-新型有機(jī)硒化合物；

-所述新型有機(jī)硒化合物的制備方法；

-所述新型有機(jī)硒化合物作為藥物活性成分的用途；

-以及包含所述新型有機(jī)硒化合物的藥物組合物，尤其是作為新型抗腫瘤劑。

現(xiàn)有技術(shù)

本發(fā)明涉及新型有機(jī)硒化合物，其制備方法，其作為藥物活性成分的用途，以及包含它們的藥物組合物，尤其是作為新型抗腫瘤劑。更具體地講，本發(fā)明涉及有機(jī)硒化合物的制備，所述有機(jī)硒化合物包括單獨(dú)地或與其他藥劑并且具體地講抗腫瘤劑結(jié)合具有藥物活性并且具體地講抗腫瘤或抗癌活性的2-羥基-3-甲基硒基丙酸、它們的鹽以及衍生自2-羥基-3-甲基硒基丙酸的酯和酰胺。

在工業(yè)化國(guó)家中癌癥仍然是主要的死因。盡管新型抗癌療法的開(kāi)發(fā)已取得許多進(jìn)展，但對(duì)于大多數(shù)實(shí)體瘤而言仍然需要根治療法。在二十世紀(jì)六十年代末，經(jīng)過(guò)研究“硒”的抗腫瘤潛能得以鑒定，從而揭示出在土壤中富含無(wú)機(jī)硒的情況下由于癌癥導(dǎo)致的死亡率較低。在過(guò)去二十年中，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的背景下，許多研究已揭示出“硒”在特定的多個(gè)器官中的抗癌活性[Papp LV等人,2007,Antioxid Redox Signal,9:775]。在用于評(píng)估“硒”對(duì)癌癥發(fā)病率的影響的總共八個(gè)臨床試驗(yàn)中，七個(gè)為陽(yáng)性結(jié)果[Whanger PD,2004,Br.J.Nutr.,91(1):11]。這證實(shí)了對(duì)動(dòng)物進(jìn)行的許多研究。

在二十一世紀(jì)初期Ip等人觀察到甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)的抗腫瘤活性[Medina D等人,2001,Nutrition and Cancer,40(1):12]。為了發(fā)揮作用，MeSeCys必須由β-裂解酶“活化”為甲硒醇[Ip C.等人,2002Cancer&Metast.Rev.,21(3-4):281]。人乳腺癌或前列腺癌的腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)出較低水平的β-裂解酶活性，這導(dǎo)致了這些腫瘤細(xì)胞對(duì)生理可接受濃度的MeSeCys的低靈敏度。相比之下，對(duì)患有前列腺腺瘤的轉(zhuǎn)基因小鼠施用3mg硒當(dāng)量/kg(Se eq./kg)MeSeCys的日劑量18至26周減緩了腫瘤病灶的發(fā)展，增加了細(xì)胞凋亡并且減少了腫瘤細(xì)胞的增殖[Wang L等人,2009,Cancer Prev.Res.,2:484]。

MeSeCys通過(guò)激活半胱天冬酶途徑誘導(dǎo)惡性腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞凋亡[Suzuki M.等人,2010,Cancer Chemother.Pharmacol.,66(3):475]。MeSeCys抑制乳腺細(xì)胞的生長(zhǎng)，并且其根據(jù)半胱天冬酶依賴性機(jī)制誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并且參與線粒體細(xì)胞色素C的釋放以及核小體DNA的碎裂[Hu H等人,2005,Carcinogenesis,26:1374]。該化合物也抑制小鼠動(dòng)物模型的前列腺癌發(fā)展并且增大小鼠的生存率[Wang L等人,2009,Cancer Prev.Res.,2:484]。

MeSeCys不易于合成，并且此外需要代謝活化才能發(fā)揮作用。

甲基硒酸(MSA)因其能夠在被諸如細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽的生物還原劑還原之后生成甲硒醇CH₃SeH而被使用。這賦予了甲基硒酸抗癌活性，已證實(shí)該抗癌活性高于MeSeCys的抗癌活性[Ip C等人,2000,Cancer Res.,60:2882]并且高于硒代甲硫胺酸的抗癌活性[Li GX等人,2008,Carcinogenesis,29:1005]。MSA能夠調(diào)節(jié)若干特異性生物標(biāo)志物，從而導(dǎo)致細(xì)胞增殖減少和細(xì)胞凋亡的激活[Dong Y.等人,2002,Anticancer Res.,22:27]。MSA通過(guò)氧化蛋白硫醇在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)部位處引發(fā)應(yīng)力，從而導(dǎo)致后者的異常折疊。如果修復(fù)系統(tǒng)“不堪重負(fù)”，則細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞凋亡過(guò)程[Wu Y等人,2005,Cancer Res.,65(19):9073]。此外，MSA以劑量依賴性方式降低激素非依賴性前列腺腺瘤細(xì)胞中的缺氧誘導(dǎo)因子HIF-1α的水平[Sinha R等人,2008,Cancer Prev.Res.,1,7,增刊,摘要號(hào)B117]。MSA減少小鼠的肺癌細(xì)胞的自發(fā)轉(zhuǎn)移[Yan L等人,2011,Int.J.Cancer,131:1260]。雖然活性很大，但MSA由于與配方及其穩(wěn)定性相關(guān)的顯著原因而難以用作藥物活性成分。

最后，其他有機(jī)硒化合物被描述為具有抗癌特性，諸如S,S'-1,4-亞苯基雙(1,2-乙二基)-異硒基-脲[SubbaRao VM等人,2008,Mol.Cancer Ther.,7(5):1297]、1,4-亞苯基雙(亞甲基)-硒氰酸酯[Chen KM,2007,Cancer Res.,67(21):10475]以及一系列異硒氰酸酯[Sharma A,2009,Clin.Cancer Res.,DOI 10.1158/1078-0432]。出于與MSA相同的原因，這些化合物非常難以用作藥物。

European Journal of Medicinal Chemistry,58,(2012),P192-205中的SHAABAN文件描述了包含作為潛在抗癌劑的氧化還原活性硫族元素和醌類的多種化合物。在第195頁(yè)，SHAABAN描述了其中R1可包括芳環(huán)(其可為芳基)并且R2＝C(＝O)R4和R4O(C＝O)的化合物，其中R2類似于下面描述的本發(fā)明的式(I)化合物的R4＝芳基。

然而，在下面描述的本發(fā)明的式(I)化合物中，僅在第二位置提供芳環(huán)，即以烷基-芳基形式提供，其中烷基附接到硒。

因此，式(I)的化合物相對(duì)于SHAABAN的第195頁(yè)的化合物4至18為新型的。

此外，對(duì)于具有對(duì)應(yīng)于本發(fā)明的式(I)的X的NH-叔丁基的SHAABAN的化合物4、5、7、10和11而言，本發(fā)明的式(I)的化合物也不同，因?yàn)樵谶@種情況下，R2≠C(＝O)CH₃并且R2僅為烷基或芳基。

另外，式(I)的化合物不具有醌類氧化還原基團(tuán)。

此外，在www.rsc.org/chemcomm,Royal Society of Chemistry,2006,P541-543中公布的ABBAS文件描述了多種不具有抗癌活性的化合物，其中第542頁(yè)上的在Se上具有甲基取代基的化合物7t對(duì)應(yīng)于下面所述的本發(fā)明的式(I)的R1。

然而，式7t的頂部的取代基對(duì)應(yīng)于下面所述的本發(fā)明的式(I)的取代基X，但對(duì)于X＝α-氨基酸而言，給出的定義提供了-NHCH(Y)COOH類型的基團(tuán)(α-氨基酸)，這不包括ABBAS的化合物7t的基團(tuán)-NH-(CH2)5-COOBn(ε-氨基酸)。

此外，在本發(fā)明的背景下，當(dāng)R2＝R4(C＝O)，但R4＝烷基或芳基時(shí)，式7t＝-O-C(＝O)-CH2-NH-C(＝O)-O-叔丁基的底部的取代基對(duì)應(yīng)于取代基-O-R2。

下面所述的本發(fā)明的“烷基”的正確理解的定義提供了取代，具體地講被氨基和/或酸基或酯基而非官能團(tuán)NH-C(＝O)-O-R取代，這將使其可能對(duì)應(yīng)于ABBAS中所述的7t。

因此，本發(fā)明的式(I)中的烷基的定義不包括ABBAS的化合物7t。

出于上文所公開(kāi)的原因，具有抗癌特性的現(xiàn)有技術(shù)的產(chǎn)品不符合抗腫瘤劑的要求。

發(fā)明目的

本發(fā)明的發(fā)明目的之一是設(shè)計(jì)易于合成和配制的新型有機(jī)硒化合物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是制備這些新型有機(jī)硒化合物，這些新型有機(jī)硒化合物可通過(guò)可用于工業(yè)規(guī)模的方法大量合成。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是制備新型有機(jī)硒化合物，所述新型有機(jī)硒化合物易于配制成藥物活性劑并且具體地講抗腫瘤劑或抗癌劑。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是制備新型藥物組合物，所述新型藥物組合物包含這些新型有機(jī)硒化合物中的至少一種的單獨(dú)一種或與另一種抗腫瘤劑或抗癌劑的組合。

這些目的由于本發(fā)明而得以實(shí)現(xiàn)，本發(fā)明基于新型有機(jī)硒化合物的設(shè)計(jì)和制備及其酯和酰胺以及其作為抗腫瘤劑的藥物用途。這已在本發(fā)明中舉例說(shuō)明。

具體實(shí)施方式

因此本發(fā)明旨在：

1)解決新的技術(shù)問(wèn)題，包括提供新型有機(jī)硒化合物及其酯和酰胺衍生物，從而構(gòu)成藥物組合物的活性成分；

2)根據(jù)以下解決方案解決這個(gè)新的技術(shù)問(wèn)題，該解決方案包括可在工業(yè)規(guī)模上用于制備這些新型有機(jī)硒化合物及其酯和酰胺衍生物的方法；

3)提供具有通式(I)的這些有機(jī)硒化合物的單獨(dú)一種或與其他藥劑尤其是與其他抗腫瘤劑的藥物組合物。

通過(guò)本發(fā)明，首次以非常簡(jiǎn)易且經(jīng)濟(jì)的方式同時(shí)解決了上面列出的技術(shù)問(wèn)題，用于制備所述新型化合物的方法非常易于實(shí)施，同時(shí)提供良好的產(chǎn)率。

根據(jù)第一方面，本發(fā)明涉及具有以下通式(I)的新型有機(jī)硒試劑：

其中

R¹＝烷基；

R²＝H、R⁴C(＝O)、R⁴OC(＝O)、α-氨?；?、CH₃SeCH₂CH₂CH(NH₂)C(＝O)、CH₃SeCH₂CH₂CH(OH)C(＝O)；

X＝OH、OR³、NH₂、NR⁴R⁵、α-氨基酸、CH₃SeCH₂CH₂CH(COOH)NH-、CH₃SeCH₂CH₂CH(COOH)O-；

R³＝烷基；

R⁴＝烷基、芳基；

R⁵＝H、烷基、芳基；

R⁴和R⁵能夠一起形成5元或6元環(huán)烷基基團(tuán)，該基團(tuán)可包含雜原子；

前提條件是，當(dāng)X＝NH-叔丁基時(shí)，R²≠C(＝O)CH₃。

本發(fā)明包括具體地講相對(duì)于帶有基團(tuán)OR²的碳原子以及相對(duì)于基團(tuán)R¹至R⁵的所有立體異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體和對(duì)映異構(gòu)體，以及在適用時(shí)存在的被視為單獨(dú)的或混合物形式的所有低聚物(二聚物、三聚物、……)和直鏈或支鏈的、無(wú)環(huán)或環(huán)狀的聚合物，所述低聚物和聚合物是在本發(fā)明中所述的式(I)的衍生物的兩個(gè)或更多個(gè)分子之間通過(guò)醇與羧酸官能團(tuán)之間的酯化反應(yīng)獲得的。

本發(fā)明還包括通式(I)的所述化合物的藥學(xué)可接受的酸或堿的所有鹽以及鈉、鈣、鋅和鎂鹽。

在通式(i)的化合物中，本發(fā)明具體地講涉及：

-特征在于R¹代表甲基、乙基或烯丙基基團(tuán)的那些；

-特征在于R²選自H、α-氨基酰基、CH₃SeCH₂CH₂CH(OH)C(＝O)、R₄(C＝O)、R₄O(C＝O)的那些；

-特征在于X選自O(shè)H、α-氨基酸、CH₃SeCH₂CH₂CH(COOH)NH-、CH₃SeCH₂CH₂CH(COOH)O-的那些；

-特征在于R¹代表甲基、乙基、烯丙基基團(tuán)；R²代表R4(C＝O)、R4O(C＝O)并且X代表OH或OR3的那些。

-實(shí)驗(yàn)部分制備的那些，具體地講化合物4、10、38、46和48。

在藥學(xué)可接受的酸中，可以非限制性地提及礦物酸，諸如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、酒石酸、磷酸，或有機(jī)酸，諸如甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、苯甲酸、馬來(lái)酸、富馬酸、琥珀酸、檸檬酸、草酸、乙醛酸、天冬氨酸，鏈烷磺酸，諸如甲磺酸、三氟甲磺酸、乙磺酸，芳基磺酸，諸如苯磺酸和對(duì)甲苯磺酸。

在藥學(xué)可接受的堿中，可以非限制性地提及無(wú)機(jī)堿，諸如鈉、鋰、鈣、鉀、鎂、銨或鋅的氫氧化物，堿金屬或堿土金屬的碳酸鹽，諸如鈉、鋰、鈣、鉀、鎂、銨或鋅的碳酸鹽和碳酸氫鹽，或有機(jī)堿，諸如甲胺、丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、N,N-二甲基乙醇胺、三(羥甲基)氨基甲烷、乙醇胺、吡啶、甲基吡啶、二環(huán)己基胺、嗎啉、普魯卡因、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、N-甲基葡糖胺，或者鏻鹽，諸如烷基鏻鹽、芳基鏻鹽、烷基芳基鏻鹽、烯基芳基鏻鹽，或季銨鹽，諸如四正丁基銨鹽。

在上式(I)中：

-烷基應(yīng)當(dāng)理解為包含具有1至26個(gè)碳原子的基團(tuán)的直鏈、支鏈或環(huán)狀飽和碳，所述碳原子可被一個(gè)或多個(gè)氟原子取代，或者可被一個(gè)或多個(gè)碳-碳雙鍵取代，或者可被至少一個(gè)OH基或被至少一個(gè)氨基取代，或者被至少一個(gè)COOH或COOR⁶基團(tuán)取代，R⁶為同樣選自具有1至26個(gè)碳原子的基團(tuán)的直鏈、支鏈或環(huán)狀飽和碳的基團(tuán)，所述碳原子為未取代的，諸如甲基、乙基、異丙基，或者可被一個(gè)或多個(gè)氟原子取代，諸如三氟甲基，或者可被苯基取代，諸如芐基，或者可被烯丙基取代，諸如亞油基、亞麻基、棕櫚?；?、烯丙基。

-芳基應(yīng)當(dāng)理解為可被一個(gè)或多個(gè)氟原子取代的苯基，或可被一個(gè)或多個(gè)氟原子取代的吡啶基，或咪唑鹽基。

-α-氨?；鶓?yīng)當(dāng)理解為-C(＝O)CH(Y)NH2類型的基團(tuán)，Y對(duì)應(yīng)于蛋白氨基酸中的一種的側(cè)鏈，即構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸。

-α-氨基酸應(yīng)當(dāng)理解為-NHCH(Y)COOH類型的基團(tuán)，Y應(yīng)于蛋白氨基酸中的一種的側(cè)鏈，即構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸。

-低聚物應(yīng)當(dāng)理解為由通過(guò)酯類鍵連接在一起的2至15個(gè)如本發(fā)明中所述的單體的序列組成的任何化合物。

-聚合物應(yīng)當(dāng)理解為由通過(guò)酯類鍵連接在一起的超過(guò)15個(gè)如本發(fā)明中所述的單體的序列組成的任何化合物。

-環(huán)狀二聚體應(yīng)當(dāng)理解為由下式組成的化合物：

其通過(guò)2個(gè)羥基酸基團(tuán)之間的2個(gè)酯鍵將如本發(fā)明中所述的通式(I)的化合物的2個(gè)單體連接在一起。

在另一個(gè)實(shí)施例中，式(I)的化合物選自如實(shí)例所述的化合物。

因此，式(I)的硒化合物可選自：

2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸甲酯；

(R)-2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸甲酯；

(S)-2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸甲酯；

2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸乙酯；

2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸叔丁酯；

(S)-(2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸芐酯；

(S)-(2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸芐酯；

3-(乙基硒)-2-羥基丙酸甲酯；

2-羥基-3-(異丁基硒)丙酸甲酯；

2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸異丙酯；

2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸；

(R)-2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸；

(S)-2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸；

3-乙基硒-2-羥基丙酸；

2-羥基-3-(異丁基硒)丙酸；

二環(huán)己胺2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸鹽；

2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸鈉；

雙(2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸鎂；

雙(2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸鋅；

雙(2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸鈣；

2-羥基-3-(甲基硒基)丙酰胺；

N-環(huán)丙基-2-羥基-3-(甲基硒基)丙酰胺；

N-[2-(二甲基氨基)乙基]-2-羥基-3-(甲基硒基)丙酰胺；

2-羥基-3-(甲基硒基)-1-(吡咯烷-1-基)丙-1-酮；

2-羥基-3-(甲基硒基)-1-(哌啶-1-基)丙-1-酮；

2-羥基-3-(甲基硒基)-1-(嗎啉-4-基)丙-1-酮；

N,N-二乙基-2-羥基-3-(甲基硒基)丙酰胺；

2-羥基-N-(2-羥乙基)-3-(甲基硒基)丙酰胺；

[(2RS)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-(S)-丙氨酸叔丁基酯；

[(2RS)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-(S)-丙氨酸；

[(2RS)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-(S)-甲硫氨酸甲酯；

[(2RS)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-(S)-甲硫氨酸；

[(2R)-2-羥基-3-甲基硒基丙酰基]-(S)-甲硫氨酸甲酯；

[(2R)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-(S)-甲硫氨酸；

[(2S)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-(S)-甲硫氨酸甲酯；

[(2S)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-(S)-甲硫氨酸；

N(α)-[(2RS)-2-羥基-3-甲基硒基丙酰基]-N(ω)-叔丁氧羰基-(S)-賴氨酸甲酯；

N(α)-[(2RS)-2-羥基-3-甲基硒基丙酰基]-N(ω)-芴基甲氧羰基-(S)-賴氨酸甲酯；

N(α)-[(2RS)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-N(ω)-芐氧羰基-(S)-賴氨酸甲酯；

[(2RS)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-(S)-硒代甲硫胺酸甲酯；

[(2RS)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-(S)-硒代甲硫胺酸；

[(2R)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-(S)-硒代甲硫胺酸甲酯；

[(2R)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-(S)-硒代甲硫胺酸；

[(2S)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-(S)-硒代甲硫胺酸甲酯；

[(2S)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-(S)-硒代甲硫胺酸；

2-(乙酰氧基)-3-(甲基硒基)丙酸；

2-(十二烷酰氧基)-3-(甲基硒基)丙酸；

2-(苯甲酰氧基)-3-(甲基硒基)丙酸甲酯；

2-(苯甲酰氧基)-3-(甲基硒基)丙酸；

3-(甲基硒基)-2-[(3'-吡啶)氧羰基]丙酸甲酯；

2-[(叔丁氧羰基)氧]-3-(甲基硒基)丙酸甲酯；

2-[(叔丁氧羰基)氧]-3-(甲基硒基)丙酸；

(2RS)-[N-(叔丁氧羰基)-S-甲硫氨?；鵠-3-(甲基硒基)丙酸甲酯；

4-甲基硒基-2-(2'-乙酰氧基-3'-甲基硒基丙酰基)丁酸甲酯；

4-甲基硒基-2-(2'-乙酰氧基-3'-甲基硒基丙酰基)丁酸；

3-甲基硒基-2-(2'-乙酰氧基-4'-甲基硒基丁酰基)丙酸甲酯；

3-甲基硒基-2-(2'-羥基-4'-甲基硒基丁?；?丙酸；

2-(戊酰氧基)-3-(甲基硒基)丙酸；

2-(壬酰氧基)-3-(甲基硒基)丙酸；

2-(亞油酰氧基)-3-(甲基硒基)丙酸；

2-(亞油酰氧基)-3-(甲基硒基)丙酸甲酯；

2-(新戊酰氧基)-3-(甲基硒基)丙酸；

2-(3-氯丙酰氧基)-3-(甲基硒基)丙酸；

2-{(1H-咪唑基-4-基羰基)氧)}-3-(甲基硒基)丙酸；

2-(新戊酰氧基)-3-(甲基硒基)丙酸甲酯；

以及它們的任何比例的混合物。

根據(jù)第二方面，本發(fā)明涉及用于制備通式(I)的新型有機(jī)硒化合物及其酯和酰胺衍生物的方法，該方法在圖1中有所闡釋，并且其特征在于其包括以下步驟：

1)可(例如，從SAF France)商購(gòu)獲得的外消旋(DL)環(huán)氧乙烷-2-羧酸酯或其對(duì)映異構(gòu)體中的一種(D或L)與以下兩者之一的反應(yīng)：

a/式Al(R¹)₂SeR¹的二烷基鋁烷基硒酸酯衍生物，所述式本身通過(guò)對(duì)應(yīng)的可(例如，從SAF,France)商購(gòu)獲得的三烷基鋁Al(R¹)₃和可(例如，從SAF,France)商購(gòu)獲得的元素硒Se(0)原位生成(根據(jù)Kozikowski AP和Ames A,1978,J.Org.Chem.,43(13):2735)。

b/或烷基硒醇R¹SeH，其本身由式R¹-Se-M₁的烷基硒酸酯的堿金屬鹽原位制備，所述式本身通過(guò)還原對(duì)應(yīng)的可(例如，從SAF,France)商購(gòu)獲得的二烷基二硒醚或通過(guò)金屬硒Se(0)與對(duì)應(yīng)的可(例如，從SAF,France)商購(gòu)獲得的烷基鋰鹽之間的反應(yīng)獲得，其中M₁代表堿金屬原子)，所述二烷基二硒醚與氯化銨反應(yīng)(類似于用硫醇打開(kāi)環(huán)氧乙烷羧酸烷基酯，如Org.Letters,2004,6(4),497中所述)；

2)如果適用的話，為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的以下反應(yīng)或系列反應(yīng)(參見(jiàn)圖1)中的一個(gè)或多個(gè)：

-酯官能團(tuán)的水解，然后

-反應(yīng)介質(zhì)的酸化，以便獲得對(duì)應(yīng)的式(I)的酸，其中X＝OH；然后

-式(I)的酸或其式(Ia)的堿金屬鹽與醇或鹵代烷的酯化反應(yīng)，以便獲得對(duì)應(yīng)的通式(I)的酯，其中X＝OR³，R³如上文定義；

-式(I)的酸與式R⁴R⁵NH或NH₃的適合的胺的酰胺化，其中R⁵如上文定義，以便獲得通式(I)的化合物，其中X＝NH2、NR⁴R⁵或α-氨基酸、CH₃SeCH₂CH₂CH(COOH)NH-；

-當(dāng)R²＝H時(shí)，通過(guò)適合的酸酯化羥基官能團(tuán)，以便獲得通式(I)的化合物，其中OR²不同于OH基；

-通過(guò)酸或通過(guò)堿成鹽。

根據(jù)本發(fā)明方法的特定具體實(shí)施：

硒試劑為以下兩者之一：

*二烷基鋁烷基硒酸酯，例如在諸如四氫呋喃(THF)的非質(zhì)子溶劑中通過(guò)金屬硒Se(0)和三甲基鋁(Al(CH₃)₃原位生成的二甲基鋁甲基硒酸酯。

*或烷基硒醇，所述烷基硒醇在諸如四氫呋喃(THF)的非質(zhì)子溶劑中由金屬硒Se(0)和烷基鋰原位生成，然后被放置在存在氯化銨的環(huán)境中。

在諸如THF的非質(zhì)子極性溶劑中進(jìn)行操作。生成式(I)的不同化合物的后續(xù)反應(yīng)，即酸化、酯化、酰胺化、成鹽，在本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的條件下進(jìn)行。

在本發(fā)明中所述的式(I)的衍生物的兩個(gè)或更多個(gè)分子之間通過(guò)醇與羧酸官能團(tuán)之間的酯化反應(yīng)獲得的所有低聚物(二聚物、三聚物)和直鏈或支鏈的、無(wú)環(huán)或環(huán)狀的聚合物(所述聚合物在適用時(shí)存在，被視為單獨(dú)的或混合物形式)是通過(guò)縮合和脫水獲得的，類似于Acta Chemica Scandinavica B,1980,34,633-636中所述或根據(jù)EP2238124的例子。

在制備硒代甲酯(RCOSeMe)的情況下，Kosikowski和Ames描述了獲得較小比例的不希望的副產(chǎn)物，即3-甲基硒基-2-羥基丙酸乙酯[Kosikowski,AP和Ames A,1978,J.Org.Chem.,43(13):2735]。雖然不是本發(fā)明的一部分，但該化合物的結(jié)構(gòu)類似于本發(fā)明中所述的通式(I)的化合物。

根據(jù)第三方面，本發(fā)明還涉及使用至少一種如上文定義的通式(I)的硒化合物單獨(dú)地或與至少一種其他藥劑并且具體地講與至少一種抗腫瘤劑組合作為藥劑，具體地講作為抗腫瘤劑。

抗腫瘤劑應(yīng)當(dāng)理解為具有治療腫瘤或通常稱為“癌癥”的特性的任何試劑。

根據(jù)第四方面，本發(fā)明還涉及包含至少一種藥物活性成分的藥物組合物，所述藥物活性成分包括至少一種如上文定義的通式(I)的硒化合物的單獨(dú)一種與至少一種其他藥物活性成分的組合。

具體地講，根據(jù)本發(fā)明的如上文定義的通式(I)的硒化合物使得單獨(dú)地或與一種或多種其他已知抗癌劑或細(xì)胞毒性劑結(jié)合，并且通過(guò)預(yù)先施用或通過(guò)共同施用來(lái)對(duì)腫瘤或癌癥(具體地講諸如前列腺、肝臟、腎臟、胰腺、肺、結(jié)腸和皮膚的腫瘤或癌癥)進(jìn)行治療成為可能；

其他抗癌劑應(yīng)當(dāng)理解為以下化合物：基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑，諸如氨魯米特、雌莫司汀、醋酸甲羥孕酮、亮丙瑞林、氟他胺、托瑞米芬、Zoladex；VEGF抑制劑，諸如抗-VEGF抗體(Avastin(R))以及小分子，諸如ZD6474和SU6668；瓦他拉尼、BAY-43-9006、SU11248、CP-547632和CEP-7055；EGFR抑制劑，諸如吉非替尼、埃羅替尼、ABX-EGF、EMD72000、11F8和西妥昔單抗；Eg5抑制劑，諸如SB-715992、SB-743921和MKI-833；PAN抑制劑，諸如卡奈替尼、EKB-569、CI-1033、AEE-788和XL-647；激酶抑制劑，諸如2C4、GW-572016、Gleevec(R)和達(dá)沙替尼(Sprycel(R)；Casodex(R)(比卡魯胺，Astra Zeneca)、他莫昔芬；MAPK激酶抑制劑，PI3激酶抑制劑，PDGF抑制劑，諸如伊馬替尼；受體酪氨酸激酶抑制劑、整聯(lián)蛋白信號(hào)抑制劑；微管蛋白；活性劑，諸如長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春瑞濱、長(zhǎng)春氟寧、紫杉醇、多西他賽、7-O-甲基硫代甲基紫杉醇、4-去乙?；?4-甲基碳酸酯紫杉醇、C-4甲基碳酸酯紫杉醇、埃博霉素A、埃博霉素B、埃博霉素C、埃博霉素D、脫氧埃博霉素A、脫氧埃博霉素B、氧雜二環(huán)[14.1.0]十七烷-5-9-二酮(伊沙匹隆)，以及它們的衍生物；CDK抑制劑、抗增殖細(xì)胞周期抑制劑、表鬼臼毒素、依托泊苷、VM-26；拓?fù)洚悩?gòu)酶I或II抑制劑，諸如喜樹堿、托泊替康、SN-38、丙卡巴肼、米托蒽醌；鉑配合物，諸如順鉑、卡鉑和奧沙利鉑；生長(zhǎng)抑制劑、抗激素治療劑；亞葉酸；替加氟；抗代謝劑，諸如嘌呤拮抗劑(例如，6-硫鳥嘌呤和6-巰嘌呤)；谷氨酰胺拮抗劑。

其他細(xì)胞毒性劑應(yīng)當(dāng)理解為以下化合物：環(huán)磷酰胺、多柔比星、柔紅霉素、米托蒽醌、美法侖、六甲基三聚氰胺、塞替派、阿糖胞苷、依達(dá)曲沙(idatrexate)、三甲曲沙、達(dá)卡巴嗪、L-天冬酰胺酶、比卡魯胺、亮丙瑞林、吡啶并苯并吲哚衍生物、干擾素、白介素。

根據(jù)第五方面，本發(fā)明涉及包含通式(I)的硒化合物作為活性成分的藥物組合物。

根據(jù)本發(fā)明的這個(gè)第五方面，通式(I)的化合物的使用量為例如按制劑的重量計(jì)介于0.02％和0.15％硒當(dāng)量(Se eq.)之間。

根據(jù)本發(fā)明的這個(gè)第五方面，藥物組合物包括藥學(xué)可接受的載體和治療有效量的本發(fā)明的化合物中的一個(gè)或多個(gè)立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、藥學(xué)可接受的鹽。這些載體可具體地講由以下組分組成：

*可注射或便攜式溶液，

*由一種或多種賦形劑構(gòu)成的固體培養(yǎng)基，所述賦形劑可選自維生素、諸如L-麥角硫因的天然抗氧化劑、礦物鹽、單糖、二糖或多糖，具體地講葉酸、維生素B₆、E或C、乳糖、淀粉。如上文定義并且包含通式(I)的化合物的至少一種的這種由一種或多種賦形劑構(gòu)成的固體培養(yǎng)基可被制成膠囊、片劑或粉劑形式。

根據(jù)本發(fā)明的這個(gè)第五方面，可根據(jù)情況，通過(guò)口腔途徑、靜脈途徑、胃腸外途徑、局部途徑，包括經(jīng)皮途徑或經(jīng)鼻途徑或經(jīng)眼途徑，或通過(guò)吸入來(lái)施用包含通式(I)的化合物的至少一種作為活性成分的藥物組合物。這些組合物的除通式(I)的化合物之外的不同成分的量是常用于所述應(yīng)用的那些。

本發(fā)明包括上述本發(fā)明的各方面和/或?qū)嵤┓桨傅乃薪M合。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明的任何實(shí)施方案可視為與另一個(gè)實(shí)施方案結(jié)合，以便描述另外的更優(yōu)選的實(shí)施方案。另外應(yīng)當(dāng)充分理解，優(yōu)選實(shí)施方案的每個(gè)單獨(dú)的元件是其自身的獨(dú)立的優(yōu)選實(shí)施方案。

附圖說(shuō)明：

圖1：根據(jù)通式(I)的化合物的合成過(guò)程的示意圖

圖2：在治療96小時(shí)后細(xì)胞DU145和LS174T的活力百分比相比化合物4的濃度的曲線圖

圖3：在治療96小時(shí)后細(xì)胞DU145、LS174T和HT-29的活力百分比相比化合物10的濃度的曲線圖

圖4：在治療96小時(shí)后細(xì)胞PC3、DU145、PANC-1和MIA PaCa-2的活力百分比相比化合物38的濃度的曲線圖

圖5：在治療96小時(shí)后細(xì)胞HT-29、LS174T、HepG2和MCF-7的活力百分比相比化合物38的濃度的曲線圖。

實(shí)施例

以下實(shí)施例，以及根據(jù)本發(fā)明的方法的示意圖(圖1)和其他圖僅僅是為了舉例說(shuō)明而提供并且決不限制本發(fā)明的范圍。

在下文所述實(shí)施例中，除非另外指明，否則所有百分比均按重量給出，溫度為環(huán)境溫度或以攝氏度給出，并且壓力為大氣壓。

所用試劑可從諸如SAF(France)、Alfa Aesar、Fisher Scientific、TCI Europe、Bachem(Switzerland)的國(guó)際供應(yīng)商商購(gòu)獲得，除了以下化合物是根據(jù)所引用的規(guī)程制備：環(huán)氧乙烷-2-羧酸乙酯(根據(jù)Org.Synth.2006,83,162-169)；環(huán)氧乙烷-2-羧酸叔丁酯(根據(jù)J.Am.Chem.Soc.2008,130(31),10096-10102)，以及(R)-環(huán)氧乙烷-2-羧酸芐酯(J.Org.Chem.1992,57(11),3380-3387)。

I.根據(jù)本發(fā)明的化合物的制備例

1a-通過(guò)引入硒制備化合物A：3-(烷基硒基)-2-羥基丙酸酯

通過(guò)使烷基硒醇R¹SeH或二烷基鋁烷基硒酸酯Al(R¹)₂SeR¹(根據(jù)A.P.Kozikowski和A.Ames,J.Org.Chem.1978,43,2735，由三烷基鋁和元素硒Se(0)原位生成)與烷基環(huán)氧乙烷羧酸酯反應(yīng)來(lái)制備化合物A。

實(shí)施例A1：使用二甲基鋁甲基硒酸酯制備2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸甲酯(化合物1)

在氮?dú)庀拢瑢?.6g(12.6mL；25.2mmol；1.1當(dāng)量)三甲基鋁在甲苯中的2M溶液逐滴加入(添加時(shí)間為15分鐘)2.0g(25.2mmol；1.1當(dāng)量)硒Se(0)。在環(huán)境溫度下將懸浮液攪拌15分鐘，然后在密閉環(huán)境下回流2h。使環(huán)境恢復(fù)到環(huán)境溫度，然后在氮?dú)庀吕鋮s至0℃。

將2.386g(22.9mmol)環(huán)氧乙烷-2-羧酸甲酯在12mL二氯甲烷中的溶液逐滴加入反應(yīng)介質(zhì)(添加時(shí)間為15分鐘)。在0℃下將介質(zhì)攪拌30分鐘，然后在環(huán)境溫度下攪拌16小時(shí)。

將反應(yīng)介質(zhì)冷卻至-4℃15分鐘。將1.286g(24.05mmol；1.05當(dāng)量)氯化銨在10mL水中的溶液非常緩慢地逐滴加入反應(yīng)介質(zhì)(添加時(shí)間為15分鐘)，因?yàn)闀?huì)產(chǎn)生很強(qiáng)的氣體析出(注意：甲烷的生成和析出)。逐滴加入20mL二氯甲烷，然后在不加熱的情況下將介質(zhì)攪拌10分鐘。逐滴加入20mL飽和NH₄Cl水溶液，然后在不加熱的情況下將介質(zhì)攪拌10分鐘。

在用二氯甲烷(7×20mL)沖洗過(guò)的硅藻土上過(guò)濾反應(yīng)介質(zhì)。傾析出有機(jī)相，用二氯甲烷(3×20mL)提取水相。將有機(jī)相合并，用Na₂SO₄干燥，過(guò)濾并濃縮。

在8毫巴的減壓下(125℃)蒸餾出獲得的黃色油。產(chǎn)物由1.998g(42％)黃色油狀的化合物1組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝2.09(s,3H)；2.91(m,1H)；3.01(m,1H)；3.18(m,1H)；3.83(s,3H)；4.51(m,1H).

¹³C NMR(CDCl₃,75MHz):δ(ppm)＝5.9；29.9；53.1；70.7；174.1

UPLC-MS(AP+):220.8(M+Na)⁺

實(shí)施例A2：使用甲硒醇制備2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸甲酯(化合物1)

在氮?dú)庀聦?92mg(12.5mmol；1當(dāng)量)硒Se(0)懸浮于44mL THF中。將懸浮液冷卻至-3℃，然后逐滴加入6.2mL(18.6mmol；1.49當(dāng)量)甲基鋰在二乙氧基甲烷中的3M溶液(添加時(shí)間為7分鐘)。在不加熱的情況下將完全脫色的介質(zhì)攪拌20分鐘，然后逐滴加入802mg(15mmol；1.2當(dāng)量)溶于44mL甲醇的氯化銨。在不加熱的情況下將介質(zhì)攪拌20分鐘，然后加入2.11mL(15mmol；1.2當(dāng)量)三乙基胺。在不加熱的情況下將介質(zhì)攪拌20分鐘，然后加入1.71g(16.25mmol；1.3當(dāng)量)環(huán)氧乙烷-2-羧酸甲酯。在0℃下將介質(zhì)攪拌1小時(shí)，然后在環(huán)境溫度下攪拌22小時(shí)。

將反應(yīng)介質(zhì)冷卻至0℃15分鐘。逐滴加入90mL二氯甲烷，然后在不加熱的情況下將介質(zhì)攪拌10分鐘。逐滴加入90mL飽和NH₄Cl水溶液，然后在不加熱的情況下將介質(zhì)攪拌10分鐘。用90mL水稀釋介質(zhì)?；厥沼袡C(jī)相，用二氯甲烷(2×90mL)提取水相。將有機(jī)相合并，用Na₂SO₄干燥，過(guò)濾并濃縮。在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯)上純化獲得的黃色油。

產(chǎn)物由330mg(14％)化合物1組成。

實(shí)施例A3：制備(R)-2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸甲酯(化合物2)

用4.959g(S)-環(huán)氧乙烷-2-羧酸甲酯起始，使用實(shí)施例A1的條件獲得化合物2。在沖洗硅藻土以及蒸發(fā)溶劑后，在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯)上純化獲得的油。

產(chǎn)物由3.257g(33％)黃色油狀的化合物2組成。

¹H NMR譜與實(shí)施例A1中獲得的譜相同。

[α]_D:-11.5(c＝1.0；MeOH)

實(shí)施例A4：制備(S)-2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸甲酯(化合物3)

用7g(R)-環(huán)氧乙烷-2-羧酸甲酯起始，使用實(shí)施例A1的條件獲得化合物3。在沖洗硅藻土以及蒸發(fā)溶劑后，在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯)上純化獲得的油。

產(chǎn)物由4.04g(29％)橙色油狀的化合物3組成。

¹H NMR譜與實(shí)施例A1中獲得的譜相同。

[α]_D:-11.1(c＝1.0；MeOH)

實(shí)施例A5：制備2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸乙酯(化合物4)

用1.56g環(huán)氧乙烷-2-羧酸乙酯起始，使用實(shí)施例A1的條件獲得化合物4。在沖洗硅藻土以及蒸發(fā)溶劑后，在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯)上純化獲得的油。

產(chǎn)物由1.188g(38％)黃色油狀的化合物4組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝1.35(t,J＝7.0,Hz,3H)；2.10(s,3H)；2.91(dd,J＝13.0,Hz,J＝5.5Hz,1H)；3.01(dd,J＝13.0Hz,J＝4.0Hz,1H)；3.16(d,J＝6.0Hz,1H)；4.3(q,J＝7.0Hz,2H)；4.5(td,J＝5.5Hz,J＝4.0Hz,1H).

¹³C NMR(CDCl₃,75MHz):δ(ppm)＝6.0；14.6；29.9；62.4；70.8；173.7

UPLC-MS(AP+):234.8(M+Na)⁺

實(shí)施例A6：制備2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸叔丁酯(化合物5)

用1.0g環(huán)氧乙烷-2-羧酸叔丁酯起始，使用實(shí)施例A1的條件獲得化合物5。在沖洗硅藻土以及蒸發(fā)溶劑后，在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯)上純化獲得的油。

產(chǎn)物由889mg(54％)微黃色油狀的化合物5組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝1.53(s,9H)；2.13(s,3H)；2.87(dd,J＝13.0Hz,J＝5.5Hz,1H)；2.97(dd,J＝13.0Hz,J＝4.0Hz,1H)；3.19(d,J＝5.5Hz,1H)；4.39(td,J＝5.5Hz,J＝4.0Hz,1H).

實(shí)施例A7：制備(S)-2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸芐酯(化合物6)

用622mg(R)-環(huán)氧乙烷-2-羧酸芐酯起始，使用實(shí)施例A1的條件獲得化合物6。在沖洗硅藻土以及蒸發(fā)溶劑后，在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯)上純化獲得的油。

產(chǎn)物由325mg(33％)微淡黃色油狀的化合物6組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝2.05(s,3H)；2.91(dd,J＝13.0Hz,J＝5.5Hz,1H)；3.02(dd,J＝13.0Hz,J＝4.5Hz,1H)；3.18(d,J＝5.5Hz,1H)；4.55(td,J＝5.5Hz,J＝4.5Hz,1H),5.26(s,2H)；7.41(m,5H).

實(shí)施例A8：制備3-(乙基硒)-2-羥基丙酸甲酯(化合物7)

用2g硒Se(0)、10.98g 25％的三乙基鋁的甲苯溶液以及2.386g環(huán)氧乙烷-2-羧酸甲酯起始，使用實(shí)施例A1的條件獲得化合物7。在沖洗硅藻土以及蒸發(fā)溶劑后，在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯)上純化獲得的油。

產(chǎn)物由1.977g(40％)黃色油狀的化合物7組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝1.41(t,J＝7.5Hz,3H)；2.67(q,J＝7.5Hz,2H)；2.92(dd,J＝13.0Hz,J＝5.5Hz,1H)；3.02(dd,J＝13.0Hz,J＝4.5Hz,1H)；3.18(d,J＝4.5Hz,1H)；3.82(s,3H),4.5(m,1H).

¹³C NMR(CDCl₃,75MHz):(ppm):16.2；18.9；27.8；53.1；70.8；174.1

實(shí)施例A9：制備2-羥基-3-(異丁基硒)丙酸甲酯(化合物8)

用2.0g硒Se(0)、19.08g 25％的三異丁基鋁的甲苯溶液以及2.386g環(huán)氧乙烷-2-羧酸甲酯起始，使用實(shí)施例A1的條件獲得化合物8。在沖洗硅藻土以及蒸發(fā)溶劑后，在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯)上純化獲得的油。

產(chǎn)物由2.291g(42％)黃色油狀的化合物8組成。

¹H NMR(CDCl₃,300MHz):δ(ppm)＝0.77(d,J＝6.5Hz,6H)；1.61(m,1H)；2.39(d,J＝7.0Hz,2H)；2.66(dd,J＝13.0Hz,J＝5.5Hz,1H)；2.76(dd,J＝13.0Hz,J＝4.5Hz,1H)；3.58(s,3H)；4.25(m,1H).

¹³C NMR(CDCl₃,75MHz):(ppm)＝22.9；29.0；29.7；35.7；53.1；70.7；174.0

1b-通過(guò)酯化反應(yīng)制備化合物A

如上面段落1a中所述，可通過(guò)引入硒試劑獲得化合物A，但另外通過(guò)化合物B的酯化反應(yīng)(對(duì)于化合物B的制備，參見(jiàn)下面段落2)獲得。

實(shí)施例A10：制備2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸乙酯(化合物4)

在氮?dú)庀聦?00mg(2.68mmol；1當(dāng)量)2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸(10，段落2)溶于11mL無(wú)水乙醇中。將66mg(1.07mmol；0.4當(dāng)量)原硼酸加入介質(zhì)。在攪拌下并且在氮?dú)庀率菇橘|(zhì)回流48小時(shí)。

再次將33mg(535μmol；0.2當(dāng)量)原硼酸加入介質(zhì)。

使介質(zhì)回流24小時(shí)。

將介質(zhì)濃縮至干燥，然后用半飽和NH4Cl水溶液(40mL)將濃縮物再溶解。用乙酸乙酯(3×40mL)提取介質(zhì)。將有機(jī)相合并，用Na₂SO₄干燥，過(guò)濾并濃縮。

產(chǎn)物由446mg(77％)黃色油狀的化合物4組成。

¹H NMR譜與實(shí)施例A5中獲得的譜相同。

實(shí)施例A11：制備2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸異丙酯(化合物9)

在氮?dú)庀聦?74mg(2mmol；1當(dāng)量)2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸(10)溶于8mL 2-丙醇中。將49mg(800μmol；0.4當(dāng)量)原硼酸加入介質(zhì)。在攪拌下并且在氮?dú)庀率菇橘|(zhì)回流48小時(shí)。

再次將25mg(400μmol；0.2當(dāng)量)原硼酸加入介質(zhì)。

使介質(zhì)回流24小時(shí)。

將介質(zhì)濃縮至干燥，然后用半飽和NaHCO₃水溶液(40mL)將濃縮物再溶解。用乙酸乙酯(3×40mL)提取介質(zhì)。將有機(jī)相合并，用Na₂SO₄干燥，過(guò)濾并濃縮。在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯)上純化獲得的油。

產(chǎn)物由285mg(62％)黃色油狀的化合物9組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝1.32(d,J＝6.0Hz,6H)；2.11(s,3H)；2.89(dd,J＝13.0Hz,J＝5.5Hz,1H)；2.99(m,1H)；3.20(s,1H)；4.45(m,1H)；5.14(m,1H).

¹³C NMR(CDCl₃ 75MHz):δ(ppm)＝6.0；22.2；29.8；70.4；70.9；173.2

UPLC-MS(AP+):248.9(M+Na)⁺

2-制備化合物B和C：3-(烷基硒基)-2-羥基丙酸和對(duì)應(yīng)的鹽

通過(guò)水解化合物A的酯官能團(tuán)來(lái)制備化合物B，并且通過(guò)使化合物B與氧化物或氫氧化物反應(yīng)來(lái)獲得對(duì)應(yīng)的鹽C：

實(shí)施例B1：通過(guò)甲酯制備2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸(化合物10)

將4.908g(23.53mmol)化合物1溶于14mL THF、5mL甲醇和5mL脫礦質(zhì)水中。加入47.1mL(47.07mmol；2當(dāng)量)1M氫氧化鋰水溶液，在環(huán)境溫度下將溶液攪拌16小時(shí)。

通過(guò)加入2M鹽酸溶液(14mL)將介質(zhì)的pH調(diào)至1。用乙酸乙酯(4×100mL)提取介質(zhì)。將有機(jī)相合并，用Na₂SO₄干燥，過(guò)濾并濃縮。

產(chǎn)物由4.177g(95％)淡黃色固體狀的化合物10組成。

¹H NMR(D₂O,400MHz):δ(ppm)＝2.08(s,3H)；2.92(dd,J＝13.5Hz,J＝6.5Hz,1H)；3.03(dd,J＝13.5Hz,J＝4.5Hz,1H)；4.57(dd,J＝6.5Hz,J＝4.5Hz,1H).

¹H NMR(DMSO,400MHz):δ(ppm)＝1.99(s,3H)；2.70(dd,J＝12.5Hz,J＝6.5Hz,1H)；2.79(dd,J＝12.5Hz,J＝5.0Hz,1H)；4.18(dd,J＝6.5Hz,J＝5.0Hz,1H).

¹³C NMR(CDCl₃,75MHz):δ(ppm)＝6.0；29.6；70.1；178.0

UPLC-MS(AP-):182.6(M-H⁺)

元素分析：C₄H₈O₃Se；理論：C(26.24％)；H(4.4％)；實(shí)驗(yàn)：C(26.9％)；H(4.42％)

實(shí)施例B2：通過(guò)叔丁酯制備2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸(化合物10)

用100mg 2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸叔丁酯(5)起始，使用實(shí)施例B1的條件獲得化合物10。

產(chǎn)物由64mg(82％)固體狀的期望產(chǎn)物組成。

¹H NMR譜與實(shí)施例B1中獲得的譜相同。

實(shí)施例B3：制備(R)-2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸(化合物11)

用2.117g(R)-2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸甲酯(2)起始，使用實(shí)施例B1的條件獲得化合物11。

產(chǎn)物由1.875g(96％)黃色固體狀的期望產(chǎn)物組成。

¹H NMR譜與實(shí)施例B1中獲得的譜相同。

[α]_D＝+1.07(c＝6.0；乙醇)

實(shí)施例B4：通過(guò)甲酯制備(S)-2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸(化合物12)

用2.95g(S)-2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸甲酯(3)起始，使用實(shí)施例B1的條件獲得化合物12。

產(chǎn)物由2.61g(95％)黃色固體狀的期望產(chǎn)物組成。

¹H NMR譜與實(shí)施例B1中獲得的譜相同。

[α]_D＝-1.03(c＝6.0；乙醇)

實(shí)施例B5：通過(guò)芐酯制備(S)-2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸(化合物12)

用494mg(S)-2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸芐酯(6)起始，使用實(shí)施例B1的條件獲得化合物12。

在環(huán)境溫度下攪拌16小時(shí)后，用乙酸乙酯(2×30mL)提取反應(yīng)介質(zhì)。通過(guò)加入2M鹽酸水溶液將介質(zhì)的pH調(diào)至1。用乙酸乙酯(2×30mL)提取介質(zhì)。將該第二提取的有機(jī)相合并，用Na₂SO₄干燥，過(guò)濾并濃縮。

產(chǎn)物由280mg(84％)淡黃色固體狀的化合物12組成。

¹H NMR譜與實(shí)施例B1中獲得的譜相同。

實(shí)施例B6：通過(guò)甲酯制備3-乙基硒-2-羥基丙酸(化合物13)

用500mg 3-(乙基硒)-2-羥基丙酸甲酯(7)起始，使用實(shí)施例B1的條件獲得化合物13。產(chǎn)物由471mg(100％)淡黃色固體狀的化合物13組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝1.44(t,J＝7.5Hz,3H)；2.71(q,J＝7.5Hz,2H)；3.00(dd,J＝13.5Hz,J＝6.0Hz,1H)；3.11(dd,J＝13.5Hz,J＝4.5Hz,1H)；4.55(dd,J＝6.0Hz,J＝4.5Hz,1H).

¹³C NMR(CDCl₃,75MHz):(ppm)＝16.1；19.1；27.6；70.3；177.9

UPLC-MS(AP-):197.2(M-H⁺)

實(shí)施例B7：通過(guò)甲酯制備2-羥基-3-(異丁基硒)丙酸(化合物14)

用500mg 2-羥基-3-(異丁基硒)丙酸甲酯(8)起始，使用實(shí)施例B1的條件獲得化合物14。

產(chǎn)物由423mg(90％)淡黃色固體狀的化合物14組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝1.03(d,J＝6.5Hz,6H)；1.88(m,1H)；1.95(dd,J＝7.0Hz,2H)；2.97(dd,J＝13.0Hz,J＝6.0Hz,1H)；3.08(dd,J＝13.0Hz,J＝4.5Hz,1H)；4.53(m,1H).

¹³C NMR(CDCl₃,75MHz):(ppm)＝22.9；28.7；29.7；35.8；70.2；177.9

UPLC-MS(AP-):225.3(M-H⁺)

實(shí)施例C1：制備二環(huán)己基胺2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸鹽(化合物15)

將373mg(2mmol)2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸溶于2mL丙酮。將733mg(805μL；4mmol；2當(dāng)量)二環(huán)己基胺加入介質(zhì)。

立刻出現(xiàn)沉淀，過(guò)濾沉淀，用丙酮(2×10mL)沖洗，然后用1/1乙酸乙酯/環(huán)己烷混合物(2×10mL)沖洗。

產(chǎn)物由524mg(70％)白色固體狀的化合物15組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝1.26(m,7H)；1.50(m,4H)；1.68(m,2H)；1.84(m,4H)；2.06(m,4H)；2.12(s,3H)；2.91(dd,J＝12.5Hz,J＝6.Hz,1H)；3.02(m,3H)；4.22(m,1H).

¹³C NMR(CDCl₃,75MHz):δ(ppm)＝5.7；25.2；25.5；29.4；31.6；53.2；72.2；177.7

實(shí)施例C2：制備2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸鈉鹽(化合物16)

在氮?dú)庀聦?0mg(2mmol)氫氧化鈉在礦物油中的60％溶液懸浮于2mL THF中。在5分鐘內(nèi)逐滴加入373mg(2mmol)溶于2mL THF的2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸。

在水-冰浴中冷卻介質(zhì)，然后加入環(huán)己烷(3mL)。

形成一種沉淀。將介質(zhì)過(guò)濾，然后用環(huán)己烷(3mL)洗滌固體，然后用TBME(3×3mL)洗滌固體。

產(chǎn)物由315mg(75％)灰白色固體狀的化合物16組成。

¹H NMR(D₂O,400MHz):δ(ppm)＝2.08(s,3H)；2.88(dd,J＝13.0Hz,J＝6.5Hz,1H)；2.99(dd,J＝13.0Hz,J＝4.0Hz,1H)；4.32(dd,J＝6.5Hz,J＝4.0Hz,1H).

¹³C NMR(D₂O,75MHz):δ(ppm)＝4.8；30.0；71.7；179.4

UPLC-MS(AP-)：182.7(M-Na⁺)

實(shí)施例C3：制備雙(2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸鎂鹽(化合物17)

將495mg(2.65mmol)2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸溶于1mL脫礦質(zhì)水中，然后加入50mg(1.25mmol)氧化鎂。在環(huán)境溫度下將介質(zhì)攪拌16小時(shí)。

用丙酮(2mL)稀釋介質(zhì)，然后通過(guò)多孔玻璃過(guò)濾介質(zhì)。用水(0.5mL)沖洗固體，然后用TBME(2mL)沖洗固體。在真空下使固體干燥。

產(chǎn)物由565mg白色固體狀的化合物17(定量)組成。

¹H NMR(D₂O,400MHz):δ(ppm)＝2.04(s,3H)；2.83(dd,J＝13.0Hz,J＝6.5Hz,1H)；2.95(dd,J＝13.0Hz,J＝4.0Hz,1H)；4.25(dd,J＝6.5Hz,J＝4.0Hz,1H).

實(shí)施例C4：制備雙(2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸鋅鹽(化合物18)

將500mg(2.65mmol)2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸溶于1mL脫礦質(zhì)水，然后加入145mg堿式碳酸鋅。加入1mL脫礦質(zhì)水，然后在環(huán)境溫度下將介質(zhì)攪拌16小時(shí)。

用丙酮(2mL)稀釋介質(zhì)，然后通過(guò)多孔玻璃過(guò)濾介質(zhì)。將固體用水(1mL)沖洗，然后用丙酮(3×2mL)沖洗。在真空下使固體干燥。

產(chǎn)物由496mg(79％)白色固體狀的化合物18組成。

¹H NMR(D₂O,400MHz):δ(ppm)＝2.05(s,3H)；2.87(dd,J＝13.0Hz,J＝6.5Hz,1H)；2.98(dd,J＝13.0Hz,J＝4.0Hz,1H)；4.32(dd,J＝6.5Hz,J＝4.0Hz,1H).

實(shí)施例C5：制備雙(2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸鈣鹽(化合物19)

將374mg(2mmol)2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸溶于0.9mL脫礦質(zhì)水中，然后加入70mg(945μmol)氫氧化鈣。加入1.1mL脫礦質(zhì)水，然后在環(huán)境溫度下將介質(zhì)攪拌16小時(shí)。

通過(guò)多孔玻璃過(guò)濾介質(zhì)。用水(2×2mL)沖洗固體，然后用叔丁基甲醚(TBME)(2×2mL)沖洗固體。在真空下使固體干燥。產(chǎn)物由74mg(19％)灰白色固體狀的期望產(chǎn)物組成。

將濾液濃縮至干燥。用TBME(5mL)研磨殘余物。在真空下使固體干燥。

產(chǎn)物由205mg(53％)灰白色固體狀的化合物19組成。

¹H NMR(D₂O,400MHz):δ(ppm)＝2.07(s,3H)；2.88(dd,J＝13.0Hz,J＝6.5Hz,1H)；2.99(dd,J＝13.0Hz,J＝4.0Hz,1H)；4.30(dd,J＝6.5Hz,J＝4.0Hz,1H).

¹³C NMR(D₂O,300MHz):δ(ppm)＝4.8；30.4；72.1；180.1

3-制備化合物D：衍生自2-羥基-3-(烷基硒基)丙酸的酰胺

通過(guò)化合物A的氨基分解制備化合物D，或者它們是由化合物B通過(guò)肽偶合合成的。

實(shí)施例D1：制備2-羥基-3-(甲基硒基)丙酰胺(化合物20)

將295mg(1.5mmol)化合物1溶于4.04g(5.25mL；36.76mmol；24當(dāng)量)20％氨水溶液中。在環(huán)境溫度下將介質(zhì)攪拌22小時(shí)。

將介質(zhì)蒸發(fā)至干燥，然后用乙酸乙酯共蒸發(fā)。

產(chǎn)物由284mg(100％)灰白色固體狀的化合物20組成。

¹H NMR(MeOD,400MHz):δ(ppm):2.11(s,3H)；2.85(dd,J＝13.0Hz,J＝7.0Hz,1H)；2.98(dd,J＝13.0Hz,J＝4.0Hz,1H)；4.3(dd,J＝7.0Hz,J＝4.0Hz,1H).

¹H NMR(DMSO,400MHz):δ(ppm)＝1.97(s,3H)；2.68(dd,J＝12.5Hz,J＝7.0Hz,1H)；2.80(dd,J＝12.5Hz,J＝4.0Hz,1H)；4.04(m,1H)；5.58(d,J＝5.5Hz,1H)；7.19(d,J＝15.5Hz,2H)

¹³C NMR(MeOD,75MHz):δ(ppm):5.2；31.0；73.3；179.2

UPLC-MS(AP+):183.8(M+H)⁺

UPLC-MS(AP+):206.0(M+Na)⁺

實(shí)施例D2：制備N-環(huán)丙基-2-羥基-3-(甲基硒基)丙酰胺(化合物21)

將513mg(2.5mmol)化合物1溶于428mg(519μL；7.5mmol；3當(dāng)量)環(huán)丙胺中。在85℃下將介質(zhì)攪拌72小時(shí)。

使介質(zhì)恢復(fù)到環(huán)境溫度，蒸發(fā)至干燥，然后在硅膠柱(二氯甲烷/甲醇)上純化。

產(chǎn)物由452mg(79％)淡黃色固體狀的化合物21組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝0.56(m,2H)；0.82(m,2H)；2.03(s,3H)；2.76(m,1H)；2.89(dd,J＝13.0Hz,J＝7.5Hz,1H)；3.08(dd,J＝13.0Hz,J＝4.5Hz,1H)；3.52(d,J＝3.5Hz,1H)；4.17(m,1H)；6.88(s,1H).

¹³C NMR(CDCl₃,75MHz):δ(ppm)＝4.9；6.8；6.9；22.7；31.6；69.9；173.8

UPLC-MS(AP+):245.9(M+Na)⁺

實(shí)施例D3：制備N-[2-(二甲基氨基)乙基]-2-羥基-3-(甲基硒基)丙酰胺(化合物22)

將417mg(2mmol)化合物1溶于539mg(674μL；6mmol；3當(dāng)量)N,N-二甲基乙二胺中。在85℃下將介質(zhì)攪拌72小時(shí)。

使介質(zhì)恢復(fù)到環(huán)境溫度，蒸發(fā)至干燥，然后在硅膠柱(二氯甲烷/甲醇)上純化。

產(chǎn)物由460mg(89％)橙色油狀的化合物22組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝2.05(s,3H)；2.28(s,6H)；2.48(t,J＝6.0Hz,2H)；2.91(dd,J＝13.0Hz,J＝7.0Hz,1H)；3.06(dd,J＝13.0Hz,J＝4.0Hz,1H)；3.40(m,2H)；4.26(dd,J＝7.0Hz,J＝4.0Hz,1H)；7.34(m,1H).

¹³C NMR(CDCl₃,75MHz):δ(ppm)＝5.2；31.6；36.7；45.6；58.6；71.0；172.9

UPLC-MS(AP+):254.9(M+H)⁺

實(shí)施例D4：制備2-羥基-3-(甲基硒基)-1-(吡咯烷-1-基)丙-1-酮(化合物23)

將513mg(2.5mmol)化合物1溶于533mg(616μL；7.5mmol；3當(dāng)量)吡咯烷中。在85℃下將介質(zhì)攪拌48小時(shí)。

使介質(zhì)恢復(fù)到環(huán)境溫度，蒸發(fā)至干燥，然后在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯)上純化。

產(chǎn)物由402mg(66％)橙色油狀的化合物23組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝1.85-2.07(m,4H)；2.11(s,3H)；2.77(dd,J＝13.0Hz,J＝7.0Hz,1H)；2.85(dd,J＝13.0Hz,J＝4.5Hz,1H)；3.45-3.65(m,4H)；3.78(d,J＝8.0Hz,1H)；4.45(m,1H).

¹³C NMR(CDCl₃,75MHz):δ(ppm)＝5.8；24.3；26.5；29.7；46.7；46.8；70.2；171.6

UPLC-MS(AP+):237.9(M+H)⁺

UPLC-MS(AP+):259.9(M+Na)⁺

實(shí)施例D5：制備2-羥基-3-(甲基硒基)-1-(哌啶-1-基)丙-1-酮(化合物24)

將417mg(2mmol)化合物1溶于517mg(600μL；6mmol；3當(dāng)量)哌啶中。在85℃下將介質(zhì)攪拌72小時(shí)。

使介質(zhì)恢復(fù)到環(huán)境溫度，蒸發(fā)至干燥，然后在硅膠柱(二氯甲烷/丙酮)上純化。

產(chǎn)物由151mg(29％)黃色油狀的化合物24組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝1.56-1.74(m,6H)；2.13(s,3H)；2.72(dd,J＝13.0Hz,J＝7.0Hz,1H)；2.82(dd,J＝13.0Hz,J＝4.0Hz,1H)；3.40(d,J＝4.0Hz,2H)；3.62(m,2H)；4.03(d,J＝7.0Hz,1H)；4.61(m,1H).

¹³C NMR(CDCl₃,75MHz):δ(ppm)＝6.0；24.8；25.8；26.6；30.4；44.2；46.5；68.7；171.3

UPLC-MS(AP+):251.9(M+H)⁺

UPLC-MS(AP+):273.9(M+Na)⁺

實(shí)施例D6：制備2-羥基-3-(甲基硒基)-1-(嗎啉-4-基)丙-1-酮(化合物25)

將486mg(2.4mmol)化合物1溶于641μL(7.2mmol；3當(dāng)量)嗎啉中。在85℃下將介質(zhì)攪拌72小時(shí)。

使介質(zhì)恢復(fù)到環(huán)境溫度，蒸發(fā)至干燥，然后在硅膠柱(二氯甲烷/丙酮)上純化。

產(chǎn)物由262mg(42％)淡黃色油狀的化合物25組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝2.12(s,3H)；2.79(m,2H)；3.52(m,2H)；3.65(m,1H)；3.74(m,5H)；3.82(d,J＝8.0Hz,1H)；4.59(m,1H).

¹³C NMR(CDCl₃,75MHz):δ(ppm)＝6.1；30.1；43.3；46.2；66.8；67.1；68.6；171.8

UPLC-MS(AP+):253.9(M+H)⁺

UPLC-MS(AP+):276.0(M+Na)⁺

實(shí)施例D7：制備N,N-二乙基-2-羥基-3-(甲基硒基)丙酰胺(化合物26)

將417mg(2mmol)化合物1溶于443mg(633μL；6mmol；3當(dāng)量)二乙胺中。在85℃下將介質(zhì)攪拌72小時(shí)。

使介質(zhì)恢復(fù)到環(huán)境溫度，蒸發(fā)至干燥，然后在硅膠柱(二氯甲烷/甲醇)上純化。

產(chǎn)物由105mg(19％)橙色油狀的化合物26組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝1.38(t,J＝7.0Hz,6H)；2.10(s,3H)；2.91(dd,J＝12.5Hz,J＝6.0Hz,1H)；3.02(m,5H)；4.33(m,1H).

實(shí)施例D8：制備2-羥基-N-(2-羥乙基)-3-(甲基硒基)丙酰胺(化合物27)

將250mg(1.22mmol)化合物1溶于228mg(225μL；3.66mmol；3當(dāng)量)乙醇胺中。在85℃下將介質(zhì)攪拌72小時(shí)。

使介質(zhì)恢復(fù)到環(huán)境溫度，蒸發(fā)至干燥，然后在硅膠柱(二氯甲烷/甲醇)上純化。

產(chǎn)物由203mg(72％)綠色油狀的化合物27組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝2.06(s,3H)；2.92(dd,J＝13.0Hz,J＝7.5Hz,1H)；2.95(s,1H)；3.11(dd,J＝13.0Hz,J＝4.0Hz,1H)；3.49(m,2H)；3.65(d,J＝4.5Hz,1H)；3.78(m,2H)；4.26(m,1H)；7.26(s,1H).

¹³C NMR(CDCl₃,75MHz):δ(ppm)＝5.2；31.2；42.5；62.2；70.6；173.9

UPLC-MS(AP+):227.9(M+H)⁺

UPLC-MS(AP+):249.8(M+Na)⁺

實(shí)施例D9：制備[(2RS)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-(S)-丙氨酸(化合物29)

D9.1.制備[(2RS)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-(S)-丙氨酸叔丁酯(化合物28)

在氮?dú)庀聦?00mg(546μmol)2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸(10)溶于5mL二氯甲烷中。將介質(zhì)冷卻至0℃，然后加入183mg(600μmol,1.1當(dāng)量)3-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4(3H)-酮。在0℃下將介質(zhì)攪拌30分鐘，然后在環(huán)境溫度下攪拌1小時(shí)30分鐘。將介質(zhì)冷卻至0℃，然后加入99mg(546μmol,1當(dāng)量)(S)-丙氨酸叔丁酯的鹽酸鹽和156mg(200μL；1.20mmol；2.2當(dāng)量)N,N-二異丙基乙胺。在0℃下將介質(zhì)攪拌30分鐘，然后在環(huán)境溫度下攪拌16小時(shí)。

用二氯甲烷(25mL)稀釋反應(yīng)介質(zhì)，然后用1N鹽酸水溶液(2×10mL)洗滌介質(zhì)，然后用NaHCO₃(1N，2×10mL)水溶液洗滌，然后用飽和NaCl水溶液(10mL)洗滌。將有機(jī)相用Na₂SO₄干燥，過(guò)濾并濃縮。在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯)上純化殘余物。

產(chǎn)物由116mg(67％)無(wú)色油狀的化合物28組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz)50/50兩種非對(duì)映體28a(R,S)和28b(S,S)的混合物:δ(ppm)＝1.42和1.43(2d,J＝3.5Hz,3H)；1.49和1.50(2s,9H)；2.04和2.05(2s,3H)；2.92(dd,J＝13.0Hz,J＝7.5Hz,1H)；3.09(m,1H)；3.43(d,J＝3.5Hz,1H)；4.21(m,1H)；4.48(m,1H)；7.27和7.33(2d,J＝6.5Hz,1H).

UPLC-MS(AP-):309.8(M-H+)

UPLC-MS(AP+):333.9(M+Na)⁺

D9.2：制備[(2RS)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-(S)-丙氨酸(化合物29)

用58mg酯28起始，使用實(shí)施例B1的條件獲得化合物29。

產(chǎn)物由40mg(81％)無(wú)色油狀的化合物29組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz)50/50兩種非對(duì)映體29a(R,S)和29b(S,S)的混合物:δ(ppm)＝1.51和1.53(2d,J＝3.0Hz,3H)；2.05和2.06(2s,3H)；2.90(m,1H)；3.10(m,1H)；3.52(s,1H)；4.24和4.31(2dd,J＝8.0Hz,J＝4.0Hz,1H)；4.61(m,1H)；7.36和7.43(2d,J＝7.5Hz,1H).

實(shí)施例D10：制備[(2RS)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-(S)-甲硫氨酸(化合物31)

D10.1.制備[(2RS)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-(S)-甲硫氨酸甲酯(化合物30)

用500mg(2.65mmol；1當(dāng)量)2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸(10)和557mg(2.65mmol；1當(dāng)量)(S)-甲硫氨酸鹽酸鹽的甲酯起始，使用實(shí)施例D9的條件獲得化合物30。產(chǎn)物由549mg(60％)微黃色油狀的期望產(chǎn)物組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz)50/50兩種非對(duì)映體30a(R,S)和30b(S,S)的混合物:δ(ppm)＝2.05(m,4H)；2.13(m,3H)；2.23(m,1H)；2.56(t,J＝7.5Hz,2H)；2.92(m,1H)；3.09(m,1H)；3.45(m,1H)；3.79和3.80(2s,3H)；4.25(m,1H)；4.75(m,1H)；7.39(m,1H).

D10.2：制備[(2RS)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-(S)-甲硫氨酸(化合物31)

用445mg化合物30起始，使用實(shí)施例B1的條件獲得化合物31。

在環(huán)境溫度下攪拌16小時(shí)后，將反應(yīng)介質(zhì)稀釋于水(40mL)中，然后用乙酸乙酯(2×25mL)提取。通過(guò)加入2M鹽酸水溶液將介質(zhì)的pH調(diào)至1。用乙酸乙酯(4×25mL)提取介質(zhì)。將該第二提取的有機(jī)相合并，用Na₂SO₄干燥，過(guò)濾并濃縮。

產(chǎn)物由400mg(92％)淡黃色油狀的期望產(chǎn)物組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz)50/50兩種非對(duì)映體31a(R,S)和31b(S,S)的混合物:δ(ppm)＝2.05和2.08(2s,3H)；2.11(m,1H)；2.15(s,3H)；2.27(m,1H)；2.62(t,J＝7.5Hz,2H)；2.91(m,1H)；3.10(m,1H)；4.28和4.38(2dd,J＝8.0Hz,J＝4.5Hz,1H)；4.75(m,1H)；7.51和7.57(2d,J＝8.0Hz,1H).

實(shí)施例D11：制備[(2R)-2-羥基-3-甲基硒基丙酰基]-(S)-甲硫氨酸(化合物31a)

D11.1.制備[(2R)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-(S)-甲硫氨酸甲酯(化合物30a)

用100mg(513μmol；1當(dāng)量)(R)-2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸(11)和108mg(513μmol；1當(dāng)量)(S)-甲硫氨酸鹽酸鹽的甲酯起始，使用實(shí)施例D9的條件獲得化合物30a。產(chǎn)物由89mg(50％)無(wú)色油狀的期望產(chǎn)物組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝2.06(s,3H)；2.07(m,1H)；2.13(s,3H)；2.22(m,1H)；2.57(t,J＝7.5Hz,2H)；2.93(dd,J＝13.0Hz,J＝7.5Hz,1H)；3.09(dd,J＝13.0Hz,J＝4.5Hz,1H)；3.40(d,J＝4.0Hz,1H)；3.80(s,3H)；4.28(m,1H)；4.75(m,1H)；7.40(d,J＝8.0Hz,1H).

D11.2.制備[(2R)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-(S)-甲硫氨酸(化合物31a)

用89mg化合物30a起始，使用實(shí)施例D10.2的條件獲得化合物31a。

產(chǎn)物由82mg(99％)無(wú)色油狀的期望產(chǎn)物組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝2.08(s,3H)；2.11(m,1H)；2.15(s,3H)；2.28(m,1H)；2.63(m,2H)；2.91(dd,J＝13.0Hz,J＝7.0Hz,1H)；3.08(dd,J＝13.0Hz,J＝4.0Hz,1H)；4.39(dd,J＝7.0Hz,J＝4.0Hz,1H)；4.74(m,1H)；7.59(d,J＝8.0Hz,1H).

實(shí)施例D12：制備[(2S)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-(S)-甲硫氨酸(化合物31b)

D12.1.制備[(2S)-2-羥基-3-甲基硒基丙酰基]-(S)-甲硫氨酸甲酯(化合物30b)

用100mg(535μmol；1當(dāng)量)(S)-2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸(12)和112mg(535μmol；1當(dāng)量)(S)-甲硫氨酸鹽酸鹽的甲酯起始，使用實(shí)施例D9的條件獲得化合物30b。產(chǎn)物由115mg(57％)無(wú)色油狀的期望產(chǎn)物組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝2.04(s,3H)；2.07(m,1H)；2.13(s,3H)；2.23(m,1H)；2.57(t,J＝7.5Hz,2H)；2.92(dd,J＝13.0Hz,J＝8.0Hz,1H)；3.10(dd,J＝13.0Hz,J＝4.5Hz,1H)；3.42(d,J＝4.5Hz,1H)；3.79(s,3H)；4.22(m,1H)；4.75(m,1H)；7.35(d,J＝8.0Hz,1H).

D12.2.制備[(2S)-2-羥基-3-甲基硒基丙酰基]-(S)-甲硫氨酸(化合物31b)

用115mg化合物30b起始，使用實(shí)施例D10.2的條件獲得化合物31b。

產(chǎn)物由98mg(98％)黃色油狀的期望產(chǎn)物組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝2.05(s,3H)；2.10(m,1H)；2.15(s,3H)；2.28(m,1H)；2.62(t,J＝7.5Hz,2H)；2.91(dd,J＝13.0Hz,J＝8.0Hz,1H)；3.11(dd,J＝13.5Hz,J＝4.5Hz,1H)；4.27(dd,J＝8.0Hz,J＝4.5Hz,1H)；4.75(m,1H)；7.48(d,J＝8.0Hz,1H).

實(shí)施例D13：制備N(α)-[(2RS)-2-羥基-3-甲基硒基丙酰基]-N(ω)-叔丁氧羰基-(S)-賴氨酸甲酯(化合物32)

用100mg(535μmol；1當(dāng)量)2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸(10)和162mg(546μmol；1當(dāng)量)N(ω)-叔丁氧羰基-(S)-賴氨酸鹽酸鹽的甲酯起始，使用實(shí)施例D9的條件獲得化合物32。

產(chǎn)物由171mg(73％)無(wú)色油狀的期望產(chǎn)物組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz)50/50兩種非對(duì)映體(R,S)和(S,S)的混合物:δ(ppm)＝1.37(m,2H)；1.44(s,9H)；1.48(m,2H)；1.73(m,1H)；1.89(m,1H)；2.02和2.04(2s,3H)；2.89(m,1H)；3.07(m,3H)；3.74和3.75(s,3H)；3.85(m,1H)；4.26(m,1H)；4.59(m,1H)；4.69(m,1H)；7.30(m,1H).

UPLC-MS(AP+):449.0(M+Na)⁺

實(shí)施例D14：制備N(α)-[(2RS)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-N(ω)-芴基甲氧羰基-(S)-賴氨酸甲酯(化合物33)

用200mg(1.059mmol；1當(dāng)量)2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸(10)和448mg(1.059mmol；1當(dāng)量)N(ω)-芴基甲氧羰基-(S)-賴氨酸鹽酸鹽的甲酯起始，使用實(shí)施例D9的條件獲得化合物33。

產(chǎn)物由430mg(59％)無(wú)色油狀的期望產(chǎn)物組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝1.42(m,2H)；1.58(m,2H)；1.76(m,2H)；1.91(m,1H)；2.03(s,3H)；2.92(m,1H)；3.10(m,1H)；3.21(m,2H)；3.78(s,3H)；4.25(m,2H)；4.43(m,2H)；4.64(m,1H)；4.90(m,1H)；7.25(m,1H)；7.35(m,2H)；7.42(m,2H)；7.63(m,2H)；7.80(m,2H).

UPLC-MS(AP+):571.3(M+Na)⁺

實(shí)施例D15：制備N(α)-[(2RS)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-N(ω)-芐氧羰基-(S)-賴氨酸芐酯(化合物34)

用400mg(2.12mmol；1當(dāng)量)2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸(10)和862mg(2.12mmol；1當(dāng)量)N(ω)-芐氧羰基-(S)-賴氨酸鹽酸鹽的甲酯起始，使用實(shí)施例D9的條件獲得化合物34。

產(chǎn)物由944mg(76％)黃色油狀的期望產(chǎn)物組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz)50/50兩種非對(duì)映體34a(R,S)和34b(S,S)的混合物:δ(ppm):1.35(m,2H)；1.51(m,2H)；1.75(m,2H)；1.91(m,1H)；2.00和2.03(2s,3H)；2.89(m,1H)；3.07(m,1H)；3.17(m,2H)；3.37和3.49(2s,1H)；4.23(m,1H)；4.67(m,1H)；4.81(m,1H)；5.12-5.26(m,4H)；7.33-7.43(m,10H).

實(shí)施例D16：制備[(2RS)-2-羥基-3-甲基硒基丙酰基]-(S)-(化合物36)

D16.1.制備[(2RS)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-(S)-硒代甲硫胺酸甲酯(化合物35)

用136mg(720μmol；1當(dāng)量)2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸(10)和187mg(720μmol；1當(dāng)量)(S)-硒代甲硫胺酸鹽酸鹽的甲酯起始，使用實(shí)施例D9的條件獲得化合物35。

產(chǎn)物由180mg(63％)無(wú)色油狀的期望產(chǎn)物組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz)50/50兩種非對(duì)映體35a(R,S)和35b(S,S)的混合物:δ(ppm):2.03(s,3H)；2.04和2.07(2s,3H)；2.13(m,1H)；2.28(m,1H)；2.57(t,J＝7.5Hz,2H)；2.92(m,1H)；3.10(m,1H)；3.38(m,1H)；3.79和3.80(2s,3H)；4.25(m,1H)；4.75(m,1H)；7.33和7.37(2d,J＝8.5Hz,1H).

D16.2.制備[(2RS)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-(S)-硒代甲硫胺酸(化合物36)

用130mg化合物35起始，使用實(shí)施例B1的條件獲得化合物36。

在環(huán)境溫度下攪拌16小時(shí)后，將反應(yīng)介質(zhì)稀釋于水(20mL)中，然后用乙酸乙酯(2×10mL)提取。通過(guò)加入2M鹽酸水溶液將介質(zhì)的pH調(diào)至1。用乙酸乙酯(3×10mL)提取介質(zhì)。將該第二提取的有機(jī)相合并，用Na₂SO₄干燥，過(guò)濾并濃縮。

產(chǎn)物由112mg(89％)黃色油狀的期望產(chǎn)物組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz)50/50兩種非對(duì)映體36a(R,S)和36b(S,S)的混合物:δ(ppm):2.05(s,3H)；2.08(s,3H)；2.17(m,1H)；2.33(m,1H)；2.63(m,2H)；2.92(m,1H)；3.10(m,1H)；4.26和4.35(2dd,J＝8.0Hz,J＝4.5Hz,1H)；4.75(m,1H)；7.43和7.49(2d,J＝8.0Hz,1H).

實(shí)施例D17：制備[(2R)-2-羥基-3-甲基硒基丙酰基]-(S)-硒代甲硫胺酸(化合物36a)

D17.1.制備[(2R)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-S-硒代甲硫胺酸甲酯(化合物35a)

用185mg(950μmol；1當(dāng)量)(R)-2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸(11)和260mg(950μmol；1當(dāng)量)(S)-硒代甲硫胺酸鹽酸鹽的甲酯起始，使用實(shí)施例D9的條件獲得化合物35a。

產(chǎn)物由233mg(62％)淡黃色油狀的期望產(chǎn)物組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝2.03(s,3H)；2.07(s,3H)；2.12(m,1H)；2.29(m,1H)；2.57(m,2H)；2.93(dd,J＝13.0Hz,J＝7.5Hz,1H)；3.09(dd,J＝13.0Hz,J＝4.5Hz,1H)；3.32(m,1H)；3.80(s,3H)；4.27(m,1H)；4.75(m,1H)；7.37(d,J＝8.0Hz,1H).

D17.2.制備[(2R)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-(S)-硒代甲硫胺酸(化合物36a)

用183mg化合物35a起始，使用實(shí)施例B1的條件獲得化合物36a。

將反應(yīng)介質(zhì)稀釋于水(20mL)中，然后用乙酸乙酯(2×10mL)提取。通過(guò)加入2M鹽酸水溶液將介質(zhì)的pH調(diào)至1。用乙酸乙酯(3×10mL)提取介質(zhì)。將有機(jī)相合并，用Na₂SO₄干燥，過(guò)濾并濃縮。

產(chǎn)物由178mg(100％)奶油色固體狀的期望產(chǎn)物組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝2.05(s,3H)；2.08(s,3H)；2.18(m,1H)；2.35(m,1H)；2.64(m,2H)；2.91(dd,J＝13.0Hz,J＝7.0Hz,1H)；3.09(dd,J＝13.0Hz,J＝4.0Hz,1H)；4.38(dd,J＝7.0Hz,J＝4.0Hz,1H)；4.74(m,1H)；7.53(d,J＝8.0Hz,1H).

實(shí)施例D18：制備[(2S)-2-羥基-3-甲基硒基丙酰基]-(S)-硒代甲硫胺酸甲酯(化合物36b)

D18.1.制備[(2S)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-(S)-硒代甲硫胺酸甲酯(化合物35b)

用177mg(949μmol；1當(dāng)量)(S)-2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸(12)和260mg(950μmol；1當(dāng)量)(S)-硒代甲硫胺酸鹽酸鹽的甲酯起始，使用實(shí)施例D9的條件獲得化合物35b。

產(chǎn)物由236mg(58％)淡黃色油狀的期望產(chǎn)物組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝2.03(s,3H)；2.04(s,3H)；2.12(m,1H)；2.29(m,1H)；2.57(t,J＝7.5Hz,2H)；2.92(dd,J＝13.0Hz,J＝8.0Hz,1H)；3.10(dd,J＝13.0Hz,J＝4.5Hz,1H)；3.79(s,3H)；4.22(dd,J＝8.0Hz,J＝4.5Hz,1H)；4.75(m,1H)；7.33(d,J＝8.5Hz,1H).

D18.2.制備[(2S)-2-羥基-3-甲基硒基丙?；鵠-(S)-硒代甲硫胺酸(化合物36b)

用186mg化合物35b起始，使用實(shí)施例B1的條件獲得化合物36b。

在環(huán)境溫度下攪拌16小時(shí)后，將反應(yīng)介質(zhì)稀釋于水(20mL)中，然后用乙酸乙酯(2×10mL)提取。通過(guò)加入2M鹽酸水溶液將介質(zhì)的pH調(diào)至1。用乙酸乙酯(3×10mL)提取介質(zhì)。將有機(jī)相合并，用Na₂SO₄干燥，過(guò)濾并濃縮。在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯，然后二氯甲烷/甲醇)上純化殘余物。將獲得的油用環(huán)己烷研磨，然后用戊烷研磨，溶于TBME和二氯甲烷中，然后濃縮至干燥。

產(chǎn)物由90mg(50％)黃色油狀的期望產(chǎn)物組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝2.05(s,6H)；2.19(m,1H)；2.34(m,1H)；2.63(m,2H)；2.91(dd,J＝13.5Hz,J＝8.0Hz,1H)；3.12(dd,J＝13.5Hz,J＝4.5Hz,1H)；4.26(dd,J＝8.0Hz,J＝4.5Hz,1H)；4.75(m,1H)；7.41(d,J＝8.0Hz,1H).

4-制備化合物E：2-酰氧基-3-(烷基硒基)丙酸和對(duì)應(yīng)的酯

通過(guò)使化合物B與羧酸酐反應(yīng)一步制備化合物E，或者通過(guò)化合物A與羧酸酐的反應(yīng)然后通過(guò)水解兩步制備。

實(shí)施例E1：制備2-(乙酰氧基)-3-(甲基硒基)丙酸(化合物37)

在氮?dú)庀聦?74mg(2mmol)2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸(10)溶于33mL二氯甲烷中。向介質(zhì)加入817mg(756μL；8mmol；4當(dāng)量)乙酸酐，然后加入2.5mg(20μmol；0.01當(dāng)量)4-二甲氨基吡啶。在氮?dú)庀虏⑶以诃h(huán)境溫度下使介質(zhì)處于攪拌狀態(tài)6小時(shí)。

再次將817mg(756μL；8mmol；4當(dāng)量)乙酸酐加入介質(zhì)。在氮?dú)庀虏⑶以诃h(huán)境溫度下將介質(zhì)攪拌16小時(shí)。

加入10mL水，然后通過(guò)蒸發(fā)將二氯甲烷從介質(zhì)清除。加入40mL飽和NH₄Cl水溶液，然后用乙酸乙酯(3×40mL)提取介質(zhì)。將有機(jī)相合并，用Na₂SO₄干燥，過(guò)濾并濃縮。在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯，具有1％TFA)上純化獲得的油。產(chǎn)物由292mg(63％)黃色油狀的化合物37組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm):2.15(s,3H)；2.20(s,3H)；2.97(dd,J＝13.5Hz,J＝7.5Hz,1H)；3.04(dd,J＝13.5Hz,J＝4.5Hz,1H)；5.37(dd,J＝7.5Hz,J＝4.5Hz,1H)；9.90(s,1H).

¹³C NMR(CDCl₃,75MHz):δ(ppm):6.2；21.0；25.0；72.6；170.7

UPLC-MS(AP-):224.7(M-H⁺)

實(shí)施例E2：制備2-(十二烷酰氧基)-3-(甲基硒基)丙酸(化合物38)

在氮?dú)庀聦?00mg(2.14mmol)2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸(10)溶于35mL二氯甲烷中。向介質(zhì)加入3.344g(8.56mmol；4當(dāng)量)月桂酸酐，然后加入2.6mg(21μmol；0.01當(dāng)量)4-二甲氨基吡啶。在氮?dú)庀虏⑶以诃h(huán)境溫度下將介質(zhì)攪拌6小時(shí)。

再次將3.344g(8.56mmol；4當(dāng)量)月桂酸酐加入介質(zhì)。在氮?dú)庀虏⑶以诃h(huán)境溫度下將介質(zhì)攪拌16小時(shí)。

加入10mL水，然后將介質(zhì)濃縮至干燥。在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯，然后二氯甲烷/甲醇)上純化殘余物。產(chǎn)物由394mg(47％)黃色油狀的化合物38組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm):0.91(m,3H)；1.29(m,16H)；1.68(m,2H)；2.13(s,3H)；2.44(t,J＝7.5Hz,2H)；3.00(m,2H)；5.30(m,1H).

實(shí)施例E3：制備2-(苯甲酰氧基)-3-(甲基硒基)丙酸(化合物40)

實(shí)施例3.1：制備2-(苯甲酰氧基)-3-(甲基硒基)丙酸甲酯(化合物39)

在氮?dú)庀聦?00mg(2.46mmol)化合物1溶于40mL二氯甲烷中。向介質(zhì)加入1.136g(4.92mmol；2當(dāng)量)苯甲酸酐，然后加入30mg(246μmol；0.1當(dāng)量)4-二甲氨基吡啶。在氮?dú)庀虏⑶以诃h(huán)境溫度下將介質(zhì)攪拌25小時(shí)。

將介質(zhì)濃縮至干燥。在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯)上純化殘余物。產(chǎn)物由633mg(81％)無(wú)色油狀的化合物39組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝2.17(s,3H)；3.13(m,2H)；3.83(s,3H)；5.60(t,J＝6.0Hz,1H)；7.50(t,J＝7.5Hz,2H)；7.63(t,J＝7.5Hz,1H)；8.13(d,J＝7.5Hz,2H).

E3.2：制備2-(苯甲酰氧基)-3-(甲基硒基)丙酸(化合物40)

用372mg化合物39起始，使用實(shí)施例B1的條件獲得化合物40。

在環(huán)境溫度下攪拌16小時(shí)后，將反應(yīng)介質(zhì)稀釋于水(10mL)中，然后用乙酸乙酯(2×10mL)提取。通過(guò)加入2M鹽酸水溶液將介質(zhì)的pH調(diào)至1。用乙酸乙酯(3×10mL)提取介質(zhì)。將該第二提取的有機(jī)相合并，用Na₂SO₄干燥，過(guò)濾并濃縮。

產(chǎn)物由283mg(81％)白色油狀的期望產(chǎn)物組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝2.13(s,3H)；2.99(dd,J＝13.5Hz,J＝6.0Hz,1H)；3.09(dd,J＝13.5Hz,J＝4.5Hz,1H)；4.58(dd,J＝6.0Hz,J＝4.5Hz,1H)；7.52(t,J＝7.5Hz,2H)；7.66(t,J＝7.5Hz,1H)；8.15(d,J＝7.5Hz,2H).

實(shí)施例E4：制備3-(甲基硒基)-2-[(3'-吡啶)氧羰基]丙酸甲酯(化合物41)

在氮?dú)庀聦?84mg(1.85mmol)化合物1溶于30mL二氯甲烷中。向介質(zhì)加入872mg(3.7mmol；2當(dāng)量)3-吡啶羧酸酐，然后加入23mg(185μmol；0.1當(dāng)量)4-二甲氨基吡啶。在氮?dú)庀虏⑶以诃h(huán)境溫度下將介質(zhì)攪拌18小時(shí)。通過(guò)多孔玻璃過(guò)濾介質(zhì)，然后將濾液濃縮至干燥。在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯)上純化殘余物。

產(chǎn)物由490mg(83％)無(wú)色油狀的化合物41組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝2.16(s,3H)；3.13(m,2H)；3.84(s,3H)；5.60(dd,J＝7.0Hz,J＝5.0Hz,1H)；7.47(dd,J＝8.0Hz,J＝5.0Hz,1H)；8.39(d,J＝8.0Hz,1H)；8.85(d,J＝5.0Hz,1H)；9.31(s,1H).

實(shí)施例E5：制備2-[(叔丁氧羰基)氧]-3-(甲基硒基)丙酸(化合物43)

E5.1：制備2-[(叔丁氧羰基)氧]-3-(甲基硒基)丙酸甲酯(化合物42)

將100mg(507μmol)化合物1溶于5mL乙酸乙酯中。將介質(zhì)冷卻至10℃，然后逐滴加入103mg(143μL；1.01mmol；2當(dāng)量)三乙基胺?？焖俚刂鸬渭尤?20mg(533μmol；1.05當(dāng)量)溶于1mL乙酸乙酯的二碳酸二叔丁酯。在90℃下將介質(zhì)加熱48小時(shí)。

將反應(yīng)介質(zhì)乙酸乙酯(25mL)稀釋，然后將介質(zhì)用5％檸檬酸水溶液(2×10mL)洗滌，然后用飽和NaCl水溶液(10mL)洗滌。將有機(jī)相用Na₂SO₄干燥，過(guò)濾并濃縮。在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯)上純化殘余物。

產(chǎn)物由101mg(63％)無(wú)色油狀的化合物42組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝1.55(s,9H)；2.13(s,3H)；2.94(dd,J＝13.5Hz,J＝7.5Hz,1H)；3.00(dd,J＝13.5Hz,J＝5.0Hz,1H)；3.82(s,3H)；5.17(dd,J＝7.5Hz,J＝5.0Hz,1H).

E5.2：制備2-[(叔丁氧羰基)氧]-3-(甲基硒基)丙酸(化合物43)

用363mg化合物42起始，使用實(shí)施例B1的條件獲得化合物43。

在環(huán)境溫度下攪拌16小時(shí)后，將反應(yīng)介質(zhì)稀釋于水(25mL)中，然后用乙酸乙酯(2×20mL)提取。通過(guò)加入5％檸檬酸水溶液(2×10mL)將介質(zhì)的pH調(diào)至4。用乙酸乙酯(5×25mL)提取介質(zhì)。將該第二提取的有機(jī)相合并，用Na₂SO₄干燥，過(guò)濾并濃縮。

將殘余物在硅膠柱(二氯甲烷/甲醇)上純化，然后在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯)上再次純化。

產(chǎn)物由39mg(11％)無(wú)色油狀的期望產(chǎn)物組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝1.52(s,9H)；2.14(s,3H)；2.96(dd,J＝13.5Hz,J＝7.5Hz,1H)；3.03(dd,J＝13.5Hz,J＝4.5Hz,1H)；5.20(dd,J＝7.5Hz,J＝4.5Hz,1H)；10.04(s,1H).

實(shí)施例E6：制備(2RS)-[N-(叔丁氧羰基)-S-甲硫氨?；鵠-3-甲基硒基丙酸甲酯(化合物44)

將500mg(2.0mmol)BOC-(S)-甲硫氨酸溶于25mL二氯甲烷中。加入417mg(2.0mmol；1當(dāng)量)N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺。在環(huán)境溫度下將介質(zhì)攪拌10分鐘，然后加入416mg(2.0mmol；1當(dāng)量)化合物1和25mg(200μmol；0.1當(dāng)量)4-二甲氨基吡啶。在環(huán)境溫度下將混合物攪拌16小時(shí)。

將介質(zhì)濃縮至干燥。在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯)上純化殘余物。

產(chǎn)物由709mg(78％)無(wú)色油狀的化合物44組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz)50/50兩種非對(duì)映體44a(R,S)和44b(S,S)的混合物:δ(ppm)＝1.48(s,9H)；2.04(m,1H)；2.12和2.14(2s,3H)；2.15和2.16(2s,3H)；2.26(m,1H)；2.65(m,2H)；2.99(m,2H)；3.80和3.81(2s,3H)；4.58(m,1H)；5.17(m,1H)；5.39(m,1H).

UPLC-MS(AP+):451.9(M+Na)⁺

實(shí)施例E7：制備4-甲基硒基-2-(2'-乙酰氧基-3'-甲基硒基丙?；?丁酸甲酯(化合物45)和4-甲基硒基-2-(2'-乙酰氧基-3'-甲基硒基丙?；?丁酸甲酯(化合物46)

E7.1.制備4-甲基硒基-2-(2'-乙酰氧基-3'-甲基硒基丙?；?丁酸甲酯(化合物45)

在氮?dú)庀聦?28mg(522μmol)2-(乙酰氧基)-3-(甲基硒基)丙酸(37)溶于5mL二氯甲烷中。將108.7mg(522μmol)N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺加入介質(zhì)。在氮?dú)庀虏⑶以诃h(huán)境溫度下將介質(zhì)攪拌10分鐘。加入116mg(522μmol)2-羥基-4-(甲基硒基)丁酸甲酯(EP1778706，以實(shí)施例9的類似方式制備，使用甲醇代替乙醇)在5mL二氯甲烷中的溶液，然后加入6.4mg(52μmol；0.01當(dāng)量)4-二甲氨基吡啶。在環(huán)境溫度下將介質(zhì)攪拌16小時(shí)。

將介質(zhì)濃縮至干燥。在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯)上純化殘余物。

產(chǎn)物由189mg(77％)無(wú)色油狀的化合物45組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz)兩種非對(duì)映體的混合物:δ(ppm)＝2.03和2.04(2s,3H)；2.15和2.16(2s,3H)；2.20(s,3H)；2.23-2.3(m,2H)；2.54-2.7(m,2H)；2.95-3.02(m,1H)；3.11(dd,J＝13.5Hz,J＝4.0Hz,1H)；3.79和3.80(2s,3H)；5.15至5.45(m,2H).

UPLC-MS(AP+):442.9(M+Na)⁺

E7.2.通過(guò)水解甲酯制備4-甲基硒基-2-(2'-乙酰氧基-3'-甲基硒基丙?；?丁酸(化合物46)

用180mg化合物45起始，使用實(shí)施例B1的條件獲得化合物46。

在環(huán)境溫度下攪拌16小時(shí)后，將反應(yīng)介質(zhì)稀釋于水(20mL)中，然后用乙酸乙酯(2×5mL)提取。將水相凍干。用鹽酸在二氧雜環(huán)己烷中的4N溶液將凍干物再溶解。將介質(zhì)攪拌10分鐘，然后濃縮至干燥。將濃縮物再溶于10mL水中，然后將溶液凍干。

產(chǎn)物由138mg(71％)黃色粘性固體狀的包含2LiCl的期望產(chǎn)物組成。

¹H NMR(D₂O,400MHz):δ(ppm)＝2.00(s,3H)；2.05(s,3H)；2.07-2.24(m,2H)；2.65(m,2H)；2.89(dd,J＝13.0Hz,J＝6.5Hz,1H)；3.00(dd,J＝13.0Hz,J＝4.5Hz,1H)；4.36(dd,J＝8.0Hz,J＝4.0Hz,1H)；4.50(dd,J＝6.5Hz,J＝4.5Hz,1H).

實(shí)施例E8：制備3-甲基硒基-2-(2'-羥基-4'-甲基硒基丁酰基)丙酸(化合物48)

E8.1：制備3-甲基硒基-2-(2'-羥基-4'-甲基硒基丁?；?丙酸甲酯(化合物47)

用89mg 2-乙酰氧基甲基硒基丁酸(EP1778706,實(shí)施例11)和72mg化合物1起始，使用實(shí)施例E7的條件獲得化合物47。

通過(guò)多孔玻璃過(guò)濾介質(zhì)，然后將濾液濃縮至干燥。在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯)上純化殘余物。

產(chǎn)物由97mg(60％)無(wú)色油狀的期望產(chǎn)物組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz)非對(duì)映體的混合物:δ(ppm)＝2.05和2.06(2s,3H)；2.11和2.14(2s,3H)；2.18和2.19(2s,3H)；2.27-2.37(m,2H)；2.60-2.80(m,2H)；2.92-3.07(m,2H)；3.80和3.81(2s,3H)；5.24(dd,J＝12.5Hz,J＝6.0Hz,1H)；5.34和5.45(2dd,J＝8.0Hz,J＝4.5Hz,1H).

UPLC-MS(AP+):443.0(M+Na)⁺

E8.2：制備3-甲基硒基-2-(2'-羥基-4'-甲基硒基丁酰基)丙酸(化合物48)

用79mg化合物47起始，使用實(shí)施例E7.2的條件獲得化合物48。

產(chǎn)物由69mg(84％)無(wú)色粘性固體狀的包含2LiCl的期望產(chǎn)物組成。

¹H NMR(D₂O,400MHz):δ(ppm)＝2.04(m,3H)；2.09-2.14(m,3H)；2.20-2.27(m,2H)；2.64-2.74(m,2H)；2.93(dd,J＝13.0Hz,J＝6.5Hz,1H)；3.04(dd,J＝13.5Hz,J＝4.5Hz,1H)；4.55(dd,J＝6.5Hz,J＝4.5Hz,1H)；5.05(m,1H).

實(shí)施例E9：制備2-(戊酰氧基)-3-(甲基硒基)丙酸(化合物49)

在氮?dú)庀聦?07mg(1.98mmol)2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸(10)溶于33mL二氯甲烷中。向介質(zhì)加入752mg(817μL；3.96mmol；2當(dāng)量)戊酸酐，然后加入2.4mg(19.8μmol；0.01當(dāng)量)4-二甲氨基吡啶。在氮?dú)庀虏⑶以诃h(huán)境溫度下將介質(zhì)攪拌24小時(shí)。

向介質(zhì)加入752mg(817μL；3.96mmol；2當(dāng)量)戊酸酐，然后加入2.4mg(19.8μmol；0.01當(dāng)量)4-二甲氨基吡啶。在氮?dú)庀虏⑶以诃h(huán)境溫度下將介質(zhì)攪拌48小時(shí)。加入10mL水，然后通過(guò)蒸發(fā)將二氯甲烷從介質(zhì)清除。加入25mL飽和NH₄Cl水溶液，然后用乙酸乙酯(3×10mL)提取介質(zhì)。將有機(jī)相合并，用Na₂SO₄干燥，過(guò)濾并濃縮。在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯)上純化獲得的油。產(chǎn)物由260mg(48％)無(wú)色油狀的化合物49組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝0.96(t,J＝7.4Hz,3H)；1.42(m,2H)；1.69(m,2H)；2.15(s,3H)；2.46(td,J＝1.9Hz,J＝7.4Hz,2H)；3.01(m,2H)；5.36(dd,J＝4.3Hz,J＝7.6Hz,1H).

UPLC-MS(AP-):267.3(M-H⁺)

實(shí)施例E10：制備2-(壬酰氧基)-3-(甲基硒基)丙酸(化合物50)

在氮?dú)庀聦?60mg(1.39mmol)2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸(10)溶于23mL二氯甲烷中。向介質(zhì)加入874mg(963μL；2.78mmol；2當(dāng)量)壬酸酐，然后加入1.7mg(13.9μmol；0.01當(dāng)量)4-二甲氨基吡啶。在氮?dú)庀虏⑶以诃h(huán)境溫度下將介質(zhì)攪拌24小時(shí)。

向介質(zhì)加入874mg(963μL；2.78mmol；2當(dāng)量)壬酸酐，然后加入1.7mg(13.9μmol；0.01當(dāng)量)4-二甲氨基吡啶。在氮?dú)庀虏⑶以诃h(huán)境溫度下將介質(zhì)攪拌24小時(shí)。

加入10mL水，然后通過(guò)蒸發(fā)將二氯甲烷從介質(zhì)清除。加入25mL飽和NH₄Cl水溶液，然后用乙酸乙酯(3×10mL)提取介質(zhì)。將有機(jī)相合并，用Na₂SO₄干燥，過(guò)濾并濃縮。在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯)上純化獲得的油。產(chǎn)物由116mg(25％)無(wú)色油狀的化合物50組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝0.91(t,J＝6.9Hz,3H)；1.34(m,10H)；1.70(m,2H)；2.14(s,3H)；2.45(td,J＝1.7Hz,J＝7.4Hz,2H)；3.01(m,2H)；5.37(dd,J＝4.3Hz,J＝7.6Hz,1H).

UPLC-MS(AP-):322.9(M-H⁺)

實(shí)施例E11.1.：制備2-(亞油酰氧基)-3-(甲基硒基)丙酸甲酯(化合物51)

將818mg(2.83mmol)亞油酸溶于35mL二氯甲烷中。加入589mg(2.83mmol；1當(dāng)量)N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺。在環(huán)境溫度下將介質(zhì)攪拌10分鐘，然后加入575mg(2.83mmol；1當(dāng)量)化合物1和35mg(283μmol；0.1當(dāng)量)4-二甲氨基吡啶。在環(huán)境溫度下將介質(zhì)攪拌48小時(shí)。

通過(guò)多孔玻璃過(guò)濾介質(zhì)，然后將濾液濃縮至干燥。在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯)上純化殘余物。產(chǎn)物由801mg(60％)無(wú)色油狀的化合物51組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝0.92(t,J＝6.9Hz,3H)；1.34(m,14H)；1.70(m,2H)；2.08(m,4H)；2.12(s,3H)；2.45(td,J＝2.8Hz,J＝7.4Hz,2H)；2.8(t,J＝6.6Hz,2H)；2.97(m,2H)；3.8(s,3H)；5.38(m,5H).

UPLC-MS(AP+):461.2(M+H⁺)

實(shí)施例E11.2：制備2-(亞油酰氧基)-3-(甲基硒基)丙酸(化合物52)

將459mg(1.59mmol)亞油酸溶于19.8mL二氯甲烷中。加入331mg(2.83mmol；1當(dāng)量)N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺。在環(huán)境溫度下將介質(zhì)攪拌30分鐘，然后加入300mg(1.59mmol；1當(dāng)量)2-羥基-3-(甲基硒基)丙酸和20mg(159μmol；0.1當(dāng)量)4-二甲氨基吡啶。在環(huán)境溫度下將介質(zhì)攪拌24小時(shí)。

通過(guò)多孔玻璃過(guò)濾介質(zhì)，然后將濾液濃縮至干燥。在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯，然后二氯甲烷/甲醇)上純化殘余物。產(chǎn)物由198mg(26％)無(wú)色油狀的化合物52組成。

¹H NMR(CDCl₃,300MHz):δ(ppm)＝0.93(t,J＝6.8Hz,3H)；1.35(m,14H)；1.70(m,2H)；2.1(m,4H)；2.15(s,3H)；2.45(m,2H)；2.8(t,J＝5.9Hz,2H)；3.0(m,2H)；5.4(m,5H).

UPLC-MS(AP-):444.7(M+H⁺)

實(shí)施例E12：制備2-[(1H-咪唑-4-基羰基)氧]-3-(甲基硒基)丙酸甲酯(化合物53)

將438mg(3.83mmol)4-咪唑羧酸懸浮于20mL二氯甲烷和30μLN,N-二甲基甲酰胺(383μmol；0.1當(dāng)量)中。將介質(zhì)冷卻至0℃，然后加入503μL(5.74mmol；1.5當(dāng)量)草酰氯。將介質(zhì)冷卻至0℃15分鐘，然后在環(huán)境溫度下攪拌2小時(shí)。將介質(zhì)濃縮至干燥。

將濃縮物再溶于20mL二氯甲烷中。將介質(zhì)冷卻至0℃，然后加入1.26mL(7.66mmol；2當(dāng)量)N,N-二異丙基乙胺。逐滴加入794mg(3.83mmol；1當(dāng)量)化合物1。在環(huán)境溫度下將介質(zhì)攪拌48小時(shí)。

將介質(zhì)用50mL乙酸乙酯稀釋，然后用20mL水洗滌。用20mL乙酸乙酯提取水相。將有機(jī)相合并，用20mL飽和NaCl水溶液洗滌。將有機(jī)相用Na₂SO₄干燥，過(guò)濾并濃縮。在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯，然后二氯甲烷/甲醇)上純化殘余物。產(chǎn)物由806mg(70％)淡黃色固體狀的化合物53組成。

¹H NMR(DMSO,400MHz):δ(ppm)＝2.12(s,3H)；3.03(m,2H)；3.70(s,3H)；5.42(dd,J＝4.6Hz,J＝7.3Hz,1H)；7.84(s,1H)；7.88(s,1H)；12.74(br s,1H).

UPLC-MS(AP+):314.7(M+Na⁺)

實(shí)施例E13.1：制備2-(新戊酰氧基)-3-(甲基硒基)丙酸甲酯(化合物54)

在氮?dú)庀聦?00mg(1.99mmol)化合物1溶于50mL二氯甲烷中。向介質(zhì)加入1.5g(7.95mmol；4當(dāng)量)三甲基乙酸酐，然后加入24mg(199μmol；0.1當(dāng)量)4-二甲氨基吡啶。在氮?dú)庀虏⑶以诃h(huán)境溫度下將介質(zhì)攪拌48小時(shí)。再次將748mg(3.98mmol；2當(dāng)量)三甲基乙酸酐加入介質(zhì)。在氮?dú)庀虏⑶以诃h(huán)境溫度下將介質(zhì)攪拌96小時(shí)。

將介質(zhì)濃縮至干燥。在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯)上純化殘余物。產(chǎn)物由484mg(83％)無(wú)色油狀的化合物54組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝1.29(s,9H)；2.13(s,3H)；2.99(m,2H)；3.79(s,3H)；5.31(dd,J＝4.6Hz,J＝7.5Hz,1H).

UPLC-MS(AP+):281.9(M+H⁺)

實(shí)施例E13.2：制備2-(新戊酰氧基)-3-(甲基硒基)丙酸(化合物55)

將240mg(0.83mmol)化合物54溶于12mL THF中。加入830μL(0.83mmol；1當(dāng)量)1M氫氧化鋰水溶液，在環(huán)境溫度下將溶液攪拌16小時(shí)。

加入41μL(41μmol,0.05當(dāng)量)1M氫氧化鋰水溶液，在環(huán)境溫度下將溶液攪拌24小時(shí)。

將反應(yīng)介質(zhì)稀釋于水(20mL)中，然后用乙酸乙酯(3×20mL)提取。通過(guò)加入1M鹽酸水溶液將介質(zhì)的pH調(diào)至4。用乙酸乙酯(3×20mL)提取介質(zhì)。將該提取的有機(jī)相合并，用Na₂SO₄干燥，過(guò)濾并濃縮。產(chǎn)物由151mg(66％)無(wú)色油狀的期望產(chǎn)物55組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝1.29(s,9H)；2.15(s,3H)；3.03(m,2H)；5.32(dd,J＝7.7Hz,J＝4.3Hz,1H).

UPLC-MS(AP-):266.6(M+H⁺)

實(shí)施例E14：制備2-(3-氯丙酰氧基)-3-(甲基硒基)丙酸甲酯(化合物56)

在氮?dú)庀聦?00mg(1.99mmol)化合物1懸浮于6mL丙酮中。將324mg(3.98mmol；2當(dāng)量)吡啶加入介質(zhì)。將介質(zhì)冷卻至-10℃，然后在-10℃下將390μL(3.98mmol；2當(dāng)量)3-氯丙酰氯加入介質(zhì)。在環(huán)境溫度下將介質(zhì)攪拌64小時(shí)。

將反應(yīng)介質(zhì)稀釋于水(20mL)中，然后用乙酸乙酯(2×20mL)提取。將有機(jī)相合并，用2×20mL 1M NaHCO₃水溶液和10mL飽和NaCl水溶液洗滌。將有機(jī)相用Na₂SO₄干燥，過(guò)濾并濃縮。在硅膠柱(環(huán)己烷/乙酸乙酯)上純化殘余物。產(chǎn)物由301mg(51％)無(wú)色油狀的化合物56組成。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ(ppm)＝2.13(s,3H)；2.97(m,4H)；3.81(s,3H)；3.82(t,J＝6.6Hz,2H)；5.4(dd,J＝4.6Hz,J＝7.5Hz,1H).

新型化合物的制備例的概覽表

II.描述根據(jù)本發(fā)明的化合物的抗腫瘤活性的實(shí)施例

II.1.細(xì)胞系

使用來(lái)源于不同類型的癌癥的八個(gè)細(xì)胞系：PC3和DU145(前列腺)、HT-29和LS-174T(結(jié)腸)、Hep G2(肝臟)、MCF-7(乳腺)、MIA PaCa-2和PANC-1(胰腺)。

每個(gè)細(xì)胞系的特征匯總于表I中。

表I：所用細(xì)胞系的特征

II.2.培養(yǎng)基

根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知操作規(guī)程，在37℃、5％CO₂下，將細(xì)胞培養(yǎng)于表II中所述的特異性培養(yǎng)基中。

表II：培養(yǎng)基的組成

II.3.評(píng)估根據(jù)本發(fā)明的化合物的細(xì)胞毒性

在(1.2.中所述的)適合的培養(yǎng)基中將癌細(xì)胞融化和擴(kuò)增后，在存在10、50、100、250和500μM的待測(cè)試化合物的情況下，將這些細(xì)胞接種到96孔板，并且在它們相應(yīng)的培養(yǎng)基中溫育或不溫育(對(duì)照)。

在溫育96小時(shí)后，對(duì)每個(gè)96孔板進(jìn)行分析，以便使用借助WST-1的比色試驗(yàn)測(cè)量細(xì)胞活力。

II.4實(shí)施例

F1.化合物4的抗腫瘤活性(參見(jiàn)實(shí)施例A5)

用化合物4獲得的對(duì)于兩個(gè)細(xì)胞系的細(xì)胞毒性結(jié)果示于圖2中。這些結(jié)果顯示，細(xì)胞活力隨著化合物4的濃度增大而減小，化合物4的濃度減小50％，細(xì)胞DU145和LS174T的細(xì)胞活力分別等于481和335μM。

F2.化合物10的抗腫瘤活性(參見(jiàn)實(shí)施例B1)

用化合物10獲得的對(duì)于三個(gè)細(xì)胞系的細(xì)胞毒性結(jié)果示于圖3中。這些結(jié)果顯示，細(xì)胞活力隨著化合物10的濃度增大而減小，化合物10的濃度減小50％，細(xì)胞DU145、LS174T和HT-29的細(xì)胞活力分別等于392、430和328μM。

F3.化合物38的抗腫瘤活性(參見(jiàn)實(shí)施例E2)

用化合物38獲得的對(duì)于八個(gè)細(xì)胞系的細(xì)胞毒性結(jié)果示于圖4a和4b中。這些結(jié)果顯示，細(xì)胞活力隨著化合物38的濃度增大而減小?；衔?8的濃度減小50％，表III中給出了每個(gè)細(xì)胞系的細(xì)胞活力。

表III：在治療96小時(shí)后使細(xì)胞活力降低50％的化合物38的濃度

III.描述根據(jù)本發(fā)明的化合物的組合物的實(shí)施例

實(shí)施例G1：包含化合物10的組合物

制備具有以下組合物的膠囊劑：

化合物10 2-羥基-3-甲基硒基丙酸 0.40mg(硒當(dāng)量)

賦形劑*和包層** 1000mg膠囊

(*玉米淀粉、乳糖、硬脂酸鎂、風(fēng)味劑、

**明膠、二氧化鈦、染料)

實(shí)施例G2：包含化合物38的組合物

制備具有以下組合物的膠囊劑：

化合物38 2-(十二烷酰氧基)-3-(甲基硒基)

丙酸 0.40mg(硒當(dāng)量)

賦形劑*和包層** 1000mg膠囊

(*玉米淀粉、乳糖、硬脂酸鎂、風(fēng)味劑、

**明膠、二氧化鈦、染料)

實(shí)施例G3：包含化合物10和化合物38的組合物

制備具有以下組合物的膠囊劑：

化合物10 2-羥基-3-甲基硒基丙酸 0.10mg(硒當(dāng)量)

化合物38 2-(十二烷酰氧基)-3-(甲基硒基)丙

酸 0.40mg(硒當(dāng)量)

賦形劑*和包層** 1000mg膠囊

(*玉米淀粉、乳糖、硬脂酸鎂、風(fēng)味劑、

**明膠、二氧化鈦、染料)