1.一種引物，其包含選自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48的核苷酸序列。
2.一種引物集合，其包含
(a)選自SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:43的正向引物；
(b)選自SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:48的反向引物；和
(c)選自SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:56的肽核酸寡聚體。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的引物集合，其中所述引物集合選自：
(a)SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:52；
(b)SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:52；
(c)SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:56；
(d)SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:56；
(e)SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:56；和
(f)SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:56。
4.一種探針，其包含選自SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:51的核苷酸序列。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的探針，所述探針還包含可檢測(cè)標(biāo)記。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的探針，其中所述可檢測(cè)標(biāo)記是熒光標(biāo)記。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的探針，其中所述熒光標(biāo)記選自FAM、NED、Cy5和VIC。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的探針，所述探針還包含猝滅劑部分。
9.一種引物和探針集合，其包含
(a)一種或多種選自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9的正向引物；
(b)一種或多種選自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12的反向引物；
(c)一種或多種選自SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42的探針；和
(d)一種或多種選自SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56和SEQ ID NO:57的肽核酸寡聚體。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的引物和探針集合，其中所述一種或多種探針包含可檢測(cè)標(biāo)記。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的引物和探針集合，其中所述可檢測(cè)標(biāo)記是熒光標(biāo)記。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的引物和探針集合，其中所述熒光標(biāo)記選自FAM、NED、Cy5和VIC。
13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的引物和探針集合，其中所述一種或多種探針還包含猝滅劑部分。
14.根據(jù)權(quán)利要求9所述的引物和探針集合，其還包含內(nèi)部對(duì)照集合，所述內(nèi)部對(duì)照集合包含
(a)正向引物，其含有SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44或SEQ ID NO:45所示的核苷酸序列；
(b)反向引物，其含有SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47或SEQ ID NO:48所示的核苷酸序列；和
(c)探針，其含有SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50或SEQ ID NO:51所示的核苷酸序列。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的引物和探針集合，其中所述包含SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50或SEQ ID NO:51所示的核苷酸序列的探針還包含可檢測(cè)標(biāo)記。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的引物和探針集合，其中所述可檢測(cè)標(biāo)記是熒光標(biāo)記。
17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的引物和探針集合，其中所述包含SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50或SEQ ID NO:51所示的核苷酸序列的探針還包含猝滅劑部分。
18.根據(jù)權(quán)利要求14所述的引物和探針集合，其中所述引物和探針集合選自：
(a)SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:51；
(b)SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:51；和
(c)SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40和SEQ ID NO:51。
19.一種鑒別一種或多種單核苷酸多態(tài)性(SNP)在v-Ki-ras2 Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同系物(KRAS)中的存在與否的方法，所述方法包括：
(a)形成反應(yīng)混合物，其包含
(i)得自受試者的樣品，其中所述樣品疑似含有KRAS靶序列，和
(ii)權(quán)利要求9的引物和探針集合；
(b)使所述反應(yīng)混合物處于足以形成一種或多種擴(kuò)增子的條件；和
(c)檢測(cè)所述一種或多種擴(kuò)增子。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述反應(yīng)混合物還包含內(nèi)部對(duì)照，所述內(nèi)部對(duì)照包含
(a)正向引物，其包含SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44或SEQ ID NO:45所示的核苷酸序列；
(b)反向引物，其包含SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47或SEQ ID NO:48所示的核苷酸序列；和
(c)探針，其含有SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50或SEQ ID NO:51所示的核苷酸序列。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，所述方法還包括確定循環(huán)數(shù)目的差異(ΔCN)，其中所述ΔCN是與含有SNP的擴(kuò)增子有關(guān)的循環(huán)數(shù)目和與從內(nèi)部對(duì)照產(chǎn)生的擴(kuò)增子有關(guān)的循環(huán)數(shù)目之間的差異。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中如果ΔCN小于截止值，那么SNP存在于KRAS中。
23.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，所述方法還包括基于步驟(c)中的檢測(cè)來鑒別一種或多種SNP在KRAS中的存在。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述一種或多種SNP選自G12C、G12R、G12S、G12D、G12A、G12V、G13D、G13C和Q61H。
25.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中權(quán)利要求9所述的引物和探針集合的一種或多種探針包含可檢測(cè)標(biāo)記。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述可檢測(cè)標(biāo)記是熒光標(biāo)記。
27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中權(quán)利要求9所述的引物和探針集合的一種或多種探針還包含猝滅劑部分。
28.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述可檢測(cè)標(biāo)記選自FAM、Cy5、NED和VIC。
29.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中檢測(cè)包括測(cè)量由所述可檢測(cè)標(biāo)記產(chǎn)生的熒光信號(hào)。
30.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中根據(jù)權(quán)利要求9所述的引物和探針集合是選自以下的引物和探針集合：
(a)SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:30；
(b)SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:20；和
(c)SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:40。
31.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述樣品得自受試者的癌性組織。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中所述癌性組織是來自結(jié)直腸癌或非小細(xì)胞肺癌的組織。
33.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中所述樣品是從固定的福爾馬林石蠟包埋的樣品提取的核酸。
34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中所述核酸是基因組DNA。
35.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述樣品是血液樣品、血清樣品或血漿樣品。
36.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述樣品是循環(huán)腫瘤DNA (ctDNA)。
37.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中形成反應(yīng)混合物包括形成三種反應(yīng)混合物，每種反應(yīng)混合物包含所述得自受試者的樣品和權(quán)利要求9的引物和探針集合。
38.根據(jù)權(quán)利要求37所述的方法，其中
(a)第一反應(yīng)混合物包含所述得自受試者的樣品、正向引物SEQ ID NO:2、反向引物SEQ ID NO:6、肽核酸寡聚體SEQ ID NO:52；和探針SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:30；
(b)第二反應(yīng)混合物包含所述得自受試者的樣品、正向引物SEQ ID NO:2、反向引物SEQ ID NO:6、肽核酸寡聚體SEQ ID NO:52；和探針SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:20；和
(c)第三反應(yīng)混合物包含所述得自受試者的樣品、正向引物SEQ ID NO:2、反向引物SEQ ID NO:6、正向引物SEQ ID NO:7、反向引物SEQ ID NO:11、肽核酸寡聚體SEQ ID NO:52、肽核酸寡聚體SEQ ID NO:56和探針SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:40。
39.根據(jù)權(quán)利要求38所述的方法，其中第一、第二和第三反應(yīng)混合物中的每一種還包含內(nèi)部對(duì)照，所述內(nèi)部對(duì)照包含
(a)正向引物，其含有SEQ ID NO:43所示的核苷酸序列；
(b)反向引物，其含有SEQ ID NO:48所示的核苷酸序列；和
(c)探針，其含有SEQ ID NO:51所示的核苷酸序列。
40.一種為有此需要的受試者選擇癌癥療法的方法，所述方法包括
(a)形成反應(yīng)混合物，其包含
(i)得自受試者的樣品，其中所述樣品疑似含有KRAS靶序列，和
(ii)權(quán)利要求9的引物和探針集合；
(b)使所述反應(yīng)混合物處于足以形成一種或多種擴(kuò)增子的條件；
(c)檢測(cè)所述一種或多種擴(kuò)增子；
(d)鑒別v-Ki-ras2Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同系物(KRAS)中的一種或多種單核苷酸多態(tài)性(SNP)；和
(e)基于在步驟(d)中鑒別的一種或多種SNP，為所述受試者選擇癌癥療法。
41.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中所述樣品得自受試者的癌性組織。
42.根據(jù)權(quán)利要求41所述的方法，其中所述癌性組織是來自結(jié)直腸癌或非小細(xì)胞肺癌的組織。
43.根據(jù)權(quán)利要求41所述的方法，其中所述樣品是從固定的福爾馬林石蠟包埋的樣品提取的核酸。
44.根據(jù)權(quán)利要求43所述的方法，其中所述核酸是基因組DNA。
45.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中所述樣品是血液樣品、血清樣品或血漿樣品。
46.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中所述樣品是循環(huán)腫瘤DNA (ctDNA)。
47.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中所述反應(yīng)混合物還包含內(nèi)部對(duì)照，所述內(nèi)部對(duì)照包含
(a)正向引物，其含有SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44或SEQ ID NO:45所示的核苷酸序列；
(b)反向引物，其含有SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47或SEQ ID NO:48所示的核苷酸序列；和
(c)探針，其含有SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50或SEQ ID NO:51所示的核苷酸序列。
48.根據(jù)權(quán)利要求47所述的方法，其中鑒別包括確定循環(huán)數(shù)目的差異(ΔCN)，其中所述ΔCN是與含有SNP的擴(kuò)增子有關(guān)的循環(huán)數(shù)目和與從內(nèi)部對(duì)照產(chǎn)生的擴(kuò)增子有關(guān)的循環(huán)數(shù)目之間的差異。
49.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中如果ΔCN小于截止值，那么SNP存在于KRAS中。
50.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中所述一種或多種SNP選自G12C、G12R、G12S、G12D、G12A、G12V、G13D、G13C、Q61H和它們的任意組合。
51.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中權(quán)利要求9所述的引物和探針集合中的一種或多種探針包含可檢測(cè)標(biāo)記。
52.根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中所述可檢測(cè)標(biāo)記是熒光標(biāo)記。
53.根據(jù)權(quán)利要求52所述的方法，其中所述熒光標(biāo)記選自FAM、Cy5、NED和VIC。
54.根據(jù)權(quán)利要求52所述的方法，其中權(quán)利要求9所述的引物和探針集合中的一種或多種探針還包含猝滅劑部分。
55.根據(jù)權(quán)利要求52所述的方法，其中檢測(cè)包括測(cè)量由所述可檢測(cè)標(biāo)記產(chǎn)生的熒光信號(hào)。
56.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中選擇包括，當(dāng)一種或多種SNP被鑒別為從KRAS缺失時(shí)，給所述受試者施用靶向表皮生長因子受體(EGFR)的治療。
57.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中選擇包括，當(dāng)一種或多種SNP被鑒別為存在于KRAS中時(shí)，不給所述受試者施用靶向表皮生長因子受體(EGFR)的治療。
58.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中選擇包括，當(dāng)一種或多種SNP被鑒別為存在于KRAS中時(shí)，給所述受試者施用除了靶向表皮生長因子受體(EGFR)的治療以外的療法。