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      煙草蛋白酶基因的制作方法

      文檔序號(hào):11109397閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

      技術(shù)特征:

      1.一種突變型、非天然存在的或轉(zhuǎn)基因煙草植物細(xì)胞,其包含:

      (i)多核苷酸,其包括編碼功能性蛋白酶的序列、由編碼功能性蛋白酶的序列組成或基本上由編碼功能性蛋白酶的序列組成,且與SEQ ID NO:1到SEQ ID No:80中的任一個(gè)具有至少95%的序列同一性;

      (ii)由(i)中所示的所述多核苷酸編碼的多肽;

      (iii)多肽,其包括編碼蛋白酶的序列、由編碼蛋白酶的序列組成或基本上由編碼蛋白酶的序列組成,且與SEQ ID NO:81到SEQ ID No:160具有至少95%的序列同一性;或

      (iv)包含(i)中所示的所述經(jīng)分離的多核苷酸的構(gòu)建體、載體或表達(dá)載體,

      且其中與所述蛋白酶的表達(dá)或活性未改變的對(duì)照煙草植物細(xì)胞相比,所述蛋白酶的表達(dá)或活性得以調(diào)節(jié)。

      2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的突變型、非天然存在的或轉(zhuǎn)基因煙草植物細(xì)胞,其中所述蛋白酶的表達(dá)或活性與所述對(duì)照煙草植物細(xì)胞相比上調(diào)。

      3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的突變型、非天然存在的或轉(zhuǎn)基因煙草植物細(xì)胞,其中所述蛋白酶的表達(dá)或活性與所述對(duì)照煙草植物細(xì)胞相比下調(diào)。

      4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的突變型、非天然存在的或轉(zhuǎn)基因煙草植物細(xì)胞,其中選自以下各項(xiàng)的蛋白酶的表達(dá)或活性經(jīng)調(diào)節(jié):

      SEQ ID NO:1到16中的至少一者;或

      SEQ ID NO:30到41中的至少一者;或

      SEQ ID NO:17到22中的至少一者;或

      SEQ ID NO:42到44中的至少一者;或

      SEQ ID NO:45到61中的至少一者;或

      SEQ ID NO:62到80中的至少一者;或

      SEQ ID NO:23到29中的至少一者。

      5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的突變型、非天然存在的或轉(zhuǎn)基因煙草植物細(xì)胞,其中選自SEQ ID NO:30到41中的至少一者的蛋白酶的表達(dá)或活性在東方型煙草中經(jīng)調(diào)節(jié)。

      6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的突變型、非天然存在的或轉(zhuǎn)基因煙草植物細(xì)胞,其中選自SEQ ID NO:17到22的蛋白酶的表達(dá)或活性在弗吉尼亞型煙草中經(jīng)調(diào)節(jié)。

      7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的突變型、非天然存在的或轉(zhuǎn)基因煙草植物細(xì)胞,其中選自SEQ ID NO:42到44中的至少一者的蛋白酶的表達(dá)或活性在白肋型煙草中經(jīng)調(diào)節(jié)。

      8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的突變型、非天然存在的或轉(zhuǎn)基因煙草植物細(xì)胞,其中選自SEQ ID NO:45到61中的至少一者的蛋白酶的表達(dá)或活性在弗吉尼亞或東方型煙草中經(jīng)調(diào)節(jié)。

      9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的突變型、非天然存在的或轉(zhuǎn)基因煙草植物細(xì)胞,其中選自SEQ ID NO:62到80中的至少一者的蛋白酶的表達(dá)或活性在白肋或東方型煙草中經(jīng)調(diào)節(jié)。

      10.根據(jù)權(quán)利要求4所述的突變型、非天然存在的或轉(zhuǎn)基因煙草植物細(xì)胞,其中選自SEQ ID NO:23到29中的至少一者的蛋白酶的表達(dá)或活性在白肋或弗吉尼亞型煙草中經(jīng)調(diào)節(jié)。

      11.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的突變型、非天然存在的或轉(zhuǎn)基因煙草植物細(xì)胞,其中所述突變是雜合或純合突變。

      12.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的突變型、非天然存在的或轉(zhuǎn)基因煙草植物細(xì)胞,其中所述一種或多種蛋白酶的表達(dá)增加約10%到約1000%。

      13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的突變型、非天然存在的或轉(zhuǎn)基因煙草植物細(xì)胞,其中所述一種或多種蛋白酶的表達(dá)增加至少10%、至少20%、至少25%、至少50%、至少100%、至少200%、至少500%、至少750%或高達(dá)1000%。

      14.一種突變型、非天然存在的或轉(zhuǎn)基因植物或其組分或部分,其包括根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的植物細(xì)胞。

      15.一種植物材料,其包含來(lái)自根據(jù)權(quán)利要求14所述的植物的生物質(zhì)、種子、莖、花或葉。

      16.一種煙草植物,其包括根據(jù)權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)所述的植物細(xì)胞、根據(jù)權(quán)利要求14所述的植物的至少一部分或根據(jù)權(quán)利要求15所述的植物材料。

      17.一種用于制備具有經(jīng)調(diào)節(jié)水平的蛋白酶的煙草植物的方法,所述方法包括以下步驟:

      (a)提供植物,所述植物包括(i)多核苷酸,其包括編碼功能性蛋白酶的序列、由編碼功能性蛋白酶的序列組成或基本上由編碼功能性蛋白酶的序列組成,且與SEQ ID NO:1到SEQ ID No:80中的至少一個(gè)具有至少95%的序列同一性;

      (b)將一個(gè)或多個(gè)突變插入至所述煙草植物的所述多核苷酸中以產(chǎn)生突變型煙草植物;以及

      (c)烘烤所述煙草植物材料。

      18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法,其中步驟(b)中的所述煙草植物為突變型煙草植物,優(yōu)選地,其中所述突變型煙草植物在一個(gè)或多個(gè)其它序列中包括一個(gè)或多個(gè)突變,所述一個(gè)或多個(gè)其它序列編碼功能性蛋白酶且與SEQ ID NO:1到SEQ ID No:80中的至少一者具有至少95%序列同一性。

      19.根據(jù)權(quán)利要求17或18所述的方法,其中煙草植物的細(xì)胞的基因組利用基因組編輯技術(shù)或基因組改造技術(shù)修飾,所述技術(shù)選自CRISPR/Cas技術(shù)、鋅指核酸酶介導(dǎo)的誘變、化學(xué)或輻射誘變、同源重組、寡核苷酸引導(dǎo)的誘變和大范圍核酸酶介導(dǎo)的誘變。

      20.一種制造與對(duì)照植物材料相比風(fēng)味概況改變的烘烤的植物材料、優(yōu)選地烘烤的葉或花的方法,所述方法包括以下步驟:

      (a)提供根據(jù)權(quán)利要求14所述的植物或根據(jù)權(quán)利要求15所述的植物材料;

      (b)任選地自其收獲所述植物材料;及

      (c)烘烤所述植物材料一段時(shí)間,使得至少一種蛋白酶的水平與對(duì)照經(jīng)烘烤植物材料相比經(jīng)調(diào)節(jié)。

      21.一種

      (i)多核苷酸,其包括編碼功能性蛋白酶的序列、由編碼功能性蛋白酶的序列組成或基本上由編碼功能性蛋白酶的序列組成,且與SEQ ID NO:1到SEQ ID No:80中的任一個(gè)具有至少95%的序列同一性;

      (ii)由(i)中所示的所述多核苷酸編碼的多肽;

      (iii)多肽,其包括編碼蛋白酶的序列、由編碼蛋白酶的序列組成或基本上由編碼蛋白酶的序列組成,且與SEQ ID NO:81到SEQ ID No:160具有至少95%的序列同一性;或

      (iv)包含(i)中所示的所述經(jīng)分離的多核苷酸的構(gòu)建體、載體或表達(dá)載體,

      的用途,其用于在煙草烘烤程序期間調(diào)節(jié)煙草中的一種或多種蛋白酶的表達(dá)或活性。

      22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的用途,其中所述烘烤程序可選自由以下組成的群組:空氣烘烤、火烘烤、煙霧烘烤和煙道烘烤。

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