一種吩噻嗪類藥物的半抗原、人工抗原、單克隆抗體及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種吩噻嗪類藥物的半抗原、人工抗原和單克隆抗體及其制備方法與應(yīng)用，該半抗原含有吩噻嗪類藥物的共有結(jié)構(gòu)部分，并且在所述吩噻嗪類藥物人工抗原的制備過程中，利用了引入的羧基與載體蛋白連接，也就是使該共有結(jié)構(gòu)部分遠(yuǎn)離載體蛋白，充分暴露給動(dòng)物的免疫識(shí)別系統(tǒng)。因此，以該人工抗原作為免疫原免疫動(dòng)物，可以獲得能同時(shí)識(shí)別多種吩噻嗪類藥物的廣譜特異性抗體，用于快速免疫分析和篩選，提高檢測(cè)效率，縮短檢測(cè)時(shí)間，降低檢測(cè)成本。
【專利說明】一種吩噻嗪類藥物的半抗原、人工抗原、單克隆抗體及其制
備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及食品安全領(lǐng)域，具體涉及一種吩噻嗪類藥物的族特異性半抗原、人工抗原、單克隆抗體及其制備方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]吩噻嗪類藥物作為一類鎮(zhèn)靜劑主要用于緩解動(dòng)物異常躁動(dòng)，達(dá)到鎮(zhèn)靜、化學(xué)保定和配合麻醉等目的，此類藥物的常見品種有氯丙嗪、異丙嗪、乙酰丙嗪、奮乃靜、氟奮乃靜、硫利達(dá)嗪。近些年，一些不法飼料商或養(yǎng)殖者為了追求飼料的高轉(zhuǎn)化率和高額利潤(rùn)，在飼料中隨意添加吩噻嗪類藥物，以減少動(dòng)物的活動(dòng)量，從而起到催肥作用。在動(dòng)物運(yùn)輸過程中使用，可降低動(dòng)物的維持需要和減少途中失重、死亡率。但這類藥物在動(dòng)物體內(nèi)代謝緩慢，在體內(nèi)的殘留時(shí)間可達(dá)2-3個(gè)月。它們?cè)谛竽琉B(yǎng)殖業(yè)中的濫用，不僅會(huì)引起動(dòng)物的中毒，還會(huì)通過在動(dòng)物性食品(肉、奶、蛋等)中的殘留直接危害到消費(fèi)者身體健康。所以，中國(guó)農(nóng)業(yè)部規(guī)定此類藥物不得以抗應(yīng)激和促生長(zhǎng)為目的在養(yǎng)殖業(yè)中使用，且在動(dòng)物性產(chǎn)品中不得檢出。因此，必須要對(duì)動(dòng)物性食品中可能殘留的吩噻嗪類藥物進(jìn)行監(jiān)控，以保證動(dòng)物性食品安全和消費(fèi)者健康。
[0003]目前，對(duì)動(dòng)物性食品中吩噻嗪類藥物的殘留檢測(cè)主要采用高效液相色譜法、液-質(zhì)聯(lián)用法、氣相色譜法等儀器檢測(cè)方法。但是儀器分析法操作復(fù)雜，樣品前處理過程繁瑣，需要專業(yè)技術(shù)人員，耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)，無法對(duì)大批次產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)，且成本較高，不適宜進(jìn)行推廣普及。而免疫分析法，是現(xiàn)在獸藥殘留檢測(cè)的重要方法，其方便，快捷，可應(yīng)用于大批量樣品的篩選，宜于推廣普及。免疫分析法的核心試劑是抗體。到目前為止，國(guó)內(nèi)外雖有針對(duì)此類藥物的抗體制備研究，但結(jié)果均不能滿足多殘留檢測(cè)的目的。1978年，Hubbard等用不同的方法合成了吩噻嗪類藥物中氯丙嗪的3種半抗原:(7-(3-羰基丙酰)氯丙嗪、N-(3-羰基丙酰)氯丙嗪、N-( 2-羰基乙酯)去甲基氯丙嗪)，制備的多克隆抗體與氯丙嗪有100%交叉反應(yīng)率，但與其他吩噻嗪類藥物沒有交叉反應(yīng)性。1979年，Midha等合成了氯丙嗪的半抗原N-(2-羰基乙酯)去甲基氯丙嗪，制備的多克隆抗體與氯丙嗪交叉反應(yīng)率為100%，但與其他吩噻嗪類藥物沒有交叉反應(yīng)性。2010年，Liu等以乙酰丙嗪為基礎(chǔ)合成半抗原，制備了單克隆抗體，該抗體與氯丙嗪交叉反應(yīng)率為100%，但對(duì)其他吩噻嗪類藥物的交叉反應(yīng)率極低1%)。2011，Shen等合成了氯丙嗪的半抗原7-氨基氯丙嗪，制備了針對(duì)氯丙嗪的多克隆抗體，該抗體與氯丙嗪交叉反應(yīng)率為100%，對(duì)其他吩噻嗪類藥物沒有交叉反應(yīng)。因此，目前已有的各種抗體均是以氯丙嗪或乙酰丙嗪為模板合成半抗原，制備的抗體不能同時(shí)識(shí)別其他吩噻嗪類藥物，當(dāng)然也就不能用于多殘留免疫檢測(cè)多種吩噻嗪類藥物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種吩噻嗪類藥物的半抗原及相應(yīng)的人工抗原、抗體。
[0005]本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供一種吩噻嗪類藥物的半抗原及相應(yīng)的人工抗原、抗體的制備方法。
[0006]本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種吩噻嗪類藥物的族特異性半抗原及相應(yīng)的人工抗原、抗體的應(yīng)用。
[0007]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取以下技術(shù)方案:一種吩噻嗪類藥物的半抗原，其分子結(jié)構(gòu)式如式I所示:
【權(quán)利要求】
1.一種吩噻嗪類藥物的半抗原，其特征在于:其分子結(jié)構(gòu)式如式1所示:
2.一種如權(quán)利要求1所述的吩噻嗪類藥物的半抗原的制備方法，其特征在于:包括如下步驟，以下按物質(zhì)的量計(jì): (a)將1份2-氯吩噻嗪溶于四氫呋喃中，攪拌下加入1飛份的氫化鈉，攪拌反應(yīng)10-30分鐘；(b)向上述反應(yīng)體系中加入f2份的溴乙酸鈉，加熱至回流，反應(yīng)6~12小時(shí)后停止加熱并降至室溫； (c)向上述反應(yīng)體系中加入5~10份的氫化鈉，回流反應(yīng)8~12小時(shí)后停止反應(yīng)并降至室溫； (d)向上述反應(yīng)體系中加入無水乙醇除去過量的氫化鈉，減壓抽濾，所得濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上蒸干，得固體，將所得固體在乙醇中酸化后采用柱層析法分離得式1所示化合物。
3.—種吩噻嗪類藥物的人工抗原，其特征在于:由權(quán)利要求1所述的吩噻嗪類藥物的半抗原與載體蛋白偶聯(lián)而成，其分子結(jié)構(gòu)式如式2所示:
4.如權(quán)利要求3所述的吩噻嗪類藥物的人工抗原的制備方法，其特征在于:包括如下步驟: (a)將0.lmmol的吩噻嗪類藥物半抗原溶于3mL N, N- 二甲基甲酰胺中，然后加入20μ?三乙胺和0.1~0.5mmol氯甲酸異丁酯，4~10°C攪拌反應(yīng)1~2小時(shí)，得A液； (b)將0.02mmol的牛血清白蛋白溶解于2mL lmol/L碳酸氫鈉溶液中，得B液； (c)將A液滴加到B液中，4~10℃攪拌反應(yīng)10-12小時(shí)，得到含吩噻嗪類藥物人工抗原的反應(yīng)液； (d)將上述含吩噻嗪類藥物人工抗原的反應(yīng)液在4~20℃用PBS透析3~4天，然后將透析袋中的溶液在無菌條件下用濾徑為0.2um的濾膜過濾，得到吩噻嗪類藥物的人工抗原。
5.一種吩噻嗪類藥物的單克隆抗體，是能與權(quán)利要求3所述的吩噻嗪類藥物的人工抗原發(fā)生特異性免疫反應(yīng)的免疫球蛋白。
6.如權(quán)利要求5所述的吩噻嗪類藥物的單克隆抗體的應(yīng)用，所述單克隆抗體用于吩噻嗪類藥物的免疫檢測(cè)。
【文檔編號(hào)】C07K14/77GK103554056SQ201310513612
【公開日】2014年2月5日 申請(qǐng)日期:2013年10月28日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月28日
【發(fā)明者】王建平, 劉靜, 張會(huì)彩, 高寶龍 申請(qǐng)人:河北農(nóng)業(yè)大學(xué)