交叉參考相關(guān)申請(qǐng)本申請(qǐng)要求2010年7月23日提交的美國臨時(shí)專利申請(qǐng)No.61/367,251；2009年11月23目提交的美國臨時(shí)專利申請(qǐng)No.61/263,707；和2009年11月23日提交的歐洲專利申請(qǐng)No.EP09014565.7的優(yōu)先權(quán)，將所述每一個(gè)美國臨時(shí)專利申請(qǐng)和歐洲專利申請(qǐng)的公開內(nèi)容通過引用整體并入本文。發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及轉(zhuǎn)基因大豆植物、植物材料和種子，其特征在于包含至少兩個(gè)特定的轉(zhuǎn)化事件，具體地在于至少兩組編碼賦予除草劑抗性的蛋白質(zhì)的基因的存在，所述基因的組各自位于大豆基因組的特定位置。本發(fā)明的大豆植物將耐除草劑表型與在除草劑不存在的情況下等同于非轉(zhuǎn)化大豆品系的不同遺傳背景中的農(nóng)藝性狀、遺傳穩(wěn)定性和功能性組合。本發(fā)明還提供了用于鑒定包含特定轉(zhuǎn)化事件EE-GM和EE-GM2或EE-GM1的植物材料在生物樣品中存在的方法和試劑盒。發(fā)明背景植物中轉(zhuǎn)基因的表型表達(dá)可通過基因本身的結(jié)構(gòu)和通過其在植物基因組中的位置來確定。同時(shí)轉(zhuǎn)基因或“外源DNA”在基因組的不同位置上的存在可以以不同方式影響植物的總體表型。通過基因操作將具有商業(yè)吸引力的性狀在農(nóng)業(yè)或工業(yè)上成功能地引入植物視不同的因素而定可以是冗長的過程。遺傳轉(zhuǎn)化的植物的實(shí)際轉(zhuǎn)化和再生只是一系列選擇步驟的第一步，所述一系列選擇步驟包括廣泛的遺傳表征、繁育以及田間試驗(yàn)的評(píng)估，最終導(dǎo)致原種事件(eliteevent)的選擇?；陉P(guān)于新型食品/飼料、GMO和非-GMO產(chǎn)物的分離以及專利材料(proprietarymaterial)的鑒定的討論，原種事件的明確鑒定變得日益重要。理想地，這樣的鑒定方法快速且簡(jiǎn)單，無需大量實(shí)驗(yàn)室裝置。此外，所述方法應(yīng)當(dāng)提供使得能夠明確鑒定原種事件而無需專家解釋，但必要時(shí)經(jīng)歷得起專家的細(xì)查的結(jié)果。本文中描述了用于鑒定生物樣品中的原種事件EE-GM3和EE-GM1或EE-GM2的特殊工具。在本發(fā)明中，EE-GM3已在耐除草劑大豆(大豆(Glycinemax))的開發(fā)中被鑒定為來自轉(zhuǎn)基因大豆植物群體的良種事件，所述耐除草劑大豆包含與賦予對(duì)4-羥基苯丙酮酸二氧合酶(HPPD)抑制劑的抗性的基因組合的編碼草甘膦抗性的基因，所述基因各自于植物可表達(dá)啟動(dòng)子的控制之下。EE-GM1和EE-GM2先前已被鑒定為在耐除草劑大豆(大豆)的開發(fā)中被鑒定為來自轉(zhuǎn)基因大豆植物群體的原種事件，所述轉(zhuǎn)基因大豆包含處于植物可表達(dá)啟動(dòng)子的控制之下的編碼草胺膦抗性的基因，并且描述于WO2006/108674和WO2006/108675(將兩個(gè)公布通過引用并入本文)中。本領(lǐng)域已公開了包含耐除草劑基因的大豆植物。然而，現(xiàn)有技術(shù)公開內(nèi)容沒有一個(gè)教導(dǎo)或提出本發(fā)明。在本領(lǐng)域中已知在大豆植物中獲得具有可接受的農(nóng)藝性狀、無產(chǎn)量抑制現(xiàn)象(yielddrag)以及提供足夠的除草劑抗性(當(dāng)然針對(duì)3個(gè)不同種類的除草劑)的商業(yè)耐除草劑原種轉(zhuǎn)化事件絕不簡(jiǎn)單容易。事實(shí)上，已報(bào)導(dǎo)市場(chǎng)上發(fā)布的具有耐除草劑的第一大豆植物(事件40-3-2)與(近-)等基因系(isogenicline)相比較具有顯著的產(chǎn)量抑制現(xiàn)象(Elmore等(2001)Agron.J.93:408-412)。同樣地，OptimumTMGATTM大豆(事件356043)經(jīng)開發(fā)將對(duì)草甘膦的抗性與對(duì)ALS除草劑的抗性組合，但已報(bào)導(dǎo)此類大豆本身不滿足草甘膦抗性的標(biāo)準(zhǔn)(無與另一種草甘膦抗性大豆事件(例如事件40-3-2)的組合(參見例如，www.bloomberg.corri/apps/news？pid＝newsarchive&sid＝ad4L0hH9MKWE))。本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案的概述本發(fā)明涉及轉(zhuǎn)基因大豆植物、其種子、細(xì)胞或組織，所述轉(zhuǎn)基因大豆植物、其種子、細(xì)胞或組織包含穩(wěn)定地整合入其基因組的表達(dá)盒(所述表達(dá)盒包含含有2mEPSPS基因的編碼序列的耐除草劑基因和含有HPPD-PFW336的編碼序列的另一種耐除草劑基因(如本文實(shí)施例1.1中描述和SEQIDNo1中所示的兩個(gè)基因))以及第二表達(dá)盒(所述第二表達(dá)盒包含含有草丁膦乙酰轉(zhuǎn)移酶的編碼序列的耐除草劑基因(如實(shí)施例1中描述的和SEQIDNo11中所示的))。所述轉(zhuǎn)基因大豆植物或其種子、細(xì)胞或組織耐受基于草甘膦、基于草銨膦的除草劑以及HPPD抑制劑除草劑例如異噁唑草酮，并且在除草劑不存在的情況下，具有大體上與非轉(zhuǎn)基因等基因系相當(dāng)?shù)霓r(nóng)藝性狀。在施用一種或多種提供了針對(duì)其的抗性的除草劑后，植物將具有與非轉(zhuǎn)基因植物相比較更優(yōu)的農(nóng)藝表型。根據(jù)本發(fā)明，大豆植物或其種子、細(xì)胞或組織包括原種事件EE-GM3和EE-GM1或EE-GM3和EE-GM2。更具體地，本發(fā)明涉及轉(zhuǎn)基因大豆、其種子、細(xì)胞或組織，其基因組DNA的特征在于這樣的事實(shí)：當(dāng)在本文中描述的PCR鑒定方案中進(jìn)行分析時(shí)，使用分別針對(duì)EE-GM3的和EE-GM-3的包含耐除草劑基因的外源DNA的5’或3’側(cè)翼區(qū)域的兩個(gè)引物，產(chǎn)生對(duì)于EE-GM3有特異性的片段，以及此外當(dāng)在本文中描述的PCR鑒定方案中分析時(shí)，使用分別針對(duì)EE-GM1或EE-GM2的和包含草胺膦抗性基因的外源DNA的5’或3’側(cè)翼區(qū)域的兩個(gè)引物，產(chǎn)生對(duì)于EE-GM1或EE-GM2有特異性的片段。用于檢測(cè)EE-GM3的引物可分別針對(duì)SEQIDNO：2內(nèi)的5'側(cè)翼區(qū)域和包含耐除草劑基因的外源DNA的5'側(cè)翼區(qū)域。用于檢測(cè)EE-GM3的引物還可分別針對(duì)SEQIDNO：3內(nèi)的3'側(cè)翼區(qū)域和包含耐除草劑基因的外源DNA的3'側(cè)翼區(qū)域，例如分別包含SEQIDNO：5和SEQIDNO：4或SEQIDNo.：7的核苷酸序列或(基本上)由所述核苷酸序列組成的引物，并且產(chǎn)生100至800bp的DNA片段，例如約263bp或706bp的片段。用于檢測(cè)EE-GM1的引物可分別針對(duì)SEQIDNO：12和包含耐除草劑基因的外源DNA內(nèi)的5'側(cè)翼區(qū)域。用于檢測(cè)EE-GM1的引物還可分別針對(duì)SEQIDNO：13和包含耐除草劑基因的外源DNA內(nèi)的3'側(cè)翼區(qū)域，例如分別包含SEQIDNO：16和SEQIDNO：17的核苷酸序列或(基本上)由所述核苷酸序列組成的引物，并且產(chǎn)生100至500bp的DNA片段，例如約183bp的片段。用于檢測(cè)EE-GM2的引物可分別針對(duì)SEQIDNO：14和包含耐除草劑基因的外源DNA內(nèi)的5'側(cè)翼區(qū)域。用于EE-GM2的檢測(cè)的引物還可分別針對(duì)SEQIDNO：15和包含耐除草劑基因的外源DNA內(nèi)的3'側(cè)翼區(qū)域，例如，分別包含SEQIDNO：18和SEQIDNO：19的核苷酸序列或(基本上)由所述核苷酸序列組成的引物，并且產(chǎn)生100至500bp的DNA片段，例如約151bp的片段。包含本發(fā)明的原種事件的EE-GM3的參照種子已在登錄號(hào)NCIMB41659下保藏在NCIMB。包含本發(fā)明的原種事件EE-GM1的參照種子已在登錄號(hào)NCIMB41658下保藏在NCIMB。包含本發(fā)明的原種事件EE-GM2的參照種子已在登錄號(hào)NCIMB41660下保藏在NCIMB。包含原種事件EE-GM3和EE-GM1的參照種子已在登錄號(hào)PTA-11041下保藏在ATCC。包含原種事件EE-GM3和EE-GM2的參照種子已在登錄號(hào)PTA-11042下保藏在ATCC。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案是包含原種事件EE-GM3(以NCIMB登錄號(hào)NCIMB41659保藏的包含所述事件的參照種子)并且還包含原種事件EE-GM1(以NCIMB登錄號(hào)NCIMB41658保藏的包含所述事件的參照種子)的種子，或包含事件EE-GM3和EE-GM1的種子(在登錄號(hào)PTA-11041下保藏在ATCC的包含所述事件的參照種子)，所述種子將生長成耐受至少3種除草劑，特別地耐草甘膦和/或HPPD抑制劑例如異噁唑草酮和/或谷氨酰胺合成酶抑制劑例如草銨膦的大豆植物。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是包含原種事件EE-GM3(以NCIMB登錄號(hào)NCIMB41659保藏的包含所述事件的參照種子)并且還包含原種事件EE-GM2(以NCIMB登錄號(hào)NCIMB41660保藏的包含所述事件的參照種子)的種子或包含事件EE-GM3和EE-GM2(在登錄號(hào)PTA-11042下保藏在ATCC的包含所述事件的參照種子)的種子，所述種子生長成耐受至少3種除草劑，特別地耐受草甘膦和/或HPPD抑制劑例如異噁唑草酮和/或谷氨酰胺合成酶抑制劑例如草銨膦的大豆植物。NCIMB保藏號(hào)NCIMB41659的種子是由至少約95％的包含原種事件EE-GM3的轉(zhuǎn)基因種子組成的種子批，所述轉(zhuǎn)基因種子將生長成耐除草劑植物，其中所述植物為耐受草甘膦和/或異噁唑草酮的植物?？刹シN可獲自保藏的種子或從所述種子獲得的種子或后代種子(例如，在與其它具有不同遺傳背景的大豆植物雜交后)，可用本文中描述的草甘膦或HPPD抑制劑例如異噁唑草酮處理正在生長的植物以獲得耐受草甘膦或異噁唑草酮的植物，所述植物包含原種事件EE-GM3。NCIMB保藏號(hào)NCIMB41658和NCIMB41660的種子是分別由至少約95％的包含原種事件EE-GM1或EE-GM2的轉(zhuǎn)基因種子組成的種子批，所述種子可生長成耐除草劑植物，其中所述植物是抗草銨膦植物。可播種種子，用本文中描述的草胺膦處理正在生長的植物以獲得耐草胺膦植物，所述植物包含原種事件EE-GM1或EE-GM2。ATCC保藏號(hào)PTA-11041的種子是由至少約95％的以純合子形式包含原種事件EE-GM3和原種事件EE-GM1的轉(zhuǎn)基因種子組成的種子批，所述種子可生長成耐除草劑植物，其中所述植物是耐草甘膦、草胺膦和/或異噁唑草酮(isoxaflutole)植物。可播種可從保藏的種子獲得或從所述種子獲得(例如，在與具有不同遺傳背景的其它大豆植物雜交后)的植物或后代種子，可用本文中描述的草甘膦、草胺膦和/或HPPD抑制劑例如異噁唑草酮處理正在生長的植物以獲得耐草甘膦、草胺膦和/或異噁唑草酮植物，所述植物包含原種事件EE-GM3和EE-GM1。ATCC保藏號(hào)PTA-11042的種子是由至少約95％的以純合子形式包含原種事件EE-GM3和原種事件EE-GM2的轉(zhuǎn)基因種子組成的種子批，所述種子將生長成耐除草劑植物，其中所述植物是耐草甘膦、草胺膦和/或異噁唑草酮植物。可播種可從保藏的種子獲得或從所述種子獲得(例如，在與具有不同遺傳背景的其它大豆植物雜交后)的種子或后代種子，可用本文中描述的草甘膦、草胺膦和/或HPPD抑制劑例如異噁唑草酮處理正在生長的植物以獲得耐草甘膦、草胺膦和/或異噁唑草酮植物，所述植物包含原種事件EE-GM3和EE-GM2。本發(fā)明還涉及來自包含原種事件EE-GM3并且還包括原種事件EE-GM1的植物的細(xì)胞、組織、子代和后代，所述植物可通過生長為PTA-11041保藏在ATCC的包含原種事件EE-GM3和EE-GM1的植物獲得，或通過生長來自保藏在NCIMB的具有登錄號(hào)NCIMB41659的種子的包含原種事件EE-GM3的植物，然后將所述植物與從保藏在NCIMB的具有登錄號(hào)NCIMB41658的種子生長而來的包含良種事件EE-GM1的植物雜交來獲得。本發(fā)明還涉及來自包含原種事件EE-GM3并且還包含原種事件EE-GM2的植物的細(xì)胞、組織、后代和后代，所述植物可通過生長以PTA-11042保藏在ATCC的原種事件EE-GM3和EE-GM2的植物來獲得，或通過生長來自保藏在NCIMB的具有登錄號(hào)NCIMB41659的種子的包含原種事件EE-GM3的植物，然后將所述植物與從保藏在NCIMB的具有登錄號(hào)NCIMB41660的種子生長而來的包含原種事件EE-GM2的植物雜交來獲得。本發(fā)明還涉及可從上文中剛剛描述的大豆植物或種子獲得的植物(例如通過大豆植物或種子的繁殖和/或與其繁育)。本發(fā)明還涉及包含原種事件EE-GM3和EE-GM1或EE-GM3和EE-GM2的大豆植物。本發(fā)明還涉及用于鑒定包含原種事件EE-GM3和EE-GM1或EE-GM3和EE-GM2的轉(zhuǎn)基因、其細(xì)胞或組織的方法，所述方法基于鑒定表征DNA序列或由這樣的DNA序列編碼的氨基酸序列在轉(zhuǎn)基因植物、細(xì)胞或組織中的存在。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，這樣的表征DNA序列為包含事件的插入位點(diǎn)的至少15bp、15bp、至少20bp、20bp或30bp或更多堿基對(duì)的序列，即包含耐除草劑基因的插入的外源DNA的一部分和與其鄰接的大豆基因組的一部分(5'或3'側(cè)翼序區(qū)域)，從而允許特異性鑒定原種事件。本發(fā)明還涉及用于鑒定生物樣品中的原種事件EE-GM3和EE-GM1或原種事件EE-GM3和EE-GM2的方法，所述方法基于特異性識(shí)別EE-GM3和EE-GM1或EE-GM3和EE-GM2的包含耐除草劑基因的外源DNA的5'和/或3'側(cè)翼序列的引物或探針。更具體地，本發(fā)明涉及這樣的方法，所述方法包括使用兩個(gè)各自利用至少兩個(gè)引物的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)或一個(gè)利用至少4個(gè)引物的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增存在于生物樣品中的兩個(gè)核酸的序列，優(yōu)選以獲得兩個(gè)100至800bp的DNA片段，所述第一引物識(shí)別EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA的5’或3’側(cè)翼區(qū)域，所述第二引物識(shí)別EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA內(nèi)的序列，所述第三引物識(shí)別EE-GM1或EE-GM2的包含耐除草劑基因的外源DNA的5’或3’側(cè)翼區(qū)域，所述第四引物識(shí)別EΕ-GM1或EE-GM2的包含耐除草劑基因的外源DNA內(nèi)的序列。用于鑒定EE-GM3的引物可分別識(shí)別EE-GM3的5'側(cè)翼區(qū)域內(nèi)的序列(SEQIDNo.2，從位置1至位置1451)或EE-GM3的3'側(cè)翼區(qū)域內(nèi)的序列(SEQIDNo3的位置241至位置1408的互補(bǔ)序列)和包含耐除草劑基因的外源DNA內(nèi)的序列(SEQIDNo2的位置1452至1843或SEQIDNo3的位置1至位置240的互補(bǔ)序列或SEQIDNo20的核苷酸位置1452至核苷酸位置16638或其互補(bǔ)序列)。識(shí)別3'側(cè)翼區(qū)域的引物可包含SEQIDNo.5的核苷酸序列，識(shí)別包含耐除草劑基因的外源DNA內(nèi)的序列的引物可包含本文中描述的SEQIDNo.4或SEQIDNo.：7的核苷酸序列。用于鑒定EE-GM1的引物可分別識(shí)別EE-GM1的5'側(cè)翼區(qū)域(SEQIDNo.12，從位置1至位置209)或EE-GM1的3'側(cè)翼區(qū)域內(nèi)的序列(SEQIDNo13的位置569至位置1000的互補(bǔ)序列)和EE-GM1的包含耐除草劑基因的外源DNA內(nèi)的序列(SEQIDNo12的位置210至720或SEQIDNo13的位置1至位置568的互補(bǔ)序列)。識(shí)別EE-GM1的5'側(cè)翼區(qū)域的引物包含SEQIDNo.16的核苷酸序列，識(shí)別EE-GM1的外源DNA內(nèi)的序列的引物可包含本文中公開的SEQIDNo.17的核苷酸序列。用于鑒定EE-GM2的引物可分別識(shí)別EE-GM2的5'側(cè)翼區(qū)域內(nèi)的序列(SEQIDNo.14，從位置1至位置311)或EE-GM2的3'側(cè)翼區(qū)域內(nèi)的序列(SEQIDNo15的位置508至位置1880的互補(bǔ)序列)和EE-GM1的包含耐除草劑基因的外源DNA內(nèi)的序列(SEQIDNo14的位置312至810的互補(bǔ)序列或SEQIDNo15的位置1至位置507)。識(shí)別EE-GM2的3'側(cè)翼區(qū)域的引物可包含SEQIDNo.18的核苷酸序列，識(shí)別EE-GM2的外源DNA內(nèi)的序列的引物可包含本文中描述的SEQIDNo.19的核苷酸序列?？赏瑫r(shí)或相繼進(jìn)行PCR擴(kuò)增。本發(fā)明更具體地涉及用于鑒定生物樣品中的原種事件EE-GM3和EE-GM1的方法，所述方法包括使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，利用至少兩個(gè)分別包含SEQIDNo.4和SEQIDNo.5的核苷酸序列或(基本上)由所述核苷酸序列組成的引物(以獲得約263bp的DNA片段)或利用兩個(gè)分別包含SEQIDNo.5和SEQIDNo.7的核苷酸序列或(基本上)由所述核苷酸序列組成的引物(以獲得約706bp的DNA片段)以及使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，利用兩個(gè)分別包含SEQIDNo.16和SEQIDNo.17的核苷酸序列或(基本上)由所述核苷酸序列組成的引物(以獲得約183bp的DNA片段)擴(kuò)增存在于生物樣品中的核酸的至少兩個(gè)序列?？赏瑫r(shí)或相繼進(jìn)行兩個(gè)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。本發(fā)明更具體地涉及用于鑒定生物樣品中的原種事件EE-GM3和EE-GM2的方法，所述方法包括使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，利用兩個(gè)分別包含SEQIDNo.4和SEQIDNo.5的核苷酸序列或(基本上)由所述核苷酸序列組成的引物(以獲得約263bp的DNA片段)，或利用兩個(gè)分別包含SEQIDNo.5和SEQIDNo.7的核苷酸序列或(基本上)由所述核苷酸序列組成的引物(以獲得約706bp的DNA片段)，以及使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，利用兩個(gè)分別包含SEQIDNo.18和SEQIDNo.19的核苷酸序列或(基本上)由核苷酸所述序列組成的引物(以獲得約151bp的DNA片段)擴(kuò)增存在于生物樣品中的核酸的至少兩個(gè)序列。可同時(shí)或相繼進(jìn)行兩個(gè)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。本發(fā)明還涉及與EE-GM1的特異性側(cè)翼序列組合的本文中描述的EE-GM3的特異性側(cè)翼序列，所述序列可用于開發(fā)鑒定EE-GM3和EE-GM1在生物樣品中的同時(shí)存在的特異性鑒定方法。此類組合的特異性側(cè)翼序列還可在鑒定測(cè)定中用作參照對(duì)照材料。更具體地，本發(fā)明涉及與EE-GM1的5'和/或3'側(cè)翼區(qū)域組合的EE-GM3的5'和/或3'側(cè)翼序列，所述序列可用于開發(fā)本文中進(jìn)一步描述的特異性引物和探針。還適合用作參照材料的是與核酸分子(所述核酸分子包含可利用包含SEQIDNo.16和SEQIDNo.17的核苷酸序列或(基本上)由所述核苷酸序列組成的引物擴(kuò)增的序列)組合的優(yōu)選約150-850bp的核酸分子，所述核酸分子可利用包含SEQIDNo.7和SEQIDNo.5的核苷酸序列或SEQIDNo.4和SEQIDNo.5的核苷酸序列或(基本上)由所述核苷酸序列組成的引物擴(kuò)增的序列，特別地使用此類引物在包含EE-GM3和EE-GM1的材料中獲得此類核酸分子。本發(fā)明還涉及與EE-GM2的特異性側(cè)翼序列組合的本文中描述的EE-GM3的特異性側(cè)翼序列，所述序列可用于開發(fā)用于鑒定EE-GM3和EE-GM2在生物樣品中的同時(shí)存在的特異性鑒定方法。這樣的組合的特異性側(cè)翼序列還可在鑒定測(cè)定中用作參照對(duì)照材料。更具體地，本發(fā)明涉及與EE-GM2的5'和/或3'的側(cè)翼區(qū)域組合的EE-GM3的5'和/或3'側(cè)翼區(qū)域，所述側(cè)翼區(qū)域可用于開發(fā)本文中進(jìn)一步描述的特異性引物和探針。還適合用作參照材料的是與核酸分子(所述核酸分子包含可利用包含EQIDNo.18和SEQIDNo.19的核苷酸或(基本上)由所述核苷酸序列組成的引物擴(kuò)增的序列)組合的優(yōu)選約150-850bp的核酸分子，所述核酸分子包含可利用包含SEQIDNo.7和SEQIDNo.5的核苷酸序列或SEQIDNo.4和SEQIDNo.5的核苷酸序列或(基本上)由所述核苷酸序列組成的引物擴(kuò)增的序列，特別地使用此類引物在包含EE-GM3和EE-GM2的材料中獲得此類核酸分子。本發(fā)明還涉及基于此類特異性引物或探針的使用鑒定EE-GM3和EE-GM1在生物樣品中的同時(shí)存在的鑒定方法。用于EE-GM3檢測(cè)的引物可包含與引物(所述引物包含選自SEQIDNo1的核苷酸序列的17至約200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，例如選自SEQIDNo2的核苷酸1452至核苷酸1843的核苷酸序列的互補(bǔ)序列或SEQIDNo3的核苷酸1至核苷酸240的核苷酸序列的17至約200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列或由或基本上由所述核苷酸序列組成)組合的選自SEQIDNo2的核苷酸1至核苷酸1451的核苷酸序列或SEQID3的核苷酸241至核苷酸1408的核苷酸序列的互補(bǔ)序列的17至約200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列或由或基本由所述核苷酸序列組成。用于EE-GM1檢測(cè)的引物可包含與引物(所述引物包含選自SEQIDNo11的核苷酸序列的17至約200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，例如選自SEQIDNo12的核苷酸219至核苷酸720的核苷酸序列的互補(bǔ)序列或SEQIDNo13的核苷酸1至核苷酸568的核苷酸序列的17至約200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列或由或基本上由所述核苷酸序列組成)組合的選自SEQIDNo12的核苷酸1至核苷酸209的核苷酸序列或SEQID13的核苷酸569至核苷酸1000的互補(bǔ)序列的17至約200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列、由或基本上由所述核苷酸序列組成。引物還可包含位于在它們的最3'末端的這些核苷酸序列，并且還包含無關(guān)序列或來源于提及的核苷酸序列但包含錯(cuò)配的序列。本發(fā)明還涉及基于此類特異性引物或探針的使用鑒定EE-GM3和EE-GM2在生物樣品中的同時(shí)存在的方法。用于EE-GM3檢測(cè)的引物可包含先前段落中描述的17至約200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列、由或基本上由所述核苷酸序列組成。用于EE-GM2檢測(cè)的引物可包含與引物(包含選自SEQIDNo11的核苷酸序列的17至約200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，例如SEQIDNo14的核苷酸312至核苷酸810的核苷酸序列的互補(bǔ)序列或SEQIDNo15的核苷酸1至核苷酸507的核苷酸序列的17至約200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列、由或基本上由所述核苷酸序列組成)組合的選自SEQIDNo14的核苷酸1至核苷酸311的核苷酸序列或SEQID15的核苷酸508至核苷酸1880的核苷酸序列的互補(bǔ)序列的17至約200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列、由或基本上由所述核苷酸序列組成。引物還可包含位于它們最3'末端的這些核苷酸序列，并且還包含無關(guān)序列或來源于提及的核苷酸序列但包含錯(cuò)配的序列。本發(fā)明還涉及用于鑒定生物樣品中的原種事件EE-GM3和EE-GM1的試劑盒，所述試劑盒包括至少一種特異性識(shí)別EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA的5’或3’側(cè)翼區(qū)域的引物或探針和至少一種特異性識(shí)別EE-GM1的包含耐除草劑基因的外源DNA的5’或3’側(cè)翼區(qū)域的引物或探針。本發(fā)明還涉及用于鑒定生物樣品中的原種事件EE-GM3和EE-GM2的試劑盒，所述試劑盒包括至少一種特異性識(shí)別EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA的5’或3’側(cè)翼區(qū)域的引物或探針和至少一種特異性識(shí)別EE-GM2的包含耐除草劑基因的外源DNA的5’或3’側(cè)翼區(qū)域的引物或探針。本發(fā)明的試劑盒，除了特異性識(shí)別EE-GM3的5’或3’側(cè)翼區(qū)域或EE-GM1的5’或3’側(cè)翼區(qū)域的引物外，還可包括特異性識(shí)別EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA內(nèi)的序列的其它引物和特異性識(shí)別EE-GM1的包含耐除草劑基因的外源DNA內(nèi)的序列的其它引物，以用于PCR鑒定方案。本發(fā)明的試劑盒，除了特異性識(shí)別EE-GM3的5’或3’側(cè)翼區(qū)域和EE-GM2的5’或3’側(cè)翼區(qū)域的引物外，還可包括特異性識(shí)別EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA內(nèi)的序列的其它引物和特異性識(shí)別EE-GM2的包含耐除草劑基因的外源DNA內(nèi)的序列的其它引物，以用于PCR鑒定方案。識(shí)別EE-GM3的3'側(cè)翼區(qū)域的引物可包含SEQIDNo.5的核苷酸序列并且識(shí)別EE-GM3的包含耐除草劑基因的轉(zhuǎn)基因或外源DNA的引物可包含SEQIDNo.4或7的核苷酸序列，或與可包含SEQIDNo.16的核苷酸序列的識(shí)別EE-GM1的5'側(cè)翼區(qū)域的引物和識(shí)別EE-GM1的包含耐除草劑基因的外源DNA的轉(zhuǎn)基因的引物組合的本文中描述的用于EE-GM3檢測(cè)的任何其它引物或引物組合可包含SEQIDNo17的核苷酸序列。識(shí)別EE-GM3的3'側(cè)翼區(qū)域的引物可包含SEQIDNo.5的核苷酸序列，并且識(shí)別EE-GM3的包含耐除草劑基因的轉(zhuǎn)基因或外源DNA的引物可包含SEQIDNo.4或7的核苷酸序列，或與可包含SEQIDNo.18的核苷酸序列的識(shí)別EE-GM2的5'側(cè)翼區(qū)域的引物和識(shí)別EE-GM2的包含耐除草劑基因的外源DNA的轉(zhuǎn)基因的引物組合的本文中描述的用于EE-GM3檢測(cè)的任何其它引物或引物組合可包含SEQIDNo19的核苷酸序列。本發(fā)明還涉及用于鑒定生物樣品中的原種事件EE-GM3和EE-GM1的試劑盒，所述試劑盒包括包含SEQIDNo.5和SEQIDNo.4的核苷酸序列或(基本上)由所述核苷酸序列組成的PCR引物和包含SEQID16和SEQID17的核苷酸序列或(基本上)由所述核苷酸序列組成的PCR引物，以用于基于EE-GM3/EE-GM1PCR的鑒定。本發(fā)明還涉及用于鑒定生物樣品中的原種事件EE-GM3和EE-GM2的試劑盒，所述試劑盒包括包含SEQIDNo.5和SEQIDNo.4的核苷酸序列或(基本上)由所述核苷酸序列組成的PCR引物和包含SEQID18和SEQID19的核苷酸序列或(基本上)由所述核苷酸序列組成的PCR引物，以用于基于EE-GM3/EE-GM2PCR的鑒定。本發(fā)明還涉及用于鑒定生物樣品中的原種事件EE-GM3和EE-GM1的試劑盒，所述試劑盒包括兩種特異性探針，第一探針包含對(duì)應(yīng)于與EE-GM3特異性區(qū)域具有80％至100％的序列同一性的序列(或與所述序列互補(bǔ))的序列或(基本上)由所述序列組成，并且第二探針包含對(duì)應(yīng)于與EE-GM1特異性區(qū)域具有80％至100％的序列同一性的序列(或與所述序列互補(bǔ))的序列或(基本上)由所述序列組成。優(yōu)選地，第一探針的序列對(duì)應(yīng)于包含EE-GM3的5’或3’側(cè)翼區(qū)域的部分的特異性區(qū)域并且所述第二探針對(duì)應(yīng)于包含EE-GM1的5’或3’側(cè)翼區(qū)域的部分的特異性區(qū)域。最優(yōu)選地，EE-GM3特異性探針包含與SEQIDNo2的核苷酸1441至1462之間的序列具有80％至100％的序列同一性的序列或與IDNo.3的核苷酸220至260之間的序列具有80％至100％的序列同一性的序列或(基本上)由所述序列組成(或與所述序列互補(bǔ))，并且EE-GM1特異性探針包含與SEQIDNo12的核苷酸199至220之間的序列具有80％至100％的序列同一性的序列或與SEQIDNo.13的核苷酸558至579之間的序列具有80％至100％的序列同一性的序列或(基本上)由所述序列組成(或與所述序列互補(bǔ))。本發(fā)明還涉及用于鑒定生物樣品中的原種事件EE-GM3和EE-GM2的試劑盒，所述試劑盒包括兩種特異性探針，第一探針包含對(duì)應(yīng)于與EE-GM3特異性區(qū)域具有80％至100％的序列同一性的序列(或與所述序列互補(bǔ))的序列或(基本上)由所述序列組成，并且第二探針包含對(duì)應(yīng)于與EE-GM2特異性區(qū)域具有80％至100％的序列同一性的序列(或與所述序列互補(bǔ))的序列或(基本上)由所述序列組成。優(yōu)選地，第一探針的序列對(duì)應(yīng)于包含EE-GM3的5’或3’側(cè)翼區(qū)域的部分的特異性區(qū)域并且所述第二探針對(duì)應(yīng)于包含EE-GM2的5’或3’側(cè)翼區(qū)域的部分的特異性區(qū)域。最優(yōu)選地，EE-GM3特異性探針包含與SEQIDNo2的核苷酸1441至1462之間的序列具有80％至100％的序列同一性的序列或與SEQIDNo.3的核苷酸220至260之間的序列具有80％至100％的序列同一性的序列或(基本上)由所述序列組成(或與所述序列互補(bǔ))，并且EE-GM2特異性探針包含與SEQIDNo14的核苷酸301至322之間的序列具有80％至100％的序列同一性的序列或與SEQIDNo.15的核苷酸497至518之間的序列具有80％至100％的序列同一性的序列或(基本上)由所述序列組成(或與所述序列互補(bǔ))。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，公開了DNA序列，所述DNA序列包含事件的連接位點(diǎn)和足夠長度的大豆基因組DNA和每一個(gè)事件的包含耐除草劑基因(轉(zhuǎn)基因)的外源DNA的多核苷酸以用作用于檢測(cè)EE-GM3和EE-GM1的引物或探針。此類序列可分別在連接位點(diǎn)的每一側(cè)包含大豆基因組DNA的至少9個(gè)核苷酸和EE-GM3或EE-GM1的包含耐除草劑基因(轉(zhuǎn)基因)的外源DNA的相似數(shù)目的核苷酸。最優(yōu)選地，此類DNA序列包含大豆基因組DNA的至少9個(gè)核苷酸和與SEQIDNO：2或SEQIDNO：3中的連接位點(diǎn)鄰接的包含耐除草劑基因的外源DNA的相似數(shù)目的核苷酸以及大豆基因組DNA的至少9個(gè)核苷酸和與SEQIDNO：12或SEQIDNO：13中的連接位點(diǎn)鄰接的包含耐除草劑基因的外源DNA的相似數(shù)目的核苷酸。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，公開了DNA序列，所述DNA序列包含事件的連接位點(diǎn)和足夠長度的大豆基因組DNA和每一個(gè)事件的包含耐除草劑基因(轉(zhuǎn)基因)的外源DNA的多核苷酸以用作用于檢測(cè)EE-GM3和EE-GM2的引物或探針。此類序列可分別在插入位點(diǎn)的每一側(cè)包含大豆基因組DNA的至少9個(gè)核苷酸和EE-GM3或EE-GM2的包含耐除草劑基因(轉(zhuǎn)基因)的外源DNA的相似數(shù)目的核苷酸。最優(yōu)選地，此類DNA序列包含大豆基因組DNA的至少9個(gè)核苷酸和與SEQIDNO：2或SEQIDNO：3中的連接位點(diǎn)鄰接的包含耐除草劑基因的外源DNA的相似數(shù)目的核苷酸以及大豆基因組DNA的至少9個(gè)核苷酸和與SEQIDNO：14或SEQIDNO：15中的連接位點(diǎn)鄰接的包含耐除草劑基因的外源DNA的相似數(shù)目的核苷酸。本發(fā)明包括的方法和試劑盒可用于不同目的例如但不限于下列目的：鑒定EE-GM3和EE-GM1或EE-GM3和EE-GM2在植物、植物材料或產(chǎn)物例如但不限于包含植物材料或來源于植物材料的食品或飼料產(chǎn)品(新鮮的或加工的)中的存在或測(cè)定其(下限)閾值；此外或可選擇地，為了分離轉(zhuǎn)基因與非轉(zhuǎn)基因材料，可將本發(fā)明的方法和試劑盒用于鑒定轉(zhuǎn)基因植物材料；此外或可選擇地，可將本發(fā)明的方法和試劑盒用于測(cè)定包含EE-GM3和EE-GM1或EE-GM3和EE-GM1的植物材料的質(zhì)量(即，純材料百分比)。本發(fā)明還涉及與從EE-GM1或EE-GM2的5'和/或3'側(cè)翼序列開發(fā)的特異性引物和探針組合的EE-GM3GM3的5'和/或3'側(cè)翼區(qū)域，以及涉及與從EE-GM1或EE-GM2的5'和/或3'側(cè)翼序列開發(fā)的特異性引物和探針組合的從EE-GM3的5'和/或3'側(cè)翼序列開發(fā)的特異性引物和探針。本發(fā)明還涉及從包含原種事件EE-GM3和EE-GM1的植物或包含原種事件EE-GM3和EE-GM2的植物獲得的基因組DNA。此類基因組DNA可在本文中描述的鑒定測(cè)定中用作參照對(duì)照材料。本文中還提供了轉(zhuǎn)基因耐除草劑大豆植物或其細(xì)胞、部分、種子或后代，其各自包含至少兩個(gè)原種事件，所述第一原種事件包含外源DNA，所述外源DNA包含：i)包含來自玉蜀黍的在植物可表達(dá)啟動(dòng)子的控制下編碼耐草甘膦的EPSPS酶的修飾epsps基因的第一嵌合基因，和ii)包含來自熒光假單胞菌(Pseudomonasfluorescen)的編碼耐HPPD抑制劑除草劑的酶的修飾hppd基因的第二嵌合基因，并且所述第二原種事件包含含有源自產(chǎn)綠色鏈霉菌(Streptomycesviridochromogene)的在植物可表達(dá)的啟動(dòng)子控制下編碼草胺膦(或草胺膦)乙酰轉(zhuǎn)移酶的修飾耐草胺膦基因的(第三)嵌合基因。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一原種事件包含緊鄰所述外源DNA的上游和與其鄰接的SEQIDNo2的核苷酸1至1451以及緊鄰所述外源DNA的下游和與其鄰接的SEQIDNo3的核苷酸241至1408，并且所述第二事件包含緊鄰所述外源DNA的上游和與其鄰接的SEQIDNo12的核苷酸1至209以及緊鄰所述外源DNA的下游和與其鄰接的SEQIDNo13的核苷酸569至1000，或所述第二事件包含緊鄰所述外源DNA的上游和與其鄰接的SEQIDNo14的核苷酸1至311以及緊鄰所述外源DNA的下游和與其鄰接的SEQIDNo15的核苷酸508至1880。在其它實(shí)施方案中，所述原種事件可通過與從已在保藏號(hào)PTA-11041或PTA-11042下保藏在ATCC的包含所述事件的參照種子生長而來的大豆植物繁育獲得，或可從已在登錄號(hào)NCIMB41659下保藏在NCIMB的包含所述第一事件的參照種子獲得，和可從已在登錄號(hào)NCIMB41658或NCIMB登錄號(hào)NCIMB41660下保藏在NCIMB的包含所述第二事件的參照種子獲得。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述大豆植物、其細(xì)胞、部分、種子或后代的基因組DNA，當(dāng)使用原種事件鑒定方案，利用兩個(gè)分別包含SEQIDNo4和SEQIDNo5的核苷酸序列分析其所述第一原種事件時(shí)，產(chǎn)生約263bp或263bp的DNA片段，當(dāng)使用原種事件鑒定方案，利用兩個(gè)分別包含SEQIDNo16和SEQIDNo17的核苷酸序列分析其所述第二原種事件時(shí)，產(chǎn)生約183bp或183bp的DNA片段，或利用兩個(gè)分別包含SEQIDNo18和SEQIDNo19的核苷酸序列的引物分析時(shí)，產(chǎn)生約151bp或151bp的DNA片段。本文中還提供了用于鑒定生物樣品中的包含2個(gè)原種事件的轉(zhuǎn)基因大豆植物或其細(xì)胞、部分、種子或后代的方法，其中所述植物、細(xì)胞、種子或后代耐草甘膦、草胺膦和HPPD抑制劑除草劑(例如異噁唑草酮)，所述方法包括使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，利用至少兩個(gè)引物從存在于生物樣品中的所述第一事件的核酸擴(kuò)增100至500bp的DNA片段，所述引物之一識(shí)別上面指定的第一原種事件的5'側(cè)翼區(qū)域，所述5'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo2的核苷酸1至核苷酸1451的核苷酸序列，或識(shí)別所述第一原種事件的3'側(cè)翼區(qū)域，所述3'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸1408的互補(bǔ)序列的核苷酸序列，所述引物的另一個(gè)引物識(shí)別所述第一事件的外源DNA內(nèi)的序列，所述外源DNA包含SEQIDNo2的核苷酸1452至核苷酸1843的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo3的核苷酸1至核苷酸240的核苷酸序列，以及包括使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，利用至少兩個(gè)引物從存在于生物樣品中的所述第二事件的核酸擴(kuò)增50至1000bp或100至500bp的DNA片段，所述引物之一識(shí)別上面指定的第二原種事件的5'側(cè)翼區(qū)域，所述5'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo12的核苷酸1至209的核苷酸序列，或識(shí)別所述第二原種事件的3'側(cè)翼區(qū)域，所述3'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo13的核苷酸569至1000的互補(bǔ)序列的核苷酸序列，所述引物的另一個(gè)引物識(shí)別所述第二事件的外源DNA內(nèi)的序列，所述外源DNA包含SEQIDNo12的核苷酸210至核苷酸720的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo13的核苷酸1至核苷酸568的核苷酸序列。本文中還提供了用于鑒定生物樣品中的包含2個(gè)原種事件的轉(zhuǎn)基因大豆植物或其細(xì)胞、部分、種子或后代的方法，其中所述植物、細(xì)胞、種子或后代耐草甘膦、草胺膦和/或HPPD抑制劑除草劑(例如異噁唑草酮)，所述方法包括使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，利用至少兩個(gè)引物從存在于生物樣品中的所述第一事件的核酸擴(kuò)增50至1000或100至500bp的DNA片段，所述引物之一識(shí)別上文中指定的第一原種事件的5'側(cè)翼區(qū)域，所述5'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo2的核苷酸1至核苷酸1451的核苷酸序列，或識(shí)別所述第一原種事件的3'側(cè)翼區(qū)域，所述3'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸1408的互補(bǔ)序列的核苷酸序列，所述引物的另一個(gè)引物識(shí)別所述第一事件的外源DNA內(nèi)的序列，所述外源DNA包含SEQIDNo2的核苷酸1452至核苷酸1843的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo3的核苷酸1至核苷酸240的核苷酸序列，以及包括使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，利用至少兩個(gè)引物從存在于生物樣品中的所述第二事件的核酸擴(kuò)增50至1000bp或100至500bp的DNA片段，所述引物之一識(shí)別上文中指定的第二原種事件的5'側(cè)翼區(qū)域，所述5'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo14的核苷酸1至核苷酸311的核苷酸序列，或識(shí)別所述第二原種事件的3'側(cè)翼區(qū)域，所述3'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo15的核苷酸508至核苷酸1880的互補(bǔ)序列的核苷酸序列，所述引物的另一個(gè)引物識(shí)別所述第二事件的外源DNA內(nèi)的序列，所述外源DNA包含SEQIDNo14的核苷酸312至核苷酸810的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo15的核苷酸1至核苷酸507的核苷酸序列。本文中還提供了用于鑒定生物樣品中的包含2個(gè)原種事件并且耐草甘膦、草胺膦和HPPD抑制劑除草劑(例如異噁唑草酮)的轉(zhuǎn)基因大豆植物或其細(xì)胞、部分、種子或后代的試劑盒，所述試劑盒包括一種識(shí)別上文中指定的第一原種事件的5'側(cè)翼區(qū)域的引物，所述5'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo2的核苷酸1至核苷酸1451的核苷酸序列，或一種識(shí)別所述第一原種事件的3'側(cè)翼區(qū)域的引物，所述3'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸1408的互補(bǔ)序列的核苷酸序列，一種識(shí)別所述第一事件的外源DNA內(nèi)的序列的引物，所述外源DNA包含SEQIDNo.2的核苷酸1452至核苷酸1843的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo3的核苷酸1至核苷酸240的核苷酸序列，并且所述試劑盒包括一種識(shí)別上文中指定的第二原種事件的5'側(cè)翼區(qū)域的引物，所述5'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo12的核苷酸1至核苷酸209的核苷酸序列，或一種識(shí)別所述第二原種事件的3'側(cè)翼區(qū)域的引物，所述3'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo13的核苷酸569至核苷酸1000的互補(bǔ)序列的核苷酸序列，所述引物的另一個(gè)引物識(shí)別所述第二事件的外源DNA內(nèi)的序列，所述外源DNA包含SEQIDNo.12的核苷酸210至核苷酸720的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo3的核苷酸1至核苷酸568的核苷酸序列。本文中還提供的用于鑒定生物樣品中的包含2個(gè)原種事件并且耐草甘膦、草胺膦和HPPD抑制劑除草劑(例如異噁唑草酮)的轉(zhuǎn)基因大豆植物或其細(xì)胞、部分、種子或后代的試劑盒，所述試劑盒包括一種識(shí)別上文中指定的第一原種事件的5'側(cè)翼區(qū)域的引物，所述5'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo2的核苷酸1至核苷酸1451的核苷酸序列，或一種識(shí)別所述第一原種事件的3'側(cè)翼區(qū)域，所述3'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸1408的互補(bǔ)序列的核苷酸序列，一種識(shí)別所述第一事件的外源DNA內(nèi)的序列的引物，所述外源DNA包含SEQIDNo.2的核苷酸1452至核苷酸1843的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo3的核苷酸1至核苷酸240的核苷酸序列，并且所述試劑盒包括一種識(shí)別上文中指定的第二原種事件的5'側(cè)翼區(qū)域(所述5'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo14的核苷酸1至核苷酸311的核苷酸序列)或識(shí)別所述第二原種事件的3'側(cè)翼區(qū)域(所述3'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo15的核苷酸508至核苷酸1880的互補(bǔ)序列的核苷酸序列)的引物，所述引物的另一種引物識(shí)別所述第二事件的外源DNA內(nèi)的序列，所述外源DNA包含SEQIDNo.14的核苷酸312至核苷酸810的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo15的核苷酸1至核苷酸507的核苷酸序列。本文中還提供了在它們的基因組中包含核酸分子的大豆植物、植物細(xì)胞、組織或種子(所述核酸分子包含與SEQIDNo.20的核苷酸位置1452至核苷酸位置16638的核苷酸序列、SEQIDNo.20的核苷酸位置2257至核苷酸位置16601的核苷酸序列或它們的互補(bǔ)序列具有至少97％、98％或至少99％或99.5％的序列同一性的核苷酸序列或與SEQIDNo.20或其互補(bǔ)序列具有至少97％、98％或至少99％或99.5％的序列同一性的核苷酸序列)，以及在它們的基因組中包含核酸分子的大豆植物、植物細(xì)胞、組織或種子(所述核酸分子包含與EE-GM1或EE-GM2的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列具有至少97％、98％或至少99％或99.5％的序列同一性的核苷酸序列)，已在保藏號(hào)NCIMB41658下保藏的包含EE-GM1的參照種子和已在保藏號(hào)NCIMB41660下保藏的包含EE-GM2的參照種子。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述植物、植物細(xì)胞、組織或種子中的EE-GM1或EE-GM2的核苷酸序列是SEQIDNo12或13中的DNA序列(例如外源DNA序列)，或SEQIDNo14或15中的DNA序列(例如外源DNA序列)，或包含SEQIDNo12的序列的第一核苷酸與SEQIDNo13的序列的最后一個(gè)核苷酸之間的SEQIDNo12和13的植物基因組(例如在包含本發(fā)明的EE-GM1或EE-GM2的保藏的種子中)的DNA序列，或包含SEQIDNo14的序列的第一核苷酸與SEQIDNo15的序列的最后一個(gè)核苷酸之間的SEQIDNo14和15的植物基因組的DNA序列。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案提供在它們的基因組中包含核酸分子的大豆植物、植物細(xì)胞、組織或種子(所述核酸分子與SEQIDNo1的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列雜交，或與SEQIDNo.20的核苷酸位置1452至核苷酸位置16638的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列雜交，或SEQIDNo.20的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列雜交)，以及在它們的基因組中包含核酸分子的大豆植物、植物細(xì)胞、組織或種子(所述核酸分子與EE-GM1或EE-GM2的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列雜交)，已在保藏號(hào)NCIMB41658下保藏的包含EE-GM1的參照種子和已在保藏號(hào)NCIMB41660下保藏的包含EE-GM2的參照種子。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述植物、植物細(xì)胞、組織或種子中的EE-GM1或EE-GM2的核苷酸序列是SEQIDNo12或13中的外源DNA，或SEQIDNo14或15中的外源DNA，或包含SEQIDNo12的序列的第一核苷酸與SEQIDNo13的序列的最后一個(gè)核苷酸之間的SEQIDNo12和13的植物基因組(例如在包含本發(fā)明的EE-GM1或EE-GM2的保藏的種子中)的外源DNA序列，或包含SEQIDNo14的序列的第一核苷酸與SEQIDNo15的序列的最后一個(gè)核苷酸之間的SEQIDNo14和15的植物基因組的外源DNA序列。附圖簡(jiǎn)述可結(jié)合附圖(通過引用并入本文)理解無意將本發(fā)明限定于描述的特定實(shí)施方案的下列實(shí)施例，其中：圖1：引用的核苷酸序列與原種事件EE-GM3的引物之間的關(guān)系的示意圖。黑色條：外源DNA；陰影條：植物來源的DNA；格紋箭頭(a)：嵌合HPPDPFW366編碼基因(關(guān)于嵌合基因的組成參見表1)；陰影箭頭(b)：嵌合2mEPSPS編碼基因(關(guān)于嵌合基因的組成參見表1)；黑色箭頭：寡核苷酸引物，條下的數(shù)字表示核苷酸位置；(c)是指顯示的核苷酸序列的互補(bǔ)序列；注意：示意圖未按規(guī)定比例繪制。圖2：通過針對(duì)EE-GM3開發(fā)的PCR鑒定方案獲得的結(jié)果。凝膠的上樣序列：泳道1：分子量標(biāo)準(zhǔn)(100bp梯帶)；泳道2和3：來自包含轉(zhuǎn)基因事件EE-GM3的大豆植物的DNA樣品；泳道4-7：來自未包含原種事件EE-GM3但包含相同的耐除草劑基因(其它轉(zhuǎn)化事件)的轉(zhuǎn)基因大豆植物的DNA樣品；泳道8：來自wt大豆的DNA樣品；泳道9：無模板DNA對(duì)照；泳道10：分子量標(biāo)準(zhǔn)。圖3：引用的核苷酸序列與原種事件EE-GM1的引物之間的關(guān)系的示意圖。黑色條：外源DNA；陰影條：植物來源的DNA；水平條紋箭頭(d)：嵌合草胺膦乙酰轉(zhuǎn)移酶編碼基因(關(guān)于嵌合基因的組成參見SEQIDNo.11)；黑色箭頭：寡核苷酸引物，條下的數(shù)字表示核苷酸位置；(c)是指顯示的核苷酸序列的互補(bǔ)序列。注意：示意圖未按規(guī)定比例繪制。圖4：引用的核苷酸序列與原種事件EE-GM2的引物之間的關(guān)系的示意圖。黑色條：外源DNA；陰影條：植物來源的DNA；水平條紋箭頭(d)：嵌合草胺膦乙酰轉(zhuǎn)移酶編碼基因(關(guān)于嵌合基因的組成參見SEQIDNo.11)；黑色箭頭：寡核苷酸引物，條下的數(shù)字表示核苷酸位置；(c)是指顯示的核苷酸序列的互補(bǔ)序列。NA：不適用的；注意：示意圖未按規(guī)定比例繪制。圖5：針對(duì)EE-GM1開發(fā)的PCR鑒定方案。凝膠的上樣序列：泳道1：來自包含轉(zhuǎn)基因事件EE-GM1的大豆植物的DNA樣品；泳道2：來自未包含原種事件EE-GM1的轉(zhuǎn)基因大豆植物的DNA樣品；泳道3：來自野生型大豆植物的對(duì)照DNA樣品；泳道4：無模板DNA對(duì)照；泳道5：分子量標(biāo)準(zhǔn)。圖6：針對(duì)EE-GM2開發(fā)的PCR鑒定方案。凝膠的上樣序列：泳道1：來自包含轉(zhuǎn)基因事件EE-GM2的大豆植物的DNA樣品；泳道2：來自未包含原種事件EE-GM2的轉(zhuǎn)基因大豆植物的DNA樣品；泳道3：來自野生型大豆植物的對(duì)照DNA樣品；泳道4：無模板DNA對(duì)照；泳道5：分子量標(biāo)準(zhǔn)。本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)描述重組DNA分子在植物基因組中的組合通常由細(xì)胞或組織的轉(zhuǎn)化產(chǎn)生。整合的具體位點(diǎn)通常歸因于隨機(jī)整合。作為用重組DNA或“轉(zhuǎn)化DNA”轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞或組織的結(jié)果而被引入植物基因組的和源自這樣的轉(zhuǎn)化DNA的DNA在下文中稱為包含一個(gè)或多個(gè)“轉(zhuǎn)基因”的“外源DNA”。EE-GM3的轉(zhuǎn)基因是草甘膦和HPPD抑制劑耐除草劑基因。在本發(fā)明的說明書中“植物DNA”將指源自已被轉(zhuǎn)化的植物的DNA。植物DNA通常見于對(duì)應(yīng)的野生型植物的相同基因座中。外源DNA的特征可在于重組DNA分子在植物基因組中整合的位點(diǎn)上的定位和構(gòu)型。其中已插入了重組DNA的植物基因組中的位置也稱為“插入位點(diǎn)”或“靶位點(diǎn)”?？蓪⒅亟MDNA至稱為“插入前植物DNA”的植物基因組的區(qū)域中的插入與植物DNA的缺失(稱為“靶位點(diǎn)缺失”)結(jié)合。如本文中所用，“側(cè)翼區(qū)域”或“側(cè)翼序列”是指與引入的DNA不同的至少20bp，優(yōu)選至少50bp和達(dá)到5000bp的DNA的序列，優(yōu)選來自植物基因組的恰好位于外源DNA的上游并且與其鄰接或恰好位于外源DNA的下游并且與其鄰接的DNA。導(dǎo)致外源DNA的隨機(jī)整合的轉(zhuǎn)化方法將導(dǎo)致具有不同側(cè)翼區(qū)域的轉(zhuǎn)化體，所述側(cè)翼區(qū)域?qū)τ诿恳粋€(gè)轉(zhuǎn)化體是特征性的和獨(dú)特的。當(dāng)通過常規(guī)雜交將重組DNA引入植物時(shí)，其在植物基因組中的插入位點(diǎn)或其側(cè)翼區(qū)域?qū)⑼ǔ２槐桓淖?。如本文中所用，“分離的核酸(序列)”或“分離的DNA(序列)”是指不再存在于其所分離自的天然環(huán)境中的核酸或DNA(序列)，例如，在另一種細(xì)菌宿主或植物基因組中的核酸序列，或融合至來自另一種來源的DNA或核酸的核酸或DNA，例如當(dāng)包含在處于植物可表達(dá)啟動(dòng)子的控制之下的嵌合基因中時(shí)。事件定義為(人工)基因座，所述基因座，作為基因工程的結(jié)果，攜帶包含至少一個(gè)拷貝的目標(biāo)基因的外源DNA或轉(zhuǎn)基因。事件的常見等位基因狀態(tài)為外源DNA的存在或不存在。事件的表型特征在于轉(zhuǎn)基因的表達(dá)。在基因水平上，事件是植物的基因組成的部分。在分子水平上，事件的特征在于限制性圖譜(例如，通過Southern印跡確定的)，在于轉(zhuǎn)基因的上游和/或下游側(cè)翼序列、分子標(biāo)志的定位和/轉(zhuǎn)基因的分子構(gòu)型。通常地，用包含至少一個(gè)目標(biāo)基因的DNA轉(zhuǎn)化植物產(chǎn)生包含許多分離事件的轉(zhuǎn)化體群體，所述每一個(gè)轉(zhuǎn)化體是獨(dú)特的。事件的特征在于外源DNA和側(cè)翼序列的至少一個(gè)序列。如本文中所用，原種事件是基于轉(zhuǎn)基因的表達(dá)和穩(wěn)定性以及其與包含其的植物的最佳農(nóng)藝特征的相容性，從通過利用相同轉(zhuǎn)化DNA的轉(zhuǎn)化獲得的一組事件選擇的事件。因此用于原種事件選擇的標(biāo)準(zhǔn)是如下的一項(xiàng)或多項(xiàng)，優(yōu)選兩項(xiàng)或更多項(xiàng)，有利地所有項(xiàng)：a)外源DNA的存在不削弱植物的其它期望的特征，例如與農(nóng)藝性狀或商業(yè)價(jià)值相關(guān)的特征；b)事件的特征在于明確確定的分子構(gòu)型，所述分子構(gòu)型可穩(wěn)定地遺傳并且可針對(duì)其開發(fā)用于身份控制(identitycontrol)的適當(dāng)工具；c)目標(biāo)基因在攜有所述事件的植物可能在正常農(nóng)藝應(yīng)用中所暴露的許多環(huán)境條件下，以商業(yè)可接受的水平在事件的雜合子(或半合子)和純合子條件中都顯示正確的、適當(dāng)?shù)暮头€(wěn)定的空間和時(shí)間表型表達(dá)。優(yōu)選地，將外源DNA與植物基因組中的位置連接，所述位置使得能夠容易地進(jìn)行至期望的商業(yè)遺傳背景中的基因滲入。通過在不同的相關(guān)遺傳背景中進(jìn)行原種事件的基因滲入，然后觀察對(duì)1、2個(gè)或所有標(biāo)準(zhǔn)例如上述a)、b)和c)的順應(yīng)性來將事件的狀態(tài)確認(rèn)作為原種事件。因此“原種事件”是指滿足上述標(biāo)準(zhǔn)的包含外源DNA的基因座。植物、植物材料或后代例如種子可在其基因組中包含一個(gè)或多個(gè)原種事件。開發(fā)用于鑒定原種事件或包含原種事件的植物或植物材料或包含含有原種事件的植物材料的產(chǎn)物的工具基于原種事件的特定基因組特征，例如包含外源DNA的基因組區(qū)域的特定限制性圖譜、分子標(biāo)志或外源DNA的側(cè)翼區(qū)域的序列。一旦已對(duì)外源DNA的一個(gè)或兩個(gè)側(cè)翼區(qū)域進(jìn)行了測(cè)序，則可利用分子生物學(xué)技術(shù)開發(fā)特異性識(shí)別樣品的核酸(DNA或RNA)中的該(這些)序列的引物和探針。例如，可開發(fā)PCR法來鑒定生物樣品(例如植物、植物材料或包含植物材料的產(chǎn)物的樣品)中的原種事件。這樣的PCR基于至少兩個(gè)特異性“引物”，一個(gè)識(shí)別原種事件的5’或3’側(cè)翼區(qū)域內(nèi)的序列并且另一個(gè)識(shí)別外源DNA內(nèi)的序列。引物優(yōu)選具有15至35個(gè)核苷酸的序列，所述序列在最優(yōu)化的PCR條件下分別“特異性識(shí)別”原種事件的5’或3’側(cè)翼區(qū)域和原種事件的外源DNA內(nèi)的序列，以便從包含原種事件的核酸樣品擴(kuò)增特異性片段(“整合片段”或鑒別擴(kuò)增子(discriminatingamplicon))。這意味著在最優(yōu)化的PCR條件下只有靶向整合片段而無植物基因組或外源DNA中的其它序列被擴(kuò)增。適用于EE-GM3的鑒定的PCR引物可以是下列序列：-長度范圍為17nt至約200nt的寡核苷酸，其在它們的3'末端上包含選自5'側(cè)翼序列(SEQIDNo2的核苷酸1至核苷酸1451)中的植物DNA的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸，優(yōu)選20個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列(識(shí)別5'側(cè)翼序列的引物)；或-長度范圍為17nt至約200nt的寡核苷酸，其在它們的3'末端上包含選自3'側(cè)翼序列(SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸1408的互補(bǔ)序列)中的植物DNA的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸，優(yōu)選20個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列(識(shí)別3'側(cè)翼序列的引物)；或-長度范圍為17nt至約200nt的寡核苷酸，其在它們的3'末端上包含選自插入的DNA序列(SEQIDNo2的核苷酸1452至核苷酸1843的互補(bǔ)序列)的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸，優(yōu)選20個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列(識(shí)別外源DNA的引物)；或-長度范圍為17nt至約200nt的寡核苷酸，其包含選自插入的DNA序列(SEQIDNo3的核苷酸1至核苷酸240)的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸，優(yōu)選20個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列；或-長度范圍為17nt至約200nt的寡核苷酸，其包含選自插入的DNA片段或其互補(bǔ)序列(SEQIDNo1或SEQIDNo20的核苷酸位置1452至16638)的核苷酸序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸，優(yōu)選20個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列。所述引物當(dāng)然可以比提及的17個(gè)連續(xù)核苷酸長，可以例如為20、21、30、35、50、75、100、150、200nt長或甚至更長。引物可完全由選自提及的側(cè)翼序列和外源DNA序列的核苷酸序列的核苷酸序列組成。然而，引物在它們的5'末端(即定位在3'的17個(gè)連續(xù)核苷酸之外的)上的核苷酸序列不太重要。因此，引物的5'序列可視情況而定包含選自側(cè)翼序列或外源DNA的核苷酸序列或由所述序列組成，但可包含幾個(gè)(例如，1、2、5或10)錯(cuò)配。引物的5'序列甚至可完全為與側(cè)翼序列或外源DNA無關(guān)的核苷酸序列，例如代表一個(gè)或多個(gè)限制性內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)的核苷酸序列。此類無關(guān)序列或具有錯(cuò)配的側(cè)翼DNA序列應(yīng)當(dāng)優(yōu)選不長于100，更優(yōu)選不長于50或甚至25個(gè)核苷酸。此外，適當(dāng)?shù)囊锟稍谒鼈兊?'末端包含橫跨植物DNA源性序列與外源DNA序列之間的連接區(qū)(位于EE-GM3的SEQIDNo2的核苷酸1451-1452和SEQIDNo3的核苷酸240-241上)的核苷酸序列或由或基本上由所述核苷酸序列組成，只要提及的定位在3'的17個(gè)連續(xù)核苷酸不僅僅來源于SEQIDNo2或3中的外源DNA或植物源性序列。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員也立即明白的是恰當(dāng)選擇的PCR引物不應(yīng)當(dāng)包含彼此互補(bǔ)的序列。為了本發(fā)明的目的，“SEQIDNo：X中所示的核苷酸序列的互補(bǔ)序列”是可通過按照沙加夫法則用它們的互補(bǔ)核苷酸替代核苷酸并且以5'至3'方向，即以所示的核苷酸序列的相反方向讀取序列從所示核苷酸序列衍生的核苷酸序列。適用于EE-GM3的引物的實(shí)例是SEQIDNo5(3'側(cè)翼序列識(shí)別引物)、SEQIDNo4(與3'側(cè)翼序列識(shí)別引物一起使用的外源DNA識(shí)別引物)或SEQIDNo7(與3'側(cè)翼序列識(shí)別引物一起使用的外源DNA識(shí)別引物)的寡核苷酸序列。適用于EE-GM3的寡核苷酸引物的其它實(shí)例在它們的3'末端包含下列序列或(基本上)由此類序列組成：a.5'側(cè)翼序列識(shí)別引物：-SEQIDNo2的核苷酸264至核苷酸283的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸266至核苷酸285的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1240至核苷酸1259的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸265至核苷酸285的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸265至核苷酸283的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1239至核苷酸1259的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1241至核苷酸1259的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1244至核苷酸1263的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1248至核苷酸1267的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1250至核苷酸1269的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸262至核苷酸279的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸263至核苷酸279的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸264至核苷酸285的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸266至核苷酸283的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1238至核苷酸1259的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1242至核苷酸1259的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1243至核苷酸1263的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1245至核苷酸1263的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1247至核苷酸1267的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1249至核苷酸1269的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1249至核苷酸1267的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸263至核苷酸285的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸267至核苷酸283的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1242至核苷酸1263的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1243至核苷酸1259的核苷酸序列--SEQIDNo2的核苷酸1246至核苷酸1267的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1246至核苷酸1263的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1248至核苷酸1269的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1250至核苷酸1271的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1250至核苷酸1267的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1241至核苷酸1263的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1245至核苷酸1267的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1247至核苷酸1269的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1247至核苷酸1263的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1249至核苷酸1271的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1242至核苷酸1261的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1241至核苷酸1261的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1243至核苷酸1261的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1240至核苷酸1261的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1244至核苷酸1261的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1239至核苷酸1261的核苷酸序列-SEQIDNo2的核苷酸1245至核苷酸1261的核苷酸序列b.與5'側(cè)翼序列識(shí)別引物一起使用的外源DNA序列識(shí)別引物：-SEQIDNo2的核苷酸1732至核苷酸1751的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1735至核苷酸1754的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1731至核苷酸1750的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1732至核苷酸1750的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1732至核苷酸1752的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1731至核苷酸1749的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1732至核苷酸1749的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1731至核苷酸1751的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1732至核苷酸1753的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1731至核苷酸1748的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1732至核苷酸1748的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1735至核苷酸1751的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1731至核苷酸1752的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1732至核苷酸1754的核苷酸序列的互補(bǔ)序列SEQIDNo2的核苷酸1731至核苷酸1747的核苷酸序列的互補(bǔ)序列SEQIDNo2的核苷酸1731至核苷酸1753的核苷酸序列的互補(bǔ)序列SEQIDNo2的核苷酸1727至核苷酸1746的核苷酸序列的互補(bǔ)序列SEQIDNo2的核苷酸1727至核苷酸1745的核苷酸序列的互補(bǔ)序列SEQIDNo2的核苷酸1727至核苷酸1747的核苷酸序列的互補(bǔ)序列SEQIDNo2的核苷酸1727至核苷酸1744的核苷酸序列的互補(bǔ)序列SEQIDNo2的核苷酸1727至核苷酸1748的核苷酸序列的互補(bǔ)序列SEQIDNo2的核苷酸1727至核苷酸1749的核苷酸序列的互補(bǔ)序列SEQIDNo2的核苷酸1726至核苷酸1745的核苷酸序列的互補(bǔ)序列SEQIDNo2的核苷酸1726至核苷酸1744的核苷酸序列的互補(bǔ)序列SEQIDNo2的核苷酸1726至核苷酸1746的核苷酸序列的互補(bǔ)序列SEQIDNo2的核苷酸1726至核苷酸1747的核苷酸序列的互補(bǔ)序列SEQIDNo2的核苷酸1726至核苷酸1748的核苷酸序列的互補(bǔ)序列SEQIDNo2的核苷酸1724至核苷酸1744的核苷酸序列的互補(bǔ)序列SEQIDNo2的核苷酸1724至核苷酸1745的核苷酸序列的互補(bǔ)序列SEQIDNo2的核苷酸1724至核苷酸1746的核苷酸序列的互補(bǔ)序列SEQIDNo2的核苷酸1461至核苷酸1478的核苷酸序列的互補(bǔ)序列SEQIDNo2的核苷酸1670至核苷酸1686的核苷酸序列的互補(bǔ)序列SEQIDNo2的核苷酸1469至核苷酸1486的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1508至核苷酸1527的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1667至核苷酸1686的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1670至核苷酸1687的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1673至核苷酸1689的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1688至核苷酸1704的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1688至核苷酸1705的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1692至核苷酸1709的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1467至核苷酸1486的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1481至核苷酸1497的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1481至核苷酸1498的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1491至核苷酸1507的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1491至核苷酸1508的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1672至核苷酸1688的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1673至核苷酸1690的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1673至核苷酸1691的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1688至核苷酸1706的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1691至核苷酸1707的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1691至核苷酸1708的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1469至核苷酸1487的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1481至核苷酸1499的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1489至核苷酸1505的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1489至核苷酸1506的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1489至核苷酸1507的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1489至核苷酸1508的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1666至核苷酸1686的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1667至核苷酸1687的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1670至核苷酸1688的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1672至核苷酸1689的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1688至核苷酸1707的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1691至核苷酸1709的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1692至核苷酸1710的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1481至核苷酸1500的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1491至核苷酸1509的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1670至核苷酸1689的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1672至核苷酸1690的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1672至核苷酸1691的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1687至核苷酸1705的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1687至核苷酸1706的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1691至核苷酸1710的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1472至核苷酸1488的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1488至核苷酸1507的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1491至核苷酸1510的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1495至核苷酸1512的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1495至核苷酸1513的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1495至核苷酸1514的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1673至核苷酸1692的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1678至核苷酸1694的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1678至核苷酸1695的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1678至核苷酸1696的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1687至核苷酸1703的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1687至核苷酸1704的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1692至核苷酸1711的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1469至核苷酸1488的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1488至核苷酸1506的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1491至核苷酸1511的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1670至核苷酸1690的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1678至核苷酸1697的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1688至核苷酸1709的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1467至核苷酸1487的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1488至核苷酸1508的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1495至核苷酸1511的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1491至核苷酸1512的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1666至核苷酸1687的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1667至核苷酸1688的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1672至核苷酸1692的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1673至核苷酸1693的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1687至核苷酸1707的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1472至核苷酸1490的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1472至核苷酸1491的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1481至核苷酸1501的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1489至核苷酸1509的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1495至核苷酸1515的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1670至核苷酸1691的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1673至核苷酸1694的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1678至核苷酸1698的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1469至核苷酸1489的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1667至核苷酸1689的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1687至核苷酸1708的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1688至核苷酸1710的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1691至核苷酸1711的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1472至核苷酸1492的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1489至核苷酸1510的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1666至核苷酸1688的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1687至核苷酸1709的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1692至核苷酸1712的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1467至核苷酸1488的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1469至核苷酸1490的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1488至核苷酸1509的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1489至核苷酸1511的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1678至核苷酸1699的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1472至核苷酸1493的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1472至核苷酸1494的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1481至核苷酸1502的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1670至核苷酸1692的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1469至核苷酸1491的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1488至核苷酸1510的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1691至核苷酸1712的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1692至核苷酸1713的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1692至核苷酸1714的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1467至核苷酸1489的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1678至核苷酸1700的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1481至核苷酸1503的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo2的核苷酸1691至核苷酸1713的核苷酸序列的互補(bǔ)序列c.3'側(cè)翼序列識(shí)別引物：-SEQIDNo3的核苷酸828至核苷酸847的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸830至核苷酸849的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸828至核苷酸846的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸828至核苷酸848的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸830至核苷酸848的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸830至核苷酸850的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸828至核苷酸845的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸830至核苷酸847的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸828至核苷酸849的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸830至核苷酸851的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸828至核苷酸844的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸830至核苷酸846的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸828至核苷酸850的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸830至核苷酸852的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸992至核苷酸1009的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸731至核苷酸752的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸776至核苷酸795的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸731至核苷酸753的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸776至核苷酸794的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸776至核苷酸796的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸776至核苷酸793的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸776至核苷酸797的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸776至核苷酸792的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸776至核苷酸798的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸733至核苷酸752的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸733至核苷酸753的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸733至核苷酸754的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸733至核苷酸755的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸838至核苷酸854的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸246至核苷酸263的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸838至核苷酸855的核苷酸序列的互補(bǔ)序列-SEQIDNo3的核苷酸245至核苷酸264的核苷酸序列的互補(bǔ)序列d.與3'側(cè)翼序列識(shí)別引物一起使用的外源DNA序列識(shí)別引物：-SEQIDNo3的核苷酸173至核苷酸192的核苷酸序列-SEQIDNo3的核苷酸22至核苷酸41的核苷酸序列-SEQIDNo3的核苷酸172至核苷酸192的核苷酸序列-SEQIDNo3的核苷酸174至核苷酸192的核苷酸序列-SEQIDNo3的核苷酸191至核苷酸210的核苷酸序列-SEQIDNo3的核苷酸171至核苷酸192的核苷酸序列-SEQIDNo3的核苷酸175至核苷酸192的核苷酸序列-SEQIDNo3的核苷酸190至核苷酸210的核苷酸序列-SEQIDNo3的核苷酸192至核苷酸210的核苷酸序列-SEQIDNo3的核苷酸176至核苷酸192的核苷酸序列-SEQIDNo3的核苷酸189至核苷酸210的核苷酸序列-SEQIDNo3的核苷酸193至核苷酸210的核苷酸序列-SEQIDNo3的核苷酸188至核苷酸210的核苷酸序列-SEQIDNo3的核苷酸194至核苷酸210的核苷酸序列-SEQIDNo3的核苷酸199至核苷酸218的核苷酸序列-SEQIDNo3的核苷酸200至核苷酸218的核苷酸序列-SEQIDNo3的核苷酸197至核苷酸218的核苷酸序列-SEQIDNo3的核苷酸201至核苷酸218的核苷酸序列-SEQIDNo3的核苷酸201至核苷酸220的核苷酸序列-SEQIDNo3的核苷酸200至核苷酸220的核苷酸序列-SEQIDNo3的核苷酸199至核苷酸220的核苷酸序列-SEQIDNo3的核苷酸200至核苷酸221的核苷酸序列-SEQIDNo3的核苷酸199至核苷酸221的核苷酸序列-SEQIDNo3的核苷酸150至核苷酸172的核苷酸序列適用于鑒定EE-GM1的PCR引物已描述于WO2006/108674中，特別是在第8頁第4行至第26頁第7行(通過引用并入本文)。適用于鑒定EE-GM2的PCR引物已描述于WO2006/108675中，特別是在第8頁第4行至第33頁第4行(通過引用并入本文)。如本文中所用，“SEQIDNo.Z的位置X至位置Y的核苷酸序列”表示包含兩個(gè)核苷酸終點(diǎn)的核苷酸序列。優(yōu)選地，擴(kuò)增片段具有50至500個(gè)核苷酸的長度，例如，100至350個(gè)核苷酸的長度。特異性引物可具有分別與原種事件以及原種事件的外源DNA的5’或3’側(cè)翼區(qū)域內(nèi)的序列具有80至100％的同一性的序列，只要錯(cuò)配仍然允許在最優(yōu)化的PCR條件下利用這些引物特異性鑒定所述原種事件。然而可允許的錯(cuò)配的范圍可由本領(lǐng)域技術(shù)人員憑經(jīng)驗(yàn)容易地確定或?qū)τ诒绢I(lǐng)域技術(shù)人員來說是已知的。整合片段的檢測(cè)可以以各種方式進(jìn)行，例如通過凝膠分析后進(jìn)行大小評(píng)估。還可對(duì)整合片段進(jìn)行直接測(cè)序。用于檢測(cè)擴(kuò)增的DNA片段的其它序列特異性方法在本領(lǐng)域也是已知的。由于引物的序列及其在基因組中的相對(duì)位置對(duì)于原種事件是獨(dú)特的，因此整合片段的擴(kuò)增將只在包含原種事件(的核酸)的生物樣品中發(fā)生。優(yōu)選地，當(dāng)進(jìn)行PCR以鑒定原種事件EE-GM3和EE-GM1或原種事件EE-GM3和EE-GM2在未知樣品中的存在時(shí)，將對(duì)照包括在一組引物中，可利用所述引物擴(kuò)增所述事件的植物物種的“管家基因”內(nèi)的片段。管家基因是在大多數(shù)細(xì)胞類型中表達(dá)并且與對(duì)于所有細(xì)胞是共同的基礎(chǔ)代謝活性有關(guān)的基因。優(yōu)選地，從管家基因擴(kuò)增的片段大于擴(kuò)增的整合片段。取決于待分析的樣品，可包括其它對(duì)照。標(biāo)準(zhǔn)PCR方案描述于本領(lǐng)域中，例如描述于'PCR擴(kuò)增手冊(cè)"(RocheMolecularBiochemicals,第2版,1999)和其它參考資料中。在針對(duì)每一個(gè)原種事件的“PCR(或聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))鑒定方案”中指定了用于PCR的最佳條件，包括特異性引物的序列。然而應(yīng)理解，針對(duì)具體的實(shí)驗(yàn)條件可能需要調(diào)整PCR鑒定方案的許多參數(shù)，或略微改變所述參數(shù)以獲得相似的結(jié)果。例如，使用不同的方法制備DNA可能需要調(diào)整例如所使用的引物、聚合酶的量和退火條件。類似地，其它引物的選擇可確定用于PCR鑒定方案的其它最佳條件。然而這些調(diào)整對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯然的，并且在現(xiàn)有PCR應(yīng)用手冊(cè)例如上文中引用的手冊(cè)中進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。或者，特異性引物可用于擴(kuò)增可用作用于鑒定生物樣品中的EE-GM3和EE-GM1或EE-GM3和EE-GM2的“特異性探針”的整合片段。在允許探針與樣品核酸中的它們的對(duì)應(yīng)片段雜交的條件下將生物樣品的核酸與探針接觸，導(dǎo)致核酸/探針雜交體的形成。可檢測(cè)(例如通過核酸或探針的標(biāo)記)這類雜交體的形成，其中這類雜交體的形成表示存在EE-GM3和EE-GM1或EE-GM3和EE-GM2?；谂c特異性探針(在固相載體上或在溶液中)雜交的此類鑒定方法已在本領(lǐng)域中進(jìn)行了描述。特異性探針優(yōu)選是在最優(yōu)化條件下與原種事件的5’或3’側(cè)翼區(qū)域內(nèi)的區(qū)域(優(yōu)選還包含與其鄰接的外源DNA的部分(在下文中稱為“特異性區(qū)域”))特異性雜交的序列。優(yōu)選，特異性探針包含與特異性區(qū)域的核苷酸序列具有至少80％、優(yōu)選80至85％、更優(yōu)選85至90％、特別優(yōu)選90至95％、最優(yōu)選95％至100％的同一性(或互補(bǔ))的50至500bp，優(yōu)選100至350bp的序列。優(yōu)選地，所述特異性探針將包含與原種事件特異性區(qū)域具有同一性(或互補(bǔ))的約15至約100個(gè)連續(xù)核苷酸的序列。此外，還可使用本文中提供的原種事件特異性序列信息來開發(fā)對(duì)于原種事件EE-GM3和EE-GM1或?qū)τ谠N事件EE-GM3和EE-GM2是特異的檢測(cè)方法，所述方法與基于PCR的擴(kuò)增法不同。此類替代檢測(cè)方法包括基于特定核酸結(jié)構(gòu)的侵入切割(invasivecleavage)的線性信號(hào)放大檢測(cè)法，也稱為InvaderTM技術(shù)(如例如美國專利5,985,557“InvasiveCleavageofNucleicAcids”，6,001,567“DetectionofNucleicAcidsequencesbyInvaderDirectedCleavage”中所描述的，通過引用并入本文)。為了利用該方法進(jìn)行EE-GM3檢測(cè)，靶序列可與包含SEQIDNo2的核苷酸1452至核苷酸1469的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的標(biāo)記的第一核酸寡核苷酸或包含SEQIDNo3的核苷酸223至核苷酸240的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的所述標(biāo)記核酸探針雜交，并且還可與包含SEQIDNo2的核苷酸1434至核苷酸1451的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的第二核酸寡核苷酸或包含SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸258的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的所述標(biāo)記核酸探針雜交，其中所述第一寡核苷酸與第二寡核苷酸重疊至少一個(gè)寡核苷酸。通過該雜交產(chǎn)生的雙鏈體或三鏈體結(jié)構(gòu)允許利用酶進(jìn)行選擇性探針切割，從而使靶序列保持完整。隨后可能地通過導(dǎo)致進(jìn)一步信號(hào)放大的中間步驟檢測(cè)切割的標(biāo)記探針。為了利用該方法進(jìn)行EE-GM1檢測(cè)，靶序列可與包含SEQIDNo12的核苷酸210至核苷酸227的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的標(biāo)記的第一核酸寡核苷酸或包含SEQIDNo13的核苷酸561至核苷酸568的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的所述標(biāo)記核酸探針雜交，并且還可與包含SEQIDNo12的核苷酸192至核苷酸209的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的第二核酸寡核苷酸或包含SEQIDNo13的核苷酸569至核苷酸586的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的所述標(biāo)記核酸探針雜交，其中所述第一寡核苷酸與第二寡核苷酸重疊至少一個(gè)寡核苷酸。通過該雜交產(chǎn)生的雙鏈體或三鏈體結(jié)構(gòu)允許利用酶進(jìn)行選擇性探針切割，從而使靶序列保持完整。隨后可能地通過導(dǎo)致進(jìn)一步信號(hào)放大的中間步驟檢測(cè)切割的標(biāo)記探針。為了利用該方法進(jìn)行EE-GM2檢測(cè)，靶序列可與包含SEQIDNo14的核苷酸312至核苷酸329的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的標(biāo)記的第一核酸寡核苷酸或包含SEQIDNo15的核苷酸490至核苷酸507的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的所述標(biāo)記核酸探針雜交，并且還可與包含SEQIDNo14的核苷酸294至核苷酸311的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的第二核酸寡核苷酸或包含SEQIDNo15的核苷酸508至核苷酸525的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的所述標(biāo)記核酸探針雜交，其中所述第一寡核苷酸與第二寡核苷酸重疊至少一個(gè)寡核苷酸。通過該雜交產(chǎn)生的雙鏈體或三鏈體結(jié)構(gòu)允許利用酶進(jìn)行選擇性探針切割，從而使靶序列保持完整。隨后可能地通過導(dǎo)致進(jìn)一步信號(hào)放大的中間步驟檢測(cè)切割的標(biāo)記探針。如本文中所用，“試劑盒”是指為了進(jìn)行本發(fā)明的方法，更具體地，鑒定生物樣品中的原種事件EE-GM3或確定包含EE-GM3的植物材料的接合性狀態(tài)而使用的一組試劑。更具體地，本發(fā)明的試劑盒的優(yōu)選實(shí)施方案包括至少一個(gè)或兩個(gè)如上所述用于鑒定原種事件的特異性引物，或用于確定接合性狀態(tài)的三個(gè)特異性引物。任選地，試劑盒還可包括本文中描述的用于PCR鑒定方案的任何其它試劑?；蛘?，根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，試劑盒可包括上述特異性探針，其與生物樣品的核酸特異性雜交以鑒定EE-GM3存在于其中。任選地，試劑盒還可包括用于使用特異性探針鑒定生物樣品中的EE-GM3的任何其它試劑(例如但不限于雜交緩沖液、標(biāo)記物)。為了進(jìn)行質(zhì)量控制(例如，種子批的純度)、檢測(cè)原種事件在植物材料或包含或來源于植物材料的材料(例如但不限于食品或飼料產(chǎn)品)中的存在或不存在，可使用本發(fā)明的試劑盒，并且特別地可調(diào)整其組分。如本文中所用，關(guān)于核苷酸序列(DNA或RNA)的“序列同一性”是指具有相同核苷酸的位置的數(shù)目除以兩個(gè)序列的較短者中的核苷酸序列的數(shù)目。利用Wilbur和Lipmann算法(Wilbur和Lipmann,1983,Proc.Nat.Acad.Sci.USA80:726)，使用20個(gè)核苷酸的窗口大小、4個(gè)核苷酸的字長以及為4的空位罰分進(jìn)行兩個(gè)核苷酸序列的比對(duì)?？梢岳缡褂肎eneticsComputerGroup的序列分析軟件包(GCG,UniversityofWisconsinBiotechnologyCenter)方便地進(jìn)行序列數(shù)據(jù)的計(jì)算機(jī)輔助分析和解釋，包括上文中描述的序列比對(duì)。當(dāng)此類序列具有至少約75％、特別地至少約80％、更特別地至少約85％、更特別地至少約90％、特別地至少約95％、更特別地至少約98％或至少約99％的序列同一性時(shí)，序列被標(biāo)示為“基本上相似”。很清楚，當(dāng)RNA序列被認(rèn)為與DNA基本上相似或與DNA序列具有一定程度的序列同一性時(shí)，DNA序列中的胸苷(T)被認(rèn)為等同于RNA序列中的尿嘧啶(U)。同樣地，很清楚小的差異或突變可隨著時(shí)間過去在DNA序列中出現(xiàn)并且對(duì)于本發(fā)明的事件特異性引物或探針可允許一些錯(cuò)配，這樣在本文中在本發(fā)明的任何實(shí)施方案中對(duì)于本發(fā)明的任何3'或5'側(cè)翼DNA或任何插入物或外源DNA或任何引物或探針指定的任何DNA序列，也包括基本上與本文中提供的序列相似的序列，例如與本發(fā)明的任何3'或5'側(cè)翼DNA、任何引物或探針或任何插入物或外源DNA的給定的序列雜交或與所述序列具有至少90％、95％、96％、97％、98％或至少99％的序列同一性的序列。如本文中所用，術(shù)語“引物”包括能夠以模板依賴性方法例如PCR引發(fā)新生核酸的合成的任何核酸。通常地，引物是10至30個(gè)核苷酸的寡核苷酸，但可使用更長的序列?？梢砸噪p鏈形式提供引物，盡管單鏈形式是優(yōu)選的。探針可用作引物，但被設(shè)計(jì)用以結(jié)合靶DNA或RNA并且無需用于擴(kuò)增過程中。如本文中所用，當(dāng)指特異性引物時(shí)，術(shù)語“識(shí)別”是指特異性引物在方法中所示的條件(例如PCR鑒定方案的條件)下與原始事件的核酸序列特異性雜交的事實(shí)，其中通過陽性對(duì)照和陰性對(duì)照的存在確定特異性。如本文中所用，術(shù)語“雜交”當(dāng)指特異性探針時(shí)，是指探針在標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格條件下結(jié)合原種事件的核酸序列特異性區(qū)域的事實(shí)。如本文中所用，標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格條件是指本文中描述的用于雜交的條件或指如由Sambrook等,1989(MolecularCloning：ALaboratoryManual,第2版,ColdSpringHarborLaboratoryPress,NY)描述的常規(guī)雜交條件，所述雜交條件例如可包括下列步驟：1)將植物基因組DNA片段固定在濾膜上，2)將濾膜在42℃下于50％甲酰胺、5XSSPE、2XDenhardt's試劑和0.1％SDS中預(yù)雜交1或2小時(shí)，或在68℃下于6XSSC、2XDenhardt's試劑和0.1％SDS中預(yù)雜交1至2小時(shí)，3)添加已被標(biāo)記的雜交探針，4)溫育16至24小時(shí)，5)在室溫下于1XSSC、0.1％SDS中洗滌濾膜20分鐘，6)在68℃下于0.2XSSC,0.1％SDS中洗滌濾膜3次，每次20分鐘，和7)使用增感屏，將濾膜在-70℃下暴露于X-射線膠片24至48小時(shí)。如本文中所用，生物樣品是植物、植物材料或包含植物材料的產(chǎn)物的樣品。術(shù)語“植物”意欲包括處于任何成熟階段的大豆(大豆)植物組織以及獲自或來源于任何這樣的植物的任何細(xì)胞、組織或器官，包括但不限于任何種子、葉、莖、花、根、單細(xì)胞、配子、細(xì)胞培養(yǎng)物、組織培養(yǎng)物或原生質(zhì)體。如本文中所用，“植物材料”是指獲自或來源于植物的材料。包含植物材料的產(chǎn)物涉及食品、飼料或使用植物材料產(chǎn)生的或可被植物材料污染的其它產(chǎn)物。應(yīng)理解，在本發(fā)明的說明書中，測(cè)試此類生物樣品的對(duì)于EE-GM3、EE-GM1和EE-GM2有特異性的核酸的存在，所述核酸的存在暗示著核酸在樣品中的存在。因此本文中提及的用于鑒定生物樣品中的原種事件EE-GM3和EE-GM2或EE-GM3和EE-GM1的方法涉及鑒定生物樣品中的包含原種事件的核酸。如本文中所用，“包含”將解釋為指定提及的所述特征、整數(shù)、步驟、試劑或組分的存在，但不排除一個(gè)或多個(gè)特征、整數(shù)、步驟或組合分或其組群的存在或添加。因此，例如，包含核苷酸或氨基酸的序列的核酸或蛋白質(zhì)可包含比實(shí)際上引述的核苷酸或氨基酸更多的核苷酸或氨基酸，即包括在更大的核酸或蛋白質(zhì)中。包含功能或結(jié)構(gòu)上確定的DNA序列的嵌合基因可包含額外的DNA序列，例如啟動(dòng)子和轉(zhuǎn)錄終止序列。本發(fā)明還涉及在大豆中進(jìn)行的一堆原種事件EE-GM3和原種事件EE-GM1或一堆原種事件EE-GM3和原種事件EE-GM2的開發(fā)，包含一堆此類事件的植物，從這些植物獲得的后代以及來源于包含這些堆的植物的植物細(xì)胞或植物材料。可如實(shí)施例1中所述獲得包含原種事件EE-GM3和EE-GM1或EE-GM3和EE-GM2的植物?？墒褂贸Ｒ?guī)繁育法將包含單個(gè)事件的植物雜交，然后鑒定其包含兩個(gè)不同事件的后代來獲得堆。可按照實(shí)施例2中針對(duì)EE-GM3和EE-GM1所描述的PCR鑒定方案鑒定包含EE-GM3和EE-GM1的大豆植物或植物材料。簡(jiǎn)而言之，使用特異性識(shí)別EE-GM3的5’或3’側(cè)翼序列內(nèi)的序列的引物例如具有SEQIDNO：5的序列的引物和識(shí)別外源DNA內(nèi)的序列的引物例如具有SEQIDNO：4的序列的引物，以及還使用特異性識(shí)別EE-GM1的5’或3’側(cè)翼序列內(nèi)的序列的引物例如具有SEQIDNO：16的序列的引物和識(shí)別外源DNA內(nèi)的序列的引物例如具有SEQIDNO：17的序列的引物通過PCR擴(kuò)增存在于生物樣品中的大豆基因組DNA?？砂凑諏?shí)施例2中針對(duì)EE-GM3和EE-GM2所描述的PCR鑒定方案鑒定包含EE-GM3和EE-GM2的大豆植物或植物材料。簡(jiǎn)而言之，使用特異性識(shí)別EE-GM3的5’或3’側(cè)翼序列內(nèi)的序列的引物例如具有SEQIDNO：5的序列的引物和識(shí)別外源DNA內(nèi)的序列的引物例如具有SEQIDNO：4的序列的引物，以及還使用特異性識(shí)別EE-GM2的5’或3’側(cè)翼序列內(nèi)的序列的引物例如具有SEQIDNO：18的序列的引物和識(shí)別外源DNA內(nèi)的序列的引物例如具有SEQIDNO：19的序列的引物通過PCR擴(kuò)增存在于生物樣品中的大豆基因組DNA。擴(kuò)增內(nèi)源大豆序列的部分的DNA引物用作PCR擴(kuò)增的陽性對(duì)照。當(dāng)進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，材料產(chǎn)生預(yù)期大小的片段，材料包含來自具有原種事件EE-GM3和EE-GM1的大豆植物或來自具有原種事件EE-GM3和EE-GM2的大豆植物的植物材料。具有EE-GM3和EE-GM1或EE-GM3和EE-GM2的植物的特征在于它們的草甘膦抗性，以及在于它們對(duì)HPPD抑制劑例如異噁唑草酮的抗性以及還在于它們對(duì)草銨膦的抗性。具有事件堆的植物的特征也在于在除草劑應(yīng)用不存在的情況下具有可與商購獲得的大豆品種相比較的農(nóng)藝特征。已觀察到，外源DNA在本文中描述的大豆植物基因組的插入?yún)^(qū)域中的存在賦予了包含該事件的植物特別令人感興趣的表型和分子特征。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案在大豆植物中提供了可通過在大豆基因組的特定位置插入轉(zhuǎn)基因獲得的原種事件EE-GM3和EE-GM1和/或EE-GM2的組合，所述原種事件賦予此類大豆植物對(duì)草甘膦、草胺膦和HPPD抑制劑除草劑例如異噁唑草酮的抗性，其中與等基因系相比較(如本文中所用，“等基因系”或“近等基因系”是具有相同遺傳背景但不存在轉(zhuǎn)基因的大豆品系，例如具有與用于轉(zhuǎn)化的植物相同的遺傳背景的植物，或已失去轉(zhuǎn)基因的分離姊妹系)，此類原種事件對(duì)此類大豆的農(nóng)藝性狀不產(chǎn)生負(fù)面影響此類大豆植物的產(chǎn)量的任何影響。具體地，本發(fā)明在大豆植物中提供了原種事件EE-GM3和EE-GM1和/或EE-GM2的組合，其中與等基因系相比較，所述原種事件在此類大豆植物的基因組中的插入或存在在此類大豆植物中不引起增加對(duì)疾病的易感性，不引起產(chǎn)量抑制現(xiàn)象，或不引起增強(qiáng)的倒伏。因此，本發(fā)明在大豆植物中提供了稱為EE-GM3和EE-GM1和/或EE-GM2的原種事件的組合，所述組合產(chǎn)生可耐受草甘膦、草胺膦和HPPD抑制劑除草劑(同時(shí)或單獨(dú)地)的施用而與等基因系相比較不負(fù)面影響所述大豆植物的產(chǎn)量的大豆植物，所述大豆植物在它們的疾病易感性或倒伏方面與等基因大豆植物相比較不具有統(tǒng)計(jì)上顯著的差異。這些特征使得原種事件的現(xiàn)有組合對(duì)控制大豆田中的耐草甘膦的雜草極具吸引力，并且還可用于在大豆田中防止或延遲其它耐草甘膦的發(fā)展(例如，通過施用草甘膦和異噁唑草酮和/或草銨膦，或通過施用異噁唑草酮和草甘膦和/或草銨膦，或通過施用草胺膦和草甘膦和/或異噁唑草酮，確保至少2個(gè)或甚至3個(gè)不同作用模式的除草劑施用于大豆田)。本文中還提供了包含事件EE-GM3和原種事件EE-GM1或EE-GM2的大豆植物或其部分，其中包含事件EE-GM3的代表性大豆種子已于NCIMB登錄號(hào)41659下保藏，包含原種事件EE-GM1的代表性大豆種子已于登錄號(hào)NCIMB41658下保藏在NCIMB，包含原種事件EE-GM2的代表性種子已于登錄號(hào)NCIMB41660下保藏在NCIMB，包含事件EE-GM3和EE-GM1的代表性大豆種子已于登錄號(hào)PTA-11041下保藏在ATCC，包含事件EE-GM3和EE-GM2的代表性大豆種子已于登錄號(hào)PTA-11042下保藏在ATCC。可通過本領(lǐng)域可獲得的任何方法，包括通過將來自保藏的種子的植物雜交，收集其后代，然后鑒定包含原種事件的適當(dāng)組合的后代植物將各個(gè)原種事件(如可見于各自保藏的種子中的)組合來獲得包含EE-GM3和EE-GM1或EE-GM3和EE-GM2的大豆植物或其部分。本文中還提供了包含此類事件的此類植物的種子以及從此類種子產(chǎn)生的大豆產(chǎn)物，其中所述大豆產(chǎn)物包含事件EE-GM3和EE-GM1或EE-GM2。此類大豆產(chǎn)物可以是膳食、磨碎的種子、粉末、薄片等或可包括所述形式。特別地，這樣的大豆產(chǎn)物包含產(chǎn)生診斷事件EE-GM3和原種事件EE-GM1或EE-GM2的擴(kuò)增子，例如包含SEQIDNo.2或3、SEQIDNo.14或15和/或SEQIDNo.12或13的擴(kuò)增子的核酸。本文中還提供了用于產(chǎn)生大豆產(chǎn)物的方法，包括獲得包含事件EE-GM3和原種事件EE-GM1或EE-GM2的大豆種子，和從其產(chǎn)生這樣的大豆產(chǎn)物。本文中還提供了大豆植物，其為任何上述大豆植物的后代，并且包含事件EE-GM3和EE-GM1或EE-GM2。本文中還提供了用于產(chǎn)生耐草甘膦和/或草胺膦和/或異噁唑草酮除草劑的大豆植物的方法，其包括：具體地通過將包含事件EE-GM3的第一大豆植物與包含EE-GM1和/或EE-GM2的大豆植物雜交，然后選擇耐草甘膦和/或草胺膦和/或異噁唑草酮的后代植物來將事件EE-GM3和事件EE-GM1或EE-GM2引入這樣的植物的基因組。本文中還提供了耐草甘膦和草胺膦和/或異噁唑草酮植物，所述植物明確地不具有產(chǎn)量抑制現(xiàn)象，具有可接受的農(nóng)藝特征，包含2mEPSPS、HPPD和PAT蛋白，并且能夠產(chǎn)生診斷事件EE-GM3和EE-GM1或EE-GM3和EE-GM2的擴(kuò)增子。本文中還提供了用于控制包含事件EE-GM3和EE-GM1或EE-GM3和EE-GM2的大豆植物的田中或待種植此類大豆植物的田中的雜草的方法，包括用有效量的基于異噁唑草酮、基于草甘膦和/或草銨膦的除草劑處理田，其中此類植物抗此類除草劑。本文中還提供了包含EE-GM3和EE-GM1的大豆植物、細(xì)胞、組織或種子，其特征在于在其細(xì)胞的基因組中包含與SEQIDNo.2的核苷酸1431至1472具有至少80％、90％、95％或100％的序列同一性的核酸序列和與SEQIDNo.3的核苷酸220至261具有至少80％、90％、95％或100％的序列同一性的核酸序列或所述序列的互補(bǔ)序列，以及還包含與SEQIDNo.12的核苷酸199至220具有至少80％、90％、95％或100％的序列同一性的核酸序列和與SEQIDNo.13的核苷酸558至579具有至少80％、90％、95％或100％的序列同一性的核酸序列或所述序列的互補(bǔ)序列。本文中還提供了包含EE-GM3和EE-GM2的大豆植物、細(xì)胞、組織或種子，其特征在于在其細(xì)胞的基因組中包含與SEQIDNo.2的核苷酸1431至1472具有至少80％、90％、95％或100％的序列同一性的核酸序列和與SEQIDNo.3的核苷酸220至261具有至少80％、90％、95％或100％的序列同一性的核酸序列或所述序列的互補(bǔ)序列，以及還有與SEQIDNo.14的核苷酸301至322具有至少80％、90％、95％或100％的序列同一性的核酸序列和與SEQIDNo.15的核苷酸497至518具有至少80％、90％、95％或100％的序列同一性的核酸序列或所述序列的互補(bǔ)序列。如本文中所用，術(shù)語“異噁唑草酮”是指除草劑異噁唑草酮[即(5-環(huán)丙基-4-異噁唑基)[2-(甲磺?；?-4-(三氟甲基)苯基]甲酮]，其活性代謝物二酮腈以及包含所述化合物的任何混合物或溶液。對(duì)于對(duì)包含本發(fā)明的事件的植物的應(yīng)用是有用的HPPD抑制性除草劑為二酮腈，例如2-氰基-3-環(huán)丙基-1-(2-甲磺酰-4-三氟甲基苯基)-丙烷-1,3-二酮和2-氰基-1-[4-(甲磺?；?-2-三氟甲基苯基]-3-(1-甲基環(huán)丙基)丙烷-1,3-二酮；其它異噁唑類；和吡唑啉鹽類，例如苯吡唑草酮[即[3-(4,5-二氫-3-異噁唑基)-2-甲基-4-(甲磺?；?苯基](5-羥基-1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲酮]，和磺酰草吡唑(pyrasulfotole)[(5-羥基-1,3-二甲基吡唑-4-基(2-甲磺酰-4-三氟甲基苯基)甲酮]；或鹽酸苯偶氮吡胺[2-[4-(2,4-二氯苯甲?；?-1,3-二甲基吡唑-5-基氧基]乙酰苯]。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，在種植大豆植物或播種之前，可用HPPD抑制劑除草劑例如異噁唑草酮('IFT')處理待種植包含EE-GM3事件的大豆植物的田，所述除草劑可清除田中可被HPPD抑制劑殺死的雜草，從而使得能夠?qū)嵤┟飧?，然后，隨后在該相同的預(yù)處理的田上種植或播種大豆(使用HPPD抑制劑除草劑的燒毀應(yīng)用)。IFT的殘余活性還將保護(hù)正在出芽和生長的大豆植物在早期生長階段免受雜草的競(jìng)爭(zhēng)。一旦大豆植物具有一定的大小，并且雜草有趨勢(shì)重現(xiàn)，則可將草甘膦或HPPD抑制劑-草甘膦混合物作為芽后除草劑在植物的頂部上方施用。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，可在大豆植物出芽前但在種子播種后(可在播種前使用其它方法，通常地常規(guī)耕地實(shí)踐例如耕犁、鑿式耕犁(chisselploughing)或苗床準(zhǔn)備使田間無雜草)，用HPPD抑制劑除草劑例如IFT處理其中播種了包含EE-GM3事件的種子的田，其中殘余活性將使田間保持無被除草劑殺死的雜草，以便正在出芽和生長的大豆植物沒有雜草競(jìng)爭(zhēng)(HPPD抑制劑除草劑的芽后施用)。一旦大豆植物具有一定的大小，并且雜草有趨勢(shì)重現(xiàn)，則可將草甘膦—或HPPD抑制劑-草甘膦混合物—作為芽后除草劑在植物的頂部上方施用。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，可在大豆植物(已從播種的種子出芽)的頂部上方用HPPD抑制劑除草劑例如IFT處理包含EE-GM3事件的植物，這可清除田中可被HPPD抑制劑殺死的雜草，可將該應(yīng)用與利用作為芽后除草劑的草甘膦的處理一起(例如，在噴霧罐混合物中)，在其之前或之后于植物的頂部上方施用(HPPD抑制劑除草劑(具有或不具有草甘膦)的芽后施用)。同樣地，根據(jù)本發(fā)明，可用下列殺蟲劑、除草劑或殺真菌劑處理具有EE-GM3和EE-GM1或EE-GM2的大豆植物，或可用包含下列殺蟲劑、除草劑或殺真菌劑的種子包衣包被具有EE-GM3和EE-GM1或EE-GM2的大豆種子：大豆除草劑：甲草胺(Alachlor)、苯達(dá)松(Bentazone)、氟樂靈(Trifluralin)、氯嘧磺隆(Chlorimuron-Ethyl)、氯酯磺草胺(Cloransulam-Methyl)、噁唑禾草靈(Fenoxaprop)、氟磺胺草醚(Fomesafen)、吡氟禾草靈(Fluazifop)、草甘膦、甲氧咪草煙(Imazamox)、滅草喹(Imazaquin)、咪草煙(Imazethapyr)、(S-)丙草胺(Metolachlor)、嗪草酮(Metribuzin)、二甲戊靈(Pendimethalin)、得殺草(Tepraloxydim)、異噁唑草酮、草銨膦。大豆殺蟲劑：λ-三氟氯氰菊酯(cyhalothrin)、滅多威(Methomyl)、對(duì)硫磷(Parathion)、硫雙威(Thiocarb)、吡蟲啉(Imidacloprid)、氯蟲酰肼(Clothianidin)、噻蟲嗪(Thiamethoxam)、噻蟲啉(Thiacloprid)、啶蟲脒(Acetamiprid)、呋蟲胺(Dinetofuran,)、氟蟲酰胺(Flubendiamide)、Rynaxypyr、Cyazypyr、多殺菌素(Spinosad)、乙基多殺菌素(Spinotoram)、埃瑪菌素(Emamectin-Benzoate)、氟蟲腈(Fipronil)、乙蟲腈(Ethiprole)、溴氰菊酯(Deltamethrin)、β-氟氯氰菊酯(-Cyfluthrin)、γ和λ三氟氯氰菊酯、4-[[(6-氯吡啶-3-基)甲基](2,2-二氟乙基)氨基]呋喃-2(5H)-酮、螺蟲乙酯(Spirotetramat)、螺螨酯(Spinodiclofen)、殺鈴脲(Triflumuron)、氟啶蟲酰胺(Flonicamid)、硫雙威(Thiodicarb)、β-氟氯氰菊酯。大豆殺真菌劑：腈嘧菌酯(Azoxystrobin)、環(huán)丙唑醇(Cyproconazole)、氟環(huán)唑(Epoxiconazole)、粉唑醇(Flutriafol)、吡唑醚菌酯(Pyraclostrobin)、戊唑醇(Tebuconazole)、布洛芬、丙硫菌唑(Prothioconazole)、氟醚唑(Tetraconazole)。下列實(shí)施例描述了原種事件EE-GM3、EE-GM1和EE-GM2以及包含事件EE-GM3和EE-GM1或EE-GM3和EE-GM2的堆的植物的鑒定以及用于特異性鑒定生物樣品中的原種事件EE-GM3、EE-GM1或EE-GM2及其堆的工具的開發(fā)。除非在實(shí)施例中另外指出，否則按照“SambrookJ和RussellDW(編著)(2001)MolecularCloning：ALaboratoryManual,第3版,ColdSpringHarborLaboratoryPress,NewYork”和“AusubelFA,BrentR,KingstonRE,MooreDD,SeidmanJG,SmithJA和StruhlK(編著)(2006)CurrentProtocolsinMolecularBiology.JohnWiley&Sons,NewYork”中描述的標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行所有重組技術(shù)。標(biāo)準(zhǔn)材料和參考資料描述于“CroyRDD(編)(1993)PlantMolecularBiologyLabFax,BIOSScientificPublishersLtd.,OxfordandBlackwellScientificPublications,Oxford”和“BrownTA,(1998)MolecularBiologyLabFax,第2版,AcademicPress,SanDiego”中。用于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的標(biāo)準(zhǔn)材料和方法可見于“McPhersonMJandMΦllerSG(2000)PCR(TheBasics),BIOSScientificPublishersLtd.,Oxford”和“PCRApplicationsManual,第3版(2006),RocheDiagnosticsGmbH,Mannheim或www.roche-applied-science.com”中。應(yīng)當(dāng)理解，下列實(shí)施例中的任何實(shí)驗(yàn)室方案例如PCR方案中的許多參數(shù)可能需要針對(duì)具體實(shí)驗(yàn)室條件進(jìn)行調(diào)整，并且可略作改進(jìn)以獲得相似結(jié)果。例如，使用不同方法制備DNA或在PCR法中選擇其它引物可決定用于PCR方案的其它最佳條件。然而這些調(diào)整對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯然的，并且在現(xiàn)有PCR應(yīng)用手冊(cè)中進(jìn)行進(jìn)一步說明。在說明書和實(shí)施例中，參考下列序列：SEQIDNo.1：載體pSF10的SalI片段核苷酸序列。SEQIDNo.2：包含側(cè)翼連接EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA的5'區(qū)域的核苷酸序列。SEQIDNo.3：包含側(cè)翼連接EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA的3'區(qū)域的核苷酸序列。SEQIDNo.4：引物SOY028SEQIDNo.5：引物SOY029SEQIDNo.6：引物SMP187SEQIDNo.7：引物STV019SEQIDNo.8：擴(kuò)增子的核苷酸序列SEQIDNo.9：用于擴(kuò)增對(duì)照片段的引物1(SOY01)SEQIDNo.10：用于擴(kuò)增對(duì)照片段的引物的2(SOY02)SEQIDNo.11：pB2/P35SAcK的核苷酸序列SEQIDNo.12：包含側(cè)翼連接EE-GM1中的外源DNA的5'區(qū)域的核苷酸序列SEQIDNo.13：包含側(cè)翼連接EE-GM1中的外源DNA的3'區(qū)域的核苷酸序列SEQIDNo.14：包含側(cè)翼連接EE-GM2中的外源DNA的5'區(qū)域的核苷酸序列SEQIDNo.15：包含側(cè)翼連接EE-GM2中的外源DNA的3'區(qū)域的核苷酸序列SEQIDNo.16：引物SOY06SEQIDNo.17：引物SOY07SEQIDNo.18：引物SOY09SEQIDNo.19：引物SOY010SEQIDNo.20：EE-GM3中的外源DNA和植物側(cè)翼序列的核苷酸序列SEQIDNo.21：引物SHA130SEQIDNo.22：引物SHA178實(shí)施例1.利用耐除草劑基因轉(zhuǎn)化大豆1.1.包含2mEPSPS和HPPD-Pf-W336嵌合基因的外源DNA的描述質(zhì)粒pSF10為pUC19衍生的克隆載體，其包含位于約7.3kb的SalI片段上的嵌合2mepsps基因和嵌合hppd-Pf-W336。兩個(gè)SalI限制性位點(diǎn)之間包含的DNA的完全說明示于下表1中。核苷酸序列示于SEQIDNo.1中。表1.pSF10的SalI限制性位點(diǎn)之間包含的DNA的核苷酸位置(SEQIDNo1)1.2.事件EE-GM3通過至大豆類型Jack的細(xì)胞內(nèi)的直接基因轉(zhuǎn)移將約7.3kb的HPLC純化的SalI線性化的pSF10片段(包含耐2mEPSPS草甘膦基因和耐HPPD抑制劑基因HPPD-Pf-W336)用于獲得轉(zhuǎn)化的大豆植物(Nickell,C.D.,G.R.Noel,D.J.Thomas和R.Waller.Registrationof'Jack'soybean.CropSci1365.30.1990)，然后將轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞再生成轉(zhuǎn)基因能育大豆植物。1.2.1原種事件EE-GM3的鑒定基于廣泛選擇法選擇原種事件EE-GM3，所述選擇法基于耐除草劑基因的良好表達(dá)和穩(wěn)定性，并且評(píng)估其與最佳農(nóng)藝特征例如株高、節(jié)距(heighttonode)、直立(stand)、活力(vigor)、種子產(chǎn)量的相容性。從使用相同嵌合基因獲得的許多不同轉(zhuǎn)化事件選擇含有該事件的大豆植物。該事件的選擇中使用的參數(shù)為：a)對(duì)田間試驗(yàn)中異噁唑草酮除草劑施用的可接受的抗性，b)對(duì)田間試驗(yàn)中草甘膦除草劑施用的可接受的抗性，c)對(duì)田間試驗(yàn)的異噁唑草酮和草甘膦除草劑的組合施用的可接受的抗性，d)耐除草劑轉(zhuǎn)基因在大豆植物基因組的單個(gè)基因座上的插入，載體主鏈不存在，e)與用于轉(zhuǎn)化的親本植物相似的總體農(nóng)藝學(xué)(成熟度、倒伏、疾病易感性等)，和f)無因轉(zhuǎn)化DNA的插入引起的產(chǎn)量抑制現(xiàn)象(與在相同條件下生長的無事件的等基因系例如用于轉(zhuǎn)化的植物品系相比較時(shí))。在T3代，選擇大豆轉(zhuǎn)化事件EE-GM3的純合品系的種子產(chǎn)量。在親本品種Jack適應(yīng)的地區(qū)進(jìn)行多位點(diǎn)重復(fù)農(nóng)藝田間研究(Multi-locationreplicatedagronomicfieldstudy)。田間評(píng)估包括除草劑抗性和農(nóng)藝性狀。發(fā)現(xiàn)包含EE-GM3的植物的農(nóng)藝性能與Jack相當(dāng)(當(dāng)不施用除草劑時(shí))。田間評(píng)估還顯示攜帶EE-GM3事件的植物具有：-與Jack相比較相似的植物形態(tài)學(xué)和種子特征，-與Jack相比較對(duì)大豆疾病的反應(yīng)無變化，和-與Jack相比較在種子萌發(fā)或休眠上無變化。將從溫室中的初始轉(zhuǎn)化體(T0)植物(用構(gòu)建體轉(zhuǎn)化的植物，以產(chǎn)生事件EE-GM3)收獲的種子(T1或S1代)種植在田中。種植3個(gè)小區(qū)，以0、2或4kg/ha草甘膦進(jìn)行噴施。從顯示期望水平的耐除草劑草甘膦的抗性的植物收獲種子。將從田間生長的自花授粉T1植物收獲的種子(T2代)按“株行(planttorow)”播種。行(完全或部分抗性)和行內(nèi)個(gè)體植物(抗性或敏感性)的分離數(shù)據(jù)的卡方分析顯示EE-GM3的單個(gè)插入的預(yù)期的孟德爾遺傳。繼續(xù)選擇和種子增加直至品系被確定為對(duì)于轉(zhuǎn)化事件EE-GM3是純合的，并且被選擇用于在第4代進(jìn)行核心種子生產(chǎn)。隨后，將T5代種子用作開發(fā)不同品種的候選者。將第6代(T6代)中的植物在設(shè)計(jì)用以將事件移入與更廣的商業(yè)大豆種質(zhì)基礎(chǔ)的基因滲入程序中與常規(guī)大豆繁育系(breedingline)雜交。將F1雜交植物(EE-GM3品系x常規(guī)品系)生長至成熟，種植F2種子。利用設(shè)計(jì)用以鑒定EE-GM3插入物的接合性的PCR引物分析901株F2植物的葉樣品。觀察到按照孟德爾法則進(jìn)行的單插入分離的1:2:1的預(yù)期比率。將選擇的事件EE-GM3引入不同的商業(yè)遺傳背景，比較不同位置上的田間試驗(yàn)的結(jié)果。使用不同的處理，用草甘膦除草劑和/或異噁唑草酮除草劑攻擊植物。植物展現(xiàn)良好的除草劑抗性。將數(shù)百個(gè)不同的包含事件EE-GM3的大豆品種用于遺傳研究，施用除草劑。隨后在田間增加從該試驗(yàn)選擇的品系，也用除草劑處理所述品系。從該試驗(yàn)，增加了50個(gè)選擇的品系，也對(duì)這些品系進(jìn)行除草劑處理。用異噁唑草酮和草甘膦噴施用的較后品系的植物毒性評(píng)分顯示反應(yīng)的差異性，但品系間的反應(yīng)范圍反映相似的差異性，如在相同處理和環(huán)境條件下生長的原始Jack背景中的EE-GM3事件的4個(gè)重復(fù)間觀察到的。因此，對(duì)于包含EE-GM3的植物觀察到廣泛的種質(zhì)間的對(duì)相關(guān)除草劑的抗性。此外，包含事件EE-GM3的植物具有正常的葉、花和莢形態(tài)學(xué)、優(yōu)良能育性，并且在多個(gè)遺傳背景中不顯示疾病或異常昆蟲易感性。在至多個(gè)遺傳背景的基因滲入過程中，未觀察到異常問題或異常情況。在一個(gè)季節(jié)中，設(shè)計(jì)10位置研究以比較包含轉(zhuǎn)化事件EE-GM3的雙耐除草劑大豆與轉(zhuǎn)化親本品種Jack和一些非轉(zhuǎn)基因大豆品種的農(nóng)藝性狀。使用隨機(jī)化完全區(qū)組設(shè)計(jì)，將EE-GM3植物種植在重復(fù)區(qū)，使用常規(guī)雜草控制或使用期望的除草劑、草甘膦和異噁唑草酮。以70克ai/Ha的目標(biāo)速率(targetrate)用異噁唑草酮除草劑和以1060克ai/Ha的目標(biāo)速率用草甘膦除草劑噴施具有包含轉(zhuǎn)化事件EE-GM3的大豆植物的小區(qū)。在約V4-V5植物生長階段以葉面噴霧的方式對(duì)這些植物施用除草劑。在早、中和晚季進(jìn)行農(nóng)藝學(xué)觀察。Jack和非轉(zhuǎn)基因品種區(qū)的植物密度(參數(shù)；直立計(jì)數(shù)(standcount))比事件EE-GM3區(qū)中的高一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差。早期直立墳數(shù)差異可能是種子批質(zhì)量的結(jié)果，因?yàn)镋E-GM3播種種子是在反季節(jié)苗圃中產(chǎn)生，而非轉(zhuǎn)基因品種的種子是在緊接著的美國正常生產(chǎn)季節(jié)產(chǎn)生的。然而，達(dá)到50％的萌發(fā)和植物活力評(píng)級(jí)(plantvigorrating)的天數(shù)相同，這表明對(duì)于這些性能參數(shù)種子批是可比較的。在晚季直立計(jì)數(shù)中，Jack和非轉(zhuǎn)基因品種與EE-GM3植物保持一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差的差異。EE-GM3事件植物的小區(qū)產(chǎn)量也比Jack的小區(qū)產(chǎn)量低一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差，這可能是由于EE-GM3事件小區(qū)的更低植物密度的結(jié)果。非轉(zhuǎn)基因品種的產(chǎn)量比Jack高，由于在最近的品種中發(fā)現(xiàn)的產(chǎn)量潛能的提高，這是可預(yù)期的。在一個(gè)試驗(yàn)中，在3個(gè)生長階段：V4-5、R1和完全成熟進(jìn)行植物健康評(píng)級(jí)。第一評(píng)級(jí)在期望的除草劑施用后不久進(jìn)行。在最終的植物健康評(píng)級(jí)時(shí)，用兩種除草劑噴施的含有EE-GM3的植物具有與未噴施的Jack植物或未噴施的包含EE-GM3的植物相同的評(píng)分。在由農(nóng)藝員工進(jìn)行評(píng)級(jí)中，噴施除草劑的植物在V4-5和R1植物生長階段接受3-4(中度傷)的健康評(píng)級(jí)。未噴施的植物(未轉(zhuǎn)化的Jack或包含EE-GM3的大豆植物)被評(píng)級(jí)為4.6-4.8(5的評(píng)級(jí)表示無損傷)。在最終植物健康評(píng)級(jí)時(shí)，所有小區(qū)接受為5的相同評(píng)級(jí)(無損傷)。一個(gè)試驗(yàn)季是異常降雨之一并且在期望的除草劑施用后EE-GM3植物中的作物損傷比在其它季節(jié)中觀察到的更明顯。田間評(píng)估還包括監(jiān)測(cè)適合性特征(fitnesscharacter)(生殖、疾病抗性、生殖力、種子散布、休眠、持久性(persistence))。對(duì)于生殖特征；至萌發(fā)的天數(shù)、達(dá)到50％的開花的天數(shù)和達(dá)到90％莢果成熟的天數(shù)，EE-GM3與Jack植物都不相同。在對(duì)疾病和蟲害的天然浸染的反應(yīng)中差異不顯著。雖然EE-GM3產(chǎn)生比Jack少的最終產(chǎn)量，但未發(fā)現(xiàn)生殖力(100粒種子重量)的差異。種子分散參數(shù)(豆莢落粒(podshattering)和植物倒伏)的評(píng)估發(fā)現(xiàn)EE-GM3和Jack具有相同的豆莢落粒評(píng)分，但發(fā)現(xiàn)EE-GM3植物不太容易倒伏。從10個(gè)位置收獲的種子的評(píng)估發(fā)現(xiàn)沒有因萌發(fā)或休眠測(cè)試而產(chǎn)生的問題。在這些試驗(yàn)中，在具有異常降雨的季中，無論雜草控制處理如何，EE-GM3植物的最終產(chǎn)量都低于Jack的產(chǎn)量一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差(可能是EE-GM3事件小區(qū)的更低植物密度的結(jié)果)。在異常潮濕的季節(jié)中，EE-GM3小區(qū)的作物損傷(10-30％的作物面積變白)據(jù)報(bào)導(dǎo)在草甘膦和異噁唑草酮除草劑的葉面施用后達(dá)到6周。然而，到成熟時(shí)，“無損傷”植物健康評(píng)級(jí)被賦予所有小區(qū)。在原種大豆品種背景中進(jìn)行EE-GM3基因滲入的重復(fù)多位點(diǎn)田間試驗(yàn)，當(dāng)與不包含轉(zhuǎn)基因的近等基因姊妹系相比較時(shí)，預(yù)期顯示包含事件EE-GM3的植物與近等基因系(在除草劑處理不存在的情況下)之間無產(chǎn)量差異。此外，在重復(fù)田間試驗(yàn)中，當(dāng)用IFT(70grai/ha和0.5％NIS,Agridex)進(jìn)行芽前或芽后處理時(shí)，在包含EE-GM3的大豆植物中發(fā)現(xiàn)顯著的作物抗性(低于10％的變白)，但當(dāng)利用磺酰草吡唑(35grai/ha和0.5％NIS,Agridex)(另一種HPPD抑制劑除草劑)的芽后施用處理時(shí)，也在包含EE-GM3的大豆植物中發(fā)現(xiàn)顯著的作物抗性(低于10％的變白)。1.2.2原種事件EE-GM3的側(cè)翼區(qū)域和外源DNA的鑒定EE-GM3原種事件中的側(cè)翼連接包含耐除草劑基因的外源DNA的區(qū)域的序列被測(cè)定為如下：1.2.2.1.右(5')側(cè)翼區(qū)域?qū)Ρ昏b定為包含5'側(cè)翼區(qū)域的片段進(jìn)行測(cè)序，其核苷酸序列示于SEQIDNo.2中。核苷酸1與1451之間的序列對(duì)應(yīng)于植物DNA，而核苷酸1452與1843之間的序列對(duì)應(yīng)于外源DNA。1.2.2.2.左(3')側(cè)翼區(qū)域?qū)Ρ昏b定為包含3'側(cè)翼區(qū)域的片段進(jìn)行測(cè)序，其核苷酸序列示于SEQIDNo.3中。核苷酸1與240之間的序列對(duì)應(yīng)于外源DNA，而核苷酸241與1408之間的序列對(duì)應(yīng)于植物DNA。1.2.2.3.EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA通過使用不同的分子技術(shù)，已確定原種事件EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA以頭接頭取向包含兩個(gè)部分3'組蛋白At序列，后接2個(gè)幾乎完全拷貝的以頭接頭取向排列的pSF10的SalI片段(參見圖1)。因此EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA按順序包含下列序列：-從核苷酸1至核苷酸199：對(duì)應(yīng)于SEQID1的nt6760至nt6958的核苷酸序列的互補(bǔ)序列的核苷酸序列；-從核苷酸200至核苷酸624：對(duì)應(yīng)于SEQID1的nt6874至nt7298的核苷酸序列的核苷酸序列；-從核苷酸625至核苷酸7909：對(duì)應(yīng)于SEQID1的nt7至nt7291的核苷酸序列的核苷酸序列；-從核苷酸7910至核苷酸15163：對(duì)應(yīng)于SEQID1的nt12至nt7265的核苷酸序列的核苷酸序列；和-從核苷酸15164至核苷酸15187：對(duì)應(yīng)于SEQID3的nt217至nt240的核苷酸序列的核苷酸序列(該序列不對(duì)應(yīng)于pSF10質(zhì)粒DNA或野生型植物DNA，從而被稱為填充DNA)。SEQIDNo2的核苷酸1至1451的5'側(cè)翼序列在該外源DNA之前緊鄰其上游并且與外源DNA鄰接，并且SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸1408的3'側(cè)翼序列在外源DNA之后緊鄰其下游離并且與外源DNA鄰接。EE-GM3中的外源DNA和側(cè)翼DNA序列的確認(rèn)完全DNA測(cè)序產(chǎn)生了SEQIDNo.20中報(bào)導(dǎo)的序列。在該序列中，插入的DNA是從核苷酸位置1452至核苷酸位置16638，以頭接頭取向排列的2個(gè)來自pSF10的幾乎完全的拷貝是從核苷酸位置2257至核苷酸位置16601。SEQIDNo.20的5'側(cè)翼DNA序列是SEQIDNo.20的核苷酸位置1至核苷酸位置1451的序列，并且SEQIDNo.20的3'側(cè)翼DNA序列是SEQIDNo.20的核苷酸位置16639至核苷酸位置17806的序列。1.3.包含草胺膦乙酰轉(zhuǎn)移酶嵌合基因的外源DNA的描述質(zhì)粒pB2/P35SAcK為pUC19衍生的克隆載體，其包含嵌合pat基因。載體的描述在下表2中給出。其核苷酸序列示于SEQIDNo.11。表2.pB2/P35SAcK(SEQIDNo11)的組分的核苷酸位置核苷酸位置描述和參考資料461-1003來自花椰菜花葉病毒的35S啟動(dòng)子1004-1011合成多接頭衍生的序列1012-1563合成pat基因(來自產(chǎn)綠色鏈霉菌的氨基酸序列)1564-1581合成多接頭衍生的序列1582-1784來自花椰菜花葉病毒的35S終止子1.4.事件EE-GM11.4.1EE-GM1的鑒定使用直接基因轉(zhuǎn)移，利用載體pB2/P35SAcK轉(zhuǎn)化大豆來開發(fā)耐除草劑大豆。基于廣泛選擇法選擇原種事件EE-GM1，所述選擇法基于耐除草劑基因的良好表達(dá)和穩(wěn)定性以及其與最佳農(nóng)藝特征的相容性。1.4.2原種事件EE-GM1的側(cè)翼區(qū)域和外源DNA的鑒定1.4.2.1.右(5')側(cè)翼區(qū)域?qū)Ρ昏b定為包含5'側(cè)翼區(qū)域的片段進(jìn)行測(cè)序，其核苷酸序列示于SEQIDNo.12中。核苷酸1與209之間的序列對(duì)應(yīng)于植物DNA，而核苷酸210與720之間的序列對(duì)應(yīng)于外源DNA。1.4.2.2.左(3')側(cè)翼區(qū)域?qū)Ρ昏b定為包含3'側(cè)翼區(qū)域的片段進(jìn)行測(cè)序，其核苷酸序列示于SEQIDNo.13中。核苷酸1與568之間的序列對(duì)應(yīng)于外源DNA，而核苷酸569與1000之間的序列對(duì)應(yīng)于植物DNA。1.4.2.3.EE-GM1的包含耐除草劑基因的外源DNA通過使用不同分子技術(shù)，現(xiàn)已確定原種事件EE-GM1的包含耐除草劑基因的外源DNA以同向重復(fù)結(jié)構(gòu)包含兩個(gè)拷貝的嵌合pat基因(參見圖3)。因此EE-GM1的包含耐除草劑基因的外源DNA按順序包含下列序列：-從核苷酸1至核苷酸3122：對(duì)應(yīng)于SEQID11的nt340至nt3461的核苷酸序列的核苷酸序列；-從核苷酸3123至核苷酸3458：對(duì)應(yīng)于SEQID11的nt1至nt336的核苷酸序列的互補(bǔ)序列的核苷酸序列；-從核苷酸3459至核苷酸4073：對(duì)應(yīng)于SEQID11的nt3462至nt4076的核苷酸序列的互補(bǔ)序列的核苷酸序列；和-從核苷酸4074至核苷酸6780：對(duì)應(yīng)于SEQID11的nt337至nt3043的核苷酸序列的核苷酸序列；和-從核苷酸6781至核苷酸6790：對(duì)應(yīng)于SEQID13的nt559至nt568的核苷酸序列的核苷酸序列(該序列不對(duì)應(yīng)于質(zhì)粒DNA或野生型植物DNA，從而被稱為填充DNA)。SEQIDNo12的核苷酸1至209的5'側(cè)翼序列在EE-GM1的該外源DNA之前緊鄰其上游并且與外源DNA鄰接，并且SEQIDNo13的核苷酸569至核苷酸1000的3'側(cè)翼序列在外源DNA之后緊鄰其下游離并且與外源DNA鄰接。1.5.事件EE-GM2使用直接基因轉(zhuǎn)移，利用載體pB2/P35SAcK轉(zhuǎn)化大豆來開發(fā)耐除草劑大豆?；趶V泛選擇法選擇原種事件EE-GM2，所述選擇法基于耐除草劑基因的良好表達(dá)和穩(wěn)定性以及其與最佳農(nóng)藝特征的相容性。1.5.1.原種事件EE-GM2的側(cè)翼區(qū)域和外源DNA的鑒定1.5.1.1.右(5')側(cè)翼區(qū)域?qū)Ρ昏b定為包含5'側(cè)翼區(qū)域的片段進(jìn)行測(cè)序，其核苷酸序列示于SEQIDNo.14中。核苷酸1與311之間的序列對(duì)應(yīng)于植物DNA，而核苷酸312與810之間的序列對(duì)應(yīng)于外源DNA。1.5.1.2.左(3')側(cè)翼區(qū)域?qū)Ρ昏b定為包含3'側(cè)翼區(qū)域的片段進(jìn)行測(cè)序，其核苷酸序列示于SEQIDNo.15中。核苷酸1與507之間的序列對(duì)應(yīng)于外源DNA，而核苷酸569與1880之間的序列對(duì)應(yīng)于植物DNA。1.5.1.3.EE-GM2的包含耐除草劑基因的外源DNA通過使用不同分子技術(shù)，現(xiàn)已確定原種事件EE-GM2的包含耐除草劑基因的外源DNA包含1個(gè)拷貝的嵌合pat基因(參見圖4)。因此EE-GM2的包含耐除草劑基因的外源DNA按順序包含下列序列：-從核苷酸1至核苷酸391：對(duì)應(yīng)于SEQID11的nt3458至nt3848的核苷酸序列的核苷酸序列；和-從核苷酸392至核苷酸3436：對(duì)應(yīng)于SEQID11的nt413至nt3457的核苷酸序列的核苷酸序列。SEQIDNo14的核苷酸1至311的5'側(cè)翼序列在EE-GM2的該外源DNA之前緊鄰其上游并且與外源DNA鄰接，并且SEQIDNo15的核苷酸508至核苷酸1880的3'側(cè)翼序列在外源DNA之后緊鄰其下游離并且與外源DNA鄰接。2.針對(duì)EE-GM3的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)鑒定方案的開發(fā)2.1.引物開發(fā)識(shí)別原種事件內(nèi)的序列的特異性引物。開發(fā)識(shí)別EE-GM3的3'側(cè)翼區(qū)域內(nèi)的序列的引物。隨后在外源DNA的序列內(nèi)選擇第二引物以便引物橫跨約263個(gè)核苷酸的序列。發(fā)現(xiàn)下列引物在對(duì)EE-GM3DNA的PCR反應(yīng)中產(chǎn)生特別清晰和可重現(xiàn)的結(jié)果：SOY028：5'-ATC.gCT.TTA.ACg.TCC.CTC.Ag-3(SEQIDNo.：4)(靶：插入DNA)SOY029：5'-CAA.ggC.CTC.gAg.ATT.ATC-3'(SEQIDNo.：5)(靶：植物DNA)優(yōu)選地將靶向內(nèi)源序列的引物包含在PCR混合物中。這些引物用作未知樣品和DNA陽性對(duì)照的內(nèi)部對(duì)照。利用內(nèi)源引物對(duì)的陽性結(jié)果(413bp的PCR擴(kuò)增片段的存在)表明在基因組DNA制劑中存在豐富的優(yōu)質(zhì)DNA可用于產(chǎn)生PCR產(chǎn)物。選擇內(nèi)源引物以識(shí)別內(nèi)源肌動(dòng)蛋白大豆基因：SOY015'-gTC.AgC.CAC.ACA.gTg.CCT.AT-3'(SEQIDNo.：9)SOY025'-gTT.ACC.gTA.CAg.gTC.TTT.CC-3'(SEQIDNo.：10)2.2.擴(kuò)增片段PCR反應(yīng)中的預(yù)期擴(kuò)增片段為：對(duì)于引物對(duì)SOY01-SOY02：413bp(內(nèi)源對(duì)照)對(duì)于引物對(duì)SOY028-SOY029：263bp(EE-GM3原種事件)2.3.模板DNA按照Edwards等(NucleicAcidResearch,19,p1349,1991)從葉沖孔制備模板DNA。當(dāng)使用利用其它方法制備的DNA時(shí)，應(yīng)當(dāng)利用不同量的模板進(jìn)行測(cè)試運(yùn)行。通常50ng的基因組模板DNA產(chǎn)生最佳結(jié)果。2.4.指定的陽性和陰性對(duì)照為了避免假陽性或陰性，決定應(yīng)當(dāng)將下列陽性和陰性對(duì)照包括在PCR運(yùn)行中：-MasterMix對(duì)照(DNA陰性對(duì)照)。這是其中未向反應(yīng)物中添加DNA的PCR。當(dāng)觀察到預(yù)期的結(jié)果(無PCR產(chǎn)物)時(shí)，這表明PCR混合物未被靶DNA污染。-DNA陽性對(duì)照(已知包含轉(zhuǎn)基因序列的基因組DNA樣品)。該陽性對(duì)照的成功擴(kuò)增表明PCR在允許靶序列擴(kuò)增的條件下運(yùn)行。-野生型DNA對(duì)照。這是其中提供的模板DNA是從非轉(zhuǎn)基因植物制備的基因組DNA。當(dāng)觀察到預(yù)期的結(jié)果：無轉(zhuǎn)基因PCR產(chǎn)物擴(kuò)增但內(nèi)源PCR產(chǎn)物擴(kuò)增時(shí)，這表明在基因組DNA樣品中不存在可檢測(cè)的轉(zhuǎn)基因背景擴(kuò)增。2.5.PCR條件在下列條件下獲得最佳結(jié)果(在描述中，用于最佳結(jié)果的各種條件意指提供此類條件的實(shí)例。很明顯，本領(lǐng)域技術(shù)人員可改變條件、試劑和參數(shù)(例如使用其它Taq聚合酶)，并且獲得期望的結(jié)果)：用于25μl反應(yīng)的PCR混合物包含：20ng模板DNA2.5μl10x擴(kuò)增緩沖液(與Taq聚合酶一起由制造商提供的)0.5μl10mMdNTP's0.4μlSOY01(10皮摩爾/μl)0.4μlSOY02(10皮摩爾/μl)0.7μlSOY028(10皮摩爾/μl)0.7μlSOY029(10皮摩爾/μl)0.1μlTaqDNA聚合酶(5個(gè)單位/μl)加水至25μl遵照以獲取最佳結(jié)果的熱循環(huán)設(shè)置(thermocyclingprofile)如下：在95℃下進(jìn)行4分鐘隨后：在95℃下進(jìn)行1分鐘在57℃下進(jìn)行1分鐘在72℃下進(jìn)行2分鐘進(jìn)行5個(gè)循環(huán)隨后：在92℃下進(jìn)行30秒在57℃下進(jìn)行30秒在72℃下進(jìn)行1分鐘進(jìn)行25個(gè)循環(huán)隨后：在72℃下進(jìn)行10分鐘2.6.瓊脂糖凝膠分析為了最佳地顯現(xiàn)PCR的結(jié)果，已確定應(yīng)當(dāng)將10至20μl的PCR樣品施加在1.5％的瓊脂糖凝膠(Tris-硼酸鹽緩沖液)上，使用適當(dāng)?shù)姆肿恿繕?biāo)準(zhǔn)(例如100bp梯帶Pharmacia)。2.7.結(jié)果的驗(yàn)證已確定，除非1)DNA陽性對(duì)照顯示預(yù)期的PCR產(chǎn)物(轉(zhuǎn)基因和內(nèi)源片段)，2)DNA陰性對(duì)照對(duì)于PCR擴(kuò)增呈陰性(無片段)和3)野生型DNA對(duì)照顯示預(yù)期的結(jié)果(內(nèi)源片段擴(kuò)增)，否則來自單個(gè)PCR運(yùn)行和單個(gè)PCR混合物內(nèi)的轉(zhuǎn)基因植物DNA樣品的數(shù)據(jù)應(yīng)當(dāng)是不可接受的。當(dāng)按照上述針對(duì)EE-GM3的PCR鑒定方案進(jìn)行時(shí)，顯示可見量的具有期望大小的轉(zhuǎn)基因和內(nèi)源PCR產(chǎn)物的泳道表明基因組模板DNA從其制備的相應(yīng)植物遺傳了EE-GM3原種事件。未顯示可見量的任一轉(zhuǎn)基因PCR產(chǎn)物但顯示可見量的內(nèi)源PCR產(chǎn)物的泳道表明基因組模板DNA從其制備的相應(yīng)植物不包含原種事件。未顯示可見量的內(nèi)源PCR產(chǎn)物和轉(zhuǎn)基因PCR產(chǎn)物的泳道表明基因組DNA的質(zhì)量和/或量不允許PCR產(chǎn)物產(chǎn)生。不能給這些植物評(píng)分。應(yīng)當(dāng)重復(fù)基因組DNA制備，并且必須進(jìn)行新的PCR運(yùn)行(利用適當(dāng)?shù)膶?duì)照)。2.8.使用鑒別PCR方案鑒定EE-GM3在嘗試篩選未知之前，必須利用適當(dāng)?shù)膶?duì)照進(jìn)行測(cè)試運(yùn)行。開發(fā)的方案可能需要針對(duì)在實(shí)驗(yàn)室之間可能不同的組分(模板DNA制劑、TaqDNA聚合酶、引物的質(zhì)量、dNTP、熱循環(huán)儀等)進(jìn)行最優(yōu)化。內(nèi)源序列的擴(kuò)增在所述方案中起著關(guān)鍵作用。必須獲得擴(kuò)增出等摩爾量的已知轉(zhuǎn)基因基因組DNA模板中的內(nèi)源序列和轉(zhuǎn)基因序列的PCR和熱循環(huán)條件。每當(dāng)靶向內(nèi)源片段不被擴(kuò)增時(shí)，或每當(dāng)靶向序列在相同溴化乙錠染色強(qiáng)度下不被擴(kuò)增時(shí)，如通過瓊脂糖凝膠電泳判斷的，則可能需要PCR條件的最優(yōu)化。按照上述方案測(cè)試來自許多大豆植物的葉材料，其中一些包含EE-GM3。來自原種事件EE-GM3和來自大豆野生型的樣品分別被用作陽性對(duì)照和陰性對(duì)照。圖2舉例說明利用針對(duì)EE-GM3的原種事件PCR鑒定方案對(duì)許多大豆植物樣品獲得的結(jié)果。發(fā)現(xiàn)泳道2和3中的樣品包含原種事件EE-GM3，因?yàn)闄z測(cè)到263bp的條帶，然而泳道4至8中的樣品不包含EE-GM3。泳道6和7包含來自使用相同耐除草劑嵌合基因獲得的其它大豆轉(zhuǎn)化事件的樣品；泳道8包含來自野生型大豆植物的DNA，泳道9代表陰性對(duì)照(水)樣品，泳道1和10代表分子量標(biāo)準(zhǔn)(100bp梯帶)。2.9.用于大批種子的EE-GM3檢測(cè)的dPCR測(cè)定建立鑒別PCR(dPCR)測(cè)定以檢測(cè)大批種子中EE-GM3的低水平存在。在可重復(fù)條件下在大批非轉(zhuǎn)基因種子中成功地檢測(cè)到最低水平0.4％(w/w)的轉(zhuǎn)基因種子。因此檢測(cè)限被確定為0.4％(w/w)。在該靶PCR反應(yīng)中使用下列引物：靶向T-DNA序列的正向引物：SHA1305'-CTA.TAT.TCT.ggT.TCC.AAT.TTA.TC-3'(SEDIDNo.12)靶向3'側(cè)翼序列的反向引物：SMP1785'-TgA.ggC.ACg.TAT.TgA.TgA.CC-3'(SEQIDNo.13)PCR反應(yīng)中來自這些引物的預(yù)期的擴(kuò)增片段為115bp。對(duì)約200ng的按照改良的GentraPuregeneDNA純化提取試劑盒(Qiagen)從磨碎的大批種子制備的模板DNA進(jìn)行靶PCR反應(yīng)。當(dāng)使用利用其它方法制備的DNA時(shí)，應(yīng)當(dāng)使用具有已知相對(duì)水平的EE-GM3的樣品進(jìn)行測(cè)試運(yùn)行。理想地應(yīng)當(dāng)在單獨(dú)的PCR運(yùn)行中進(jìn)行靶向內(nèi)源序列的驗(yàn)證參照系統(tǒng)PCR反應(yīng)，以驗(yàn)證DNA樣品對(duì)于PCR分析的適合性，以避免假陰性結(jié)果。對(duì)于未知測(cè)試樣品，PCR實(shí)驗(yàn)理想地應(yīng)當(dāng)包括適當(dāng)?shù)年栃院完幮詫?duì)照樣品，即：-MasterMix對(duì)照(DNA陰性對(duì)照)。這是其中未向反應(yīng)物中添加DNA的PCR。當(dāng)對(duì)于靶和參照系統(tǒng)反應(yīng)都觀察到預(yù)期的結(jié)果(無PCR產(chǎn)物)時(shí)，這表明PCR混合物未被靶DNA污染。-DNA陽性對(duì)照(已知包含轉(zhuǎn)基因序列的基因組DNA樣品)。該陽性對(duì)照的成功擴(kuò)增表明PCR在允許靶序列擴(kuò)增的條件下運(yùn)行。-還可將野生型DNA對(duì)照添加進(jìn)該P(yáng)CR中。這是其中提供的模板DNA是從非轉(zhuǎn)基因植物制備的基因組DNA。當(dāng)觀察到預(yù)期的結(jié)果：無轉(zhuǎn)基因PCR產(chǎn)物擴(kuò)增但內(nèi)源PCR產(chǎn)物擴(kuò)增時(shí)，這表明在基因組DNA樣品中不存在可檢測(cè)的轉(zhuǎn)基因背景擴(kuò)增。在下列條件下獲得最佳結(jié)果：-用于25μl反應(yīng)的PCR混合物包含：200ng模板DNA5μl5x反應(yīng)緩沖液0.25μl20mMdNTP0.7μlSHA130(10皮摩爾/l)0.4μlSMP178(10皮摩爾/l)0.1μlGO-TaqDNA聚合酶(5個(gè)單位/l)加水至25μl-遵照以獲取最佳結(jié)果的熱循環(huán)設(shè)置如下：在95℃下進(jìn)行4分鐘隨后：在95℃下進(jìn)行1分鐘在57℃下進(jìn)行1分鐘在72℃下進(jìn)行2分鐘進(jìn)行5個(gè)循環(huán)隨后：在92℃進(jìn)行30秒在57℃下進(jìn)行30秒在72℃下進(jìn)行1分鐘進(jìn)行30個(gè)循環(huán)隨后：在72℃下進(jìn)行10分鐘為了最佳地顯現(xiàn)PCR的結(jié)果，已確定應(yīng)當(dāng)將10至20μl的PCR產(chǎn)物施加在1.5％的瓊脂糖凝膠(Tris-硼酸鹽緩沖液)上，使用適當(dāng)?shù)姆肿恿繕?biāo)準(zhǔn)(例如50bp梯帶)。當(dāng)按照上述PCR法進(jìn)行時(shí)，顯示可見量的具有期望大小的靶和參照系統(tǒng)PCR產(chǎn)物的泳道表明基因組模板DNA從其制備的測(cè)試樣品包含高于靶反應(yīng)的檢測(cè)限的EE-GM3原種事件的水平。未顯示可見量的靶PCR產(chǎn)物但顯示可見量的參照系統(tǒng)PCR產(chǎn)物的泳道表明基因組模板DNA從其制備的測(cè)試樣品包含低于靶反應(yīng)的檢測(cè)限的EE-GM3原種事件的水平未顯示可見量的內(nèi)源和轉(zhuǎn)基因PCR產(chǎn)物的泳道表明基因組DNA的質(zhì)量和/或量不允許PCR產(chǎn)物產(chǎn)生。不能給這些植物評(píng)分。應(yīng)當(dāng)重復(fù)基因組DNA制備，并且必須利用適當(dāng)?shù)膶?duì)照進(jìn)行新的PCR運(yùn)行。3.特定整合片段作為用于檢測(cè)包含EE-GM3的材料的探針的用途使用特異性引物SOY028(SEQIDNo.4)和SOY029(SEQIDNo.5)通過PCR獲得EE-GM3的特定整合片段，產(chǎn)生具有SEQIDNo8的核苷酸序列的擴(kuò)增子，或通過化學(xué)合成獲得EE-GM3的特定整合片段，并且標(biāo)記所述整合片段。將該整合片段用作用于檢測(cè)生物樣品中的EE-GM3的特異性探針。按照標(biāo)準(zhǔn)方法從樣品提取核酸。隨后將該核酸在經(jīng)最優(yōu)化以允許雜交體形成的雜交條件下與特異性探針接觸。隨后檢測(cè)雜交體的形成以表明EE-GM3核酸存在于樣品中。任選地，使用特異性引物擴(kuò)增樣品的核酸，然后將所述核酸與特異性探針接觸。或者，標(biāo)記所述核酸，然后將其與特異性探針而非整合片段接觸。任選地，將特異性探針連接至固體載體(例如，但不限于濾膜、條帶或珠粒)，隨后將其與樣品接觸。4.針對(duì)EE-GM1的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)鑒定方案4.1.引物開發(fā)識(shí)別原種事件內(nèi)的序列的特異性引物。更具體地，開發(fā)識(shí)別EE-GM1的5'側(cè)翼區(qū)域內(nèi)的序列的引物。隨后在外源DNA的序列內(nèi)選擇第二引物以便引物橫跨約183個(gè)核苷酸的序列。發(fā)現(xiàn)下列引物在對(duì)EE-GM1DNA的PCR反應(yīng)中產(chǎn)生特別清晰和可重現(xiàn)的結(jié)果：SOY06：5'-ggC.gTT.CgT.AgT.gAC.TgA.gg-3'(SEQIDNo.：16)(靶：植物DNA)SOY07：5'-gTT.TTA.CAA.CgT.CgT.gAC.Tgg-3'(SEQIDNo.：17)(靶：植物DNA)優(yōu)選地將靶向內(nèi)源序列的引物包含在PCR混合物中。這些引物用作未知樣品和DNA陽性對(duì)照的內(nèi)部對(duì)照。利用內(nèi)源引物對(duì)的陽性結(jié)果表明在基因組DNA制劑中存在豐富的優(yōu)質(zhì)DNA可用于產(chǎn)生PCR產(chǎn)物。選擇內(nèi)源引物以識(shí)別大豆中的管家基因：SOY01：5'-gTC.AgC.CAC.ACA.gTg.CCT.AT-3'(SEQIDNo.：9)(位于大豆肌動(dòng)蛋白1基因(登錄號(hào)J01298)中)SOY02：5'-gTT.ACC.gTA.CAg.gTC.TTT.CC-3'(SEQIDNo.：10)(位于大豆肌動(dòng)蛋白1基因(登錄號(hào)J01298)中)4.2.擴(kuò)增片段PCR反應(yīng)中的預(yù)期擴(kuò)增片段為：對(duì)于引物對(duì)SOY01-SOY02：413bp(內(nèi)源對(duì)照)對(duì)于引物對(duì)SOY06-SOY07：183bp(EE-GM1原種事件)4.3.模板DNA按照Edwards等(NucleicAcidResearch,19,p1349,1991)從葉沖孔制備模板DNA。當(dāng)使用利用其它方法制備的DNA時(shí)，應(yīng)當(dāng)利用不同量的模板進(jìn)行測(cè)試運(yùn)行。通常50ng的基因組模板DNA產(chǎn)生最佳結(jié)果。4.4.指定的陽性和陰性對(duì)照為了避免假陽性或陰性，決定應(yīng)當(dāng)將下列陽性和陰性對(duì)照包括在PCR運(yùn)行中：-MasterMix對(duì)照(DNA陰性對(duì)照)。這是其中未向反應(yīng)物中添加DNA的PCR。當(dāng)觀察到預(yù)期的結(jié)果(無PCR產(chǎn)物)時(shí)，這表明PCR混合物未被靶DNA污染。-DNA陽性對(duì)照(已知包含轉(zhuǎn)基因序列的基因組DNA樣品)。該陽性對(duì)照的成功擴(kuò)增表明PCR在允許靶序列擴(kuò)增的條件下運(yùn)行。-野生型DNA對(duì)照。這是其中提供的模板DNA是從非轉(zhuǎn)基因植物制備的基因組DNA。當(dāng)觀察到預(yù)期的結(jié)果：無轉(zhuǎn)基因PCR產(chǎn)物擴(kuò)增但內(nèi)源PCR產(chǎn)物擴(kuò)增時(shí)，這表明在基因組DNA樣品中不存在可檢測(cè)的轉(zhuǎn)基因背景擴(kuò)增。4.5.PCR條件在下列條件下獲得最佳結(jié)果：-用于25μl反應(yīng)的PCR混合物包含：2.5μl模板DNA2.5μl10x擴(kuò)增緩沖液(與Taq聚合酶一起提供的)0.5μl10mMdNTP's0.5μlSOY06(10皮摩爾/μl)0.7μlSOY07(10皮摩爾/μl)0.25μlSOY01(10皮摩爾/μl)0.25μlSOY02(10皮摩爾/μl)0.1μlTaqDNA聚合酶(5個(gè)單位/μl)加水至25μl-遵照以獲取最佳結(jié)果的熱循環(huán)設(shè)置如下：在95℃下進(jìn)行4分鐘隨后：在95℃下進(jìn)行1分鐘在57℃下進(jìn)行1分鐘在72℃下進(jìn)行2分鐘進(jìn)行5個(gè)循環(huán)隨后：在92℃下進(jìn)行30秒在57℃下進(jìn)行30秒在72℃下進(jìn)行1分鐘進(jìn)行25個(gè)循環(huán)隨后：在72℃下進(jìn)行5分鐘4.6.瓊脂糖凝膠分析為了最佳地顯現(xiàn)PCR的結(jié)果，已確定應(yīng)當(dāng)將10至20μl的PCR樣品施加在1.5％的瓊脂糖凝膠(Tris-硼酸鹽緩沖液)上，使用適當(dāng)?shù)姆肿恿繕?biāo)準(zhǔn)(例如100bp梯帶Pharmacia)。4.7.結(jié)果的驗(yàn)證已確定，除非1)DNA陽性對(duì)照顯示預(yù)期的PCR產(chǎn)物(轉(zhuǎn)基因和內(nèi)源片段)，2)DNA陰性對(duì)照對(duì)于PCR擴(kuò)增呈陰性(無片段)和3)野生型DNA對(duì)照顯示預(yù)期的結(jié)果(內(nèi)源片段擴(kuò)增)，否則來自單個(gè)PCR運(yùn)行和單個(gè)PCR混合物內(nèi)的轉(zhuǎn)基因植物DNA樣品的數(shù)據(jù)應(yīng)當(dāng)是不可接受的。當(dāng)按照上述針對(duì)EE-GM1的PCR鑒定方案進(jìn)行時(shí)，顯示可見量的具有期望大小的轉(zhuǎn)基因和內(nèi)源PCR產(chǎn)物的泳道表明，基因組模板DNA從其制備的相應(yīng)植物遺傳了EE-GM1原種事件。未顯示可見量的任一轉(zhuǎn)基因PCR產(chǎn)物但顯示可見量的內(nèi)源PCR產(chǎn)物的泳道表明基因組模板DNA從其制備的相應(yīng)植物不包含原種事件。未顯示可見量的內(nèi)源PCR產(chǎn)物和轉(zhuǎn)基因PCR產(chǎn)物的泳道表明基因組DNA的質(zhì)量和/或量不允許PCR產(chǎn)物產(chǎn)生。不能給這些植物評(píng)分。應(yīng)當(dāng)重復(fù)基因組DNA制備，并且必須利用適當(dāng)?shù)膶?duì)照進(jìn)行新的PCR運(yùn)行。4.8.使用鑒別PCR方案鑒定EE-GM1在嘗試篩選未知之前，必須利用適當(dāng)?shù)膶?duì)照進(jìn)行測(cè)試運(yùn)行。開發(fā)的方案可能需要針對(duì)在實(shí)驗(yàn)室之間可能不同的組分(模板DNA制劑、TaqDNA聚合酶、引物的質(zhì)量、dNTP、熱循環(huán)儀等)進(jìn)行最優(yōu)化。內(nèi)源序列的擴(kuò)增在所述方案中起著關(guān)鍵作用。必須獲得擴(kuò)增出等摩爾量的已知轉(zhuǎn)基因基因組DNA模板中的內(nèi)源序列和轉(zhuǎn)基因序列的PCR和熱循環(huán)條件。每當(dāng)靶向內(nèi)源片段不被擴(kuò)增時(shí)，或每當(dāng)靶向序列在相同溴化乙錠染色強(qiáng)度下不被擴(kuò)增時(shí)，如通過瓊脂糖凝膠電泳判斷的，則可能需要PCR條件的最優(yōu)化。按照上述方案測(cè)試來自許多植物的大豆葉材料，其中一些包含EE-GM1。來自原種事件EE-GM1和來自大豆野生型的樣品分別被用作陽性和陰性對(duì)照。圖5舉例說明利用針對(duì)EE-GM1的原種事件PCR鑒定方案對(duì)許多大豆植物樣品獲得的結(jié)果(泳道1至14)。發(fā)現(xiàn)泳道1中的樣品包含原種事件EE-GM1，因?yàn)闄z測(cè)到185bp的條帶，然而泳道2、3和4的樣品不包含EE-GM1。泳道2包含另一個(gè)大豆原種事件，泳道3代表非轉(zhuǎn)基因大豆對(duì)照；泳道4代表陰性對(duì)照(水)樣品，泳道5代表分子量標(biāo)準(zhǔn)(100bp梯帶)。5.特定整合片段作為用于檢測(cè)包含EE-GM1的材料的探針的用途使用特異性引物SOY06(SEQIDNo.16)和SOY07(SEQIDNo.17)通過PCR，或通過化學(xué)合成獲得EE-GM1的特定整合片段，并且標(biāo)記所述整合片段。將該整合片段用作用于檢測(cè)生物樣品中的EE-GM1的特異性探針。按照標(biāo)準(zhǔn)方法從樣品提取核酸。隨后將該核酸在經(jīng)最優(yōu)化以允許雜交體形成的雜交條件下與特異性探針接觸。隨后檢測(cè)雜交體的形成以表明EE-GM1核酸存在于樣品中。任選地，使用特異性引物擴(kuò)增樣品的核酸，然后將所述核酸與特異性探針接觸。或者，標(biāo)記所述核酸，然后將其與特異性探針而非整合片段接觸。任選地，將特異性探針連接至固體載體(例如，但不限于濾膜、條帶或珠粒)，隨后將其與樣品接觸。6.針對(duì)EE-GM2的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)鑒定方案.6.1.引物開發(fā)識(shí)別原種事件內(nèi)的序列的特異性引物。更具體地，開發(fā)識(shí)別EE-GM2的3'側(cè)翼區(qū)域內(nèi)的序列的引物。隨后在外源DNA的序列內(nèi)選擇第二引物以便引物橫跨約150個(gè)核苷酸的序列。發(fā)現(xiàn)下列引物在對(duì)EE-GM2DNA的PCR反應(yīng)中產(chǎn)生特別清晰和可重現(xiàn)的結(jié)果：SOY09：5'-TgT.ggT.TAT.ggC.ggT.gCC.ATC-3'(SEQIDNo.：18)(靶：植物DNA)SOY010：5'-TgC.TAC.Agg.CAT.CgT.ggT.gTC-3'(SEQIDNo.：19)(靶：插入物DNA)優(yōu)選地將靶向內(nèi)源序列的引物包含在PCR混合物中。這些引物用作未知樣品和DNA陽性對(duì)照的內(nèi)部對(duì)照。利用內(nèi)源引物對(duì)的陽性結(jié)果表明在基因組DNA制劑中存在豐富的優(yōu)質(zhì)DNA可用于產(chǎn)生PCR產(chǎn)物。選擇內(nèi)源引物以識(shí)別大豆中的管家基因：SOY01：5'-gTC.AgC.CAC.ACA.gTg.CCT.AT-3'(SEQIDNo.：9)(位于大豆肌動(dòng)蛋白1基因(登錄號(hào)J01298)中)SOY02：5'-gTT.ACC.gTA.CAg.gTC.TTT.CC-3'(SEQIDNo.：10)(位于大豆肌動(dòng)蛋白1基因(登錄號(hào)J01298)中)6.2.擴(kuò)增片段PCR反應(yīng)中的預(yù)期擴(kuò)增片段為：對(duì)于引物對(duì)SOY01-SOY02：413bp(內(nèi)源對(duì)照)對(duì)于引物對(duì)SOY09-SOY010：151bp(EE-GM2原種事件)6.3.模板DNA按照Edwards等(NucleicAcidResearch,19,p1349,1991)從葉沖孔制備模板DNA。當(dāng)使用利用其它方法制備的DNA時(shí)，應(yīng)當(dāng)利用不同量的模板進(jìn)行測(cè)試運(yùn)行。通常50ng的基因組模板DNA產(chǎn)生最佳結(jié)果。6.4.指定的陽性和陰性對(duì)照為了避免假陽性或陰性，決定應(yīng)當(dāng)將下列陽性和陰性對(duì)照包括在PCR運(yùn)行中：-MasterMix對(duì)照(DNA陰性對(duì)照)。這是其中未向反應(yīng)物中添加DNA的PCR。當(dāng)觀察到預(yù)期的結(jié)果(無PCR產(chǎn)物)時(shí)，這表明PCR混合物未被靶DNA污染。-DNA陽性對(duì)照(已知包含轉(zhuǎn)基因序列的基因組DNA樣品)。該陽性對(duì)照的成功擴(kuò)增表明PCR在允許靶序列擴(kuò)增的條件下運(yùn)行。-野生型DNA對(duì)照。這是其中提供的模板DNA是從非轉(zhuǎn)基因植物制備的基因組DNA。當(dāng)觀察到預(yù)期的結(jié)果：無轉(zhuǎn)基因PCR產(chǎn)物擴(kuò)增但內(nèi)源PCR產(chǎn)物擴(kuò)增時(shí)，這表明在基因組DNA樣品中不存在可檢測(cè)的轉(zhuǎn)基因背景擴(kuò)增。6.5.PCR條件在下列條件下獲得最佳結(jié)果：-用于25μl反應(yīng)的PCR混合物包含：2.5μl模板DNA2.5μl10x擴(kuò)增緩沖液(與Taq聚合酶一起提供的)0.5μl10mMdNTP's0.5μlSOY09(10皮摩爾/μl)0.5μlSOY010(10皮摩爾/μl)0.25μlSOY01(10皮摩爾/μl)0.25μlSOY02(10皮摩爾/μl)0.1μlTaqDNA聚合酶(5units/μl)加水至25μl-遵照以獲取最佳結(jié)果的熱循環(huán)設(shè)置如下：在95℃下進(jìn)行4分鐘隨后：在95℃下進(jìn)行1分鐘在57℃下進(jìn)行1分鐘在72℃下進(jìn)行2分鐘進(jìn)行5個(gè)循環(huán)隨后：在92℃下進(jìn)行30秒在57℃下進(jìn)行30秒在72℃下進(jìn)行1分鐘進(jìn)行25個(gè)循環(huán)隨后：在72℃下進(jìn)行5分鐘6.6.瓊脂糖凝膠分析為了最佳地顯現(xiàn)PCR的結(jié)果，已確定應(yīng)當(dāng)將10至20μl的PCR樣品施加在1.5％的瓊脂糖凝膠(Tris-硼酸鹽緩沖液)上，使用適當(dāng)?shù)姆肿恿繕?biāo)準(zhǔn)(例如100bp梯帶Pharmacia)。6.7.結(jié)果的驗(yàn)證已確定，除非1)DNA陽性對(duì)照顯示預(yù)期的PCR產(chǎn)物(轉(zhuǎn)基因和內(nèi)源片段)，2)DNA陰性對(duì)照對(duì)于PCR擴(kuò)增呈陰性(無片段)和3)野生型DNA對(duì)照顯示預(yù)期的結(jié)果(內(nèi)源片段擴(kuò)增)，否則來自單個(gè)PCR運(yùn)行和單個(gè)PCR混合物內(nèi)的轉(zhuǎn)基因植物DNA樣品的數(shù)據(jù)應(yīng)當(dāng)是不可接受的。當(dāng)按照上述針對(duì)EE-GM2的PCR鑒定方案進(jìn)行時(shí)，顯示可見量的具有期望大小的轉(zhuǎn)基因和內(nèi)源PCR產(chǎn)物的泳道表明，基因組模板DNA從其制備的相應(yīng)植物遺傳了EE-GM2原種事件。未顯示可見量的任一轉(zhuǎn)基因PCR產(chǎn)物但顯示可見量的內(nèi)源PCR產(chǎn)物的泳道表明基因組模板DNA從其制備的相應(yīng)植物不包含原種事件。未顯示可見量的內(nèi)源PCR產(chǎn)物和轉(zhuǎn)基因PCR產(chǎn)物的泳道表明基因組DNA的質(zhì)量和/或量不允許PCR產(chǎn)物產(chǎn)生。不能給這些植物評(píng)分。應(yīng)當(dāng)重復(fù)基因組DNA制備，并且必須利用適當(dāng)?shù)膶?duì)照進(jìn)行新的PCR運(yùn)行。6.8.使用鑒別PCR方案鑒定EE-GM2在嘗試篩選未知之前，必須利用適當(dāng)?shù)膶?duì)照進(jìn)行測(cè)試運(yùn)行。開發(fā)的方案可能需要針對(duì)在實(shí)驗(yàn)室之間可能不同的組分(模板DNA制劑、TaqDNA聚合酶、引物的質(zhì)量、dNTP、熱循環(huán)儀等)進(jìn)行最優(yōu)化。內(nèi)源序列的擴(kuò)增在所述方案中起著關(guān)鍵作用。必須獲得擴(kuò)增出等摩爾量的已知轉(zhuǎn)基因基因組DNA模板中的內(nèi)源序列和轉(zhuǎn)基因序列的PCR和熱循環(huán)條件。每當(dāng)靶向內(nèi)源片段不被擴(kuò)增時(shí)，或每當(dāng)靶向序列在相同溴化乙錠染色強(qiáng)度下不被擴(kuò)增時(shí)，如通過瓊脂糖凝膠電泳判斷的，則可能需要PCR條件的最優(yōu)化。按照上述方案測(cè)試來自許多植物的大豆葉材料，其中一些包含EE-GM2。來自原種事件EE-GM2和來自大豆野生型的樣品分別被用作陽性對(duì)照和陰性對(duì)照。圖6舉例說明利用針對(duì)EE-GM2的原種事件PCR鑒定方案對(duì)許多大豆植物樣品獲得的結(jié)果(泳道1至14)。發(fā)現(xiàn)泳道1中的樣品包含原種事件，因?yàn)闄z測(cè)到185bp的條帶，然而泳道2、3和4的樣品不包含EE-GM2。泳道2包含另一個(gè)大豆原種事件，泳道3代表非轉(zhuǎn)基因大豆對(duì)照；泳道4代表陰性對(duì)照(水)樣品，泳道5代表分子量標(biāo)準(zhǔn)(100bp梯帶)。7.特定整合片段作為用于檢測(cè)包含EE-GM2的材料的探針的用途使用特異性引物SOY09(SEQIDNo.18)和SOY010(SEQIDNo.19)通過PCR，或通過化學(xué)合成獲得EE-GM2的特定整合片段，并且標(biāo)記所述整合片段。將該整合片段用作用于檢測(cè)生物樣品中的EE-GM2的特異性探針。按照標(biāo)準(zhǔn)方法從樣品提取核酸。隨后將該核酸在經(jīng)最優(yōu)化以允許雜交體形成的雜交條件下與特異性探針接觸。隨后檢測(cè)雜交體的形成以表明EE-GM2核酸存在于樣品中。任選地，使用特異性引物擴(kuò)增樣品的核酸，然后將所述核酸與特異性探針接觸?；蛘撸瑯?biāo)記所述核酸，然后將其與特異性探針而非整合片段接觸。任選地，將特異性探針連接至固體載體(例如，但不限于濾膜、條帶或珠粒)，隨后將其與樣品接觸。8.包含EE-GM3和EE-GM1或EE-GM3和EE-GM2的大豆植物的產(chǎn)生以及此類植物的農(nóng)藝性狀的評(píng)估通過包含EE-GM3的親本大豆植物與包含EE-GM1的親本大豆植物之間的常規(guī)雜交已獲得包含原種事件EE-GM3和EE-GM1的組合的大豆植物。使用本文中描述的針對(duì)EE-GM1和EE-GM3的PCR鑒定方案鑒定包含兩個(gè)事件的后代植物。具體地，將包含EE-GM3的植物和幾個(gè)EE-GM1品系進(jìn)行雜交。生長所得的F1代，并且噴施草甘膦和草銨膦。從F1植物收獲F2種子，并且進(jìn)行種植(不對(duì)F2植物進(jìn)行噴施)。拔取F2單株植物。種植F2:F3植物行，用草甘膦和草銨膦進(jìn)行噴施。鑒定對(duì)于EE-GM3和EE-GM1都是純合的行，隨后進(jìn)行收獲。來自該試驗(yàn)的分離數(shù)據(jù)顯示所述事件的預(yù)期的孟德爾分離。已通過包含EE-GM3的親本大豆植物與包含EE-GM2的親本大豆植物之間的常規(guī)雜交獲得包含原種事件EE-GM3和EE-GM2的組合的大豆植物。使用本文中描述的針對(duì)EE-GM2和EE-GM3的PCR鑒定方案鑒定包含兩個(gè)事件的后代植物。具體地，將包含EE-GM3的植物與包含EE-GM2的植物進(jìn)行雜交。將所得的F1植物與4個(gè)常規(guī)品系雜交。將來自這些雜交的F1生長在田間，用草甘膦和草銨膦進(jìn)行噴施。隨后種植從耐兩種除草劑的F1植物收獲的F2種子。用草甘膦和草銨膦對(duì)F2植物進(jìn)行噴施。收獲900株耐兩種除草劑的植物，在田間試驗(yàn)中種植所述植物。在該試驗(yàn)中獲得所述事件的預(yù)期孟德爾分離數(shù)據(jù)。對(duì)約40個(gè)對(duì)于對(duì)兩種除草劑的抗性是純合的品系篩選農(nóng)藝一致性以進(jìn)行進(jìn)一步研究。這些品系具有良好的耐兩種除草劑的抗性和良好的農(nóng)藝學(xué)特征。利用在不同類型的商業(yè)種質(zhì)中包含組合事件的此類大豆植物的田間試驗(yàn)正在多個(gè)區(qū)位進(jìn)行，并且對(duì)植物的多個(gè)農(nóng)藝學(xué)參數(shù)進(jìn)行評(píng)估，包括株高、節(jié)距、直立、活力、種子產(chǎn)量以及草甘膦、異噁唑草酮和草胺膦抗性水平。9.EE-GM3和EE-GM1或EE-GM2至優(yōu)選品種的基因滲入通過重復(fù)回交至商業(yè)大豆品種來引入原種事件EE-GM3和原種事件EE-GM1或EE-GM2，所述商業(yè)大豆品種是例如但不限于大豆品種7631014(US2009252860)；大豆品種7431014(US2009252859)；大豆品種7925084(US2009252858)；大豆品種7311153(US2009252857)；大豆品種S070159(US2009252856)；大豆品種7535357(US2009246353)；大豆品種S070160(US2009246352)；大豆品種26074414(US2009249508)；大豆品種7509171(US2009249507)；大豆品種S070158(US2009246351)；大豆品種7511119(US2009249506)；大豆品種7113111(US2009238945)；大豆品種S06-02RM018047(US7592518)；大豆品種7013345(US2009232957)；大豆品種7041461(US2009235376)；大豆品種7549450(US2009232956)；大豆品種7317090(US2009232955)；大豆品種2N2V58015(US2009226597)；大豆品種7243182(US2009226596)；大豆品種7143182(US2009226595)；大豆品種7043182(US2009220673)；大豆品種S070157(US2009222950)；大豆品種306924721(US2009220672)；大豆品種7614385(US2009220671)；大豆品種7925118(US2009214750)；大豆品種7821295(US2009214749)；大豆品種7811336(US2009214748)；大豆品種S070150(US2009214747)；大豆品種6214260(US2009214746)；大豆品種S070152(US2009214745)；大豆品種7429331(US2009214751)；大豆品種26034631(US2009208634)；大豆品種S07-03JR108674(US7560621)；大豆品種S07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008/054747中描述的事件DP-305423-1(高油酸/ALS抑制劑抗性)、US2009130071中描述的MON87701、US2009036308中描述的事件3560.4.3.5或US2008312082中描述的事件DP-305423-1或WO2010/080829中描述的事件BPS-CV127-9(事件127)。如下文權(quán)利要求中所用，除非另外明確地指出，否則術(shù)語“植物”意欲包括任何成熟階段的植物組織以及采自或來源于任何此類植物的細(xì)胞、組織或器官，包括但不限于任何種子、葉、莖、花、根、單細(xì)胞、配子、細(xì)胞培養(yǎng)物、組織培養(yǎng)物或原生質(zhì)體。將包含原種事件EE-GM3的參照種子于2009年10月12日在NCIMB登錄號(hào)NCIMB41659下作為32-RRMM-0531保藏在NCIMB(FergusonBuilding,CraibstoneEstate,Bucksburn,AberdeenAB9YA,Scotland)，驗(yàn)證其成活力。EE-GM3的別名為事件FG-072或?qū)N事件EE-GM1的參照種子于2009年10月12日在NCIMB登錄號(hào)NCIMB41658下作為32RRMM0368保藏在NCIMB(FergusonBuilding.CraibstoneEstate,Bucksburn,AberdeenAB9YA.Scotland)。EE-GM1的別名為事件LL27、A2704-12或?qū)N事件EE-GM2的參照種子于2009年10月12日在NCIMB登錄號(hào)NCIMB41660下作為32CON0688保藏在NCIMB(FergusonBuilding,CraibstoneEstate,Bucksburn,AberdeenAB9YA,Scotland)。EE-GM2的別名為事件LL55、A5547-127或?qū)N事件EE-GM3和EE-GM1的參照種子于2010年6月11日在ATCC登錄號(hào)PTA-11041下作為111606大豆保藏在ATCC(美國典型培養(yǎng)物保藏中心,10801UniversityBlvd.,Manassas,Va.20110-2209,USA)。將包含原種事件EE-GM3和EE-GM2的參照種子于2010年6月11日在ATCC登錄號(hào)PTA-11042下作為05SHX2XEB大豆保藏在ATCC(美國典型培養(yǎng)物保藏中心,10801UniversityBlvd.,Manassas,Va.20110-2209,USA)。本發(fā)明的上述說明旨在舉例說明而不非限定。所述實(shí)施方案的各種改變或變更對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是可想到的。在不背離本發(fā)明的精神或范圍的情況下進(jìn)行此類改變和變更。本發(fā)明的一些實(shí)施方案如下：1.一種用于鑒定原種事件EE-GM3和EE-GM1在生物樣品中的同時(shí)存在的方法，所述方法包括利用特異性識(shí)別EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA的5’或3’側(cè)翼區(qū)域的特異性引物或探針檢測(cè)EE-GM3特異性區(qū)域，和利用特異性識(shí)別EE-GM1的包含耐除草劑基因的外源DNA的5’或3’側(cè)翼區(qū)域的特異性引物或探針檢測(cè)EE-GM1特異性區(qū)域。2.實(shí)施方案1所述的方法，所述方法包括使用利用至少兩個(gè)引物的第一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，和使用利用至少兩個(gè)引物的第二聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，從存在于所述生物樣品中的核酸擴(kuò)增兩個(gè)50至1000bp的DNA片段，在所述第一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)中，所述引物之一識(shí)別EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA的5'側(cè)翼區(qū)域或EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA的3'側(cè)翼區(qū)域，所述5'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo2的核苷酸1至核苷酸1451的核苷酸序列，所述3'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸1408的互補(bǔ)序列的核苷酸序列，所述引物的另一個(gè)引物識(shí)別EE-GM3的外源DNA內(nèi)的序列，所述外源DNA包含SEQIDNo.2的核苷酸1452至核苷酸1843的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo3的核苷酸1至核苷酸240的核苷酸序列，或所述引物的另一個(gè)引物識(shí)別EE-GM3的外源DNA內(nèi)的序列，所述外源DNA包含SEQIDNo.1的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列，或包含SEQIDNo.20的核苷酸位置1452至核苷酸位置16638的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列，并且在所述第二聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)中，所述引物之一識(shí)別EE-GM1的包含耐除草劑基因的外源DNA的5'側(cè)翼區(qū)域或EE-GM1的包含耐除草劑基因的外源DNA的3'側(cè)翼區(qū)域，所述5'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo12的核苷酸1至核苷酸209的核苷酸序列，所述3'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo13的核苷酸569至核苷酸1000的互補(bǔ)序列的核苷酸序列，所述引物的另一個(gè)引物識(shí)別EE-GM1的外源DNA內(nèi)的序列，所述外源DNA包含SEQIDNo.12的核苷酸210至核苷酸720的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo13的核苷酸1至核苷酸568的核苷酸序列，或所述引物的另一個(gè)引物識(shí)別EE-GM1的外源DNA內(nèi)的序列，所述外源DNA包含SEQIDNo.11的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列，其中所述第一聚合酶和第二聚合酶反應(yīng)可以是相繼的或同時(shí)的。3.實(shí)施方案2所述的方法，其中識(shí)別EE-GM3的5'側(cè)翼區(qū)域的所述引物包含選自SEQIDNo2的核苷酸1至核苷酸1451的核苷酸序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列或識(shí)別EE-GM3的3'側(cè)翼區(qū)域的所述引物包含選自SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸1408的互補(bǔ)序列的核苷酸序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，并且識(shí)別EE-GM3的外源DNA內(nèi)的序列的所述引物包含選自SEQIDNo.2的核苷酸1452至核苷酸1843的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo3的核苷酸1至核苷酸240的核苷酸序列或SEQIDNo.1的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列、或SEQIDNo.20的核苷酸位置1452至核苷酸位置16638的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸，并且其中識(shí)別EE-GM1的5'側(cè)翼區(qū)域的所述引物包含選自SEQIDNo12的核苷酸1至核苷酸209的核苷酸序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，或識(shí)別EE-GM3的3'側(cè)翼區(qū)域的所述引物包含選自SEQIDNo13的核苷酸569至核苷酸1000的互補(bǔ)序列的核苷酸序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，并且識(shí)別EE-GM1的外源DNA內(nèi)的序列的所述引物包含選自SEQIDNo.12的核苷酸210至核苷酸720的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo13的核苷酸1至核苷酸568的核苷酸序列或SEQIDNo.11的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸。4.實(shí)施方案2所述的方法，其中識(shí)別EE-GM3的5'側(cè)翼區(qū)域的所述引物在其最3'末端包含選自SEQIDNo2的核苷酸1至核苷酸1451的核苷酸序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列或識(shí)別EE-GM3的3'側(cè)翼區(qū)域的所述引物在其最3'末端包含選自SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸1408的互補(bǔ)序列的核苷酸序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，并且識(shí)別EE-GM3的外源DNA內(nèi)的序列的所述引物在其3'末端包含選自SEQIDNo.2的核苷酸1452至核苷酸1843的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo3的核苷酸1至核苷酸240的核苷酸序列或SEQIDNo1的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列、或SEQIDNo.20的核苷酸位置1452至核苷酸位置16638的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸，并且其中識(shí)別EE-GM1的5'側(cè)翼區(qū)域的所述引物在其最3'末端包含選自SEQIDNo12的核苷酸1至核苷酸209的核苷酸序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列或識(shí)別EE-GM1的3'側(cè)翼區(qū)域的所述引物在其最3'末端包含選自SEQIDNo13的核苷酸569至核苷酸1000的互補(bǔ)序列的核苷酸序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，并且識(shí)別EE-GM1的外源DNA內(nèi)的序列的所述引物在其3'末端包含選自SEQIDNo.12的核苷酸210至核苷酸720的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo13的核苷酸1至核苷酸568的核苷酸序列或SEQIDNo11的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸。5.實(shí)施方案4所述的方法，其中所述EE-GM3特異性引物分別包含SEQIDNo.5和SEQIDNo.4的序列，或分別包含SEQIDNo5和SEQIDNo.7的序列，以及所述EE-GM1特異性引物分別包含SEQIDNo.16和SEQIDNo.17的序列。6.實(shí)施方案5所述的方法，所述方法包括使用EE-GM3PCR鑒定方案擴(kuò)增約263或約706bp的EE-GM3特異性片段和擴(kuò)增約183bp的EE-GM1特異性片段。7.一種用于鑒定原種事件EE-GM3和原種事件EE-GM1在生物樣品中的同時(shí)存在的試劑盒，所述試劑盒包括一種識(shí)別EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA的5'側(cè)翼區(qū)域的引物，所述5'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo2的核苷酸1至核苷酸1451的核苷酸序列，或一種識(shí)別EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA的3’側(cè)翼區(qū)域的引物，所述3’側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸1408的互補(bǔ)序列的核苷酸序列，和一種識(shí)別EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA內(nèi)的序列的引物，所述外源DNA包含SEQIDNo.2的核苷酸1452至核苷酸1843的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo3的核苷酸1至核苷酸240的核苷酸序列或SEQIDNo1的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列、或SEQIDNo.20的核苷酸位置1452至核苷酸位置16638的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列，并且其中所述試劑盒還包括一種識(shí)別EE-GM1的包含耐除草劑基因的外源DNA的5'側(cè)翼區(qū)域的引物，所述5'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo12的核苷酸1至核苷酸209的核苷酸序列，或一種識(shí)別EE-GM1的包含耐除草劑基因的外源DNA的3'側(cè)翼區(qū)域的引物，所述3'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo13的核苷酸569至核苷酸1000的互補(bǔ)序列的核苷酸序列，和一種識(shí)別EE-GM1的包含耐除草劑基因的外源DNA內(nèi)的序列的引物，所述外源DNA包含SEQIDNo.12的核苷酸210至核苷酸720的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo13的核苷酸1至核苷酸568的核苷酸序列或SEQIDNo11的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列。8.實(shí)施方案7所述的試劑盒，其中識(shí)別EE-GM3的所述5'側(cè)翼區(qū)域的所述引物包含選自SEQIDNo2的核苷酸1至核苷酸1451的核苷酸序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，或識(shí)別EE-GM3的3'側(cè)翼區(qū)域的所述引物包含選自SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸1408的互補(bǔ)序列的核苷酸序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，并且識(shí)別EE-GM3的外源DNA內(nèi)的序列的所述引物包含選自SEQIDNo.2的核苷酸1452至核苷酸1843的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo3的核苷酸1至核苷酸240的核苷酸序列或SEQIDNo1的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列或SEQIDNo.20的核苷酸位置1452至核苷酸位置16638的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸，并且其中識(shí)別EE-GM1的所述5'側(cè)翼區(qū)域的所述引物包含選自SEQIDNo12的核苷酸1至核苷酸209的核苷酸序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，或識(shí)別EE-GM1的3'側(cè)翼區(qū)域的所述引物包含選自SEQIDNo13的核苷酸569至核苷酸1000的互補(bǔ)序列的核苷酸序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，并且識(shí)別EE-GM1的外源DNA內(nèi)的序列的所述引物包含選自SEQIDNo.12的核苷酸210至核苷酸720的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo13的核苷酸1至核苷酸568的核苷酸序列或SEQIDNo11的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸。9.實(shí)施方案7所述的試劑盒，其中識(shí)別EE-GM3的所述5'側(cè)翼區(qū)域的所述引物在其最3'末端包含選自SEQIDNo2的核苷酸1至核苷酸1451的核苷酸序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列或識(shí)別EE-GM3的所述3'側(cè)翼區(qū)域的所述引物在其最3'末端包含選自SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸1408的互補(bǔ)序列的核苷酸序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，并且識(shí)別EE-GM3的所述外源DNA內(nèi)的序列的所述引物在其3'末端包含選自SEQIDNo.2的核苷酸1452至核苷酸1843的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo3的核苷酸1至核苷酸240的核苷酸序列或SEQIDNo1的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列、或SEQIDNo.20的核苷酸位置1452至核苷酸位置16638的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸，并且其中，識(shí)別EE-GM1的所述5'側(cè)翼區(qū)域的所述引物在其最3'末端包含選自SEQIDNo12的核苷酸1至核苷酸209的核苷酸序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，或識(shí)別EE-GM1的所述3'側(cè)翼區(qū)域的所述引物在其最3'末端包含選自SEQIDNo13的核苷酸569至核苷酸1000的互補(bǔ)序列的核苷酸序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，并且識(shí)別EE-GM1的所述外源DNA內(nèi)的序列的所述引物在其3'末端包含選自SEQIDNo.12的核苷酸210至核苷酸720的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo13的核苷酸1至核苷酸568的核苷酸序列或SEQIDNo11的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸。10.實(shí)施方案7所述的試劑盒，其包括包含SEQIDNo.4的序列的引物和包含SEQIDNo.5的序列的引物或包括包含SEQIDNo.5的序列的引物和包含SEQIDNo.7的序列的引物以及還包括包含SEQIDNo.16的序列的引物和包含SEQIDNo.17的序列的引物。11.一對(duì)引物，所述第一引物包含在最優(yōu)化的檢測(cè)條件下特異性識(shí)別EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA的5’或3’側(cè)翼區(qū)域內(nèi)的序列的序列，所述5'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo2的核苷酸1至核苷酸1451的核苷酸序列，并且所述3'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸的1408的互補(bǔ)序列的核苷酸序列，并且所述第二引物包含在最優(yōu)化的檢測(cè)條件下特異性識(shí)別EE-GM1的包含耐除草劑基因的外源DNA的5’或3’側(cè)翼區(qū)域內(nèi)的序列的序列，所述5'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo12的核苷酸1至核苷酸209的核苷酸序列，并且所述3'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo13的核苷酸569至核苷酸1000的互補(bǔ)序列的核苷酸序列。12.實(shí)施方案11所述的引物對(duì)，其中所述第一引物包含選自SEQIDNo2的核苷酸1至核苷酸1451的核苷酸序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列或選自SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸1408的互補(bǔ)序列的核苷酸序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，并且其中所述第二引物包含選自SEQIDNo12的核苷酸1至核苷酸209的核苷酸序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列或選自SEQIDNo13的核苷酸569至核苷酸1000的互補(bǔ)序列的核苷酸序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列。13.實(shí)施方案11所述的引物對(duì)，其中所述第一引物在其最3'末端包含選自SEQIDNo2的核苷酸1至核苷酸1451的核苷酸序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列或選自SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸1408的互補(bǔ)序列的核苷酸序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，并且其中所述第二引物在其最3'末端包含選自SEQIDNo12的核苷酸1至核苷酸209的核苷酸序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列或選自SEQIDNo13的核苷酸569至核苷酸1000的互補(bǔ)序列的核苷酸序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列。14.一對(duì)引物，其中所述第一引物在其最3'末端包含SEQIDNo.5的序列并且其中所述第二引物在其最3'末端包含SEQIDNo.16的序列。15.一種包含4種引物的裝置，第一引物在其最3'末端包含SEQIDNo.5的序列；第二引物在其最3'末端包含SEQIDNo.4的序列；第三引物在其最3'末端包含SEQIDNo.16的序列；和第四引物在其最3'末端包含SEQIDNo.17的序列。16.實(shí)施方案1所述的方法，所述方法包括將生物樣品的核酸與針對(duì)EE-GM3的第一特異性探針和與針對(duì)EE-GM1的第二特異性探針雜交。17.實(shí)施方案16所述的方法，其中所述第一特異性探針的序列與包含EE-GM3的5'側(cè)翼序列或3'側(cè)翼序列的部分和與其鄰接的外源DNA的序列的序列具有至少80％的序列同一性，并且其中所述第二特異性探針的序列與包含EE-GM1的5'側(cè)翼序列或3'側(cè)翼序列的部分和與其鄰接的外源DNA的序列的序列具有至少80％的序列同一性。18.實(shí)施方案17所述的方法，其中所述第一特異性探針的序列與SEQIDNo.2的核苷酸1431至1472或SEQIDNo.3的核苷酸220至261或所述序列的互補(bǔ)序列具有至少80％的序列同一性，并且其中所述第二特異性探針的序列與SEQIDNo.12的核苷酸199至220或SEQIDNo.13的核苷酸558至579或所述序列的互補(bǔ)序列具有至少80％的序列同一性。19.一種用于鑒定原種事件EE-GM3和原種事件EE-GM1在生物樣品中的同時(shí)存在的試劑盒，所述試劑盒包括能夠與EE-GM3的特異性區(qū)域特異性雜交的第一特異性探針和能夠與EE-GM1的特異性區(qū)域特異性雜交的第二特異性探針。20.實(shí)施方案19所述的試劑盒，其中所述第一特異性探針的序列與包含EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA的5'側(cè)翼序列或3'側(cè)翼序列的部分和與其鄰接的外源DNA的序列的序列具有至少80％的序列同一性，并且其中所述第二特異性探針的序列與包含EE-GM1的包含耐除草劑基因的外源DNA的5'側(cè)翼序列或3'側(cè)翼序列的部分和與其鄰接的外源DNA的序列的序列具有至少80％的序列同一性。21.實(shí)施方案20所述的試劑盒，其中所述第一特異性探針的序列包含與SEQIDNo.2的核苷酸1441至1462或SEQIDNo.3的核苷酸230至251或所述序列的互補(bǔ)序列具有至少80％的序列同一性的序列，并且其中所述第二特異性探針的序列與SEQIDNo.12的核苷酸199至220或SEQIDNo.13的核苷酸558至579或所述序列的互補(bǔ)序列具有至少80％的序列同一性。22.一對(duì)用于鑒定原種事件EE-GM3和原種事件EE-GM1在生物樣品中的同時(shí)存在的特異性探針。23.實(shí)施方案22所述的探針對(duì)，其包括第一探針和第二探針，所述第一探針包含核苷酸序列，所述核苷酸序列與包含EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA的5'側(cè)翼序列或3'側(cè)翼序列的部分和與其鄰接的外源DNA的序列的序列或其互補(bǔ)序列具有至少80％的序列同一性，所述第二探針包含核苷酸序列，所述核苷酸與包含EE-GM1的包含耐除草劑基因的外源DNA的5'側(cè)翼序列或3'側(cè)翼序列的部分和與其鄰接的外源DNA的序列的序列或其互補(bǔ)序列具有至少80％的序列同一性。24.實(shí)施方案23所述的引物對(duì)，其中所述第一探針與SEQIDNo.2的核苷酸1441至1462或SEQIDNo.3的核苷酸230至251或所述序列的互補(bǔ)序列具有至少80％的序列同一性，并且其中所述第二探針與SEQIDNo.12的核苷酸199至220或SEQIDNo.13的核苷酸558至579或所述序列的互補(bǔ)序列具有至少80％的序列同一性。25.一組用于鑒定原種事件EE-GM3和EE-GM1在生物樣品中的同時(shí)存在的特異性探針，包括第一探針和第二探針，所述第一探針具有包含與SEQIDNo.2的核苷酸1441至1462或SEQIDNo.3的核苷酸230至251或所述序列的互補(bǔ)序列基本上相似的核苷酸序列的序列，所述第二探針具有與SEQIDNo.12的核苷酸199至220或SEQIDNo.13的核苷酸558至579或所述序列的互補(bǔ)序列基本上相似的核苷酸序列。26.一種用于確認(rèn)種子樣品中的種子純度的方法，所述方法包括用特異性識(shí)別EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA的5’或3’側(cè)翼區(qū)域的特異性引物或探針檢測(cè)EE-GM3特異性區(qū)域，和用特異性識(shí)別EE-GM1的包含耐除草劑基因的外源DNA的5’或3’側(cè)翼區(qū)域的特異性引物或探針檢測(cè)EE-GM1特異性區(qū)域。27.一種用于在種子批的樣品中篩選種子的原種事件EE-GM3和EE-GM1的存在的方法，所述方法包括用特異性識(shí)別EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA的5’或3’側(cè)翼區(qū)域的特異性引物或探針檢測(cè)EE-GM3特異性區(qū)域，和用特異性識(shí)別EE-GM1的包含耐除草劑基因的外源DNA的5’或3’側(cè)翼區(qū)域的特異性引物或探針檢測(cè)EE-GM1特異性區(qū)域。28.一種通過與大體上互補(bǔ)的標(biāo)記核酸探針雜交來檢測(cè)原種事件EE-GM3和EE-GM1在生物樣品中的存在的方法，其中通過再循環(huán)靶核酸序列來放大探針：靶核酸比率，所述方法包括：a)將所述靶核酸序列與包含SEQIDNo2的核苷酸1452至核苷酸1469的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的第一核酸寡核苷酸或包含SEQIDNo3的核苷酸223至核苷酸240的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的所述第一核酸核苷酸雜交；b)將所述靶核酸序列與包含SEQIDNo2的核苷酸1434至核苷酸1451的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的第二核酸寡核苷酸或包含SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸258的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的所述標(biāo)記核酸探針雜交，其中所述第一寡核苷酸和第二寡核苷酸重疊至少一個(gè)核苷酸，并且其中將所述第一寡核苷酸或所述第二寡核苷酸標(biāo)記為所述標(biāo)記核酸探針；c)用產(chǎn)生選擇性探針切割從而導(dǎo)致雙鏈體離解的酶僅切割探針：靶核酸序列雙鏈體內(nèi)的標(biāo)記探針，從而使所述靶序列保持完整；d)通過重復(fù)步驟(a)至(c)再循環(huán)所述靶核酸序列；和e)檢測(cè)切割的標(biāo)記探針，從而確定所述靶核酸序列的存在；和f)將所述靶核酸序列與包含SEQIDNo12的核苷酸210至核苷酸227的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的第三核酸寡核苷酸或包含SEQIDNo13的核苷酸561至核苷酸568的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的所述第三核酸寡核苷酸雜交；g)將所述靶核酸序列與包含SEQIDNo12的核苷酸192至核苷酸209的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的第四核酸寡核苷酸或包含SEQIDNo13的核苷酸569至核苷酸586的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的所述標(biāo)記核酸探針雜交，其中所述第三寡核苷酸和第四寡核苷酸重疊至少一個(gè)核苷酸，并且其中將所述第三寡核苷酸或所述第四寡核苷酸標(biāo)記為所述標(biāo)記核酸探針；h)用產(chǎn)生選擇性探針切割從而導(dǎo)致雙鏈體離解的酶僅切割探針：靶核酸序列雙鏈體內(nèi)的標(biāo)記探針，從而使所述靶序列保持完整；i)通過重復(fù)步驟(f)至(h)再循環(huán)所述靶核酸序列；和j)檢測(cè)切割的標(biāo)記探針，從而確定所述靶核酸序列的存在。29.一種各自在其基因組中包含原種事件EE-GM3和原種事件EE-GM1的轉(zhuǎn)基因大豆植物或其細(xì)胞、部分、組織、種子或后代，已于保藏號(hào)NCIMB41659下保藏在NCIMB的包含所述事件EE-GM3的參照種子和已于保藏號(hào)NCIMB41658下保藏在NCIMB的包含所述事件EE-GM1的參照種子，或已于保藏號(hào)PTA-11041下保藏在ATCC的在其基因組中包含原種事件EE-GM3和原種事件EE-GM1的參照種子。30.實(shí)施方案29所述的轉(zhuǎn)基因大豆植物、種子、細(xì)胞、組織、部分或后代，其基因組DNA，當(dāng)使用針對(duì)EE-GM3的原種事件鑒定方案，利用兩個(gè)分別包含SEQID4和SEQID5的核苷酸序列的引物進(jìn)行分析時(shí)，產(chǎn)生約263bp的DNA片段，并且其基因組DNA，當(dāng)使用針對(duì)EE-GM1的原種事件鑒定方案，利用兩個(gè)分別包含SEQID16和SEQID17的核苷酸序列進(jìn)行分析時(shí)，產(chǎn)生約183bp的DNA片段。31.一種各自在其基因組中包含原種事件EE-GM3和原種事件EE-GM1的大豆植物、其植物部分或種子、細(xì)胞或組織，所述大豆植物可通過將包含原種事件EE-GM3的大豆植物與在其基因組中包含原種事件EE-GM1的大豆植物雜交來獲得，所述包含原種事件EE-GM3的大豆植物可通過從已于保藏號(hào)NCIMB41659下保藏在NCIMB的種子生長而來的大豆植物的繁殖和/或與其繁育來獲得，所述包含原種事件EE-GM1的大豆植物可通過從于保藏號(hào)NCIMB41658下保藏在NCIMB的種子生長而來的大豆植物的繁殖和/或與其繁育來獲得，或所述大豆植物可通過從已于登錄號(hào)PTA-11041下保藏在ATCC的種子生長而來的大豆植物的繁殖和/或與其繁育來獲得。32.一種包含原種事件EE-GM3和EE-GM1的大豆種子、已于保藏號(hào)NCIMB41659下保藏在NCIMB的包含事件EE-GM3的參照種子、已于保藏號(hào)NCIMB41658下保藏在NCIMB的包含事件EE-GM1的參照種子和已于保藏號(hào)PTA-11041下保藏在ATCC的包含事件EE-GM3和EE-GM1的參照種子。33.一種可從實(shí)施方案32所述的種子獲得的包含原種事件EE-GM3和EE-GM1的轉(zhuǎn)基因大豆植物、植物部分、細(xì)胞或組織。34.一種用于產(chǎn)生包含原種事件EE-GM3和EE-GM1的大豆植物或種子的方法，包括將根據(jù)實(shí)施方案29至33中任一項(xiàng)所述的植物與另一種大豆植物雜交，和種植獲自所述雜交的種子。35.一種包含原種事件EE-GM3和EE-GM1的大豆基因組DNA。36.一對(duì)分離的核酸分子，所述第一核酸分子包含與SEQIDNo.2的核苷酸1441至核苷酸1452或SEQIDNo.3的核苷酸230至251或所述序列的互補(bǔ)序列基本上相似的核苷酸序列，并且所述第二核酸分子包含與SEQIDNo.12的核苷酸199至核苷酸220或SEQIDNo.13的核苷酸558至579或所述序列的互補(bǔ)序列基本上相似的核苷酸序列。37.實(shí)施方案36所述的分離的核酸分子對(duì)，所述第一核酸分子包含與SEQIDNo.2的核苷酸1431至核苷酸1462或SEQIDNo.3的核苷酸220至261或所述序列的互補(bǔ)序列基本上相似的核苷酸序列，并且所述第二核酸分子包含與SEQIDNo.12的核苷酸189至核苷酸230或SEQIDNo.13的核苷酸548至589或所述序列的互補(bǔ)序列基本上相似的核苷酸序列。38.一種大豆植物，其在其基因組中按順序包含下列核苷酸序列：a)SEQIDNo2的核苷酸1至1451的核苷酸序列；b)SEQID1的核苷酸6760至核苷酸6958的核苷酸序列的互補(bǔ)序列的核苷酸序列；c)SEQID1的核苷酸6874至核苷酸7298的核苷酸序列；d)SEQID1的核苷酸7至核苷酸7291的核苷酸序列；e)SEQID1的核苷酸12至核苷酸7265的核苷酸序列；f)SEQID3的核苷酸217至核苷酸240的核苷酸序列；和g)SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸1408的核苷酸序列：并且還按順序包含下列序列：h)SEQIDNo12的核苷酸1至209的核苷酸序列；i)SEQID11的核苷酸340至核苷酸3461的核苷酸序列；j)SEQID11的核苷酸1至核苷酸336的核苷酸序列的互補(bǔ)序列的核苷酸序列；k)SEQID11的核苷酸3462至核苷酸4076的核苷酸序列的互補(bǔ)序列的核苷酸序列；l)SEQID11的核苷酸337至核苷酸3043的核苷酸序列；m)SEQID13的核苷酸559至核苷酸568的核苷酸序列；和n)SEQIDNo13的核苷酸569至核苷酸1000的核苷酸序列。39.一種按順序包含下列核苷酸序列的DNA分子：a)SEQIDNo2的核苷酸1至1451的核苷酸序列；b)SEQID1的核苷酸6760至核苷酸6958的核苷酸序列的互補(bǔ)序列的核苷酸序列；c)SEQID1的核苷酸6874至核苷酸7298的核苷酸序列；d)SEQID1的核苷酸7至核苷酸7291的核苷酸序列；e)SEQID1的核苷酸12至核苷酸7265的核苷酸序列；f)SEQID3的核苷酸217至核苷酸240的核苷酸序列；g)SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸1408的核苷酸序列；以及還按順序包含下列序列：h)SEQIDNo12的核苷酸1至209的核苷酸序列；i)SEQID11的核苷酸340至核苷酸3461的核苷酸序列；j)SEQID11的核苷酸1至核苷酸336的核苷酸序列的互補(bǔ)序列的核苷酸序列；k)SEQID11的核苷酸3462至核苷酸4076的核苷酸序列的互補(bǔ)序列的核苷酸序列；1)SEQID11的核苷酸337至核苷酸3043的核苷酸序列；m)SEQID13的核苷酸559至核苷酸568的核苷酸序列；和n)SEQIDNo13的核苷酸569至核苷酸1000的核苷酸序列。40.一種用于鑒定原種事件EE-GM3和EE-GM2在生物樣品中的同時(shí)存在的方法，所述方法包括用特異性識(shí)別EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA的5’或3’側(cè)翼區(qū)域的特異性引物或探針檢測(cè)EE-GM3特異性區(qū)域，和用特異性識(shí)別EE-GM2的包含耐除草劑基因的外源DNA的5’或3’側(cè)翼區(qū)域的特異性引物或探針檢測(cè)EE-GM2特異性區(qū)域。41.實(shí)施方案40所述的方法，所述方法包括使用利用至少兩個(gè)引物的第一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，和使用利用至少兩個(gè)引物的第二聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，從存在于所述生物樣品中的核酸擴(kuò)增兩個(gè)50至1000bp的DNA片段，在所述第一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)中，所述引物之一識(shí)別EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA的5'側(cè)翼區(qū)域或EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA的3'側(cè)翼區(qū)域，所述5'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo2的核苷酸1至核苷酸1451的核苷酸序列，所述3'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸1408的互補(bǔ)序列的核苷酸序列，所述引物的另一個(gè)引物識(shí)別EE-GM3的外源DNA內(nèi)的序列，所述外源DNA包含SEQIDNo.2的核苷酸1452至核苷酸1843的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo3的核苷酸1至核苷酸240的核苷酸序列，或所述引物的另一個(gè)引物識(shí)別EE-GM3的外源DNA內(nèi)的序列，所述外源DNA包含SEQIDNo.1的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列，或包含SEQIDNo.20的核苷酸位置1452至核苷酸位置16638的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列，并且在所述第二聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)中，所述引物之一識(shí)別EE-GM2的包含耐除草劑基因的外源DNA的5'側(cè)翼區(qū)域或EE-GM2的包含耐除草劑基因的外源DNA的3'側(cè)翼區(qū)域，所述5'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo14的核苷酸1至核苷酸311的核苷酸序列，所述3'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo15的核苷酸508至核苷酸1880的互補(bǔ)序列的核苷酸序列，所述引物的另一個(gè)引物識(shí)別EE-GM2的外源DNA內(nèi)的序列，所述外源DNA包含SEQIDNo.14的核苷酸312至核苷酸810的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo15的核苷酸1至核苷酸507的核苷酸序列，或所述引物的另一個(gè)引物識(shí)別EE-GM2的外源DNA內(nèi)的序列，所述外源DNA包含SEQIDNo.11的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列，其中所述第一聚合酶和第二聚合酶反應(yīng)可以是相繼的或同時(shí)的。42.實(shí)施方案41所述的方法，其中識(shí)別EE-GM3的5'側(cè)翼區(qū)域的所述引物包含選自SEQIDNo2的核苷酸1至核苷酸1451的核苷酸序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，或識(shí)別EE-GM3的3'側(cè)翼區(qū)域的所述引物包含選自SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸1408的互補(bǔ)序列的核苷酸序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，并且識(shí)別EE-GM3的外源DNA內(nèi)的序列的所述引物包含選自SEQIDNo.2的核苷酸1452至核苷酸1843的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo3的核苷酸1至核苷酸240的核苷酸序列或SEQIDNo.1的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列、或SEQIDNo.20的核苷酸位置1452至核苷酸位置16638的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸，并且其中識(shí)別EE-GM2的5'側(cè)翼區(qū)域的所述引物包含選自SEQIDNo14的核苷酸1至核苷酸311的核苷酸序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，或識(shí)別EE-GM3的3'側(cè)翼區(qū)域的所述引物包含選自SEQIDNo15的核苷酸508至核苷酸1880的互補(bǔ)序列的核苷酸序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，并且識(shí)別EE-GM2的外源DNA內(nèi)的序列的所述引物包含選自SEQIDNo.14的核苷酸312至核苷酸810的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo15的核苷酸1至核苷酸507的核苷酸序列或SEQIDNo.11的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸。43.實(shí)施方案41所述的方法，其中識(shí)別EE-GM3的5'側(cè)翼區(qū)域的所述引物在其最3'末端包含選自SEQIDNo2的核苷酸1至核苷酸1451的核苷酸序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列或識(shí)別EE-GM3的3'側(cè)翼區(qū)域的所述引物在其最3'末端包含選自SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸1408的互補(bǔ)序列的核苷酸序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，并且識(shí)別EE-GM3的外源DNA內(nèi)的序列的所述引物在其3'末端包含選自SEQIDNo.2的核苷酸1452至核苷酸1843的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo3的核苷酸1至核苷酸240的核苷酸序列或SEQIDNo1的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列、或SEQIDNo.20的核苷酸位置1452至核苷酸位置16638的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸，并且其中識(shí)別EE-GM2的5'側(cè)翼區(qū)域的所述引物在其最3'末端包含選自SEQIDNo14的核苷酸1至核苷酸311的核苷酸序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列或識(shí)別EE-GM2的3'側(cè)翼區(qū)域的所述引物在其最3'末端包含選自SEQIDNo15的核苷酸508至核苷酸1880的互補(bǔ)序列的核苷酸序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，并且識(shí)別EE-GM2的外源DNA內(nèi)的序列的所述引物在其3'末端包含選自SEQIDNo.14的核苷酸312至核苷酸810的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo15的核苷酸1至核苷酸507的核苷酸序列或SEQIDNo11的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸。44.實(shí)施方案43所述的方法，其中所述EE-GM3特異性引物分別包含SEQIDNo.5和SEQIDNo.4的序列，或分別包含SEQIDNo5和SEQIDNo.7的序列，并且所述EE-GM2特異性引物分別包含SEQIDNo.18和SEQIDNo.19的序列。45.實(shí)施方案44所述的方法，所述方法包括使用EE-GM3PCR鑒定方案擴(kuò)增約263或約706bp的EE-GM3特異性片段和擴(kuò)增約151bp的EE-GM2特異性片段。46.一種用于鑒定原種事件EE-GM3和原種事件EE-GM2在生物樣品中的同時(shí)存在的試劑盒，所述試劑盒包括一種識(shí)別EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA的5'側(cè)翼區(qū)域的引物，所述5'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo2的核苷酸1至核苷酸1451的核苷酸序列，或一種識(shí)別EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA的3’側(cè)翼區(qū)域的引物，所述3’側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸1408的互補(bǔ)序列的核苷酸序列，和一種識(shí)別EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA內(nèi)的序列的引物，所述外源DNA包含SEQIDNo.2的核苷酸1452至核苷酸1843的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo3的核苷酸1至核苷酸240的核苷酸序列或SEQIDNo1的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列、或SEQIDNo.20的核苷酸位置1452至核苷酸位置16638的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列，并且其中所述試劑盒還包括一種識(shí)別EE-GM2的包含耐除草劑基因的外源DNA的5'側(cè)翼區(qū)域的引物，所述5'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo14的核苷酸1至核苷酸311的核苷酸序列，或一種識(shí)別EE-GM2的包含耐除草劑基因的外源DNA的3'側(cè)翼區(qū)域的引物，所述3'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo15的核苷酸508至核苷酸1880的互補(bǔ)序列的核苷酸序列，和一種識(shí)別EE-GM2的包含耐除草劑基因的外源DNA內(nèi)的序列的引物，所述外源DNA包含SEQIDNo.14的核苷酸312至核苷酸810的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo15的核苷酸1至核苷酸507的核苷酸序列或SEQIDNo11的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列。47.實(shí)施方案46所述的試劑盒，其中識(shí)別EE-GM3的所述5'側(cè)翼區(qū)域的所述引物包含選自SEQIDNo2的核苷酸1至核苷酸1451的核苷酸序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，或識(shí)別EE-GM3的3'側(cè)翼區(qū)域的所述引物包含選自SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸1408的互補(bǔ)序列的核苷酸序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，并且識(shí)別EE-GM3的外源DNA內(nèi)的序列的所述引物包含選自SEQIDNo.2的核苷酸1452至核苷酸1843的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo3的核苷酸1至核苷酸240的核苷酸序列或SEQIDNo1的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列或SEQIDNo.20的核苷酸位置1452至核苷酸位置16638的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸，并且其中識(shí)別EE-GM2的所述5'側(cè)翼區(qū)域的所述引物包含選自SEQIDNo14的核苷酸1至核苷酸311的核苷酸序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，或識(shí)別EE-GM2的3'側(cè)翼區(qū)域的所述引物包含選自SEQIDNo15的核苷酸508至核苷酸1880的互補(bǔ)序列的核苷酸序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，并且識(shí)別EE-GM2的外源DNA內(nèi)的序列的所述引物包含選自SEQIDNo.14的核苷酸312至核苷酸810的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo15的核苷酸1至核苷酸507的核苷酸序列或SEQIDNo11的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸。48.實(shí)施方案46所述的試劑盒，其中識(shí)別EE-GM3的所述5'側(cè)翼區(qū)域的所述引物在其最3'末端包含選自SEQIDNo2的核苷酸1至核苷酸1451的核苷酸序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列或識(shí)別EE-GM3的所述3'側(cè)翼區(qū)域的所述引物在其最3'末端包含選自SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸1408的互補(bǔ)序列的核苷酸序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，并且識(shí)別EE-GM3的所述外源DNA的內(nèi)的序列的所述引物在其3'末端包含選自SEQIDNo.2的核苷酸1452至核苷酸1843的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo3的核苷酸1至核苷酸240的核苷酸序列或SEQIDNo1的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列、或SEQIDNo.20的核苷酸位置1452至核苷酸位置16638的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸，并且其中，識(shí)別EE-GM2的所述5'側(cè)翼區(qū)域的所述引物在其最3'末端包含選自SEQIDNo14的核苷酸1至核苷酸311的核苷酸序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，或識(shí)別EE-GM2的所述3'側(cè)翼區(qū)域的所述引物在其最3'末端包含選自SEQIDNo15的核苷酸508至核苷酸1880的互補(bǔ)序列的核苷酸序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，并且識(shí)別EE-GM2的所述外源DNA內(nèi)的序列的所述引物在其3'末端包含選自SEQIDNo.14的核苷酸312至核苷酸810的互補(bǔ)序列的核苷酸序列或SEQIDNo15的核苷酸1至核苷酸507的核苷酸序列或SEQIDNo11的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸。49.實(shí)施方案46所述的試劑盒，其包括包含SEQIDNo.4的序列的引物和包含SEQIDNo.5的序列的引物或包括包含SEQIDNo.5的序列的引物和包含SEQIDNo.7的序列的引物以及還包括包含SEQIDNo.18的序列的引物和包含SEQIDNo.19的序列的引物。50.一對(duì)適用于EE-GM3和EE-GM2的特異性檢測(cè)的引物，所述第一引物包含在最優(yōu)化的檢測(cè)條件下特異性識(shí)別EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA的5’或3’側(cè)翼區(qū)域內(nèi)的序列的序列，所述5'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo2的核苷酸1至核苷酸1451的核苷酸序列，并且所述3'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸的1408的互補(bǔ)序列的核苷酸序列，并且所述第二引物包含在最優(yōu)化的檢測(cè)條件下特異性識(shí)別EE-GM2的包含耐除草劑基因的外源DNA的5’或3’側(cè)翼區(qū)域內(nèi)的序列的序列，所述5'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo14的核苷酸1至核苷酸311的核苷酸序列，并且所述3'側(cè)翼區(qū)域包含SEQIDNo15的核苷酸508至核苷酸1880的互補(bǔ)序列的核苷酸序列。51.實(shí)施方案50所述的引物對(duì)，其中所述第一引物包含選自SEQIDNo2的核苷酸1至核苷酸1451的核苷酸序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列或選自SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸1408的互補(bǔ)序列的核苷酸序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，并且其中所述第二引物包含選自SEQIDNo14的核苷酸1至核苷酸311的核苷酸序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列或選自SEQIDNo15的核苷酸508至核苷酸1880的互補(bǔ)序列的核苷酸序列的17至200個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列。52.實(shí)施方案50所述的引物對(duì)，其中所述第一引物在其最3'末端包含選自SEQIDNo2的核苷酸1至核苷酸1451的核苷酸序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列或選自SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸1408的互補(bǔ)序列的核苷酸序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，并且其中所述第二引物在其最3'末端包含選自SEQIDNo14的核苷酸1至核苷酸311的核苷酸序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列或選自SEQIDNo15的核苷酸508至核苷酸1880的互補(bǔ)序列的核苷酸序列的至少17個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列。53.一對(duì)引物，其中所述第一引物在其最3'末端包含SEQIDNo.5的序列并且其中所述第二引物在其最3'末端包含SEQIDNo.18的序列。54.一種包含4種引物的裝置，第一引物在其最3'末端包含SEQIDNo.5的序列；第二引物在其最3'末端包含SEQIDNo.4的序列；第三引物在其最3'末端包含SEQIDNo.18的序列；和第四引物在其最3'末端包含SEQIDNo.19的序列。55.實(shí)施方案40所述的方法，所述方法包括將生物樣品的核酸與針對(duì)EE-GM3的第一特異性探針和與針對(duì)EE-GM2的第二特異性探針雜交。56.實(shí)施方案55所述的方法，其中所述第一特異性探針的序列與包含EE-GM3的5'側(cè)翼序列或3'側(cè)翼序列的部分和與其鄰接的外源DNA的序列的序列具有至少80％的序列同一性，并且其中所述第二特異性探針的序列與包含EE-GM2的5'側(cè)翼序列或3'側(cè)翼序列的部分和與其鄰接的外源DNA的序列的序列具有至少80％的序列同一性。57.實(shí)施方案56所述的方法，其中所述第一特異性探針的序列與SEQIDNo.2的核苷酸1431至1472或SEQIDNo.3的核苷酸220至261或所述序列的互補(bǔ)序列具有至少80％的序列同一性，并且其中所述第二特異性探針的序列與SEQIDNo.14的核苷酸301至322或SEQIDNo.15的核苷酸497至518或所述序列的互補(bǔ)序列具有至少80％的序列同一性。58.一種用于鑒定原種事件EE-GM3和原種事件EE-GM2在生物樣品中的同時(shí)存在的試劑盒，所述試劑盒包括能夠與EE-GM3的特異性區(qū)域特異性雜交的第一特異性探針和能夠與EE-GM2的特異性區(qū)域特異性雜交的第二特異性探針。59.實(shí)施方案58所述的試劑盒，其中所述第一特異性探針的序列與包含EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA的5'側(cè)翼序列或3'側(cè)翼序列的部分和與其鄰接的外源DNA的序列的序列具有至少80％的序列同一性，并且其中所述第二特異性探針的序列與包含EE-GM2的包含耐除草劑基因的外源DNA的5'側(cè)翼序列或3'側(cè)翼序列的部分和與其鄰接的外源DNA的序列的序列具有至少80％的序列同一性。60.實(shí)施方案59所述的試劑盒，其中所述第一特異性探針的序列包含與SEQIDNo.2的核苷酸1441至1462或SEQIDNo.3的核苷酸230至251或所述序列的互補(bǔ)序列具有至少80％的序列同一性的序列，并且其中所述第二特異性探針的序列與SEQIDNo.14的核苷酸301至322或SEQIDNo.15的核苷酸497至518或所述序列的互補(bǔ)序列具有至少80％的序列同一性。61.一對(duì)用于鑒定原種事件EE-GM3和原種事件EE-GM2在生物樣品中的同時(shí)存在的特異性探針。62.實(shí)施方案61所述的探針對(duì)，其包括第一探針和第二探針，所述第一探針包含核苷酸序列，所述核苷酸序列與包含EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA的5'側(cè)翼序列或3'側(cè)翼序列的部分和與其鄰接的外源DNA的序列的序列或其互補(bǔ)序列具有至少80％的序列同一性，并且所述第二探針包含核苷酸序列，所述核苷酸序列與包含EE-GM2的包含耐除草劑基因的外源DNA的5'側(cè)翼序列或3'側(cè)翼序列的部分和與其鄰接的外源DNA的序列的序列或其互補(bǔ)序列具有至少80％的序列同一性。63.實(shí)施方案62所述的引物對(duì)，其中所述第一探針與SEQIDNo.2的核苷酸1441至1462或SEQIDNo.3的核苷酸230至251或所述序列的互補(bǔ)序列具有至少80％的序列同一性，并且其中所述第二探針與SEQIDNo.14的核苷酸301至322或SEQIDNo.15的核苷酸497至518或所述序列的互補(bǔ)序列具有至少80％的序列同一性。64.一組用于鑒定原種事件EE-GM3和EE-GM2在生物樣品中的同時(shí)存在的特異性探針，包括第一探針和第二探針，所述第一探針具有包含與SEQIDNo.2的核苷酸1441至1462或SEQIDNo.3的核苷酸230至251或所述序列的互補(bǔ)序列基本上相似的核苷酸序列的序列，所述第二探針具有與SEQIDNo.14的核苷酸301至322或SEQIDNo.15的核苷酸497至518或所述序列的互補(bǔ)序列基本上相似的核苷酸序列。65.一種用于確認(rèn)種子樣品中的種子純度的方法，所述方法包括用特異性識(shí)別EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA的5’或3’側(cè)翼區(qū)域的特異性引物或探針檢測(cè)EE-GM3特異性區(qū)域，和用特異性識(shí)別EE-GM2的包含耐除草劑基因的外源DNA的5’或3’側(cè)翼區(qū)域的特異性引物或探針檢測(cè)EE-GM2特異性區(qū)域。66.一種用于在種子批的樣品中篩選種子的原種事件EE-GM3的存在的方法，所述方法包括用特異性識(shí)別EE-GM3的包含耐除草劑基因的外源DNA的5’或3’側(cè)翼區(qū)域的特異性引物或探針檢測(cè)EE-GM3特異性區(qū)域，和用特異性識(shí)別EE-GM2的包含耐除草劑基因的外源DNA的5’或3’側(cè)翼區(qū)域的特異性引物或探針檢測(cè)EE-GM2特異性區(qū)域。67.一種通過與大體上互補(bǔ)的標(biāo)記核酸探針雜交來檢測(cè)原種事件EE-GM3和EE-GM2在生物樣品中的存在的方法，其中通過再循環(huán)靶核酸序列來放大探針：靶核酸比率，所述方法包括：a)將所述靶核酸序列與包含SEQIDNo2的核苷酸1452至核苷酸1469的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的第一核酸寡核苷酸或包含SEQIDNo3的核苷酸223至核苷酸240的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的所述第一核酸核苷酸雜交；b)將所述靶核酸序列與包含SEQIDNo2的核苷酸1434至核苷酸1451的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的第二核酸寡核苷酸或包含SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸258的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的所述標(biāo)記核酸探針雜交，其中所述第一寡核苷酸和第二寡核苷酸重疊至少一個(gè)核苷酸，并且其中將所述第一寡核苷酸或所述第二寡核苷酸標(biāo)記為所述標(biāo)記核酸探針；c)用產(chǎn)生選擇性探針切割從而導(dǎo)致雙鏈體離解的酶僅切割探針：靶核酸序列雙鏈體內(nèi)的標(biāo)記探針，從而使所述靶序列保持完整；d)通過重復(fù)步驟(a)至(c)再循環(huán)所述靶核酸序列；和e)檢測(cè)切割的標(biāo)記探針，從而確定所述靶核酸序列的存在；和f)將所述靶核酸序列與包含SEQIDNo14的核苷酸312至核苷酸329的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的第三核酸寡核苷酸或包含SEQIDNo15的核苷酸490至核苷酸507的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的所述第三核酸寡核苷酸雜交；g)將所述靶核酸序列與包含SEQIDNo14的核苷酸294至核苷酸311的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的第四核酸寡核苷酸或包含SEQIDNo15的核苷酸508至核苷酸525的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列的所述標(biāo)記核酸探針雜交，其中所述第三寡核苷酸和第四寡核苷酸重疊至少一個(gè)核苷酸，并且其中將所述第三寡核苷酸或所述第四寡核苷酸標(biāo)記為所述標(biāo)記核酸探針；h)用產(chǎn)生選擇性探針切割從而導(dǎo)致雙鏈體離解的酶僅切割探針：靶核酸序列雙鏈體內(nèi)的標(biāo)記探針，從而使所述靶序列保持完整；i)通過重復(fù)步驟(f)至(h)再循環(huán)所述靶核酸序列；和j)檢測(cè)切割的標(biāo)記探針，從而確定所述靶核酸序列的存在。68.一種各自在其基因組中包含原種事件EE-GM3和原種事件EE-GM2的轉(zhuǎn)基因大豆植物或其細(xì)胞、部分、組織、種子或后代，已于保藏號(hào)NCIMB41659下保藏在NCIMB的包含所述事件EE-GM3的參照種子和已于保藏號(hào)NCIMB41660下保藏在NCIMB的包含所述事件EE-GM2的參照種子，或已于保藏號(hào)PTA-11042下保藏在ATCC的在其基因組中包含原種事件EE-GM3和原種事件EE-GM2的參照種子。69.實(shí)施方案68所述的轉(zhuǎn)基因大豆植物、種子、細(xì)胞、組織、部分或后代，其基因組DNA，當(dāng)使用針對(duì)EE-GM3的原種事件鑒定方案，利用兩個(gè)分別包含SEQID4和SEQID5的核苷酸序列的引物進(jìn)行分析時(shí)，產(chǎn)生約263bp的DNA片段，并且其基因組DNA，當(dāng)使用針對(duì)EE-GM2的原種事件鑒定方案，利用兩個(gè)分別包含SEQID18和SEQID19的核苷酸序列進(jìn)行分析時(shí)，產(chǎn)生約151bp的DNA片段。70.一種各自在其基因組中包含原種事件EE-GM3和原種事件EE-GM2的大豆植物、其植物部分或種子、細(xì)胞或組織，所述大豆植物可通過將在其基因組中包含原種事件EE-GM3的大豆植物與在其基因組中包含原種事件EE-GM2的大豆植物雜交來獲得，所述包含原種事件EE-GM3的大豆植物可通過從已于保藏號(hào)NCIMB41659下保藏在NCIMB的種子生長而來的大豆植物的繁殖和/或與其繁育來獲得，所述包含原種事件EE-GM2的大豆植物可通過從于保藏號(hào)NCIMB41660下保藏在NCIMB的種子生長而來的大豆植物的繁殖和/或與其繁育來獲得，或所述大豆植物可通過從已于登錄號(hào)PTA-11042下保藏在ATCC的種子生長而來的大豆植物的繁殖和/或與其繁育來獲得。71.一種包含原種事件EE-GM3和EE-GM2的大豆種子、已于保藏號(hào)NCIMB41659下保藏在NCIMB的包含事件EE-GM3的參照種子、已于保藏號(hào)NCIMB41660下保藏在NCIMB的包含事件EE-GM2的參照種子和已于保藏號(hào)PTA-11042下保藏在ATCC的包含事件EE-GM3和EE-GM2的參照種子。72.一種可從實(shí)施方案71所述的種子產(chǎn)生的包含原種事件EE-GM3和EE-GM2的轉(zhuǎn)基因大豆植物、細(xì)胞或組織。73.一種用于產(chǎn)生包含原種事件EE-GM3和EE-GM2的大豆植物或種子的方法，包括將根據(jù)實(shí)施方案68至72中任一項(xiàng)所述的植物與另一種大豆植物雜交，和種植獲自所述雜交的種子。74.一種包含原種事件EE-GM3和EE-GM2的大豆基因組DNA。75.一對(duì)分離的核酸分子，所述第一核酸分子包含與SEQIDNo.2的核苷酸1441至核苷酸1452或SEQIDNo.3的核苷酸230至251或所述序列的互補(bǔ)序列基本上相似的核苷酸序列，并且所述第二核酸分子包含與SEQIDNo.14的核苷酸301至核苷酸322或SEQIDNo.15的核苷酸497至518或所述序列的互補(bǔ)序列基本上相似的核苷酸序列。76.實(shí)施方案75所述的分離的核酸分子對(duì)，所述第一核酸分子包含與SEQIDNo.2的核苷酸1431至核苷酸1462或SEQIDNo.3的核苷酸220至261或所述序列的互補(bǔ)序列基本上相似的核苷酸序列，并且所述第二核酸分子包含與SEQIDNo.14的核苷酸301至核苷酸322或SEQIDNo.15的核苷酸487至518或所述序列的互補(bǔ)序列基本上相似的核苷酸序列。77.一種大豆植物，其在其基因組中按順序包含下列核苷酸序列：a)SEQIDNo2的核苷酸1至1451的核苷酸序列；b)SEQID1的核苷酸6760至核苷酸6958的核苷酸序列的互補(bǔ)序列的核苷酸序列；c)SEQID1的核苷酸6874至核苷酸7298的核苷酸序列；d)SEQID1的核苷酸7至核苷酸7291的核苷酸序列；e)SEQID1的核苷酸12至核苷酸7265的核苷酸序列；f)SEQID3的核苷酸217至核苷酸240的核苷酸序列；和g)SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸1408的核苷酸序列：并且還按順序包含下列序列：h)SEQIDNo14的核苷酸1至311的核苷酸序列；i)SEQID11的核苷酸3458至核苷酸3848的核苷酸序列；j)SEQID11的核苷酸413至核苷酸3457的核苷酸序列；k)SEQID15的核苷酸508至核苷酸1880的核苷酸序列。78.一種按順序包含下列核苷酸序列的DNA分子：a)SEQIDNo2的核苷酸1至1451的核苷酸序列；b)SEQID1的核苷酸6760至核苷酸6958的核苷酸序列的互補(bǔ)序列的核苷酸序列；c)SEQID1的核苷酸6874至核苷酸7298的核苷酸序列；d)SEQID1的核苷酸7至核苷酸7291的核苷酸序列；e)SEQID1的核苷酸12至核苷酸7265的核苷酸序列；f)SEQID3的核苷酸217至核苷酸240的核苷酸序列；g)SEQIDNo3的核苷酸241至核苷酸1408的核苷酸序列；并且還按順序包含下列序列：h)SEQIDNo14的核苷酸1至311的核苷酸序列；i)SEQID11的核苷酸3458至核苷酸3848的核苷酸序列；j)SEQID11的核苷酸413至核苷酸3457的核苷酸序列；k)SEQID15的核苷酸508至核苷酸1880的核苷酸序列。79.一種包含EE-GM3和EE-GM1的大豆植物、細(xì)胞、組織或種子，其在其細(xì)胞的基因組中包含與SEQIDNo.2的核苷酸1431至1472具有至少80％、90％、95％或100％的序列同一性的核酸序列和與SEQIDNo.3的核苷酸220至261或所述序列的互補(bǔ)序列具有至少80％、90％、95％或100％的序列同一性的核酸序列，以及還有與SEQIDNo.12的核苷酸199至220具有至少80％、90％、95％或100％的序列同一性的核酸序列和SEQIDNo.13的核苷酸558至579或所述序列的互補(bǔ)序列具有至少80％、90％、95％或100％的序列同一性的核酸序列。80.一種包含EE-GM3和EE-GM2的大豆植物、細(xì)胞、組織或種子，其在其細(xì)胞的基因組中包含與SEQIDNo.2的核苷酸1431至1472具有至少80％、90％、95％或100％的序列同一性的核酸序列和與SEQIDNo.3的核苷酸220至261或所述序列的互補(bǔ)序列具有至少80％、90％、95％或100％的序列同一性的核酸序列，以及還有與SEQIDNo.14的核苷酸301至322具有至少80％、90％、95％或100％的序列同一性的核酸序列和與SEQIDNo.15的核苷酸497至518或所述序列的互補(bǔ)序列具有至少80％、90％、95％或100％的序列同一性的核酸序列。81.一種大豆植物、植物細(xì)胞、組織或種子，在它們的基因組中包含核酸分子，所述核酸分子包含與SEQIDNo.20的核苷酸位置1452至核苷酸位置16638的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列具有至少97％、98％或至少99％的序列同一性的核苷酸序列，或與SEQIDNo.20或其互補(bǔ)序列具有至少97％、98％或至少99％的序列同一性的核苷酸序列，以及在它們的基因組中包含核酸分子，所述核酸分子包含與EE-GM1或EE-GM2的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列具有至少97％、98％或至少99％的序列同一性的核苷酸序列，已于保藏號(hào)NCIMB41658下保藏在NCIMB的包含所述事件EE-GM1的參照種子，和已于保藏號(hào)NCIMB41660下保藏在NCIMB的包含所述事件EE-GM2的參照種子，例如其中所述EE-GM1或EE-GM2的核苷酸序列分別包含或?yàn)镾EQIDNo12或13中的外源DNA序列或SEQIDNo14或15中的外源DNA序列，分別包含或?yàn)橹参锘蚪M中的SEQIDNo12的序列與SEQIDNo13的序列之間的外源DNA序列或植物基因組中的SEQIDNo14的序列與SEQIDNo15的序列之間的外源DNA序列。82.一種大豆植物、植物細(xì)胞、組織或種子，在它們的基因組中包含核酸分子，所述核酸分子與SEQIDNo1的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列雜交，或與SEQIDNo.20的核苷酸位置1452至核苷酸位置16638的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列雜交，或與SEQIDNo.20的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列雜交，以及在它們的基因組中包含與EE-GM1或EE-GM2的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列雜交的核酸分子，已于保藏號(hào)NCIMB41658下保藏的包含EE-GM1的參照種子，和已于保藏號(hào)NCIMB41660下保藏的包含EE-GM2的參照種子，例如其中所述EE-GM1或EE-GM2的核苷酸序列包含或?yàn)镾EQIDNo12或13中的外源DNA序列，或SEQIDNo14或15中的外源DNA序列，或植物基因組中的SEQIDNo12的序列與SEQIDNo13的序列之間的外源DNA序列，或植物基因組中的SEQIDNo14的序列與SEQIDNo15的序列之間的外源DNA序列。當(dāng)前第1頁1 2 3