專利名稱：噻唑烷二酮衍生物用于防止早產(chǎn)或哺乳時子宮收縮的用途的制作方法
本申請要求1998年10月29日申請但現(xiàn)已放棄的美國臨時專利申請序列號60/106133中的益處。但不放棄將其公開的全部內(nèi)容特定地加入本文作為參考。
本發(fā)明一般涉及包括產(chǎn)科的醫(yī)藥領(lǐng)域。更具體地說，本發(fā)明涉及包括曲格列酮的噻唑烷二酮類本身以及與保胎劑一起預(yù)防或降低例如早產(chǎn)和哺乳時子宮收縮的催產(chǎn)素介導(dǎo)作用的用途。
早產(chǎn)導(dǎo)致至少75％不能歸因于先天畸形的新生兒死亡。體重低于1500g的新生兒在1歲之前比出生體重大于2500g的嬰兒死亡的可能性大20倍。早產(chǎn)主要表現(xiàn)在發(fā)育遲滯、視覺和聽覺受損、慢性肺病和大腦性麻痹。出生時體重低的幸存者發(fā)生神經(jīng)受損的機會也大10倍。甚至在看上去健康的早產(chǎn)兒中，他們比足月嬰兒中發(fā)生學(xué)校和家庭問題的頻率要高(McCormick，1985)。
多年來，盡管在產(chǎn)科中早產(chǎn)已連續(xù)出現(xiàn)重大問題，但是自從本世紀(jì)中期以來早產(chǎn)比例一直保持在相同水平。盡管可以獲得大量不同的治療，但是許多爭論圍繞其預(yù)防早產(chǎn)和管理早產(chǎn)的功效上(Main，1995)。通過控制子宮收縮并使其及時釋放，將節(jié)省數(shù)十億美元的早產(chǎn)兒護理費用。
早產(chǎn)，定義為妊娠(39周為足月)不到37周自動發(fā)生的分娩，分娩的10個中約有1個為早產(chǎn)。早產(chǎn)與子宮肌收縮有關(guān)，它可能是由血液中的催產(chǎn)素誘導(dǎo)的。催產(chǎn)素對子宮的作用完全依賴于分娩前催產(chǎn)素受體(OTR)在子宮肌層的增量表達(dá)。抑制早產(chǎn)兒產(chǎn)生OTR或使OTR失活的能力可能對預(yù)防早產(chǎn)發(fā)作和分娩起著決定性作用。本發(fā)明的目的是通過防止OTR表達(dá)增加和/或防止催產(chǎn)素與OTR結(jié)合來預(yù)防不想要的收縮。因此，使用防止催產(chǎn)素與OTR結(jié)合和/或抑制OTR增加的噻唑烷二酮類，例如曲格列酮，或相關(guān)化合物防止了早產(chǎn)和剖腹產(chǎn)之前的分娩。催產(chǎn)素(OT)的已知功能包括分娩時平滑肌收縮(Fuchs等人，1982；Soloff，1989)、哺乳期間排出乳(Soloff等人，1979)和釋放前列腺素(Hinko和Soloff，1992)。由于OTR上調(diào)決定了細(xì)胞對催產(chǎn)素的響應(yīng)能力，因此這些作用以非常特定的事件發(fā)生。足月時，就在分娩前子宮肌OTR上升2倍，并在分娩之后立即戲劇性地降低。與之相反，在哺乳動物子宮肌細(xì)胞中的OTR，它響應(yīng)哺乳導(dǎo)致條件反射地釋放到血液中的催產(chǎn)素而收縮，分娩后不久就增加并且只要連續(xù)哺乳就一直保持高。從這兩個例子可以了解到，OTR水平上升將操縱組織特定的OT作用，并且在這兩個組織中的OTR調(diào)節(jié)不同。時至今日，引起OTR蛋白質(zhì)水平增加的已知試劑包括子宮中的雌二醇(Fuchs等人，1983；Larcher等人，1995)、以及兔羊膜中的糖皮質(zhì)激素和/或環(huán)AMP(Hinko和Soloff，1993)、和人乳房瘤細(xì)胞系中的糖皮質(zhì)激素和未知蛋白質(zhì)Hs578T(Copland等人，1999)。
OTR是在細(xì)胞表面膜上表達(dá)的，并且來自循環(huán)的OT結(jié)合或分泌障礙源的出現(xiàn)引起細(xì)胞內(nèi)事件級聯(lián)，結(jié)果是細(xì)胞收縮和/前列腺素合成。這些事件是由束縛在OTR的胞內(nèi)部分的G蛋白介導(dǎo)的(Strakova和Soloff，1977)。已顯示Gi和Gq同位型與OTR偶聯(lián)，并且各自通過不同且分開的胞內(nèi)路徑工作。這些G蛋白的活性導(dǎo)致胞內(nèi)鈣快速上升、促細(xì)胞分裂劑激活的蛋白(MAP)激酶(ERK2和p38)磷酸化(Hoare等人，1999)。由OT治療引起的其它事件包括cfos mRNA、細(xì)胞循環(huán)調(diào)節(jié)所必需的蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)錄激活(Strakova等人，1998)。由于催產(chǎn)素和后葉加壓素以及V1a后葉加壓素受體和OTR彼此具有高度的同源性，因此對催產(chǎn)素而言存在非特異性競爭性拮抗劑(Postina等人，1996及其中的參考文獻(xiàn))。10-100倍濃度的后葉加壓素將激活該催產(chǎn)素受體。也存在阻斷催產(chǎn)素結(jié)合到OTR的高親和性拮抗劑，但是它同樣也能很好地結(jié)合到后葉加壓素受體上。最近，Zingg描述5β-二氫孕酮、孕酮代謝物非競爭性地結(jié)合到催產(chǎn)素受體上并拮抗催產(chǎn)素作用(Grazzini等人，1998)。然而，需要高濃度的100μM 5β-二氫孕酮抑制催產(chǎn)素誘導(dǎo)的子宮收縮(Thornton等人，1999)。作為與催產(chǎn)素結(jié)合以激活OTR的位點相對抗，非競爭性抑制劑(例如5β-二氫孕酮)結(jié)合到例如OTR上的不同位點。非競爭性抑制劑改變了其結(jié)合的分子的構(gòu)象，由此改變了激活配體與相同分子結(jié)合的能力。一旦非競爭性拮抗劑結(jié)合，這些事件僅部分地能可逆。因此，臨床上沒有對催產(chǎn)素和催產(chǎn)素受體有效的特異性競爭性拮抗劑。
通過控制子宮收縮并使其及時釋放，將節(jié)省數(shù)十億美元的早產(chǎn)兒護理費用。為了使催產(chǎn)素具有生物活性，必需增加催產(chǎn)素受體(OTR)。這在分娩前不久以及允許分泌母乳的哺乳期間發(fā)生。不希望母乳喂養(yǎng)其孩子的母親可能服用曲格列酮抑制催產(chǎn)素作用。
目前在臨床上將曲格列酮用于2型糖尿病患者，從而增加胰島素敏感性，并因此增加葡萄糖吸收到細(xì)胞中(噻唑烷二酮類不引起低血糖)。口服該藥能良好地吸收到血流中并且?guī)缀鯖]有副作用。曲格列酮是Parke-Davis在美國以Sankyo銷售。除了少數(shù)患者呈現(xiàn)自發(fā)性肝不耐性之外，已證實該藥沒有明顯的副作用。
本發(fā)明涉及例如曲格列酮的噻唑烷二酮類與催產(chǎn)素受體(OTR)的相互作用。噻唑烷二酮類或噻唑烷二酮樣化合物可以單獨使用、與其它噻唑烷二酮類和/或噻唑烷二酮樣化合物組合使用、和/或與例如至少一種保胎劑的其它化合物聯(lián)合使用。本發(fā)明的方法可用于預(yù)防或減少催產(chǎn)素介導(dǎo)作用。包括可以將本發(fā)明所述的方法用于治療例如人類的哺乳動物以及其它動物。
在本發(fā)明的一個實施方式中，提供了預(yù)防妊娠者早產(chǎn)的方法，它是通過向該對象給予有效預(yù)防該對象免受早產(chǎn)的量的噻唑烷二酮。
在另一實施方式中，提供了減少或預(yù)防者中催產(chǎn)素介導(dǎo)作用的方法，包括向該對象給予有效減少該對象內(nèi)催產(chǎn)素介導(dǎo)作用量的噻唑烷二酮。本發(fā)明可以實現(xiàn)治療任意的催產(chǎn)素介導(dǎo)作用，包括誘導(dǎo)妊娠者分娩、誘導(dǎo)子宮痙攣、誘導(dǎo)排乳和誘導(dǎo)釋放前列腺素。
在本發(fā)明的其它實施方式中，上述治療的噻唑烷二酮化合物包括曲格列酮。同時在其它實施方式中，該噻唑烷二酮包括吡格列酮、BRL49653或者與曲格列酮有關(guān)的化合物。與曲格列酮有關(guān)的化合物為基本上與曲格列酮的化學(xué)結(jié)構(gòu)相似或者可以由曲格列酮獲得的一種。
本發(fā)明的方法具有清楚的治療和預(yù)防應(yīng)用。本身本發(fā)明的一些實施方式包括噻唑烷二酮，它以藥理學(xué)上可接受的形式分散，以便可以將該噻唑烷二酮給到患者?？梢酝ㄟ^局部、非腸道、靜脈內(nèi)或陰道內(nèi)實現(xiàn)該化合物的給藥。包括例如使用栓劑或乳油制劑經(jīng)陰道內(nèi)給藥提供治療子宮收縮的治療益處。
盡管本發(fā)明的方法僅使用噻唑烷二酮，但是還包括可以使用噻唑烷二酮與至少一種其它噻唑烷二酮、噻唑烷二酮樣化合物或保胎劑組合實現(xiàn)該方法。保胎劑已被使用使子宮松弛，并且在本發(fā)明的一些實施方式中，保胎劑包括至少一種β-模擬物、硫酸鎂、至少一種前列腺素抑制劑或者至少一種鈣阻斷劑。在所述發(fā)明的其它實施方式中，前列腺素抑制劑為消炎痛，并且鈣阻斷劑為硝苯地平。
在使用噻唑烷二酮和保胎劑的本發(fā)明組合治療中，在本發(fā)明的有關(guān)實施方式中，將這些化合物同時給予患者，但是在其它實施方式中，在另一保胎劑之前將該噻唑烷二酮給藥，并且反之亦然。
由于本文顯示曲格列酮與催產(chǎn)素受體結(jié)合，因此本發(fā)明還涉及篩選催產(chǎn)素拮抗劑和激動劑的方法。在一些實施方式中，如下進行催產(chǎn)素激動劑的篩選將曲格列酮樣化合物給藥到催產(chǎn)素受體，測定該化合物是否與該受體結(jié)合?？蓽y定出結(jié)合就認(rèn)為該曲格列酮樣化合物為激動劑。在其它實施方式中，如下進行催產(chǎn)素拮抗劑的篩選(a)將噻唑烷二酮給藥到催產(chǎn)素受體；(b)給藥含有候選催產(chǎn)素拮抗劑的組合物；以及(c)測定該噻唑烷二酮是否與該受體結(jié)合。
單詞“一”當(dāng)與權(quán)利要求書和/或說明書中的術(shù)語“含有”一起使用時可以意思是“一種”，但是也與“一種或多種”、“至少一種”和“一種或一種以上”的意思一致。
附圖簡述下面附圖形成本說明書的一部分并且包括進一步證實本發(fā)明的某些方面。通過參照這些附圖中的一個或多個并結(jié)合本文中特定實施方式的詳細(xì)說明，可以更好地理解本發(fā)明。


圖1、噻唑烷二酮類與催產(chǎn)素受體的結(jié)合。在人子宮肌細(xì)胞中125I-OTA結(jié)合的抑制百分比。
圖2、在初級人子宮肌細(xì)胞中的前列腺素E2水平。細(xì)胞用帶有或沒有曲格列酮的催產(chǎn)素處理20小時。將培養(yǎng)基除去并冷凍直至評價PGE2水平。
圖3A-H、培養(yǎng)中人足月子宮肌細(xì)胞的胞內(nèi)細(xì)胞質(zhì)鈣水平的變化。每條線代表單個細(xì)胞的鈣的變化。細(xì)胞用曲格列酮預(yù)處理1分鐘，然后用催產(chǎn)素、鈴蟾肽(BBS)或者緩激肽處理。這三種試劑引起胞內(nèi)鈣增加并在正常條件下引起子宮收縮。細(xì)胞在10％FBS、DMEM、青霉素/鏈霉素中生長，使OTR水平升高。然后將細(xì)胞放入含有Fura-2的KRH緩沖液中。這些細(xì)胞吸收Fura-2，并測定細(xì)胞質(zhì)鈣水平的變化。然后將細(xì)胞如上述每個圖處理。在圖3A中，細(xì)胞用10nM催產(chǎn)素處理，證實細(xì)胞質(zhì)鈣水平增加。在圖3B中，細(xì)胞用0.001μg/ml曲格列酮(2.2nM)預(yù)處理1分鐘，然后用10nM催產(chǎn)素處理。該濃度下曲格列酮對催產(chǎn)素刺激的鈣過渡沒有影響。在圖3C中，0.01μg/ml(22.6nM)曲格列酮部分地阻斷催產(chǎn)素誘導(dǎo)的鈣過渡。在圖D中，0.1μg/ml(226nM)曲格列酮完全阻斷10nM催產(chǎn)素誘導(dǎo)的鈣過渡，但是不能阻斷100nM鈴蟾肽誘導(dǎo)的鈣過渡。這證明了曲格列酮對催產(chǎn)素介導(dǎo)作用的特異性(在圖3G中也有顯示)。在圖3E中，100nM催產(chǎn)素和100nM緩激肽誘導(dǎo)人子宮肌細(xì)胞中的鈣過渡。在圖3F中，226nM曲格列酮不阻斷催產(chǎn)素和緩激肽誘導(dǎo)的鈣過渡，然而在圖3G中，1μg/ml(2.2μM)曲格列酮特異性地阻斷催產(chǎn)素誘導(dǎo)的鈣過渡，但不阻斷緩激肽誘導(dǎo)的該過渡。在圖3H中，100nM和1μM曲格列酮證實了催產(chǎn)素誘導(dǎo)的鈣水平升高的劑量依賴性抑制。
圖4A和圖4B、測定來自C-段的足月人子宮肌組織的子宮收縮。如圖4A和4B所示，以約3-4分鐘間隔發(fā)生節(jié)律性收縮。用10nM催產(chǎn)素刺激之后，如圖4A所示，子宮肌層組織具有多重收縮。約5分鐘之后(每個垂直軸線之間的距離代表1分鐘)，子宮收縮停止對10nM催產(chǎn)素的響應(yīng)。子宮肌層用10μg/ml(22.6μM)曲格列酮處理1分鐘將阻斷10nM催產(chǎn)素刺激的收縮(圖4B)。5分鐘之后，加入100nM催產(chǎn)素。在有100nM催產(chǎn)素的情況下發(fā)生收縮，這證實該過程是可逆的。這說明與催產(chǎn)素受體的結(jié)合存在競爭性。
本發(fā)明以觀察到的例如曲格列酮的噻唑烷二酮類可以抑制催產(chǎn)素與催產(chǎn)素受體(OTR)結(jié)合為基礎(chǔ)。催產(chǎn)素結(jié)合觸發(fā)各種催產(chǎn)素介導(dǎo)活性，例如子宮開始收縮、并伴隨著開始分娩、釋放前列腺素以及排乳。催產(chǎn)素引起前列腺素從卵巢和子宮釋放。前列腺素E2和Fα可以起黃體解體和黃體期缺損的作用。噻唑烷二酮類，例如曲格列酮，以及噻唑烷二酮樣化合物因此提供了抑制催產(chǎn)素或相似化合物激活例如后葉加壓素的OTR的不想要的作用的治療和預(yù)防方法。例證噻唑烷二酮類參見US5478852和US5814647，將其加入本文作為參考。
由于約10％的孕婦早產(chǎn)，因此這些治療的價值非常大(Norton等人，1993；Main，1995)。時至今日，沒有研究能有說服力地證實使用現(xiàn)有的保胎(子宮松弛)治療提高長期新生兒后來存活的提高或任意指數(shù)。保胎治療對母子的許多潛在損害已有證明(Notron等人，1993；Moise等人，1998；Wilkins等人，1988)。β-腎上腺素能試劑的潛在并發(fā)癥包括高血糖、低鉀血、低血壓、肺水腫、心肌機能不全、節(jié)律障礙、心肌局部缺血和孕產(chǎn)婦死亡。硫酸鎂的潛在并發(fā)癥包括肺水腫、呼吸阻抑、心搏停止、孕產(chǎn)婦手足搐搦、深度肌癱瘓和深度低血壓。除肺水腫之外，所有其它都是這種治療的少見并發(fā)癥。硝苯地平治療的潛在并發(fā)癥包括瞬變低血壓。因此，很顯然，需要其它方法治療早產(chǎn)。I、催產(chǎn)素介導(dǎo)作用本發(fā)明人的發(fā)現(xiàn)在于例如曲格列酮的噻唑烷二酮類可與催產(chǎn)素受體(OTR)結(jié)合，因此本發(fā)明包括抑制或減少催產(chǎn)素介導(dǎo)作用。
催產(chǎn)素為生存時間短且作用快的激素，它通過腦的丘腦下部產(chǎn)生，與其最相關(guān)的后葉加壓素(抗利尿激素)一起，貯存在垂體后葉，并且如果需要的話釋放到血液中。它刺激某些平滑肌膜，壓縮血管并促使某些組織對其它激素和神經(jīng)敏感。影響的主要組織為子宮，包括子宮內(nèi)膜和子宮肌層、陰道、乳房(兩種性別)、勃起組織(兩種性別)、精囊，并且對分娩和性欲高潮時的子宮肌收縮、減少胎盤分離出血的血管收縮以及嬰兒啼哭時喂乳母親具有的排乳反射有特定的影響。
催產(chǎn)素是在所有哺乳動物腦中神經(jīng)元的兩個離散群中產(chǎn)生的。產(chǎn)生催產(chǎn)素神經(jīng)元的一個離散群向垂體后葉凸出，它是位于腦底部的內(nèi)分泌腺。催產(chǎn)素從該垂體后葉釋放到血流中，由此它產(chǎn)生公知的末梢效果如子宮收縮和排乳。含有催產(chǎn)素神經(jīng)元的另一離散群直接凸向已知介導(dǎo)母性行為的特定腦區(qū)域。通過在這些腦區(qū)域中局部地充當(dāng)化學(xué)信使，催產(chǎn)素起母性行為的調(diào)節(jié)器和控制器的作用。
刺激催產(chǎn)素從垂體后葉釋放的已知試劑包括從子宮頸、陰道和乳房產(chǎn)生的感覺刺激。通過增加血漿滲透也刺激催產(chǎn)素的分泌。催產(chǎn)素的分泌受乙醇和卵巢松弛素的抑制。本發(fā)明包括如上所述刺激內(nèi)源催產(chǎn)素釋放的試劑以及通常抑制內(nèi)源催產(chǎn)素釋放的試劑的拮抗劑的用途。催產(chǎn)素目前顯示是刺激子宮收縮，從而誘導(dǎo)分娩并用于控制胎盤釋放之后的產(chǎn)后出血。它還顯示刺激母乳喂養(yǎng)時的泌乳。催產(chǎn)素目前是通過合成制備的，并以包括Pitocin(ParkeDavis，Morris Plains，NJ)和Syntocinon的各種商標(biāo)名稱銷售。它可以通過靜脈內(nèi)、肌內(nèi)以及通過鼻吸收給藥。催產(chǎn)素的活性是用USP單位表示的，其定義為垂體后葉浸出物的子宮刺激能力的生物測定。1USP單位與約2μg純肽相當(dāng)。
催產(chǎn)素受體(OTR)是在細(xì)胞表面膜上表達(dá)的。OTR的首先的三個胞外域?qū)Ω叨扔H和的催產(chǎn)素結(jié)合和激動劑的選擇是至關(guān)重要的(Postina等人，1996)。來自循環(huán)或由旁分泌衍生源產(chǎn)生的催產(chǎn)素與細(xì)胞表面OTR相互作用，從而開始胞內(nèi)事件級聯(lián)。這些事件是由束縛在OTR胞內(nèi)部分的G蛋白介導(dǎo)的(Strakova和Soloff，1997)。接著這些G蛋白的激活導(dǎo)致胞內(nèi)鈣快速上升以及MAP激酶(ERK2)磷酸化。由催產(chǎn)素處理導(dǎo)致的其它事件包括cfos mRNA、細(xì)胞循環(huán)進行所必需的蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)錄激活(Strakova等人，1998)。
催產(chǎn)素和催產(chǎn)素相關(guān)的化合物，通過催產(chǎn)素受體作用，目前在臨床上的用途是誘導(dǎo)子宮收縮和分娩時促使嬰兒和胎盤釋放。該作用依賴于OTR(催產(chǎn)素受體)在靶細(xì)胞表面上及時增加。如果OTR不上升，催產(chǎn)素對臨產(chǎn)子宮不起作用，因此限制相反的副作用。在妊娠后期，OTR的量增加，最終引起子宮的平滑肌收縮并導(dǎo)致分娩。催產(chǎn)素和OTR之間的相互作用通常還伴隨有子宮痛性痙攣、促使乳腺釋放乳(排乳)以及釋放前列腺素。
本發(fā)明優(yōu)選的催產(chǎn)素激動劑的例子包括4-蘇氨酸-1-羥基-脫氨基催產(chǎn)素、9-脫氨基催產(chǎn)素、代替甘氨酰胺基而含有甘氨酸基的催產(chǎn)素類似物(Ferrier和Du Vigneaud，1966)；7-D-脯氨酸-催產(chǎn)素及其脫氨基類似物(Ferrier和Du Vigneaud，1966)；(2，4-二異亮氨酸)-催產(chǎn)素、具有尿鈉排泄和利尿活性的催產(chǎn)素類似物(Hruby等人，1970)；脫氨基催產(chǎn)素類似物(Urry等人，1970)；長效催產(chǎn)素(OT)類似物1-脫氨基-1-單碳-E12-酪氨酸(OME)-OT(dCOMOT)(Veznik等人，1979；Cort等人，1982和1979)；卡貝縮宮素，一種長效催產(chǎn)素類似物(Hunter等人，1992)；催產(chǎn)素激動劑[蘇氨酸-甘氨酸7]-催產(chǎn)素(TG-OT)(Chadio和Antoni，1993)；Olson等人(1991)所述的的催產(chǎn)素激動劑；催產(chǎn)加壓素、催產(chǎn)素和后葉加壓素的均等類似物(Gazis等人，1987)；以及脫氨基-6-碳-催產(chǎn)素(dC60)，一種認(rèn)為對一些生理上重要的酶系統(tǒng)有抗性的有效催產(chǎn)素相似物(Krejci等人，1981)。同樣，最近描述了非肽催產(chǎn)素拮抗劑，包括L371、257，含有鄰位三葡萄糖基乙氧基苯基乙酰基核心的相關(guān)化合物系列(例如L374、943)(Williams等人，1999)。
US5846766涉及一種垂體后葉激素-催產(chǎn)素的受體；編碼這種受體的DNA系列；含有這種DNA序列的重組DNA分子和含有該重組DNA分子的轉(zhuǎn)化體。本發(fā)明還涉及檢測和診斷方法以及為了相同目的且含有催產(chǎn)素、其受體或該受體的抗體的試劑盒。
A、早產(chǎn)/剖腹產(chǎn)本發(fā)明包括通過給予例如曲格列酮的噻唑烷二酮類到妊娠者達(dá)到預(yù)防或減少早產(chǎn)危險的方法。在妊娠時主要對子宮的功能和結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。在分娩之前，子宮主要為靜態(tài)。從這點出發(fā)，提高收縮活性涉及以下物質(zhì)的水平升高(i)催產(chǎn)素受體；(ii)鈣通道；(iii)縫隙連接；以及(iv)內(nèi)皮素受體。
早產(chǎn)的常規(guī)特征是人妊娠37周之前子宮規(guī)則收縮，并伴隨有進行性子宮頸擴張和/或消失。大多數(shù)情況下，早產(chǎn)原因還未知，盡管一些素因已被鑒定。除了一些孕婦活動之外，各種情況例如多胎妊娠和妊娠中、第二次三個月發(fā)生流產(chǎn)歷史與其發(fā)生有關(guān)。
有一些方法可以測定患者是否有早產(chǎn)的危險。一種方法包括測定孕婦的子宮頸或陰道分泌物中存在胎纖連蛋白，它是可能發(fā)生早產(chǎn)的指示劑(Lockwood等人，1991)?；蛘?，已使用唾液雌三醇區(qū)別真假分娩(US5480776)并用于測定延遲分娩的保胎治療的有效性(US5370135)。
已研究了一些預(yù)防性治療，盡管沒有一個試驗?zāi)苊鞔_確定其功效。例如，描述了口服保胎治療延遲妊娠，同時減少孕婦的活動。因此，本發(fā)明提供了一種對現(xiàn)有預(yù)防早產(chǎn)治療的更需要的選擇。早產(chǎn)管理也已有研究對象，其中已具有不同程度有效性的保胎治療。沒有研究證實這種治療的長期新生兒益處。同樣，通過包括至少一種噻唑烷二酮單獨或與其它保胎劑一起的機理，本發(fā)明在早產(chǎn)管理方面具有實用性。由于本發(fā)明通過給予噻唑烷二酮，例如曲格列酮，或者噻唑烷二酮樣化合物可以抑制或減少子宮收縮，因此在涉及通過腹部和子宮壁切開以取出胎兒的手術(shù)過程的剖腹產(chǎn)之前本發(fā)明的方法可用于抑制子宮收縮(C-段)。而且，本發(fā)明的方法可用于治療描述為痛性月經(jīng)的痛經(jīng)。
B、其它催產(chǎn)素介導(dǎo)作用本發(fā)明的另一觀察涉及噻唑烷二酮類預(yù)防通過催產(chǎn)素釋放前列腺素的能力。前列腺素包括具有許多活性的改性脂肪酸。前列腺素為通常由花生四烯酸(一種20-碳、直鏈、多不飽和脂肪酸前體)獲得的環(huán)狀不飽和脂肪酸。前列腺素可以起松弛血管壁肌肉的有效血管舒張藥的作用。在婦女中，前列腺素涉及控制促性腺素釋放素(GnRH)、黃體化激素(LH)分泌、控制排卵以及誘導(dǎo)子宮收縮。最近研究顯示，抑制前列腺素釋放可以有效地治療痛經(jīng)，同時給予前列腺素導(dǎo)致誘導(dǎo)分娩或治療流產(chǎn)。在癌癥發(fā)展過程中還涉及前列腺素。同樣，前列腺素在癌癥發(fā)展中起作用的許多組織例如結(jié)腸和乳房還可以表達(dá)催產(chǎn)素載體。最近，已在人乳房瘤中描述了催產(chǎn)素受體。這樣，通過抑制前列腺素合成，催產(chǎn)素拮抗劑可以使腫瘤發(fā)展減慢。
時至今日，已知催產(chǎn)素為通過鈣和MAP激酶路徑的信號。至今，還沒有發(fā)現(xiàn)所述路徑可以對細(xì)胞分化、細(xì)胞繁殖和細(xì)胞凋亡起決定性作用。純催產(chǎn)素拮抗劑可以說明催產(chǎn)素在這些路徑中的作用。
C、保胎劑在本發(fā)明的一些實施方式中，抑制或減少催產(chǎn)素介導(dǎo)作用的治療包括給予例如曲格列酮的噻唑烷二酮和另一保胎劑。許多保胎(子宮松弛劑用于預(yù)防子宮收縮。這些包括β-模擬物，例如β-腎上腺受體刺激物(例如沙丁胺醇、特布他林、異克舒令、利托君和非諾特羅)、硫酸鎂、前列腺素抑制劑(例如消炎痛、阿司匹林和萘普生)、和例如硝苯地平和尼卡地平的鈣阻斷劑。此外，用于保胎的候選物為降鈣素基因相關(guān)的肽(CGRP)，它是一種通常松弛平滑肌組織并且最近報道為誘導(dǎo)孕婦中自動收縮子宮肌層的劑量依賴性松弛的有效血管舒張藥(Dong等人，1999；Yallampi等人，1999，將它們都加入本文作為參考)。包括將噻唑烷二酮和另一保胎劑可以同時或者在不同時間給藥以抑制或減少子宮收縮或任意其它催產(chǎn)素介導(dǎo)作用。
保胎治療經(jīng)常使用少量的保胎劑減少子宮收縮的頻率并停止子宮頸變化。例如利托君和硫酸鎂的保胎劑經(jīng)常經(jīng)靜脈內(nèi)給藥。將特布他林(一種β-模擬物)經(jīng)靜脈內(nèi)或皮下給藥。如果靜脈內(nèi)治療成功，那么典型地接著口服利托君或特布他林。可以使用口服治療保持該效果直到妊娠35-37周。
用于早產(chǎn)保胎的常規(guī)禁忌證包括以下急性胎兒窘迫、絨毛羊膜炎、驚厥或嚴(yán)重驚厥前期、胎兒死亡、胎兒發(fā)育和孕產(chǎn)婦血液動力不穩(wěn)定性。而且，已觀察到以下并發(fā)癥就β-類上腺素劑(β-模擬物)而言，高血糖、低鉀血、低血壓、肺水腫、心肌機能不全、心律不齊、心肌局部缺血和孕產(chǎn)婦死亡；對硫酸鎂而言，肺水腫、呼吸衰退、心搏停止、孕產(chǎn)婦手足搐搦、深度肌癱瘓和深度低血壓；對消炎痛而言，肝炎、腎衰竭和胃腸出血；對硝苯地平而言，瞬變低血壓。II、曲格列酮和其它噻唑烷二酮類本發(fā)明的方法涉及通過使用曲格列酮、其它噻唑烷二酮類、或噻唑烷二酮樣化合物、US5968960(將其加入本文作為參考)中所述的一些抑制或減少催產(chǎn)素介導(dǎo)作用并且通常治療患者的方法。制備噻唑烷二酮類和噻唑烷二酮樣化合物的方法例如描述在以下文獻(xiàn)中1993年6月29日授予的US5223522；1992年7月12日授予的US5132317；1992年6月9日授予的US5120754；1991年10月29日授予的US5061717；1990年1月30日授予的US4897405；1989年10月10日授予的US4873255；1987年8月18日授予的US4687777；1986年2月25日授予的US4572912；1981年9月1日授予的US4287200；1991年5月26日授予的US5002953；US5972944；5965589；5910592；5811439；5506245；4340605；4438141；4444779；4461902；4703052；4725610；4897393；4918091；4948900；5194443；5232925和5260445；WO91/07107；WO92/02520；WO94/01433；WO89/08651；和JP特開69383/92，將它們都加入本文作為參考。
噻唑烷二酮樣化合物包括結(jié)構(gòu)與噻唑烷二酮相似的化合物。這種噻唑烷二酮樣化合物可以包括可以存在于噻唑烷二酮中至少一部分的至少一種衍生物或模擬物，或完全由其組成。本文所用的“衍生物”或“噻唑烷二酮樣化合物”是指噻唑烷二酮分子的一種化學(xué)改性或變化形式，盡管術(shù)語“模擬物”或“類似物”是指結(jié)構(gòu)可以與噻唑烷二酮分子相似或者可以不相似，但是功能與其相似的分子。本文所用的部分”通常是指較大化學(xué)或分子結(jié)構(gòu)的較小化學(xué)或分子組分，并且被術(shù)語分子”所包含。
曲格列酮(±-5-[[4-[(3，4-二氫-6-羥基-2，5，7，8-四甲基-2H-1-苯并吡喃-2-基)甲氧基]苯基]甲基]-2，4-噻唑烷二酮)已作為抗高血糖劑用于控制II型糖尿病。它在肌肉和脂肪組織中提高了胰島素敏感性，并且曲格列酮阻止了肝糖異生。它已單獨使用或與磺酰脲類一起使用用于控制成人初發(fā)性糖尿病。它具有約441道爾頓的分子量并且其分子式為C24H27NO8S。曲格列酮的多晶型也已描述在例如US5700820中，將其加入本文作為參考。BRL49563(羅格列酮BRL49653或avandia，Smith-Kline最近投放市場)和吡格列酮為用于治療II型糖尿病的第二代噻唑烷二酮類。它們以曲格列酮的結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)設(shè)計并且不同點在于這兩種化合物不含曲格列酮中含有的維生素E部分。與曲格列酮相比，BRL49653和吡格列酮對轉(zhuǎn)錄因子PPARγ的親和力要高100-和6-倍。因此，對II型糖尿病，為了降低血糖水平，將2-4mg/天的BRL49563(avandia、羅格列酮)用于患者，相比較曲格列酮的使用量為200-400mg/天。著重指出的是噻唑烷二酮類不引起低血糖。這些試劑起增感胰島素能力的作用，從而使血糖被例如脂肪細(xì)胞和肌肉的靶細(xì)胞吸收。III、測定曲格列酮或其它噻唑烷二酮活性的方法由于本發(fā)明是以觀察例如曲格列酮的噻唑烷二酮類既抑制催產(chǎn)素與其受體結(jié)合，噻唑烷二酮類又結(jié)合到該受體上為基礎(chǔ)的，因此結(jié)合試驗呈現(xiàn)了測定噻唑烷二酮活性的實施方式。這些結(jié)合試驗對本領(lǐng)域技術(shù)人員為公知，正如Hoare等人于1999年和Postino于1996年所表示的，將其加入本文作為參考。這些試驗可用于評價噻唑烷二酮的治療功效；或者，這些試驗可與本發(fā)明的篩選方法一起用于鑒定和表征催產(chǎn)素的激動劑和拮抗劑。本文所用的“激動劑”是指能與受體結(jié)合并激活信號路徑的化合物或物質(zhì)。就本發(fā)明而言，激動劑能夠結(jié)合催產(chǎn)素受體并模擬催產(chǎn)素的功能。由于噻唑烷二酮類結(jié)合OTR，因此包括噻唑烷二酮類的結(jié)構(gòu)可以用作該相互作用的基礎(chǔ)。其它噻唑烷二酮樣物質(zhì)可用作激動劑，并且可以在OTR結(jié)合試驗中評價任意催產(chǎn)素激動劑活性。
本發(fā)明的“拮抗劑”為與例如噻唑烷二酮的另一物質(zhì)競爭結(jié)合到一受體上的物質(zhì)或化合物，例如OTR?？梢愿鶕?jù)本發(fā)明通過測定候選拮抗劑和噻唑烷二酮之間與OTR的競爭性結(jié)合篩選拮抗劑。競爭性以用于OTR結(jié)合的噻唑烷二酮被候選物的任意可測定的替換來定量。在大鼠和可能的人中，使用結(jié)合測定例如已觀察到孕酮具有催產(chǎn)素拮抗劑活性(Thornton等人，1999)。IV、阻斷催產(chǎn)素介導(dǎo)作用的方法本發(fā)明涉及通過給藥曲格列酮、其它噻唑烷二酮類或噻唑烷二酮樣化合物抑制或減少催產(chǎn)素介導(dǎo)作用并且通常治療患者的方法。因此，下面描述制劑和化合物的給藥路徑。
A、向患者給藥的制劑和路徑包括臨床應(yīng)用，以適宜打算應(yīng)用的形式制備醫(yī)用組合物是必不可少的。通常，這需要制備主要不含熱原以及可能對人或動物有害的其它雜質(zhì)的組合物。
人們通常希望使用適宜的鹽和緩沖液使釋放載體穩(wěn)定并允許被靶細(xì)胞吸收。當(dāng)將重組細(xì)胞加入患者中時也將使用緩沖液。本發(fā)明的含水組合物含有對細(xì)胞有效量且溶解或分散于藥用可接受的載體或含水介質(zhì)中的噻唑烷二酮。這些組合物還稱之為接種物。短語“藥用可接受的”或“藥理學(xué)可接受的”是指當(dāng)向動物或人給藥時不產(chǎn)生負(fù)面、過敏或其它事與愿違反應(yīng)的分子實體和組合物。本文所用的“藥用可接受的載體”或“藥理學(xué)可接受的載體”包括任意和所有溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗菌劑和抗真菌劑、等滲和吸收延遲劑等。這些介質(zhì)和試劑用于藥用活性物中的用途在本領(lǐng)域中為公知。除了任意常規(guī)介質(zhì)或試劑不能與本發(fā)明的載體或細(xì)胞相容的范圍之外，包括了其在治療組合物中的用途。也可以將其它活性組分加入這些組合物中。
本發(fā)明人提出了向可能經(jīng)歷或正在經(jīng)歷例如分娩或哺乳時子宮收縮的催產(chǎn)素介導(dǎo)作用的患者局部、區(qū)域釋放例如曲格列酮的噻唑烷二酮，它將是一種非常有效地釋放治療有效組合物以抵抗該催產(chǎn)素作用的方法。類似地，保胎劑可以介導(dǎo)患者身體的特定、受影響的區(qū)域。區(qū)域性給藥包括經(jīng)動脈內(nèi)、腔內(nèi)、陰道內(nèi)、膀胱內(nèi)、鞘內(nèi)、胸膜內(nèi)和腹膜內(nèi)路徑給藥。
本發(fā)明的活性組合物可以包括典型的藥用制劑。本發(fā)明的這些組合物是通過任意常規(guī)路徑進行給藥的，只要靶組織可通過該路徑獲得。這包括口、鼻、頰、直腸或陰道?；蛘撸梢酝ㄟ^常位、真皮內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)注射給藥。這些組合物正常地以如上所述的藥用可接受的組合物給藥。這些藥物和試劑還可以經(jīng)非腸道或腹膜內(nèi)給藥。術(shù)語經(jīng)非腸道”通常用于指經(jīng)靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下給藥。
生物材料應(yīng)經(jīng)深度透析除去不想要的小分子量分子和/或者將備用組合物冷凍干燥至所需載體中。然后將活性化合物配制成非腸道給藥，例如配制成經(jīng)靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、病斑內(nèi)或甚至腹膜內(nèi)路徑注射。根據(jù)本公開，含有作為活性組分的噻唑烷二酮或噻唑烷二酮樣組合物的含水組合物的制備對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說為已知。典型地，這些組合物可制成可注射液，或者液體溶液或者懸浮液；適宜在注射前通過添加液體用于制備溶液或懸浮液的固體形式也可以制備；并且這些制劑也可經(jīng)乳化。
適宜注射用的藥用形式包括無菌水溶液或分散液；含有芝麻油、花生油或含水丙二醇的制劑；以及用于臨時制備無菌注射液或分散液的無菌粉末。在所有情況下，該形式必需無菌并且必需為易于注射的液體。它在生產(chǎn)和貯藏條件下必需穩(wěn)定并且必需經(jīng)防腐以抗如細(xì)菌和真菌的微生物的污染作用。
本發(fā)明的治療組合物有利地以或者作為液體溶液或懸浮液的注射組合物形式給藥；也可以制成在注射前適宜溶于或懸浮于液體中的固體形式。這些制劑還可以經(jīng)乳化。為此目的的典型組合物含有藥用可接受的載體。例如，組合物可以含有10mg、25mg、50mg或高達(dá)約100mg人血清白蛋白/ml磷酸緩沖鹽水。其它藥用可接受的載體包括水溶液、無毒賦形劑，包括鹽、防腐劑、緩沖液等。非水溶劑的例子有丙二醇、聚乙二醇、植物油和可注射的有機酯，如油酸乙酯。含水載體包括水、醇/水溶液、生理鹽水溶液、如氯化鈉的非腸道載體、林格氏葡萄糖等。腹膜內(nèi)載體包括液體和營養(yǎng)補充劑。防腐劑包括抗菌劑、抗氧化劑、螯合劑和惰性氣體。不同組分的pH、精確濃度、以及藥用組合物可以根據(jù)公知參數(shù)經(jīng)調(diào)整。適宜與例如曲格列酮的噻唑烷二酮配制用的賦形劑包括交聯(lián)羥甲纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素、氧化鐵(合成)、硬脂酸鎂、微晶纖維素、聚乙二醇400、聚山梨酯80、聚維酮、二氧化硅、二氧化鈦和水(經(jīng)過純化的)。
作為游離堿或藥用可接受鹽的活性化合物的溶液可以在適宜與例如羥丙基纖維素的表面活性劑混合的水中制備。也可以在甘油、液體聚乙二醇及其混合物或油中制備分散液。在貯藏和使用的常規(guī)條件下，這些制劑含有防止微生物生長的防腐劑。
噻唑烷二酮或噻唑烷二酮樣組合物可以配制成中性或鹽形式的組合物。藥用可接受的鹽包括酸加成鹽(與蛋白質(zhì)的自由氨基形成)，以及與可溶鹽酸或磷酸的無機酸或者例如乙酸、草酸、酒石酸、杏仁酸等的有機酸形成。與自由羧基形成的鹽還可以由無機堿如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、氫氧化鈣或氫氧化鐵以及例如異丙胺、三甲胺、組氨酸、脯氨酸等的有機酸獲得。
載體還可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液體聚乙二醇等)、其適宜混合物和植物油的溶劑或分散介質(zhì)。通過使用例如卵磷脂的包衣、在為分散液時通過保持所需路徑以及通過使用表面活性劑可以保持其適宜的流動性。通過各種抗菌劑和抗真菌劑，例如對羥基苯甲酸酯類、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫汞撒等，可以防止微生物作用。在許多情況下，優(yōu)選包括等滲劑，例如糖類或氯化鈉。通過在組合物中使用延遲吸收的試劑，例如單硬脂酸鋁和明膠，可以延長注射組合物的吸收。
通過將所需量的活性化合物加入具有上面列出的各種其它組分的適宜溶劑中，根據(jù)需要之后進行過濾滅菌，制得無菌注射液。一般說來，通過將各種無菌活性組分加入含有基本分散介質(zhì)和來自上面所列那些的所需其它組分的無菌載體中制備分散液。在為用于制備無菌注射液的無菌粉末的情況下，優(yōu)選的制備方法是真空干燥和凍干技術(shù)，由前面的無菌過濾液獲得活性組分加任意其它所需組分的粉末。
還包括制備更濃或高度濃縮的直接注射液，其中使用DMSO作溶劑導(dǎo)致極快滲透，向小區(qū)域釋放高濃度的活性劑。
配制之后，以與劑量制品相容的方式以及治療有效量給予溶液。制品易于以各種劑量形式給藥，例如上述注射液形式，但是也可以使用藥物釋放膠囊等。
就以水溶液非腸道給藥而言，如果需要的話應(yīng)將溶液適宜緩沖，并且稀釋液首先與足夠生理鹽水或葡萄糖等滲。這些微粒水溶液特別適合靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下和腹膜內(nèi)給藥。在這一點上，根據(jù)本文所公開的，可以使用的無菌含水介質(zhì)對本領(lǐng)域技術(shù)人員為已知。例如，可以將一個劑量溶于1ml等滲NaCl溶液中，以及或者加入到1000ml皮下輸液用液體中或者在注射的目的位置注射，(參見例如"Remington’sPharmaceutical Sciences"第15版，第1035-1038頁和第1570-1580頁)。根據(jù)治療對象的癥狀，可以對劑量進行必要的改變。無論如何，對給藥負(fù)責(zé)的人應(yīng)確定各個對象的適宜劑量。
可以將噻唑烷二酮或噻唑烷二酮化合物以單位劑量中含有約0.0001-1.0mg、或者約0.001-0.1mg、或者約0.1-1.0mg或者甚至約10mg等配制到治療混合物中。在優(yōu)選實施方式中，將活性催產(chǎn)素或催產(chǎn)素類似物以含有約0.001-約1mg配制在治療混合物中。也可以給予多種劑量。
本發(fā)明的治療組合物有利地以注射組合物如溶液或懸浮液的形式給藥；也可以制成在注射前適宜溶于或懸浮于液體中的固體形式。這些制劑還可以經(jīng)乳化。為此目的的典型組合物含有藥用可接受的載體。例如，組合物可以含有10mg、25mg、50mg或高達(dá)約100mg人血清白蛋白/ml磷酸緩沖鹽水。其它藥用可接受的載體包括水溶液、無毒賦形劑，包括鹽、防腐劑、緩沖液等。非水溶劑的例子有丙二醇、聚乙二醇、植物油和可注射的有機酯，如油酸乙酯。含水載體包括水、醇/水溶液、生理鹽水溶液、如氯化鈉的非腸道載體、林格氏葡萄糖等。腹膜內(nèi)載體包括液體和營養(yǎng)補充劑。防腐劑包括抗菌劑、抗氧化劑、螯合劑和惰性氣體。不同組分的pH、精確濃度、以及藥用組合物可以根據(jù)公知參數(shù)經(jīng)調(diào)整。適宜與例如曲格列酮的噻唑烷二酮配制用的賦形劑包括交聯(lián)羥甲纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素、氧化鐵(合成)、硬脂酸鎂、微晶纖維素、聚乙二醇400、聚山梨酯80、聚維酮、二氧化硅、二氧化鈦和水(經(jīng)過純化的)。
除了用于例如靜脈內(nèi)或肌內(nèi)注射的非腸道給藥配制的化合物之外，包括其它用于可接受的形式，例如片劑或用于口服的其它固體；微脂粒制劑；定時釋放膠囊；以及目前使用的任意其它形式，包括乳膏。
在本發(fā)明中人們還可以使用鼻液或噴霧劑、氣溶膠或吸入劑。鼻液經(jīng)常為經(jīng)設(shè)計以液滴或噴霧給藥到鼻通道的水溶液。鼻液經(jīng)制備，以便它們在許多方面與鼻分泌液相似，從而保持正常的纖毛作用。因此，含水鼻液通常為等滲并經(jīng)輕度緩沖以保持5.5-6.5的pH。
此外，在該制劑中可以含有抗菌防腐劑(與眼制劑中所用的相似)以及適宜藥物穩(wěn)定劑(如果需要的話)。各種工業(yè)鼻制劑為已知并包括例如，抗生素和抗組胺劑，并且將它們用于預(yù)防哮喘。
適合其它方式給藥的其它制劑包括陰道栓和托。也可以使用直腸栓或托。
栓劑為各種重量和形式的固體劑量形式，經(jīng)常用于插入直腸、陰道或尿道給藥。插入之后，栓劑變軟、熔化并溶于腔液中。
一般來說，就栓劑而言，常規(guī)粘合劑和載體可以包括例如，聚亞烷基二醇或甘油三酸酯；這些栓劑可以由含有0.5％-10％，優(yōu)選1％-2％活性組分的混合物形成。
口服制劑包括例如藥用級甘露糖醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等的常用賦形劑。這些組合物呈現(xiàn)溶液、懸浮液、片劑、丸劑、膠囊、持續(xù)釋放制劑或粉末形式。其它制劑適宜口服?？诜苿┌ɡ缢幱眉壐事短谴?、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等的常用賦形劑。這些組合物呈現(xiàn)溶液、懸浮液、片劑、丸劑、膠囊、持續(xù)釋放制劑或粉末形式。當(dāng)路徑為局部時，形式可以為乳膏、軟膏、油膏或霧劑。
在一些實施方式中，口服藥用組合物將包括惰性稀釋劑或可同化食用的載體，或者可以將它們壓成片劑，或者可以將它們直接加入膳食食品中。就口服治療給藥而言，這些活性化合物可以與賦形劑混合并以可消化的片劑、口腔片、錠劑、膠囊、酏劑、懸浮液、糖漿、糯米紙囊劑等形式使用。這些組合物和制劑應(yīng)含有至少0.1％的活性化合物。當(dāng)然，這些組合物和制劑的百分比可以變化，并且可以適宜地為單位重量的約2-約75％，或者優(yōu)選在25-60％之間。活性化合物在這些治療用組合物中的量為使得獲得適宜劑量。
片劑、口腔片、丸劑、膠囊等也可以含有以下粘合劑，例如西黃蓍膠、阿拉伯膠、玉米淀粉或明膠；賦形劑，例如磷酸二鈣；崩解劑，例如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、海藻酸等；潤滑劑，例如硬脂酸鎂；和甜味劑，例如可以加入蔗糖、乳糖或糖精，或者調(diào)味劑，例如薄荷、冬綠油或櫻桃風(fēng)味劑。當(dāng)劑量單位形式為膠囊時，除了上面類型的材料外，可以含有液體載體。各種其它材料可以包衣存在，或者用于改變劑量單位的物理形式。例如，可以用蟲膠、糖或者兩者涂布片劑、丸劑或膠囊。酏劑糖漿可以含有活性化合物、作為甜味劑的蔗糖、作為防腐劑的對羥基苯甲酸甲酯和對羥基苯甲酸丙酯、染料和調(diào)味劑，例如櫻桃或柑橘調(diào)味劑。
B、治療有效量的曲格列酮和其它噻唑烷二酮類有效量的治療劑是以所需目標(biāo)，例如(i)抑制子宮收縮或(ii)抑制排乳為基礎(chǔ)確定的。術(shù)語“單位劑量”是指適用于患者的物理離散單位，每一單位含有經(jīng)計算產(chǎn)生上面討論的所需反應(yīng)的預(yù)定量治療組合物，與其給藥方式即適宜路徑和治療機理有關(guān)。根據(jù)治療數(shù)和單位劑量的所給量取決于治療對象、患者的狀態(tài)和所希望的保護。治療組合物的精確量還取決于醫(yī)師的判斷并且對每個個體都不一樣。
可以與作為治療的次要保胎劑聯(lián)合治療的噻唑烷二酮，例如曲格列酮，的有效量可以根據(jù)治療的宿主和特定的給藥方式進行改變。在本發(fā)明的一個實施方式中，例如曲格列酮的噻唑烷二酮的使用劑量范圍為約0.5mg/kg體重-約500mg/kg體重。術(shù)語“體重”是動物接受治療時的體重。當(dāng)治療分離的細(xì)胞時，本文所用的“體重”應(yīng)理解為“總細(xì)胞重”。術(shù)語“總重量”可用于分離的細(xì)胞和動物治療。所有濃度和治療水平都以“體重”或簡單地“mg”表示，在本發(fā)明中還被認(rèn)為包括類似的“所有細(xì)胞重量”和“總重量”濃度。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員將想到使用各種劑量范圍，例如1mg/kg體重-450mg/kg體重、2mg/kg體重-400mg/kg體重、3mg/kg體重-350mg/kg體重、4mg/kg體重-300mg/kg體重、5mg/kg體重-250mg/kg體重、6mg/kg體重-200mg/kg體重、7mg/kg體重-150mg/kg體重、8mg/kg體重-100mg/kg體重或9mg/kg體重-50mg/kg體重。而且，本領(lǐng)域技術(shù)人員將想到可以使用各種不同劑量水平，1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、7.5mg/kg、10mg/kg、12.5mg/kg、15mg/kg、17.5mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg、80mg/kg、90mg/kg、100mg/kg、120mg/kg、140mg/kg、150mg/kg、160mg/kg、180mg/kg、200mg/kg、225mg/kg、250mg/kg、275mg/kg、300mg/kg、325mg/kg、350mg/kg、375mg/kg、400mg/kg、450mg/kg、500mg/kg、550mg/kg、600mg/kg、700mg/kg、750mg/kg、800mg/kg、900mg/kg、1000mg/kg、1250mg/kg、1500mg/kg、1750mg/kg、2000mg/kg、2500mg/kg和/或3000mg/kg。當(dāng)然，所有這些劑量為舉例性的，并且預(yù)期這些點之間的任意劑量液可用于本發(fā)明。對曲格列酮或其它噻唑烷二酮類而言，可以上面任意的劑量范圍或劑量水平將它們單獨或這些化合物與保胎藥一起使用。
“治療有效量”或“[化合物]有效量”是指有效地產(chǎn)生有益結(jié)果，例如抑制或減少催產(chǎn)素介導(dǎo)作用的那些量。這些量最初可以通過查閱公開的文獻(xiàn)、通過進行體外試驗或在健康試驗動物內(nèi)進行代謝研究確定。在用于臨床之前，可以在動物模型，優(yōu)選待治療的特定疾病的廣泛接受的動物模型中有益地進行證實性研究。用于某些實施方式的優(yōu)選動物模型為嚙齒動物模型，由于它們使用經(jīng)濟，特別是所得結(jié)果作為臨床價值的預(yù)兆被廣泛地接受，因此優(yōu)選它們。
正如本領(lǐng)域所公知的，例如曲格列酮和噻唑烷二酮類化合物的活性化合物用于任意特定患者的特定劑量水平取決于各種因素，包括所用特定化合物的活性、年齡、體重、綜合健康、性別、膳食、給藥時間、給藥路徑、排泄率、藥物組合以及進行治療的具體病的嚴(yán)重性。對給藥負(fù)責(zé)的人將決定單個患者的適宜劑量。而且，對人給藥而言，制品應(yīng)滿足FDA局生物標(biāo)準(zhǔn)所需的無菌、致熱性、大體安全和純度標(biāo)準(zhǔn)。
在一些實施方式中，曲格列酮或噻唑烷二酮類化合物將與次要試劑一起給藥。只要不要求次要試劑的劑量不超過前面引用的毒性水平，并且次要試劑的有效量可以簡單地定義為當(dāng)與噻唑烷二酮一起給藥到動物時能有效地抑制或減少催產(chǎn)素介導(dǎo)作用的那些量。這可以通過監(jiān)測動物或患者并測定指示給定治療成功的健康和疾病的那些物理和生物化學(xué)參數(shù)。這些方法在動物試驗和臨床實踐中為常規(guī)。C、組合治療本發(fā)明的主要目的是減少催產(chǎn)素介導(dǎo)作用。包括將噻唑烷二酮或噻唑烷二酮樣化合物單獨或與其它試劑一起給藥?？梢耘c噻唑烷二酮或噻唑烷二酮樣化合物組合的其它試劑包括其它保胎劑，例如β-模擬物、硫酸鎂、前列腺素抑制劑，并且使子宮松弛的鈣阻斷劑將減少或預(yù)防影響子宮收縮、前列腺素釋放和排乳的催產(chǎn)素介導(dǎo)作用。
可以使用各種組合；噻唑烷二酮或噻唑烷二酮樣化合物為“A”并且其它試劑為B”A/B/A B/A/B B/B/A A/A/BA/B/BB/A/AA/B/B/BB/A/B/BB/B/B/AB/B/A/BA/A/B/BA/B/A/BA/B/B/AB/B/A/AB/A/B/AB/A/A/BA/A/A/BB/A/A/AA/B/A/AA/A/B/AV、實施例通過以下實施例說明本發(fā)明的優(yōu)選實施方式。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解為，這些實施例中公開的這些技術(shù)遵循本發(fā)明人所公開的代表性技術(shù)，并在本發(fā)明的試驗中作用良好，因此可以認(rèn)為它們構(gòu)成其試驗的優(yōu)選方式。然而，根據(jù)本文所公開的內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)想到可以在不背離本發(fā)明的精神和范圍下對所公開的具體實施方式
進行許多改變，同時仍然可以獲得類似結(jié)果。
實施例1材料和方法化學(xué)物質(zhì)從以下源獲得化學(xué)物質(zhì)OT和OT拮抗劑(OTA)＝[d(CH2)5，Tyr(Me)2，Thr4，Tyr-NH29]OVT，伊比利亞半島實驗室(Belmont，CA)；抗壞血酸、地塞米松和β-甘油磷酸酯，Sigma。
細(xì)胞培養(yǎng)條件經(jīng)C-段從母親獲得人足月子宮肌層組織時建立這些適宜方案。通過膠原酶分散分離人足月妊娠子宮肌層細(xì)胞并在由補充有10％胎牛血清(FBS)和2％青霉素/鏈霉素的Delbecco氏改性eagles培養(yǎng)基(DMEM)組成的培養(yǎng)基中在人性化組織培養(yǎng)培養(yǎng)箱中在37℃、5％CO2和95％空氣的環(huán)境下生長。
測定OTR配體結(jié)合如前面所述將OTA單碘化(Hinko和Soloff，1992)。制備時的碘化肽的比活性為2000Ci/mmol。如前面所述，使用增加濃度的[125I]OTA進行特異性O(shè)TR結(jié)合活性的整個細(xì)胞測定(Copland等人，1999)。使用Hoechst染料H 33258和Hoefer DyNAQuant熒光計按照廠商的說明測定細(xì)胞DNA的濃度。
就競爭性研究而言，將適宜濃度的化合物如曲格列酮、BRL49653、吡格列酮、雌二醇和維生素E琥珀酸酯在有125I-OTA的情況下培養(yǎng)。通過總cpm減去非特異性結(jié)合確定特異性結(jié)合。特異性結(jié)合用總結(jié)合的百分?jǐn)?shù)表示。所有點重復(fù)三次。
胞內(nèi)鈣水平使用前面所述的方法和設(shè)計在單細(xì)胞中進行[Ca2+]i的實時記錄(Copland等人，1999)。當(dāng)內(nèi)分析差異系數(shù)為6.3％時分析靈敏度為2.5pg/ml，并且內(nèi)分析差異系數(shù)為6.9％。
前列腺素E2(PGE2)水平如上所述，使用來自Amersham LifeSciences(Arlington Heights，IL)的PGE2酶免疫測定(EIA)體系測定培養(yǎng)基中的PGE2水平(Copland等人，1999)。當(dāng)內(nèi)分析差異系數(shù)為6.3％時分析靈敏度為2.5pg/ml，并且內(nèi)分析差異系數(shù)為6.9％。
統(tǒng)計Newman-Keuls試驗所遵循的單向方差分析確定不同治療組的方式之間的統(tǒng)計學(xué)差異(Statview 512軟件，加拿大Calabasas的BrainPowers公司)。在P＜0.05水平下認(rèn)為差異顯著。
實施例2曲格列酮和催產(chǎn)素受體之間的相互作用在圖1中，顯示曲格列酮與OTR直接結(jié)合。當(dāng)加入結(jié)合試驗中時，曲格列酮與125I-OTA直接競爭，隨著曲格列酮劑量增加，可測定的結(jié)合水平降低。曲格列酮的50％抑制濃度(IC50)為15.7nM，而與之比較，催產(chǎn)素的IC50＝0.58nM。BRL49653和吡格列酮的IC50約為10.6μM。5β-二羥基孕酮的IC50約為100μM，維生素E琥珀酸酯和17β-雌二醇證實對OTR結(jié)合沒有親和力。
實施例3曲格列酮對催產(chǎn)素介導(dǎo)活性的干擾在初級人子宮肌層細(xì)胞中測定前列腺素E2(PGE2)合成作為功能性參數(shù)，顯示當(dāng)在催產(chǎn)素處理前幾分鐘向培養(yǎng)基中加入5μg/ml曲格列酮時競爭阻斷通過催產(chǎn)素的PGE2釋放(圖2)。
測定催產(chǎn)素作用的另一功能性參數(shù)，將胞內(nèi)鈣從胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)釋放到細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中，證實10nM劑量的催產(chǎn)素快速地增加胞內(nèi)鈣釋放(圖3A，每條線代表一個單細(xì)胞的鈣變化)。如果子宮肌層細(xì)胞中的胞內(nèi)鈣沒有增加，那么沒有發(fā)生肌肉收縮。在圖3B中，0.001μg/ml曲格列酮(2.2nM)對10nM刺激劑量的催產(chǎn)素沒有影響，然而在圖3C中0.01μg/ml劑量部分地抑制催產(chǎn)素刺激的胞內(nèi)鈣增加。在圖3D中，0.1μg/ml劑量的曲格列酮完全抑制催產(chǎn)素刺激的胞內(nèi)鈣增加。曲格列酮的影響是特異性的。在有0.1μg/ml曲格列酮的情況下100nM鈴蟾肽引起胞內(nèi)鈣水平增加(圖3D)。與OTR相同，鈴蟾肽也為Gq偶聯(lián)蛋白質(zhì)。在圖3E、圖3F和圖3G中，特異性的其它證據(jù)證實，緩激肽刺激的胞內(nèi)鈣釋放不受1μg/ml劑量曲格列酮的抑制，然而100nM催產(chǎn)素刺激的胞內(nèi)鈣釋放受到抑制。在圖3H中，證實了相應(yīng)于不同濃度的催產(chǎn)素(10-11-10-6M，對照)的胞內(nèi)鈣的劑量依賴性增加。劑量為0.1或1μM的曲格列酮證實劑量依賴性抑制催產(chǎn)素誘導(dǎo)的胞內(nèi)鈣增加。曲格列酮的兩個劑量都使劑量反應(yīng)曲線向右移。在有曲格列酮(10-8M OT/107曲格列酮和10-7MOT/10-6M曲格列酮)情況下的高水平催產(chǎn)素時，胞內(nèi)鈣水平與OT單獨刺激的那些相等。這說明曲格列酮為競爭性抑制劑，正好與非競爭性抑制劑催產(chǎn)素相反。
在圖4中，有C-段分娩獲得足月子宮肌層組織，并且在低定張力下將幾條組織懸浮于37℃PBS浴中。該張力引起圖4A所證實的節(jié)律性收縮。10nM催產(chǎn)素引起持續(xù)的收縮快速增加。去除催產(chǎn)素之后，該組織恢復(fù)到收縮的節(jié)律性模式。在圖4B中，劑量為10μg/ml的曲格列酮抑制10nM催產(chǎn)素誘導(dǎo)的收縮。100nM劑量的催產(chǎn)素能夠克服曲格列酮抑制，這證實了曲格列酮處理的可逆性。
根據(jù)本文所公開的內(nèi)容，可以制備和實施本文所公開的所有組合物和/或方法，并且沒有不當(dāng)試驗。盡管按照優(yōu)選實施方式描述了本發(fā)明的組合物和方法，等滲顯而易見，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在不背離本發(fā)明的概念、精神和范圍下對本文所述的組合物和/或方法以及方法的步驟或步驟的順序進行改變。更具體地說，顯而易見，化學(xué)和生理相關(guān)的一些試劑可以用本文所公開的試劑(例如其它噻唑烷二酮類)替換，同時獲得相同或相似的結(jié)果。對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說都是顯而易見的所有這些相似的替代和改變被認(rèn)為都在附加權(quán)利要求書所定義的本發(fā)明的精神、范圍和概念內(nèi)。
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權(quán)利要求
1.一種預(yù)防妊娠者早產(chǎn)的方法，包括對該妊娠者給予預(yù)防其早產(chǎn)有效量的噻唑烷二酮。
2.一種減少對象內(nèi)催產(chǎn)素介導(dǎo)作用的方法，包括對該對象給予減少其中催產(chǎn)素介導(dǎo)作用的有效量的噻唑烷二酮。
3.如權(quán)利要求2的方法，其中所述催產(chǎn)素介導(dǎo)作用為誘導(dǎo)妊娠者分娩。
4.如權(quán)利要求2的方法，其中所述催產(chǎn)素介導(dǎo)作用為誘導(dǎo)子宮痛性痙攣。
5.如權(quán)利要求2的方法，其中所述催產(chǎn)素介導(dǎo)作用為誘導(dǎo)排乳。
6.如權(quán)利要求2的方法，其中所述催產(chǎn)素介導(dǎo)作用為誘導(dǎo)前列腺素釋放。
7.如權(quán)利要求2的方法，其中所述對象為哺乳動物。
8.如權(quán)利要求2的方法，其中所述噻唑烷二酮包括曲格列酮。
9.如權(quán)利要求2的方法，其中所述噻唑烷二酮包括吡格列酮、BRL49653或與曲格列酮相關(guān)的化合物。
10.如權(quán)利要求2的方法，其中所述噻唑烷二酮以藥理學(xué)可接受的形式分散。
11.如權(quán)利要求10的方法，其中所述噻唑烷二酮經(jīng)局部給藥。
12.如權(quán)利要求10的方法，其中所述噻唑烷二酮經(jīng)非腸道給藥。
13.如權(quán)利要求12的方法，其中所述噻唑烷二酮經(jīng)靜脈內(nèi)給藥。
14.如權(quán)利要求11的方法，其中所述噻唑烷二酮經(jīng)腹膜內(nèi)給藥。
15.如權(quán)利要求3的方法，還包括給予保胎劑。
16.如權(quán)利要求15的方法，其中所述保胎劑包括β-模擬物、硫酸鎂、前列腺素抑制劑或鈣阻斷劑。
17.如權(quán)利要求16的方法，其中所述前列腺素抑制劑為消炎痛。
18.如權(quán)利要求17的方法，其中所述鈣阻斷劑為硝苯地平。
19.如權(quán)利要求15的方法，其中將所述保胎劑和噻唑烷二酮同時給予。
20.一種篩選催產(chǎn)素激動劑的方法，包括向催產(chǎn)素受體給予曲格列酮樣化合物并測定該化合物是否與該受體結(jié)合。
21.一種篩選催產(chǎn)素拮抗劑的方法，包括(a)將噻唑烷二酮給藥到催產(chǎn)素受體；(b)給予含有候選催產(chǎn)素拮抗劑的組合物；以及(c)測定該噻唑烷二酮是否與該受體結(jié)合。
全文摘要
本發(fā)明提供了通過使用例如曲格列酮的噻唑烷二酮或噻唑烷二酮樣化合物預(yù)防或減少催產(chǎn)素介導(dǎo)作用的方法。這些方法描述了單獨使用這些化合物,或?qū)⑵渑c例如保胎劑的至少一種其它試劑一起使用。這賦予了治療催產(chǎn)素介導(dǎo)作用,例如誘導(dǎo)子宮收縮、前列腺素釋放和排乳的新型治療機理。因此,通過這些方法可以治療例如早產(chǎn)和剖腹產(chǎn)分娩之前分娩的癥狀。
文檔編號C07D277/20GK1328456SQ99813856
公開日2001年12月26日 申請日期1999年10月29日 優(yōu)先權(quán)日1998年10月29日
發(fā)明者J·A·科普蘭德三世, K·L·艾夫斯, M·索羅夫 申請人:德克薩斯大學(xué)董事會