本發(fā)明涉及中草藥有效成分提取純化技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種有效去除白花蛇舌草多糖中蛋白的方法。

背景技術(shù)：

白花蛇舌草是一種傳統(tǒng)的抗腫瘤中藥,可廣泛應(yīng)用于治療各種腫瘤。白花蛇舌草多糖是從茜草科耳草屬植物白花蛇舌草中提取得到的一種生物大分子,它由葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和鼠李糖等單糖組成,能顯著抑制小鼠移植性S-180實體瘤的生長,而且與環(huán)磷酰胺合用,可以明顯改善環(huán)磷酰胺所致的免疫器官萎縮和造血系統(tǒng)的損傷。但提取的白花蛇舌草多糖常含有雜質(zhì)蛋白質(zhì)，降低多糖純度，從而影響其活性和應(yīng)用效果。

目前經(jīng)常采用的除蛋白的方法主要是Sevag法和三氯乙酸法。但這兩種方法共同的缺點是都需要用到大量的有機溶劑，對環(huán)境污染，產(chǎn)生大量廢液，后期處理復(fù)雜，且多糖損失率大。因此，探索一種綠色環(huán)保、高效、工藝簡便的去蛋白的方法迫在眉睫。

木瓜蛋白酶，主要存在于番木瓜莖葉與果實中，未成熟果實的乳汁中含量最高。因其穩(wěn)定性好，蛋白水解能力強，并且對多種蛋白質(zhì)均具有較好的降解作用，目前已被廣泛地應(yīng)用于食品、化工、化妝品、醫(yī)療衛(wèi)生等行業(yè)中，由于該酶是100％純天然產(chǎn)物,適應(yīng)現(xiàn)代社會生活追求自然化趨勢，因此具有誘人的開發(fā)前景。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種綠色環(huán)保、高效、簡捷、安全的去除白花蛇舌草多糖中的蛋白質(zhì)方法。

本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：

白花蛇舌草經(jīng)水提后(工藝參數(shù)為：料液比：1:25，提取3次，時間分別為：1.5h、1.5h、1h)后合并三次提取液經(jīng)微濾膜組件分離得滲出液，再經(jīng)超濾后，得濃縮液，添加占底物體 積8％～15％的酶液，充分混勻，調(diào)節(jié)pH5.2～7.2。保溫45～65℃，酶解0.5～2.0h、沸水浴10min滅酶，4000rpm離心除去沉淀，上清液醇沉12h，獲得的多糖提取液中蛋白去除率可達(dá)85％～95％，多糖損失率為6～10％。

而且添加的酶液占底物體積的10％，酶解pH6.0，酶解溫度55℃，酶解1h，在此處理條件下，多糖中蛋白的去除率為90％，多糖損失率為7.9％。

本發(fā)明的優(yōu)點和積極效果：

本發(fā)明采用食品級的木瓜蛋白酶作為酶解劑，且無任何有機溶劑和添加劑，因此整個去蛋白過程無污染，綠色環(huán)保。所獲的白花蛇舌草多糖可直接作為醫(yī)藥或功能食品的原料，提高了產(chǎn)品純度和價值。本工藝操作簡便，生產(chǎn)成本低，特別適用于工業(yè)化生產(chǎn)。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例，對本發(fā)明進一步說明，下述實施例是說明性的，不是限定性的，不能以下述實施例來限定本發(fā)明的保護范圍。

實施例1

10kg白花蛇舌草，添加250kg水，充分?jǐn)嚢瑁?次(1.5h、1.5h、1h)后合并3次提取液經(jīng)微濾膜組件分離得滲出液，再經(jīng)超濾后，得濃縮液，添加8％的酶液，充分混勻，調(diào)節(jié)pH至5.5。保溫45℃，酶解1.5h、沸水浴10min滅酶，4000rpm離心除去沉淀，上清液醇沉12h，獲得的多糖提取液中蛋白去除率可達(dá)86％，多糖損失率為6.8％。

實施例2

10kg白花蛇舌草，添加250kg水，充分?jǐn)嚢?，水?次(1.5h、1.5h、1h)后合并3次提取液經(jīng)微濾膜組件分離得滲出液，再經(jīng)超濾后，得濃縮液，添加10％的酶液，充分混勻，調(diào)節(jié)pH至6.0。保溫55℃，酶解1h、沸水浴10min滅酶，4000rpm離心除去沉淀，上清液醇沉12h，獲得的多糖提取液中蛋白去除率可達(dá)90％，多糖損失率為7.4％。

實施例3

10kg白花蛇舌草，添加250kg水，充分?jǐn)嚢?，水?次(1.5h、1.5h、1h)后合并3次提取液經(jīng)微濾膜組件分離得滲出液，再經(jīng)超濾后，得濃縮液，添加12％的酶液，充分混勻， 調(diào)節(jié)pH至7.0。保溫55℃，酶解1h、沸水浴10min滅酶，4000rpm離心除去沉淀，上清液醇沉12h，獲得的多糖提取液中蛋白去除率可達(dá)88％，多糖損失率為8.9％。

實施例4

10kg白花蛇舌草，添加250kg水，充分?jǐn)嚢瑁?次(1.5h、1.5h、1h)后合并3次提取液經(jīng)微濾膜組件分離得滲出液，再經(jīng)超濾后，得濃縮液，添加15％的酶液，充分混勻，調(diào)節(jié)pH至6.5。保溫60℃，酶解1.5h、沸水浴10min滅酶，4000rpm離心除去沉淀，上清液醇沉12h，獲得的多糖提取液中蛋白去除率可達(dá)95％，多糖損失率為9.7％。

實施例5

10kg白花蛇舌草，添加250kg水，充分?jǐn)嚢?，水?次(1.5h、1.5h、1h)后合并3次提取液經(jīng)微濾膜組件分離得滲出液，再經(jīng)超濾后，得濃縮液，添加10％的酶液，充分混勻，調(diào)節(jié)pH至7.0。保溫60℃，酶解1h、沸水浴10min滅酶，4000rpm離心除去沉淀，上清液醇沉12h，獲得的多糖提取液中蛋白去除率可達(dá)90％，多糖損失率為9.1％。

實施例6

10kg白花蛇舌草，添加250kg水，充分?jǐn)嚢?，水?次(1.5h、1.5h、1h)后合并3次提取液經(jīng)微濾膜組件分離得滲出液，再經(jīng)超濾后，得濃縮液，添加13％的酶液，充分混勻，調(diào)節(jié)pH至6.5。保溫55℃，酶解1.5h、沸水浴10min滅酶，4000rpm離心除去沉淀，上清液醇沉12h，獲得的多糖提取液中蛋白去除率可達(dá)89％，多糖損失率為8.3％。