本發(fā)明屬于精細化學品合成領域，尤其是涉及一種6-蝶呤基葉酸的合成方法。

背景技術：

葉酸又名碟酰谷氨酸，b族維生素之一，是氨基酸、嘧啶和嘌呤代謝中單碳轉移的載體，對核蛋白的合成起輔酶作用；同時，葉酸也是許多細胞內(nèi)酶反應的輔酶；葉酸的缺乏，會導致dtmp的合成受到限制，使dna合成受阻，而產(chǎn)生巨幼細胞貧血。目前的研究已經(jīng)證實，婦女孕前或妊娠早期缺乏葉酸是神經(jīng)管畸形發(fā)生的重要病因之一。葉酸與同型半胱氨酸代謝關系密切，對預防心腦血管疾病的發(fā)生具有重要的生物學意義。而且，也有研究表明，葉酸與許多癌癥的發(fā)生、預防以及治療相關。

植物和微生物可在體內(nèi)從頭合成葉酸，而動物則不能，對人類而言，植物是人類最主要的葉酸來源。研究表明，世界上大多數(shù)國家的人群葉酸的攝入量都不理想，因此，利用基因工程改造植物，使其體內(nèi)葉酸含量顯著提高，就成為解決世界范圍內(nèi)葉酸缺乏癥的最新選擇。

四氫葉酸(thf)及其衍生物通常都稱為葉酸，葉酸分子由喋呤、對氨基苯甲酸(paba)和谷氨酸三部分組成。在不同的氧化條件下一碳單位連接于喋呤的n-5位置或是對氨基苯甲酸的n-10位置,或是連接在二者之間。通常人們所說的葉酸為l-構型(l-folicacid)，葉酸雜質包括d-葉酸(d-folicacid)、葉酸雜質-e(6-蝶呤基葉酸，6-pterinylfolicacid)、高葉酸(homofolicacid)、異高葉酸(isohomofolicacid)等，在檢測葉酸時要確定含有哪些雜質，以及準確的測量出葉酸中的雜質和每種雜質的含量，因此，必須要提供雜質標準品。

技術實現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明旨在提出一種6-蝶呤基葉酸的合成方法，制得一種葉酸雜質的高純度標準品，以便準確、有效的檢測出葉酸中該種雜質的含量。

為達到上述目的，本發(fā)明的技術方案是這樣實現(xiàn)的：

一種6-蝶呤基葉酸的合成方法，包括如下步驟：

(1)將化合物1蝶酸與化合物2谷氨酸二叔丁酯鹽酸鹽加入到二甲基甲酰胺(dmf)中，加入縮合劑和輔助試劑，在室溫攪拌過夜，將反應液倒入蒸餾水中，析出的固體經(jīng)過濾，用蒸餾水洗滌，得到固體粗品，濾液用乙酸乙酯萃取，干燥，除去溶劑，得到固體粗品，將兩部分固體合并，真空干燥，得粗品化合物3；

(2)將所述的粗品化合物3加入到二甲基甲酰胺(dmf)和n-甲基吡咯烷酮(nmp)的混合液中，然后加入化合物4蝶呤甲基溴化物，混合物于室溫至60℃攪拌4-48小時，反應液冷卻至室溫后倒入蒸餾水中，析出的固體經(jīng)過濾，蒸餾水洗滌，干燥得棕色固體化合物5；

(3)將所述的棕色固體化合物5溶于三氟乙酸(tfa)和二氯甲烷(dcm)的混合溶劑中，混合物于室溫攪拌1-12小時，脫去叔丁基保護基團，將溶劑濃縮至約5ml，在攪拌下緩慢加入蒸餾水，析出棕色固體，固體經(jīng)過濾，蒸餾水洗滌，真空干燥后重新溶解于三氟乙酸中，再次加入蒸餾水，析出的固體經(jīng)過濾、蒸餾水洗滌，真空干燥后得到棕色固體6-蝶呤基葉酸；

其化學方程式為：

進一步，所述的步驟(1)中的縮合劑為o-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(hbtu)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(hatu)，6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(hctu)、二環(huán)己基碳二亞胺(dcc)、n,n'-二異丙基碳二亞胺(dic)或(1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亞胺)(edci)中的至少一種。

進一步，所述的步驟(1)中的輔助試劑為1-羥基苯并三唑(hobt)、二異丙基乙基胺(dipea)、三乙胺(tea)或4-二甲氨基吡啶(dmap)中的至少一種

進一步，所述的縮合劑為hbtu，所述的輔助試劑為dipea與hobt的混合物；其中，所述的hbtu的用量為1-10當量，所述的hobt的用量為1-10當量，所述的dipea用量為1-50當量。

進一步，所述的步驟(1)中化合物1與化合物2的摩爾比為1：(1-10)；所述的二甲基甲酰胺的用量為每毫摩爾化合物1加二甲基甲酰胺1-100ml。

進一步，所述的步驟(2)中化合物3與dmf和nmp的質量體積比為1g:(1-100)ml；其中，所述的混合液中dmf和nmp的體積比為100：(1-100)。

進一步，所述的步驟(3)中化合物5與三氟乙酸和二氯甲烷的混合溶劑的質量比為1：(1-100)；其中，所述的混合溶劑中三氟乙酸的體積含量為20-100％。

進一步，所述的步驟(3)中得到的棕色固體6-蝶呤基葉酸的純度為70-80％。

所述的合成方法制備得到的6-蝶呤基葉酸的用途，所述的6-蝶呤基葉酸用于葉酸的質譜檢測雜質標準品。

相對于現(xiàn)有技術，本發(fā)明所述的6-蝶呤基葉酸的合成方法具有以下優(yōu)勢：

本發(fā)明所述的6-蝶呤基葉酸的合成方法可用于大量制備葉酸雜質6-蝶呤基葉酸的標準品，純度可達70-80％；該方法簡單，可準確、有效的檢測出葉酸中雜質6-蝶呤基葉酸的含量。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實施例所述的6-蝶呤基葉酸的制備路線。

具體實施方式

除有定義外，以下實施例中所用的技術術語具有與本發(fā)明所屬領域技術人員普遍理解的相同含義。以下實施例中所用的試驗試劑，如無特殊說明，均為常規(guī)生化試劑；所述實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。

下面結合實施例及附圖來詳細說明本發(fā)明。

實施例1

一種6-蝶呤基葉酸的合成方法，包括如下步驟：

(1)化合物3的合成：將化合物1蝶酸(4g，12.8mmol)和化合物2谷氨酸二叔丁酯鹽酸鹽(4.9g，16.6mmol)，加入到二甲基甲酰胺(100-200ml)中，加入hbtu(7.3g，19.2mmol)、hobt(2.6g，19.2mmol)和二異丙基乙基胺(6.5g，50mmol)，該混合物在室溫攪拌過夜，將反應液倒入蒸餾水中(1000ml)，析出固體，經(jīng)過濾、用蒸餾水洗滌，得到固體粗品。濾液用乙酸乙酯萃取，干燥，除去溶劑，得到固體粗品，將兩部分固體合并，真空干燥，得粗品化合物3(5g)，收率70.5％；

(2)化合物5的合成：將化合物3(2.6g，4.7mmol)加入到dmf(40ml)和nmp(5ml)混合液中，然后加入蝶呤甲基溴化物(3.2g，9.4mmol)，混合物于室溫至60℃攪拌24小時，反應液冷卻至室溫后倒入蒸餾水中，析出固體，經(jīng)過濾，蒸餾水洗，干燥得棕色固體化合物5，3.2g；

(3)化合物6的合成：將化合物5溶于三氟乙酸(30ml)和二氯甲烷(15ml)的混合溶劑中，混合物于室溫攪拌4小時，將溶劑濃縮至約5ml，攪拌下慢慢加入蒸餾水(50ml)，析出棕色固體，固體過濾，蒸餾水洗滌，真空干燥后重新溶解于三氟乙酸中(5ml)，再次加入蒸餾水，析出的固體經(jīng)過濾、蒸餾水洗滌，真空干燥后的得棕色固體6-蝶呤基葉酸化合物，157mg，收率5.4％。質譜檢測結果顯示分子離子峰[m+h]+＝617，純度約70-80％。該產(chǎn)品溶解性極差，經(jīng)過酸堿處理和hplc純化均不能得到更高純度的產(chǎn)品。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。