本發(fā)明涉及一種氯霉素分子印跡聚合物微球的制備方法，屬于化學(xué)合成技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
氯霉素(chloramphenicol，CAP)對革蘭氏陽性和陰性細(xì)菌均具有抑制作用，主要用于治療各種細(xì)菌感染，但是由于其具有嚴(yán)重的毒副作用，如導(dǎo)致骨髓抑制(bone marrow depression)、再生障礙性貧JlIL(aplasticanemia)、先天性發(fā)育不全(hypoplastic anemia)等。因此，已被許多國家如中國、歐盟和美國等禁止在動物性食品中使用，并立法規(guī)定了最高殘留限量。目前，關(guān)于氯霉素的檢測方法，主要有酶聯(lián)免疫(enzyme linkedimmunosorbent assay，ELISA)、高效液相色譜(high performance liquid chromatography，HPLC)、氣相色譜(gas chromatography，GC)及液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜(1iquid chromatographic—tandem mass spectrometri，LC—MS/MS)、氣相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜(gas chromatography—tandem mass spectrometry，GC—MS/MS)等，各種檢測方法均需要高效的分離、純化過程。分子印跡聚合物(molecularly imprinted polymers，MIPs)是人工合成的對某一或某類分子(模板分子及其類似物)具有特定選擇性的聚合物，己成功應(yīng)用于氯霉素等各類抗生素的分離純化。
目前，制備MIPs的方法主要是本體聚合法(bulk-polymerization)，該方法雖然制備簡單，但是后續(xù)處理過程復(fù)雜，如需要經(jīng)過研磨、篩分才能得到合適大小的粒子，得率較低；因此，為了克服本體聚合方法的缺點(diǎn)，近年來，制備形狀規(guī)則、粒徑均一的MIPS的方法得到了快速發(fā)展，如懸浮聚合、多步溶脹聚合和沉淀聚合等。
分子印跡聚合物有良好的物理和化學(xué)性能，具有專一識別性強(qiáng)、可再生等優(yōu)勢，已經(jīng)存許多領(lǐng)域得到了應(yīng)用。其具有類抗體的特異性、高選擇性、高強(qiáng)度等優(yōu)點(diǎn)，具有預(yù)定性、識別性和實(shí)用性等特點(diǎn)，可以滿足作為吸附劑的要求。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供了一種氯霉素分子印跡聚合物微球的制備方法，該方法操作簡單高效，而且制備出的微球具有粒徑統(tǒng)一、吸附性好的優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
一種氯霉素分子印跡聚合物微球的制備方法，包括如下步驟：
(1)聚合物種子的制備
將表面活性劑、引發(fā)劑、溶劑和單體一并加入到燒瓶或反應(yīng)釜中，在60～90℃下聚合10～20小時，聚合完成后，冷卻，離心，洗滌，干燥，得到聚合物種子；
(2)取上述合成好的聚合物種子加入至含有穩(wěn)定劑的水溶液中，并用超聲溶解，溶解成微乳狀態(tài)下，將其加入到反應(yīng)瓶中，然后開啟攪拌，制備成種子懸浮液；
(3)將引發(fā)劑、增塑劑溶于去離子水中，然后在超聲作用下，將上述混合物制成粒徑在0.3～0.5μm,制成引發(fā)劑懸浮液；
(4)將氯霉素、功能單體、表面活性劑、增塑劑、乙二醇二甲基丙烯酸酯加入盛有去離子水的燒瓶中，然后超聲溶解，直至液滴的粒徑在0.3～0.5μm，形成單體懸浮液；
(5)將步驟(3)中制好的引發(fā)劑懸浮液和步驟(4)中制備好的單體乳液分別加入至步驟(2)中種子懸浮液中，在70～90℃下攪拌聚合10～20小時；
(6)上述聚合反應(yīng)完成后，冷卻、依次用去離子水、甲醇、丙酮、去離子水洗滌，然后放在索式提取器中用甲醇萃取24小時，除去綠霉素，然后干燥，即得氯霉素分子印跡聚合物微球。
進(jìn)一步地，上述步驟(1)中和步驟(4)中的表面活性劑選自聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羥甲基纖維素、羥丙基纖維素或至少兩種的混合物。
進(jìn)一步地，上述步驟(1)和(3)中的引發(fā)劑選自偶氮二異丁腈和過氧化苯甲酰。
進(jìn)一步地，上述步驟(1)的聚合反應(yīng)溫度優(yōu)選為85℃。
進(jìn)一步地，上述步驟(1)中的溶劑選自乙醇、四氫呋喃和氯仿。
進(jìn)一步地，上述步驟(2)中穩(wěn)定劑為聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮。
進(jìn)一步地，上述步驟(3)中增塑劑為十二烷基磺酸鈉。
進(jìn)一步地，上述步驟(4)中功能單體選自苯乙烯、丙烯酰胺或甲基丙烯酸酯。
進(jìn)一步地，上述步驟(5)中聚合溫度優(yōu)選為85℃。
本發(fā)明所達(dá)到的有益效果：本發(fā)明制備氯霉素分子印跡的聚合物微球，反應(yīng)中通過制備種子聚合物，然后利用種子乳液生長法制備出了該微球，其可高效吸附和精確分離氯霉素。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步描述。以下實(shí)施例僅用于更加清楚地說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而不能以此來限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
實(shí)施例1
(1)聚合物種子的制備
將聚乙烯吡咯烷酮2g、偶氮二異丁腈1g、乙醇100ml和苯乙烯100g一并加入到燒瓶中，攪拌，在70℃下聚合10～20小時，聚合完成后，冷卻，離心，洗滌，干燥，得到聚合物種子；
(2)取上述合成好的聚合物種子10g加入至含有3g聚乙烯醇的水溶液中，并用150W超聲溶解，溶解成微乳狀態(tài)下，將其加入到反應(yīng)瓶中，然后開啟攪拌，制備成種子懸浮液；
(3)將偶氮二異丁腈5g、十二烷基磺酸2g溶于去離子水100ml中，然后在超聲作用下，將上述混合物制成粒徑在0.3～0.5μm,制成引發(fā)劑懸浮液；
(4)將氯霉素40g、苯乙烯80g、羥乙基纖維素3g、十二烷基磺酸鈉、乙二醇二甲基丙烯酸酯320g加入盛有去離子水2L的燒瓶中，然后400W超聲溶解，直至液滴的粒徑在0.3～0.5μm，形成單體懸浮液；
(5)將步驟(3)中制好的引發(fā)劑懸浮液和步驟(4)中制備好的單體乳液分別加入至步驟(2)中種子懸浮液中，緩慢滴入，在85℃下攪拌聚合11小時；
(6)上述聚合反應(yīng)完成后，冷卻、依次用去離子水、甲醇、丙酮、去離子水洗滌，然后放在索式提取器中用甲醇萃取24小時，除去綠霉素，然后干燥，即得氯霉素分子印跡聚合物微球。
實(shí)施例2
(1)聚合物種子的制備
將聚乙烯吡咯烷酮1g、偶氮二異丁腈0.5g、乙醇20ml和苯乙烯20g一并加入到燒瓶中，攪拌，在78℃下聚合10小時，聚合完成后，冷卻，離心，洗滌，干燥，得到聚合物種子；
(2)取上述合成好的聚合物種子5g加入至含有1g聚乙烯醇的水溶液中，并用150W超聲溶解，溶解成微乳狀態(tài)下，將其加入到反應(yīng)瓶中，然后開啟攪拌，制備成種子懸浮液；
(3)將偶氮二異丁腈1g、十二烷基磺酸1g溶于去離子水30ml中，然后在超聲作用下，將上述混合物制成粒徑在0.3～0.5μm,制成引發(fā)劑懸浮液；
(4)將氯霉素5g、苯乙烯10g、羥乙基纖維素1g、十二烷基磺酸鈉1g、乙二醇二甲基丙烯酸酯40g加入盛有去離子水300ml的燒瓶中，然后400W超聲溶解，直至液滴的粒徑在0.3～0.5μm，形成單體懸浮液；
(5)將步驟(3)中制好的引發(fā)劑懸浮液和步驟(4)中制備好的單體乳液分別加入至步驟(2)中種子懸浮液中，緩慢滴入，在80℃下攪拌聚合15小時；
(6)上述聚合反應(yīng)完成后，冷卻、依次用去離子水、甲醇、丙酮、去離子水洗滌，然后放在索式提取器中用甲醇萃取24小時，除去綠霉素，然后干燥，即得氯霉素分子印跡聚合物微球。
實(shí)施例3
(1)聚合物種子的制備
將聚乙烯吡咯烷酮1g、偶氮二異丁腈0.5g、乙醇50ml和苯乙烯50g一并加入到燒瓶中，攪拌，在90℃下聚合24小時，聚合完成后，冷卻，離心，洗滌，干燥，得到聚合物種子；
(2)取上述合成好的聚合物種子15g加入至含有1g聚乙烯醇的水溶液中，并用150W超聲溶解，溶解成微乳狀態(tài)下，將其加入到反應(yīng)瓶中，然后開啟攪拌，制備成種子懸浮液；
(3)將偶氮二異丁腈32g、十二烷基磺酸2g溶于去離子水80ml中，然后在超聲作用下，將上述混合物制成粒徑在0.3～0.5μm,制成引發(fā)劑懸浮液；
(4)將氯霉素30g、苯乙烯60g、羥乙基纖維素3g、十二烷基磺酸鈉3g、乙二醇二甲基丙烯酸酯240g加入盛有去離子水1.5L的燒瓶中，然后400W超聲溶解，直至液滴的粒徑在0.5μm，形成單體懸浮液；
(5)將步驟(3)中制好的引發(fā)劑懸浮液和步驟(4)中制備好的單體乳液分別加入至步驟(2)中種子懸浮液中，緩慢滴入，在90℃下攪拌聚合10小時；
(6)上述聚合反應(yīng)完成后，冷卻、依次用去離子水、甲醇、丙酮、去離子水洗滌，然后放在索式提取器中用甲醇萃取24小時，除去綠霉素，然后干燥，即得氯霉素分子印跡聚合物微球。
以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明技術(shù)原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和變形，這些改進(jìn)和變形也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。