一種肝素鈉的去色與降低硫酸皮膚素含量的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種肝素鈉的去色與降低硫酸皮膚素含量的方法，屬于肝素鈉純化【技術領域】，其包括以下步驟：（1）將肝素鈉溶解在醋酸鈉溶液中；（2）使用醋酸將步驟（1）中所得到的溶液pH調節(jié)至酸性；（3）將步驟（2）中所得溶液加熱至60℃，然后在溶液中加入溶液重量的0.7～1.0倍的乙醇，加入乙醇的同時進行攪拌，所得溶液在60℃條件下保持1h后停止攪拌；（4）采用梯度降溫的方法將步驟（3）中得到的溶液混合物降溫，直至溫度降低至室溫；（5）步驟（4）中的梯度降溫程結束后，去除含廢乙醇的上清液后，將下層的沉淀固體進行脫水烘干，得到純化后的肝素鈉。通過本發(fā)明處理過的肝素鈉，能夠有效的去除顏色并降低肝素鈉中硫酸皮膚素的含量。
【專利說明】一種肝素鈉的去色與降低硫酸皮膚素含量的方法

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種肝素鈉的去色與降低硫酸皮膚素含量的方法，能有效的去除肝素鈉的顏色以及降低肝素鈉中硫酸皮膚素的含量，屬于肝素鈉的純化方法【技術領域】。

【背景技術】
[0002]肝素鈉是目前臨床上使用最多、最廣泛的抗凝劑，在生物體內與蛋白的復合物形式出現(xiàn)。這種復合物沒有抗凝血活性，只有將其單獨分離出來才能表現(xiàn)出抗凝血活性。肝素鈉在生物界分布廣泛，存在于高等哺乳動物中，如豬、牛、羊等的肺部組織、腸組織中。肝素鈉常見的分離方式有酶解或鹽解、醇沉、氧化等，由于肝素的來源以及提取方式，肝素中必然含有大量的核酸蛋白雜質、硫酸皮膚素，同時肝素的顏色也較深。
[0003]目前在生產精品肝素鈉的過程中，國內絕大數(shù)廠家都要使用高錳酸鉀或者過氧化氫對肝素粗品進行氧化，以降低肝素鈉的顏色，根據(jù)粗品肝素鈉的顏色深淺，高錳酸鉀或者過氧化氫的用量也有差別。不論哪種氧化形式，都會對肝素鈉的結構造成一定的破壞，從而降低了肝素鈉的生物活性，影響了產品的品質和收率。
[0004]另外，肝素鈉在精制過程中都需要以分次沉淀的方式，去除粗品肝素鈉中含有的硫酸皮膚素雜質，每次沉淀在去除硫酸皮膚素的同時，也會去除一部分的肝素鈉，造成了肝素鈉的產品收率降低。


【發(fā)明內容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種能減少對肝素鈉生物活性破壞、質量穩(wěn)定、收率提高的肝素鈉的去色與降低硫酸皮膚素含量的方法，以解決現(xiàn)有技術的肝素鈉在后續(xù)精制過程中影響產品的品質和收率的技術問題。
[0006]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術方案為:一種肝素鈉的去色與降低硫酸皮膚素含量的方法，其包括以下步驟:(I)將肝素鈉溶解在醋酸鈉溶液中；(2)使用醋酸將步驟Cl)中所得到的溶液PH調節(jié)至酸性；(3)將步驟(2)中所得溶液加熱至60°C，然后在溶液中加入溶液重量的0.7-1.0倍的乙醇，加入乙醇的同時進行攪拌，所得溶液在60°C條件下保持Ih后停止攪拌；(4)采用梯度降溫的方法將步驟(3)中得到的溶液混合物降溫，直至溫度降低至室溫，本步驟得到上層含乙醇清液、下層含肝素鈉沉淀固體的混合物；(5)步驟
(4)中的梯度降溫程結束后，去除含廢乙醇的上清液后，將下層的沉淀固體進行脫水烘干，得到純化后的肝素鈉。
[0007]步驟(I)中，用于溶解粗品肝素鈉的醋酸鈉溶液重量濃度為5°/『10%。
[0008]步驟(2)中，使用醋酸將溶液pH最終調節(jié)至3.5-5.0。
[0009]步驟(4)中，梯度降溫過程中控制每小時溫度降低4~6°C。
[0010]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明使用醋酸鈉溶解肝素鈉溶液，使用醋酸調節(jié)pH，在溶液中形成了一個緩沖體系，能夠確保溶液在升溫和后續(xù)逐步降溫沉淀的過程中PH的穩(wěn)定，溶液始終維持一個偏酸性的環(huán)境體系，有利于肝素鈉的分離。同時，使用先升溫然后逐步梯度降溫的過程，能夠確保肝素鈉逐步穩(wěn)定的從溶液中析出并且沉淀，最大程度的保障肝素鈉與硫酸皮膚素的分離效果。通過本發(fā)明的方法處理過的肝素鈉，能夠有效的去除顏色并降低肝素鈉中硫酸皮膚素的含量，當這種肝素鈉作為原料進行精制時，能夠大大減少氧化去色過程中高錳酸鉀或者過氧化氫的用量，降低氧化劑的用量，減少氧化劑對肝素鈉生物活性的破壞，提高了產品品質，同時減少了分次沉淀的次數(shù)，提高了產品收率。

【具體實施方式】
[0011]下面結合具體實施例對本發(fā)明進行詳細說明。
[0012]實施例1:
本實施例肝素鈉的去色與降低硫酸皮膚素含量的方法按照以下步驟進行:
(I)取10g粗品肝素鈉溶解于重量濃度為5%的100ml的醋酸鈉溶液中，觀察溶解現(xiàn)象，確保粗品肝素鈉溶解完全。
[0013](2)使用醋酸溶液調節(jié)步驟(I)中所得到溶液的pH，一邊攪拌一邊加入醋酸溶液，直至所得溶液的PH=3.5，停止調酸。
[0014]使用醋酸調節(jié)pH，在溶液中形成了一個緩沖體系，能夠確后續(xù)步驟中pH的穩(wěn)定，溶液始終維持一個偏酸性的環(huán)境體系，有利于肝素鈉的分離。
[0015](3)將步驟(2)中所得溶液加熱至60°C，然后加入溶液重量的0.7倍的乙醇，加入乙醇的同時進行攪拌，在60°C維持Ih，同時關閉攪拌。
[0016](4)嚴格控制步驟(3)得到的溶液混合物的溫度，采用梯度降溫的方法將步驟(3)中得到的溶液混合物降溫，本實施例控制每小時溫度降低5°C，經過7h的降溫，直至溫度降低至室溫25°C，最終本步驟得到上層含乙醇清液、下層含肝素鈉沉淀固體的混合物。
[0017]使用先升溫然后逐步梯度降溫的過程，能夠確保肝素鈉逐步穩(wěn)定的從溶液中析出并且沉淀，最大程度的保障肝素鈉與硫酸皮膚素的分離效果。
[0018](5)待步驟(4)中的梯度降溫過程結束后，將步驟(4)所得混合物中的廢乙醇上清傾倒去除，再加入乙醇對沉淀得到的下層固體進行脫水，逐步將濕固體碾碎，脫水完成以后，靜置0.5h，傾倒除去脫水用的廢乙醇，再次加入乙醇進行脫水，完成兩次脫水以后，對所得固體烘干得到產品。
[0019]經檢測得到的產品的主要指標如下:
經過紫外分光光度計檢測0D400nm的數(shù)值，通過此項指標顯示顏色去除率，檢測得本次試驗顏色去除率為55%。
[0020]通過HPLC檢測產品的皮膚素含量，本次試驗中，皮膚素含量由22.5%降至7.2%，硫酸皮膚素的去除率為68.0%。
[0021]實施例2:
(I)取10g粗品肝素鈉溶解于重量濃度為10%的100ml醋酸鈉溶液，觀察溶解現(xiàn)象，確保粗品肝素鈉溶解完全。
[0022](2)使用醋酸溶液調節(jié)步驟(I)中所得到溶液的pH，一邊攪拌一邊加入醋酸溶液，直至pH=5.0，停止調酸。
[0023]使用醋酸調節(jié)pH，在溶液中形成了一個緩沖體系，能夠確后續(xù)步驟中pH的穩(wěn)定，溶液始終維持一個偏酸性的環(huán)境體系，有利于肝素鈉的分離。
[0024](3)將步驟(2)中所得溶液加熱至60°C，然后加入溶液重量的1.0倍的乙醇，加入乙醇的同時進行攪拌，在60°C維持Ih，同時關閉攪拌。
[0025](4)嚴格控制步驟(3)得到的溶液混合物的溫度，采用梯度降溫的方法將步驟(3)中得到的溶液混合物降溫，本實施例控制每小時溫度降低4°C，經過8h的降溫，直至溫度降低至室溫22°C，最終本步驟得到上層含乙醇清液、下層含肝素鈉沉淀固體的混合物。
[0026]使用先升溫然后逐步梯度降溫的過程，能夠確保肝素鈉逐步穩(wěn)定的從溶液中析出并且沉淀，最大程度的保障肝素鈉與硫酸皮膚素的分離效果。
[0027](5)待步驟(4)中的梯度降溫過程結束后，將步驟(4)所得混合物中的廢乙醇上清液傾倒去除，再加入乙醇對沉淀得到的下層沉淀固體進行脫水，逐步將濕固體碾碎，脫水完成以后，靜置0.5h，傾倒除去脫水用的廢乙醇，再次加入乙醇進行脫水，完成兩次脫水以后，對所得固體烘干得到產品。
[0028]經檢測得到的產品的主要指標如下:
經過紫外分光光度計檢測0D400nm的數(shù)值，通過此項指標顯示顏色去除率，檢測得本次試驗顏色去除率為48%。
[0029]通過HPLC檢測產品的皮膚素含量，本次試驗中，皮膚素含量由22.5%降至8.5%，硫酸皮膚素的去除率為62.2%。
[0030]有以上具體實施例可知，通過本發(fā)明處理過的肝素鈉，能夠有效的去除顏色并降低肝素鈉中硫酸皮膚素的含量。當這種肝素鈉在后續(xù)的精制過程中，能夠大大減少氧化去色過程中高錳酸鉀或者過氧化氫的用量，降低氧化劑的用量，減少氧化劑對肝素鈉生物活性的破壞，提高了產品品質，同時減少了分次沉淀的次數(shù)，提高了產品收率。
[0031 ] 在本發(fā)明的其它實施例中，步驟(I)中，用于溶解粗品肝素鈉的醋酸鈉溶液重量濃度可以是5110%之間的一個合適數(shù)值。
[0032]在本發(fā)明的其它實施例中，步驟(2)中，可以最終將溶液pH調節(jié)至3.5~5.0之間的一個合適值。
[0033]在本發(fā)明的其它實施例中，步驟(4)中，可以根據(jù)操作時的室溫，可以將梯度降溫過程中每小時溫度降低的值控制在4~6°C之間。
【權利要求】
1.一種肝素鈉的去色與降低硫酸皮膚素含量的方法，其特征在于，其包括以下步驟:(1)將肝素鈉溶解在醋酸鈉溶液中；(2)使用醋酸將步驟(1)中所得到的溶液pH調節(jié)至酸性；(3)將步驟(2)中所得溶液加熱至60°C，然后在溶液中加入溶液重量的0.7-1.0倍的乙醇，加入乙醇的同時進行攪拌，所得溶液在60°C條件下保持lh后停止攪拌；(4)采用梯度降溫的方法將步驟(3)中得到的溶液混合物降溫，直至溫度降低至室溫，本步驟得到上層含乙醇清液、下層含肝素鈉沉淀固體的混合物；(5)步驟(4)中的梯度降溫程結束后，去除含廢乙醇的上清液后，將下層的沉淀固體進行脫水烘干，得到純化后的肝素鈉。
2.根據(jù)權利要求1所述的肝素鈉的去色與降低硫酸皮膚素含量的方法，其特征在于:步驟(1)中，用于溶解粗品肝素鈉的醋酸鈉溶液重量濃度為5°/『10%。
3.根據(jù)權利要求1所述的肝素鈉的去色與降低硫酸皮膚素含量的方法，其特征在于:步驟(2)中，使用醋酸將溶液pH最終調節(jié)至3.5-5.0。
4.根據(jù)權利要求1所述的肝素鈉的去色與降低硫酸皮膚素含量的方法，其特征在于:步驟(4)中，梯度降溫過程中控制每小時溫度降低4~6°C。
【文檔編號】C08B37/10GK104448044SQ201410812877
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月24日 優(yōu)先權日:2014年12月24日
【發(fā)明者】唐詠群, 黃錫偉, 王春華, 高原, 董晗 申請人:南京健友生化制藥股份有限公司