背景

領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物活性化合物、包含其的組合物、以及使用此類生物活性化合物和組合物治療癌癥及其它疾病的方法。

相關(guān)技術(shù)的描述

有前景的新型癌癥治療劑包括多拉司他汀及合成的多拉司他汀類似物如奧瑞斯他汀(美國專利號5,635,483、5,780,588、6,323,315及6,884,869；shnyder等人(2007)int.j.oncol.31：353-360；otani，m.等人jpn.j.cancerres.2000，91，837-844；pct國際公布號wo01/18032a3、wo2005/039492、wo2006/132670及wo2009/095447；fennell，b.j.等人j.antimicrob.chemther.2003，51，833-841)。多拉司他汀和奧瑞斯他汀已顯示干擾微管的動力學，由此破壞細胞分裂(woyke等人(2001)antimicrob.agentschemother.45(12)：3580-3584)并且具有抗癌(美國專利號5,663,149)和抗真菌活性(pettit等人(1998)antimicrob.agentschemother.42：2961-2965)。令人遺憾的是，盡管有早期的熱情，但多拉司他汀10作為ii期臨床試驗中的單一試劑顯示出不良的結(jié)果(shnyder(2007)，同上)。在奧瑞斯他汀家族中的某些化合物作為具有改進的功效和藥理特征的臨床候選物顯示出比多拉司他汀更大的前景(pettit等人(1995)anti-cancerdrugdes.10：529-544；pettit等人(1998)anti-cancerdrugdes.13：243-277；shnyder(2007)，同上)。此結(jié)構(gòu)類型的各種合成類似物已有描述(美國專利號6,569,834；美國專利號6,124,431；及pettit等人(2011)j.nat.prod.74：962-968)。

奧瑞斯他汀具有若干性質(zhì)，使得其對藥物開發(fā)具有吸引力。首先，這些化合物極其有效。其次，它們的制備簡單直接，因為肽骨架的原因。第三，它們一般與肽相比或與具體說來其它癌癥藥物類別相比具有良好的藥代動力學和代謝特征譜。最終，奧瑞斯他汀的肽結(jié)構(gòu)類似于抗體的肽結(jié)構(gòu)，所以當這些化合物被用作抗體-藥物綴合物(adc)的一部分時，它們不太可能會造成高分子量聚集物的沉淀或形成(doronina等人(2003)nat.biotechnology21(7)：778-784)。

有效的細胞毒性和抗有絲分裂組合物是治療許多破壞性病癥(包括癌癥)高度需要的。雖然已生成了廣泛多種奧瑞斯他汀類似物，但許多展現(xiàn)降低的效力，這限制了在醫(yī)學治療方法中的功用。因為以上原因，雖然在本領(lǐng)域中已有進展，但仍需要具有優(yōu)選特征的額外的有效的抗有絲分裂和細胞毒性化合物，使得其適用于治療多種病癥，包括癌癥。本公開滿足了這些需要并且還提供相關(guān)優(yōu)點。

概述

簡單地說，本公開涉及生物活性化合物、包含其的組合物、以及使用此類化合物和組合物的方法。提供了式i化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r¹選自：氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、氨基-雜環(huán)基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：芳基、芳基-c1-c6烷基、c1-c6烷基、c1-c6烷硫基、羧基、羧酰胺、c3-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、胍基、鹵基、c1-c6鹵烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基-c1-c6烷基、羥基和硫基；或

r¹為r^ar^bnch(r^c)-；

r^a選自：h和c1-c6烷基；

r^b為c1-c6烷基；且

r^c為r^d-c(ch3)2-；且

r^d選自：h、芳基、c3-c7環(huán)烷基和雜芳基，其各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c4酰硫基、c2-c4烯基、c1-c4烷基、c1-c4烷基氨基、c1-c4烷氧基、氨基、氨基-c1-c4烷基、鹵基、c1-c4鹵烷基、羥基、羥基-c1-c4烷基和硫基，其中c2-c4烯基、c1-c4烷基氨基及c1-c4烷氧基進一步任選被一個選自以下的取代基取代：c1-c4烷基芳基、羥基和硫基；或

r^b和r^c與其各自所鍵結(jié)的原子一起形成雜環(huán)基二基；

r²選自：c2-c6烷基、芳基、芳基-c1-c6烷基、c4-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、雜芳基、雜芳基-c1-c6烷基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧羰基、c1-c6烷基、c1-c6烷基氨基、氨基、氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、芳基、羧酰胺、羧基、氰基、c1-c6鹵?；1-c6鹵烷基、c1-c6鹵烷氧基、鹵基、羥基、硝基、硫基和硫基-c1-c6烷基；并且

x為-c(o)nhch(ch2r³)-，或x不存在；并且

r³選自：芳基、雜芳基和c3-c7環(huán)烷基，各自任選被一個選自氨基和羥基的取代基取代。

在一個實施方案中，本發(fā)明提供了一種制備本文所述的化合物或其藥學上可接受的鹽的方法。

在另一實施方案中，提供了一種藥物組合物，其包含本文所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、以及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。

在另一實施方案中，提供了一種在療法中使用本文所述的化合物或其藥學上可接受的鹽的方法。具體說來，本公開提供了一種治療哺乳動物的癌癥的方法，所述方法包括向有此需要的哺乳動物施用有效量的本文所述的化合物或其藥學上可接受的鹽，或包含本文所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、以及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑的藥物組合物。

在另一實施方案中，本公開提供了一種抑制哺乳動物中的腫瘤生長的方法，所述方法包括向有此需要的哺乳動物施用有效量的本文所述的化合物或其藥學上可接受的鹽，或包含本文所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、以及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑的藥物組合物。

在另一實施方案中，本公開提供了一種使用本文所述的化合物或其藥學上可接受的鹽體外殺滅癌細胞的方法。在另一實施方案中，本公開提供了一種體內(nèi)殺滅哺乳動物中的癌細胞的方法，所述方法包括向有此需要的哺乳動物施用有效量的本文所述的化合物或其藥學上可接受的鹽，或包含本文所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、以及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑的藥物組合物。

在另一實施方案中，本公開提供了一種增加患有癌癥的哺乳動物的存活時間的方法，所述方法包括向此類哺乳動物施用有效量的本文所述的化合物或其藥學上可接受的鹽，或包含本文所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、以及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑的藥物組合物。

在另一實施方案中，本公開提供了一種本文所述的化合物或其藥學上可接受的鹽在制造用于治療哺乳動物的癌癥的藥劑中的用途。

在另一實施方案中，本公開提供了一種本文所述的化合物或其藥學上可接受的鹽在制造用于抑制哺乳動物中的腫瘤生長的藥劑中的用途。

在另一實施方案中，本公開提供了一種本文所述的化合物或其藥學上可接受的鹽在制造用于延長患有癌癥的哺乳動物的存活的藥劑中的用途。

在另一實施方案中，本公開提供了本文所述的化合物或藥物組合物，其是用于通過療法治療人或動物體的方法中。

在另一實施方案中，本公開提供了本文所述的化合物或藥物組合物，其是用于治療哺乳動物的癌癥。

在另一實施方案中，本公開提供了本文所述的化合物或藥物組合物，其是用于抑制哺乳動物中的腫瘤生長。

在另一實施方案中，本公開提供了本文所述的化合物或藥物組合物，其是用于延長患有癌癥的哺乳動物的存活。

在一個實施方案中，提供了包含如本文所述的生物活性化合物或其藥學上可接受的鹽的組合物，其直接地或間接地連接到靶向部分。

在一個實施方案中，本發(fā)明提供式ii組合物：

(t)-(l)-(d)

ii

其中(t)為靶向部分，(l)為任選的接頭，且(d)為式i、ia、ib、ic、id、ie、if、ig、ih、ii、ij或ik的化合物，或其藥學上可接受的鹽。如果(l)存在，那么(d)共價地連接到(l)上；或如果(l)不存在，那么(d)共價地連接到(t)上。

在一個實施方案中，靶向部分為抗體。因此，在一個實施方案中，提供了抗體-藥物綴合物(adc)，其包含本文所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或前藥。

在一個實施方案中，本發(fā)明提供了一種制備式ii組合物的方法。

在另一實施方案中，提供了一種藥物組合物，其包含式ii組合物或其藥學上可接受的鹽、以及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。

在另一實施方案中，提供了一種在療法中使用式ii組合物的方法。具體說來，本公開提供了一種治療哺乳動物的癌癥的方法，所述方法包括向有此需要的哺乳動物施用有效量的式ii組合物或包含式ii組合物及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑的藥物組合物。

在另一實施方案中，本公開提供了一種抑制哺乳動物中的腫瘤生長的方法，所述方法包括向有此需要的哺乳動物施用有效量的式ii組合物或包含式ii組合物及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑的藥物組合物。

在另一實施方案中，本公開提供了一種使用式ii組合物體外殺滅癌細胞的方法。在另一實施方案中，本公開提供了一種體內(nèi)殺滅哺乳動物中的癌細胞的方法，所述方法包括向有此需要的哺乳動物施用有效量的式ii組合物或包含式ii組合物及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑的藥物組合物。

在另一實施方案中，本公開提供了增加患有癌癥的哺乳動物的存活時間的方法，所述方法包括向有此需要的哺乳動物施用有效量的式ii組合物或包含式ii組合物及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑的藥物組合物。

在另一實施方案中，本公開提供了一種式ii組合物或其藥學上可接受的鹽在制造用于治療哺乳動物的癌癥的藥劑中的用途。

在另一實施方案中，本公開提供了一種式ii組合物在制造用于抑制哺乳動物中的腫瘤生長的藥劑中的用途。

在另一實施方案中，本公開提供了一種式ii組合物在制造用于延長患有癌癥的哺乳動物的存活的藥劑中的用途。

在另一實施方案中，本公開提供了一種式ii組合物或包含式ii組合物的藥物組合物，其是用于通過療法治療人或動物體的方法中。

在另一實施方案中，本公開提供了一種式ii組合物或包含式ii組合物的藥物組合物，其是用于治療哺乳動物的癌癥。

在另一實施方案中，本公開提供了一種式ii組合物或包含式ii組合物的藥物組合物，其是用于抑制哺乳動物中的腫瘤生長。

在另一實施方案中，本公開提供了一種式ii組合物或包含式ii組合物的藥物組合物，其是用于延長患有癌癥的哺乳動物的存活。

本公開的這些及其它方面在參考以下詳細說明后將變得顯而易見。

附圖簡述

圖1示出了化合物5對her2陽性hcc1954細胞系的細胞毒性。

圖2示出了化合物5對her2陰性jurkat細胞系的細胞毒性。

圖3示出了化合物5的曲妥單抗adc對her2陽性nci-n87細胞系的細胞毒性。

圖4示出了化合物5的曲妥單抗adc對her2陽性hcc1954細胞系的細胞毒性。

圖5示出了化合物5的曲妥單抗adc對her2陰性jurkat細胞系的細胞毒性。

圖6示出了用于比較某些adc與mda-mb-231細胞系的結(jié)合的平衡天然結(jié)合測定的結(jié)果。

圖7示出了某些adc在使用nodscidγ小鼠的nci-n87腫瘤模型中的功效。

圖8示出了某些adc在使用c.b-17/icrhsd-prkdc^scid小鼠的karpas299腫瘤模型中的功效。

圖9示出了化合物14的曲妥單抗adc在雌性spraguedawley大鼠中的耐受性研究結(jié)果。

圖10示出了化合物5的曲妥單抗adc在雌性spraguedawley大鼠中的耐受性研究結(jié)果。

圖11示出了在用化合物5處理的jurkat細胞中細胞周期停滯測定的結(jié)果。

詳述

在以下描述中，闡明某些具體細節(jié)以便提供對本公開的各種實施方案的透徹了解。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，本公開可在無這些細節(jié)的情況下實踐。

定義

除非另有說明，否則如本文所用的以下術(shù)語和短語意在具有以下含義。當在本文中使用商品名稱時，申請者意在獨立地包括商品名稱產(chǎn)品制劑、通用藥名以及商品名稱產(chǎn)品的活性藥物成分。

除非上下文另外要求，否則在本說明書和權(quán)利要求書通篇中，詞語“包含(comprise)”及其變型，如“包含(comprises)”和“包含(comprising)”應(yīng)以開放式、包括性的意義解釋為“包括但不限于”。

在本說明書通篇中對“一個實施方案”或“一實施方案”的提及意在表示關(guān)于實施方案所述的具體特點、結(jié)構(gòu)或特征包括在本公開的至少一個實施方案中。因此，短語“在一個實施方案中”或“在一實施方案中”在本說明書通篇的不同地方的出現(xiàn)不一定都指的是同一實施方案。應(yīng)當理解，為清楚起見在單獨的實施方案的上下文中描述的本發(fā)明的某些特點也可在單個實施方案中以組合形式提供。相反，為簡潔起見在單個實施方案的上下文中描述的本發(fā)明的各種特點也可單獨地或以任何合適的子組合形式提供。

化學基團

關(guān)于由變量(例如，包含在本文所述的化學通式(例如，i、ia、ib、ic、id、ie、if、ig、ih、ii、ij、ik、im、in、ii、iii、iv、v、vi、vii及viii)內(nèi)的r^a、r^b、r^c、r^d、r^e、r^f、r^g、r^h、rⁱ、r^j、r^k、r^m、r¹、r²、r^2a、r³、r⁴、r⁵、r⁶、r⁷、r⁸、r⁹、r⁴、r¹⁰、r¹¹、r¹²、r¹³、r1⁴、r¹⁵、r¹⁶、x、y及z)表示的化學基團的實施方案的所有組合具體地由本發(fā)明所涵蓋，如同每個和每一個組合單獨明確地敘述一般，由此此類組合包括產(chǎn)生穩(wěn)定化合物(即，可被分離、表征及測試生物活性的化合物)的化合物。另外，描述此類變量的實施方案中所列的化學基團的所有子組合以及本文所述的用途和醫(yī)學適應(yīng)癥的所有子組合也具體地由本發(fā)明所涵蓋，就如同化學基團的每個和每一個子組合及用途和醫(yī)學適應(yīng)癥的子組合單獨地且明確地在本文中敘述一般。另外，如果在具體的實施方案和/或權(quán)利要求中為任何具體的r^a、r^b、r^c、r^d、r^e、r^f、r^g、r^h、rⁱ、r^j、r^k、r^m、r¹、r²、r^2a、r³、r⁴、r⁵、r⁶、r⁷、r⁸、r⁹、r⁴、r¹⁰、r¹¹、r¹²、r¹³、r1⁴、r¹⁵、r¹⁶、x、y或z列舉了取代基的清單，那么應(yīng)當理解每個單獨的取代基可從具體的實施方案和/或權(quán)利要求中刪除，并且取代基的其余清單將被視為在本公開的范圍內(nèi)。

如本文所用的術(shù)語“酰氧基”包括-oc(o)-烷基，其中烷基如本文中所定義。酰氧基的實例包括但不限于：甲酰氧基、乙酰氧基、丙酰氧基、異丁酰氧基、新戊酰氧基等。

如本文所用的術(shù)語“酰硫基”是指-sc(o)-烷基，其中烷基如本文中所定義。酰硫基的實例包括但不限于：甲酰硫基、乙酰硫基、丙酰硫基、異丁酰硫基、新戊酰硫基等。

如本文所用的術(shù)語“烷氧基”是指-o-烷基，其中烷基如本文中所定義。烷基的實例包括但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、異戊氧基、叔戊氧基、新戊氧基、1-甲基丁氧基、2-甲基丁氧基、正己氧基等。

如本文所用的術(shù)語“烷氧羰基”是指-c(o)o-烷基。烷氧羰基的實例包括但不限于：甲氧羰基、乙氧羰基、正丙氧羰基、異丙氧羰基、正丁氧羰基、仲丁氧羰基、異丁氧羰基、叔丁氧羰基、戊氧羰基、異戊氧羰基、叔戊氧羰基、新戊氧羰基、1-甲基丁氧羰基、2-甲基丁氧羰基、正己氧羰基等。

如本文所用的術(shù)語“烯基二基”是指含有指定數(shù)目的碳原子和一個或多個碳-碳雙鍵的直鏈或支鏈不飽和烴二價基團，例如，c2-c6烯基二基、c2-c4烯基二基或c2烯基二基。烯基二基的實例包括但不限于：乙烯基二基、正丙烯基二基、異丙烯基二基、正丁烯基二基、仲丁烯基二基、異丁烯基二基、叔丁烯基二基、戊烯基二基、異戊烯基二基、叔戊烯基二基、新戊烯基二基、1-甲基丁烯基二基、2-甲基丁烯基二基、正己烯基二基等。

如本文所用的術(shù)語“烷基”是指含有指定數(shù)目的碳原子的直鏈或支鏈飽和烴基團，例如c1-c6烷基、c1-c4烷基或c2烷基。烷基的實例包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、戊基、異戊基、叔戊基、新戊基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、正己基等。

如本文所用的術(shù)語“烷基二基”是指含有指定數(shù)目的碳原子的直鏈或支鏈飽和烴二價基團，例如，c1-c6烷基二基、c1-c4烷基二基或c2烷基二基。烷基二基的實例包括但不限于：甲基二基、乙基二基、正丙基二基、異丙基二基、正丁基二基、仲丁基二基、異丁基二基、叔丁基二基、戊基二基、異戊基二基、叔戊基二基、新戊基二基、1-甲基丁基二基、2-甲基丁基二基、正己基二基等。

如本文所用的術(shù)語“烷基氨基”是指-nh-烷基，其中烷基如本文中所定義。烷基氨基的實例包括但不限于：甲基氨基、乙基氨基、正丙基氨基、異丙基氨基、正丁基氨基、仲丁基氨基、異丁基氨基、叔丁基氨基、戊基氨基、異戊基氨基、叔戊基氨基、新戊基氨基、1-甲基丁基氨基、2-甲基丁基氨基、正己基氨基等。

如本文所用的術(shù)語“烷硫基”是指-s-烷基，其中烷基如本文中所定義。烷硫基的實例包括但不限于：甲硫基、乙硫基、正丙硫基、異丙硫基、正丁硫基、仲丁硫基、異丁硫基、叔丁硫基、戊硫基、異戊硫基、叔戊硫基、新戊硫基、1-甲基丁硫基、2-甲基丁硫基、正己硫基等。

如本文所用的術(shù)語“氨基”是指-nh2。

如本文所用的術(shù)語“氨基-環(huán)烷基”是指被一個氨基取代基取代的環(huán)烷基，那些術(shù)語如本文中所定義。氨基-環(huán)烷基的實例包括但不限于：氨基環(huán)丙基、氨基環(huán)丁基、氨基環(huán)戊基、氨基環(huán)己基等。

如本文所用的術(shù)語“氨基-烷基”是指被一個氨基取代基取代的烷基，那些術(shù)語如本文中所定義。氨基-烷基的實例包括但不限于：氨基甲基、氨基乙基、氨基-正丙基、氨基-異丙基、氨基-正丁基、氨基-仲丁基、氨基-異丁基、氨基-叔丁基、氨基-戊基、氨基-異戊基、氨基-叔戊基、氨基-新戊基、氨基-1-甲基丁基、氨基-2-甲基丁基、氨基-正己基等。

如本文所用的術(shù)語“氨基-芳基”是指被一個氨基取代基取代的芳基，那些術(shù)語如本文中所定義。氨基-芳基的實例包括但不限于：氨基-苯基、氨基-萘基等。

如本文所用的術(shù)語“氨基-雜環(huán)基”是指被一個氨基取代基取代的雜環(huán)基，那些術(shù)語如本文中所定義。氨基-雜環(huán)基的實例包括但不限于：氨基-吡咯烷基、氨基-哌啶基等。

如本文所用的術(shù)語“芳基”是指衍生自6至12元單環(huán)或二環(huán)烴環(huán)系統(tǒng)的基團，其中至少一個環(huán)是芳族的。芳基的實例包括但不限于：苯基、萘基、1，2，3，4-四氫-萘基、5，6，7，8-四氫-萘基、茚滿基等。

如本文所用的術(shù)語“芳基-烷基”是指被一個芳基取代基取代的烷基，那些術(shù)語如本文中所定義。芳基-烷基的實例包括但不限于：芐基、苯乙基、苯丙基、萘基甲基等。

如本文所用的術(shù)語“芳基二基”是指衍生自6至12元單環(huán)或二環(huán)烴環(huán)系統(tǒng)的二價基團，其中至少一個環(huán)是芳族的。芳基二基的實例包括但不限于：苯基二基、萘基二基、1，2，3，4-四氫-萘基二基、5，6，7，8-四氫-萘基二基、茚滿基二基等。

如本文所用的術(shù)語“羧酰胺”是指-c(o)nh2。

如本文所用的術(shù)語“羧基”是指-c(o)oh。

如本文所用的術(shù)語“氰基”是指-cn。

如本文所用的術(shù)語“環(huán)烷基”是指含有指定數(shù)目的碳原子的環(huán)狀飽和烴基團，例如c3-c7烷基或c4-c7烷基二基。環(huán)烷基的實例包括但不限于：環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。

如本文所用的術(shù)語“環(huán)烷基-烷基”是指被一個環(huán)烷基取代基取代的烷基，那些術(shù)語如本文中所定義。環(huán)烷基-烷基的實例包括但不限于：環(huán)丙基甲基、環(huán)丁基甲基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基甲基、環(huán)丙基乙基、環(huán)丁基乙基、環(huán)戊基乙基、環(huán)己基乙基等。

如本文所用的術(shù)語“環(huán)烷基二基”是指含有指定數(shù)目的碳原子的二價環(huán)狀飽和烴基團，例如，c3-c7環(huán)烷基二基或c4-c7烷基二基。環(huán)烷基二基的實例包括但不限于：環(huán)丙基二基、環(huán)丁基二基、環(huán)戊基二基、環(huán)己基二基等。

如本文所用的術(shù)語“胍基”是指-nh-c(＝nh)-nh2。

如本文所用的術(shù)語“鹵基”是指-f、-cl、-br及-i。

如本文所用的術(shù)語“鹵?；笔侵?c(o)-鹵烷基，其中鹵烷基如本文中所定義。鹵酰基的實例包括但不限于：二氟乙?；?、三氟乙酰基、3，3，3-三氟丙?；⑽宸；?。

如本文所用的術(shù)語“鹵烷氧基”是指-o-鹵烷基，其中鹵烷基如本文中所定義。鹵烷氧基的實例包括但不限于：二氟甲氧基、三氟甲氧基、2，2，2-三氟乙氧基、五氟乙氧基等。

如本文所用的術(shù)語“鹵烷基”是指被一個或多個鹵素取代的如本文所定義的烷基。完全取代的鹵烷基可由式cnl2n+1表示，其中l(wèi)是鹵素。當存在一個以上鹵素時，它們可以是相同或不同的并且選自由以下組成的組：f、cl、br及i。鹵烷基的實例包括但不限于：氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯二氟甲基、2，2，2-三氟乙基、五氟乙基等。

如本文所用的術(shù)語“雜芳基”是指衍生自6至12元單環(huán)或二環(huán)環(huán)系統(tǒng)的基團，其中至少一個環(huán)原子是雜原子且至少一個環(huán)是芳族的。雜原子的實例包括但不限于：o、s、n等。雜芳基的實例包括但不限于：吡啶基、苯并呋喃基、吡嗪基、噠嗪基、嘧啶基、三嗪基、喹啉基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、1h-苯并咪唑基、異喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、吡咯基、吲哚基、1h-苯并咪唑-2-基、苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-5-基、3，4-二氫-2h-苯并[1，4]噁嗪-7-基、2，3-二氫-苯并呋喃-7-基、2，3-二氫吲哚-1-基等。

如本文所用的術(shù)語“雜芳基-烷基”是指被一個雜芳基取代基取代的烷基，那些術(shù)語如本文中所定義。雜芳基-烷基的實例包括但不限于：吡啶基甲基、苯并呋喃基甲基、吡嗪基甲基、噠嗪基甲基、嘧啶基甲基、三嗪基甲基、喹啉基甲基、苯并噁唑基甲基、苯并噻唑基甲基、1h-苯并咪唑基甲基、異喹啉基甲基、喹唑啉基甲基、喹喔啉基甲基、吡咯基甲基、吲哚基甲基、1h-苯并咪唑-2-基甲基、苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-5-基甲基、3，4-二氫-2h-苯并[1，4]噁嗪-7-基甲基、2，3-二氫-苯并呋喃-7-基甲基、2，3-二氫-吲哚-1-基甲基等。

如本文所用的術(shù)語“雜芳基二基”是指衍生自6至12元單環(huán)或二環(huán)環(huán)系統(tǒng)的二價基團，其中至少一個環(huán)原子是雜原子且至少一個環(huán)是芳族的。雜原子的實例包括但不限于：o、s、n等。雜芳基二基的實例包括但不限于：噻唑基二基、2，4-噻唑基二基、三唑基二基、1，2，3-三唑基-1，4-二基、吡啶基二基、苯并呋喃基二基、吡嗪基二基、噠嗪基二基、嘧啶基二基、三嗪基二基、喹啉基二基、苯并噁唑基二基、苯并噻唑基二基、1h-苯并咪唑基二基、異喹啉基二基、喹唑啉基二基、喹喔啉基二基、吡咯基二基、吲哚基二基、1h-苯并咪唑-2-基二基、苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-5-基二基、3，4-二氫-2h-苯并[1，4]噁嗪-7-基二基、2，3-二氫-苯并呋喃-7-基二基、2，3-二氫-吲哚-1-基二基等。實例包括但不限于：等。

如本文所用的術(shù)語“雜環(huán)基”是指衍生自3至12元單環(huán)或二環(huán)非芳族環(huán)系統(tǒng)的基團，其中至少一個環(huán)原子是雜原子。雜原子的實例包括但不限于：o、s、n等。雜環(huán)基取代基可經(jīng)由其可利用的環(huán)原子中的任一個連接，例如環(huán)碳或環(huán)氮。在一些實施方案中，雜環(huán)基是含有3-、4-、5-、6-或7-元的環(huán)。雜環(huán)基的實例包括但不限于：氮丙啶-1-基、氮丙啶-2-基、氮雜環(huán)丁-1-基、氮雜環(huán)丁-2-基、氮雜環(huán)丁-3-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、嗎啉-2-基、嗎啉-3-基、嗎啉-4-基、哌嗪-1-基、哌嗪-2-基、哌嗪-3-基、哌嗪-4-基、吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、[1，3]-二氧戊環(huán)-2-基、硫代嗎啉-4-基、[1，4]氧雜氮雜環(huán)庚烷-4-基、1，1-二氧代-1λ⁶-硫代嗎啉-4-基、氮雜環(huán)庚烷-1-基、氮雜環(huán)庚烷-2-基、氮雜環(huán)庚烷-3-基、氮雜環(huán)庚烷-4-基、八氫-喹啉-1-基、八氫-異喹啉-2-基等。

如本文所用的術(shù)語“雜環(huán)基-烷基”是指被一個雜環(huán)基取代基取代的烷基，那些術(shù)語如本文中所定義。雜環(huán)基-烷基的實例包括但不限于：氮雜環(huán)丁-3-基甲基、哌啶-1-基甲基、哌啶-2-基甲基、哌啶-3-基甲基、哌啶-4-基甲基、嗎啉-2-基甲基、嗎啉-3-基甲基、嗎啉-4-基甲基、哌嗪-1-基甲基、哌嗪-2-基甲基、哌嗪-3-基甲基、哌嗪-4-基甲基、吡咯烷-1-基甲基、吡咯烷-2-基甲基、吡咯烷-3-基甲基、[1，3]-二氧戊環(huán)-2-基甲基、硫代嗎啉-4-基甲基、[1，4]氧雜氮雜環(huán)庚烷-4-基甲基、1，1-二氧代-1λ⁶-硫代嗎啉-4-基甲基、氮雜環(huán)庚烷-1-基甲基、氮雜環(huán)庚烷-2-基甲基、氮雜環(huán)庚烷-3-基甲基、氮雜環(huán)庚烷-4-基甲基、八氫-喹啉-1-基甲基、八氫-異喹啉-2-基等。

如本文所用的術(shù)語“雜環(huán)基二基”是指衍生自3至12元單環(huán)或二環(huán)非芳族環(huán)系統(tǒng)的二價基團，其中至少一個環(huán)原子是雜原子。雜原子的實例包括但不限于：o、s、n等。雜環(huán)基二基取代基可經(jīng)由其可利用的環(huán)原子中的任兩個連接，例如環(huán)碳或環(huán)氮。在一些實施方案中，雜環(huán)基二基是含有3-、4-、5-、6-或7-元的環(huán)。雜環(huán)基二基的實例包括但不限于：氮丙啶-1-基二基、氮丙啶-2-基二基、氮雜環(huán)丁-1-基二基、氮雜環(huán)丁-2-基二基、氮雜環(huán)丁-3-基二基、哌啶-1-基二基、哌啶-2-基二基、哌啶-3-基二基、哌啶-4-基二基、嗎啉-2-基二基、嗎啉-3-基二基、嗎啉-4-基二基、哌嗪-1-基二基、哌嗪-2-基二基、哌嗪-3-基二基、哌嗪-4-基二基、吡咯烷-1-基二基、吡咯烷-2-基二基、吡咯烷-3-基二基、[1，3]-二氧戊環(huán)-2-基二基、硫代嗎啉-4-基二基、[1，4]氧雜氮雜環(huán)庚烷-4-基二基、1，1-二氧代-1λ6-硫代嗎啉-4-基二基、氮雜環(huán)庚烷-1-基二基、氮雜環(huán)庚烷-2-基二基、氮雜環(huán)庚烷-3-基二基、氮雜環(huán)庚烷-4-基二基、八氫-喹啉-1-基二基、八氫-異喹啉-2-基二基等。

如本文所用的術(shù)語“羥基”是指-oh。

如本文所用的術(shù)語“羥基-烷基”是指被一個羥基取代基取代的烷基，那些術(shù)語如本文中所定義。羥基-烷基的實例包括但不限于：羥甲基、羥乙基、羥基-正丙基、羥基-異丙基、羥基-正丁基、羥基-仲丁基、羥基-異丁基、羥基-叔丁基、羥基-戊基、羥基-異戊基、羥基-叔戊基、羥基-新戊基、羥基-1-甲基丁基、羥基-2-甲基丁基、羥基-正己基等。

如本文所用的術(shù)語“硝基”是指-no2。

如本文所用的術(shù)語“氧代基”是指＝o。

如本文所用的術(shù)語“硫基”是指-sh。

如本文所用的術(shù)語“硫代烷基”是指-s-烷基，其中烷基如本文中所定義。實例包括但不限于：甲硫基、乙硫基、正丙硫基、異丙硫基、正丁硫基、仲丁硫基、異丁硫基、叔丁硫基、戊硫基、異戊硫基、叔戊硫基、新戊硫基、1-甲基丁硫基、2-甲基丁硫基、正己硫基等。

如本文所用，“取代的”表示化學基團的至少一個氫原子被非氫取代基或基團取代，該非氫取代基或基團可以是單價或二價的。當取代基或基團為二價時，應(yīng)理解此基團進一步被另一取代基或基團取代。當本文中的化學基團被“取代”時，其可具有高達滿價態(tài)的取代；例如，甲基可被1、2或3個取代基取代，亞甲基(甲基二基)可被1或2個取代基取代，苯基可被1、2、3、4或5個取代基取代，萘基可被1、2、3、4、5、6或7個取代基取代等。同樣，“被一個或多個取代基取代”是指基團被一個取代基至至多所述基團物理上允許的總數(shù)量的取代基取代。此外，當基團被一個以上基團取代時，它們可以是相同的或者它們可以是不同的。

本文所述的化合物還可包括互變異構(gòu)形式，如酮-烯醇互變異構(gòu)體等等?；プ儺悩?gòu)形式可處于平衡中或通過適當?shù)娜〈诳臻g上鎖定成一種形式。應(yīng)當理解，各種互變異構(gòu)形式在本發(fā)明化合物的范圍內(nèi)。

應(yīng)當理解和了解的是，式i及與此相關(guān)之式的化合物可具有一個或多個手性中心且因此可以對映異構(gòu)體和/或非對映異構(gòu)體形式存在。應(yīng)了解本發(fā)明延伸至且包括所有此類對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體和其混合物，包括但不限于外消旋體。應(yīng)當理解，除非另外指出或示出，否則式i及本公開通篇使用的式的化合物旨在代表所有單獨的對映異構(gòu)體及其混合物。

如本文所用的術(shù)語“保護基”是指在本領(lǐng)域中已知保護反應(yīng)性基團(包括但不限于羥基和氨基)以免在合成過程中發(fā)生不希望的反應(yīng)的不穩(wěn)定化學部分。用保護基保護的羥基和氨基在本文中分別被稱為“受保護的羥基”和“受保護的氨基”。保護基通常被選擇性地和/或相對地使用以保護反應(yīng)期間在其它反應(yīng)性位點處的位點且隨后可被除去以留下未保護的基團，其呈原樣或可用于其它反應(yīng)。如本領(lǐng)域中已知的保護基一般描述于greene和wuts，protectivegroupsinorganicsynthesis，第3版，johnwiley&sons，newyork(1999)中?；鶊F可選擇性地作為前體并入本公開的化合物中。例如，氨基可作為疊氮基置于本文所述的化合物中，該疊氮基可在合成中的所需時刻在化學上轉(zhuǎn)化為氨基。一般來說，基團作為前體被保護或存在，該前體對修飾母體分子的其它部分的反應(yīng)呈惰性，以便在適當?shù)臅r間轉(zhuǎn)化為其最終基團。其它代表性保護或前體基團論述于agrawal，等人，protocolsforoligonucleotideconjugates，編著，humanapress；newjersey，1994；第26卷第172頁中。羥基保護基的實例包括但不限于：叔丁基、叔丁氧基甲基、甲氧基甲基、四氫吡喃基、1-乙氧基乙基、1-(2-氯乙氧基)乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、對氯苯基、2，4-二硝基苯基、芐基、2，6-二氯芐基、二苯甲基、對硝基芐基、三苯甲基、三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基(tbdps)、三苯甲硅烷基、苯甲酰甲酸酯、乙酸酯、氯乙酸酯、三氯乙酸酯、三氟乙酸酯、新戊酸酯、苯甲酸酯、苯甲酸對苯酯、碳酸9-芴基甲酯、甲磺酸酯及甲苯磺酸酯。“氨基保護基”的實例包括但不限于氨基甲酸酯保護基，如2-三甲基甲硅烷基乙氧羰基(teoc)、1-甲基-1-(4-聯(lián)苯基)乙氧羰基(bpoc)、叔丁氧羰基(boc)、烯丙氧基羰基(alloc)、9-芴基甲氧羰基(fmoc)及芐氧羰基(cbz)；酰胺保護基，如甲?；⒁阴；?、三鹵乙酰基、苯甲?；跋趸交阴；换酋０繁Ｗo基，如2-硝基苯磺?；?；以及亞胺和環(huán)狀亞胺保護基，如苯二酰亞氨基和二硫雜琥珀?；?dithiasuccinoyl)。

如本文所用的“前藥”是指可在生理條件下或通過溶劑分解轉(zhuǎn)化為本文所述的生物活性化合物的化合物。因此，術(shù)語“前藥”是指藥學上可接受的本文所述的化合物的代謝前體。前藥當向有此需要的受試者施用時可以是非活性的，但體內(nèi)轉(zhuǎn)化為本文所述的活性化合物。在一個實施方案中，前藥在體內(nèi)快速地轉(zhuǎn)化以產(chǎn)生本文所述的母體化合物，例如通過在血液中的水解。在一個實施方案中，前藥在血漿或血液中可為穩(wěn)定的。在一個實施方案中，前藥可以是本文所述的化合物的靶向形式。前藥化合物經(jīng)常在哺乳動物生物體中提供溶解度、組織相容性或延遲釋放的優(yōu)點(參見bundgard，h.，designofprodrugs(1985)，第79，2124頁(elsevier，amsterdam))。前藥的論述提供于higuchi，t.等人，a.c.s.symposiumseries，第14卷及bioreversiblecarriersindrugdesign，編著edwardb.roche，americanpharmaceuticalassociationandpergamonpress，1987中。

術(shù)語“前藥”包括任何共價鍵合的載體，當向哺乳動物受試者施用此類前藥時其在體內(nèi)釋放本文所述的活性化合物。綴合物(包括如本文所公開的adc)是本文所述化合物的此類前藥。本文所述的化合物的前藥可通過以修飾物在常規(guī)操作中或在體內(nèi)裂解為本文所述的母體化合物的方式修飾本文所述的化合物中存在的官能團來制備。前藥包括本文所述的化合物，其中羥基、氨基或巰基被鍵結(jié)至任何基團，當向哺乳動物受試者施用本文所述的化合物的前藥時其裂解以分別形成游離的羥基、游離的氨基或游離的巰基。前藥的實例包括但不限于醇官能團的乙酸酯、甲酸酯及苯甲酸酯衍生物，以及本文所述的化合物中的胺官能團的酰胺衍生物等等。

本公開還包括了所有通過用具有不同原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)的原子取代一個或多個原子而被同位素標記的本文所述的化合物。可并入所公開的化合物中的同位素的實例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟、氯及碘的同位素，分別如²h、³h、¹¹c、¹³c、¹⁴c、¹³n、¹⁵n、¹⁵o、¹⁷o、¹⁸o、³¹p、³²p、³⁵s、¹⁸f、³⁶cl、¹²³i及¹²⁵i。這些放射性同位素標記的化合物適用于通過表征例如作用位點或模式或與藥理上重要的作用位點的結(jié)合親和力來幫助測定或測量化合物的有效性。本文所述的某些同位素標記的化合物(例如，加入了放射性同位素的那些)適用于藥物和/或底物組織分布研究中?？紤]到其易于加入和現(xiàn)成的檢測，放射性同位素氚(即³h)和碳-14(即¹⁴c)特別適用于此目的。

用較重的同位素如氘(即²h)的取代可由于更大的代謝穩(wěn)定性，例如延長的體內(nèi)半衰期或減少的劑量要求而提供某些治療優(yōu)點且因此在一些情況下可為優(yōu)選的。

用正電子發(fā)射同位素如¹¹c、¹⁸f、¹⁵o及¹³n的取代可適用于正電子發(fā)射斷層掃描(pet)研究中以用于檢查底物受體占有率。本文所述的同位素標記的化合物一般可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)或通過類似于以下闡述的制備和實施例中所述的過程使用適當?shù)耐凰貥擞浽噭┐嫦惹笆褂玫姆菢擞浽噭﹣碇苽洹?/p>

本公開還旨在包括所公開的化合物的體內(nèi)代謝產(chǎn)物。此類產(chǎn)物可由所施用化合物的例如氧化、還原、水解、酰胺化、酯化等產(chǎn)生，主要歸因于酶促過程。因此，本公開包括通過一種方法產(chǎn)生的化合物，所述方法包括將本公開的化合物施用于哺乳動物持續(xù)足以產(chǎn)生其代謝產(chǎn)物的一段時間。此類產(chǎn)物通常通過以下操作來鑒別：將本文所述的放射性同位素標記的化合物以可檢測的劑量施用于動物如大鼠、小鼠、豚鼠、猴或人類，允許足夠代謝發(fā)生的時間，并且將其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物從尿液、血液或其它生物樣品中分離。

如本文所用的“穩(wěn)定化合物”和“穩(wěn)定結(jié)構(gòu)”是指足夠穩(wěn)定以便經(jīng)受得住從反應(yīng)混合物中分離至有用的純度并配制成有效治療劑的化合物。

其它定義

術(shù)語“抗體”在本文中以廣義使用且具體地包括完整單克隆抗體、多克隆抗體、由至少兩個完整抗體形成的多特異性抗體(例如雙特異性抗體)和抗體片段，只要它們展現(xiàn)所需生物活性。術(shù)語“抗體”是指全長免疫球蛋白分子或全長免疫球蛋白分子的功能活性部分，即含有免疫特異性地結(jié)合目標靶抗原或其部分的抗原結(jié)合位點的分子。本文所公開的免疫球蛋白可以是任一種類型(例如igg、ige、igm、igd及iga)、類別(例如igg1、igg2、igg3、igg4、iga1及iga2)或亞類的免疫球蛋白分子。免疫球蛋白可來源于任何物種。一方面，免疫球蛋白具有人、鼠或兔來源。另一方面，抗體為多克隆、單克隆、多特異性(例如雙特異性)、人類、人源化或嵌合抗體、線性抗體、單鏈抗體、雙抗體、大型抗體(maxibodies)、微型抗體、fv、fab片段、f(ab’)片段、f(ab’)2片段、由fab表達文庫產(chǎn)生的片段、抗獨特型(抗id)抗體、cdr、以及免疫特異性地結(jié)合至靶抗原的以上任一者的表位結(jié)合片段。

如本文所用的術(shù)語“單克隆抗體”是指從基本上同源的抗體群獲得的抗體，即，除可以微量存在的可能天然存在的突變之外群體相同的單獨抗體。單克隆抗體包括“嵌合”抗體，其中重鏈和/或輕鏈的一部分與來源于特定物種或?qū)儆谔囟贵w類別或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，而鏈的其余部分與來源于另一物種或?qū)儆诹硪豢贵w類別或亞類的抗體以及此類抗體片段中的相應(yīng)序列相同或同源(參見，例如美國專利號4,816,567；及morrison等人，1984，proc.natl.acad.sci.usa81：6851-6855)。單克隆抗體還包括人源化抗體，其可含有完全人類恒定區(qū)及來自非人類來源的cdr。

“完整”抗體是包含抗原結(jié)合可變區(qū)以及輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域(cl)和重鏈恒定結(jié)構(gòu)域ch1、ch2及ch3的抗體。恒定結(jié)構(gòu)域可為天然序列恒定結(jié)構(gòu)域(例如，人類天然序列恒定結(jié)構(gòu)域)或其氨基酸序列變體。

完整的抗體可具有一種或多種“效應(yīng)子功能”，這指的是可歸因于抗體的fc區(qū)(天然序列fc區(qū)或氨基酸序列變體fc區(qū))的那些生物活性?？贵w效應(yīng)子功能的實例包括c1q結(jié)合；補體依賴性細胞毒性(cdc)；fc受體結(jié)合；抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(adcc)；吞噬作用；細胞表面受體(例如b細胞受體；bcr)的下調(diào)等。在一些實施方案中，抗體缺乏效應(yīng)子功能。

“抗體片段”包含完整抗體的一部分，優(yōu)選包含抗原結(jié)合區(qū)或其可變區(qū)。抗體片段的實例包括fab、fab’、f(ab’)2及fv片段；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子；大型抗體；微型抗體；及由抗體片段形成的多特異性抗體。

“分離的”抗體是已被鑒別并且從其自然環(huán)境的組分中分離和/或回收的抗體。其自然環(huán)境的污染組分是將干擾抗體的診斷或治療用途的材料，并且可包括酶、激素及其它蛋白質(zhì)或非蛋白質(zhì)溶質(zhì)。在一些實施方案中，抗體將被純化(1)至大于95重量％的抗體，如通過lowry方法所測定，且最優(yōu)選超過99重量％，(2)通過利用轉(zhuǎn)杯式測序儀至足以獲得n端或內(nèi)部氨基酸序列的至少15個殘基的程度，或(3)使用考馬斯藍或優(yōu)選銀染色在還原或非還原條件下通過sds-page至均一性。分離的抗體包括在重組細胞內(nèi)原位處的抗體，因為抗體自然環(huán)境的至少一種組分將不存在。然而，通常，分離的抗體將通過至少一個純化步驟來制備。

“結(jié)合”目標抗原的抗體是能夠用足以使得抗體適用于靶向表達抗原的細胞的親和力結(jié)合那個抗原的抗體。

“天然序列”多肽是具有與來源于自然的多肽相同的氨基酸序列的多肽。此類天然序列多肽可從自然界中分離或可通過重組或合成手段產(chǎn)生。因此，天然序列多肽可具有天然存在的人類多肽、鼠多肽或來自任何其它哺乳動物物種的多肽的氨基酸序列。

術(shù)語“細胞內(nèi)代謝物”是指由在細胞內(nèi)對本文所述的組合物(例如，抗體藥物綴合物(adc))的代謝過程或反應(yīng)產(chǎn)生的化合物。該代謝過程或反應(yīng)可為酶促過程，如主題組合物的肽接頭的蛋白水解裂解，或主題組合物內(nèi)的官能團如腙、酯或酰胺的水解。在綴合物(包括adc)的情形中，細胞內(nèi)代謝物包括但不限于抗體及游離藥物，其已在細胞內(nèi)被分離，即在進入之后，擴散、攝取或運送到細胞中(例如，通過由胞內(nèi)酶進行的adc的酶促裂解)。

在綴合物(包括adc)的情形中，術(shù)語“細胞內(nèi)裂解(intracellularlycleaved)”和“細胞內(nèi)裂解(intracellularcleavage)”是指在細胞內(nèi)部對本文所述的組合物的代謝過程或反應(yīng)，借此藥物部分(d)與靶向部分(t)(例如抗體)之間的共價連接(例如接頭(l))斷裂，產(chǎn)生游離藥物。在一個實施方案中，主題組合物的裂解部分因此是細胞內(nèi)代謝物(例如，t、t-l片段、d-l片段和d)。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明提供了是式ii組合物的裂解產(chǎn)物的組合物，該裂解產(chǎn)物包括包含式i化合物的組合物。

術(shù)語“細胞外裂解”是指在細胞外部對本文所述的組合物的代謝過程或反應(yīng)，借此藥物部分(d)與靶向部分(t)(例如抗體)之間的共價連接(例如接頭(l))斷裂，產(chǎn)生在細胞外部從(t)上解離的游離藥物。在一個實施方案中，主題組合物的裂解部分因此是最初的細胞外代謝物(例如，t、t-l片段、d-l片段和d)，其可通過擴散及細胞滲透性或轉(zhuǎn)運在細胞內(nèi)移動。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明提供了是式ii組合物的裂解產(chǎn)物的組合物，該裂解產(chǎn)物包括包含式i化合物的組合物。

“哺乳動物”包括人和家畜，如實驗室動物和家庭寵物(例如貓、狗、豬、牛、綿羊、山羊、馬、兔)，及非家畜，如野生動物等。

“任選的”或“任選地”意指隨后描述的情形事件有可能發(fā)生也有可能不發(fā)生，而且該描述包括以下所述事件或情形的例子以及不發(fā)生的例子。舉例來說，“任選被取代的芳基”意指芳基取代基可能被取代也可能不被取代，而且該描述包括取代的芳基取代基以及未取代的芳基取代基。

“藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑”包括但不限于任何佐劑、載體、賦形劑、助流劑、甜味劑、稀釋劑、防腐劑、染料/著色劑、增味劑、表面活性劑、潤濕劑、分散劑、懸浮劑、穩(wěn)定劑、等滲劑、溶劑或乳化劑，其已被美國食品與藥物管理局(或另一管轄區(qū)域的其他類似管理機構(gòu))批準為在人或家畜中使用所接受。

“藥學上可接受的鹽”包括酸和堿加成鹽。

“藥學上可接受的酸加成鹽”是指保留游離堿的生物有效性和性質(zhì)的那些鹽，其在生物或其它方面是合乎需要的，并且其是由以下形成：無機酸，如但不限于鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等；以及有機酸，如但不限于乙酸、2，2-二氯乙酸、己二酸、海藻酸、抗壞血酸、天冬氨酸、苯磺酸、安息香酸、4-乙酰胺基苯甲酸、樟腦酸、樟腦-10-磺酸、癸酸、己酸、辛酸、碳酸、肉桂酸、檸檬酸、環(huán)拉酸、十二烷基硫酸、乙烷-1，2-二磺酸、乙磺酸、2-羥基乙磺酸、甲酸、富馬酸、半乳糖二酸、龍膽酸、葡庚糖酸、葡糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、戊二酸、2-氧代基-戊二酸、甘油磷酸、羥基乙酸、馬尿酸、異丁酸、乳酸、乳糖酸、十二烷酸、馬來酸、蘋果酸、丙二酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、萘-1，5-二磺酸、萘-2-磺酸、1-羥基-2-萘甲酸、煙酸、油酸、乳清酸、草酸、棕櫚酸、雙羥萘酸、丙酸、焦谷氨酸、丙酮酸、水楊酸、4-氨基水楊酸、癸二酸、硬脂酸、丁二酸、酒石酸、硫氰酸、對甲苯磺酸、三氟乙酸、十一碳烯酸等。

“藥學上可接受的堿加成鹽”是指保留游離酸的生物有效性和性質(zhì)的那些鹽，其在生物或其它方面是合乎需要的。這些鹽是由無機堿或有機堿加成到游離酸上來制備。衍生自無機堿的鹽包括但不限于鈉、鉀、鋰、銨、鈣、鎂、鐵、鋅、銅、錳、鋁鹽等。優(yōu)選的無機鹽是銨、鈉、鉀、鈣和鎂鹽。衍生自有機堿的鹽包括但不限于以下的鹽：伯、仲及叔胺；取代的胺，包括天然存在的取代胺；環(huán)胺和堿離子交換樹脂，如氨、異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、二乙醇胺、乙醇胺、丹醇、2二甲氨基乙醇、2二乙氨基乙醇、二環(huán)己胺、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、咖啡因、普魯卡因、海巴明、膽堿、甜菜堿、芐乙胺、苯乍生、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可堿、三乙醇胺、氨丁三醇、嘌呤、哌嗪、哌啶、n-乙基哌啶、多胺樹脂等。特別優(yōu)選的有機堿是異丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二環(huán)己胺、膽堿及咖啡因。

結(jié)晶常常產(chǎn)生本文所述的化合物的溶劑化物。如本文所用，術(shù)語“溶劑化物”是指包含本文所述的化合物的一個或多個分子與溶劑的一個或多個分子的聚集物。溶劑可為水，在此情形下，溶劑化物可為水合物?；蛘?，溶劑可為有機溶劑。因此，本公開的化合物可以水合物形式存在，包括一水合物、二水合物、半水合物、倍半水合物、三水合物、四水合物等，以及相應(yīng)的溶劑化物形式。本文所述的化合物可為真正的溶劑化物，而在其它情況下，本文所述的化合物可僅保持外來水或是水加上一些外來溶劑的混合物。

“藥物組合物”是指本文所述的化合物與本領(lǐng)域中普遍接受的介質(zhì)的制劑，其是用于將生物活性化合物遞送給哺乳動物，例如人。此類介質(zhì)包括所有藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。

本文中有待治療的病癥的非限制性實例包括良性和惡性腫瘤；白血病和淋巴樣惡性腫瘤，具體說來乳腺癌、卵巢癌、胃癌、子宮內(nèi)膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎癌、結(jié)腸癌、甲狀腺癌、胰腺癌、前列腺癌或膀胱癌；神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細胞、星形膠質(zhì)細胞、下丘腦及其它腺體、巨噬細胞、上皮細胞、間質(zhì)和囊胚腔病癥、自身免疫疾病、炎性疾病、纖維化及感染性疾病?？紤]到主題組合物的特征且特別是效力，熟練技術(shù)人員將顯而易見，本文所述的化合物可被示為用于治療任何疾病，其中需要發(fā)揮針對靶細胞的細胞毒性或細胞毒性作用。

在一個實施方案中，本文所述的組合物被用于治療自身免疫疾病。對負責產(chǎn)生自身免疫抗體的細胞的抗原有免疫特異性的抗體可從任何機構(gòu)(例如，大學的科學家或公司如genentech)獲得或通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何方法(例如化學合成或重組表達技術(shù))產(chǎn)生。在另一實施方案中，對自身免疫疾病的治療有免疫特異性的有用的配體抗體包括但不限于：抗核抗體；抗雙鏈dna；抗單鏈dna、抗心磷脂抗體igm、igg；抗磷脂抗體igm、igg；抗sm抗體；抗線粒體抗體；甲狀腺抗體；微粒體抗體；甲狀腺球蛋白抗體；抗scl-70；抗jo；抗u1rnp；抗la/ssb；抗ssa；抗ssb；抗壁細胞(peritalcell)抗體；抗組蛋白；抗rnp；c-anca；p-anca；抗著絲點；抗纖維蛋白及抗gbm抗體。在某些優(yōu)選實施方案中，適用于本方法中的抗體可結(jié)合至在活化的淋巴細胞上表達的受體或受體復合物。

受體或受體復合物可包含免疫球蛋白基因超家族成員、tnf受體超家族成員、整聯(lián)蛋白、細胞因子受體、趨化因子受體、主要組織相容性蛋白、凝集素或補體調(diào)控蛋白。合適的免疫球蛋白超家族成員的非限制性實例是cd2、cd3、cd4、cd8、cd19、cd22、cd28、cd79、cd90、cd152/ctla-4、pd-1和icos。

合適的tnf受體超家族成員的非限制性實例是cd27、cd40、cd95/fas、cd134/ox40、cd137/4-1bb、tnf-r1、tnfr-2、rank、taci、bcma、骨保護素、apo2/trail-r1、trail-r2、trail-r3、trail-r4和apo-3。合適的整聯(lián)蛋白的非限制性實例是cd11a、cd11b、cd11c、cd18、cd29、cd41、cd49a、cd49b、cd49c、cd49d、cd49e、cd49f、cd103和cd104。合適的凝集素的非限制性實例是c型、s型和i型凝集素。

在一個實施方案中，配體是結(jié)合至與自身免疫疾病有關(guān)的活化的淋巴細胞的抗體。

特征為免疫細胞的不當激活并且可通過本文所述的方法治療或預防的免疫疾病可例如通過作為病癥基礎(chǔ)的超敏反應(yīng)的類型來分類。這些反應(yīng)通常被分為四種類型：過敏反應(yīng)、細胞毒性(溶細胞)反應(yīng)、免疫復合體反應(yīng)或細胞介導的免疫(cmi)反應(yīng)(也稱為延遲型超敏(dth)反應(yīng))。(參見，例如fundamentalimmunology(williame.paul編著，ravenpress，n.y.，第3版1993))。

此類免疫疾病的具體實例包括以下：類風濕性關(guān)節(jié)炎、自身免疫性脫髓鞘疾病(例如多發(fā)性硬化癥、變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎)、內(nèi)分泌眼病、葡萄膜視網(wǎng)膜炎、全身性紅斑狼瘡、重癥肌無力、格雷夫斯氏病(grave′sdisease)、腎小球性腎炎、自身免疫性血液病、炎性腸病(例如克羅恩氏病(crohn′sdisease))、過敏癥、變態(tài)反應(yīng)、干燥綜合征(sjogren′ssyndrome)、i型糖尿病、原發(fā)性膽汁性肝硬化、韋格納氏肉芽腫病(wegener′sgranulomatosis)、纖維肌痛、多發(fā)性肌炎、皮肌炎、多內(nèi)分泌腺衰竭、施密特氏綜合征(schmidt′ssyndrome)、自身免疫性葡萄膜炎、阿狄森氏病(addison′sdisease)、腎上腺炎、甲狀腺炎、橋本氏甲狀腺炎(hashimoto′sthyroiditis)、自身免疫性甲狀腺病、惡性貧血、胃萎縮、慢性肝炎、狼瘡樣肝炎、動脈粥樣硬化、亞急性皮膚型紅斑狼瘡、甲狀旁腺機能減退、心肌梗塞后綜合征(dressler′ssyndrome)、自身免疫性血小板減少癥、特發(fā)性血小板減少性紫癜、溶血性貧血、尋常天皰瘡、天皰瘡、皰疹樣皮炎、斑形脫發(fā)、類天皰瘡、硬皮病、進行性全身性硬化、crest綜合征(鈣質(zhì)沉著、雷諾氏現(xiàn)象(raynaud′sphenomenon)、食道蠕動障礙、指硬皮病)和毛細血管擴張)、男性和女性自身免疫性不孕癥、強直性脊柱炎、潰瘍性結(jié)腸炎、混合性結(jié)締組織病、結(jié)節(jié)性多動脈炎、全身性壞死性脈管炎、特應(yīng)性皮炎、特應(yīng)性鼻炎、古德帕斯徹氏綜合征(goodpasture′ssyndrome)、查加斯氏病(chagas′disease)、結(jié)節(jié)病、風濕熱、哮喘、反復流產(chǎn)、抗磷脂綜合征、農(nóng)民肺、多形性紅斑、心切開術(shù)后綜合征、庫欣氏綜合征(cushing′ssyndrome)、自身免疫性慢性活動性肝炎、養(yǎng)鳥者肺、中毒性表皮壞死溶解、阿爾波特氏綜合征(alport′ssyndrome)、牙槽炎、過敏性牙槽炎、纖維性肺泡炎、間質(zhì)性肺病、結(jié)節(jié)性紅斑、壞疽性膿皮病、輸血反應(yīng)、高安氏動脈炎(takayasu′sarteritis)、風濕性多肌痛、顳動脈炎、血吸蟲病、巨細胞性動脈炎、蛔蟲病、曲霉病、薩姆普特氏綜合征(sampter′ssyndrome)、、濕疹、淋巴瘤樣肉芽腫病、白塞氏病(behcet′sdisease)、卡普蘭氏綜合征(caplan′ssyndrome)、川崎病(kawasaki′sdisease)、登革熱、腦脊髓炎、心內(nèi)膜炎、心肌內(nèi)膜纖維化、眼內(nèi)炎、持久性隆起性紅斑、牛皮癬、胎兒成紅細胞增多病、嗜酸性筋膜炎、舒爾曼氏綜合征(shulman′ssyndrome)、費爾蒂氏綜合征(felty′ssyndrome)、絲蟲病、睫狀體炎、慢性睫狀體炎、異時性睫狀體炎、富克氏睫狀體炎(fuch′scyclitis)、iga腎病、亨-舍二氏紫癜(henoch-schonleinpurpura)、移植物抗宿主疾病、移植排斥、心肌病、伊頓-蘭伯特肌無力綜合征(eaton-lambertsyndrome)、復發(fā)性多軟骨炎、冷球蛋白血癥、瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血癥(waldenstrom′smacroglobulemia)、伊文氏綜合征(evan′ssyndrome)和自身免疫性性腺生成障礙。因此，本文所述的方法包括治療以下病癥：b淋巴細胞(例如，全身性紅斑狼瘡、古德帕斯徹氏綜合征、類風濕性關(guān)節(jié)炎及i型糖尿病)、th1淋巴細胞(例如，類風濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、牛皮癬、干燥綜合征、橋本氏甲狀腺炎、格雷夫斯病、原發(fā)性膽汁性肝硬化、韋格納氏肉芽腫病、肺結(jié)核或急性移植物抗宿主疾病)或th2淋巴細胞(例如，特應(yīng)性皮炎、全身性紅斑狼瘡、變應(yīng)性哮喘、鼻炎結(jié)膜炎、過敏性鼻炎、歐門氏(omenn′ssyndrome)綜合征、全身性硬化或慢性移植物抗宿主疾病)。一般而言，涉及樹突細胞的病癥包括th1淋巴細胞或th2淋巴細胞的病癥。

在某些實施方案中，免疫病癥是t細胞介導的，其可包括活化的t細胞?？墒┯胊dc或adc衍生物以耗盡此類活化的t細胞。

在一個實施方案中，本文所述的組合物可用于治療纖維化。纖維化可在體內(nèi)的許多組織中出現(xiàn)，通常由于炎癥或損傷，實例包括但不限于：肺臟，肺纖維化、特發(fā)性肺纖維化、囊性纖維化；肝臟，肝硬化；心臟，心肌內(nèi)膜纖維化、陳舊性心肌梗塞、心房纖維化；其它，縱隔纖維化(縱隔的軟組織)、骨髓纖維化(骨髓)、腹膜后纖維化(腹膜后腔的軟組織)、進行性大塊纖維化(肺)；煤炭工人肺塵埃沉著病的并發(fā)癥、腎原性全身性纖維化(皮膚)、克羅恩氏病(腸)、瘢痕瘤(皮膚)、硬皮病/全身性硬化(皮膚、肺)、關(guān)節(jié)纖維化(膝、肩、其它關(guān)節(jié))、佩羅尼氏病(peyronie′sdisease)(陰莖)、杜普伊特蘭氏攣縮癥(dupuytren′scontracture)(手、手指)及某些形式的粘連性關(guān)節(jié)囊炎(肩)。

關(guān)于感染性疾病，本文所述的組合物^可直接作用于某些感染性因子或病原體，或可用于對載有或另外提供感染性因子或病原體的宿主細胞發(fā)揮細胞抑制性或細胞毒性作用。

“有效量”或“治療有效量”是指本文所述的化合物當向哺乳動物(優(yōu)選人類)施用時足以實現(xiàn)如以下所定義治療特定適應(yīng)癥(例如，在哺乳動物(優(yōu)選人類)中的癌癥或腫瘤細胞)的量。構(gòu)成“治療有效量”的本文所述的化合物的量將根據(jù)化合物、病狀及其嚴重性、施用方式和有待治療的哺乳動物的年齡而變化，但可由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)其所具備的知識并慮及本公開來常規(guī)地確定。

如本文所用的“治療(treating)”或“治療(treatment)”包括治療患有目標疾病或病狀的哺乳動物(優(yōu)選人類)中的目標疾病或病狀，并且包括：

(i)預防所述疾病或病狀在哺乳動物中出現(xiàn)，特別是當此類哺乳動物易患該病但尚未被診斷為患有該病時；

(ii)抑制所述疾病或病狀，即，阻止其發(fā)展；

(iii)減輕所述疾病或病狀，即，造成疾病或病狀的消退；或

(iv)減輕由所述疾病或病狀產(chǎn)生的癥狀，即，減輕疼痛但不解決原發(fā)疾病或病狀。

關(guān)于癌癥治療的化合物的治療有效量可減少癌細胞數(shù)量；減小腫瘤尺寸；抑制(即，在某種程度上減慢且優(yōu)選終止)癌細胞浸潤到外周器官中；抑制(即，在某種程度上減慢且優(yōu)選終止)腫瘤轉(zhuǎn)移；在某種程度上抑制腫瘤生長；增加存活時間；和/或在某種程度上減輕一種或多種與所述癌癥有關(guān)的癥狀。如果藥物可預防生長和/或殺滅現(xiàn)存的癌細胞，那么其可為細胞抑制性和/或細胞毒性的。本發(fā)明化合物優(yōu)選為細胞毒性的。對于癌癥療法，功效可例如通過評價至疾病進展的時間(ttp)和/或測定反應(yīng)率(rr)來測量。

關(guān)于有待實現(xiàn)的具體結(jié)果的“有效量”是足以達到所需結(jié)果的量。例如，當關(guān)于殺滅癌細胞時提及的藥物的“有效量”是指足以產(chǎn)生殺滅效果的藥物的量。

預期使用本公開的化合物治療的實體腫瘤包括但不限于：肉瘤、纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管內(nèi)皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤因氏瘤(ewing′stumor)、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結(jié)腸癌、結(jié)腸直腸癌、腎癌、胰腺癌、骨癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、食道癌、胃癌(例如胃腸癌)、口腔癌、鼻癌、喉癌、鱗狀細胞癌(例如，肺的)、基底細胞癌、腺癌(例如，肺的)、汗腺癌瘤、皮脂腺癌瘤、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊腺癌、髓樣癌、支氣管癌、腎細胞癌、肝癌、膽管癌、絨毛膜癌、精原細胞瘤、胚胎癌、韋爾姆斯氏瘤(wilms′tumor)、子宮頸癌、子宮癌、睪丸癌、小細胞肺癌、膀胱癌、肺癌、非小細胞肺癌、上皮癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、成膠質(zhì)細胞瘤、多形性星形細胞瘤、成神經(jīng)管細胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、松果體瘤、成血管細胞瘤、聽神經(jīng)瘤、寡樹突神經(jīng)膠細胞瘤、腦膜瘤、皮膚癌、黑色素瘤、神經(jīng)母細胞瘤和成視網(wǎng)膜細胞瘤。預期使用本公開的化合物治療的血液相關(guān)癌癥包括但不限于：急性淋巴母細胞性白血病“all”、急性成淋巴細胞性b細胞白血病、急性成淋巴細胞性t細胞白血病、急性髓母細胞性白血病“aml”、急性早幼粒細胞白血病“apl”、急性單核細胞性白血病、急性紅白血病性白血病、急性巨核細胞性白血病、急性髓單核細胞性白血病、急性非淋巴細胞性白血病、急性未分化性白血病、慢性粒細胞性白血病“cml”、慢性淋巴細胞性白血病“cll”、毛細胞白血病和多發(fā)性骨髓瘤。預期使用本公開的化合物治療的急性和慢性白血病包括但不限于：成淋巴細胞性白血病、髓細胞性白血病、淋巴細胞性白血病和骨髓性白血病。預期使用本公開的化合物治療的淋巴瘤包括但不限于：何杰金氏病(hodgkin′sdisease)、非何杰金氏淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血癥、重鏈病和真性紅細胞增多。預期使用本公開的化合物治療的其它癌癥包括但不限于：腹膜癌、肝細胞癌、肝癌、唾液腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、陰莖癌、肛門癌、頭頸癌、腎細胞癌、急性間變性大細胞癌和皮膚間變性大細胞癌。

包括但不限于腫瘤、轉(zhuǎn)移或特征為不受控制或不希望的細胞生長的其它疾病或病癥的癌癥可通過施用本公開的化合物來治療或預防。

在其它實施方案中，提供用于治療或預防癌癥的方法，所述方法包括向有此需要的患者施用有效量的本文所公開的化合物與另外的治療方法的組合。在一個實施方案中，另外的治療方法包括化療劑的治療。在一個實施方案中，化療劑是借此癌癥的治療未被認為是難治性的。在另一實施方案中，化療劑是借此癌癥的治療被認為是難治性的。本文所述的化合物可在化療劑之前、之后或與其同時施用。

在一個實施方案中，另外的治療方法是放射療法。本文所述的化合物可在放射之前、之后或與其同時施用。

本文所述的化合物也可向經(jīng)歷過或?qū)⒔?jīng)歷癌癥治療手術(shù)的患者施用。

在具體的實施方案中，本文所述的化合物與化療劑或放射療法同時施用。在另一具體的實施方案中，化療劑或放射療法在本文所述的化合物施用之前或之后施用，一方面，在本文所述的化合物施用之前或之后至少一小時、五小時、12小時、一天、一周、一個月，在其它方面中若干個月(例如，長達三個月)。

化療劑可在一系列的時間段上施用?？墒┯帽疚乃信e的或另外本領(lǐng)域中已知的化療劑的任一種或組合。關(guān)于放射，任何放射療法方案可取決于有待治療的癌癥類型而使用。舉例來說，但并非出于限制，可施用x射線放射；具體說來，高能巨電壓(大于1mev能量的放射)可用于深部的腫瘤，且電子束及正電壓x射線放射可用于皮膚癌。也可施用γ-射線放射性同位素，如鐳、鈷及其它元素的放射性同位素。

另外，提供用本文所述的化合物的癌癥治療方法作為化療或放射療法的替代，其中化療或放射療法已被證明或可被證明為毒性過高，例如，對所治療的受試者產(chǎn)生不可接受的或無法忍受的副作用。另外，提供用本文所述的化合物的癌癥治療方法作為手術(shù)的替代，其中手術(shù)已被證明或可被證明為所治療的受試者不可接受或無法忍受的。

本文所述的化合物還可以體外或離體方式使用，如用于治療某些癌癥，包括但不限于白血病和淋巴瘤，此類治療包括自體干細胞移植。此可包括多步過程，其中收集動物的自體造血干細胞并清除所有的癌細胞，然后經(jīng)由施用高劑量的本文所述的化合物伴有或不伴有高劑量放射療法根除動物的剩余骨骼-骨髓細胞群，并將干細胞移植物輸注回到動物中。隨后當骨髓功能恢復且動物恢復時提供支持性護理。

用于治療癌癥的方法還包括向有此需要的患者施用有效量的本文所述的化合物和作為抗癌劑的另一治療劑。合適的抗癌劑包括但不限于氨甲蝶呤、紫杉酚、l-天冬酰胺酶、巰基嘌呤、硫鳥嘌呤、羥基脲、阿糖胞苷、環(huán)磷酸酰胺、異環(huán)磷酰胺、亞硝基脲、順鉑、卡鉑、絲裂霉素、氮烯唑胺、甲基芐肼、拓撲替康、氮芥、環(huán)磷酰胺、依托泊苷、5-氟尿嘧啶、bcnu、依立替康、喜樹堿、博來霉素、阿霉素、伊達比星、柔紅霉素、放線菌素d、更生霉素、普卡霉素、米托蒽醌、天冬酰胺酶、長春花堿、長春新堿、去乙酰長春酰胺、長春瑞濱、紫杉醇和多西他賽。

化療劑的其它實例包括烷化劑，如噻替派和環(huán)磷酰胺；烷基磺酸鹽，如白消安、蘇消安、英丙舒凡及保釋芬；氮丙啶，如苯并多巴、卡波醌、美妥替哌(meturedopa)及脲多巴；乙烯亞胺和甲基蜜胺類(methylamelamine)，包括六甲蜜胺、曲他胺、三乙烯磷酰胺、三乙烯硫代磷酰胺及三羥甲基蜜胺；tlk286(telcyta^tm)；多聚乙酰(特別是布拉他辛和布拉他辛酮)；δ-9-四氫大麻酚(屈大麻酚，)；β-拉帕醌；拉帕醇；秋水仙堿；樺木酸；喜樹堿(包括合成類似物拓撲替康cpt-11(依立替康，)、乙酰喜樹堿、東莨菪素(scopolectin)及9-氨基喜樹堿)；苔蘚抑素；海綿他汀(callystatin)；cc-1065(包括其阿多來新、卡折來新及比折來新合成類似物)；鬼臼霉素；足葉草酸；替尼泊苷；隱藻素類(特別是隱藻素1和隱藻素8)；多拉司他汀；倍癌霉素(包括合成類似物、kw-2189及cb1-tm1)；伊璐霉素；水鬼蕉堿；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；軟海綿素；氮芥，如氮芥苯丁酸、萘氮芥、環(huán)磷酰胺、雌氮芥、異環(huán)磷酰胺、氮芥、鹽酸甲氧氮芥、美法侖、新恩比興、膽固醇苯乙酸氮芥、松龍苯芥、氯乙環(huán)磷酰胺和尿嘧啶氮芥；三嗪類，如達卡巴嗪；亞硝基脲類，如卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀及雷莫司汀(ranimnustine)；表鬼臼毒素(epipodophyllin)，如依托泊苷、替尼泊苷、拓撲替康、9-氨基喜樹堿、喜樹堿(camptothecinorcrisnatol)；雙膦酸鹽，如氯膦酸鹽；抗生素，如烯二炔抗生素(例如加利車霉素，特別是加利車霉素γ1i和加利車霉素ωl1(參見，例如agnew，chem.intl.ed.engl.，33：183-186(1994))和蒽環(huán)霉素，如蒽那霉素、ad32、阿柔比星、柔紅霉素、右雷佐生、dx-52-1、表柔比星、gpx-100、伊達比星、krn5500、美諾立爾、達內(nèi)霉素包括達內(nèi)霉素a、埃斯培拉霉素、新制癌菌素發(fā)色團及相關(guān)色蛋白烯二炔抗生素發(fā)色團、阿克拉霉素(aclacinomysins)、放線菌素、安曲霉素(authramycin)、重氮絲氨酸、博來霉素(例如a2和b2)、放線菌素c、卡柔比星(carabicin)、洋紅霉素(caminomycin)、嗜癌菌素、色霉素(chromomycinis)、更生霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧代基-l-正亮氨酸、阿霉素(包括嗎啉代-阿霉素、氰基嗎啉代-阿霉素、2-吡咯啉并-阿霉素、脂質(zhì)體阿霉素和去氧阿霉素)、依索比星、麻西羅霉素、絲裂霉素如絲裂霉素c、霉酚酸、諾加霉素、橄欖霉素、培洛霉素、泊非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素、三鐵阿霉素、羅多比星、鏈黑菌素、鏈脲霉素、殺結(jié)核菌素、烏苯美司、凈司他丁和佐柔比星；光能療法，如苯并卟啉衍生物單酸(bpd-ma)、酞菁、光敏劑pc4和去甲氧基-竹紅菌素a(2ba-2-dmha)；葉酸類似物，如二甲葉酸、蝶羅呤和三甲曲沙；嘌呤類似物，如氟達拉濱、6-巰基嘌呤、硫咪嘌呤和硫鳥嘌呤；嘧啶類似物，如環(huán)胞苷、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷(cytarabine)、阿糖胞苷(cytosinearabinoside)、二脫氧尿苷、去氧氟尿苷、依諾他濱和氟尿苷；雄激素，如二甲睪酮、丙酸屈他雄酮、環(huán)硫雄醇、美雄烷和睪內(nèi)酯；抗腎上腺素，如氨魯米特、米托坦和曲洛司坦；葉酸補充劑，如亞葉酸(甲酰四氫葉酸)；醋葡醛內(nèi)酯；抗葉酸抗腫瘤劑，如ly231514培美曲塞、二氫葉酸還原酶抑制劑如氨甲蝶呤和三甲曲沙；抗代謝物如5-氟尿嘧啶(5-fu)及其前藥如uft、s-1及卡培他濱、氟尿苷、去氧氟尿苷及雷替曲塞；及胸苷酸合酶抑制劑和甘氨酰胺核苷酸甲?；D(zhuǎn)移酶抑制劑如雷替曲塞(tdx)；二氫嘧啶脫氫酶的抑制劑，如恩尿嘧啶；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酮戊酸；安吖啶；阿莫司汀；比生群；依達曲沙；地磷酰胺(defofamine)；秋水仙胺；地吖醌；艾氟米辛(elformithine)；醋酸羥吡咔唑；埃博霉素；乙環(huán)氧啶；硝酸鎵；羥基脲；蘑菇多糖；氯尼達明(lonidainine)；美登木素生物堿，如美登素和美登木素；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌達醇(mopidanmol)；二胺硝吖啶(nitraerine)；噴司他??；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；2-乙酰肼；甲基芐肼；多糖復合物(jhsnaturalproducts，eugene，or)；丙亞胺；利索新；西佐喃；鍺螺胺；細交鏈孢菌酮酸；三亞胺醌；2，2’，2”-三氯三乙胺；單端孢菌素類(特別是t-2毒素、疣孢菌素(verracurin)a、桿孢菌素a及蛇形菌素)；烏拉坦；長春地辛氮烯唑胺；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴衛(wèi)矛醇；雙溴丙基哌嗪；加西托星(gacytosine)；阿拉伯糖苷(“ara-c”)；環(huán)磷酸酰胺；噻替派；紫杉醇和紫杉烷、例如紫杉醇(bristol-myerssquibboncology，princeton，n.j.)、abraxane^tm不合聚氧乙烯蓖麻油的、紫杉醇的白蛋白工程改造的納米顆粒制劑(americanpharmaceuticalpartners，schaumberg，ill.)和多西他賽(rhone-poulencrorer，antony，france)；苯丁酸氮芥；吉西他濱6-硫代鳥嘌呤；巰基嘌呤；鉑；鉑類似物或基于鉑的類似物，如順鉑、奧沙利鉑及卡鉑；長春花堿依托泊苷(vp-16)；異環(huán)磷酰胺；米托蒽醌；長春新堿長春花生物堿；長春瑞濱萬珂；來那度胺；沙利度胺；imid3；洛伐他?。痪S拉帕米；毒胡蘿卜素；1-甲基-4-苯基吡啶；細胞周期抑制劑，如星狀孢菌素；諾消靈(novantrone)；依達曲沙；道諾霉素；米托蒽醌；氨基蝶呤；卡培他濱；伊班膦酸鹽；拓撲異構(gòu)酶抑制劑rfs2000；二氟甲基鳥氨酸(dmfo)；維生素d3類似物，如eb1089、cb1093及kh1060；類視黃醇，如視黃酸；以上任一種的藥學上可接受的鹽、酸或衍生物；以及以上兩種或更多種的組合，如chop，即環(huán)磷酸酰胺、阿霉素、長春新堿及氫化潑尼松的組合療法的縮寫；及folfox，即奧沙利鉑(eloxatintm)與5-fu和甲酰四氫葉酸組合的治療方案的縮寫。

用于調(diào)節(jié)或抑制腫瘤上的激素作用的抗激素劑如抗雌激素和選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(serm)包括例如他莫昔芬(包括他莫昔芬)、雷洛昔芬、甲地孕酮、屈洛昔芬、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛昔芬、ly117018、奧那司酮和托瑞米芬；抑制芳香酶的芳香酶抑制劑，其調(diào)節(jié)腎上腺中的雌激素產(chǎn)生，例如像4(5)-咪唑、氨魯米特、乙酸甲地孕酮、依西美坦、福美司坦(formestanie)、法倔唑、伏氯唑、來曲唑和阿那曲唑；及抗雄激素，如氟他胺、比卡魯胺、尼魯米特、比卡魯胺、亮丙瑞林及戈舍瑞林；以及曲沙他濱(1，3-二氧戊環(huán)核苷胞嘧啶類似物)；反義寡核苷酸，特別是抑制異常細胞增殖中所涉及的信號途徑中的基因表達的那些反義寡核苷酸，例如像pkc-α、raf、h-ras和表皮生長因子受體(egf-r)；疫苗，如基因療法疫苗，例如像疫苗、疫苗和疫苗；ril-2；拓撲異構(gòu)酶1抑制劑；rmrh；以及以上任一種的藥學上可接受的鹽、酸或衍生物。

新型化合物

提供了式i化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r¹選自：氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、氨基-雜環(huán)基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：芳基、芳基-c1-c6烷基、c1-c6烷基、c1-c6烷硫基、羧基、羧酰胺、c3-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、胍基、鹵基、c1-c6鹵酰基、c1-c6鹵烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基-c1-c6烷基、羥基和硫基；或

r¹為r^ar^bnch(r^c)-；

r^a選自：h和c1-c6烷基；

r^b為c1-c6烷基；且

r^c為r^d-c(ch3)2-；且

r^d選自：h、芳基、c3-c7環(huán)烷基和雜芳基，其各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c4酰硫基、c2-c4烯基、c1-c4烷基、c1-c4烷基氨基、c1-c4烷氧基、氨基、氨基-c1-c4烷基、鹵基、c1-c4鹵烷基、羥基、羥基-c1-c4烷基和硫基，其中c2-c4烯基、c1-c4烷基氨基及c1-c4烷氧基進一步任選被一個選自以下的取代基取代：c1-c4烷基芳基、羥基和硫基；或

r^b和r^c與其各自所鍵結(jié)的原子一起形成雜環(huán)基二基；

r²選自：c2-c6烷基、芳基、芳基-c1-c6烷基、c4-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、雜芳基、雜芳基-c1-c6烷基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧羰基、c1-c6烷基、c1-c6烷基氨基、氨基、氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、芳基、羧酰胺、羧基、氰基、c1-c6鹵酰基、c1-c6鹵烷基、c1-c6鹵烷氧基、鹵基、羥基、硝基、硫基和硫基-c1-c6烷基；并且

x為-c(o)nhch(ch2r³)-，或x不存在；并且

r³選自：芳基、雜芳基和c3-c7環(huán)烷基，各自任選被一個選自氨基和羥基的取代基取代。

在一些實施方案中，當r¹為2-甲基-1-(甲基氨基)丙基，且x為-c(o)nhch(ch2ph)-時，r²不為乙基、異丙基、正丁基及苯基。

還提供了式i化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r¹選自：氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、氨基-雜環(huán)基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：芳基、芳基-c1-c6烷基、c1-c6烷基、c1-c6烷硫基、羧基、羧酰胺、c3-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、胍基、鹵基、c1-c6鹵?；1-c6鹵烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基-c1-c6烷基、羥基和硫基；或

r¹為r^ar^bnch(r^c)-；

r^a選自：h和c1-c6烷基；

r^b為c1-c6烷基；且

r^c為r^d-c(ch3)2-；且

r^d選自：h、芳基、c3-c7環(huán)烷基和雜芳基，其各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c4酰硫基、c2-c4烯基、c1-c4烷基、c1-c4烷基氨基、c1-c4烷氧基、氨基、氨基-c1-c4烷基、鹵基、c1-c4鹵烷基、羥基、羥基-c1-c4烷基和硫基，其中c2-c4烯基、c1-c4烷基氨基及c1-c4烷氧基進一步任選被一個選自以下的取代基取代：c1-c4烷基芳基、羥基和硫基；或

r^b和r^c與其各自所鍵結(jié)的原子一起形成雜環(huán)基二基；

r²選自：c1-c6烷基、芳基、芳基-c1-c6烷基、c3-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、雜芳基、雜芳基-c1-c6烷基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧羰基、c1-c6烷基、c1-c6烷基氨基、氨基、氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、芳基、羧酰胺、羧基、氰基、c1-c6鹵?；?、c1-c6鹵烷基、c1-c6鹵烷氧基、鹵基、羥基、硝基、硫基和硫基-c1-c6烷基；并且

x為-c(o)nhch(ch2r³)-，或x不存在；并且

r³選自：芳基、雜芳基和c3-c7環(huán)烷基，各自任選被一個選自氨基和羥基的取代基取代。

在一些實施方案中，當r¹為2-甲基-1-(甲基氨基)丙基，且x為-c(o)nhch(ch2ph)-時，r²不為甲基、乙基、異丙基、正丁基、環(huán)丙基及苯基。

還提供了式i化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r¹選自：氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、氨基-雜環(huán)基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：芳基、芳基-c1-c6烷基、c1-c6烷基、c1-c6烷硫基、羧基、羧酰胺、c3-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、胍基、鹵基、c1-c6鹵?；?、c1-c6鹵烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基-c1-c6烷基、羥基和硫基；或

r¹為r^ar^bnch(r^c)-；

r^a選自：h和c1-c6烷基；

r^b為c1-c6烷基；且

r^c為r^d-c(ch3)2-；且

r^d選自：h、芳基、c3-c7環(huán)烷基和雜芳基，其各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c4酰硫基、c2-c4烯基、c1-c4烷基、c1-c4烷基氨基、c1-c4烷氧基、氨基、氨基-c1-c4烷基、鹵基、c1-c4鹵烷基、羥基、羥基-c1-c4烷基和硫基，其中c2-c4烯基、c1-c4烷基氨基及c1-c4烷氧基進一步任選被一個選自以下的取代基取代：c1-c4烷基芳基、羥基和硫基；或

r^b和r^c與其各自所鍵結(jié)的原子一起形成雜環(huán)基二基；

r²選自：c2-c6烷基、芳基、芳基-c1-c6烷基、c4-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、雜芳基、雜芳基-c1-c6烷基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧羰基、c1-c6烷基、c1-c6烷基氨基、氨基、氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、芳基、羧酰胺、羧基、氰基、c1-c6鹵?；1-c6鹵烷基、c1-c6鹵烷氧基、鹵基、羥基、硝基、硫基和硫基-c1-c6烷基；并且

x不存在。

變量r¹

在一些實施方案中，r¹選自：氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、氨基-雜環(huán)基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：芳基、芳基-c1-c6烷基、c1-c6烷基、c1-c6烷硫基、羧基、羧酰胺、c3-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、胍基、鹵基、c1-c6鹵烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基-c1-c6烷基、羥基和硫基。

在一些實施方案中，r¹選自：氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、氨基-雜環(huán)基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自c1-c6烷基和鹵基的取代基取代。

在一些實施方案中，r¹選自：1-(二甲基氨基)-2-甲基丙基、2-甲基-1-(甲基氨基)丙基、1-氨基環(huán)戊基、1-氨基環(huán)丙基、4-氨基苯基、2-氨基丙-2-基、1-氨基環(huán)己基、3-氨基氧雜環(huán)丁烷-3-基、2-(甲基氨基)丙-2-基、1-氨基-2-甲基丙-2-基、2-甲基吡咯烷-2-基、2-氨基-3-甲基丁-2-基、2-氨基丁-2-基、2-甲基-1-(甲基氨基)丙-2-基、1-甲基哌啶-2-基、3-氟吡咯烷-3-基、1，2-二甲基吡咯烷-2-基和2-(二甲基氨基)丙-2-基)。

在一些實施方案中，r¹選自：1-(二甲基氨基)-2-甲基丙基、2-甲基-1-(甲基氨基)丙基、1-氨基環(huán)戊基、1-氨基環(huán)丙基、4-氨基苯基、2-氨基丙-2-基、1-氨基環(huán)己基、3-氨基氧雜環(huán)丁烷-3-基、2-(甲基氨基)丙-2-基、1-氨基-2-甲基丙-2-基、2-甲基吡咯烷-2-基、2-氨基-3-甲基丁-2-基、2-氨基丁-2-基、2-甲基-1-(甲基氨基)丙-2-基、1-甲基哌啶-2-基、3-氟吡咯烷-3-基、1，2-二甲基吡咯烷-2-基、2-(二甲基氨基)丙-2-基)、2-甲基-1-(甲基氨基)-2-苯基丙基、1-異丙基哌啶-2-基、2-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚烷-3-基和2-甲基-2-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚烷-3-基。

在一些實施方案中，r¹為1-(二甲基氨基)-2-甲基丙基。

在一些實施方案中，r¹為2-甲基-1-(甲基氨基)丙基。

在一些實施方案中，r¹為1-氨基環(huán)戊基。

在一些實施方案中，r¹為1-氨基環(huán)丙基。

在一些實施方案中，r¹為4-氨基苯基。

在一些實施方案中，r¹為2-氨基丙烷-2-基。

在一些實施方案中，r¹為1-氨基環(huán)己基。

在一些實施方案中，r¹為3-氨基氧雜環(huán)丁烷-3-基。

在一些實施方案中，r¹為2-(甲基氨基)丙-2-基。

在一些實施方案中，r¹為1-氨基-2-甲基丙烷-2-基。

在一些實施方案中，r¹為2-甲基吡咯烷-2-基。

在一些實施方案中，r¹為2-氨基-3-甲基丁烷-2-基。

在一些實施方案中，r¹為2-氨基丁烷-2-基。

在一些實施方案中，r¹為2-甲基-1-(甲基氨基)丙-2-基。

在一些實施方案中，r¹為1-甲基哌啶-2-基。

在一些實施方案中，r¹為3-氟吡咯烷-3-基。

在一些實施方案中，r¹為2-甲基-1-(甲基氨基)丙基。

在一些實施方案中，r¹為(r)-1-(二甲基氨基)-2-甲基丙基。

在一些實施方案中，r¹為(r)-2-甲基-1-(甲基氨基)丙基。

在一些實施方案中，r¹為r^ar^bnch(r^c)-。

在一些實施方案中，r¹為2-甲基-1-(甲基氨基)-2-苯基丙基。

在一些實施方案中，r¹為1-異丙基哌啶-2-基。

在一些實施方案中，r¹為2-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚烷-3-基。

在一些實施方案中，r¹為2-甲基-2-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚烷-3-基。

變量r^a

在一些實施方案中，r^a選自：h和c1-c6烷基；

在一些實施方案中，r^b選自：h、甲基及異丙基。

在一些實施方案中，r^c為h。

在一些實施方案中，r^d為甲基。

在一些實施方案中，r^e為異丙基。

變量r^b

在一些實施方案中，r^b為c1-c6烷基。

在一些實施方案中，r^b為甲基。

變量r^c

在一些實施方案中，r^c為r^d-c(ch3)2-。

變量r^d

在一些實施方案中，r^d選自：h、芳基、c3-c7環(huán)烷基和雜芳基，其各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c4酰硫基、c2-c4烯基、c1-c4烷基、c1-c4烷基氨基、c1-c4烷氧基、氨基、氨基-c1-c4烷基、鹵基、c1-c4鹵烷基、羥基、羥基-c1-c4烷基和硫基，其中c2-c4烯基、c1-c4烷基氨基及c1-c4烷氧基進一步任選被一個選自c1-c4烷基芳基、羥基及硫基的取代基取代。

在一些實施方案中，r^d選自：h、芳基、c3-c7環(huán)烷基和雜芳基，其各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c4酰硫基、c2-c4烯基、c1-c4烷基、c1-c4烷基氨基、c1-c4烷氧基、氨基、氨基-c1-c4烷基、鹵基、c1-c4鹵烷基、羥基、羥基-c1-c4烷基和硫基，其中c2-c4烯基、c1-c4烷基氨基及c1-c4烷氧基進一步任選被一個選自對甲苯基、羥基及硫基的取代基取代。

在一些實施方案中，r^d選自：h、芳基、c3-c7環(huán)烷基和雜芳基，其各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：(2-羥乙基)氨基、(2-巰基乙基)氨基、2-(乙?；蚧?乙氧基、2-氨基乙氧基、2-羥基乙氧基、2-巰基乙氧基、3-甲氧基、4-甲基苯乙烯基、氨基、氨基甲基、氯、氟、羥基、羥甲基、甲基、硫基、三氟甲基。

在一些實施方案中，r^d選自：h、環(huán)己基、1h-吲哚-3-基、苯基和噻吩-2-基，其各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：(2-羥乙基)氨基、(2-巰基乙基)氨基、2-(乙酰基硫基)乙氧基、2-氨基乙氧基、2-羥基乙氧基、2-巰基乙氧基、3-甲氧基、4-甲基苯乙烯基、氨基、氨基甲基、氯、氟、羥基、羥甲基、甲基、硫基和三氟甲基。

在一些實施方案中，r^d選自：h、1h-吲哚-3-基、1-甲基-1h-吲哚-3-基、2-甲氧基苯基、3-((2-羥乙基)氨基)苯基、3-((2-巰基乙基)氨基)苯基、3-(2-(乙?；蚧?乙氧基)苯基、3-(2-羥基乙氧基)苯基、3-(2-巰基乙氧基)苯基、3-(4-甲基苯乙烯基)苯基、3-(氨基甲基)苯基、3-(羥甲基)苯基、3-羥基苯基、3，5-二氟苯基、3，5-二甲基苯基、3-氨基苯基、3-氯苯基、3-巰基苯基、3-甲氧基苯基、3-三氟甲基苯基、4-((2-羥乙基)氨基)苯基、4-((2-巰基乙基)氨基)苯基、4-(2-(乙?；蚧?乙氧基)苯基、4-(2-氨基乙氧基)苯基、4-(2-羥基乙氧基)苯基、4-(2-巰基乙氧基)苯基、4-(氨基甲基)苯基、4-(羥甲基)苯基、4-氨基苯基、4-羥基苯基、4-巰基苯基、4-甲氧基苯基、環(huán)己基、噻吩-2-基、間甲苯基和苯基。

在一些實施方案中，r^d選自：h、1h-吲哚-3-基、1-甲基-1h-吲哚-3-基、2-甲氧基苯基、3-((2-羥乙基)氨基)苯基、3-((2-巰基乙基)氨基)苯基、3-(2-羥基乙氧基)苯基、3-(2-巰基乙氧基)苯基、3，5-二氟苯基、3，5-二甲基苯基、3-氯苯基、3-巰基苯基、3-甲氧基苯基、3-三氟甲基苯基、4-((2-羥乙基)氨基)苯基、4-((2-巰基乙基)氨基)苯基、4-4-(2-羥基乙氧基)苯基、4-(2-巰基乙氧基)苯基、4-巰基苯基、4-甲氧基苯基、環(huán)己基、噻吩-2-基、間甲苯基和苯基。

在一些實施方案中，r^d為苯基。

在一些實施方案中，r^d為1h-吲哚-3-基。

在一些實施方案中，r^d為1-甲基-1h-吲哚-3-基。

在一些實施方案中，r^d為2-甲氧基苯基。

在一些實施方案中，r^d為3-((2-羥乙基)氨基)苯基。

在一些實施方案中，r^d為3-((2-巰基乙基)氨基)苯基。

在一些實施方案中，r^d為3-(2-羥基乙氧基)苯基。

在一些實施方案中，r^d為3-(2-巰基乙氧基)苯基。

在一些實施方案中，r^d為3，5-二氟苯基。

在一些實施方案中，r^d為3，5-二甲基苯基。

在一些實施方案中，r^d為3-氯苯基。

在一些實施方案中，r^d為3-巰基苯基。

在一些實施方案中，r^d為3-甲氧基苯基。

在一些實施方案中，r^d為3-三氟甲基苯基。

在一些實施方案中，r^d為4-((2-羥乙基)氨基)苯基。

在一些實施方案中，r^d為4-((2-巰基乙基)氨基)苯基。

在一些實施方案中，r^d為4-4-(2-羥基乙氧基)苯基。

在一些實施方案中，r^d為4-(2-巰基乙氧基)苯基。

在一些實施方案中，r^d為4-巰基苯基。

在一些實施方案中，r^d為4-甲氧基苯基。

在一些實施方案中，r^d為環(huán)己基。

在一些實施方案中，r^d為噻吩-2-基。

在一些實施方案中，r^d為間甲苯基。

變量r²

在一些實施方案中，r²選自：c2-c6烷基、芳基、芳基-c1-c6烷基、c4-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、雜芳基、雜芳基-c1-c6烷基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧羰基、c1-c6烷基、c1-c6烷基氨基、氨基、氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、芳基、羧酰胺、羧基、氰基、c1-c6鹵?；1-c6鹵烷基、c1-c6鹵烷氧基、鹵基、羥基、硝基、硫基和硫基-c1-c6烷基。

在一些實施方案中，r²選自：c2-c6烷基、芳基、芳基-c1-c6烷基、c4-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、雜芳基、雜芳基-c1-c6烷基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：1-氨基環(huán)丙基、4-氨基苯基、氨基、氨基甲基、溴、叔丁基、羧酰胺、羧基、氯、氰基、乙基、氟、羥基、異丙基、甲氧基、甲基、硝基、苯基、硫基、硫代甲基、三氟甲氧基和三氟甲基。

在一些實施方案中，r²選自：5，6，7，8-四氫萘-1-基、芐基、環(huán)己基、乙基、己烷-2-基、甲基、萘-2-基、哌啶-1-基、苯基、丙基、吡啶-3-基和噻吩-2-基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：1-氨基環(huán)丙基、4-氨基苯基、氨基、氨基甲基、溴、叔丁基、羧酰胺、羧基、氯、氰基、乙基、氟、羥基、異丙基、甲氧基、甲基、硝基、苯基、硫基、硫代甲基、三氟甲氧基和三氟甲基。

在一些實施方案中，r²選自：5，6，7，8-四氫萘-1-基、芐基、環(huán)己基、乙基、己烷-2-基、萘-2-基、哌啶-1-基、苯基、丙基、吡啶-3-基和噻吩-2-基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：1-氨基環(huán)丙基、4-氨基苯基、氨基、氨基甲基、溴、叔丁基、羧酰胺、羧基、氯、氰基、乙基、氟、羥基、異丙基、甲氧基、甲基、硝基、苯基、硫基、硫代甲基、三氟甲氧基和三氟甲基。

在一些實施方案中，r²選自：4-氨基芐基、4-(氨基甲基)芐基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基、芐基、3-巰基丙基、2-巰基乙基、4-(巰基甲基)苯基、對甲苯基、2，4，6-三甲基苯基、4-(三氟甲氧基)苯基、2，4，6-三異丙基苯基、4-叔丁基苯基、4-氯苯基、3-氰基苯基、2-硝基苯基、4-甲氧基-2-硝基苯基、4-氨基羰基-2-硝基苯基、4-甲氧基苯基、苯基、2-氟芐基、哌啶-1-基、鄰甲苯基、4-溴苯基、萘-2-基、4-甲氧羰基苯基、2-(三氟甲基)芐基、己烷-2-基、2-甲氧基乙基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基、吡啶-3-基甲基、4-羧基苯基、3-氨基苯基、吡啶-3-基、噻吩-2-基、4-羥基苯基、4-(1-氨基環(huán)丙基)芐基、4-(1-氨基環(huán)丙基)苯基、2-甲基芐基、4-硝基芐基、4-氯芐基、苯乙基、4-溴芐基、4-氰基芐基、3-硝基芐基、4-叔丁基芐基、2-硝基芐基、4-硝基苯乙基、2-氯代-3-甲氧羰基苯基、2-氨基苯基、[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4′-氨基-[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4-氟芐基、3-(三氟甲基)芐基、3-(三氟甲氧基)芐基、3，4-二氯芐基、2-氰基芐基、3-氯芐基、4-氨基-2-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯基、4-氨基-2，3-二甲基苯基、4-氨基-5，6，7，8-四氫萘-1-基、4-氨基-3-甲基苯基、4-氨基-3-氟苯基、4-氨基-3-乙基苯基和4-氨基-3-(三氟甲基)苯基。

在一些實施方案中，r²選自：4-氨基芐基、4-(氨基甲基)芐基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基、芐基、3-巰基丙基、2-巰基乙基、4-(巰基甲基)苯基、對甲苯基、2，4，6-三甲基苯基、4-(三氟甲氧基)苯基、2，4，6-三異丙基苯基、4-叔丁基苯基、4-氯苯基、3-氰基苯基、2-硝基苯基、4-甲氧基-2-硝基苯基、4-氨基羰基-2-硝基苯基、4-甲氧基苯基、苯基、2-氟芐基、哌啶-1-基、鄰甲苯基、4-溴苯基、萘-2-基、4-甲氧羰基苯基、2-(三氟甲基)芐基、己烷-2-基、2-甲氧基乙基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基、吡啶-3-基甲基、4-羧基苯基、3-氨基苯基、吡啶-3-基、噻吩-2-基、4-羥基苯基、4-(1-氨基環(huán)丙基)芐基、4-(1-氨基環(huán)丙基)苯基、2-甲基芐基、4-硝基芐基、4-氯芐基、苯乙基、4-溴芐基、4-氰基芐基、3-硝基芐基、4-叔丁基芐基、2-硝基芐基、4-硝基苯乙基、2-氯代-3-甲氧羰基苯基、2-氨基苯基、[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4′-氨基-[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4-氟芐基、3-(三氟甲基)芐基、3-(三氟甲氧基)芐基、3，4-二氯芐基、2-氰基芐基、3-氯芐基、4-氨基-2-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯基、4-氨基-2，3-二甲基苯基、4-氨基-5，6，7，8-四氫萘-1-基、4-氨基-3-甲基苯基、4-氨基-3-氟苯基、4-氨基-3-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲基)苯基和4-(甲氧羰基)苯基。

在一些實施方案中，其中r²選自：芳基和芳基-c1-c6烷基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：氨基和氨基-c1-c6烷基。

在一些實施方案中，r²選自：4-氨基芐基、4-(氨基甲基)芐基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基和芐基。

在一些實施方案中，r²為4-氨基芐基。

在一些實施方案中，r²為4-(氨基甲基)芐基。

在一些實施方案中，r²為4-(氨基甲基)苯基。

在一些實施方案中，r²為4-氨基苯基。

在一些實施方案中，r²為芐基。

在一些實施方案中，r²為3-巰基丙基。

在一些實施方案中，r²為2-巰基乙基。

在一些實施方案中，r²為4-(巰基甲基)苯基。

在一些實施方案中，r²為對甲苯基。

在一些實施方案中，r²為2，4，6-三甲基苯基。

在一些實施方案中，r²為4-(三氟甲氧基)苯基。

在一些實施方案中，r²為2，4，6-三異丙基苯基。

在一些實施方案中，r²為4-叔丁基苯基。

在一些實施方案中，r²為4-氯苯基。

在一些實施方案中，r²為3-氰基苯基。

在一些實施方案中，r²為2-硝基苯基。

在一些實施方案中，r²為4-甲氧基-2-硝基苯基。

在一些實施方案中，r²為4-氨基羰基-2-硝基苯基。

在一些實施方案中，r²為4-甲氧基苯基。

在一些實施方案中，r²為苯基。

在一些實施方案中，r²為2-氟芐基。

在一些實施方案中，r²為哌啶-1-基。

在一些實施方案中，r²為鄰甲苯基。

在一些實施方案中，r²為4-溴苯基。

在一些實施方案中，r²為萘-2-基。

在一些實施方案中，r²為4-甲氧基羰基苯基。

在一些實施方案中，r²為-(三氟甲基)芐基。

在一些實施方案中，r²為己烷-2-基。

在一些實施方案中，r²為2-甲氧基乙基。

在一些實施方案中，r²為環(huán)戊基甲基。

在一些實施方案中，r²為環(huán)己基。

在一些實施方案中，r²為吡啶-3-基甲基。

在一些實施方案中，r²為4-羰基苯基。

在一些實施方案中，r²為3-氨基苯基。

在一些實施方案中，r²為吡啶-3-基。

在一些實施方案中，r²為噻吩-2-基。

在一些實施方案中，r²為4-羥基苯基。

在一些實施方案中，r²為4-(1-氨基環(huán)丙基)芐基。

在一些實施方案中，r²為4-(1-氨基環(huán)丙基)苯基。

在一些實施方案中，r²為2-甲基芐基。

在一些實施方案中，r²為4-硝基芐基。

在一些實施方案中，r²為4-氯芐基。

在一些實施方案中，r²為苯乙基。

在一些實施方案中，r²為4-溴芐基。

在一些實施方案中，r²為4-氰基芐基。

在一些實施方案中，r²為3-硝基芐基。

在一些實施方案中，r²為4-叔丁基芐基。

在一些實施方案中，r²為2-硝基芐基。

在一些實施方案中，r²為-硝基苯乙基。

在一些實施方案中，r²為2-氯代-3-甲氧基羰基苯基。

在一些實施方案中，r²為2-氨基苯基。

在一些實施方案中，r²為[1，1’-聯(lián)苯]-4-基。

在一些實施方案中，r²為4’-氨基-[1，1’-聯(lián)苯]-4-基。

在一些實施方案中，r²為4-氟芐基。

在一些實施方案中，r²為3-(三氟甲基)芐基。

在一些實施方案中，r²為3-(三氟甲氧基)芐基。

在一些實施方案中，r²為3，4-二氯芐基。

在一些實施方案中，r²為2-氰基芐基。

在一些實施方案中，r²為3-氯芐基。

在一些實施方案中，r²為4-氨基-2-乙基苯基。

在一些實施方案中，r²為4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯基。

在一些實施方案中，r²為4-氨基-2，3-二甲基苯基。

在一些實施方案中，r²為4-氨基-5，6，7，8-四氫萘-1-基。

在一些實施方案中，r²為4-氨基-3-甲基苯基。

在一些實施方案中，r²為4-氨基-3-氟苯基。

在一些實施方案中，r²為4-氨基-3-乙基苯基。

在一些實施方案中，r²為4-氨基-3-(三氟甲基)苯基。

在一些實施方案中，r²為4-(甲氧羰基)苯基。

變量r³

在一些實施方案中，r³選自：芳基、雜芳基和c3-c7環(huán)烷基，各自任選被一個選自氨基和羥基的取代基取代。

在一些實施方案中，r³選自：1h-吲哚-3-基、4-氨基苯基、4-羥基苯基、5-羥基吡啶-2-基、環(huán)己基和苯基。

在一些實施方案中，r³為1h-吲哚-3-基。

在一些實施方案中，r³為4-氨基苯基。

在一些實施方案中，r³為4-羥基苯基。

在一些實施方案中，r³為5-羥基吡啶-2-基。

在一些實施方案中，r³為環(huán)己基。

在一些實施方案中，r³為苯基。

變量r⁴

在一些實施方案中，r⁴選自：h和c1-c6烷基。

在一些實施方案中，r⁴為h。

在一些實施方案中，r⁴為c1-c6烷基。

在一些實施方案中，r⁴為甲基。

變量r⁵

在一些實施方案中，r⁵選自：h和c1-c6烷基。

在一些實施方案中，r⁵為h。

在一些實施方案中，r⁵為c1-c6烷基。

在一些實施方案中，r⁵為甲基。

變量x

在一些實施方案中，x為-c(o)nhch(ch2r³)-，或x不存在。

在一些實施方案中，x為-c(o)nhch(ch2r³)-

在一些實施方案中，x不存在。

某些組合

在一些實施方案中，r^b為c1-c6烷基；且r^c為r^d-c(ch3)2-。

在一些實施方案中，r^b和r^c連同其各自所鍵結(jié)的原子一起形成雜環(huán)基二基。

在一些實施方案中，r^b和r^c連同其各自所鍵結(jié)的原子一起形成選自以下的雜環(huán)基二基：吡咯烷基二基、哌啶基二基和氮雜環(huán)庚烷基二基。

在一些實施方案中，r^b和r^c連同其各自所鍵結(jié)的原子一起形成吡略烷基二基。

在一些實施方案中，r^b和r^c連同其各自所鍵結(jié)的原子一起形成哌啶基二基。

在一些實施方案中，r^b和r^c連同其各自所鍵結(jié)的原子一起形成氮雜環(huán)庚烷基二基。

在一些實施方案中，r⁴和r⁵各自獨立地選自：h和c1-c6烷基。

在一些實施方案中，r⁴和r⁵各自獨立地選自：h和甲基。

在一些實施方案中，r⁴和r⁵各自為甲基。

在一些實施方案中，r⁴為h且r⁵為甲基。

還提供了式ia化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r²選自：c2-c6烷基、芳基、芳基-c1-c6烷基、c4-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、雜芳基、雜芳基-c1-c6烷基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧羰基、c1-c6烷基、c1-c6烷基氨基、氨基、氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、芳基、羧酰胺、羧基、氰基、c1-c6鹵烷基、c1-c6鹵烷氧基、鹵基、羥基、硝基、硫基和硫基-c1-c6烷基；并且

r⁴和r⁵各自獨立地選自：h和c1-c6烷基。

還提供了式ia化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r²選自：4-氨基芐基、4-(氨基甲基)芐基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基、芐基、3-巰基丙基、2-巰基乙基、4-(巰基甲基)苯基、對甲苯基、2，4，6-三甲基苯基、4-(三氟甲氧基)苯基、2，4，6-三異丙基苯基、4-叔丁基苯基、4-氯苯基、3-氰基苯基、2-硝基苯基、4-甲氧基-2-硝基苯基、4-氨基羰基-2-硝基苯基、4-甲氧基苯基、苯基、2-氟芐基、哌啶-1-基、鄰甲苯基、4-溴苯基、萘-2-基、4-甲氧羰基苯基、2-(三氟甲基)芐基、己烷-2-基、2-甲氧基乙基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基、吡啶-3-基甲基、4-羧基苯基、3-氨基苯基、吡啶-3-基、噻吩-2-基、4-羥基苯基、4-(1-氨基環(huán)丙基)芐基、4-(1-氨基環(huán)丙基)苯基、2-甲基芐基、4-硝基芐基、4-氯芐基、苯乙基、4-溴芐基、4-氰基芐基、3-硝基芐基、4-叔丁基芐基、2-硝基芐基、4-硝基苯乙基、2-氯代-3-甲氧羰基苯基、2-氨基苯基、[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4′-氨基-[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4-氟芐基、3-(三氟甲基)芐基、3-(三氟甲氧基)芐基、3，4-二氯芐基、2-氰基芐基、3-氯芐基、4-氨基-2-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯基、4-氨基-2，3-二甲基苯基、4-氨基-5，6，7，8-四氫萘-1-基、4-氨基-3-甲基苯基、4-氨基-3-氟苯基、4-氨基-3-乙基苯基、以及4-氨基-3-(三氟甲基)苯基；并且

r⁴和r⁵各自獨立地選自：h和甲基。

還提供了式ib化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r²選自：c2-c6烷基、芳基、芳基-c1-c6烷基、c4-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、雜芳基、雜芳基-c1-c6烷基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧羰基、c1-c6烷基、c1-c6烷基氨基、氨基、氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、芳基、羧酰胺、羧基、氰基、c1-c6鹵烷基、c1-c6鹵烷氧基、鹵基、羥基、硝基、硫基和硫基-c1-c6烷基；

r³選自：芳基、雜芳基及c3-c7環(huán)烷基，各自任選被一個選自氨基和羥基的取代基取代；并且

r⁴和r⁵各自獨立地選自：h和c1-c6烷基。

還提供了式ib化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r²選自：4-氨基芐基、4-(氨基甲基)芐基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基、芐基、3-巰基丙基、2-巰基乙基、4-(巰基甲基)苯基、對甲苯基、2，4，6-三甲基苯基、4-(三氟甲氧基)苯基、2，4，6-三異丙基苯基、4-叔丁基苯基、4-氯苯基、3-氰基苯基、2-硝基苯基、4-甲氧基-2-硝基苯基、4-氨基羰基-2-硝基苯基、4-甲氧基苯基、苯基、2-氟芐基、哌啶-1-基、鄰甲苯基、4-溴苯基、萘-2-基、4-甲氧羰基苯基、2-(三氟甲基)芐基、己烷-2-基、2-甲氧基乙基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基、吡啶-3-基甲基、4-羧基苯基、3-氨基苯基、吡啶-3-基、噻吩-2-基、4-羥基苯基、4-(1-氨基環(huán)丙基)芐基、4-(1-氨基環(huán)丙基)苯基、2-甲基芐基、4-硝基芐基、4-氯芐基、苯乙基、4-溴芐基、4-氰基芐基、3-硝基芐基、4-叔丁基芐基、2-硝基芐基、4-硝基苯乙基、2-氯代-3-甲氧羰基苯基、2-氨基苯基、[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4′-氨基-[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4-氟芐基、3-(三氟甲基)芐基、3-(三氟甲氧基)芐基、3，4-二氯芐基、2-氰基芐基、3-氯芐基、4-氨基-2-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯基、4-氨基-2，3-二甲基苯基、4-氨基-5，6，7，8-四氫萘-1-基、4-氨基-3-甲基苯基、4-氨基-3-氟苯基、4-氨基-3-乙基苯基、以及4-氨基-3-(三氟甲基)苯基；

r³選自：1h-吲哚-3-基、4-氨基苯基、4-羥基苯基、5-羥基吡啶-2-基、環(huán)己基和苯基；并且

r⁴和r⁵各自獨立地選自：h和甲基。

還提供了式ic化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r²選自：c2-c6烷基、芳基、芳基-c1-c6烷基、c4-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、雜芳基、雜芳基-c1-c6烷基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧羰基、c1-c6烷基、c1-c6烷基氨基、氨基、氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、芳基、羧酰胺、羧基、氰基、c1-c6鹵烷基、c1-c6鹵烷氧基、鹵基、羥基、硝基、硫基和硫基-c1-c6烷基；并且

x為-c(o)nhch(ch2r³)-，或x不存在；并且

r³選自：芳基、雜芳基及c3-c7環(huán)烷基，各自任選被一個選自氨基和羥基的取代基取代；并且

r⁴和r⁵各自獨立地選自：h和c1-c6烷基。

還提供了式ic化合物：

或其藥學上可接受的鹽，

其中：

r²選自：4-氨基芐基、4-(氨基甲基)芐基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基、芐基、3-巰基丙基、2-巰基乙基、4-(巰基甲基)苯基、對甲苯基、2，4，6-三甲基苯基、4-(三氟甲氧基)苯基、2，4，6-三異丙基苯基、4-叔丁基苯基、4-氯苯基、3-氰基苯基、2-硝基苯基、4-甲氧基-2-硝基苯基、4-氨基羰基-2-硝基苯基、4-甲氧基苯基、苯基、2-氟芐基、哌啶-1-基、鄰甲苯基、4-溴苯基、萘-2-基、4-甲氧羰基苯基、2-(三氟甲基)芐基、己烷-2-基、2-甲氧基乙基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基、吡啶-3-基甲基、4-羧基苯基、3-氨基苯基、吡啶-3-基、噻吩-2-基、4-羥基苯基、4-(1-氨基環(huán)丙基)芐基、4-(1-氨基環(huán)丙基)苯基、2-甲基芐基、4-硝基芐基、4-氯芐基、苯乙基、4-溴芐基、4-氰基芐基、3-硝基芐基、4-叔丁基芐基、2-硝基芐基、4-硝基苯乙基、2-氯代-3-甲氧羰基苯基、2-氨基苯基、[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4′-氨基-[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4-氟芐基、3-(三氟甲基)芐基、3-(三氟甲氧基)芐基、3，4-二氯芐基、2-氰基芐基、3-氯芐基、4-氨基-2-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯基、4-氨基-2，3-二甲基苯基、4-氨基-5，6，7，8-四氫萘-1-基、4-氨基-3-甲基苯基、4-氨基-3-氟苯基、4-氨基-3-乙基苯基、以及4-氨基-3-(三氟甲基)苯基；并且

x為-c(o)nhch(ch2r³)-，或x不存在；并且

r³選自：1h-吲哚-3-基、4-氨基苯基、4-羥基苯基、5-羥基吡啶-2-基、環(huán)己基和苯基；并且

r⁴和r⁵各自獨立地選自：h和甲基。

還提供了式id化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r²選自：c2-c6烷基、芳基、芳基-c1-c6烷基、c4-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、雜芳基、雜芳基-c1-c6烷基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧羰基、c1-c6烷基、c1-c6烷基氨基、氨基、氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、芳基、羧酰胺、羧基、氰基、c1-c6鹵烷基、c1-c6鹵烷氧基、鹵基、羥基、硝基、硫基和硫基-c1-c6烷基；并且

r⁴和r⁵各自獨立地選自：h和c1-c6烷基。

還提供了式id化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r²選自：4-氨基芐基、4-(氨基甲基)芐基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基、芐基、3-巰基丙基、2-巰基乙基、4-(巰基甲基)苯基、對甲苯基、2，4，6-三甲基苯基、4-(三氟甲氧基)苯基、2，4，6-三異丙基苯基、4-叔丁基苯基、4-氯苯基、3-氰基苯基、2-硝基苯基、4-甲氧基-2-硝基苯基、4-氨基羰基-2-硝基苯基、4-甲氧基苯基、苯基、2-氟芐基、哌啶-1-基、鄰甲苯基、4-溴苯基、萘-2-基、4-甲氧羰基苯基、2-(三氟甲基)芐基、己烷-2-基、2-甲氧基乙基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基、吡啶-3-基甲基、4-羧基苯基、3-氨基苯基、吡啶-3-基、噻吩-2-基、4-羥基苯基、4-(1-氨基環(huán)丙基)芐基、4-(1-氨基環(huán)丙基)苯基、2-甲基芐基、4-硝基芐基、4-氯芐基、苯乙基、4-溴芐基、4-氰基芐基、3-硝基芐基、4-叔丁基芐基、2-硝基芐基、4-硝基苯乙基、2-氯代-3-甲氧羰基苯基、2-氨基苯基、[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4′-氨基-[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4-氟芐基、3-(三氟甲基)芐基、3-(三氟甲氧基)芐基、3，4-二氯芐基、2-氰基芐基、3-氯芐基、4-氨基-2-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯基、4-氨基-2，3-二甲基苯基、4-氨基-5，6，7，8-四氫萘-1-基、4-氨基-3-甲基苯基、4-氨基-3-氟苯基、4-氨基-3-乙基苯基、以及4-氨基-3-(三氟甲基)苯基；并且

r⁴和r⁵各自獨立地選自：h和甲基。

還提供了式ie化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r²選自：c2-c6烷基、芳基、芳基-c1-c6烷基、c4-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、雜芳基、雜芳基-c1-c6烷基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧羰基、c1-c6烷基、c1-c6烷基氨基、氨基、氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、芳基、羧酰胺、羧基、氰基、c1-c6鹵烷基、c1-c6鹵烷氧基、鹵基、羥基、硝基、硫基和硫基-c1-c6烷基；并且

r³選自：芳基、雜芳基及c3-c7環(huán)烷基，各自任選被一個選自氨基和羥基的取代基取代；并且

r⁴和r⁵各自獨立地選自：h和c1-c6烷基。

還提供了式ie化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r²選自：4-氨基芐基、4-(氨基甲基)芐基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基、芐基、3-巰基丙基、2-巰基乙基、4-(巰基甲基)苯基、對甲苯基、2，4，6-三甲基苯基、4-(三氟甲氧基)苯基、2，4，6-三異丙基苯基、4-叔丁基苯基、4-氯苯基、3-氰基苯基、2-硝基苯基、4-甲氧基-2-硝基苯基、4-氨基羰基-2-硝基苯基、4-甲氧基苯基、苯基、2-氟芐基、哌啶-1-基、鄰甲苯基、4-溴苯基、萘-2-基、4-甲氧羰基苯基、2-(三氟甲基)芐基、己烷-2-基、2-甲氧基乙基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基、吡啶-3-基甲基、4-羧基苯基、3-氨基苯基、吡啶-3-基、噻吩-2-基、4-羥基苯基、4-(1-氨基環(huán)丙基)芐基、4-(1-氨基環(huán)丙基)苯基、2-甲基芐基、4-硝基芐基、4-氯芐基、苯乙基、4-溴芐基、4-氰基芐基、3-硝基芐基、4-叔丁基芐基、2-硝基芐基、4-硝基苯乙基、2-氯代-3-甲氧羰基苯基、2-氨基苯基、[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4′-氨基-[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4-氟芐基、3-(三氟甲基)芐基、3-(三氟甲氧基)芐基、3，4-二氯芐基、2-氰基芐基、3-氯芐基、4-氨基-2-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯基、4-氨基-2，3-二甲基苯基、4-氨基-5，6，7，8-四氫萘-1-基、4-氨基-3-甲基苯基、4-氨基-3-氟苯基、4-氨基-3-乙基苯基、以及4-氨基-3-(三氟甲基)苯基；并且

r³選自：1h-吲哚-3-基、4-氨基苯基、4-羥基苯基、5-羥基吡啶-2-基、環(huán)己基和苯基；并且

r⁴和r⁵各自獨立地選自：h和甲基。

還提供了式if化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r²選自：c2-c6烷基、芳基、芳基-c1-c6烷基、c4-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、雜芳基、雜芳基-c1-c6烷基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧羰基、c1-c6烷基、c1-c6烷基氨基、氨基、氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、芳基、羧酰胺、羧基、氰基、c1-c6鹵烷基、c1-c6鹵烷氧基、鹵基、羥基、硝基、硫基和硫基-c1-c6烷基；并且

x為-c(o)nhch(ch2r³)-，或x不存在；并且

r³選自：芳基、雜芳基和c3-c7環(huán)烷基，各自任選被一個選自氨基和羥基的取代基取代。

還提供了式if化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r²選自：4-氨基芐基、4-(氨基甲基)芐基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基；并且

x為-c(o)nhch(ch2r³)-，或x不存在；并且

r³選自：1h-吲哚-3-基、4-氨基苯基、4-羥基苯基、5-羥基吡啶-2-基、環(huán)己基和苯基。

還提供了式ig化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r²選自：c2-c6烷基、芳基、芳基-c1-c6烷基、c4-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、雜芳基、雜芳基-c1-c6烷基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧羰基、c1-c6烷基、c1-c6烷基氨基、氨基、氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、芳基、羧酰胺、羧基、氰基、c1-c6鹵烷基、c1-c6鹵烷氧基、鹵基、羥基、硝基、硫基和硫基-c1-c6烷基。

還提供了式ig化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r²選自：4-氨基芐基、4-(氨基甲基)芐基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基。

還提供了式ih化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r²選自：c2-c6烷基、芳基、芳基-c1-c6烷基、c4-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、雜芳基、雜芳基-c1-c6烷基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧羰基、c1-c6烷基、c1-c6烷基氨基、氨基、氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、芳基、羧酰胺、羧基、氰基、c1-c6鹵烷基、c1-c6鹵烷氧基、鹵基、羥基、硝基、硫基和硫基-c1-c6烷基；并且

r³選自：芳基、雜芳基和c3-c7環(huán)烷基，各自任選被一個選自氨基和羥基的取代基取代。

還提供了式ih化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r²選自：4-氨基芐基、4-(氨基甲基)芐基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基；并且

r³選自：1h-吲哚-3-基、4-氨基苯基、4-羥基苯基、5-羥基吡啶-2-基、環(huán)己基和苯基。

還提供了式ii化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r²選自：c2-c6烷基、芳基、芳基-c1-c6烷基、c4-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、雜芳基、雜芳基-c1-c6烷基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧羰基、c1-c6烷基、c1-c6烷基氨基、氨基、氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、芳基、羧酰胺、羧基、氰基、c1-c6鹵烷基、c1-c6鹵烷氧基、鹵基、羥基、硝基、硫基和硫基-c1-c6烷基；

x為-c(o)nhch(ch2r³)-，或x不存在；并且

r³選自：芳基、雜芳基和c3-c7環(huán)烷基，各自任選被一個選自氨基和羥基的取代基取代。

還提供了式ii化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r²選自：4-氨基芐基、4-(氨基甲基)芐基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基、芐基、3-巰基丙基、2-巰基乙基、4-(巰基甲基)苯基、對甲苯基、2，4，6-三甲基苯基、4-(三氟甲氧基)苯基、2，4，6-三異丙基苯基、4-叔丁基苯基、4-氯苯基、3-氰基苯基、2-硝基苯基、4-甲氧基-2-硝基苯基、4-氨基羰基-2-硝基苯基、4-甲氧基苯基、苯基、2-氟芐基、哌啶-1-基、鄰甲苯基、4-溴苯基、萘-2-基、4-甲氧羰基苯基、2-(三氟甲基)芐基、己烷-2-基、2-甲氧基乙基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基、吡啶-3-基甲基、4-羧基苯基、3-氨基苯基、吡啶-3-基、噻吩-2-基、4-羥基苯基、4-(1-氨基環(huán)丙基)芐基、4-(1-氨基環(huán)丙基)苯基、2-甲基芐基、4-硝基芐基、4-氯芐基、苯乙基、4-溴芐基、4-氰基芐基、3-硝基芐基、4-叔丁基芐基、2-硝基芐基、4-硝基苯乙基、2-氯代-3-甲氧羰基苯基、2-氨基苯基、[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4′-氨基-[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4-氟芐基、3-(三氟甲基)芐基、3-(三氟甲氧基)芐基、3，4-二氯芐基、2-氰基芐基、3-氯芐基、4-氨基-2-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯基、4-氨基-2，3-二甲基苯基、4-氨基-5，6，7，8-四氫萘-1-基、4-氨基-3-甲基苯基、4-氨基-3-氟苯基、4-氨基-3-乙基苯基、以及4-氨基-3-(三氟甲基)苯基；

x為-c(o)nhch(ch2r³)-，或x不存在；并且

r³選自：1h-吲哚-3-基、4-氨基苯基、4-羥基苯基、5-羥基吡啶-2-基、環(huán)己基和苯基。

還提供了式ij化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r²選自：c2-c6烷基、芳基、芳基-c1-c6烷基、c4-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、雜芳基、雜芳基-c1-c6烷基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧羰基、c1-c6烷基、c1-c6烷基氨基、氨基、氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、芳基、羧酰胺、羧基、氰基、c1-c6鹵烷基、c1-c6鹵烷氧基、鹵基、羥基、硝基、硫基和硫基-c1-c6烷基。

還提供了式ij化合物：

或其藥學上可接受的鹽，

其中：

r²選自：4-氨基芐基、4-(氨基甲基)芐基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基、芐基、3-巰基丙基、2-巰基乙基、4-(巰基甲基)苯基、對甲苯基、2，4，6-三甲基苯基、4-(三氟甲氧基)苯基、2，4，6-三異丙基苯基、4-叔丁基苯基、4-氯苯基、3-氰基苯基、2-硝基苯基、4-甲氧基-2-硝基苯基、4-氨基羰基-2-硝基苯基、4-甲氧基苯基、苯基、2-氟芐基、哌啶-1-基、鄰甲苯基、4-溴苯基、萘-2-基、4-甲氧羰基苯基、2-(三氟甲基)芐基、己烷-2-基、2-甲氧基乙基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基、吡啶-3-基甲基、4-羧基苯基、3-氨基苯基、吡啶-3-基、噻吩-2-基、4-羥基苯基、4-(1-氨基環(huán)丙基)芐基、4-(1-氨基環(huán)丙基)苯基、2-甲基芐基、4-硝基芐基、4-氯芐基、苯乙基、4-溴芐基、4-氰基芐基、3-硝基芐基、4-叔丁基芐基、2-硝基芐基、4-硝基苯乙基、2-氯代-3-甲氧羰基苯基、2-氨基苯基、[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4′-氨基-[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4-氟芐基、3-(三氟甲基)芐基、3-(三氟甲氧基)芐基、3，4-二氯芐基、2-氰基芐基、3-氯芐基、4-氨基-2-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯基、4-氨基-2，3-二甲基苯基、4-氨基-5，6，7，8-四氫萘-1-基、4-氨基-3-甲基苯基、4-氨基-3-氟苯基、4-氨基-3-乙基苯基和4-氨基-3-(三氟甲基)苯基。

還提供了式ik化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r²選自：c2-c6烷基、芳基、芳基-c1-c6烷基、c4-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、雜芳基、雜芳基-c1-c6烷基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧羰基、c1-c6烷基、c1-c6烷基氨基、氨基、氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、芳基、羧酰胺、羧基、氰基、c1-c6鹵烷基、c1-c6鹵烷氧基、鹵基、羥基、硝基、硫基和硫基-c1-c6烷基；并且

r³選自：芳基、雜芳基和c3-c7環(huán)烷基，各自任選被一個選自氨基和羥基的取代基取代。

還提供了式ik化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r²選自：4-氨基芐基、4-(氨基甲基)芐基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基、芐基、3-巰基丙基、2-巰基乙基、4-(巰基甲基)苯基、對甲苯基、2，4，6-三甲基苯基、4-(三氟甲氧基)苯基、2，4，6-三異丙基苯基、4-叔丁基苯基、4-氯苯基、3-氰基苯基、2-硝基苯基、4-甲氧基-2-硝基苯基、4-氨基羰基-2-硝基苯基、4-甲氧基苯基、苯基、2-氟芐基、哌啶-1-基、鄰甲苯基、4-溴苯基、萘-2-基、4-甲氧羰基苯基、2-(三氟甲基)芐基、己烷-2-基、2-甲氧基乙基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基、吡啶-3-基甲基、4-羧基苯基、3-氨基苯基、吡啶-3-基、噻吩-2-基、4-羥基苯基、4-(1-氨基環(huán)丙基)芐基、4-(1-氨基環(huán)丙基)苯基、2-甲基芐基、4-硝基芐基、4-氯芐基、苯乙基、4-溴芐基、4-氰基芐基、3-硝基芐基、4-叔丁基芐基、2-硝基芐基、4-硝基苯乙基、2-氯代-3-甲氧羰基苯基、2-氨基苯基、[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4′-氨基-[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4-氟芐基、3-(三氟甲基)芐基、3-(三氟甲氧基)芐基、3，4-二氯芐基、2-氰基芐基、3-氯芐基、4-氨基-2-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯基、4-氨基-2，3-二甲基苯基、4-氨基-5，6，7，8-四氫萘-1-基、4-氨基-3-甲基苯基、4-氨基-3-氟苯基、4-氨基-3-乙基苯基、以及4-氨基-3-(三氟甲基)苯基；并且

r³選自：1h-吲哚-3-基、4-氨基苯基、4-羥基苯基、5-羥基吡啶-2-基、環(huán)己基和苯基。

還提供了式im化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r¹選自：氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、氨基-雜環(huán)基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：芳基、芳基-c1-c6烷基、c1-c6烷基、c1-c6烷硫基、羧基、羧酰胺、c3-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、胍基、鹵基、c1-c6鹵酰基、c1-c6鹵烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基-c1-c6烷基、羥基和硫基；或

r¹為r^ar^bnch(r^c)-；

r^a選自：h和c1-c6烷基；

r^b為c1-c6烷基；且

r^c為r^d-c(ch3)2-；且

r^d選自：h、芳基、c3-c7環(huán)烷基和雜芳基，其各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c4酰硫基、c2-c4烯基、c1-c4烷基、c1-c4烷基氨基、c1-c4烷氧基、氨基、氨基-c1-c4烷基、鹵基、c1-c4鹵烷基、羥基、羥基-c1-c4烷基和硫基，其中c2-c4烯基、c1-c4烷基氨基及c1-c4烷氧基進一步任選被一個選自以下的取代基取代：c1-c4烷基芳基、羥基和硫基；或

r^b和r^c與其各自所鍵結(jié)的原子一起形成雜環(huán)基二基；

r²選自：c2-c6烷基、芳基、芳基-c1-c6烷基、c4-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、雜芳基、雜芳基-c1-c6烷基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧羰基、c1-c6烷基、c1-c6烷基氨基、氨基、氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、芳基、羧酰胺、羧基、氰基、c1-c6鹵?；1-c6鹵烷基、c1-c6鹵烷氧基、鹵基、羥基、硝基、硫基和硫基-c1-c6烷基。

還提供了式im化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r¹選自：1-(二甲基氨基)-2-甲基丙基、2-甲基-1-(甲基氨基)丙基、1-氨基環(huán)戊基、1-氨基環(huán)丙基、4-氨基苯基、2-氨基丙-2-基、1-氨基環(huán)己基、3-氨基氧雜環(huán)丁烷-3-基、2-(甲基氨基)丙-2-基、1-氨基-2-甲基丙-2-基、2-甲基吡咯烷-2-基、2-氨基-3-甲基丁-2-基、2-氨基丁-2-基、2-甲基-1-(甲基氨基)丙-2-基、1-甲基哌啶-2-基、3-氟吡咯烷-3-基、1，2-二甲基吡咯烷-2-基和2-(二甲基氨基)丙-2-基)；并且

r2選自：4-氨基芐基、4-(氨基甲基)芐基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基、芐基、3-巰基丙基、2-巰基乙基、4-(巰基甲基)苯基、對甲苯基、2，4，6-三甲基苯基、4-(三氟甲氧基)苯基、2，4，6-三異丙基苯基、4-叔丁基苯基、4-氯苯基、3-氰基苯基、2-硝基苯基、4-甲氧基-2-硝基苯基、4-氨基羰基-2-硝基苯基、4-甲氧基苯基、苯基、2-氟芐基、哌啶-1-基、鄰甲苯基、4-溴苯基、萘-2-基、4-甲氧羰基苯基、2-(三氟甲基)芐基、己烷-2-基、2-甲氧基乙基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基、吡啶-3-基甲基、4-羧基苯基、3-氨基苯基、吡啶-3-基、噻吩-2-基、4-羥基苯基、4-(1-氨基環(huán)丙基)芐基、4-(1-氨基環(huán)丙基)苯基、2-甲基芐基、4-硝基芐基、4-氯芐基、苯乙基、4-溴芐基、4-氰基芐基、3-硝基芐基、4-叔丁基芐基、2-硝基芐基、4-硝基苯乙基、2-氯代-3-甲氧羰基苯基、2-氨基苯基、[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4′-氨基-[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4-氟芐基、3-(三氟甲基)芐基、3-(三氟甲氧基)芐基、3，4-二氯芐基、2-氰基芐基、3-氯芐基、4-氨基-2-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯基、4-氨基-2，3-二甲基苯基、4-氨基-5，6，7，8-四氫萘-1-基、4-氨基-3-甲基苯基、4-氨基-3-氟苯基、4-氨基-3-乙基苯基和4-氨基-3-(三氟甲基)苯基。

還提供了式im化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r¹選自：氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、氨基-雜環(huán)基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：芳基、芳基-c1-c6烷基、c1-c6烷基、c1-c6烷硫基、羧基、羧酰胺、c3-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、胍基、鹵基、c1-c6鹵酰基、c1-c6鹵烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基-c1-c6烷基、羥基和硫基；或

r¹為r^ar^bnch(r^c)-；

r^a選自：h和c1-c6烷基；

r^b為c1-c6烷基；且

r^c為r^d-c(ch3)2-；且

r^d選自：h、芳基、c3-c7環(huán)烷基和雜芳基，其各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c4酰硫基、c2-c4烯基、c1-c4烷基、c1-c4烷基氨基、c1-c4烷氧基、氨基、氨基-c1-c4烷基、鹵基、c1-c4鹵烷基、羥基、羥基-c1-c4烷基和硫基，其中c2-c4烯基、c1-c4烷基氨基及c1-c4烷氧基進一步任選被一個選自以下的取代基取代：c1-c4烷基芳基、羥基和硫基；或

r^b和r^c與其各自所鍵結(jié)的原子一起形成雜環(huán)基二基；

r²選自：c1-c6烷基、芳基、芳基-c1-c6烷基、c3-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、雜芳基、雜芳基-c1-c6烷基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧羰基、c1-c6烷基、c1-c6烷基氨基、氨基、氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、芳基、羧酰胺、羧基、氰基、c1-c6鹵酰基、c1-c6鹵烷基、c1-c6鹵烷氧基、鹵基、羥基、硝基、硫基和硫基-c1-c6烷基。

還提供了式im化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r¹選自：1-(二甲基氨基)-2-甲基丙基、2-甲基-1-(甲基氨基)丙基、1-氨基環(huán)戊基、1-氨基環(huán)丙基、4-氨基苯基、2-氨基丙-2-基、1-氨基環(huán)己基、3-氨基氧雜環(huán)丁烷-3-基、2-(甲基氨基)丙-2-基、1-氨基-2-甲基丙-2-基、2-甲基吡咯烷-2-基、2-氨基-3-甲基丁-2-基、2-氨基丁-2-基、2-甲基-1-(甲基氨基)丙-2-基、1-甲基哌啶-2-基、3-氟吡咯烷-3-基、1，2-二甲基吡咯烷-2-基、2-(二甲基氨基)丙-2-基)、2-甲基-1-(甲基氨基)-2-苯基丙基、1-異丙基哌啶-2-基、2-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚烷-3-基和2-甲基-2-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚烷-3-基；并且

r²選自：4-氨基芐基、4-(氨基甲基)芐基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基、芐基、3-巰基丙基、2-巰基乙基、4-(巰基甲基)苯基、對甲苯基、2，4，6-三甲基苯基、4-(三氟甲氧基)苯基、2，4，6-三異丙基苯基、4-叔丁基苯基、4-氯苯基、3-氰基苯基、2-硝基苯基、4-甲氧基-2-硝基苯基、4-氨基羰基-2-硝基苯基、4-甲氧基苯基、苯基、2-氟芐基、哌啶-1-基、鄰甲苯基、4-溴苯基、萘-2-基、4-甲氧羰基苯基、2-(三氟甲基)芐基、己烷-2-基、2-甲氧基乙基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基、吡啶-3-基甲基、4-羧基苯基、3-氨基苯基、吡啶-3-基、噻吩-2-基、4-羥基苯基、4-(1-氨基環(huán)丙基)芐基、4-(1-氨基環(huán)丙基)苯基、2-甲基芐基、4-硝基芐基、4-氯芐基、苯乙基、4-溴芐基、4-氰基芐基、3-硝基芐基、4-叔丁基芐基、2-硝基芐基、4-硝基苯乙基、2-氯代-3-甲氧羰基苯基、2-氨基苯基、[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4′-氨基-[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4-氟芐基、3-(三氟甲基)芐基、3-(三氟甲氧基)芐基、3，4-二氯芐基、2-氰基芐基、3-氯芐基、4-氨基-2-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯基、4-氨基-2，3-二甲基苯基、4-氨基-5，6，7，8-四氫萘-1-基、4-氨基-3-甲基苯基、4-氨基-3-氟苯基、4-氨基-3-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲基)苯基和4-(甲氧羰基)苯基。

還提供了式in化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r¹選自：氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、氨基-雜環(huán)基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：芳基、芳基-c1-c6烷基、c1-c6烷基、c1-c6烷硫基、羧基、羧酰胺、c3-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、胍基、鹵基、c1-c6鹵酰基、c1-c6鹵烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基-c1-c6烷基、羥基和硫基；或

r¹為r^ar^bnch(r^c)-；

r^a選自：h和c1-c6烷基；

r^b為c1-c6烷基；且

r^c為r^d-c(ch3)2-；且

r^d選自：h、芳基、c3-c7環(huán)烷基和雜芳基，其各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c4酰硫基、c2-c4烯基、c1-c4烷基、c1-c4烷基氨基、c1-c4烷氧基、氨基、氨基-c1-c4烷基、鹵基、c1-c4鹵烷基、羥基、羥基-c1-c4烷基和硫基，其中c2-c4烯基、c1-c4烷基氨基及c1-c4烷氧基進一步任選被一個選自以下的取代基取代：c1-c4烷基芳基、羥基和硫基；或

r^b和r^c與其各自所鍵結(jié)的原子一起形成雜環(huán)基二基；

r²選自：c2-c6烷基、芳基、芳基-c1-c6烷基、c4-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、雜芳基、雜芳基-c1-c6烷基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧羰基、c1-c6烷基、c1-c6烷基氨基、氨基、氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、芳基、羧酰胺、羧基、氰基、c1-c6鹵酰基、c1-c6鹵烷基、c1-c6鹵烷氧基、鹵基、羥基、硝基、硫基和硫基-c1-c6烷基；并且

r³選自：芳基、雜芳基和c3-c7環(huán)烷基，各自任選被一個選自氨基和羥基的取代基取代；

前提條件是當r¹為2-甲基-1-(甲基氨基)丙基，且r³為苯基時，r²不為乙基、異丙基、正丁基和苯基。

還提供了式in化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r¹選自：1-(二甲基氨基)-2-甲基丙基、2-甲基-1-(甲基氨基)丙基、1-氨基環(huán)戊基、1-氨基環(huán)丙基、4-氨基苯基、2-氨基丙-2-基、1-氨基環(huán)己基、3-氨基氧雜環(huán)丁烷-3-基、2-(甲基氨基)丙-2-基、1-氨基-2-甲基丙-2-基、2-甲基吡咯烷-2-基、2-氨基-3-甲基丁-2-基、2-氨基丁-2-基、2-甲基-1-(甲基氨基)丙-2-基、1-甲基哌啶-2-基、3-氟吡咯烷-3-基、1，2-二甲基吡咯烷-2-基和2-(二甲基氨基)丙-2-基)；并且

r²選自：4-氨基芐基、4-(氨基甲基)芐基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基、芐基、3-巰基丙基、2-巰基乙基、4-(巰基甲基)苯基、對甲苯基、2，4，6-三甲基苯基、4-(三氟甲氧基)苯基、2，4，6-三異丙基苯基、4-叔丁基苯基、4-氯苯基、3-氰基苯基、2-硝基苯基、4-甲氧基-2-硝基苯基、4-氨基羰基-2-硝基苯基、4-甲氧基苯基、苯基、2-氟芐基、哌啶-1-基、鄰甲苯基、4-溴苯基、萘-2-基、4-甲氧羰基苯基、2-(三氟甲基)芐基、己烷-2-基、2-甲氧基乙基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基、吡啶-3-基甲基、4-羧基苯基、3-氨基苯基、吡啶-3-基、噻吩-2-基、4-羥基苯基、4-(1-氨基環(huán)丙基)芐基、4-(1-氨基環(huán)丙基)苯基、2-甲基芐基、4-硝基芐基、4-氯芐基、苯乙基、4-溴芐基、4-氰基芐基、3-硝基芐基、4-叔丁基芐基、2-硝基芐基、4-硝基苯乙基、2-氯代-3-甲氧羰基苯基、2-氨基苯基、[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4′-氨基-[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4-氟芐基、3-(三氟甲基)芐基、3-(三氟甲氧基)芐基、3，4-二氯芐基、2-氰基芐基、3-氯芐基、4-氨基-2-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯基、4-氨基-2，3-二甲基苯基、4-氨基-5，6，7，8-四氫萘-1-基、4-氨基-3-甲基苯基、4-氨基-3-氟苯基、4-氨基-3-乙基苯基、以及4-氨基-3-(三氟甲基)苯基；并且

r³選自：1h-吲哚-3-基、4-氨基苯基、4-羥基苯基、5-羥基吡啶-2-基、環(huán)己基和苯基。

前提條件是當r¹為2-甲基-1-(甲基氨基)丙基，且r³為苯基時，r²不為乙基、異丙基、正丁基和苯基。

還提供了式in化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r¹選自：1-(二甲基氨基)-2-甲基丙基、2-甲基-1-(甲基氨基)丙基、1-氨基環(huán)戊基、1-氨基環(huán)丙基、4-氨基苯基、2-氨基丙-2-基、1-氨基環(huán)己基、3-氨基氧雜環(huán)丁烷-3-基、2-(甲基氨基)丙-2-基、1-氨基-2-甲基丙-2-基、2-甲基吡咯烷-2-基、2-氨基-3-甲基丁-2-基、2-氨基丁-2-基、2-甲基-1-(甲基氨基)丙-2-基、1-甲基哌啶-2-基、3-氟吡咯烷-3-基、1，2-二甲基吡咯烷-2-基、2-(二甲基氨基)丙-2-基)、2-甲基-1-(甲基氨基)-2-苯基丙基、1-異丙基哌啶-2-基、2-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚烷-3-基和2-甲基-2-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚烷-3-基；并且

r²選自：4-氨基芐基、4-(氨基甲基)芐基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基、芐基、3-巰基丙基、2-巰基乙基、4-(巰基甲基)苯基、對甲苯基、2，4，6-三甲基苯基、4-(三氟甲氧基)苯基、2，4，6-三異丙基苯基、4-叔丁基苯基、4-氯苯基、3-氰基苯基、2-硝基苯基、4-甲氧基-2-硝基苯基、4-氨基羰基-2-硝基苯基、4-甲氧基苯基、苯基、2-氟芐基、哌啶-1-基、鄰甲苯基、4-溴苯基、萘-2-基、4-甲氧羰基苯基、2-(三氟甲基)芐基、己烷-2-基、2-甲氧基乙基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基、吡啶-3-基甲基、4-羧基苯基、3-氨基苯基、吡啶-3-基、噻吩-2-基、4-羥基苯基、4-(1-氨基環(huán)丙基)芐基、4-(1-氨基環(huán)丙基)苯基、2-甲基芐基、4-硝基芐基、4-氯芐基、苯乙基、4-溴芐基、4-氰基芐基、3-硝基芐基、4-叔丁基芐基、2-硝基芐基、4-硝基苯乙基、2-氯代-3-甲氧羰基苯基、2-氨基苯基、[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4′-氨基-[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4-氟芐基、3-(三氟甲基)芐基、3-(三氟甲氧基)芐基、3，4-二氯芐基、2-氰基芐基、3-氯芐基、4-氨基-2-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯基、4-氨基-2，3-二甲基苯基、4-氨基-5，6，7，8-四氫萘-1-基、4-氨基-3-甲基苯基、4-氨基-3-氟苯基、4-氨基-3-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲基)苯基和4-(甲氧羰基)苯基；并且

r³選自：1h-吲哚-3-基、4-氨基苯基、4-羥基苯基、5-羥基吡啶-2-基、環(huán)己基和苯基。

前提條件是當r¹為2-甲基-1-(甲基氨基)丙基，且r³為苯基時，r²不為乙基、異丙基、正丁基和苯基。

還提供了式vi化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r⁶選自：氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、氨基-雜環(huán)基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：芳基、芳基-c1-c6烷基、c1-c6烷基、c1-c6烷硫基、羧基、羧酰胺、c3-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、胍基、鹵基、c1-c6鹵酰基、c1-c6鹵烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基-c1-c6烷基、羥基和硫基；或

r⁶為r^er^fnch(r^g)-；

r^e選自：h和c1-c6烷基；

r^f為c1-c6烷基；且

r^g為r^h-c(ch3)2-；且

r^h選自：h、芳基、c3-c7環(huán)烷基和雜芳基，其各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c4酰硫基、c2-c4烯基、c1-c4烷基、c1-c4烷基氨基、c1-c4烷氧基、氨基、氨基-c1-c4烷基、鹵基、c1-c4鹵烷基、羥基、羥基-c1-c4烷基和硫基，其中c2-c4烯基、c1-c4烷基氨基及c1-c4烷氧基進一步任選被一個選自以下的取代基取代：c1-c4烷基芳基、羥基和硫基；或

r^e和r^f與其各自所鍵結(jié)的原子一起形成雜環(huán)基二基；

r⁷為任選被c1-c6烷硫基取代的c2-c4烷基；

r⁸為任選被c1-c6烷硫基取代的c2-c4烷基；

r⁹選自：h和c1-c3烷基；

r¹⁰選自：c1-c6烷基、芳基、芳基-c1-c6烷基、c3-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、雜芳基、雜芳基-c1-c6烷基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧羰基、c1-c6烷基、c1-c6烷基氨基、氨基、氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、芳基、羧酰胺、羧基、氰基、c1-c6鹵?；?、c1-c6鹵烷基、c1-c6鹵烷氧基、鹵基、羥基、硝基、硫基和硫基-c1-c6烷基；

y為-c(o)nhch(ch2r¹¹)-，或y不存在；并且

r¹¹選自：芳基、雜芳基和c3-c7環(huán)烷基，各自任選被一個選自氨基和羥基的取代基取代。

還提供了式vi化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r⁶選自：1-(二甲基氨基)-2-甲基丙基、2-甲基-1-(甲基氨基)丙基、1-氨基環(huán)戊基、1-氨基環(huán)丙基、4-氨基苯基、2-氨基丙-2-基、1-氨基環(huán)己基、3-氨基氧雜環(huán)丁烷-3-基、2-(甲基氨基)丙-2-基、1-氨基-2-甲基丙-2-基、2-甲基吡咯烷-2-基、2-氨基-3-甲基丁-2-基、2-氨基丁-2-基、2-甲基-1-(甲基氨基)丙-2-基、1-甲基哌啶-2-基、3-氟吡咯烷-3-基、1，2-二甲基吡咯烷-2-基、2-(二甲基氨基)丙-2-基)、2-甲基-1-(甲基氨基)-2-苯基丙基、1-異丙基哌啶-2-基、2-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚烷-3-基和2-甲基-2-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚烷-3-基；

r⁷選自：異丙基、異丁基、仲丁基、叔丁基及2-(甲硫基)乙基；

r⁸選自：異丙基、異丁基、仲丁基和2-(甲硫基)乙基；

r⁹選自：甲基、乙基和正丙基；

r¹⁰選自：4-氨基芐基、4-(氨基甲基)芐基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基、芐基、3-巰基丙基、2-巰基乙基、4-(巰基甲基)苯基、對甲苯基、2，4，6-三甲基苯基、4-(三氟甲氧基)苯基、2，4，6-三異丙基苯基、4-叔丁基苯基、4-氯苯基、3-氰基苯基、2-硝基苯基、4-甲氧基-2-硝基苯基、4-氨基羰基-2-硝基苯基、4-甲氧基苯基、苯基、2-氟芐基、哌啶-1-基、鄰甲苯基、4-溴苯基、萘-2-基、4-甲氧羰基苯基、2-(三氟甲基)芐基、己烷-2-基、2-甲氧基乙基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基、吡啶-3-基甲基、4-羧基苯基、3-氨基苯基、吡啶-3-基、噻吩-2-基、4-羥基苯基、4-(1-氨基環(huán)丙基)芐基、4-(1-氨基環(huán)丙基)苯基、2-甲基芐基、4-硝基芐基、4-氯芐基、苯乙基、4-溴芐基、4-氰基芐基、3-硝基芐基、4-叔丁基芐基、2-硝基芐基、4-硝基苯乙基、2-氯代-3-甲氧羰基苯基、2-氨基苯基、[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4′-氨基-[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4-氟芐基、3-(三氟甲基)芐基、3-(三氟甲氧基)芐基、3，4-二氯芐基、2-氰基芐基、3-氯芐基、4-氨基-2-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯基、4-氨基-2，3-二甲基苯基、4-氨基-5，6，7，8-四氫萘-1-基、4-氨基-3-甲基苯基、4-氨基-3-氟苯基、4-氨基-3-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲基)苯基和4-(甲氧羰基)苯基；

y為-c(o)nhch(ch2r¹¹)-，或y不存在；并且

r¹¹選自：1h-吲哚-3-基、4-氨基苯基、4-羥基苯基、5-羥基吡啶-2-基、環(huán)己基和苯基。

還提供了式vii化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r⁶選自：氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、氨基-雜環(huán)基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：芳基、芳基-c1-c6烷基、c1-c6烷基、c1-c6烷硫基、羧基、羧酰胺、c3-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、胍基、鹵基、c1-c6鹵酰基、c1-c6鹵烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基-c1-c6烷基、羥基和硫基；或

r⁶為r^er^fnch(r^g)-；

r^e選自：h和c1-c6烷基；

r^f為c1-c6烷基；且

r^g為r^h-c(ch3)2-；且

r^h選自：h、芳基、c3-c7環(huán)烷基和雜芳基，其各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c4酰硫基、c2-c4烯基、c1-c4烷基、c1-c4烷基氨基、c1-c4烷氧基、氨基、氨基-c1-c4烷基、鹵基、c1-c4鹵烷基、羥基、羥基-c1-c4烷基和硫基，其中c2-c4烯基、c1-c4烷基氨基及c1-c4烷氧基進一步任選被一個選自以下的取代基取代：c1-c4烷基芳基、羥基和硫基；或

r^e和r^f與其各自所鍵結(jié)的原子一起形成雜環(huán)基二基；

r⁷為任選被c1-c6烷硫基取代的c2-c4烷基；

r⁸為任選被c1-c6烷硫基取代的c2-c4烷基；

r⁹選自：h和c1-c3烷基；

r¹⁰選自：c1-c6烷基、芳基、芳基-c1-c6烷基、c3-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、雜芳基、雜芳基-c1-c6烷基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧羰基、c1-c6烷基、c1-c6烷基氨基、氨基、氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、芳基、羧酰胺、羧基、氰基、c1-c6鹵?；?、c1-c6鹵烷基、c1-c6鹵烷氧基、鹵基、羥基、硝基、硫基和硫基-c1-c6烷基；

y為-c(o)nhch(ch2r¹¹)-，或y不存在；并且

r¹¹選自：芳基、雜芳基和c3-c7環(huán)烷基，各自任選被一個選自氨基和羥基的取代基取代。

還提供了式vii化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r⁶選自：1-(二甲基氨基)-2-甲基丙基、2-甲基-1-(甲基氨基)丙基、1-氨基環(huán)戊基、1-氨基環(huán)丙基、4-氨基苯基、2-氨基丙-2-基、1-氨基環(huán)己基、3-氨基氧雜環(huán)丁烷-3-基、2-(甲基氨基)丙-2-基、1-氨基-2-甲基丙-2-基、2-甲基吡咯烷-2-基、2-氨基-3-甲基丁-2-基、2-氨基丁-2-基、2-甲基-1-(甲基氨基)丙-2-基、1-甲基哌啶-2-基、3-氟吡咯烷-3-基、1，2-二甲基吡咯烷-2-基、2-(二甲基氨基)丙-2-基)、2-甲基-1-(甲基氨基)-2-苯基丙基、1-異丙基哌啶-2-基、2-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚烷-3-基和2-甲基-2-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚烷-3-基；

r⁷選自：異丙基、異丁基、仲丁基、叔丁基及2-(甲硫基)乙基；

r⁸選自：異丙基、異丁基、仲丁基及2-(甲硫基)乙基；

r⁹選自：甲基、乙基和正丙基；

r¹⁰選自：4-氨基芐基、4-(氨基甲基)芐基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基、芐基、3-巰基丙基、2-巰基乙基、4-(巰基甲基)苯基、對甲苯基、2，4，6-三甲基苯基、4-(三氟甲氧基)苯基、2，4，6-三異丙基苯基、4-叔丁基苯基、4-氯苯基、3-氰基苯基、2-硝基苯基、4-甲氧基-2-硝基苯基、4-氨基羰基-2-硝基苯基、4-甲氧基苯基、苯基、2-氟芐基、哌啶-1-基、鄰甲苯基、4-溴苯基、萘-2-基、4-甲氧羰基苯基、2-(三氟甲基)芐基、己烷-2-基、2-甲氧基乙基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基、吡啶-3-基甲基、4-羧基苯基、3-氨基苯基、吡啶-3-基、噻吩-2-基、4-羥基苯基、4-(1-氨基環(huán)丙基)芐基、4-(1-氨基環(huán)丙基)苯基、2-甲基芐基、4-硝基芐基、4-氯芐基、苯乙基、4-溴芐基、4-氰基芐基、3-硝基芐基、4-叔丁基芐基、2-硝基芐基、4-硝基苯乙基、2-氯代-3-甲氧羰基苯基、2-氨基苯基、[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4′-氨基-[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4-氟芐基、3-(三氟甲基)芐基、3-(三氟甲氧基)芐基、3，4-二氯芐基、2-氰基芐基、3-氯芐基、4-氨基-2-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯基、4-氨基-2，3-二甲基苯基、4-氨基-5，6，7，8-四氫萘-1-基、4-氨基-3-甲基苯基、4-氨基-3-氟苯基、4-氨基-3-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲基)苯基和4-(甲氧羰基)苯基；

y為-c(o)nhch(ch2r¹¹)-，或y不存在；并且

r¹¹選自：1h-吲哚-3-基、4-氨基苯基、4-羥基苯基、5-羥基吡啶-2-基、環(huán)己基和苯基。

還提供了式viii化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r¹²選自：氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、氨基-雜環(huán)基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：芳基、芳基-c1-c6烷基、c1-c6烷基、c1-c6烷硫基、羧基、羧酰胺、c3-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、胍基、鹵基、c1-c6鹵酰基、c1-c6鹵烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基-c1-c6烷基、羥基和硫基；或

r¹²為rⁱr^jnch(r^k)-；

rⁱ選自：h和c1-c6烷基；

r^j為c1-c6烷基；且

r^k為r^m-c(ch3)2-；且

r^m選自：h、芳基、c3-c7環(huán)烷基和雜芳基，其各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c4酰硫基、c2-c4烯基、c1-c4烷基、c1-c4烷基氨基、c1-c4烷氧基、氨基、氨基-c1-c4烷基、鹵基、c1-c4鹵烷基、羥基、羥基-c1-c4烷基和硫基，其中c2-c4烯基、c1-c4烷基氨基及c1-c4烷氧基進一步任選被一個選自以下的取代基取代：c1-c4烷基芳基、羥基和硫基；或

rⁱ和r^j與其各自所鍵結(jié)的原子一起形成雜環(huán)基二基；

r¹³為任選被c1-c6烷硫基取代的c2-c4烷基；

r¹⁴為任選被c1-c6烷硫基取代的c2-c4烷基；

r¹⁵選自：c2-c6烷基、芳基、芳基-c1-c6烷基、c4-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、雜芳基、雜芳基-c1-c6烷基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧羰基、c1-c6烷基、c1-c6烷基氨基、氨基、氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、芳基、羧酰胺、羧基、氰基、c1-c6鹵?；?、c1-c6鹵烷基、c1-c6鹵烷氧基、鹵基、羥基、硝基、硫基和硫基-c1-c6烷基；

z為-c(o)nhch(ch2r¹⁶)-，或z不存在；并且

r¹⁶選自：芳基、雜芳基和c3-c7環(huán)烷基，各自任選被一個選自氨基和羥基的取代基取代；

前提條件是當r¹²為2-甲基-1-(甲基氨基)丙基，r¹³為異丙基，且r¹⁴為仲丁基，且z為-c(o)nhch(ch2ph)-時，r¹⁵不為乙基、異丙基、正丁基和苯基。

還提供了式viii化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r¹²選自：1-(二甲基氨基)-2-甲基丙基、2-甲基-1-(甲基氨基)丙基、1-氨基環(huán)戊基、1-氨基環(huán)丙基、4-氨基苯基、2-氨基丙-2-基、1-氨基環(huán)己基、3-氨基氧雜環(huán)丁烷-3-基、2-(甲基氨基)丙-2-基、1-氨基-2-甲基丙-2-基、2-甲基吡咯烷-2-基、2-氨基-3-甲基丁-2-基、2-氨基丁-2-基、2-甲基-1-(甲基氨基)丙-2-基、1-甲基哌啶-2-基、3-氟吡咯烷-3-基、1，2-二甲基吡咯烷-2-基、2-(二甲基氨基)丙-2-基)、2-甲基-1-(甲基氨基)-2-苯基丙基、1-異丙基哌啶-2-基、2-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚烷-3-基和2-甲基-2-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚烷-3-基；

r¹³選自：異丙基、異丁基、仲丁基、叔丁基及2-(甲硫基)乙基；

r¹⁴選自：異丙基、異丁基、仲丁基及2-(甲硫基)乙基；

r¹⁵選自：4-氨基芐基、4-(氨基甲基)芐基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基、芐基、3-巰基丙基、2-巰基乙基、4-(巰基甲基)苯基、對甲苯基、2，4，6-三甲基苯基、4-(三氟甲氧基)苯基、2，4，6-三異丙基苯基、4-叔丁基苯基、4-氯苯基、3-氰基苯基、2-硝基苯基、4-甲氧基-2-硝基苯基、4-氨基羰基-2-硝基苯基、4-甲氧基苯基、苯基、2-氟芐基、哌啶-1-基、鄰甲苯基、4-溴苯基、萘-2-基、4-甲氧羰基苯基、2-(三氟甲基)芐基、己烷-2-基、2-甲氧基乙基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基、吡啶-3-基甲基、4-羧基苯基、3-氨基苯基、吡啶-3-基、噻吩-2-基、4-羥基苯基、4-(1-氨基環(huán)丙基)芐基、4-(1-氨基環(huán)丙基)苯基、2-甲基芐基、4-硝基芐基、4-氯芐基、苯乙基、4-溴芐基、4-氰基芐基、3-硝基芐基、4-叔丁基芐基、2-硝基芐基、4-硝基苯乙基、2-氯代-3-甲氧羰基苯基、2-氨基苯基、[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4′-氨基-[1，1′-聯(lián)苯]-4-基、4-氟芐基、3-(三氟甲基)芐基、3-(三氟甲氧基)芐基、3，4-二氯芐基、2-氰基芐基、3-氯芐基、4-氨基-2-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯基、4-氨基-2，3-二甲基苯基、4-氨基-5，6，7，8-四氫萘-1-基、4-氨基-3-甲基苯基、4-氨基-3-氟苯基、4-氨基-3-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲基)苯基和4-(甲氧羰基)苯基；

z為-c(o)nhch(ch2r¹⁶)-，或z不存在；并且

r¹⁶選自：1h-吲哚-3-基、4-氨基苯基、4-羥基苯基、5-羥基吡啶-2-基、環(huán)己基和苯基；

前提條件是當r¹²為2-甲基-1-(甲基氨基)丙基，r¹³為異丙基，且r¹⁴為仲丁基，且z為-c(o)nhch(ch2ph)-時，r¹⁵不為乙基、異丙基、正丁基和苯基。

還提供了式viiia化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r¹²選自：氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、氨基-雜環(huán)基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：芳基、芳基-c1-c6烷基、c1-c6烷基、c1-c6烷硫基、羧基、羧酰胺、c3-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、胍基、鹵基、c1-c6鹵?；?、c1-c6鹵烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基-c1-c6烷基、羥基和硫基；或

r¹²為rⁱr^jnch(r^k)-；

rⁱ選自：h和c1-c6烷基；

r^j為c1-c6烷基；且

r^k為r^m-c(ch3)2-；且

r^m選自：h、芳基、c3-c7環(huán)烷基和雜芳基，其各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c4酰硫基、c2-c4烯基、c1-c4烷基、c1-c4烷基氨基、c1-c4烷氧基、氨基、氨基-c1-c4烷基、鹵基、c1-c4鹵烷基、羥基、羥基-c1-c4烷基和硫基，其中c2-c4烯基、c1-c4烷基氨基及c1-c4烷氧基進一步任選被一個選自以下的取代基取代：c1-c4烷基芳基、羥基和硫基；或

rⁱ和r^j與其各自所鍵結(jié)的原子一起形成雜環(huán)基二基；

r¹³為任選被c1-c6烷硫基取代的c2-c4烷基；

r¹⁴為任選被c1-c6烷硫基取代的c2-c4烷基；并且

r¹⁵選自：c1-c6烷基、芳基、芳基-c1-c6烷基、c3-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、雜芳基、雜芳基-c1-c6烷基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧羰基、c1-c6烷基、c1-c6烷基氨基、氨基、氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、芳基、羧酰胺、羧基、氰基、c1-c6鹵?；?、c1-c6鹵烷基、c1-c6鹵烷氧基、鹵基、羥基、硝基、硫基和硫基-c1-c6烷基。

還提供了式viiia化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r¹²選自：1-(二甲基氨基)-2-甲基丙基、2-甲基-1-(甲基氨基)丙基、1-氨基環(huán)戊基、1-氨基環(huán)丙基、4-氨基苯基、2-氨基丙-2-基、1-氨基環(huán)己基、3-氨基氧雜環(huán)丁烷-3-基、2-(甲基氨基)丙-2-基、1-氨基-2-甲基丙-2-基、2-甲基吡咯烷-2-基、2-氨基-3-甲基丁-2-基、2-氨基丁-2-基、2-甲基-1-(甲基氨基)丙-2-基、1-甲基哌啶-2-基、3-氟吡咯烷-3-基、1，2-二甲基吡咯烷-2-基、2-(二甲基氨基)丙-2-基)、2-甲基-1-(甲基氨基)-2-苯基丙基、1-異丙基哌啶-2-基、2-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚烷-3-基和2-甲基-2-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚烷-3-基；

r¹³選自：異丙基、異丁基、仲丁基、叔丁基及2-(甲硫基)乙基；

r¹⁴選自：異丙基、異丁基、仲丁基及2-(甲硫基)乙基；并且

r¹⁵選自：4-氨基芐基、4-(氨基甲基)芐基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基、芐基、3-巰基丙基、2-巰基乙基、4-(巰基甲基)苯基、對甲苯基、2，4，6-三甲基苯基、4-(三氟甲氧基)苯基、2，4，6-三異丙基苯基、4-叔丁基苯基、4-氯苯基、3-氰基苯基、2-硝基苯基、4-甲氧基-2-硝基苯基、4-氨基羰基-2-硝基苯基、4-甲氧基苯基、苯基、2-氟芐基、哌啶-1-基、鄰甲苯基、4-溴苯基、萘-2-基、4-甲氧羰基苯基、2-(三氟甲基)芐基、己烷-2-基、2-甲氧基乙基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基、吡啶-3-基甲基、4-羧基苯基、3-氨基苯基、吡啶-3-基、噻吩-2-基、4-羥基苯基、4-(1-氨基環(huán)丙基)芐基、4-(1-氨基環(huán)丙基)苯基、2-甲基芐基、4-硝基芐基、4-氯芐基、苯乙基、4-溴芐基、4-氰基芐基、3-硝基芐基、4-叔丁基芐基、2-硝基芐基、4-硝基苯乙基、2-氯代-3-甲氧羰基苯基、2-氨基苯基、[1，1＇-聯(lián)苯]-4-基、4＇-氨基-[1，1＇-聯(lián)苯]-4-基、4-氟芐基、3-(三氟甲基)芐基、3-(三氟甲氧基)芐基、3，4-二氯芐基、2-氰基芐基、3-氯芐基、4-氨基-2-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯基、4-氨基-2，3-二甲基苯基、4-氨基-5，6，7，8-四氫萘-1-基、4-氨基-3-甲基苯基、4-氨基-3-氟苯基、4-氨基-3-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲基)苯基和4-(甲氧羰基)苯基。

還提供了式viiib化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r¹²選自：氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、氨基-雜環(huán)基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：芳基、芳基-c1-c6烷基、c1-c6烷基、c1-c6烷硫基、羧基、羧酰胺、c3-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、胍基、鹵基、c1-c6鹵?；1-c6鹵烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基-c1-c6烷基、羥基和硫基；或

r¹²為rⁱr^jnch(r^k)-；

rⁱ選自：h和c1-c6烷基；

r^j為c1-c6烷基；且

r^k為r^m-c(ch3)2-；且

r^m選自：h、芳基、c3-c7環(huán)烷基和雜芳基，其各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c4酰硫基、c2-c4烯基、c1-c4烷基、c1-c4烷基氨基、c1-c4烷氧基、氨基、氨基-c1-c4烷基、鹵基、c1-c4鹵烷基、羥基、羥基-c1-c4烷基和硫基，其中c2-c4烯基、c1-c4烷基氨基及c1-c4烷氧基進一步任選被一個選自以下的取代基取代：c1-c4烷基芳基、羥基和硫基；或

rⁱ和r^j與其各自所鍵結(jié)的原子一起形成雜環(huán)基二基；

r¹³為任選被c1-c6烷硫基取代的c2-c4烷基；

r¹⁴為任選被c1-c6烷硫基取代的c2-c4烷基；

r¹⁵選自：c2-c6烷基、芳基、芳基-c1-c6烷基、c4-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c6烷基、雜芳基、雜芳基-c1-c6烷基和雜環(huán)基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧羰基、c1-c6烷基、c1-c6烷基氨基、氨基、氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、芳基、羧酰胺、羧基、氰基、c1-c6鹵?；?、c1-c6鹵烷基、c1-c6鹵烷氧基、鹵基、羥基、硝基、硫基和硫基-c1-c6烷基；并且

r¹⁶選自：芳基、雜芳基和c3-c7環(huán)烷基，各自任選被一個選自氨基和羥基的取代基取代；

前提條件是當r¹²為2-甲基-1-(甲基氨基)丙基，r¹³為異丙基，且r¹⁴為仲丁基，且r¹⁶為苯基時，r¹⁵不為乙基、異丙基、正丁基和苯基。

還提供了式viiib化合物：

及其藥學上可接受的鹽，其中：

r¹²選自：1-(二甲基氨基)-2-甲基丙基、2-甲基-1-(甲基氨基)丙基、1-氨基環(huán)戊基、1-氨基環(huán)丙基、4-氨基苯基、2-氨基丙-2-基、1-氨基環(huán)己基、3-氨基氧雜環(huán)丁烷-3-基、2-(甲基氨基)丙-2-基、1-氨基-2-甲基丙-2-基、2-甲基吡咯烷-2-基、2-氨基-3-甲基丁-2-基、2-氨基丁-2-基、2-甲基-1-(甲基氨基)丙-2-基、1-甲基哌啶-2-基、3-氟吡咯烷-3-基、1，2-二甲基吡咯烷-2-基、2-(二甲基氨基)丙-2-基)、2-甲基-1-(甲基氨基)-2-苯基丙基、1-異丙基哌啶-2-基、2-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚烷-3-基和2-甲基-2-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚烷-3-基；

r¹³選自：異丙基、異丁基、仲丁基、叔丁基及2-(甲硫基)乙基；

r¹⁴選自：異丙基、異丁基、仲丁基及2-(甲硫基)乙基；

r¹⁵選自：4-氨基芐基、4-(氨基甲基)芐基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基、芐基、3-巰基丙基、2-巰基乙基、4-(巰基甲基)苯基、對甲苯基、2，4，6-三甲基苯基、4-(三氟甲氧基)苯基、2，4，6-三異丙基苯基、4-叔丁基苯基、4-氯苯基、3-氰基苯基、2-硝基苯基、4-甲氧基-2-硝基苯基、4-氨基羰基-2-硝基苯基、4-甲氧基苯基、苯基、2-氟芐基、哌啶-1-基、鄰甲苯基、4-溴苯基、萘-2-基、4-甲氧羰基苯基、2-(三氟甲基)芐基、己烷-2-基、2-甲氧基乙基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基、吡啶-3-基甲基、4-羧基苯基、3-氨基苯基、吡啶-3-基、噻吩-2-基、4-羥基苯基、4-(1-氨基環(huán)丙基)芐基、4-(1-氨基環(huán)丙基)苯基、2-甲基芐基、4-硝基芐基、4-氯芐基、苯乙基、4-溴芐基、4-氰基芐基、3-硝基芐基、4-叔丁基芐基、2-硝基芐基、4-硝基苯乙基、2-氯代-3-甲氧羰基苯基、2-氨基苯基、[1，1＇-聯(lián)苯]-4-基、4＇-氨基-[1，1＇-聯(lián)苯]-4-基、4-氟芐基、3-(三氟甲基)芐基、3-(三氟甲氧基)芐基、3，4-二氯芐基、2-氰基芐基、3-氯芐基、4-氨基-2-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯基、4-氨基-2，3-二甲基苯基、4-氨基-5，6，7，8-四氫萘-1-基、4-氨基-3-甲基苯基、4-氨基-3-氟苯基、4-氨基-3-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲基)苯基和4-(甲氧羰基)苯基；并且

r¹⁶選自：1h-吲哚-3-基、4-氨基苯基、4-羥基苯基、5-羥基吡啶-2-基、環(huán)己基和苯基；

前提條件是當r¹²為2-甲基-1-(甲基氨基)丙基，r¹³為異丙基，且r¹⁴為仲丁基，且r¹⁶為苯基時，r¹⁵不為乙基、異丙基、正丁基和苯基。

本發(fā)明的一些實施方案包括選自表a中所示的以下群組的一種或多種化合物的每個組合。

本發(fā)明的一些實施方案包括選自表b中所示的以下群組的一種或多種化合物的每個組合。

本發(fā)明的一些實施方案包括選自表c中所示的以下群組的一種或多種化合物的每個組合。

表a

表b

表c

另外，本發(fā)明的單獨化合物及化學種類，例如表a、表b及表c中所見的那些化合物(包括其非對映異構(gòu)物及對映異構(gòu)體)涵蓋所有藥學上可接受的鹽。式i化合物可根據(jù)由本領(lǐng)域技術(shù)人員使用的相關(guān)公開文獻方法來制備。用于這些反應(yīng)的示例性試劑和方法示于以下工作實施例中。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了一種制造本文所述的化合物的方法。

包含新型化合物的綴合物

本文所述的化合物可用于形成綴合物，例如抗體-藥物綴合物(adc)。因此，在本公開的一個實施方案中，提供式ii的綴合物組合物：

(t)-(l)-(d)

ii

其中(t)為靶向部分，(l)為任選的接頭，且(d)為式i化合物。在一個實施方案中，(t)為抗體。因此，在一個實施方案中，抗體-藥物綴合物(adc)包含式i的化合物(d)。

如熟練技術(shù)人員應(yīng)理解，廣泛多種手段可用于共價地連接(t)-(l)-(d)。任何已知的方法可用于連接綴合物組分。任何已知的接頭技術(shù)可用于將(t)連接至(d)。此外，(t)、(l)和(d)可以如熟練技術(shù)人員所認可的任何合適的方式來修飾，以便促進綴合物形成。

靶向部分(t)

本發(fā)明組合物的靶向部分(t)在其范圍內(nèi)包括(t)的任何單元，其與受體、抗原或與給定的靶細胞群有關(guān)的其它接受部分結(jié)合或反應(yīng)性地締合或復合。(t)是與設(shè)法被靶向的細胞群的部分結(jié)合、與之復合或與之反應(yīng)的分子。一方面，(t)用于將藥物(d)遞送到與(t)反應(yīng)的特定的靶細胞群。此類(t)包括但不限于大分子量蛋白，例如像全長抗體、抗體片段、較小分子量蛋白、多肽或肽、凝集素、糖蛋白、非肽、維生素、營養(yǎng)素轉(zhuǎn)運分子(如但不限于轉(zhuǎn)鐵蛋白)或任何其它細胞結(jié)合分子或物質(zhì)。

(t)可與接頭單元(l)或藥物(d)形成鍵。(t)可經(jīng)由(t)的雜原子與(l)單元形成鍵?？纱嬖谟?t)上的雜原子包括硫(在一個實施方案中，來自(t)的巰基)、氧(在一個實施方案中，來自(t)的羰基、羧基或羥基)及氮(在一個實施方案中，來自(t)的伯氨基或仲氨基)。這些雜原子可以(t)的天然狀態(tài)存在于(t)上，例如天然存在的抗體，或者可經(jīng)由化學修飾引入(t)中。

在一個實施方案中，(t)具有巰基并且(t)經(jīng)由巰基的硫原子鍵結(jié)至(l)。在另一實施方案中，(t)具有一個或多個可在化學上被修飾以引入一個或多個巰基的賴氨酸殘基。(t)經(jīng)由巰基鍵結(jié)至(l)單元?？捎糜谛揎椯嚢彼岬脑噭┌ǖ幌抻趎-琥珀酰亞胺基s-乙酰基硫基乙酸酯(sata)和2-亞氨基四氫噻吩(iminothiolane)鹽酸鹽(traut’s試劑)。

在另一實施方案中，(l)可具有一個或多個可在化學上被修飾以具有一個或多個巰基的糖基。(t)經(jīng)由巰基的硫原子鍵結(jié)至(l)。在又一實施方案中，(t)可具有一個或多個糖基，所述糖基可被氧化以提供醛(-cho)基團(參見，例如laguzza等人，1989，j.med.chem.32(3)：548-55)。相應(yīng)的醛可與(l)的一部分上的反應(yīng)性位點形成鍵。可與(t)上的羰基反應(yīng)的反應(yīng)性位點包括但不限于肼和羥胺。用于修飾供(d)的連接或締合用的蛋白質(zhì)的其它方案描述于coligan等人，currentprotocolsinproteinscience，第2卷，johnwiley&sons(2002)中，該文獻以引用的方式并入本文。

(t)可包括例如蛋白質(zhì)、多肽或肽，包括但不限于轉(zhuǎn)鐵蛋白、表皮生長因子(“egf”)、蛙皮素、促胃液素、促胃液素釋放肽、血小板源性生長因子、il-2、il-6、轉(zhuǎn)化生長因子(“tgf”)如tgf-α或tgf-β、牛痘生長因子(“vgf”)、胰島素及胰島素樣生長因子i和ii、凝集素及來自低密度脂蛋白的脫輔基蛋白。

(t)也可包括抗體，如多克隆抗體或單克隆抗體?？贵w可針對特定的抗原決定簇，包括例如癌細胞抗原、病毒抗原、微生物抗原、蛋白質(zhì)、肽、糖、化學物質(zhì)、核酸或其片段。產(chǎn)生多克隆抗體的方法在本領(lǐng)域中是已知的。針對目標抗原的單克隆抗體(mab)可通過使用本領(lǐng)域中已知的任何技術(shù)來制備。這些技術(shù)包括但不限于最初由kohler和milstein(1975，nature256，495-497)描述的雜交瘤技術(shù)、人b細胞雜交瘤技術(shù)(kozbor等人，1983，immunologytoday4：72)以及ebv-雜交瘤技術(shù)(cole等人，1985，monoclonalantibodiesandcancertherapy，alanr.liss，inc.，第77-96頁)。選擇的淋巴細胞抗體方法(slam)(babcook，j.s.等人，anovelstrategyforgeneratingmonoclonalantibodiesfromsingle，isolatedlymphocytesproducingantibodiesofdefinedspecificities.procnatlacadsciusa，1996.93(15)：第7843-8頁)及(mcleangr，olsenoa，wattin，rathanaswamip，lesliekb，babcookjs，schraderjw.recognitionofhumancytomegalovirusbyhumanprimaryimmunoglobulinsidentifiesaninnatefoundationtoanadaptiveimmuneresponse.jimmunol.2005年4月15日；174(8)：4768-78。此類抗體可以是免疫球蛋白類中的任一個，包括igg、igm、ige、iga及igd及其任何亞類。產(chǎn)生本發(fā)明中使用的mab的雜交瘤可在體外或體內(nèi)培養(yǎng)。

單克隆抗體可為例如人單克隆抗體、人源化單克隆抗體、抗體片段或嵌合抗體(例如，人-小鼠抗體)。人單克隆抗體可通過本領(lǐng)域中已知的眾多技術(shù)中的任一種來制造(例如，teng等人，1983，proc.natl.acad.sci.usa80：7308-7312；kozbor等人，1983，immunologytoday4：72-79；以及olsson等人，1982，meth.enzymol.92：3-16)。還參見huse等人，1989，science246：1275-1281及mclean等人jimmunol.2005年4月15日；174(8)：4768-78。

抗體也可為雙特異性抗體。用于制造雙特異性抗體的方法在本領(lǐng)域中是已知的。全長雙特異性抗體的傳統(tǒng)產(chǎn)生是基于兩個免疫球蛋白重鏈-輕鏈對的共表達，其中兩條鏈具有不同特異性(參見，例如milstein等人，1983，nature305：537-539；國際公布號wo93/08829；traunecker等人，1991，emboj.10：3655-3659。

根據(jù)一種不同的方法，將具有所需結(jié)合特異性的抗體可變結(jié)構(gòu)域(抗體-抗原結(jié)合位點)融合至免疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域序列。該融合優(yōu)選用包含鉸鏈、ch2及ch3區(qū)的至少一部分的免疫球蛋白重鏈恒定結(jié)構(gòu)域進行。優(yōu)選第一重鏈恒定區(qū)(ch1)含有為輕鏈結(jié)合所必需的位點，存在于融合物的至少一種中。將具有編碼免疫球蛋白重鏈融合物和(如果需要的話)免疫球蛋白輕鏈的序列的核酸插入分離的表達載體中，并且共轉(zhuǎn)染到合適的宿主生物體中。這在當用于構(gòu)建中的不等比率的三條多肽鏈提供最佳產(chǎn)率時的實施方案中調(diào)節(jié)三個多肽片段的相互比例中提供了靈活性。然而，可能當相等比率的至少兩條多肽鏈的表達造成高產(chǎn)率時或當比率不是特別重要時將兩條或所有三條多肽鏈的編碼序列插入一個表達載體中。

舉例來說，雙特異性抗體可具有雜合免疫球蛋白重鏈，該重鏈在一條臂上具有第一結(jié)合特異性，且在另一條臂上具有雜合免疫球蛋白重鏈-輕鏈對(提供第二結(jié)合特異性)。此不對稱結(jié)構(gòu)促進所需雙特異性化合物從不需要的免疫球蛋白鏈結(jié)合中的分離，因為免疫球蛋白輕鏈在僅一半的雙特異性分子中的存在提供便利的分離方式(國際公布號wo94/04690)，該專利以引用的方式整體并入本文。

關(guān)于生成雙特異性抗體的進一步細節(jié)，參見，例如suresh等人，1986，methodsinenzymology121：210；rodrigues等人，1993，j.immunology151：6954-6961；carter等人，1992，bio/technology10：163-167；carter等人，1995，j.hematotherapy4：463-470；merchant等人，1998，naturebiotechnology16：677-681。使用此類技術(shù)，可制備雙特異性抗體用于治療或預防如本文所定義的疾病中。

雙功能抗體還描述于歐洲專利公布號epa0105360中。如在此參考文獻中所公開，雜合或雙功能抗體可以生物方式，即通過細胞融合技術(shù)，或以化學方式，特別是用交聯(lián)劑或二硫橋形成試劑而得到，并且可包含全抗體或其片段。用于獲得此類雜合抗體的方法公開于例如國際公布wo83/03679和歐洲專利公布號epa0217577中，其兩者都以引用的方式并入本文。

抗體也可為抗體的功能活性片段、衍生物或類似物，其免疫特異性地結(jié)合至靶抗原(例如，癌抗原、病毒抗原、微生物抗原或結(jié)合至細胞或基質(zhì)的其它抗體)。就此而言，“功能活性”意指片段、衍生物或類似物能夠識別與該片段、衍生物或類似物所衍生自的抗體識別的抗原相同的抗原。具體地說，在示例性實施方案中，免疫球蛋白分子的獨特型的抗原性可通過缺失特異性地識別抗原的cdr序列c端的框架和cdr序列來增強。為了確定哪個cdr序列結(jié)合抗原，含有cdr序列的合成肽可用于通過本領(lǐng)域中已知的任何結(jié)合測定法與抗原的結(jié)合測定中(例如bia核心測定)(參見，例如kabat等人，1991，sequencesofproteinsofimmunologicalinterest，第五版，nationalinstituteofhealth，bethesda，md.；kabat等人，1980，j.immunology125(3)：961-969)。

其它有用的抗體包括抗體的片段，如但不限于f(ab’)2片段、fab片段、fab’、fv片段及抗體的重鏈和輕鏈二聚體或其任何最小片段，如fvs或單鏈抗體(sca)(例如，如美國專利號4,946,778；bird，1988，science242：423-42；huston等人，1988，proc.natl.acad.sci.usa85：5879-5883；及ward等人，1989，nature334：544-54中所述)。

也可使用重組抗體，如嵌合及人源化單克隆抗體，包含人和非人部分，其可使用標準重組dna技術(shù)制成。(參見，例如美國專利號4,816,567；和美國專利號4,816,397。)人源化抗體是來自非人物種的抗體分子，其具有一個或多個來自非人物種的互補決定區(qū)(cdr)和來自人免疫球蛋白分子的框架區(qū)。(參見，例如美國專利號5,585,089。)嵌合及人源化單克隆抗體可通過本領(lǐng)域中已知的重組dna技術(shù)產(chǎn)生，例如使用在以下文獻中所述的方法：國際公布號wo87/02671；歐洲專利公布號0184187；歐洲專利公布號0171496；歐洲專利公布號0173494；國際公布號wo86/01533；美國專利號4,816,567；歐洲專利公布號012023；berter等人，1988，science240：1041-1043；liu等人，1987，proc.natl.acad.sci.usa84：3439-3443；liu等人，1987，j.immunol.139：3521-3526；sun等人，1987，proc.natl.acad.sci.usa84：214-218；nishimura等人，1987，cancer.res.47：999-1005；wood等人，1985，nature314：446-449；shaw等人，1988，j.natl.cancerinst.80：1553-1559；morrison，1985，science229：1202-1207；oi等人，1986，biotechniques4：214；美國專利號5,225,539；jones等人，1986，nature321：552-525；verhoeyan等人，1988，science239：1534；以及beidler等人，1988，j.immunol.141：4053-4060。

可使用完全的人抗體。人抗體可例如使用轉(zhuǎn)基因小鼠來制備，該轉(zhuǎn)基因小鼠不能表達內(nèi)源性免疫球蛋白重鏈和輕鏈基因，但可表達人重鏈和輕鏈基因。轉(zhuǎn)基因小鼠是以正常方式用所選抗原(例如，多肽的全部或一部分)來免疫?？墒褂贸Ｒ?guī)的雜交瘤技術(shù)獲得針對抗原的單克隆抗體。由轉(zhuǎn)基因小鼠載有的人免疫球蛋白轉(zhuǎn)基因在b細胞分化期間重新排列且隨后經(jīng)歷類別轉(zhuǎn)換和體細胞突變。因此，使用此類技術(shù)有可能產(chǎn)生治療上有用的igg、iga、igm及ige抗體。關(guān)于用于產(chǎn)生人抗體的此項技術(shù)的綜述，參見lonberg和huszar(1995，int.rev.immunol.13：65-93)。關(guān)于用于產(chǎn)生人抗體和人單克隆抗體的此項技術(shù)及用于產(chǎn)生此類抗體的方案的詳細論述。參見，例如美國專利號5,625,126；5,633,425；5,569,825；5,661,016；及5,545,806。

識別所選表位的人抗體也可使用稱為“導向選擇”的技術(shù)生成。在此方法中，所選的非人單克隆抗體，例如小鼠抗體，被用于指導識別相同表位的完全的人抗體的選擇。(參見，例如jespers等人，1994，biotechnology12：899-903。)人抗體也可使用本領(lǐng)域中已知的各種技術(shù)(包括噬菌體展示文庫)產(chǎn)生(參見，例如hoogenboom和winter，1991，j.mol.biol.227：381；marks等人，1991，j.mol.biol.222：581；quan和carter，2002，“theriseofmonoclonalantibodiesastherapeutics，”anti-igeandallergicdisease，jardieu，p.m.和fickjr.，r.b，編著，marceldekker，newyork，n.y.，第20章，第427-469頁)。

在其它實施方案中，抗體是抗體的融合蛋白或其功能活性片段。舉例來說，抗體可經(jīng)由在n端或c端處的共價鍵(例如肽鍵)融合至不是抗體的另一蛋白質(zhì)(或其部分，如蛋白質(zhì)的至少10個、20個或50個氨基酸的部分)的氨基酸序列上。

抗體還包括被修飾，即通過任一類型分子的共價連接的類似物和衍生物，只要此類共價連接容許抗體保留其抗原結(jié)合免疫特異性。例如但不限于，抗體的衍生物和類似物包括已進一步例如通過糖基化、乙?；⒕垡叶蓟?、磷酸化、酰胺化、通過已知保護/封閉基團的衍生化、蛋白水解裂解、鍵結(jié)至細胞抗體單元或其它蛋白質(zhì)等被修飾的那些。眾多化學修飾中的任一種可通過已知技術(shù)進行，包括但不限于特定的化學裂解、乙酰化、甲?；?、在衣霉素存在下的代謝合成等。另外，類似物或衍生物可含有一個或多個非天然氨基酸。

抗體可在與fc受體相互作用的氨基酸殘基中具有修飾(例如，取代、缺失或添加)。具體說來，抗體包括在經(jīng)鑒定參與抗fc結(jié)構(gòu)域與fcrn受體之間的相互作用的氨基酸殘基中具有修飾的抗體(參見，例如國際公布號wo97/34631，其以引用的方式整體并入本文)。對靶抗原有免疫特異性的抗體可從商業(yè)上或其它來源獲得或者通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何方法(例如像化學合成或重組表達技術(shù))產(chǎn)生。編碼對癌細胞抗原有免疫特異性的抗體的核苷酸序列可例如從genbank數(shù)據(jù)庫或類似的數(shù)據(jù)庫、文獻出版物或通過常規(guī)的克隆及測序獲得。

可用于治療癌癥的抗體的實例包括但不限于：人源化抗her2單克隆抗體、(曲妥單抗；genentech)；(利妥昔單抗；genentech)，其是用于治療患有非何杰金氏淋巴瘤的患者的嵌合抗cd20單克隆抗體；ovarex(altarexcorporation，ma)，其是用于治療卵巢癌的鼠抗體；依決可單抗(panorex)(glaxowellcome，nc)，其是用于治療結(jié)腸直腸癌的鼠igg2a抗體；西妥昔單抗愛必妥(imclonesystemsinc.，ny)，其是用于治療表皮生長因子陽性癌癥如頭頸癌的抗egfrigg嵌合抗體；vitaxin(medimmune，inc.，md)，其是用于治療肉瘤的人源化抗體；阿侖單抗(campath)i/h(leukosite，ma)，其是用于治療慢性淋巴細胞性白血病(cll)的人源化igg1抗體；smartmi95(proteindesignlabs，inc.，ca)，其是用于治療急性骨髓性白血病(aml)的人源化抗cd33igg抗體；lymphocide(immunomedics，inc.，nj)，其是用于治療非何杰金氏淋巴瘤的人源化抗cd22igg抗體；smartid10(proteindesignlabs，inc.，ca)，其是用于治療非何杰金氏淋巴瘤的人源化抗hla-dr抗體；oncolym(techniclone，inc.，ca)其是用于治療非何杰金氏淋巴瘤的放射性標記的鼠抗hla-dr10抗體；allomune(biotransplant，ca)，其是用于治療何杰金氏病或非何杰金氏淋巴瘤的人源化抗cd2mab；阿瓦斯汀(genentech，inc.，ca)，其是用于治療肺及結(jié)腸直腸癌的抗vegf人源化抗體；依帕珠單抗(epratuzamab)(immunomedics，inc.，nj和amgen，ca)，其是用于治療非何杰金氏淋巴瘤的抗cd22抗體；以及ceacide(immunomedics，nj)，其是用于治療結(jié)腸直腸癌的人源化抗cea抗體。

適用于治療癌癥的其它抗體包括但不限于針對以下抗原的抗體(示例性癌癥在括號中示出)：ca125(卵巢癌)、ca15-3(癌瘤)、ca19-9(癌瘤)、l6(癌瘤)、lewisy(癌瘤)、lewisx(癌瘤)、甲胎蛋白(癌瘤)、ca242(結(jié)腸直腸癌)、胎盤堿性磷酸酶(癌瘤)、前列腺特異性膜抗原(前列腺癌)、前列腺酸性磷酸酶(前列腺癌)、表皮生長因子(癌瘤)、mage-1(癌瘤)、mage-2(癌瘤)、mage-3(癌瘤)、mage-4(癌瘤)、抗轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(癌瘤)、p97(黑色素瘤)、muc1-klh(乳腺癌)、cea(結(jié)腸直腸癌)、gp100(黑色素瘤癌)、mart1(黑色素瘤)、前列腺特異性抗原(psa)(前列腺癌)、il-2受體(t細胞白血病和淋巴瘤)、cd20(非何杰金氏淋巴瘤)、cd52(白血病)、cd33(白血病)、cd22(淋巴瘤)、人絨毛膜促性腺激素(癌瘤)、cd38(多發(fā)性骨髓瘤)、cd40(淋巴瘤)、粘蛋白(癌瘤)、p21(癌瘤)、mpg(黑色素瘤)、以及neu致癌基因產(chǎn)物(癌瘤)。一些特異性、有用的抗體包括但不限于br96mab(trail等人，1993，science261：212-215)、br64(trail等人，1997，cancerresearch57：100-105)、針對cd40抗原的mab，如s2c6mab(francisco等人，2000，cancerres.60：3225-3231)及其嵌合和人源化變體、針對cd33抗原的mab；針對epha2抗原的mab；針對cd70抗原的mab，如1f6mab和2f2mab及其嵌合和人源化變體；以及針對cd30抗原的mab，如ac10(bowen等人，1993，j.immunol.151：5896-5906；wahl等人，2002，cancerres.62(13)：3736-42)及其嵌合和人源化變體。可使用結(jié)合至腫瘤相關(guān)抗原的許多其它內(nèi)化抗體并且已經(jīng)有了綜述(參見，例如franke等人，2000，cancerbiother.radiopharm.15：45976；murray，2000，semin.oncol.27：6470；breitling等人，recombinantantibodies，johnwiley，andsons，newyork，1998)。

抗體也可以是結(jié)合至存在于靶細胞或靶細胞群上的抗原的抗體。舉例來說，與一種或多種正常細胞(例如，非癌細胞)相比，跨膜多肽及其它標志物可特異性地在一種或多種特定類型的靶細胞(例如癌細胞)的表面上表達。與在正常細胞表面上的那些相比，此類標志物經(jīng)常更大量地在靶細胞表面上表達，或展現(xiàn)更大的免疫原性。此類細胞表面抗原多肽的鑒別引出特異性地靶向細胞以便經(jīng)由基于抗體的療法進行破壞的能力。因此，在一些實施方案中，抗體包括但不限于針對腫瘤相關(guān)抗原(taa)的抗體。此類腫瘤相關(guān)抗原是本領(lǐng)域中已知的，并且可制備以便使用本領(lǐng)域中公知的方法和信息來用于生成抗體。

另參見ep2552957，wo/2012/116453，wo/2012/032080。另參見zybody^tm，http：//www.zyngenia.com/science-technology/technology-approach.asp。另參見人僅有重鏈的抗體技術(shù)，http：//www.crescendobiologics.com/。另參見wo2010001251，基于酵母的人抗體酵母基平臺http：//www.adimab.com/platform-overview，mablogix^tm平臺http：//www.dna.com/ourapproach/complementarytechnologies/antibodydiscovery，單克隆發(fā)現(xiàn)平臺http：//www.igenica.com/science.php，wo2009/157771，ep2560993，wo2013004842，wo2012166560。

除抗體之外，本發(fā)明組合物的靶向部分(t)在其范圍內(nèi)還包括(t)的任何單元，其與受體、抗原或與給定的靶細胞群有關(guān)的其它接受部分結(jié)合或反應(yīng)性地締合或復合。(t)是與設(shè)法被靶向的細胞群的部分結(jié)合、與之復合或與之反應(yīng)的分子。舉例來說，來源于不同來源的細胞表面受體的配體包括在(t)內(nèi)，包括來源于人細胞的那些、來源于細菌的配體、以及源自病原體的配體。各種各樣的適當靶向部分在本領(lǐng)域中是已知的，例如，參見wo2013117705。

接頭部分(l)

本發(fā)明組合物任選地還包括接頭部分(l)。(l)是雙功能化合物，其可用于連接(d)和(t)以形成綴合物組合物t-l-d。此類綴合物允許將藥物選擇性遞送至靶細胞(例如腫瘤細胞)。(l)包括二價取代基，如烷基二基、芳基二基、雜芳基二基、部分如：-(cr2)no(cr2)n-、烷氧基(例如，聚亞乙基氧基、peg、聚亞甲基氧基)和烷基氨基(例如，聚乙烯氨基、jeffamine^tm)的重復單元；以及二酸酯和酰胺，包括琥珀酸酯、琥珀酰胺、二乙醇酸酯、丙二酸酯和己酰胺。

本發(fā)明組合物可使用具有用于結(jié)合至(d)和(t)的反應(yīng)性位點的(l)單元來制備。在一些實施方案中，(l)具有反應(yīng)性位點，其具有對(t)上存在的親核基團有反應(yīng)性的親電子基團。(t)上的有用的親核基團包括但不限于巰基、羥基及氨基。(t)的親核基團的雜原子對(l)上的親電子基團有反應(yīng)性并且與(l)形成共價鍵。有用的親電子基團包括但不限于馬來酰亞胺和鹵代乙酰胺基團。(t)上的親核基團提供用于連接至(l)的方便的位點。

在另一實施方案中，(l)具有反應(yīng)性位點，其具有對(t)上存在的親電子基團有反應(yīng)性的親核基團。(t)上的有用的親電子基團包括但不限于醛和酮羰基。(l)的親核基團的雜原子可與(t)上的親電子基團反應(yīng)并且與(t)形成共價鍵。(l)上的有用的親核基團包括但不限于酰肼、肟、氨基、肼、縮氨基硫脲、肼羧酸酯和芳酰肼。(t)上的親電子基團提供用于連接至(l)的方便的位點。

羧酸官能團和氯甲酸酯官能團也是用于(l)的有用的反應(yīng)性位點，因為它們可與(d)的氨基反應(yīng)以形成酰胺鍵。(l)上的碳酸酯官能團也適用作反應(yīng)性位點，如但不限于碳酸對硝基苯酯，其可與(d)的氨基反應(yīng)以形成氨基甲酸酯鍵。

應(yīng)當理解，在現(xiàn)有技術(shù)中教導的任何接頭部分，且特別是用于藥物遞送的情形中所教導的那些，可用于本發(fā)明中。不希望限制先前陳述的范圍，在一個實施方案中，(l)包含wo2012/113847中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含u.s.8,288,352中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含u.s.5,028,697中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含u.s.5,006,652中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含u.s.5,094,849中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含u.s.5,053,394中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含u.s.5,122,368中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含u.s.5,387,578中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含u.s.5,547,667中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含u.s.5,622,929中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含u.s.5,708,146中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含u.s.6,468,522中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含u.s.6,103,236中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含u.s.6,638,509中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含u.s.6,214,345中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含u.s.6,759,509中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含wo2007/103288中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含wo2008/083312中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含wo2003/068144中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含wo2004/016801中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含wo2009/134976中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含wo2009/134952中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含wo2009/134977中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含wo2002/08180中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含wo2004/043493中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含wo2007/018431中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含wo2003/026577中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含wo2005/077090中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含wo2005/082023中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含wo2007/011968中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含wo2007/038658中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含wo2007/059404中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含wo2006/110476中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含wo2005/112919中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含wo2008/103693中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含u.s.6,756,037中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含u.s.7,087,229中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含u.s.7,122,189中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含u.s.7,332,164中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含u.s.5,556,623中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含u.s.5,643,573中所公開的接頭部分。在另一實施方案中，(l)包含u.s.5,665,358中所公開的接頭部分。

在一個優(yōu)選實施方案中，(l)包含2013年12月27日提交的美國臨時申請61/921,242中所公開的接頭部分。因此，提供式iii的綴合物組合物：

(t)-(l¹)-(d¹)

iii

其中(t)為靶向部分，其中(d¹)具有以下結(jié)構(gòu)(iv)：

其中r¹和x如本文上文和下文中所述；

其中r^2a選自：c2-c6烷基二基、芳基二基、c4-c7環(huán)烷基二基、雜芳基二基和雜環(huán)基二基，各自任選被一個或多個選自以下的取代基取代：c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧羰基、c1-c6烷基、c1-c6烷基氨基、氨基、氨基-c1-c6烷基、氨基-芳基、氨基-c3-c7環(huán)烷基、芳基、羧酰胺、羧基、氰基、c1-c6鹵烷基、c1-c6鹵烷氧基、鹵基、羥基、硝基、硫基和硫基-c1-c6烷基；

且其中(l¹)-(t)具有以下結(jié)構(gòu)(v)

(aa)1-(aa)n-(l²)-(t)

v

其中鍵結(jié)至式iv中的r^2a的-nh-基團與式v中的(aa)1形成肽鍵(jpb)，其中jpb是酶促可裂解的，其中每個aa獨立地為氨基酸，其中n為0至25的整數(shù)，其中(l²)任選地為接頭(l¹)的剩余部分，其中(t)為靶向部分，且其中(aa)1-(aa)n結(jié)合起來包含能夠促進jpb的酶促裂解的氨基酸序列。

也可使用包含自分解組分的接頭(l)。例如，參見美國專利號6,214,345。自分解組分的一個實例為對氨基芐基氨基甲?；?pabc)。

可商購獲得的接頭可用于本發(fā)明。舉例來說，如本文中所示，可使用可商購獲得的可裂解接頭6-[3′(2-吡啶基二硫基)-丙酰胺基]己酸磺基琥珀酰亞胺酯(磺基-lc-spdp：thermopierce目錄號21650)和非可裂解的接頭4-[n-馬來酰亞胺基甲基]環(huán)己烷-1-羧酸琥珀酰亞胺酯(smcc：thermopierce目錄號22360)。

還參見wo2012171020，wo2010138719，多種可商購獲得的接頭，例如來自concortishttp：//www.concortis.com/home。還參見kim等人，bioconjugatechemistry，21(8)：1513-1519aug2010。還參見ep2326349。還參見無銅點擊化學接頭(copperfreeclickchemistrylinkers)，angew.chem.int.編，2010，49，第9422-9425頁，chembiochem，2011，12，第1309-1312頁，http：//www.synaffix.com/technology/。

藥物部分(d)

(d)為如本文所述的式i化合物。熟練技術(shù)人員將認識到，本文所述的化合物可適當?shù)乇恍揎椧源龠M與(l)的綴合反應(yīng)，或如果(l)不存在，與(t)的綴合反應(yīng)，以及綴合物(t)-(l)-(d)或(t)-(d)的形成?？墒褂?d)上的任一連接點。在一個實施方案中，(d)的c端在(t)-(l)-(d)綴合物中形成連接點。在另一實施方案中，(d)的n端在(t)-(l)-(d)綴合物中形成連接點。在另一實施方案中，(d)的側(cè)鏈在(t)-(l)-(d)綴合物中形成連接點。

施用

出于施用的目的，本公開的化合物可作為原料化學品施用或可作為藥物組合物配制。本公開的藥物組合物包含本文所述的化合物及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。本文所述的化合物以有效治療特定目標疾病或病狀的量，例如以足以治療癌癥或腫瘤細胞生長的量，且優(yōu)選以對患者可接受的毒性存在于組合物中。本文所述的化合物的活性可由本領(lǐng)域技術(shù)人員確定，例如，如以下實施例中所述。適當?shù)臐舛群蛣┝靠捎杀绢I(lǐng)域技術(shù)人員容易地確定。

本文所述的化合物或其藥學上可接受的鹽以純的形式或以適當藥物組合物形式的施用可經(jīng)由用于發(fā)揮類似效用的試劑的所接受的施用模式的任一種來進行。本公開的藥物組合物可通過將本文所述的化合物與適當?shù)乃帉W上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑組合來制備，并且可配制成固體、半固體、液體或氣態(tài)形式的制劑，如片劑、膠囊、粉劑、顆粒劑、膏劑、溶液、栓劑、注射劑、吸入劑、凝膠、微球體及氣溶膠。施用此類藥物組合物的典型途徑包括但不限于經(jīng)口、局部、經(jīng)皮、吸入、胃腸外、舌下、經(jīng)頰、直腸、陰道及鼻內(nèi)。如本文所用的術(shù)語胃腸外包括皮下注射、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、胸骨內(nèi)注射或輸注技術(shù)。本公開的藥物組合物被配制以便允許其中所含的活性成分當組合物施用于患者時是生物可利用的。將向受試者或患者施用的組合物采取一個或多個劑量單位的形式，其中例如，片劑可以是單個劑量單位，且呈氣溶膠形式的本文所述的化合物的容器可容納多個劑量單位。制備此類劑型的實際方法是已知的或?qū)楸绢I(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見；例如，參見remington：thescienceandpracticeofpharmacy(第22版)編者loydv.allen，jr.，等人，pharmaceuticalpress，2012。有待施用的組合物將在任何情況下含有治療有效量的本文所述的化合物或其藥學上可接受的鹽，用于根據(jù)本公開的教導治療目標疾病或病狀。

本文所述的藥物組合物可呈固體或液體形式。一方面，載體為顆粒，以使得組合物例如呈片劑或粉末形式。載體可為液體，其中組合物呈例如口服糖漿劑、可注射液體或氣溶膠，其適用于例如吸入施用中。

當打算經(jīng)口施用時，本公開的藥物組合物通常為固體或液體形式，其中半固體、半液體、混懸液及凝膠形式包括在本文中視為固體或液體的形式內(nèi)。

作為用于經(jīng)口施用的固體組合物，藥物組合物可配制成粉劑、顆粒劑、壓片劑、丸劑、膠囊、咀嚼膠、糯米紙或類似形式。此類固體組合物通常將含有一種或多種惰性稀釋劑或可食用的載體。另外，可存在一種或多種以下物質(zhì)：粘合劑，如羧甲基纖維素、乙基纖維素、微晶纖維素、黃蓍膠或明膠；賦形劑，如淀粉、乳糖或糊精；崩解劑，如海藻酸、海藻酸鈉、原生凝膠(primogel)、玉米淀粉等；潤滑劑，如硬脂酸鎂或sterotex；助流劑，如膠體二氧化硅；甜味劑，如蔗糖或糖精；調(diào)味劑，如薄荷、水楊酸甲酯或橙味調(diào)味劑；以及著色劑。

當藥物組合物呈膠囊(例如明膠膠囊)形式時，其除以上類型的材料之外還可含有液體載體，如聚乙二醇或油。

本文所述的藥物組合物可呈液體形式，例如酏劑、糖漿劑、溶液、乳液或混懸液。液體可用于經(jīng)口施用或通過注射遞送，作為兩個實例。當打算經(jīng)口施用時，本文所述的藥物組合物除本化合物之外通常還含有甜味劑、防腐劑、染料/著色劑及增味劑中的一種或多種。在打算通過注射施用的組合物中，可包括表面活性劑、防腐劑、潤濕劑、分散劑、懸浮劑、緩沖劑、穩(wěn)定劑及等滲劑中的一種或多種。

本文所述的液體藥物組合物，無論它們是溶液、混懸液或其它類似形式，可包括一種或多種以下佐劑：無菌稀釋劑，如注射用水、鹽水溶液、優(yōu)選生理鹽水、林格氏溶液(ringer′ssolution)、等滲氯化鈉、不揮發(fā)性油類，如可充當溶劑或懸浮介質(zhì)的合成的甘油單酯或甘油二酯、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它溶劑；抗細菌劑，如苯甲醇或?qū)αu基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，如乙二胺四乙酸；緩沖劑，如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽以及用于調(diào)節(jié)滲透壓的試劑，如氯化鈉或葡萄糖。胃腸外制劑可裝入安瓿、一次性注射器或由玻璃或塑料制成的多劑量小瓶中。生理鹽水為優(yōu)選佐劑?？勺⑸涞乃幬锝M合物優(yōu)選為無菌的。

打算用于胃腸外或經(jīng)口施用的本文所述的液體藥物組合物應(yīng)含有本文所述的化合物的量以便將獲得合適的劑量。

本文所述的藥物組合物可用于局部施用，在此情況下載體可適當?shù)匕芤?、乳液、軟膏或凝膠基質(zhì)?；|(zhì)舉例來說可包含一種或多種以下物質(zhì)：礦脂、羊毛脂、聚乙二醇、蜂蠟、礦物油、稀釋劑如水和乙醇、以及乳化劑和穩(wěn)定劑。增稠劑可存在于用于局部施用的藥物組合物中。如果打算經(jīng)皮施用，組合物可包括經(jīng)皮貼劑或離子電滲裝置。

本文所述的藥物組合物可打算以例如栓劑形式直腸施用，其將在直腸中融化并釋放藥物。用于直腸施用的組合物可含有油脂性基質(zhì)作為合適的無刺激性賦形劑。此類基質(zhì)包括但不限于羊毛脂、可可脂及聚乙二醇。

本文所述的藥物組合物可包括改善固體或液體劑量單位的物理形式的各種物質(zhì)。例如，組合物可包括在活性成分周圍形成包衣外殼的物質(zhì)。形成包衣外殼的物質(zhì)通常為惰性的，并且可選自例如糖、蟲膠及其它腸溶包衣劑。或者，活性成分可包裹在明膠膠囊中。

本文所述的藥物組合物可以劑量單位來制備，其可作為氣溶膠施用。術(shù)語氣溶膠用于表示在具有膠體性質(zhì)的那些系統(tǒng)至由加壓包裝組成的系統(tǒng)范圍內(nèi)的多種系統(tǒng)。遞送可由液化或壓縮氣體或通過分配活性成分的合適的泵系統(tǒng)進行。本文所述的化合物的氣溶膠可在單相、雙相或三相系統(tǒng)中遞送以便遞送活性成分。氣溶膠的遞送包括必需的容器、激活劑、閥門、分容器等，它們可組合在一起形成成套裝置。本領(lǐng)域技術(shù)人員無需過度實驗可確定優(yōu)選的氣溶膠。

本文所述的藥物組合物可通過藥物領(lǐng)域中公知的方法來制備。例如，打算通過注射施用的藥物組合物可通過將本文所述的化合物與無菌蒸餾水組合以形成溶液來制備?？商砑颖砻婊钚詣┮源龠M均勻溶液或混懸液的形成。表面活性劑是與本文所述的化合物非共價地相互作用以便促進化合物在含水遞送系統(tǒng)中的溶解或均勻懸浮的化合物。

本文所述的化合物或其藥學上可接受的鹽是以治療有效量施用，該治療有效量將隨包括以下的多種因素而變化：所采用的特定化合物的活性；化合物的代謝穩(wěn)定性和作用長度；患者的年齡、體重、一般健康狀況、性別及飲食；施用模式和時間；排泄率；藥物組合；具體病癥或病狀的嚴重性；以及受試者接受的療法。

本文所述的化合物或其藥學上可接受的衍生物也可在一種或多種其它治療劑施用的同時、之前或之后施用。此類組合療法包括含有本文所述的化合物及一種或多種另外的活性劑的單一藥物劑量制劑的施用，以及本文所述的化合物與每種活性劑在其各自單獨的藥物劑量制劑中的施用。舉例來說，本文所述的化合物與其它活性劑可以單一口服劑量組合物(如片劑或膠囊)形式一起向患者施用，或每種試劑以單獨的口服劑量制劑來施用。當使用單獨的劑量制劑時，本文所述的化合物與一種或多種另外的活性劑可基本上同時(即同時地)或在分別錯開的時間(即連續(xù)地)施用；應(yīng)理解組合療法包括所有這些方案。

以下實施例示出了本文所述的化合物(即式i及相關(guān)式的化合物)的各種制備方法。應(yīng)當理解，本領(lǐng)域技術(shù)人員將能通過類似方法或通過組合本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它方法制備這些化合物。還應(yīng)理解的是，本領(lǐng)域技術(shù)人員將能以如下所述的類似方式通過使用適當?shù)钠鹗冀M分并視需要修改合成的參數(shù)來制備下文未具體示出的式i的其它化合物。一般說來，起始組分可從如sigmaaldrich、lancastersynthesis，inc.、maybridge、matrixscientific、tci和fluorochemusa等來源獲得或根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的來源(參見，例如advancedorganicchemistry：reactions，mechanisms，andstructure，第5版(wiley，2000年12月))合成或如本文所述來制備。

提供以下實施例用于說明目的，而非限制。

實施例

實施例1：一般合成方法

合成方案a

合成方案b

方案c

實施例1.1：一般方法1-三氟乙酰胺裝置。

向胺在1，4-二噁烷中的攪拌懸浮液中添加三氟乙酸酐(1.1當量)。將反應(yīng)混合物從懸浮液轉(zhuǎn)換成溶液并再次轉(zhuǎn)換回懸浮液。通過tlc和/或hplc-ms監(jiān)測反應(yīng)的進展以使反應(yīng)完全。一旦起始材料完全消耗，便將反應(yīng)用己烷或乙醚稀釋，在布氏漏斗上過濾并在減壓下干燥所生成的固體以得到純的三氟乙酰胺。

實施例1.2：一般方法2

方法a：dcc/dmap介導的n-?；酋０沸纬?。

向酸在二氯甲烷中的攪拌溶液中添加磺酰胺溶液(1.3當量，根據(jù)需要在二氯甲烷、n，n-二甲基甲酰胺或其混合物中)。添加二環(huán)己基碳化二亞胺(1.2當量)且接著添加n，n-二甲基氨基吡啶(1.2當量)。通過hplc-ms(通常16h)監(jiān)測反應(yīng)過程并且可通過添加乙醚沉淀過量的副產(chǎn)物。通過過濾除去固體并用1∶1乙醚/二氯甲烷洗滌。將合并的有機層濃縮，并且通過硅膠色譜法或任選的制備型-hplc純化殘余物以得到所需的n-?；酋０?。

方法b：dcc或edci/dmap介導的n-?；酋０沸纬伞?/p>

向酸在二氯甲烷、乙酸乙酯或其混合物中的攪拌溶液中添加磺酰胺溶液(1.3當量，根據(jù)需要在二氯甲烷、乙酸乙酯或n，n-二甲基甲酰胺或其混合物中)。添加二環(huán)己基碳化二亞胺或edci(1.2當量)且接著添加n，n-二甲基氨基吡啶(1.2當量)。通過hplc-ms(通常16h)監(jiān)測反應(yīng)過程并且可通過添加乙醚沉淀過量的副產(chǎn)物。通過過濾除去固體并用1∶1乙醚/二氯甲烷洗滌。將合并的有機層濃縮，并且通過硅膠色譜法或任選的制備型-hplc純化殘余物以得到所需的n-酰基磺酰胺。

實施例1.3：一般方法3替代方案-acbt介導的n-?；酋０沸纬?/p>

此方法是由arkivoc2004(xii)，14-22中所述的內(nèi)容改編而來。

實施例1.4：一般方法4-三氟乙酰胺皂化。

向含有構(gòu)建體的三氟乙酰胺在1，4-二噁烷或甲醇中的溶液中添加氫氧化鋰(10當量)和水(10％v/v)。允許在室溫下攪拌反應(yīng)或任選地加熱至50℃。通過hplc-ms監(jiān)測反應(yīng)過程。一旦完成，便在減壓下除去揮發(fā)性物質(zhì)，必要時對水層的ph進行調(diào)節(jié)并且用二氯甲烷或乙酸乙酯連續(xù)洗滌。將有機相匯集，經(jīng)mgso4干燥，過濾并濃縮。反應(yīng)產(chǎn)物“按原樣”使用或根據(jù)需要通過硅膠色譜法純化。

實施例1.4.1：一般方法4.1-酰胺/酯皂化。

向含有構(gòu)建體的酰胺/酯在1，4-二噁烷或甲醇中的溶液中添加氫氧化鋰(10當量)和水(10％v/v)。允許在室溫下攪拌反應(yīng)或任選地加熱至50℃。通過hplc-ms監(jiān)測反應(yīng)過程。一旦完成，便在減壓下除去揮發(fā)性物質(zhì)，必要時對水層的ph進行調(diào)節(jié)并且用二氯甲烷或乙酸乙酯連續(xù)洗滌。將有機相匯集，經(jīng)mgso4干燥，過濾并濃縮。反應(yīng)產(chǎn)物“按原樣”使用或根據(jù)需要通過硅膠色譜法純化。

實施例1.5：一般方法5-dic/cu(ii)介導的肽鍵形成

向羧酸在最少量的30％n，n-二甲基甲酰胺的二氯甲烷溶液中的攪拌溶液中依次添加1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺(0.95當量)、1-羥基-7-氮雜苯并三唑(1.0當量)、胺(0.33當量)及無水氯化銅(ii)(1.0當量)，其中在每種另外的試劑之間有一個短暫停頓。在室溫下繼續(xù)攪拌并且通過hplc-ms監(jiān)測反應(yīng)的進展。一旦完成，在減壓下除去揮發(fā)性物質(zhì)并且通過硅膠色譜法或反相hplc純化殘余物質(zhì)以提供足夠純度的所需酰胺。

實施例1.6：一般方法6-hatu介導的肽鍵形成。

在0℃下向羧酸在最少量的二氯甲烷或n，n-二甲基甲酰胺或其混合物中的攪拌溶液中添加hatu(1.05-1.2當量)和n，n-二異丙胺(2-4當量)或2，4，6-可力丁(2-4當量)。繼續(xù)攪拌持續(xù)短暫的誘導期(5-20分鐘)，在此時向反應(yīng)中充入胺在二氯甲烷中的溶液。允許反應(yīng)溫至室溫并且通過hplc-ms監(jiān)測進展。一旦完成，在減壓下除去揮發(fā)性物質(zhì)并且通過硅膠色譜法或反相hplc純化殘余物質(zhì)以提供足夠純度的酰胺。

實施例1.7：一般方法7-fmoc基團移除。

將fmoc保護的肽構(gòu)建體溶于在n，n-二甲基甲酰胺中的20％哌啶中。通過hplc-ms監(jiān)測反應(yīng)過程。當完成時，在減壓下除去所有揮發(fā)性物質(zhì)以得到殘余物，將其通過硅膠色譜法純化或直接用于下一步中。

實施例1.8：一般方法8-使用nhs-活化酯的胺的n-?；?。

向胺在最少量的n，n-二甲基甲酰胺中的溶液中添加相應(yīng)的含有酯的n-羥基琥珀酰亞胺(1.5當量)及任選的二異丙胺(2-4當量)。通過hplc-ms(通常約16h)監(jiān)測反應(yīng)進展，此時在減壓下除去所有揮發(fā)性物質(zhì)。隨后將殘余物通過硅膠色譜法或反相hplc純化以得到所需的酰胺產(chǎn)物。

實施例1.9：一般方法9-boc基團移除。

向boc保護的構(gòu)建體在二氯甲烷中的溶液中添加10％v/v三氟乙酸。通過hplc-ms監(jiān)測反應(yīng)過程。一旦完成，便在減壓下除去所有揮發(fā)性物質(zhì)。通過反相hplc、硅膠色譜法或從冷甲醇/二氯甲烷/乙醚的混合物中沉淀來純化殘余物質(zhì)。

實施例1.9.1：一般方法9.1-boc基團和叔丁酯移除。

向boc保護的胺或叔丁酯在二氯甲烷中的溶液中添加10-20％v/v三氟乙酸。通過hplc-ms監(jiān)測反應(yīng)過程。一旦完成，便在減壓下除去所有揮發(fā)性物質(zhì)。通過反相hplc、硅膠色譜法或從冷甲醇/二氯甲烷/乙醚的混合物中沉淀來純化殘余物質(zhì)。

實施例1.10：fmoc-val-cit-oh：(s)-2-((s)-2-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酸，fmoc-纈氨酸-瓜氨酸-oh，fmoc-vc-oh。

根據(jù)dubowchik等人，bioconjugatechem.，2002，13，855-869制備標題化合物。

¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ12.56(s，1h)，8.21(d，j＝7.3hz，1h)，7.90(d，j＝7.5hz，2h)，7.76(t，j＝7.0hz，2h)，7.49-7.39(m，3h)，7.38-7.23(m，2h)，5.96(t，j＝5.9hz，1h)，5.40(s，2h)，4.34-4.09(m，4h)，3.93(dd，j＝9.1，7.1hz，1h)，3.39(q，j＝7.0hz，3h)，2.96(q，j＝6.5hz，2h)，1.97(d，j＝6.9hz，1h)，1.86-1.63(m，1h)，1.57(dtd，j＝13.9，9.0，5.4hz，1h)，1.41(dhept，j＝13.2，6.9hz，2h)，0.88(dd，j＝13.3，6.7hz，6h).)。c26h32n4o6計算值：[m+h]+497.23。實測值：[m+h]⁺497.19。

實施例1.11：(s)-2-((s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酸，boc-纈氨酸-瓜氨酸-oh，boc-vc-oh。

根據(jù)具有匹配的光譜數(shù)據(jù)的us2010/0233190a1合成標題化合物。

實施例1.12：mc-nhs：6-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酸2，5-二氧代吡咯烷-1-基酯。

向6-氨基己酸(10.0g，76.2mmol，1.0eq)在乙酸(75ml)中的攪拌溶液中添加馬來酸酐(7.85g，80.0mmol，1.05eq)。固體溶解耗費了幾分鐘，接著在約5min之后，白色固體開始出現(xiàn)。一小時之后，懸浮液增稠成白色餅狀物。將此物質(zhì)在燒結(jié)漏斗上過濾并用甲苯洗滌并且在真空中在加熱下干燥以除去所有痕量乙酸。

將中間體粉末溶于甲苯(250ml)中，添加三乙胺(21.3ml，152mmol，2.0eq)，并且用dean-stark分水器將混合物加熱至回流?；亓?h之后，冷卻混合物并且將澄清的甲苯層從燒瓶中的其余粘性殘余物中傾析。在真空中除去甲苯以產(chǎn)生6-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酸酯的三乙胺鹽。將鹽再溶解于甲苯中，并且添加少量乙酸，接著濃縮。緊接著，將混合物溶于50％飽和碳酸氫鈉中，并且添加1mhcl以便將ph調(diào)節(jié)至3，形成乳狀沉淀。將其用etoac萃取三次，將合并的有機物經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾并在真空中濃縮以得到純的6-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酸酯(3.08g，19％)。

在0℃下向6-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酸酯(3.08g，14.6mmol，1.0eq)和n-羥基琥珀酰亞胺(1.76g，15.3mmol，1.05eq)在etoac(30ml)中的攪拌溶液中添加二環(huán)己基碳化二亞胺(3.16g，15.3mmol，1.05eq)。接著允許反應(yīng)溫至室溫。20h之后，將反應(yīng)物過濾并用etoac洗滌并且濃縮濾液。通過快速色譜法純化殘余物以得到呈澄清油狀的標題化合物(2.16g，48％)，其緩慢凝固成白色蠟狀固體。¹hnmr(400mhz，氯仿-d)δ6.71(s，2h)，3.56(t，j＝7.2hz，2h)，2.86(s，4h)，2.63(t，j＝7.4hz，2h)，1.80(p，j＝7.4hz，2h)，1.73-1.57(m，2h)，1.50-1.35(m，2h)。m/z計算值：c14h16n2o6＝308.10。實測值：[m+h]⁺＝309.13。rf＝0.28(50％etoac/hex)。

實施例1.13：mt-oh：3-(2-(2-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸。

根據(jù)warnecke，a.，kratz，f.bioconjugatechemistry2003，14，377-387制備標題化合物。

¹hnmr(400mhz，氯仿-d)δ6.74(s，2h)，3.87-3.72(m，4h)，3.72-3.62(m，10h)，2.73-2.64(m，2h)。m/z計算值：c13h29no7＝301.12。實測值：[m+h]⁺＝302.14。

實施例1.14：mt-nhs：3-(2-(2-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸2，5-二氧代吡咯烷-1-基酯。

在室溫下將mt-oh(2.6g，8.6mmol，1.0eq)用在30ml的5∶1etoac/二噁烷中的二環(huán)己基碳化二亞胺(1.87g，9.06mmol，1.05eq)和n-羥基琥珀酰亞胺(1.04g，6.06mmol，1.05eq)處理。36h之后，將混合物過濾，用etoac洗滌，并且通過快速色譜法純化殘余物以得到呈澄清油狀的標題化合物(309mg，9.0％)連同起始材料(1.31g，50％回收率)一起。

¹hnmr(400mhz，氯仿-d)δ6.72(s，2h)，3.87(t，j＝6.4hz，2h)，3.74(t，j＝5.6hz，2h)，3.70-3.58(m，10h)，2.93(t，j＝6.4hz，2h)，2.86(s，4h)，1.32-1.19(m，2h)。m/z計算值：c17h22n2o9＝398.13。實測值：[m+h]⁺＝399.15，[m+na]⁺＝421.14。rf＝0.59(10％(5％acoh/meoh)/10％hex/ch2cl2)。

實施例1.15：mt-vc-oh：(14r，17r)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氫1h-吡咯-1-基)-14-異丙基-12，15-二氧代-17-(3-脲基丙基)-3，6，9-三氧雜-13，16-二氮雜十八-18-烷酸。

方法a

向(r)-2-((r)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酸(boc-vc-oh，0.600g，1.602mmol)在二氯甲烷(2.5ml)中的溶液中添加三氟乙酸(2.5ml)。通過hplc監(jiān)測反應(yīng)過程中的起始材料消耗，然后在減壓下濃縮，再懸浮在甲苯中，在減壓下濃縮并且在高真空下靜置4小時。將一部分產(chǎn)物(h-vc-oh.tfa，0.5g，1.287mmol)懸浮在1，4-二噁烷(0.5ml)中并且一次性加入mt-nhs(0.512g，1.287mmol)，接著加入二異丙基乙胺(0.90ml，4當量)并且允許攪拌反應(yīng)過夜。濃縮反應(yīng)至干燥并且將生成的油溶于甲醇中，之后通過制備型hplc純化。所需級分的冷凍干燥得到呈白色粉末狀的標題化合物(0.351g)。

方法b

根據(jù)wo2015095953a1中所述的方法制備標題化合物。

實施例1.16：(s)-2-氨基-3-苯基-n-(4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基磺?；?丙酰胺(化合物1)。

根據(jù)一般方法2和9，由boc-苯丙氨酸及2，2，2-三氟代-n-(4-氨磺?；交?乙酰胺制備。¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ11.42(s，1h)，7.84(d，j＝8.7hz，2h)，7.73-7.64(m，1h)，7.69(d，j＝8.7hz，2h)，7.24-7.14(m，3h)，7.13-7.06(m，2h)，3.65-3.60(m，1h)，3.06(dd，j＝14.2，5.1hz，1h)，2.91(dd，j＝14.1，7.1hz，1h)。c17h16f3n3o4s計算值：m/z＝415.08實測值：[m+h]⁺＝416.5。

實施例1.17：(s)-2-氨基-3-苯基-n-((4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)芐基)磺?；?丙酰胺(化合物2)。

根據(jù)一般方法3和9，由boc-苯丙氨酸及2，2，2-三氟代-n-(4-氨磺?；交?乙酰胺(實施例1.39)制備。¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ7.76-7.71(m，2h)，7.58(d，j＝8.4hz，2h)，7.36-7.21(m，8h)，4.34(d，j＝13.1hz，1h)，4.30(d，j＝13.1hz，1h)，3.62(dd，j＝8.2，4.6hz，1h)，3.21-3.09(m，1h)，2.89(dd，j＝14.3，8.3hz，1h)。c18h18f3n3o4s計算值：m/z＝429.10實測值：[m+h]⁺＝430.7。

實施例1.18：(s)-1-(((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-(4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基磺酰胺基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸叔丁酯(化合物3)。

使用一般方法2，由可商購獲得的boc-val-dip-dap-oh(0.08g)及2，2，2-三氟代-n-(4-氨磺?；交?乙酰胺合成標題化合物。c37h58f3n5o10s計算值：m/z＝821.39實測值：[m+h]⁺＝823.04。

實施例1.19：(s)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n-((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-(4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基磺酰胺基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-n，3-二甲基丁酰胺(化合物4)。

使用一般方法9和6，由化合物3及n，n-二甲基纈氨酸制備標題化合物。c39h63f3n6o9s計算值：m/z＝848.43實測值：[m+h]⁺850.11。

實施例1.20：(s)-n-((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-(4-氨基苯基磺酰胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n，3-二甲基丁酰胺(化合物5)。

使用一般方法4，由化合物4制備標題化合物。c37h64n6o8s計算值：m/z＝752.45實測值：[m+h]⁺754.16。

實施例1.21：(s)-1-(((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-((4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基)甲基磺酰胺基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸叔丁酯(化合物6)。

通過一般方法2，由可商購獲得的boc-val-dil-dap-oh制備標題化合物。c38h60f3n5o10s計算值：m/z＝835.40實測值：[m+h]⁺＝836.7。

實施例1.22：(s)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n-((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-((4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基)甲基磺酰胺基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-n，3-二甲基丁酰胺(化合物7)。

遵循一般方法6，由化合物6制備標題化合物。c40h65f3n6o9s計算值：m/z＝862.45實測值：[m+h]⁺＝863.2。

實施例1.23：(s)-n-((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-((4-氨基苯基)甲基磺酰胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n，3-二甲基丁酰胺(化合物8)。

遵循一般方法4，由化合物7制備標題化合物。c38h66n6o8s計算值：m/z＝766.47實測值：[m-c7h8o2s+h]⁺＝599.0(醌甲基化物的碎片化及4-氨基芐基磺酸酯的損失)。

實施例1.24：(s)-1-(((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-((s)-1-氧代基-3-苯基-1-(4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基磺酰胺基)丙-2-基氨基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸叔丁酯(化合物9)。

使用一般方法6，由可商購獲得的boc-val-dip-dap-oh(0.07g)及化合物1合成標題化合物。c46h67f3n6o11s計算值：m/z＝968.45實測值：[m+na]⁺＝992.1。

實施例1.25：(s)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n-((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-((s)-1-氧代基-3-苯基-1-(4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基磺酰胺基)丙-2-基氨基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-n，3-二甲基丁酰胺(化合物10)。

使用一般方法9和6，由化合物9(110mg)及n，n-二甲基纈氨酸制備標題化合物。c48h72f3n7o10s計算值：m/z＝995.50實測值：[m+h]⁺997.3。

實施例1.26：(s)-n-((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-((s)-1-(4-氨基苯基磺酰胺基)-1-氧代基-3-苯基丙-2-基氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n，3-二甲基丁酰胺(化合物11)。

使用一般方法4，由化合物10(100mg)制備標題化合物。c46h73n7o9s計算值：m/z＝899.52實測值：[m+h]⁺901.3。

實施例1.27：(s)-1-(((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-((s)-1-氧代基-3-苯基-1-(4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基甲基磺酰胺基)丙-2-基氨基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸叔丁酯(化合物12)。

通過一般方法6，由可商購獲得的boc-val-dil-dap-oh及化合物2制備標題化合物。c47h69f3n6o11s計算值：m/z＝982.47實測值：[m+na]⁺＝1006.2。

實施例1.28：(s)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n-((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-((s)-1-氧代基-3-苯基-1-(4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基甲基磺酰胺基)丙-2-基氨基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-n，3-二甲基丁酰胺(化合物13)。

通過一般方法6，由化合物12及二甲基纈氨酸制備標題化合物。c49h74f3n7o10s計算值：m/z＝1009.52實測值：[m+h]⁺＝1011.0。

實施例1.29：(s)-n-((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-((s)-1-(4-氨基苯基甲基磺酰胺基)-1-氧代基-3-苯基丙-2-基氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n，3-二甲基丁酰胺(化合物14)。

通過一般方法4，由化合物13制備化合物。c47h75n7o9s計算值：m/z＝913.53實測值：[m-c7h8o2s+na]⁺＝768.1(醌甲基化物的碎片化及4-氨基芐基磺酸酯的損失)。

實施例1.30：一般方法10-氫化。

向有待還原的樣品在甲醇、乙醇、乙酸、乙酸乙酯、其混合物或其它合適的溶劑中的溶液中加入磁性攪拌器。含有攪拌溶液的燒瓶裝配有二通氣體管線轉(zhuǎn)接器并且在減壓下抽空并充入氮氣。重復此過程3次。加入呈固體或漿料的10％pd/c，通常以相對于反應(yīng)物的10mol％鈀。再次在減壓下抽空容器并充入含氫氣球。通過hplc-ms監(jiān)測反應(yīng)是否完成，且一旦完成，通過在過濾漏斗上的硅藻土墊來過濾。在減壓下濃縮濾液并且原樣使用或經(jīng)由硅膠或制備型hplc色譜法純化。

實施例1.31：3-(2-(2-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸全氟苯酯。

向3-(2-(2-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸(實施例1.13)(2.28g，7.57mmol)在二氯甲烷(100ml)中的攪拌溶液中添加1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(1.59g，1.1當量)和五氟苯酚(1.53g，1.1當量)。允許攪拌反應(yīng)過夜，此時hplc-ms顯示不剩余起始材料(rt＝5.30min，490.4m/z，全梯度)。用飽和碳酸氫鈉(約20ml)稀釋粗反應(yīng)混合物并且將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗。將有機相用鹽水(約50ml)洗滌，經(jīng)mgso4干燥，過濾并濃縮以得到淡黃色油狀物。將油狀物溶于最少量的二氯甲烷中并裝載至100g硅膠柱上來純化(isolera，10-100％etoac的己烷溶液，經(jīng)12個柱體積)。匯集含有所需物質(zhì)的級分并在減壓下濃縮以得到無色油狀物(3.32g，94％)。

實施例1.32：(3r，4s，5s)-4-((s)-2-(芐氧羰基氨基)-n，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酸叔丁酯，cbz-val-dil-otbu。

遵循一般方法6，由商業(yè)上購得的cbz-val-oh及h-dil-otbu·hcl制備標題化合物。

¹hnmr(400mhz，氯仿-d)δ7.40-7.30(m，5h)，5.54(d，j＝9.2hz，1h)，5.12(s，2h)，4.73(s，1h)，4.54(dd，j＝9.2，5.6hz，1h)，3.91(s，1h)，3.37(s，3h)，2.98(s，3h)，2.47(d，j＝16.5hz，1h)，2.33(dd，j＝15.6，9.1hz，1h)，2.07-1.96(m，1h)，1.84-1.60(m，1h)，1.48(s，9h)，1.45-1.32(m，2h)，1.04(d，j＝6.8hz，3h)，0.98(d，j＝6.6hz，3h)，0.94(d，j＝6.8hz，3h)，0.86(t，j＝7.4hz，3h)。c27h44n2o6計算值：m/z＝492.32實測值：[m+h]⁺＝515.8[m+na]⁺。rf＝0.78(50％etoac/hex)。

實施例1.33：(3r，4s，5s)-4-((s)-2-(((芐氧基)羰基)氨基)-n，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酸，cbz-val-dil-oh。

使用一般方法9，由cbz-val-dil-otbu(實施例1.32)制備標題化合物。c23h36n2o6計算值：m/z＝436.26實測值：[m+na]⁺459.81。1hnmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.47-7.22(m，5h)，5.21-4.99(m，2h)，4.83-4.54(m，1h)，4.39(d，j＝8.0hz，1h)，3.96(s，1h)，3.43-3.33(s，3h)，3.07(s，3h)，2.63(dd，j＝15.9，2.9hz，1h)，2.38(dd，j＝15.8，9.3hz，1h)，2.15-1.95(m，1h)，1.83(s，1h)，1.52-1.30(m，1h)，1.07-0.91(m，9h)，0.85(t，j＝7.4hz，3h)。

實施例1.34：(3r，4s，5s)-4-((s)-2-氨基-n，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酸叔丁酯，h-val-dil-otbu。

根據(jù)一般方法10，由cbz-val-dil-otbu(438mg，0.889mmol)生成標題化合物，以獲得呈澄清膜狀的所需產(chǎn)物(288mg，90％)。¹hnmr(400mhz，氯仿-d)δ4.76(s，1h)，3.92(s，1h)，3.50(d，j＝5.1hz，1h)，3.38(s，3h)，2.92(s，3h)，2.48(dd，j＝15.7，3.1hz，1h)，2.35(dd，j＝15.6，8.8hz，1h)，1.93(dq，j＝10.9，6.5hz，1h)，1.82-1.60(m，1h)，1.51-1.46(m，11h)，1.05-0.85(m，12h)。c19h38n2o4計算值：m/z＝358.28實測值：[m+na]⁺＝381.8。

實施例1.35：(3r，4s，5s)-4-((s)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酸叔丁酯，dov-val-dil-otbu。

遵循一般方法6，由h-val-dil-otbu及n，n-二甲基纈氨酸制備標題化合物。

¹hnmr(400mhz，氯仿-d)δ7.09(d，j＝8.8hz，1h)，4.79(t，j＝7.6hz，1h)，4.00-3.81(m，1h)，3.75(s，1h)，3.37(s，3h)，3.26(s，1h)，3.00(s，3h)，2.74(s，6h)，2.49(d，j＝15.9hz，1h)，2.38-2.20(m，2h)，2.13-2.05(m，1h)，1.81-1.62(m，1h)，1.51-1.43(m，10h)，1.33(s，1h)，1.18-0.89(m，15h)，0.83(t，j＝7.2hz，3h)。c26h51n3o5計算值：m/z＝485.38實測值：[m+na]⁺＝508.9。rf＝0.36(5％meoh/ch2cl2)。

實施例1.36：(3r，4s，5s)-叔丁基4-((s)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酸，dov-val-dil-oh。

遵循一般方法9，由dov-val-dil-otbu制備標題化合物。

¹hnmr(400mhz，氯方-d)δ4.98(t，j＝10.0hz，1h)，4.65(dd，j＝9.3，3.1hz，1h)，4.08(d，j＝10.6hz，1h)，3.61-3.53(m，1h)，3.39(s，3h)，3.24(s，3h)，3.13(s，3h)，2.93(s，3h)，2.77(dd，j＝17.0，9.8hz，1h)，2.66(dd，j＝17.3，1.9hz，1h)，2.31-2.26(m，1h)，2.07(dt，j＝10.8，5.5hz，1h)，1.97-1.85(m，1h)，1.29-1.24(m，1h)，1.13(d，j＝6.7hz，3h)，1.08-1.01(m，6h)，1.01-0.95(m，6h)，0.90-0.81(m，1h)，0.77(t，j＝6.9hz，3h)c22h43n3o5計算值：m/z＝429.32。實測值：[m+h]⁺＝430.8。

實施例1.37：(5s，8s，11s，12r)-11-((s)-仲丁基)-1-(9h-芴-9-基)-5，8-二異丙基-12-甲氧基-4，10-二甲基-3，6，9-三氧代-2-氧雜-4，7，10-三氮雜十四烷-14-酸叔丁酯，fmoc-(me)val-val-dil-otbu。

根據(jù)一般方法6，由fmoc-(me)-(l)-纈氨酸-oh及h-val-dil-otbu制備標題化合物。c40h59n3o7計算值：m/z＝693.44實測值：[m+h]⁺694.98。

實施例1.38：(5s，8s，11s，12r)-11-((s)-仲丁基)-1-(9h-芴-9-基)-5，8-二異丙基-12-甲氧基-4，10-二甲基-3，6，9-三氧代-2-氧雜-4，7，10-三氮雜十四烷-14-酸，fmoc-(me)val-val-dil-oh。

使用一般方法9，由fmoc-(me)val-val-dil-otbu制備標題化合物。c36h51n3o7計算值：m/z＝637.37實測值：[m+h]⁺638.91。

實施例1.39：2，2，2-三氟代-n-(4-氨磺?；交?乙酰胺。

向磺胺(1.72g，10mmol)在二噁烷(20ml)中的攪拌懸浮液中添加三氟乙酸酐(1.69ml，1.2當量)。緩慢溶解固體以生成均勻的溶液并且在短期之后，形成一批新的固體。將反應(yīng)用乙醚(100ml)稀釋并且將所生成的懸浮液在布氏漏斗上過濾。收集固體并且在減壓下干燥以提供足夠純度的標題化合物以供進一步使用(2.60g，97％)。

實施例1.40：(2r，3r)-3-甲氧基-2-甲基-3-((s)-吡咯烷-2-基)-n-(4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基磺?；?丙酰胺。

遵循一般方法2和9，由商業(yè)上購得的boc-dap-oh及2，2，2-三氟代-n-(4-氨磺?；交?乙酰胺制備標題化合物。

¹hnmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.06(d，j＝8.9hz，2h)，7.92(d，j＝8.9hz，2h)，3.69(dd，j＝6.6，3.0hz，1h)，3.48(s，3h)，3.51-3.39(m，1h)，3.33-3.14(m，2h)，2.64(p，j＝7.0hz，1h)，2.06-1.68(m，4h)，1.19(d，j＝7.1hz，3h)。c17h22f3n3o5s計算值：m/z＝437.12實測值：[m+h]⁺＝438.6。

實施例1.41：((s)-1-(((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-((4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基)磺酰胺基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸芐酯。

根據(jù)一般方法2，由cbz-val-dil-oh及實施例1.40的產(chǎn)物制備標題化合物。c40h56f3n5o10s計算值：m/z＝855.37實測值：[m+h]⁺857.07。

實施例1.42：(s)-2-氨基-n-((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-((4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基)磺酰胺基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-n，3-二甲基丁酰胺。

根據(jù)一般方法10，由實施例1.41的產(chǎn)物制備標題化合物。c32h50f3n5o8s計算值：m/z＝721.33實測值：[m+h]⁺722.70。

實施例1.43：(3r，4s，5s)-4-((s)-2-((r)-1-異丙基哌啶-2-甲酰胺基)-n，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酸叔丁酯。

根據(jù)一般方法6，由(r)-1-異丙基哌啶-2-羧酸及h-val-dil-otbu制備標題化合物。c28h53n3o5計算值：m/z＝511.40實測值：[m+h]⁺512.77。

實施例1.44：(3r，4s，5s)-4-((s)-2-((r)-1-異丙基哌啶-2-甲酰胺基)-n，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酸。

根據(jù)一般方法9，由實施例1.43的叔丁基產(chǎn)物制備標題化合物。c24h45n3o5計算值：m/z＝455.34實測值：[m+h]⁺456.70。

實施例1.45：(r)-1-異丙基-n-((s)-1-(((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-((4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基)磺酰胺基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)哌啶-2-甲酰胺(化合物15)。

根據(jù)一般方法6，由實施例1.40的產(chǎn)物及實施例1.44的產(chǎn)物制備標題化合物。c41h65f3n6o9s計算值：m/z＝874.45實測值：[m+h]⁺876.0。

實施例1.46：(r)-n-((s)-1-(((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-((4-氨基苯基)磺酰胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)-1-異丙基哌啶-2-甲酰胺(化合物16)。

根據(jù)一般方法4，由化合物15制備標題化合物。c39h66n6o8s計算值：m/z＝778.47實測值：[m+h]⁺780.06。

實施例1.47：(1-(((s)-1-(((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-((4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基)磺酰胺基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯。

根據(jù)一般方法6，由實施例1.42的產(chǎn)物及商業(yè)上購得的α-(boc-氨基)異丁酸制備標題化合物。c41h65f3n6o11s計算值：m/z＝906.44實測值：[m+h]⁺907.80。

實施例1.48：(1-(((s)-1-(((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-((4-氨基苯基)磺酰胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯。

根據(jù)一般方法4，由實施例1.47的產(chǎn)物制備標題化合物。c39h66n6o10s計算值：m/z＝810.46實測值：[m+h]⁺811.84。

實施例1.49：(s)-2-(2-氨基-2-甲基丙酰胺基)-n-((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-((4-氨基苯基)磺酰胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-n，3-二甲基丁酰胺(化合物17)。

根據(jù)一般方法9，由實施例1.48的產(chǎn)物制備標題化合物。c34h58n6o8s計算值：m/z＝710.40實測值：[m+h]⁺711.77。

實施例1.50(6s，9s，12s，13r)-12-((s)-仲丁基)-9-異丙基-13-甲氧基-2，2，5，11-四甲基-4，7，10-三氧代-6-(2-苯基丙-2-基)-3-氧雜-5，8，11-三氮雜十五烷-15-酸叔丁酯。

使用一般方法6，由(s)-2-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)-3-甲基-3-苯基丁酸(根據(jù)wo2015095953a1制備)及h-val-dil-otbu制備標題化合物。c36h61n3o7計算值：m/z＝647.45實測值：[m+h]⁺649.12。

實施例1.51：(3r，4s，5s)-4-((s)-n，3-二甲基-2-((s)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酸。

根據(jù)一般方法9，由實施例1.50的產(chǎn)物制備標題化合物。c27h45n3o5計算值：m/z＝491.34實測值：[m+h]⁺492.73。

實施例1.52：(1-(((s)-1-(((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-((4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基)磺酰胺基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物18)。

根據(jù)一般方法6，由實施例1.51的產(chǎn)物及實施例1.42的產(chǎn)物制備標題化合物。c44h65f3n6o9s計算值：m/z＝910.45實測值：[m+h]⁺911.91。

實施例1.53(s)-n-((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-((4-氨基苯基)磺酰胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-n，3-二甲基-2-((s)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺(化合物19)。

使用一般方法4，由實施例1.52的產(chǎn)物制備標題化合物。c42h66n6o8s計算值：m/z＝814.47實測值：[m+h]⁺816.08。

實施例1.54：((s)-1-(((s)-1-(((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-((4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基)磺酰胺基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯。

使用一般方法6，由實施例1.42的產(chǎn)物及商業(yè)上購得的boc-(me)-(l)-纈氨酸-oh制備標題化合物。c43h69f3n6o11s計算值：m/z＝934.47實測值：[m+h]⁺935.87。

實施例1.55：((s)-1-(((s)-1-(((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-((4-氨基苯基)磺酰胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯。

使用一般方法4，由實施例1.54的產(chǎn)物制備標題化合物。c41h70n6o10s計算值：m/z＝838.49實測值：[m+h]⁺839.85。

實施例1.56：(s)-n-((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-((4-氨基苯基)磺酰胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-n，3-二甲基-2-((s)-3-甲基-2-(甲基氨基)丁酰胺基)丁酰胺(化合物20)。

使用一般方法9，由實施例1.54的產(chǎn)物制備標題化合物。c36h62n6o8s計算值：m/z＝738.43實測值：[m+h]⁺739.84。

實施例1.57：2，2，2-三氟代-n-(4-(氨磺酰基甲基)苯基)乙酰胺。

根據(jù)wo2015095953a1制備標題化合物。

實施例1.58：2，2，2-三氟代-n-(4-氨磺?；S基)乙酰胺。

根據(jù)wo2015095953a1制備標題化合物。

實施例1.59：(s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-((4-((2，2，2-三氟乙酰胺基)甲基)苯基)磺酰胺基)丙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯。

使用一般方法2，由商業(yè)上購得的boc-dolaproline-oh及2，2，2-三氟代-n-(4-氨磺酰基芐基)乙酰胺制備標題化合物。c23h32f3n3o7s計算值：m/z＝551.19實測值：[m+na]⁺574.92。

實施例1.60：(2r，3r)-3-甲氧基-2-甲基-3-((s)-吡咯烷-2-基)-n-((4-((2，2，2-三氟乙酰胺基)甲基)苯基)磺酰基)丙酰胺。

使用一般方法9，由實施例1.59的產(chǎn)物制備標題化合物。c18h24f3n3o5s計算值：m/z＝451.14實測值：[m+h]⁺452.71。

實施例1.61：(s)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n-((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-((4-((2，2，2-三氟乙酰胺基)甲基)苯基)磺酰胺基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-n，3-二甲基丁酰胺(化合物21)。

使用一般方法6，由dov-val-dil-oh(實施例1.36)及實施例1.60的產(chǎn)物制備標題化合物。c40h65f3n6o9s計算值：m/z＝862.45實測值：[m+h]⁺863.80。

實施例1.62：(s)-n-((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-((4-(氨基甲基)苯基)磺酰胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n，3-二甲基丁酰胺(化合物22)。

根據(jù)一般方法4，由化合物51制備標題化合物。c38h66n6o8s計算值：m/z＝766.47實測值：[m+h]⁺767.85。

實施例1.63：(s)-(1-氧代基-3-苯基-1-((4-((2，2，2-三氟乙酰胺基)甲基)苯基)磺酰胺基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物63)

使用一般方法2，由boc-(l)-phe-oh及2，2，2-三氟代-n-(4-氨磺酰基芐基)乙酰胺(實施例1.58)制備標題化合物。c23h26f3n3o6s計算值：m/z＝529.15實測值：[m+na]⁺552.52。

實施例1.64：(s)-2-氨基-3-苯基-n-((4-((2，2，2-三氟乙酰胺基)甲基)苯基)磺?；?丙酰胺。

使用一般方法9，由實施例1.63的產(chǎn)物制備標題化合物。c18h18f3n3o4s計算值：m/z＝429.10實測值：[m+h]⁺430.51。¹hnmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.05-7.98(m，2h)，7.56(d，j＝8.2hz，2h)，7.33-7.22(m，3h)，7.09(d，j＝6.7hz，2h)，4.59(d，j＝4.4hz，2h)，4.06(t，j＝6.8hz，1h)，3.15(dd，j＝14.1，6.3hz，1h)，3.03(dd，j＝14.2，7.4hz，1h)。

實施例1.65：(s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-(((s)-1-氧代基-3-苯基-1-((4-((2，2，2-三氟乙酰胺基)甲基)苯基)磺酰胺基)丙-2-基)氨基)丙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯。

根據(jù)一般方法6，由可商購獲得的boc-dolaproline-oh及實施例1.64的產(chǎn)物制備標題化合物。c32h41f3n4o8s計算值：m/z＝698.26實測值：[m+na]⁺721.62。

實施例1.66：(2r，3r)-3-甲氧基-2-甲基-n-((s)-1-氧代基-3-苯基-1-((4-((2，2，2-三氟乙酰胺基)甲基)苯基)磺酰胺基)丙-2-基)-3-((s)-吡咯烷-2-基)丙酰胺。

使用一般方法9，由實施例1.65的產(chǎn)物制備標題化合物。c27h33f3n4o6s計算值：m/z＝598.21實測值：[m+h]⁺599.62。

實施例1.67：(s)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n-((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-(((s)-1-氧代基-3-苯基-1-((4-((2，2，2-三氟乙酰胺基)甲基)苯基)磺酰胺基)丙-2-基)氨基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-n，3-二甲基丁酰胺(化合物23)。

根據(jù)一般方法6，由dov-val-dil-oh(實施例1.36)及實施例1.66的產(chǎn)物制備標題化合物。c49h74f3n7o10s計算值：m/z＝1009.52實測值：[m+h]⁺1011.04。

實施例1.68：(s)-n-((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-(((s)-1-((4-(氨基甲基)苯基)磺酰胺基)-1-氧代基-3-苯基丙-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n，3-二甲基丁酰胺(化合物24)。

根據(jù)一般方法4，由實施例1.67的產(chǎn)物制備標題化合物。c47h75n7o9s計算值：m/z＝913.53實測值：[m+h]⁺915.09。

實施例1.69：2，2，2-三氟代-n-(4-(氨磺?；谆?芐基)乙酰胺。

根據(jù)wo2015095953a1制備標題化合物。

實施例1.70：(s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-(((4-((2，2，2-三氟乙酰胺基)甲基)苯基)甲基)磺酰胺基)丙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯。

使用一般方法2，由商業(yè)上購得的boc-dolaproline-oh及2，2，2-三氟代-n-(4-(氨磺?；谆?芐基)乙酰胺(實施例1.69)制備標題化合物。c24h34f3n3o7s計算值：m/z＝565.21實測值：[m+na]⁺588.75。

實施例1.71：(2r，3r)-3-甲氧基-2-甲基-3-((s)-吡咯烷-2-基)-n-((4-((2，2，2-三氟乙酰胺基)甲基)芐基)磺?；?丙酰胺。

根據(jù)一般方法9，由實施例1.69的產(chǎn)物制備標題化合物。c19h26f3n3o5s計算值：m/z＝465.15實測值：[m+h]⁺466.77。

實施例1.72：(s)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n-((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-(((4-((2，2，2-三氟乙酰胺基)甲基)苯基)甲基)磺酰胺基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-n，3-二甲基丁酰胺(化合物25)。

根據(jù)一般方法6，由實施例1.36的產(chǎn)物及實施例1.71的產(chǎn)物制備標題化合物。c41h67f3n6o9s計算值：m/z＝876.46實測值：[m+h]⁺878.22。

實施例1.73：(s)-n-((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-(((4-(氨基甲基)苯基)甲基)磺酰胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n，3-二甲基丁酰胺(化合物26)。

根據(jù)一般方法4，由實施例1.72的產(chǎn)物制備標題化合物。c39h68n6o8s計算值：m/z＝780.48實測值：[m+h]⁺782.20。

實施例1.74：(s)-(1-氧代基-3-苯基-1-(((4-((2，2，2-三氟乙酰胺基)甲基)苯基)甲基)磺酰胺基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯。

根據(jù)一般方法2，由boc-(l)-phe-oh及2，2，2-三氟代-n-(4-(氨磺酰基甲基)芐基)乙酰胺(實施例1.69)制備標題化合物。c24h28f3n3o6s計算值：m/z＝543.17實測值：[m+na]⁺566.78。

實施例1.75：(s)-2-氨基-3-苯基-n-((4-((2，2，2三氟乙酰胺基)甲基)芐基)磺?；?丙酰胺。

使用一般方法9，由實施例1.74的產(chǎn)物制備標題化合物。c19h20f3n3o4s計算值：m/z＝443.11實測值：[m+h]⁺444.55。¹hnmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.46-7.27(m，9h)，4.51(s，2h)，4.46(s，2h)，3.84(dd，j＝9.3，4.3hz，1h)，3.29(dd，1h)，2.95(dd，j＝14.5，9.4hz，1h)。

實施例1.76：(s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-(((s)-1-氧代基-3-苯基-1-(((4-((2，2，2-三氟乙酰胺基)甲基)苯基)甲基)磺酰胺基)丙-2-基)氨基)丙基)吡咯烷-1-羧酸酯。

根據(jù)一般方法6，由可商購獲得的boc-dolaproline-oh及實施例1.75的產(chǎn)物制備標題化合物。c33h43f3n4o8s計算值：m/z＝712.28實測值：[m+na]⁺735.65。

實施例1.77：(2r，3r)-3-甲氧基-2-甲基-n-((s)-1-氧代基-3-苯基-1-(((4-((2，2，2-三氟乙酰胺基)甲基)苯基)甲基)磺酰胺基)丙-2-基)-3-((s)-吡咯烷-2-基)丙酰胺。

使用一般方法9，由實施例1.76的產(chǎn)物制備標題化合物。c28h35f3n4o6s計算值：m/z＝612.22實測值：[m+h]⁺613.58。

實施例1.78：(s)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n-((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-(((s)-1-氧代基-3-苯基-1-(((4-((2，2，2-三氟乙酰胺基)甲基)苯基)甲基)磺酰胺基)丙-2-基)氨基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-n，3-二甲基丁酰胺(化合物27)。

使用一般方法9和6，由dov-val-dil-oh(實施例1.36)及實施例1.77的產(chǎn)物制備標題化合物。c50h76f3n7o10s計算值：m/z＝1023.53實測值：[m+h]⁺1024.94。

實施例1.79：(s)-n-((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-(((s)-1-(((4-(氨基甲基)苯基)甲基)磺酰胺基)-1-氧代基-3-苯基丙-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n，3-二甲基丁酰胺(化合物28)

使用一般方法4，由實施例1.78的產(chǎn)物制備標題化合物。c48h77n7o9s計算值：m/z＝927.55實測值：[m+h]⁺928.92。

實施例1.80：2，2，2-三氟代-n-(1-(4-氨磺?；交?環(huán)丙基)乙酰胺。

根據(jù)wo2015095953a1制備標題化合物。

實施例1.81：(2r，3r)-3-甲氧基-2-甲基-3-((s)-吡咯烷-2-基)-n-(4-(1-(2，2，2-三氟乙酰胺基)環(huán)丙基)苯基磺?；?丙酰胺。

遵循一般方法2和9，由商業(yè)上購得的boc-dap-oh及2，2，2-三氟代-n-(1-(4-氨磺酰基苯基)環(huán)丙基)乙酰胺(實施例1.80)制備標題化合物。¹hnmr(400mhz，dmso-d⁶)δ12.19(s，1h)，10.32(s，1h)，7.86(d，j＝8.6hz，2h)，7.35(d，j＝8.6hz，2h)，7.31(s，1h)，3.58(dd，j＝5.7，3.7hz，1h)，3.28(s，3h)，3.11(t，j＝6.8hz，2h)，2.59(dq，j＝13.0，6.5hz，1h)，1.90-1.68(m，3h)，1.63-1.56(m，1h)，1.44-1.35(m，4h)，1.04(d，j＝7.0hz，3h)。c20h26f3n3o5s計算值：m/z＝477.15實測值：[m+h]⁺＝478.6。

實施例1.82：(s)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n-((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-(4-(1-(2，2，2-三氟乙酰胺基)環(huán)丙基)苯基磺酰胺基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-n，3-二甲基丁酰胺(化合物29)。

根據(jù)一般方法6，由dov-val-dil-oh(實施例1.36)及實施例1.81的產(chǎn)物制備標題化合物。c42h67f3n6o9s計算值：m/z＝888.46實測值：[m+h]⁺＝889.3。

實施例1.83：(s)-n-((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-(4-(1-氨基環(huán)丙基)苯基磺酰胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n，3-二甲基丁酰胺(化合物30)。

根據(jù)一般方法4，由實施例1.82的產(chǎn)物制備標題化合物。c40h68n6o8s計算值：m/z＝792.48實測值：[m+na]⁺＝815.9。

實施例1.84：(s)-2-氨基-3-苯基-n-(4-(1-(2，2，2-三氟乙酰胺基)環(huán)丙基)苯基磺?；?丙酰胺。

遵循一般方法2和9，由boc-phe-oh及2，2，2-三氟代-n-(1-(4-氨磺?；交?環(huán)丙基)乙酰胺(實施例1.80)制備標題化合物。¹hnmr(400mhz，dmso-d⁶)δ10.30(s，1h)，7.87(b，3h)，7.79(d，j＝8.3hz，2h)，7.25(d，j＝8.2hz，2h)，7.23-7.16(m，3h)，7.08(dd，j＝6.6，2.9hz，2h)，3.78(s，1h)，3.06(dd，j＝14.2，5.3hz，1h)，2.93(dd，j＝14.1，7.2hz，1h)，1.36(dd，j＝6.6，3.0hz，4h)。c20h20f3n3o4s計算值：m/z＝455.11實測值：[m+h]⁺＝456.6。

實施例1.85：(s)-1-(((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-((s)-1-氧代基-3-苯基-1-(4-(1-(2，2，2-三氟乙酰胺基)環(huán)丙基)苯基磺酰胺基)丙-2-基氨基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸叔丁酯。

根據(jù)一般方法2，由商業(yè)上獲得的boc-val-dil-dap-oh及實施例1.84的產(chǎn)物制備標題化合物。c49h71f3n6o11s計算值：m/z＝1008.49實測值：[m+na]⁺＝1031.9。

實施例1.86：(s)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n-((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-((s)-1-氧代基-3-苯基-1-(4-(1-(2，2，2-三氟乙酰胺基)環(huán)丙基)苯基磺酰胺基)丙-2-基氨基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-n，3-二甲基丁酰胺(化合物31)。

遵循一般方法9和6，由實施例1.85的產(chǎn)物及n，n-二甲基纈氨酸制備標題化合物。c51h76f3n7o10s計算值：m/z＝1035.53實測值：[m+h]⁺＝1036.5。

實施例1.87：(s)-n-((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-((s)-1-(4-(1-氨基環(huán)丙基)苯基磺酰胺基)-1-氧代基-3-苯基丙-2-基氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n，3-二甲基丁酰胺(化合物32)。

根據(jù)一般方法4，由實施例1.86的產(chǎn)物制備標題化合物。c49h77n7o9s計算值：m/z＝939.55實測值：[m+h]⁺＝940.5。

實施例1.88：(s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-((苯基甲基)磺酰胺基)丙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯。

使用一般方法2，由商業(yè)上獲得的boc-dolaproline-oh及芐基磺酰胺制備標題化合物。c21h32n2o6s計算值：m/z＝440.20實測值：[m+h]⁺463.71。

實施例1.89：(2r，3r)-n-(芐基磺?；?-3-甲氧基-2-甲基-3-((s)-吡咯烷-2-基)丙酰胺。

使用一般方法9，由實施例1.88的產(chǎn)物制備標題化合物。c16h24n2o4s計算值：m/z＝340.15實測值：[m+h]⁺341.75。

實施例1.90：((s)-1-(((s)-1-(((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-((苯基甲基)磺酰胺基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)(甲基)氨基甲酸(9h-芴-9-基)甲酯。

根據(jù)一般方法6，由實施例1.89的產(chǎn)物及實施例1.38的產(chǎn)物制備標題化合物。c52h73n5o10s計算值：m/z＝959.51實測值：[m+h]⁺961.15。

實施例1.91：(s)-n-((3r，4s，5s)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-((苯基甲基)磺酰胺基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-n，3-二甲基-2-((s)-3-甲基-2-(甲基氨基)丁酰胺基)丁酰胺(化合物33)。

根據(jù)一般方法7，由實施例1.90的產(chǎn)物制備標題化合物。c37h63n5o8s計算值：m/z＝737.44實測值：[m+h]⁺739.07。

實施例1.92：(s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-3-((4-(甲氧羰基)苯基)磺酰胺基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯。

根據(jù)一般方法2，由4-氨磺酰基苯甲酸甲酯及boc-dap-oh制備標題化合物。c22h32n2o85計算值：m/z＝484.19.實測值：[m+na]⁺＝507.6。

實施例1.93：4-(n-((2r，3r)-3-((s)-1-((3r，4s，5s)-4-((s)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚?；?吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙?；?氨磺酰基)苯甲酸甲酯(化合物34)。

根據(jù)一般方法9和6，由實施例1.92的產(chǎn)物及dov-val-dil-oh(實施例1.36)制備標題化合物。c22h32n2o8s計算值：m/z＝795.45.實測值：[m+na]⁺＝818.8。

實施例1.94：(s，e)-4-((s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-n，3，3-三甲基丁酰胺基)-2，5-二甲基己-2-烷酸(化合物83)

根據(jù)一般方法4，由(s，e)-4-((s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-n，3，3-三甲基丁酰胺基)-2，5-二甲基己-2烷酸乙酯制備標題化合物。c20h36n2o5計算值：m/z＝384.26實測值：[m+h]⁺＝407.71。¹hnmr(400mhz，氯仿-d)δ6.80(dd，j＝9.6，1.8hz，1h)，5.29(d，j＝10.1hz，1h)，5.16(t，j＝10.0hz，1h)，4.46(d，j＝10.1hz，1h)，3.03(s，3h)，1.95(d，j＝1.5hz，3h)，1.44(s，9h)，0.99(s，9h)，0.92(d，j＝6.5hz，3h)，0.88(d，j＝6.5hz，3h)。

實施例1.95：(2r，3r)-3-甲氧基-2-甲基-3-((s)-吡咯烷-2-基)丙酸甲酯。

向boc-dap-oh(0.635g，2.21mmol)在二氯甲烷/甲醇(95∶5，v/v，10ml)中的攪拌溶液中添加tms-重氮甲烷(2m在己烷中，1.35ml，1.2當量)。監(jiān)測反應(yīng)且當冒泡停止時，hplc-ms分析顯示完全轉(zhuǎn)化為酯。通過添加乙酸淬滅剩余的tms-重氮甲烷并且一旦所有黃色消失，便在減壓下濃縮反應(yīng)。將殘余物溶于二氯甲烷中并且根據(jù)一般方法9.1除去boc-保護基。該物質(zhì)在未進一步純化的情況下“按原樣”使用。c10h19no3計算值：m/z＝201.14實測值：[m+h]⁺＝202.56。¹hnmr(400mhz，甲醇-d4)δ3.88(dd，j＝6.0，3.6hz，1h)，3.74(s，3h)，3.73-3.62(m，1h)，3.52(s，3h)，3.32-3.26(m，2h)，2.88-2.74(m，1h)，2.15-1.87(m，4h)，1.29(d，j＝7.2hz，3h)。

實施例1.96：(2r，3r)-3-((s)-1-((s，e)-4-((s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-n，3，3-三甲基丁酰胺基)-2，5-二甲基己-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸甲酯。

根據(jù)一般方法6，由實施例1.94的產(chǎn)物及實施例1.95的產(chǎn)物制備標題化合物。c30h53n3o7計算值：m/z＝567.39實測值：[m+na]⁺＝590.85。¹hnmr(400mhz，氯仿-d)δ5.53(dd，j＝9.0，1.8hz，1h)，5.18(d，j＝10.1hz，1h)，5.02(dd，j＝10.6，8.8hz，1h)，4.37(d，j＝10.1hz，1h)，4.11-4.01(m，1h)，3.92(dd，j＝8.2，2.8hz，1h)，3.66(s，3h)，3.51-3.42(m，1h)，3.39(s，3h)，3.34-3.23(m，1h)，2.89(s，3h)，2.54-2.43(m，1h)，1.86(s，3h)，1.95-1.77(m，3h)，1.70-1.52(m，1h)，1.36(s，9h)，1.21(d，j＝6.9hz，3h)，0.92(s，9h)，0.88(d，j＝6.6hz，3h)，0.78(d，j＝6.6hz，3h)。

實施例1.97：(2r，3r)-3-((s)-1-((s，e)-4-((s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-n，3，3-三甲基丁酰胺基)-2，5-二甲基己-2-烯?；?吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸。

根據(jù)一般方法4.1，由實施例1.96的產(chǎn)物制備標題化合物。c29h51n3o7計算值：m/z＝553.37實測值：[m+na]⁺＝576.81。¹hnmr(400mhz，氯仿-d)δ5.64(d，j＝8.8hz，1h)，5.37(d，j＝10.1hz，1h)，5.05(s，1h)，4.42(d，j＝10.1hz，1h)，4.23-4.17(m，1h)，4.02(dd，j＝8.8，2.5hz，1h)，3.53-3.46(m，1h)，3.45(s，3h)，3.39-3.27(m，1h)，2.93(s，3h)，2.51-2.36(m，1h)，2.08-1.77(m，4h)，1.90(s，3h)，1.73-1.60(m，1h)，1.40(s，9h)，1.25(d，j＝7.1hz，3h)，0.95(s，9h)，0.91(d，j＝6.5hz，3h)，0.82(d，j＝6.5hz，3h)。

實施例1.98：((s)-1-(((s，e)-6-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-((4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基)磺酰胺基)丙基)吡咯烷-1-基)-2，5-二甲基-6-氧代己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯。

根據(jù)一般方法2，由實施例1.97的產(chǎn)物及實施例1.39的產(chǎn)物制備標題化合物。c37h56f3n5o9s計算值：m/z＝803.38實測值：[m+na]⁺＝826.69。¹hnmr(400mhz，氯仿-d)δ9.66(s，1h)，8.03(d，j＝8.8hz，2h)，7.82(d，j＝8.8hz，2h)，5.62(d，j＝8.6hz，1h)，5.54(d，j＝10.0hz，1h)，5.10-4.98(m，1h)，4.45(d，j＝10.1hz，1h)，4.01(dd，j＝7.2，2.4hz，1h)，3.94-3.83(m，1h)，3.48-3.43(m，1h)，3.41(s，3h)，3.35-3.22(m，1h)，2.95(s，3h)，2.66-2.55(m，1h)，1.87(s，3h)，1.91-1.75(m，2h)，1.67-1.53(m，2h)，1.41(s，9h)，1.14(d，j＝6.9hz，3h)，0.96(s，9h)，0.89(d，j＝6.4hz，3h)，0.82(d，j＝6.5hz，3h)。

實施例1.99：(s)-2-氨基-n-((s，e)-6-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-((4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基)磺酰胺基)丙基)吡咯烷-1-基)-2，5-二甲基-6-氧代己-4-烯-3-基)-n，3，3-三甲基丁酰胺。

根據(jù)一般方法9.1，由實施例1.98的產(chǎn)物制備標題化合物。c32h48f3n5o7s計算值：m/z＝703.32實測值：[m+h]⁺＝704.68。¹hnmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.06(d，j＝8.5hz，2h)，7.90(d，j＝8.5hz，2h)，5.71(dd，j＝9.5，1.9hz，1h)，5.10-5.00(m，2h)，4.30(s，1h)，3.85(dd，j＝8.1，2.7hz，1h)，3.79-3.71(m，1h)，3.55-3.48(m，1h)，3.36(s，3h)，3.40-3.28(m，1h)，3.00(s，3h)，2.52-2.39(m，1h)，2.09-1.96(m，1h)，1.91(s，3h)，1.95-1.83(m，1h)，1.79-1.69(m，1h)，1.69-1.51(m，1h)，1.14(d，j＝6.9hz，3h)，1.10(s，9h)，0.97(d，j＝6.5hz，3h)，0.93(d，j＝6.5hz，3h)。

實施例1.100：(s)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n-((s，e)-6-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-((4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基)磺酰胺基)丙基)吡咯烷-1-基)-2，5-二甲基-6-氧代己-4-烯-3-基)-n，3，3-三甲基丁酰胺(化合物35)。

根據(jù)一般方法6，由實施例1.99的產(chǎn)物及n，n-二甲基纈氨酸制備標題化合物。c39h61f3n6o8s計算值：m/z＝830.42實測值：[m+h]⁺＝831.75。

實施例1.101：(s)-n-((s，e)-6-((s)-2-((1r，2r)-3-((4-氨基苯基)磺酰胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-2，5-二甲基-6-氧代己-4-烯-3-基)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n，3，3-三甲基丁酰胺(化合物36)。

根據(jù)一般方法4.1，由實施例1.100的產(chǎn)物制備標題化合物。c37h62n6o7s計算值：m/z＝734.44實測值：[m+h]⁺＝735.72。

實施例1.102：(s)-1-異丙基-n-((s3-1-(((s，e)-6-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-((4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基)磺酰胺基)丙基)吡咯烷-1-基)-2，5-二甲基-6-氧代己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)哌啶-2-甲酰胺(化合物37)。

根據(jù)一般方法6，由實施例1.99的產(chǎn)物及(r)-1-異丙基哌啶-2-羧酸制備標題化合物。c41h63f3n6o8s計算值：m/z＝856.44實測值：[m+h]⁺＝857.80。

實施例1.103(s)-n-((s)-1-(((s，e)-6-((s)-2-((1r，2r)-3-((4-氨基苯基)磺酰胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-2，5-二甲基-6-氧代己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)-1-異丙基哌啶-2-甲酰胺(化合物38)。

根據(jù)一般方法4.1，由實施例1.102的產(chǎn)物制備標題化合物。c39h64n6o7s計算值：m/z＝760.46實測值：[m+h]⁺＝761.77。

實施例1.104：(s，e)-3-(1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-2-甲基丙烯酸。

根據(jù)一般方法4.1，由(s，e)-2-(3-乙氧基-2-甲基-3-氧代丙-1-烯-1-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(根據(jù)j.org.chem.，2003，68(16)，第6459-6462頁所制備)合成標題化合物。c13h21no4計算值：m/z＝255.15實測值：[m-boc+h]⁺＝156.5，[m-boc+mecn]⁺＝197.5。

實施例1.105：(s，e)-2-(2-甲基-3-氧代基-3-((4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基)磺酰胺基)丙-1-烯-1-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯。

根據(jù)一般方法2，由實施例1.104的產(chǎn)物及實施例1.39的產(chǎn)物制備標題化合物。c21h26f3n3o6s計算值：m/z＝505.15實測值：[m-boc+h]⁺＝406.5，[m+na]⁺＝528.5。

實施例1.106：(s，e)-2-甲基-3-(吡咯烷-2-基)-n-((4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基)磺酰基)丙烯酰胺。

根據(jù)一般方法9.1，由實施例1.105的產(chǎn)物制備標題化合物。c16h18f3n3o4s計算值：m/z＝405.10，實測值：[m+h]⁺＝406.5。

實施例1.107：(s)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n-((3r，4s，5s)-3-甲氧基-5-甲基-1-((s)-2-((e)-2-甲基-3-氧代基-3-((4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基)磺酰胺基)丙-1-烯-1-基)吡咯烷-1-基)-1-氧代庚烷-4-基)-n，3-二甲基丁酰胺(化合物39)。

根據(jù)一般方法6，由實施例1.106的產(chǎn)物及實施例1.36的產(chǎn)物制備標題化合物。c38h59f3n6o8s計算值：m/z＝816.41，實測值：[m+h]⁺＝817.7。

實施例2：本發(fā)明的藥物-接頭綴合物的合成。

方案1

方案1示出了合成d-l復合物的一般方案的具體實施方案。在本發(fā)明的其它實施方案中，在添加氨基酸(例如，aa1-aa2)之前將保護基(pg1)從毒素(或藥物)中除去。在本發(fā)明的某些實施方案中，錨定物包括可與靶標形成共價鍵的官能團。在本發(fā)明的其它實施方案中，錨定物包含延伸物(stretcher)。

實施例2.1：(s)-n-(4-(n-((2r，3r)-3-((s)-1-((3r，4s，5s)-4-((s)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚?；?吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙?；?氨磺?；?苯基)-2-((s)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)-14-異丙基-12-氧代基-3，6，9-三氧雜-13-氮雜十五烷-15-酰胺基)-5-脲基戊酰胺。

使用一般方法5，由mt-vc-oh及化合物5合成標題化合物并且通過制備型hplc色譜法純化。c61h101n11o17s計算值：m/z＝1291.71實測值：[m+h]⁺1292.89。

實施例2.2：(s)-n-(4-((n-((2r，3r)-3-((s)-1-((3r，4s，5s)-4-((s)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚?；?吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙?；?氨磺?；?甲基)苯基)-2-((s)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)-14-異丙基-12-氧代基-3，6，9-三氧雜-13-氮雜十五烷-15-酰胺基)-5-脲基戊酰胺。

使用一般方法5，由mt-vc-oh及化合物8合成標題化合物并且通過制備型hplc色譜法純化。c61h101n11o17s計算值：m/z＝1305.73實測值：[m+h]⁺＝1306.9。

實施例2.3：(s)-n-(4-(n-(((2r，3r)-3-((s)-1-((3r，4s，5s)-4-((s)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚?；?吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙?；?-l-苯基丙酰胺基)氨磺酰基)苯基)-2-((s)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)-14-異丙基-12-氧代基-3，6，9-三氧雜-13-氮雜十五烷-15-酰胺基)-5-脲基戊酰胺。

根據(jù)一般方法5，由mt-vc-oh及化合物11制備標題化合物。c70h110n12o18s計算值：m/z＝1438.8amu；實測值：[m+h]⁺＝1440.2，[(m+2h)/2]²⁺＝720.5。

實施例2.4：(s)-n-(4-((n-(((2r，3r)-3-((s)-1-((3r，4s，5s)-4-((s)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚?；?吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)-l-苯基丙酰胺基)氨磺?；?甲基)苯基)-2-((s)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)-14-異丙基-12-氧代基-3，6，9-三氧雜-13-氮雜十五烷-15-酰胺基)-5-脲基戊酰胺。

根據(jù)一般方法5，由化合物14及mt-vc-oh制備并且通過制備型hplc純化。c71h112n12o18s計算值：m/z＝1452.80amu；實測值：[m+h]⁺＝1453.7。

實施例2.5：(s)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n-((3r，4s，5s)-1-((s)-2-((1r，2r)-3-((4-(3-(2-(2-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙烷酰胺基)苯基)磺酰胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-n，3-二甲基丁酰胺。

使用一般方法6，由化合物5及mt-oh制備標題化合物。c50h81n7o14s計算值：m/z1035.56＝實測值：[m+h]⁺1037.97。

實施例2.6：(s)-n-(1-(4-(n-((2r，3r)-3-((s)-1-((3r，4s，5s)-4-((s)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚?；?吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)氨磺?；?苯基)環(huán)丙基)-2-((s)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)-14-異丙基-12-氧代基-3，6，9-三氧雜-13-氮雜十五烷-15-酰胺基)-5-脲基戊酰胺。

遵循一般方法8，由化合物30、boc-vc-oh及mt-nhs制備標題化合物。c64h105n11o17s計算值：m/z＝1331.74實測值：[m+h]⁺＝1332.8。

實施例2.7：((s)-1-(((s)-1-((1-(4-(n-(((2r，3r)-3-((s)-1-((3r，4s，5s)-4-((s)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙?；?-l-苯基丙酰胺基)氨磺?；?苯基)環(huán)丙基)氨基)-1-氧代基-5-脲基戊-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯。

遵循一般方法5，由化合物32及boc-vc-oh制備標題化合物。c65h105n11o14s計算值：m/z＝1295.76實測值：[m+h]⁺＝1297.2。

實施例2.8：(s)-n-(1-(4-(n-(((2r，3r)-3-((s)-1-((3r，4s，5s)-4-((s)-2-((s)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-n，3-二甲基丁酰胺基-3-甲氧基-5-甲基庚?；?吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙?；?l-苯基丙酰胺基)氨磺酰基)苯基)環(huán)丙基-2-((s)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)-14-異丙基-12-氧代基-3，6，9-三氧雜-13-氮雜十五烷-15-酰胺基)-5-脲基戊酰胺。

遵循一般方法9和8，由實施例2.7的產(chǎn)物及mt-nhs制備標題化合物。c73h114n12o18s計算值：m/z＝1478.81實測值：[m+h]⁺＝1479.7。

實施例2.9：4-((s)-2-((s)-2-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1h-吡咯-1-基)己烷酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊烷酰胺基)芐基((s)-1-(((s)-1-(((3r，4s，5r)-3-甲氧基-1-((s)-2-((1r，2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代基-3-((苯基甲基)磺酰胺基)丙基)吡咯烷-1-基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)(甲基)氨基甲酸酯。

由化合物33及商業(yè)上購得的mc-vc-pabc-opnp制備標題化合物。c66h101n11o16s計算值：m/z＝1335.71實測值：[m+h]⁺1337.28。

本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，可能進行如以上方案中所示的化學轉(zhuǎn)化，其中有一個或多個參數(shù)的修改。作為實例，替代的非親核溶劑可適用于化學過程中，如thf、dmf、甲苯等。反應(yīng)溫度可變化。替代試劑可適于充當脫水劑或酸活化劑，其通常用于酰胺形成反應(yīng)中，如五氟苯基酯、nhs酯、edac、hbtu、hobt等。

實施例3：式i化合物在jurkat和hcc1954細胞系中的細胞毒性。

針對jurkat和hcc1954細胞系測試化合物以評價它們的細胞毒性。以各種濃度(30nm至1000nm)起始1∶3滴定化合物。對照細胞毒素hti-286(參見，例如u.s.7,579,323)也是從30nm濃度開始進行1∶3滴定。將板孵育3天。使用30μl/孔的1×celltiter-glo試劑量化細胞活力。對照細胞毒素在預期濃度下成功地殺滅了jurkat。

每個細胞系在其相應(yīng)的生長培養(yǎng)基中生長直到接種日。將細胞從它們的培養(yǎng)容器中移除并且使用vicell計數(shù)所生成的細胞懸液。接著將細胞在其生長培養(yǎng)基中稀釋至25000/ml，以使得100μl/孔＝2500個細胞/孔。將每個細胞系接種在96孔黑壁tc板的內(nèi)部60個孔中，外部的孔用水填充。在測定建立之前一天接種hcc1954。如下所述稀釋細胞毒素，在深孔96孔板中使用rpmi+10％fbs制備每種化合物的5×劑量-反應(yīng)。此“主”稀釋板用于每個細胞系。將25μl的5×劑量反應(yīng)一式三份摻入每個細胞系中。使板回到培養(yǎng)箱中并且孵育3晚。3晚之后，使用30μl/孔的1×celltiter-glo試劑量化細胞活力。孵育至少10分鐘之后，使用spectramax(500ms積分)測量發(fā)光。結(jié)果示于表2以及圖1和2中。

表2

實施例3.1：式i化合物在jurkat、hcc1954、nci-n87、bxpc-3、sk-ov-3和jimt-1細胞系中的細胞細胞毒性的評價。

針對一種或多種以下細胞系測試化合物：人t細胞白血病細胞系jurkat(atcc：tib-152)；人乳腺癌細胞系hcc1954(atcc：crl-2338)和jimt-1(dsmz：acc589)；人胰腺細胞系bxpc-3(atcc：crl.1687)、人卵巢腺癌細胞系sk-ov-3(atcc：htb-77)及人胃癌細胞系nci-n87(atcc：crl.5822)；以便評價它們的細胞毒性。

簡單說來，細胞是獲自商業(yè)來源并且如所提供的產(chǎn)品頁中所述進行培養(yǎng)。將細胞從其培養(yǎng)容器中移除并且使用vicell(beckmancoulter)計數(shù)所生成的細胞懸液，然后以25,000個細胞/ml(2,500個細胞/孔)接種在costar3904黑壁平底的96孔板(細胞接種在96孔tc板的內(nèi)部60個孔中，并且外緣孔用水填充)中。在37℃/5％co2氣氛下孵育貼壁細胞系一夜以允許細胞附著在微量滴定板表面，而在使用之前即刻將細胞懸液(jurkat)鋪板。將細胞毒素溶解并且在二甲亞砜中連續(xù)稀釋，然后將溶液以五倍所需最大最終濃度添加到完全生長培養(yǎng)基中。接著在生長培養(yǎng)基中，通常1∶3，經(jīng)八個步驟滴定細胞毒素。不存在測試品的對照(生長培養(yǎng)基單獨)一式六份包括在每個微量滴定板上。將所制備的毒素滴定液(25μl/孔)一式三份添加到每個測定的細胞系。將細胞和滴定液在37℃/5％co2下孵育三晚(jurkat)和五晚(所有其它細胞系)。孵育之后，使用通過向每個測定孔中添加30μl所制備的試劑測量細胞活力。在黑暗中孵育混合物至少20分鐘，之后使用微板光度計(500ms積分時間)測量所發(fā)出的發(fā)光。將所收集的相對發(fā)光單位(rlu)轉(zhuǎn)化為使用以上提及的生長培養(yǎng)基單獨對照的細胞毒性％(細胞毒性％＝1-[孔rlu/平均培養(yǎng)基單獨對照rlu]×100％)。繪制數(shù)據(jù)(細胞毒性％對比adc的濃度(log10(nm))并且使用graphpadprism軟件5.02版，使用非線性回歸方法(四參數(shù)-可變斜率)將其擬合至曲線以便獲得ec50估算值。對照細胞毒素，通常是hti-286(參見，例如u.s.7,579,323)以預期濃度成功地殺滅了所有細胞系。

結(jié)果示于表2.1中。

表2.1

*在300nm下無細胞毒性

實施例4：生物測定。

細胞系：人t細胞白血病細胞系jurkat(atcc：tib-152)；hcc1954(atcc：crl.2338)；人胰腺細胞系：aspc-1(atcc：crl-1682)、bxpc-3(atcc：crl.1687)、hpaf-ii(atcc：crl.1997)、miapaca2(atcc：crl.1420)、panc-1(atcc：crl.1469)、capan-1(atcc：htb-79)、capan-2(atcc：htb-80)以及人胃癌細胞系nci-n87(atcc：crl.5822)；aml-193(atcc：crl.9589)、ccrf-cem(atcc：ccl-119)、du145(atcc：htb-81)、pc-3(atcc：crl.1435)、a-431(atcc：crl.1555)、ht-29(atcc：htb-38)、a-172(atcc：crl.1620)、nci-h358(atcc：crl.5807)、a549(atcc：ccl-185)、colo-205(atcc：ccl-222)、mda-mb-231(atcc：htb-26)、ovcar-3(atcc：htb-161)、ov-90(atcc：crl.11732)、oe19(sigma：96071721)、rt112/84(sigma：85061106)。

在添加化合物之前一天，將hcc1954aspc-1、bxpc-3、hpaf-ii、miapaca2、panc-1、capan-1、capan-2及nci-n87細胞以2500個細胞/100微升(μl)培養(yǎng)基的密度添加到使用完全生長培養(yǎng)基的壁不透明的96孔組織培養(yǎng)處理的微量滴定板中。在37℃/5％co2下孵育這些貼壁細胞系細胞一夜以允許細胞附著在微量滴定板表面。添加化合物當天，將jurkat細胞以2500個細胞/100μl添加到使用與hcc1954相同的生長培養(yǎng)基的單獨的96孔微量滴定板中。首先使用二甲亞砜將化合物連續(xù)稀釋，然后將所制備的稀釋液以五倍最終濃度添加到完全生長培養(yǎng)基中。然后經(jīng)八個步驟1∶3滴定化合物。沒有化合物的對照(生長培養(yǎng)基單獨)一式六份包括在每個微量滴定板上。一式三份添加(25μl/孔)所制備的化合物滴定液。在37℃/5％co2下孵育細胞及化合物滴定液三晚。孵育之后，通過將30μl所制備的添加到每個測定孔中，使用試劑測量細胞活力。在黑暗中孵育測定至少20分鐘，之后使用微板光度計(500ms積分時間)測量所發(fā)出的發(fā)光。將所收集的相對發(fā)光單位(rlu)轉(zhuǎn)化為使用以上提及的生長培養(yǎng)基單獨對照的細胞毒性％(細胞毒性％＝1-[孔rlu/平均培養(yǎng)基單獨對照rlu])。

使用三參數(shù)非線性回歸曲線擬合，將graphpad用于生成ec50值。

實施例5：示例性抗體-藥物綴合物。

1.示例性接頭

如熟練技術(shù)人員認識到，用于綴合物形成的具體接頭將取決于用于鍵形成的反應(yīng)物化合物的反應(yīng)性基團。舉例來說，并且在本發(fā)明范圍內(nèi)，具有硫醇部分的化合物可用于綴合物形成。在一些本實施例中，可商購獲得的可裂解的接頭6-[3＇(2-吡啶基二硫基)-丙酰胺基]己酸磺基琥珀酰亞胺酯(磺基-lc-spdp：thermopierce目錄號21650)和非可裂解的接頭4-[n-馬來酰亞胺基甲基]環(huán)己烷-1-羧酸琥珀酰亞胺酯(smcc：thermopierce目錄號22360)被用于抗體-藥物綴合反應(yīng)。偶聯(lián)過程是以兩個主要步驟進行：1)經(jīng)由與抗體伯胺基團(賴氨酸殘基)及接頭的n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)酯部分的反應(yīng)將接頭并入到抗體上；以及2)并入的馬來酰亞胺基團(smcc)或2-吡啶基二硫基(lc-spdp)與含有硫醇的化合物的反應(yīng)。、

2.具有可裂解的(lc-spdp)或非可裂解的(smcc)接頭的抗體的活化

將抗體在磷酸鉀ph8(磺基-lc-spdp)或d-pbs(invitrogen)ph7.4(smcc)中稀釋至5mg/ml。向稀釋的抗體中添加剛?cè)芙獾慕宇^，對磺基-lc-spdp使用超純水或?qū)mcc使用無水n，n-二甲基乙酰胺(dma)。10-14倍摩爾過量的smcc：抗體或磺基-lc-spdp：抗體造成5-7個接頭/抗體的并入。在28℃下孵育接頭-抗體“活化”反應(yīng)2小時。孵育之后，使用40kdazeba^tm尺寸排阻色譜法/脫鹽柱(thermopierce目錄號87771或87772，根據(jù)規(guī)模)從每個抗體樣品中除去未反應(yīng)的接頭。在同一色譜法步驟期間，更換緩沖液為下一個反應(yīng)做準備：磷酸鹽緩沖液/edtaph6.5(lc-spdp)或檸檬酸鹽緩沖液/edtaph5(smcc)。然后使用微板適合的bca測定(thermopierce目錄號23225)針對抗體標準曲線測定純化制劑的總蛋白含量。為了估計接頭并入的程度，進行與過量(與蛋白質(zhì)濃度相比，約10倍)半胱氨酸的小規(guī)模反應(yīng)。10min孵育之后，使用5，5-二硫代-雙-(2-硝基苯甲酸)(ellman＇s試劑，thermopierce目錄號22582)檢測未反應(yīng)的半胱氨酸。通過對來自半胱氨酸標準曲線的濃度進行內(nèi)插，通過從所用半胱氨酸的已知濃度中減去測定值來確定接頭濃度。

3.含有硫醇的化合物對接頭-活化抗體的反應(yīng)

在偶聯(lián)反應(yīng)的第二步中，通過首先使用磷酸鹽緩沖液/edtaph6.5(lc-spdp)或檸檬酸鹽緩沖液/edtaph5(smcc)將制劑稀釋至2mg/ml來利用活化的抗體。在使用之前，使用tcep-瓊脂糖珠粒還原含有硫醇的n-?；酋０坊衔镆源_保硫醇基可用于對并入的接頭作出反應(yīng)。簡單地說，使用磷酸鹽緩沖液/edtaph6.5將化合物稀釋至5mm。在其中水溶性是一個問題的情況下，添加少量的37％hcl(1∶300)并且其足以在5mm下溶解化合物。在使用之前，使tcep-瓊脂糖珠粒(thermopierce目錄號77712)用磷酸鹽緩沖液/edta/10％dma平衡。將化合物稀釋物繞tcep-瓊脂糖珠粒旋轉(zhuǎn)至少0.5小時或長達3小時。在過濾器(其排除tcep-瓊脂糖)上，通過離心收集還原的化合物。使用ellman＇s試劑(與半胱氨酸標準曲線相比)測量還原的程度及硫醇濃度。然后將含有還原硫醇的化合物以與先前測定的接頭濃度相比約2倍摩爾過量添加到活化的抗體樣品中。為了監(jiān)測偶聯(lián)反應(yīng)有效性，通過將每種化合物以與綴合反應(yīng)中所用的相同稀釋因子在磷酸鹽緩沖液/edtaph6.5或檸檬酸鹽緩沖液/edtaph5中稀釋來制備“過夜”綴合物對照。將剩余的化合物貯備液在-80℃下冷凍。在周圍溫度下孵育反應(yīng)及過夜對照過夜。次日早晨，將冷凍的化合物貯備液解凍并且為每種化合物準備另一對照，就像“過夜”對照-這是“新鮮”對照。使用ellman＇s試劑將小體積的每個綴合反應(yīng)與過夜及新鮮化合物對照相比。使用40kdazeba^tm尺寸排阻/脫鹽柱從adc中純化出未反應(yīng)的化合物；在同一步驟期間，將緩沖液更換為d-pbsph7.4(invitrogen)。然后就以下來分析純化的adc：總蛋白含量(bca測定，piercemicrobca方案)、抗原結(jié)合的相對親和力(平衡天然結(jié)合)、以及her2陽性細胞(hcc1954)與her2陰性細胞(jurkat)相比的選擇性細胞毒性殺滅。

4.細胞毒性測定

在添加測試品之前一天，將hcc1954細胞以2,500個細胞/100μl培養(yǎng)基的密度添加到使用完全生長培養(yǎng)基的壁不透明的96孔組織培養(yǎng)處理的微量滴定板中。在37℃/5％co2下孵育hcc1954細胞一夜以允許細胞附著在微量滴定板表面。添加測試品當天，將jurkat細胞以2,500個細胞/100μl添加到使用與hcc1954相同的生長培養(yǎng)基的單獨的96孔微量滴定板中。為了比較adc殺滅與從游離化合物處獲得的那個，首先使用二甲亞砜或dma將n-酰基磺酰胺化合物連續(xù)稀釋，然后將所制備的稀釋液以五倍最終濃度添加到完全生長培養(yǎng)基中。然后經(jīng)八個步驟1∶3滴定化合物。為了測試adc，將其以五倍最終濃度直接在生長培養(yǎng)基中稀釋。然后經(jīng)八個步驟1∶3滴定adc。不存在測試品的對照(生長培養(yǎng)基單獨)一式六份包括在每個微量滴定板上。將所制備的化合物/adc滴定液一式三份添加(25μl/孔)到hcc1954細胞及jurkat細胞中。在37℃/5％co2下孵育細胞及滴定液三晚。孵育之后，通過將30μl所制備的添加到每個測定孔中，使用試劑測量細胞活力。在黑暗中孵育測定至少20分鐘，之后使用微板光度計(500ms積分時間)測量所發(fā)出的發(fā)光。將所收集的相對發(fā)光單位(rlu)轉(zhuǎn)化為使用以上提及的生長培養(yǎng)基單獨對照的細胞毒性％(細胞毒性％＝1-[孔rlu/平均培養(yǎng)基單獨對照rlu])。

5.通過esitof質(zhì)譜法的抗體-藥物綴合物(adc)的分析。

電噴霧電離飛行時間(esitof)質(zhì)譜(ms)儀器(qstarxl混合四極-toflc/msms；absciex)被用于測定adc的分子量并且評估藥物-抗體比率(dar)。esitofms儀器裝備有電噴霧電離渦輪噴霧源。以陽離子模式進行數(shù)據(jù)獲取，并且使用analystqs1.1軟件獲取在2,000m/z至4,000m/z的質(zhì)量范圍上的樣品總離子流。如下操作離子源：5.2kv的離子噴霧針電壓、在25(任意單位)下的噴霧作用(氣體1)、30(任意單位)的氣簾氣、150v的去簇電壓及150℃的溫度。將adc測試樣品溶液借助于注射器和注射器泵，經(jīng)由熔融二氧化硅毛細管，通過直接輸注以5μl/min引入離子源中。通常dar在0至4的范圍內(nèi)。

6.制備adc樣品用于esi-tofms分析

使用endos(iggzero)^tm內(nèi)切糖苷酶對所有adc樣品去糖基化并且在esitof-ms分析之前用水更換緩沖液。簡單說來，使原始adc樣品穿過100kmwcoamicon濃縮器以便在磷酸鈉緩沖液中的緩沖液更換。然后用在含有150mmnacl的磷酸鈉裂解緩沖液中的iggzero^tm(1單位/1μg抗體)處理緩沖液更換的樣品并且在37℃下孵育30min。使用100kmwcoamicon濃縮器再次用水對所生成的去糖基化adc進行緩沖液更換，并且在分析之前用在乙腈/水中的0.1％甲酸(50/50v/v％)稀釋至3.0μg/μl的濃度。

實施例6：示例性抗體-藥物綴合物

1.由mcvcpabc-毒素制備抗體-藥物綴合物，一般方法

向抗體(1-10mg/ml)在25mm硼酸鈉、25mm氯化鈉、1mmdtpa(ph8.0)中的溶液中添加來自在相同緩沖液(2.0-3.0摩爾當量)中新鮮制備的貯備液(1-10mm)的tcep。將溶液充分混合并且在冰上冷卻之前，在37℃下孵育2h。在一些情況下，將還原的抗體溶液進一步用含有1mmdtpa的冰冷的磷酸鹽緩沖鹽水(最終蛋白質(zhì)濃度2.0mg/ml)或冰冷的25mm硼酸鈉、25mm氯化鈉、1mmdtpa(ph8.0)稀釋以獲得最終蛋白質(zhì)濃度在1與4mg/ml之間的溶液。向在冰上儲存的還原蛋白質(zhì)溶液中添加來自10mmdmso儲備溶液的馬來酰亞胺官能化的毒素(10-12摩爾當量)。立即通過倒轉(zhuǎn)充分地混合綴合反應(yīng)并且允許綴合繼續(xù)在冰上進行大約1小時，之后通過在磷酸鹽緩沖鹽水或10mm檸檬酸鈉、150mm氯化鈉ph5.5預平衡過的zeba^tm自旋脫鹽柱(40kdamwco；peirce)上純化。將洗出液匯集，過濾法消毒(millipore)，并且在4℃下儲存。分析純化的adc的總蛋白含量(二金雞納酸(bicinchonicacid)測定，piercemicrobca方案，目錄號23225)。通過還原和非還原page、hplc-hic、sec和rp-uplc-ms表征adc產(chǎn)物。平均dar及藥物分布衍生自參考非還原page對hic及l(fā)c-ms數(shù)據(jù)的說明。平均dar估算值通常在3.5-4.5的范圍內(nèi)。如(上文/下文)所述進行adc對抗原結(jié)合(平衡天然結(jié)合)的相對親和力。通過測試抗原陽性及抗原陰性細胞系的殺滅來評價抗體藥物綴合物的選擇性細胞毒性。

2.通過抗體藥物綴合物對抗原陽性細胞的選擇性體外細胞毒性的測定

展示所制備的每種綴合物相對于抗原陰性jurkat細胞的抗原陽性細胞系(包括hcc1954、nci-n87、hpaf-ii及bxpc-3細胞系)的選擇性殺滅。簡單說來，細胞是由atcc獲得并且如所提供的產(chǎn)品頁中所述進行培養(yǎng)。將細胞以25,000個細胞/ml(2,500個細胞/孔)接種在costar3904黑壁平底的96孔板中。在37℃/5％co2氣氛下孵育貼壁細胞系細胞一夜以允許細胞附著在微量滴定板表面，而在使用之前即刻將細胞懸液(jurkat)鋪板。將adc以五倍所需最終濃度直接在適當?shù)募毎L培養(yǎng)基中稀釋。然后經(jīng)八個步驟，通常1∶3滴定這些adc。不存在測試品的對照(生長培養(yǎng)基單獨)一式六份包括在每個微量滴定板上。將所制備的adc滴定液一式三份添加(25μl/孔)到所測定的每個細胞系中。將細胞和滴定液在37℃/5％co2下孵育三晚(jurkat)和五晚(所有其它細胞系)。孵育之后，通過將30μl所制備的添加到每個測定孔中，使用試劑測量細胞活力。在黑暗中孵育混合物至少20分鐘，之后使用微板光度計(500ms積分時間)測量所發(fā)出的發(fā)光。將所收集的相對發(fā)光單位(rlu)轉(zhuǎn)化為使用以上提及的生長培養(yǎng)基單獨對照的細胞毒性％(細胞毒性％＝1-[孔rlu/平均培養(yǎng)基單獨對照rlu])。繪制數(shù)據(jù)(細胞毒性％對比adc的濃度(log10(nm))并且使用graphpadprism軟件5.02版，通過非線性回歸方法分析以獲得ec50估算值。

3.藥物與抗體比率(dar)的估算

通過疏水性相互作用色譜法及高效液相色譜-質(zhì)譜法評價毒素-接頭與抗體的平均綴合度。這些技術(shù)描述于antibodydrugconjugates，methodsinmolecularbiology第1045卷，2013年第275-284頁.l.ducry編著，及asishb.chakraborty、scottj.berger和johnc.gebler，characterizationofanigglmonoclonalantibodyandrelatedsub-structuresbylc/esi-tof/ms：applicationnote，waterscorporation.2007年3月.720002107en中。通常，dar在0至4的范圍內(nèi)。

方法1.疏水性相互作用色譜法

使抗體藥物綴合物在連接到agilent1100系列hplc上的butyl-npr柱(tosohbioscience；內(nèi)徑4.6mm×35mm；2.5μm粒徑)上經(jīng)歷疏水性相互作用色譜法(hic)。以4mg/ml或超過4mg/ml注入樣品(5μl)。必要時，在注射之前使用pallnanosepomega離心濃縮裝置(部件#od010c34)濃縮adc。采用線性梯度洗脫，起始于95％流動相a/5％流動相b，在12min時間內(nèi)轉(zhuǎn)換為5％流動相a/95％流動相b(流動相a：1.5m硫酸銨+25mm磷酸鈉ph6.95及流動相b：25％異丙醇、75％25mm磷酸鈉ph6.95)。未修飾的抗體的注入提供鑒別具有dar＝0的峰的手段。根據(jù)在280nm下的吸光度檢測抗體。

方法2.超高效液相色譜-質(zhì)譜法用于dar估算

反相超高效液相色譜串聯(lián)esi-qtof-質(zhì)譜法(uplc-esi-qtof-ms)被用于表征抗體藥物綴合物在用二硫蘇糖醇還原之后的藥物綴合程度。使用耦合到具有電噴霧離子源的quattro-premier^tmqtof質(zhì)譜儀(waterscorporation)上的(h-類)bio進行表征。在70℃下，用polymerx^tm5upr-1100a，50×2.0mm柱(phenomenex，inc.)及由溶劑a：乙腈/水/三氟乙酸/甲酸(10/90/0.1/0.1，v/v％)和溶劑b：乙腈/甲酸(100/0.1，v/v)構(gòu)成的流動相進行還原的adc樣品的uplc分析。用線性梯度洗脫還原的adc樣品的組分，起始于溶劑a/溶劑b(80/20v/v及0.3ml/min的流速至溶劑a/溶劑b(40/60，v/v)，經(jīng)25min，然后經(jīng)2min至溶劑a/溶劑b(10/90，v/v％)，之后平衡回到初始條件?？傔\行時間是30min。使用masslynx^tm數(shù)據(jù)獲取軟件(waterscorporation)獲取在500-4,500m/z范圍的esi-tofms總離子流(tic)數(shù)據(jù)。以陽離子v模式獲取樣品組分質(zhì)量數(shù)據(jù)，并且如下操作esi來源：源溫度：150℃；去溶劑化溫度350℃；去溶劑化氣體：800l/h；樣品錐電壓：60v；毛細管電壓：3.0kv；去溶劑化氣體：氮氣；以及碰撞氣體：氬氣。通過maximumentropy^tm1(max-ent1)算法去卷積每個峰的總tic質(zhì)譜以生成峰組分的中性質(zhì)量數(shù)據(jù)。

4.制備還原的adc樣品用于uplc/esi-tofms分析

在60℃下使用20mmdtt進行adc的抗體(約1μg/μl溶液)中二硫鍵的還原歷時20min以生成輕鏈和重鏈。注射體積的5-10μl的還原的adc樣品被用于uplc/esi-tof-ms分析。

實施例6.1示例性抗體-藥物綴合物

1.由馬來酰亞胺官能化的藥物-接頭制備抗體-藥物綴合物，一般方法

向抗體(1-10mg/ml)在磷酸鹽緩沖鹽水(ph7.4)中的溶液中添加來自在相同緩沖液(2.0-3.0摩爾當量)中新鮮制備的貯備液(1-10mm)的tcep。將溶液充分混合并且在冰上冷卻之前，在37℃下孵育2h。在一些情況下，將還原的抗體溶液進一步用含有1mmdtpa的冰冷的磷酸鹽緩沖鹽水稀釋以獲得最終蛋白質(zhì)濃度在1與5mg/ml之間的溶液。向在冰上儲存的還原蛋白質(zhì)溶液中添加來自10-20mmdmso儲備溶液的馬來酰亞胺官能化的藥物-接頭(8-10摩爾當量)。立即通過倒轉(zhuǎn)充分地混合綴合反應(yīng)并且允許綴合繼續(xù)在冰上進行大約1小時，之后通過在磷酸鹽緩沖鹽水預平衡過的zeba^tm自旋脫鹽柱(40kdamwco；peirce)上純化。將洗出液匯集，過濾法消毒(millipore)，并且在4℃下儲存。分析純化的adc的總蛋白含量(二金雞納酸測定，piercemicrobca方案，目錄號23225)。通過還原和非還原page、hplc-hic、sec和rp-uplc-ms表征adc產(chǎn)物。平均dar及藥物分布衍生自參考非還原page對hic及l(fā)c-ms數(shù)據(jù)的說明。平均dar估算值通常在3.5-4.2的范圍內(nèi)。如(上文/下文)所述進行adc對于抗原結(jié)合(平衡天然結(jié)合)的相對親和力。通過在細胞細胞毒性測定中測試抗原陽性及抗原陰性細胞系的殺滅來評價抗體藥物綴合物的選擇性細胞毒性。

2.抗體藥物綴合物對抗原陽性細胞的選擇性體外細胞毒性的測定

測試抗體藥物綴合物對包括以下的培養(yǎng)細胞系的細胞毒性：人t細胞白血病細胞系jurkat(atcc：tib-152)；人乳腺癌細胞系hcc1954(atcc：crl-2338)和jimt-1(dsmz：acc589)；人卵巢腺癌細胞系sk-ov-3(atcc：htb-77)；人胃癌細胞系nci-n87(atcc：crl-5822)；人非何杰金氏淋巴瘤細胞系karpas299(健康保護局培養(yǎng)物中心(healthprotectionagencyculturecollections：06072604)；以及人伯基特氏(burkitt＇s)淋巴瘤細胞系ramos(atcc：crl-1596)。為所制備的每種綴合物展示抗原陽性細胞系(包括對于基于曲妥單抗的綴合物是hcc1954、nci-n87、sk-ov-3及jimt-1細胞系；對于基于利妥昔單抗的綴合物是ramos細胞系；對于基于貝倫妥單抗(cac-10)的綴合物是karpas299)相對于一個或多個抗原陰性細胞系(對于基于曲妥單抗的綴合物是jurkat、karpas299及ramos；對于基于貝倫妥單抗(cac-10)和利妥昔單抗的綴合物是nci-n87)的選擇性殺滅。簡單說來，細胞是獲自商業(yè)來源并且如所提供的產(chǎn)品頁中所述進行培養(yǎng)。將細胞以25,000個細胞/ml(2,500個細胞/孔)接種在costar3904黑壁平底的96孔板中。在37℃/5％co2氣氛下孵育貼壁細胞系一夜以允許細胞附著在微量滴定板表面，而在使用之前即刻將細胞懸液(jurkat)鋪板。將adc以五倍所需最終最大濃度直接在適當?shù)募毎L培養(yǎng)基中稀釋。然后經(jīng)八個步驟，通常1∶3滴定這些adc。不存在測試品的對照(生長培養(yǎng)基單獨)一式六份包括在每個微量滴定板上。將所制備的adc滴定液各自一式三份添加(25μl/孔)到所測定的每個細胞系中。將細胞和滴定液在37℃/5％co2下孵育三晚(jurkat)和五晚(所有其它細胞系)。孵育之后，使用通過向每個測定孔中添加30μl所制備的試劑測量細胞活力。在黑暗中孵育混合物至少20分鐘，之后使用微板光度計(500ms積分時間)測量所發(fā)出的發(fā)光。將所收集的相對發(fā)光單位(rlu)轉(zhuǎn)化為使用以上提及的生長培養(yǎng)基單獨對照的細胞毒性％(細胞毒性％＝1-[孔rlu/平均培養(yǎng)基單獨對照rlu])。繪制數(shù)據(jù)(細胞毒性％對比adc的濃度(log10(nm))并且使用graphpadprism軟件5.02版，使用非線性回歸方法(四參數(shù)-可變斜率)將其擬合至曲線以便獲得ec50估算值。

3.藥物與抗體比率(dar)的估算

通過疏水性相互作用色譜法及高效液相色譜-質(zhì)譜法評價毒素-接頭與抗體的平均綴合度。這些技術(shù)描述于antibodydrugconjugates，methodsinmolecularbiology第1045卷，2013年.第275-284頁.l.ducry編著，及asishb.chakraborty、scottj.berger和johnc.gebler，characterizationofanigg1monoclonalantibodyandrelatedsub-structuresbylc/esi-tof/ms：applicationnote，waterscorporation.2007年3月.720002107en中。

方法1.疏水性相互作用色譜法

使抗體藥物綴合物在連接到agilent1100系列hplc上的butyl-npr柱(tosohbioscience；內(nèi)徑4.6mm×35mm；2.5μm粒徑)上經(jīng)歷疏水性相互作用色譜法(hic)。以4mg/ml或超過4mg/ml注入樣品(5μl)。采用線性梯度洗脫，起始于95％流動相a/5％流動相b，在12min時間內(nèi)轉(zhuǎn)換為5％流動相a/95％流動相b(流動相a：1.5m硫酸銨+25mm磷酸鈉ph6.95及流動相b：25％異丙醇、75％25mm磷酸鈉ph6.95)。使用相同流動相組分的替代梯度提供一些綴合物的改善拆分。未修飾的抗體的注入提供鑒別具有dar＝0的峰的手段。根據(jù)在280nm下的吸光度檢測抗體。

方法2.超高效液相色譜-質(zhì)譜法用于dar估算

反相超高效液相色譜串聯(lián)esi-qtof-質(zhì)譜法(uplc-esi-qtof-ms)被用于表征抗體藥物綴合物在用二硫蘇糖醇還原之后的藥物綴合程度。使用耦合到具有電噴霧離子源的quattro-premier^tmqtof質(zhì)譜儀(waterscorporation)上的(h-類)bio進行表征。在70℃下，用polymerx^tm5upr-1100a，50×2.0mm柱(phenomenex，inc.)及由溶劑a：乙腈/水/三氟乙酸/甲酸(10/90/0.1/0.1，v/v％)和溶劑b：乙腈/甲酸(100/0.1，v/v)構(gòu)成的流動相進行還原的adc樣品的uplc分析。用線性梯度洗脫還原的adc樣品的組分，起始于溶劑a/溶劑b(80/20v/v及0.3ml/min的流速至溶劑a/溶劑b(40/60，v/v)，經(jīng)25min，然后經(jīng)2min至溶劑a/溶劑b(10/90，v/v％)，之后平衡回到初始條件?？傔\行時間是30min。使用masslynx^tm數(shù)據(jù)獲取軟件(waterscorporation)獲取在500-4,500m/z范圍的esi-tofms總離子流(tic)數(shù)據(jù)。以陽離子v模式獲取樣品組分質(zhì)量數(shù)據(jù)，并且如下操作esi來源：源溫度：150℃；去溶劑化溫度350℃；去溶劑化氣體：800l/h；樣品錐電壓：60v；毛細管電壓：3.0kv；去溶劑化氣體：氮氣；以及碰撞氣體：氬氣。通過maximumentropy^tm1(max-ent1)算法去卷積每個峰的總tic質(zhì)譜以生成峰組分的中性質(zhì)量數(shù)據(jù)。

4.制備還原的adc樣品用于uplc/esi-tofms分析

在60℃下使用20mmdtt進行adc的抗體(約1μg/μl溶液)中二硫鍵的還原歷時20min以生成輕鏈和重鏈。注射體積的5-10μl的還原的adc樣品被用于uplc/esi-tof-ms分析。

5.使用平衡天然結(jié)合測定進行的adc對抗原的相對親和力的測定

使用平衡天然結(jié)合測定對抗體及其綴合物的結(jié)合進行評級。進行實驗以比較基于曲妥單抗和曲妥單抗的抗體藥物綴合物與mda-mb-231細胞系(atcc：htb-26)的結(jié)合。如由供應(yīng)商提供的產(chǎn)品頁上所述培養(yǎng)mda-mb-231細胞。用pbs洗滌細胞(約60％匯合)一次并且使用細胞解離緩沖液(sigma5914)從培養(yǎng)瓶中移除，然后再懸浮于細胞培養(yǎng)基中并轉(zhuǎn)移到96孔v形底的板(sartstedt82.1583.001；50000個細胞/孔)中，之后沉淀細胞(400×g，3min)并丟棄上清液。在冰冷的細胞培養(yǎng)基中從60μg/ml起始濃度開始1∶3滴定抗體及抗體藥物綴合物。這些滴定液(20μl)被用于再懸浮細胞沉淀，然后與細胞一起孵育過夜以達到平衡。通過以下操作洗出未結(jié)合的抗體：沉淀兩次并將細胞再懸浮于facs緩沖液(200μl；pbsph7.4，合有1％fbs)中，然后沉淀并再懸浮于含有2μg/mlgt抗人igg-fc-alexa647(jacksonimmuno目錄號109-605-098)和2.5μg/ml7-放線菌素d(sigma目錄號a9400)的相同緩沖液(200μl)中并且在冰上孵育30min。如上洗滌細胞，再懸浮于50μlfacs緩沖液中并且通過流式細胞術(shù)(bdaccuri)并排除7-aad陽性事件進行分析。graphpadprism被用于使用具有4參數(shù)及可變斜率的非線性回歸分析將曲線擬合至數(shù)據(jù)。來自代表性相對親和力評級實驗的數(shù)據(jù)示于圖6中。

實施例7：式i化合物的抗體藥物綴合物。

使用類似于實施例5和6中所述的方法，制備以下曲妥單抗adc，其中n＝0、1、2、3、4、5、6、7或8。n平均值為約4。

t-mtvc-化合物5

t-mtvc-化合物5對her2陽性nci-n87和hcc1954細胞系及her2陰性jurkat細胞系的細胞毒性示于表3及圖3-5中。

表3

實施例7.1：式i化合物的抗體藥物綴合物。

使用類似于實施例6.1中所述的方法，由曲妥單抗(herceptin，roche)、利妥昔單抗(rituxan，roche)及貝倫妥單抗(cac-10)制備以下抗體藥物綴合物，其中n平均值為大約4。

t-mtvc-化合物5

b-mtvc-化合物5

r-mtvc-化合物5

t-mtvc-化合物11

b-mtvc-化合物11

t-mtvc-化合物14

b-mtvc-化合物14

t-mtvc-化合物8

t-mtvc-化合物32

t-mtvc-化合物30

t-mt-化合物5

t-mcvcpabc-化合物80

測試來自實施例7的抗體藥物綴合物對抗原陽性和抗原陰性細胞系的細胞毒性。結(jié)果示于表3.1中。

表3.1

nc＝無細胞毒性

實施例8：在載有pc-3腫瘤的小鼠中毒素的功效研究

iv施用測試品。劑量接近最大耐受劑量。每七天遞送一個針劑的測試品，四次重復/針劑，或每七天遞送一個針劑，三次重復/針劑。媒介物：6.3％海藻糖、0.05％20、20mm檸檬酸鹽緩沖液，ph5.0，4℃。

1.程序概述

在實驗第0日，在購自harlanlaboratories的7-8周齡的雌性無胸腺裸小鼠的背部皮下接種5×10⁶個pc-3腫瘤細胞。每周一、周三及周五測量腫瘤。一旦腫瘤在尺寸上達到150-200mm³，便通過使各組的平均腫瘤尺寸平衡將動物分配到4個處理組中的一個中。用其相應(yīng)的化合物處理動物，并且每周一、周三及周五繼續(xù)腫瘤測量。

2.pc-3細胞：細胞制備-組織培養(yǎng)物

pc-3人前列腺腺癌細胞系是獲自atcc(目錄號crl-1435)。細胞是起始于實驗室貯備液的冷凍小瓶，該小瓶是由原始atcc小瓶冷凍而來，就支原體陰性對細胞進行測試，并保持在實驗室液氮罐中。為體內(nèi)研究收獲傳代#3至#10并具有80-90％匯合的細胞培養(yǎng)物。在37℃/5％co2環(huán)境下將細胞在補充有2mml-谷氨酰胺和10％fbs的ham'sf12培養(yǎng)基中生長。每周一次以1∶3至1∶6的分裂比傳代培養(yǎng)細胞并擴增。培養(yǎng)基每周更新一次。

3.細胞制備-收獲以供植入

將細胞用2ml新鮮的胰蛋白酶/edta溶液(具有edta4na的0.25％胰蛋白酶)簡單地沖洗一次，然后吸出額外的胰蛋白酶/edta。然后添加1.5ml胰蛋白酶/edta，并且水平地放置燒瓶以確保細胞被胰蛋白酶/edta覆蓋。隨后在37℃下孵育細胞幾分鐘。在倒置顯微鏡下觀察細胞以確保細胞層被分散，然后添加新鮮的培養(yǎng)基，并且采集50μl細胞懸液并與錐蟲藍(1∶1)混合并對細胞進行計數(shù)并且使用autot4評價細胞活力。在1,000rpm下離心細胞7min并吸出上清液。然后將細胞再懸浮在生長培養(yǎng)基中至適當?shù)臐舛纫杂糜诮臃N。注射體積為100μl/動物。

4.腫瘤細胞植入-sc背部

在第0日，在異氟烷麻醉下，使用27/28-號針將5.0×10⁶個腫瘤細胞以100μl的體積皮下植入到小鼠的背部中。

5.動物圈養(yǎng)

將動物圈養(yǎng)在通風籠中，每籠2至5只動物，使用12小時亮/暗循環(huán)。動物無限制地接受無菌食品和水并且動物的圈養(yǎng)和使用是根據(jù)加拿大委員會有關(guān)動物管理指南(canadiancouncilonanimalcareguidelines)進行。無菌處理動物，并且每10-14天更換籠子一次。

6.數(shù)據(jù)收集(腫瘤尺寸)

每周一、周三及周五就腫瘤發(fā)展對小鼠進行監(jiān)測。用卡尺測量所建立的腫瘤的尺寸。根據(jù)方程式[l×w²]÷2計算腫瘤體積，其中長度(l)為腫瘤的長軸。在腫瘤測量之時還稱重動物。允許腫瘤生長至800mm³的最大值。

7.分析方法：腫瘤體積x實驗日生長曲線

針對處理天數(shù)繪制每組的腫瘤體積。在首只動物達到腫瘤-尺寸實驗終點(800mm³)之時或在研究的最后一天為每個組截止生長曲線。在組生長曲線截止之前從研究中退出的任何動物將從研究中完全除去。

8.動物排除

具有潰瘍腫瘤、必需使動物安樂死、具有700mm³或較小腫瘤體積的任何動物將從研究中除去并且不能進行數(shù)據(jù)分析(除了如果最終腫瘤體積比處理日高＞2.0倍，至復發(fā)的天數(shù)之外)。

實施例9：在使用nodscidgamma小鼠的nci-n87腫瘤模型中的抗體藥物綴合物的功效劑量范圍研究

iv施用測試品，僅一次處理。測試劑量為3、7及12mg/kg。媒介物：20mm檸檬酸鈉、6.3％海藻糖、0.02％20，ph5，4℃。

1.程序概述

在實驗第0日，在購自thejacksonlaboratory(mice)的7-8周齡的七十六只(76)雌性nod/scidgamma小鼠(nsg)的下背部中皮下接種5×10⁶個在基質(zhì)膠中的nci-n87腫瘤細胞。每周一、周三及周五測量腫瘤。一旦腫瘤在尺寸上達到150-200mm³，便通過使各組的平均腫瘤尺寸平衡將動物分配到10個處理組中的一個中。用其相應(yīng)的化合物處理動物，并且每周一、周三及周五繼續(xù)腫瘤測量。

2.細胞制備-組織培養(yǎng)物：nci-n87細胞

nci-n87人胃癌細胞來源于在細胞毒性療法之前采集的胃高分化癌的肝轉(zhuǎn)移。在細胞系建立之前，將腫瘤作為在無胸腺裸小鼠中的異種移植物傳代三代。nci-n87細胞是獲自atcc(目錄號crl-5822)并且在radil處測試支原體和小鼠病原體呈陰性。

細胞是起始于實驗室貯備液的冷凍小瓶，該小瓶是由原始atcc小瓶冷凍而來，并保持在實驗室液氮罐中。為體內(nèi)研究收獲傳代#3至#10并具有80-90％匯合的細胞培養(yǎng)物。在37℃/5％co2環(huán)境下使nci-n87細胞在補充有1.0mml-谷氨酰胺和10％fbs的rpmi1640培養(yǎng)基中生長。每周一次或兩次以1∶3或1∶4的分裂比傳代培養(yǎng)細胞并擴增。培養(yǎng)基每周更新一次。用5％dmso冷凍細胞。

3.細胞制備-收獲以供植入

將細胞用無ca、mg的漢克氏(hank's)平衡鹽溶液簡單地沖洗一次。添加新鮮的胰蛋白酶/edta溶液(具有edta4na的0.25％胰蛋白酶)，并且將燒瓶水平放置以確保細胞被胰蛋白酶/eda覆蓋，然后吸出額外的胰蛋白酶/edta。在37℃下孵育細胞幾分鐘。在倒置顯微鏡下觀察細胞直到細胞層被分散，然后添加新鮮的培養(yǎng)基。然后，收集50μl細胞懸液并與錐蟲藍(1∶1)混合，并且在血球計上對細胞進行計數(shù)并評價其活力?；盍?yīng)≥90％。在125rcf(1,000rpm)下離心細胞7min并且吸出上清液。將細胞再懸浮于冷的生長培養(yǎng)基中至2倍所需最終濃度(100×10⁶/ml)。將懸液與基質(zhì)膠(1∶1)混合(在冰上)。所生成的細胞懸液(50×10⁶個細胞/ml)被用于以100μl注射體積遞送5×10⁶個細胞/動物。接觸到基質(zhì)膠的所有器材(針、注射器、移液管尖頭)都在注射之前冷藏。

4.腫瘤細胞植入-sc(nci-n87)

在接種以前，為每只小鼠的下背部區(qū)域中的大約2×2cm的面積剃毛，并用乙醇清潔。在第0日，在異氟烷麻醉下，使用27/28-號針將5.0×10⁶個腫瘤細胞以100μl的體積皮下植入到小鼠的背部中。

5.動物圈養(yǎng)

將動物圈養(yǎng)在通風籠中，每籠2至5只動物，使用12小時亮/暗循環(huán)。動物無限制地接受無菌食品和水并且動物的圈養(yǎng)和使用是根據(jù)加拿大委員會有關(guān)動物管理指南進行。無菌地處理動物，并且每10-14天更換籠子一次。

6.數(shù)據(jù)收集(腫瘤尺寸)

每周一、周三及周五就腫瘤發(fā)展對小鼠進行監(jiān)測。用卡尺測量所建立的腫瘤的尺寸。根據(jù)方程式[l×w²]÷2計算腫瘤體積，其中長度(l)為腫瘤的長軸。在腫瘤測量之時還稱重動物。允許腫瘤生長至800mm³的最大值。

7.分析方法：腫瘤體積x實驗日生長曲線

針對處理天數(shù)繪制每組的腫瘤體積。在首只動物達到腫瘤-尺寸實驗終點(800mm³)之時或在研究的最后一天為每個組截止生長曲線。在組生長曲線截止之前從研究中退出的任何動物將從研究中完全除去。

8.動物排除

具有潰瘍腫瘤、必需使動物安樂死、具有700mm³或較小腫瘤體積的任何動物將從研究中除去并且不能進行數(shù)據(jù)分析(除了如果最終腫瘤體積比處理日高＞2.0倍，至復發(fā)的天數(shù)之外)。

實施例10：在使用nodscidgamma小鼠的nci-n87腫瘤模型中的抗體藥物綴合物的功效比較。

iv施用測試品，其中一次施用3mg/kg。媒介物：20mm檸檬酸鈉、6.3％海藻糖、0.02％20，ph5。

1.程序概述

在實驗第0日，在購自thejacksonlaboratory(mice)的7-8周齡的24只(24)雌性nod/scidgamma小鼠(nsg)的下背部中皮下接種5×10⁶個在基質(zhì)膠中的nci-n87腫瘤細胞。每周一、周三及周五測量腫瘤。一旦腫瘤在尺寸上達到150-200mm³，便通過使各組的平均腫瘤尺寸平衡將動物分配到3個處理組中的一個中。用其相應(yīng)的化合物處理動物，并且每周一、周三及周五繼續(xù)腫瘤測量。

2.細胞制備-組織培養(yǎng)物：nci-n87細胞

nci-n87人胃癌細胞來源于在細胞毒性療法之前采集的胃高分化癌的肝轉(zhuǎn)移。在細胞系建立之前，將腫瘤作為在無胸腺裸小鼠中的異種移植物傳代三代。nci-n87細胞是獲自atcc(目錄號crl-5822)并且在radil處測試支原體和小鼠病原體呈陰性。

細胞是起始于實驗室貯備液的冷凍小瓶，該小瓶是由原始atcc小瓶冷凍而來，并保持在實驗室液氮罐中。為體內(nèi)研究收獲傳代#3至#10并具有80-90％匯合的細胞培養(yǎng)物。在37℃/5％co2環(huán)境下使nci-n87細胞在補充有1.0mml-谷氨酰胺和10％fbs的rpmi1640培養(yǎng)基中生長。每周一次或兩次以1∶3或1∶4的分裂比傳代培養(yǎng)細胞并擴增。培養(yǎng)基每周更新一次。用5％dmso冷凍細胞。

3.細胞制備-收獲以供植入

將細胞用無ca、mg的漢克氏平衡鹽溶液簡單地沖洗一次。添加新鮮的胰蛋白酶/edta溶液(具有edta4na的0.25％胰蛋白酶)，并且將燒瓶水平放置以確保細胞被胰蛋白酶/eda覆蓋，然后吸出額外的胰蛋白酶/edta。在37℃下孵育細胞幾分鐘。在倒置顯微鏡下觀察細胞直到細胞層被分散，然后添加新鮮的培養(yǎng)基。然后，收集50μl細胞懸液并與錐蟲藍(1∶1)混合，并且在血球計上對細胞進行計數(shù)并評價其活力。活力應(yīng)≥90％。在125rcf(1,000rpm)下離心細胞7min并且吸出上清液。將細胞再懸浮于冷的生長培養(yǎng)基中至2倍所需最終濃度(100×10⁶/ml)。將懸液與基質(zhì)膠(1∶1)混合(在冰上)。所生成的細胞懸液(50×10⁶個細胞/ml)被用于以100μl注射體積遞送5×10⁶個細胞/動物。接觸到基質(zhì)膠的所有器材(針、注射器、移液管尖頭)都在注射之前冷藏。

4.腫瘤細胞植入-皮下(nci-n87)

在接種以前，為每只小鼠的下背部區(qū)域中的大約2×2cm的面積剃毛，并用乙醇清潔。在第0日，在異氟烷麻醉下，使用27/28-號針將5.0×10⁶個腫瘤細胞以100μl的體積皮下移植到小鼠的背部中。

5.動物圈養(yǎng)

將動物圈養(yǎng)在通風籠中，每籠2至5只動物，使用12小時亮/暗循環(huán)。動物無限制地接受無菌食品和水并且動物的圈養(yǎng)和使用是根據(jù)加拿大委員會有關(guān)動物管理指南進行。無菌處理動物，并且每10-14天更換籠子一次。

6.數(shù)據(jù)收集(腫瘤尺寸)

每周一、周三及周五就腫瘤發(fā)展對小鼠進行監(jiān)測。用卡尺測量所建立的腫瘤的尺寸。根據(jù)方程式[l×w²]÷2計算腫瘤體積，其中長度(l)為腫瘤的長軸。在腫瘤測量之時還稱重動物。允許腫瘤生長至800mm³的最大值。

7.分析方法：腫瘤體積x實驗日生長曲線

針對處理天數(shù)繪制每組的腫瘤體積。在首只動物達到腫瘤-尺寸實驗終點(800mm³)之時或在研究的最后一天為每個組截止生長曲線。在組生長曲線截止之前從研究中退出的任何動物將從研究中完全除去。

8.動物排除

具有潰瘍腫瘤、必需使動物安樂死、具有700mm³或較小腫瘤體積的任何動物將從研究中除去并且不能進行數(shù)據(jù)分析(除了如果最終腫瘤體積比處理日高＞2.0倍，至復發(fā)的天數(shù)之外)。

實施例10.1：在使用nodscidgamma小鼠的nci-n87腫瘤模型中的抗體藥物綴合物的功效比較。

iv施用測試品，僅一次處理，5mg/kg。媒介物：無鈣或鎂的磷酸鹽緩沖鹽水，ph7.4。

1.程序概述

在實驗第0日，在購自thejacksonlaboratory(mice)的7-8周齡的雌性nod/scidgamma小鼠(nsg)的下背部中皮下接種5×10⁶個在基質(zhì)膠中的nci-n87腫瘤細胞。每周一、周三及周五測量腫瘤。一旦腫瘤在尺寸上達到150-200mm³，便通過使各組的平均腫瘤尺寸平衡將動物分配到10個處理組中的一個中。用其相應(yīng)的化合物處理動物，并且每周一、周三及周五繼續(xù)腫瘤測量。

2.細胞制備-組織培養(yǎng)物：nci-n87細胞

nci-n87人胃癌細胞來源于在細胞毒性療法之前采集的胃高分化癌的肝轉(zhuǎn)移。在細胞系建立之前，將腫瘤作為在無胸腺裸小鼠中的異種移植物傳代三代。nci-n87細胞是獲自atcc(目錄號crl-5822)并且在radil處測試支原體和小鼠病原體呈陰性。

細胞是起始于實驗室貯備液的冷凍小瓶，該小瓶是由原始atcc小瓶冷凍而來，并保持在實驗室液氮罐中。為體內(nèi)研究收獲傳代#3至#10并具有80-90％匯合的細胞培養(yǎng)物。在37℃/5％co2環(huán)境下使nci-n87細胞在補充有1.0mml-谷氨酰胺和10％fbs的rpmi1640培養(yǎng)基中生長。每周一次或兩次以1∶3或1∶4的分裂比傳代培養(yǎng)細胞并擴增。每周更新培養(yǎng)基一次。用5％dmso冷凍細胞。

3.細胞制備-收獲以供植入

將細胞用無ca、mg的漢克氏平衡鹽溶液簡單地沖洗一次。添加新鮮的胰蛋白酶/edta溶液(具有edta4na的0.25％胰蛋白酶)，并且將燒瓶水平放置以確保細胞被胰蛋白酶/eda覆蓋，然后吸出額外的胰蛋白酶/edta。在37℃下孵育細胞幾分鐘。在倒置顯微鏡下觀察細胞直到細胞層被分散，然后添加新鮮的培養(yǎng)基。然后，收集50μl細胞懸液并與錐蟲藍(1∶1)混合，并且在血球計上對細胞進行計數(shù)并評價其活力?；盍Α?0%。在125rcf(1,000rpm)下離心細胞7min并且吸出上清液。將細胞再懸浮于冷的生長培養(yǎng)基中至2倍所需最終濃度(100×10⁶/ml)。將懸液與基質(zhì)膠(1∶1)混合(在冰上)。所生成的細胞懸液(50×10⁶個細胞/ml)被用于以100μl注射體積遞送5×10⁶個細胞/動物。接觸到基質(zhì)膠的所有器材(針、注射器、移液管尖頭)都在注射之前冷藏。

4.腫瘤細胞植入-sc(nci-n87)

在接種以前，為每只小鼠的下背部區(qū)域中的大約2×2cm的面積剃毛，并用乙醇清潔。在第0日，在異氟烷麻醉下，使用27/28-號針將5.0×10⁶個腫瘤細胞以100μl的體積皮下植入到小鼠的背部中。

5.動物圈養(yǎng)

將動物圈養(yǎng)在通風籠中，每籠2至5只動物，使用12小時亮/暗循環(huán)。動物無限制地接受無菌食品和水并且動物的圈養(yǎng)和使用是根據(jù)加拿大委員會有關(guān)動物管理指南進行。無菌地處理動物，并且每10-14天更換籠子一次。

6.數(shù)據(jù)收集(腫瘤尺寸)

每周一、周三及周五就腫瘤發(fā)展對小鼠進行監(jiān)測。用卡尺測量所建立的腫瘤的尺寸。根據(jù)方程式[l×w²]÷2計算腫瘤體積，其中長度(l)為腫瘤的長軸。在腫瘤測量之時還稱重動物。允許腫瘤生長至800mm³的最大值。

7.分析方法：腫瘤體積x實驗日生長曲線

相對于處理天數(shù)于圖7中繪制某些處理組的腫瘤體積。在首只動物達到腫瘤-尺寸實驗終點(800mm³)之時或在研究的最后一天為每個組截止生長曲線。在組生長曲線截止之前從研究中退出的任何動物將從研究中完全除去。

8.動物排除

具有潰瘍腫瘤、必需使動物安樂死、具有700mm³或較小腫瘤體積的任何動物將從研究中除去并且不能進行數(shù)據(jù)分析(除了如果最終腫瘤體積比處理日高＞2.0倍，至復發(fā)的天數(shù)之外)。

實施例11：在使用c.b-17/icrhsd-prkdc^scid小鼠的karpas299腫瘤模型中的抗體藥物綴合物的功效比較。

iv施用測試品，其中在第21日、第25日、第29日及第33日以1mg/kg施用四次。媒介物：無鈣或鎂的磷酸鹽緩沖鹽水，ph7.4。

1.程序概述

在購自harlan的雌性c.b-17/lcrhsd-prkdcscid(cb.17-scid)小鼠的下背部中皮下接種1百萬個表達karpas299cd30的腫瘤細胞系。每周一、周三及周五就腫瘤發(fā)展對小鼠進行監(jiān)測。用卡尺測量所建立的腫瘤的尺寸。根據(jù)方程式[l×w²]÷2計算腫瘤體積，其中長度為腫瘤的長軸。在腫瘤測量之時還稱重動物。當平均腫瘤體積為141.32mm³時，基于腫瘤體積在第21日對小鼠進行隨機化。在隨機化之時，將每組小鼠減為6只。小鼠預定在第21日、第25日、第29日及第33日接受其相應(yīng)的化合物的四次單獨的靜脈內(nèi)推注施用，并且每周一、周三及周五測量腫瘤。

1.細胞制備-組織培養(yǎng)物：karpas299

karpas299人t細胞淋巴瘤細胞系是于1986年由患有t細胞非何杰金氏淋巴瘤的25歲男性的外周血建立；現(xiàn)歸類為cd30+間變性大細胞淋巴瘤(alcl)；細胞攜帶npm-alk融合基因。karpas299細胞是獲自健康保護局培養(yǎng)物中心(目錄號06072604并且測試支原體呈陰性)。

細胞起始于實驗室貯備液的冷凍小瓶。為體內(nèi)研究收獲傳代3至10次且密度維持在5×10⁵與2×10⁶個細胞/ml之間的細胞培養(yǎng)物。在37℃在5％co2環(huán)境下細胞以懸液形式生長于rpmi1640+2mm谷氨酰胺+20％胎牛血清中。每周兩次以1∶3的分裂比傳代培養(yǎng)細胞并擴增。

2.細胞制備-收獲以供植入

將細胞離心并用無ca、mg的漢克氏平衡鹽溶液洗滌一次。然后，收集50μl細胞懸液并與錐蟲藍(1∶1)混合，并且在cellometerauto4上對細胞進行計數(shù)并評價其活力?；盍Α?0％。在200g下離心細胞7min并且吸出上清液。將細胞再懸浮于生長培養(yǎng)基中以供皮下接種。所生成的細胞懸液被用于以50μl體積皮下遞送1×10⁶個細胞。

3.腫瘤細胞植入-皮下(karpas299)

在接種以前，為每只小鼠的下背部區(qū)域中的大約2×2em的面積剃毛，并用乙醇清潔。在第0日，在異氟烷麻醉下，使用27/28-號針將1×10⁶個細胞以50μl的體積皮下植入到小鼠的背部中。

4.動物圈養(yǎng)

將動物圈養(yǎng)在通風籠中，每籠3至4只動物，使用12小時亮/暗循環(huán)。動物無限制地接受無菌食品和水并且動物的圈養(yǎng)和使用是根據(jù)加拿大委員會有關(guān)動物管理指南進行。無菌地處理動物，并且每10-14天更換籠子一次。

5.數(shù)據(jù)收集(腫瘤尺寸)

在接種后11天開始，每個工作日就腫瘤發(fā)展對小鼠進行監(jiān)測。用卡尺測量所建立的腫瘤的尺寸。根據(jù)方程式[l×w²]÷2計算腫瘤體積，其中長度(mm)為腫瘤的長軸。還在腫瘤測量之時(僅周一、周三及周五)稱重動物。一旦施用處理，便在周一、周三及周五，每周三次測量腫瘤。允許腫瘤生長至800mm³的最大值。

6.分析方法：腫瘤體積x實驗日生長曲線

相對于處理天數(shù)于圖8中繪制每組的腫瘤體積。在首只動物達到腫瘤-尺寸實驗終點(800mm³)之時或在研究的最后一天為每個組截止生長曲線。在組生長曲線截止之前從研究中退出的任何動物將從研究中完全除去。

7.動物排除

具有潰瘍腫瘤、必需使動物安樂死、具有700mm³或較小腫瘤體積的任何動物將從研究中除去并且不能進行數(shù)據(jù)分析(除了如果最終腫瘤體積比處理日高＞2.0倍，至復發(fā)的天數(shù)之外)。

實施例12：抗體藥物綴合物在雌性spraguedawley大鼠中的耐受性

iv施用測試品，在第0日單次施用。測試品制劑：無鈣或鎂的磷酸鹽緩沖鹽水，ph7.4。

1.程序概述

四十三只雌性spraguedawley(品系001)大鼠是購自charlesriverlabs并且允許在研究開始之前的5天馴化期。在第0日，iv施用測試品。在以下時候收集動物體重和臨床觀察結(jié)果：在注射日的注射前，每天進行持續(xù)施用之后至少三天，此后每周三次，直到研究終點(優(yōu)選每周一、周三及周五)，并恰好在安樂死之前。在第22日，通過co2對動物施以安樂死并進行尸檢。對任何不尋常的觀察結(jié)果拍照。

2.動物圈養(yǎng)

將動物圈養(yǎng)在通風籠中，每籠2-3只，使用12小時亮/暗循環(huán)。動物無限制地接受食品和水并且動物的圈養(yǎng)和使用是根據(jù)加拿大委員會有關(guān)動物管理指南進行。每周更換籠子一次。在開始處理之前強制進行至少5天的馴化期。在馴化期期間完成詳細的身體檢查及體重測定。僅健康動物用于研究。所有動物都通過尾巴上的花紋來鑒別?；\子用具有以下信息的單個卡片標記：方案編號、房號、研究指導者、研究指導者的電話、物種和品系、性別、體重、接收日期及供應(yīng)商。

3.測試品施用

單獨稱重動物并且以所需體積的測試品施用以施用處方劑量。

4.靜脈內(nèi)施用

通過推注靜脈內(nèi)(iv)注射向大鼠施用溶液。使用＜23g針，經(jīng)由側(cè)尾靜脈通過靜脈內(nèi)推注施用給藥溶液。根據(jù)在注射日前一天收集的個體體重來調(diào)整7ml/kg的給藥體積。將處理過的大鼠送回其住所籠中并且觀察直到看見止血。

5.動物的觀察和數(shù)據(jù)收集

使用“注射后臨床觀察記錄”來方便急性毒性作用的監(jiān)測以便評價發(fā)病并且有助于確定施用之后長達24小時的人道終點。在施用日的工作日結(jié)束時(給藥后約6小時)，如果動物表現(xiàn)出在它們在無觀察的情況下不能放置過夜水平下的臨床癥狀，那么便對動物施以安樂死并視為達到了毒性終點，或定期監(jiān)測直到它們被認為能安全放置過夜。

在施用后24小時后，使用“耐受性監(jiān)測臨床觀察記錄”就慢性毒性對動物進行監(jiān)測。根據(jù)以下頻率/方案監(jiān)測動物：在注射日的注射前，每天進行持續(xù)施用后至少三天，此后每周三次直到研究終點(優(yōu)選每周一、周三及周五)，并恰好在安樂死之前。如果動物表現(xiàn)出顯著的發(fā)病體征，那么便更經(jīng)常地監(jiān)測動物。對達到人道終點的任何動物施以安樂死并且進行尸檢以鑒別肝臟、脾臟、腎臟、肺臟、心臟、胃腸道及膀胱中的任何大體異常。

來自耐受性研究的結(jié)果示于圖9和10中。

這些數(shù)據(jù)表明式i的截短化合物(其中x不存在)比其全長對應(yīng)物(其中x為-c(o)nhch(ch2r³)-)耐受性更好。

實施例13.細胞周期停滯測定

獲得呈指數(shù)生長形式的jurkat細胞(atcc)，其是在補充有10％fbs的rmpi-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。將1百萬個細胞/ml以950μl的體積接種于12孔組織培養(yǎng)物處理的板中。在50μl生長培養(yǎng)基中用化合物5處理細胞以使得化合物5的最終濃度為50nm，向?qū)φ占毎o予單獨50μl生長培養(yǎng)基。在濕潤的培養(yǎng)箱中在37℃和5％co2下孵育細胞24h。孵育之后，將細胞充分地再懸浮并且轉(zhuǎn)移到5mlfacs試管中，并在冰上儲存。通過在搖籃式離心機中在450×g下旋轉(zhuǎn)細胞4min進行兩次洗滌，再懸浮于1ml冰冷的pbs中。通過在渦流下以逐滴方式添加3ml冰冷的100％乙醇來固定細胞，并且在4℃下立即儲存1h。1h孵育期間，在冰冷的pbs中制備以下染色溶液：10μg/ml碘化丙啶、10u/mlrna酶1f及0.05％tritonx-100。1h固定孵育之后，通過如上所述旋轉(zhuǎn)細胞并在1ml冰冷的pbs中洗滌兩次除去乙醇。將細胞再懸浮于500μl上述染色溶液中，并且在室溫下孵育1h。在bdc6htfc血細胞計數(shù)器上獲取事件，通過門控除去碎片和二聯(lián)體。使用fcsexpress生成直方圖，針對fl-3中的熒光繪制事件數(shù)量。

來自此測定的代表性數(shù)據(jù)示于圖11中。dna含量直方圖示出了在g0/g1相中的大部分未處理的細胞在用化合物5處理之后具有向細胞周期的g2/m相的明顯轉(zhuǎn)變。

在本說明書中提及的所有美國專利、美國專利申請公布、美國專利申請、外國專利、外國專利申請及非專利出版物以引用的方式并入本文，其引用的整體程度與本描述并非不一致。由以上應(yīng)理解，雖然本文所述的具體實施方案出于說明目的而在本文得以描述，但可在不背離本文所述的精神及范圍的情況下作出各種修改。因此，本公開不被所附權(quán)利要求以外的內(nèi)容限制。