本發(fā)明屬于皮膚修復
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種人源脂肪間充質(zhì)干細胞因子及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
：近年來，間充質(zhì)干細胞分泌的因子已成為研究熱點，這些細胞因子可有效調(diào)控機體細胞信號傳導、活化人體干細胞，進而生理性修復或替代機體損傷、病變及衰老的細胞。將細胞因子添加到美容化妝品，不僅具有一般化妝品的保濕美白功效，還能夠修復受損皮膚，消除皮膚皺紋，收縮毛孔，改善面色等，越來越受到人們的關(guān)注。然而市面上的細胞因子化妝品一般采用直接摻入或經(jīng)凍干后摻入化妝品基質(zhì)的方式制造，細胞因子含量較低，且含有大量糖分等其它雜質(zhì)，使用這些化妝品后反而會造成皮膚干燥脫皮等不適感。公開號為CN105543313A的申請公開了一種分離人源間充質(zhì)干細胞因子的方法以及一種細胞因子化妝品或藥物，每100ml化妝品或藥物中包含權(quán)利要求6所述的間充質(zhì)干細胞因子凍干粉0.5～1.5g，生物多糖膠0.1～1g，膠原蛋白1～5ml。但是其效果有待進一步改進。技術(shù)實現(xiàn)要素：為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種人源脂肪間充質(zhì)干細胞因子及其制備方法和用途。本發(fā)明人源脂肪間充質(zhì)干細胞因子的制備方法，它包括如下步驟：取人脂肪間充質(zhì)干細胞，置于高輔酶無血清培養(yǎng)基中，培養(yǎng)至細胞匯合度75～85％時，收集上清液，即可；其中，所述高輔酶無血清培養(yǎng)基是每1L添加有輔酶A10mg～28mg、輔羧酶5mg～15mg、黃素腺嘌呤二核苷酸4mg～12mg、尿苷酸磷酸0.5mg～2.5mg的間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基。優(yōu)選地，所述培養(yǎng)是在低氧條件下培養(yǎng)，其中，24h內(nèi)細胞的氧濃度為21％，24h～26h氧濃度由21％均勻降到18％，第27h的氧濃度為18％，第28～36h氧濃度由18％均勻降到8％，第37h的氧濃度為8％，第38h～44h氧濃度由8％均勻降到2％，后持續(xù)于2％的氧濃度下培養(yǎng)；優(yōu)選地，所述的細胞活率為97.3％。本發(fā)明還提供了一種人源脂肪間充質(zhì)干細胞因子濃縮液的制備方法，步驟如下：a、按照前述的方法培養(yǎng)，得培養(yǎng)液上清；b、過濾、濃縮。其中，所述過濾、濃縮方法是：先采用0.22μm濾膜過濾；然后通過40KD超濾膜，收集透析液，再將透析液通過100D超濾膜，收集截留液，得到細胞因子濃縮液,即可。本發(fā)明還提供了前述方法制備得到的人源脂肪間充質(zhì)干細胞因子濃縮液。本發(fā)明還提供了一種人源間充質(zhì)干細胞因子凍干粉的制備步驟，如下：取前述細胞因子濃縮液，凍干，得人源間充質(zhì)干細胞因子凍干粉。其中，凍干前，先加入凍干保護劑；其中，所述凍干保護劑每100ml中含有如下組分：生育酚0.5g、谷胱甘肽0.4g，人白蛋白0.5ml,右旋糖苷3.5g、海藻糖1.5g，甘露醇4g、羥脯氨酸0.05g、精氨酸0.2g、組氨酸0.2g、蛋氨酸0.2g、酪氨酸0.2g、氨基乙酸2g、檸檬酸鈉0.26g。本發(fā)明還提供了前述方法制備得到的人源間充質(zhì)干細胞因子凍干粉。本發(fā)明還提供了前述細胞因子濃縮液或前述細胞因子凍干粉在制備化妝品或者修復皮膚損傷的藥物中的用途。本發(fā)明還提供了一種細胞因子化妝品或藥物，每10ml化妝品或藥物中包含前述間充質(zhì)干細胞因子凍干粉0.005～0.05g，生物多糖膠0.1～0.145g，膠原蛋白溶液0.3ml，葉酸0.05g；優(yōu)選地，每10ml中化妝品或藥物中包含前述的間充質(zhì)干細胞因子凍干粉0.05g，生物多糖膠0.1g，膠原蛋白溶液0.3ml，葉酸0.05g。本發(fā)明分離純化人源脂肪間充質(zhì)干細胞因子的方法，通過特定的低氧培養(yǎng)體系和培養(yǎng)基培養(yǎng)得到高濃度細胞因子培養(yǎng)液，并且可有效去除間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)液中的雜質(zhì)，而且得到的細胞因子純度高，產(chǎn)量高，并且脂肪組織取材容易，不再依托臍帶組織來源，成本低廉。本發(fā)明的間充質(zhì)干細胞因子濃縮液能夠促進表皮細胞營養(yǎng)代謝；促進皮下膠原細胞功能，加速皮膚膠原細胞生長，增加膠原分泌，具有預(yù)防和修復皮膚損傷，延緩衰老，抗皺及美白等功效，而且使用時無皮膚干燥等不適感。本發(fā)明的間充質(zhì)干細胞因子濃縮液與其他原料制備而成的化妝品或藥品，可以增強其皮膚修復、抗老化、祛皺美白等美容護膚功效，具有良好的市場前景。下面通過具體實施方式對本發(fā)明做進一步詳細說明，但是并不是對本發(fā)明的限制，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。附圖說明圖1為P5代ADSCADSC細胞表面標志圖。圖2為燙傷后48h創(chuàng)面。圖3為燙傷后14d創(chuàng)面。圖4左圖為燙傷后18d創(chuàng)面。圖5左圖為燙傷后21d創(chuàng)面。圖2-圖5用藥說明：a為含本發(fā)明細胞因子的凝膠；b為生理鹽水；c為1％SD-Ag霜；d為成纖維細胞生長因子。具體實施方式下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照試劑盒說明書選擇。實驗試劑及儀器：試劑購買廠家CD45-FITCCD90-FITC美國Coulter公司HLA-DR-FITC美國Coulter公司CD105-PE美國Coulter公司DMEM/F12培養(yǎng)基美國GIBICO公司胰蛋白酶美國Sigma公司胎牛血清澳大利亞PAA無血清培養(yǎng)基美國GIBICO公司CoA(輔酶A)Solarbio公司TPP(輔羧酶)Solarbio公司FDA(黃素腺嘌呤二核苷酸)Solarbio公司UTP(尿苷酸磷酸)。Solarbio公司生物多糖膠Solabia公司膠原蛋白溶液(膠原蛋白濃度為10％)山東隆貝生物科技有限公司白蛋白成都蓉生藥業(yè)有限責任公司無血清培養(yǎng)基美國GIBICO公司；EGFELISA試劑盒美國RD公司FGF美國RD公司VEGF美國RD公司實施例1本發(fā)明脂肪間充質(zhì)干細胞因子的制備一、脂肪來源供者簽署脂肪捐贈知情者同意書，采集前檢查供者凝血功能、丙型肝炎病毒抗體、艾滋病病毒Ⅰ/Ⅰ抗體、乙型肝炎病毒抗原和梅毒螺旋體抗體。分離脂肪，保證所采脂肪無病毒污染。二、制備方法脂肪改良培養(yǎng)基和本發(fā)明低氧培養(yǎng)組：1、人脂肪間充質(zhì)干細胞(AADSC)低氧培養(yǎng)上清液的獲取(1)細胞培養(yǎng)：將采集瓶中下層液體用吸管吸出，留下黃色脂肪組織，注意不要吸到黃色脂肪顆粒；加入30ml生理鹽水，振蕩采集瓶，清洗脂肪組織，然后靜置3分鐘，待分層后用吸管吸出下層液體。反復重復此步驟，清洗3次；將采集瓶中清洗后的脂肪組織取出，每3ml放入一個100mm2培養(yǎng)皿中，用手術(shù)剪將脂肪組織剪成1mm3大小碎塊，均勻鋪在培養(yǎng)皿底部；每個培養(yǎng)皿加入10ml人脂肪干細胞無血清培養(yǎng)基，然后將培養(yǎng)皿放置在37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；培養(yǎng)過程中，每3天用倒置顯微鏡觀察細胞生長情況，并將培養(yǎng)上清液吸出，添加10ml新鮮培養(yǎng)基。用倒置顯微鏡觀察細胞生長情況，當觀察到培養(yǎng)皿中細胞生長出來且匯合度達40％時，將培養(yǎng)皿中上清液和脂肪組織吸出，注意不要吸到細胞。加入1ml0.25％胰酶-0.38g/LEDTA溶液消化細胞。在顯微鏡下觀察到細胞變圓，有細胞開始脫離瓶壁時，即可加入5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液器輕輕吹打瓶壁上剩余的細胞，并輕輕吹打，將細胞吹散。將細胞轉(zhuǎn)移到15ml離心管中，1000rpm離心5min。棄上清，加入10ml培養(yǎng)基重懸細胞。此時獲得的細胞為P0代脂肪干細胞。(2)制備種子庫細胞將收獲的細胞以3000個/cm2密度接種到T75培養(yǎng)瓶中，并采用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)。當細胞生長到匯合度75～85％時，收獲細胞，添加10％DMSO，用無血清培養(yǎng)基調(diào)整細胞量至1.0～10.0×106個/ml/管，用程控降溫儀降溫后保存在液氮罐中作為種子庫細胞(即P1代細胞)。對得到的P1代細胞進行活率測定，活率為98.3％。(3)制備人脂肪間充質(zhì)干細胞的上清液按需求量復蘇種子庫細胞，進行擴大培養(yǎng)，復蘇細胞活率為97.3％。將種子庫細胞以3000個/cm2密度接種到T75培養(yǎng)瓶中，并采用無血清培養(yǎng)體系培養(yǎng)。當細胞生長到匯合度75～85％時，對細胞(即P2代細胞)進行傳代，再以8000個/cm2密度接種到T225培養(yǎng)瓶中，在培養(yǎng)瓶中加入40ml高輔酶無血清培養(yǎng)基【培養(yǎng)基中加入了CoA(輔酶A)10mg～28mg/L、TPP(輔羧酶)5mg～15mg/L、FDA(黃素腺嘌呤二核苷酸)4mg～12mg/L、UTP(尿苷酸磷酸)0.5mg～2.5mg/L】，放入三氣培養(yǎng)箱，細胞按上述培養(yǎng)條件正常培養(yǎng)24h，24h后，氧氣濃度在24h～27h期間由21％均勻降到18％，并在18％維持1h，28h后調(diào)節(jié)氧濃度，使之在28h～37h期間由18％均勻降到8％，并持續(xù)在8％培養(yǎng)1h后調(diào)節(jié)氧濃度，使之在38h～44h期間由8％均勻降到2％，并持續(xù)在2％培養(yǎng)10h。當細胞生長到匯合度75～85％時，收集上清液并保存在-40℃低溫冰箱內(nèi)，對細胞(即P3代細胞)進行傳代，如此重復操作直到收獲P5代細胞，按1.0～10.0×107個細胞/ml密度凍存(細胞凍存時加入10％DMSO)，并對最后收集的細胞上清液取樣，進行細胞活率、無菌、支原體、細菌內(nèi)毒素檢測。(4)將收集的P2-P5代細胞的所有無血清培養(yǎng)液在37℃解凍后合并在一起，得到15L液體。脂肪常規(guī)培養(yǎng)實驗組：步驟(3)中培養(yǎng)基為常規(guī)的不添加高輔酶的無血清培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件為正常氧狀態(tài)，其余同脂肪改良培養(yǎng)基和本發(fā)明低氧培養(yǎng)組；脂肪改良培養(yǎng)基和現(xiàn)有低氧培養(yǎng)方法培養(yǎng)后的上清：步驟(3)中的低氧條件為：5％O2、5％CO2、90％N2，其余同脂肪改良培養(yǎng)基和本發(fā)明低氧培養(yǎng)組；脂肪常規(guī)培養(yǎng)基和本發(fā)明低氧培養(yǎng)方法培養(yǎng)后的上清：步驟(3)中培養(yǎng)基為常規(guī)的不添加高輔酶的無血清培養(yǎng)基，其余同脂肪改良培養(yǎng)基和本發(fā)明低氧培養(yǎng)組。2、過濾濃縮對收集的無血清上清液先采用0.22μm濾膜過濾，去除混在上清液中的細胞碎片；再采用分級無菌超濾分離機進行截留，此處所述分級超濾分離機，是由電磁供料泵、耐震壓力表、無菌原料罐、壓力表、無菌管道支架以及100D和40KD無菌有機濾膜等配件連接組成。培養(yǎng)上清液通過濾膜的順序為，先通過50KD有機濾膜，收集低于40KD的細胞因子液；然后將細胞因子液用電磁泵再次打入100d有機濾膜，收集到3L-5L細胞因子濃縮液，根據(jù)工藝需要，通過反復濃縮可以將細胞因子體積濃縮為原培養(yǎng)上清液體積的1/3-1/10，即可。三、實驗結(jié)果1、人脂肪間充質(zhì)干細胞的形態(tài)取P5代細胞懸液進行流式檢測，檢測結(jié)果如表1，圖1所示。表1P5代ADSC細胞的免疫表型細胞免疫表型表達P5代ADSC細胞免疫表型CD90-FITC99.9CD105-PE99.9CD73-FITC99.7HLA-DR-PC51.0CD45-PC70.3CD14/34/79a-PE1.1FITC：代表異硫氰酸熒光素標記；PE：代表藻紅蛋白標記；PC5：藻紅蛋白－花青素5、P75：藻紅蛋白－花青素7。由表1，圖1可見，細胞高表達CD90、CD105、CD73，但不表達CD45、HLA-DR\CD14/34/79a，符合人脂肪間充質(zhì)干細胞的表面標志特征。2、細胞因子濃縮液中的細胞因子含量測定用ELISA試劑盒對表皮生長因子(EGF)、成纖維細胞生長因子(FGF)和血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)為代表的細胞因子進行檢測，試驗中對正常培養(yǎng)條件和常規(guī)無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)所得的培養(yǎng)上清液、和改良后的培養(yǎng)基與低氧濃度培養(yǎng)所得培養(yǎng)上清液進行細胞因子含量測定。再對脂肪培養(yǎng)所得上清液采用100D與40KD聯(lián)合超濾后進行含量測定，以及回收率檢測。試驗均取5L細胞培養(yǎng)上清液，用0.22μm濾膜過濾后進行超濾，直至濃縮液為500mL為止，即濃縮10倍(而現(xiàn)有專利一般濃縮20倍以上)，取樣進行含定比較。檢測結(jié)果見表2。表2細胞因子含量對比由表2可見，與組1采用常規(guī)的培養(yǎng)方法(培養(yǎng)基為常規(guī)培養(yǎng)基，且氧濃度為正常氧濃度)相比，本發(fā)明改進的培養(yǎng)方式(組2)可以有效提高細胞因子表達水平，進而提高最終得到的產(chǎn)物中的生長因子含量；與現(xiàn)有低氧培養(yǎng)方法相比(組3)，本發(fā)明改進的低氧培養(yǎng)方式(組4)可以有效提高細胞因子的表達水平，進而提高最終得到的產(chǎn)物中的生長因子含量；與組1采用常規(guī)的培養(yǎng)方法(培養(yǎng)基為常規(guī)培養(yǎng)基，且氧濃度為正常氧濃度)相比，本發(fā)明同時改進培養(yǎng)基和采用低氧培養(yǎng)(組4)的方法，最終得到的產(chǎn)物中的生長因子含量高。實驗結(jié)果說明，本發(fā)明改良后的培養(yǎng)基與低氧濃度培養(yǎng)方式，均可以有效提高上清中生長因子的含量，獲得上清后用濾膜超濾法進一步純化，得到的細胞培養(yǎng)上清液的細胞因子含量均較高，回收率高。而且發(fā)明中采用脂肪得到細胞培養(yǎng)上清液，所得到的培養(yǎng)上清液中細胞因子量高且穩(wěn)定，濃縮倍數(shù)少，節(jié)約時間，利于工業(yè)化，用于美容護膚，優(yōu)勢明顯。實施例2本發(fā)明間充質(zhì)干細胞因子的制備1、取實施例1制備得到的細胞因子濃縮液，通過反復超濾調(diào)整細胞因子濃縮液濃度，使?jié)饪s液中EGF含量為6ug/ml。2、在細胞因子濃縮液中加入一定量凍干保護劑，使EGF的含量為0.5ug/ml，并調(diào)節(jié)pH值為6.0。其中，凍干保護劑每100ml中含有如下組分：生育酚0.5g、谷胱甘肽0.4g，人白蛋白0.5ml,右旋糖苷3.5g、海藻糖1.5g，甘露醇4g、羥脯氨酸0.05g、精氨酸0.02g、組氨酸0.2g、蛋氨酸0.2g、酪氨酸0.2g、氨基乙酸2g、檸檬酸鈉0.26g。凍干條件為：溫度在-25～-40℃，壓強維持在10-30pa，時間為18-28h，得到細胞因子凍干粉。3、細胞因子凍干粉的活性測定采用細胞增值法/MTT比色法測定凍干前溶液的EGF和凍干后的EGF，其EGF的活性保持率為97.1％。細胞因子凍干粉水分經(jīng)測定小于1.3％。本發(fā)明的凍干保護劑可以有效保護細胞因子的活性，而且凍干時間短，生產(chǎn)效率較高。實施例3本發(fā)明細胞因子化妝品或藥物的制備取實施例2制備的細胞因子凍干粉，加入生物多糖膠、膠原蛋白、葉酸、無菌超純水制成組合物，該組合物可以加入到常規(guī)護膚品中，也可單獨作為護膚品使用。其中10ml水溶液中含細胞因子凍干粉0.05g，生物多糖膠0.1g，膠原蛋白無菌溶液0.3ml、葉酸0.05g。實施例4本發(fā)明細胞因子化妝品或藥物的制備取實施例2制備的細胞因子凍干粉，加入生物多糖膠、膠原蛋白、葉酸、無菌超純水制成組合物。其中10ml水溶液中含細胞因子凍干粉0.025g，生物多糖膠0.125g，膠原蛋白無菌溶液0.3ml、葉酸0.05g。實施例5本發(fā)明細胞因子化妝品或藥物的制備取實施例2制備的細胞因子凍干粉，加入生物多糖膠、膠原蛋白、葉酸、無菌超純水制成組合物。其中10ml水溶液中含細胞因子凍干粉0.005g，低分子量生物多糖膠0.145g，膠原蛋白無菌溶液0.3ml、葉酸0.05g。以下通過試驗例具體說明本發(fā)明的有益效果。試驗例1本發(fā)明間充質(zhì)干細胞因子的凍干保護劑篩選一、試驗方法1、取實施例1制備得到的細胞因子濃縮液，通過超濾調(diào)整濃度，使?jié)饪s液中EGF含量為0.6ug/ml。2、在細胞因子濃縮液中加入一定量的凍干保護劑，使EGF的含量為0.5ug/ml，并調(diào)節(jié)pH值為6.0。凍干保護劑配方分別如下所示：配方1：100ml中含有如下組分：生育酚0.5g、谷胱甘肽0.4g，人白蛋白0.5ml,右旋糖苷3.5g、海藻糖1.5g，甘露醇4g、羥脯氨酸0.05g、精氨酸0.0.2g、組氨酸0.2、蛋氨酸0.2、絡(luò)氨酸0.2、氨基乙酸2g、檸檬酸鈉0.26g。配方2：100ml中含有如下組分：抗壞血酸(VC)1.0g，人白蛋白0.5ml,右旋糖苷3.8g、海藻糖3.0g，甘氨酸0.1、精氨酸0.17g、氨基乙酸4g、檸檬酸鈉0.26g。3、在壓強為10～30pa，-25～-40℃下進行凍干。二、試驗結(jié)果見表3。表3兩種凍干保護劑比較組分凍干時間EGF活性凍干粉所含水分(n＝3)配方130h97.1％1.2％配方235h94.2％1.7％由表3可見，使用本發(fā)明凍干保護劑配方(配方1)可以顯著增加EGF活性，而且凍干粉中水分含量低，使凍干粉更易于保存。因此，本發(fā)明的凍干保護劑用于凍干時效果好，具有顯著優(yōu)勢。試驗例2本發(fā)明細胞因子化妝品或藥物的配方篩選一、方法選取體重250g左右雄性Wistar大鼠30只。經(jīng)脫毛、局麻后，用3cm沸水加熱鐵棒緊貼背部皮膚，持續(xù)7s，每只大鼠背部造成4個創(chuàng)面。燙傷后立即腹腔注射乳酸林格氏液5ml抗休克,創(chuàng)面經(jīng)病理證實為深Ⅰ度。大鼠24只隨機分為兩組：正常對照組(6只)和實驗組(24只)，實驗組分為4組，每組6只，實驗組動物分別涂抹實施例3、4、5的藥物，每日一次。于燙傷后10d、14d、18d、21d測量創(chuàng)面愈合率。二、結(jié)果1、創(chuàng)面愈合率燙傷后10d、14d、18d、21d的創(chuàng)面愈合率如下表所示：表4各組創(chuàng)面愈合率比較(％,x±s，n＝6)*：與生理鹽水相比，P<0.05；#：與最佳組(實施例3)相比，P<0.05。由上表可以看出，本發(fā)明三個實驗組的愈合效果顯著優(yōu)于對照組，說明三個組合的藥品/化妝品均可以有效促進創(chuàng)面愈合，其中，實施例3所示的組合方式的愈合效果最佳，顯著優(yōu)于另外兩個實驗組。試驗例3本發(fā)明間充質(zhì)干細胞因子的應(yīng)用一、方法選取體重250g左右雄性Wistar大鼠48只。經(jīng)脫毛、局麻后，用3cm沸水加熱鐵棒緊貼背部皮膚，持續(xù)7s，每只大鼠背部造成4個創(chuàng)面。燙傷后立即腹腔注射乳酸林格氏液5ml抗休克,創(chuàng)面經(jīng)病理證實為深Ⅰ度。大鼠4處創(chuàng)面分別給予含本發(fā)明細胞因子的凝膠、按照公開號為CN105543313A的申請的實施例4制備的藥物、成纖維細胞生長因子噴霧劑、1％SD-Ag霜和生理鹽水，每日一次。大鼠48只隨機分為兩組：正常對照組(6只)和實驗組(42只)，實驗組分為7組，每組6只，其中試驗組每組又隨機分為A、B二個小組，每小組3只，A小組與B小組前后兩個創(chuàng)面用藥相交換，以排除部位不同的干擾。7組大鼠分別于燙傷后4h、12h、24h、48h、7d、14d、21d處死，取創(chuàng)面全層皮膚測量創(chuàng)面愈合率和創(chuàng)面微血管密度。二、結(jié)果2.1創(chuàng)面愈合率燙傷后第10d，各組間創(chuàng)面愈合率沒有顯著差別，第14d、18d和21d時，含本發(fā)明細胞因子的凝膠組和成纖維細胞生長因子組創(chuàng)面愈合率顯著大于SD-Ag和生理鹽水組(P<0.05)，而含本發(fā)明細胞因子的凝膠組與成纖維細胞生長因子組、SD-Ag組與生理鹽水組間無顯著性差異。見表5、圖2～圖5。表5各組創(chuàng)面愈合率比較(％,x±s，n＝6)*：與生理鹽水相比，P<0.05；#：與1％SD-Ag霜相比，P<0.05。2.2創(chuàng)面微血管密度(MVD)燙傷后各組創(chuàng)面組織微血管密度逐漸增加，第21d達高峰。在燙傷后第7d，含本發(fā)明細胞因子的凝膠創(chuàng)面MVD顯著多于SD-Ag和生理鹽水組，燙傷后第14d和21d，含本發(fā)明細胞因子的凝膠組和成纖維細胞生長因子組與SD-Ag和生理鹽水組相比，創(chuàng)面MVD顯著增加(P<0.05)，含本發(fā)明細胞因子的凝膠組與成纖維細胞生長因子組間以及SD-Ag組與生理鹽水組間相比，差異無顯著性意義，見表6。表6創(chuàng)面微血管密度變化(條/mm2，x±s，n＝6)注：*：與生理鹽水相比，P<0.05；#：與1％SD-Ag霜相比，P<0.05。由表5、表6以及圖2～圖5可知，本發(fā)明藥物/化妝品促進創(chuàng)面愈合的能力優(yōu)良，優(yōu)于市售的藥物成纖維細胞生長因子噴霧劑和1％SD-Ag霜，同時也優(yōu)于現(xiàn)有文獻報道的類似產(chǎn)品，修復效果良好，應(yīng)用前景優(yōu)良。綜上，本發(fā)明方法制備得到的濃縮液脂肪間充質(zhì)干細胞因子含量高，質(zhì)量穩(wěn)定，與其他材料在特定配比下組合物制備的產(chǎn)品，修復皮膚損傷的效果好；而且本發(fā)明方法簡單易行、適合大規(guī)模生產(chǎn)，具有良好的市場前景。當前第1頁1 2 3