本發(fā)明涉及環(huán)糊精加工領域，特別涉及一種麥芽糖-β環(huán)糊精的純化方法。
（二）
背景技術：
環(huán)糊精是由環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移酶作用淀粉產(chǎn)生的α-1,4糖苷鍵連接而成的環(huán)狀低聚糖。環(huán)糊精具有獨特空腔結(jié)構(gòu)，使其可以與很多客體分子通過分子間相互作用發(fā)生包合，例如有機分子、無機化合物以及稀有氣體等，從而形成了主客體的復合物。環(huán)糊精可以形成主客體復合物的性質(zhì)，可以廣泛地應用于制藥、化工、食品等行業(yè)。含有6、7和8個葡萄糖殘基的環(huán)糊精分別稱之為α-，β-和γ-環(huán)糊精。β-環(huán)糊精因其包合能力強，生產(chǎn)工藝簡單，成本低廉，是目前工業(yè)上唯一大量生產(chǎn)并廣泛應用的產(chǎn)品。但是β-環(huán)糊精一般溶解性較?。?5℃，1.8g/100mL H2O），這就大大限制了其應用范圍。
麥芽糖-β環(huán)糊精是環(huán)糊精的衍生物，在β環(huán)糊精分子第6位碳原子的羥基上偶聯(lián)1個麥芽糖殘基的分支環(huán)糊精，其水溶性（25℃，151g/100mL H2O）大大高于其對應的β-環(huán)糊精100多倍，并可溶解許多油類物質(zhì)；同時生物安全性和利用度高。因此，麥芽糖基β-環(huán)糊精應用范圍更廣，更具有應用前途，前景廣闊。麥芽糖-β環(huán)糊精合成主要采用普魯蘭酶法合成。在酶反應體系中，主要的原料為麥芽糖與β環(huán)糊精，通過普魯蘭酶的反向合成，反應體系最終含有麥芽糖、β環(huán)糊精及麥芽糖-β環(huán)糊精，反應體系呈高粘度、半固態(tài)，此外麥芽糖-β環(huán)糊精與β環(huán)糊精結(jié)構(gòu)相似，分子量相近，導致麥芽糖-β環(huán)糊精的純化十分困難。
（三）
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明為了彌補現(xiàn)有技術的不足，提供了一種步驟簡單、產(chǎn)品純度高的麥芽糖-β環(huán)糊精的純化方法。
本發(fā)明是通過如下技術方案實現(xiàn)的：
一種麥芽糖-β環(huán)糊精的純化方法，以普魯蘭酶的逆向合成麥芽糖-β環(huán)糊精的反應溶液為原料，包括如下步驟：
（1）將反應溶液稀釋；
（2）將稀釋后的溶液進行納濾處理，之后加純水，繼續(xù)納濾處理，得到納濾后的濃縮液；
（3）以納濾后濃縮液為原料，進行模擬移動床純化，模擬移動床色譜的固定相采用葡聚糖凝膠G-15，流動相采用乙醇與水的混合溶液；模擬移動床色譜系統(tǒng)的操作溫度為10-20℃，進樣液流速為10-40mL/min，洗脫液流速為20-80mL/min，萃余液流速為10-40mL/min，萃取液流速為20-80mL/min，切換時間為15-45min，麥芽糖-β環(huán)糊精在萃余液中，收集萃余液；
（4）對萃余液進行濃縮、干燥，得到產(chǎn)品。
本發(fā)明通過構(gòu)建納濾-模擬移動床分離純化系統(tǒng)，可以有效地去除反應體系當中的麥芽糖與β-環(huán)糊精，提供了一種工業(yè)化純化麥芽糖-β環(huán)糊精的方法。
本發(fā)明的更優(yōu)技術方案為：
步驟（1）中，將反應溶液稀釋至固形物含量為10-20%。
步驟（2）中，將稀釋的反應溶液在40-60℃、壓力1.5-2.0MPa、納濾膜為300-500的條件下，進行納濾處理，當濃縮液體積為原液體積的1/4-1/6時，向濃縮液中加入與濾過液體積相同的純水，繼續(xù)進行納濾處理，如此循環(huán)2-3次。
步驟（3）中，乙醇與水的體積比為10-20:80-90，模擬移動床由8-16跟色譜柱組成，色譜柱分四個區(qū)域，每區(qū)由2-4支相同的色譜柱串聯(lián)。
步驟（4）中，在40-60℃、壓力0.8-1.0MPa、納濾膜為300-500的條件下，對萃余液進行納濾濃縮去除水，將其體積濃縮至原液體積的1/4-1/6，此時結(jié)束操作；將濃縮的萃余液進行冷凍干燥，凍干產(chǎn)品中麥芽糖-β環(huán)糊精純度超過98%。
本發(fā)明提供的麥芽糖-β環(huán)糊精純化方法，采用了納濾-模擬移動床-納濾的處理組合，適合工業(yè)化分離純化麥芽糖-β環(huán)糊精；通過控制納濾膜分子量、操作溫度、循環(huán)次數(shù)等，有效地去除了反應溶液中的麥芽糖；通過控制模擬移動床的操作溫度、洗脫液的乙醇含量，有效地降低了β-環(huán)糊精的溶解度，加快了其在模擬移動床中的移動速度，提高了分離效率，縮短了操作時間。通過上述發(fā)明方法，最終使得產(chǎn)品中麥芽糖-β環(huán)糊精的含量超過98%。
本發(fā)明提供的麥芽糖-β環(huán)糊精純化方法具有產(chǎn)品純度高、分離效率高，適合工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)點。
（四）具體實施方式
實施例1：
本發(fā)明提供麥芽糖-β環(huán)糊精純化方法，按照下列流程進行，具體操作流程包括以下步驟：
（1）反應溶液的稀釋：將含有麥芽糖、β環(huán)糊精及麥芽糖-β環(huán)糊精的普魯蘭酶的逆向合成反應溶液稀釋至固形物含量為20%。
（2）納濾處理：將稀釋的反應溶液在60℃，壓力為2.0Mpa，納濾膜為500的條件下，進行納濾處理去除麥芽糖，當濃縮液體積為原液體積的1/6時，向濃縮液中加入與濾過液體積相同的純水，繼續(xù)進行納濾處理，如此循環(huán)3次。
（3）模擬移動床純化：將納濾處理的濃縮液為原料，進行模擬移動床純化，模擬移動床色譜的固定相采用Sephadex G15，流動相采用乙醇與水的混合溶液，乙醇與水的體積為20：80。模擬移動床由12根色譜柱組成，色譜柱分四個區(qū)域，每區(qū)由3支相同的色譜柱串聯(lián)。模擬移動床色譜系統(tǒng)的操作溫度為20℃。進樣液流速為40mL/min；洗脫液流速為80mL/min；萃余液流速為40mL/min；萃取液流速為80mL/min；切換時間為45min。麥芽糖-β環(huán)糊精存在于萃余液中，收集萃余液。
（4）濃縮：采用納濾進行濃縮，將收集的萃余液在60℃，壓力為1.0Mpa，納濾膜為500的條件下，進行納濾處理去除水，當濃縮液體積為原液體積的1/6時結(jié)束操作。
（5）干燥：將納濾濃縮進行冷凍干燥。
本方法有效的提高了麥芽糖-β環(huán)糊精產(chǎn)品的純度，最終產(chǎn)品純度達到99%。
實施例2：
本發(fā)明提供麥芽糖-β環(huán)糊精純化方法，按照下列流程進行，具體操作流程包括以下步驟：
（1）反應溶液的稀釋：將含有麥芽糖、β環(huán)糊精及麥芽糖-β環(huán)糊精的普魯蘭酶的逆向合成反應溶液稀釋至固形物含量為10%。
（2）納濾處理：將稀釋的反應溶液在40℃，壓力為1.5Mpa，納濾膜為300的條件下，進行納濾處理去除麥芽糖，當濃縮液體積為原液體積的1/4時，向濃縮液中加入與濾過液體積相同的純水，繼續(xù)進行納濾處理，如此循環(huán)2次。
（3）模擬移動床純化：將納濾處理的濃縮液為原料，進行模擬移動床純化，模擬移動床色譜的固定相采用Sephadex G15，流動相采用乙醇與水的混合溶液，乙醇與水的體積為10：90。模擬移動床由8根色譜柱組成，色譜柱分四個區(qū)域，每區(qū)由2支相同的色譜柱串聯(lián)。模擬移動床色譜系統(tǒng)的操作溫度為10℃。進樣液流速為10mL/min；洗脫液流速為20mL/min；萃余液流速為10mL/min；萃取液流速為20mL/min；切換時間為15min。麥芽糖-β環(huán)糊精存在于萃余液中，收集萃余液。
（4）濃縮：采用納濾進行濃縮，將收集的萃余液在40℃，壓力為0.8Mpa，納濾膜為300的條件下，進行納濾處理去除水，當濃縮液體積為原液體積的1/4時結(jié)束操作。
（5）干燥：將納濾濃縮進行冷凍干燥。
本方法有效的提高了麥芽糖-β環(huán)糊精產(chǎn)品的純度，最終產(chǎn)品純度達到98%。
實施例3：
本發(fā)明提供麥芽糖-β環(huán)糊精純化方法，按照下列流程進行，具體操作流程包括以下步驟：
（1）反應溶液的稀釋：將含有麥芽糖、β環(huán)糊精及麥芽糖-β環(huán)糊精的普魯蘭酶的逆向合成反應溶液稀釋至固形物含量為15%。
（2）納濾處理：將稀釋的反應溶液在50℃，壓力為1.7Mpa，納濾膜為400的條件下，進行納濾處理去除麥芽糖，當濃縮液體積為原液體積的1/5時，向濃縮液中加入與濾過液體積相同的純水，繼續(xù)進行納濾處理，如此循環(huán)2次。
（3）模擬移動床純化：將納濾處理的濃縮液為原料，進行模擬移動床純化，模擬移動床色譜的固定相采用Sephadex G15，流動相采用乙醇與水的混合溶液，乙醇與水的體積為15：85。模擬移動床由16根色譜柱組成，色譜柱分四個區(qū)域，每區(qū)由4支相同的色譜柱串聯(lián)。模擬移動床色譜系統(tǒng)的操作溫度為15℃。進樣液流速為20mL/min；洗脫液流速為50mL/min；萃余液流速為20mL/min；萃取液流速為50mL/min；切換時間為30min。麥芽糖-β環(huán)糊精存在于萃余液中，收集萃余液。
（4）濃縮：采用納濾進行濃縮，將收集的萃余液在50℃，壓力為0.9Mpa，納濾膜為400的條件下，進行納濾處理去除水，當濃縮液體積為原液體積的1/5時結(jié)束操作。
（5）干燥：將納濾濃縮進行冷凍干燥。
本方法有效的提高了麥芽糖-β環(huán)糊精產(chǎn)品的純度，最終產(chǎn)品純度達到98%。