本發(fā)明涉及一類結(jié)構(gòu)新穎的含異噁唑雜環(huán)的二茂鐵甲酸衍生物及含該類衍生物的藥物組合物及其用途。具體而言，該類二茂鐵甲酸衍生物對(duì)肺癌細(xì)胞株A549、大腸癌細(xì)胞株HCT-116和乳腺癌細(xì)胞株MCF-7具有較強(qiáng)的抑制活性。可作為治療腫瘤、癌癥等疾病的藥物或先導(dǎo)化合物。
背景技術(shù)：
：癌癥已成為世界范圍內(nèi)最重要的致死性疾病。癌癥可于任何年齡在各種器官及組織中發(fā)生，導(dǎo)致死亡的主要癌癥種類有：肺癌、胃癌、肝癌、結(jié)腸癌和乳腺癌等。近年來(lái)，肺癌成為發(fā)病率最高的惡性腫瘤。根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)統(tǒng)計(jì)：2008年全世界被診斷為肺癌的人數(shù)為1,600,000人，占癌癥總發(fā)病人數(shù)的13%，死亡人數(shù)1,400,000例，占癌癥總死亡人數(shù)的18%(JemalA,etal.CACancerJ.Clin.2011,61:69-90)；2010年，美國(guó)新增肺癌患者222,520人，死亡人數(shù)157,330例，其中死于非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者占肺癌總死亡人數(shù)的85%(JemalA,etal.CACancerJ.Clin.2010,60:277-300)。從我國(guó)近年來(lái)城鄉(xiāng)前10位惡性腫瘤構(gòu)成來(lái)看，肺癌已代替肝癌成為我國(guó)首位致死的惡性腫瘤，占全部惡性腫瘤死亡的22.7%(SheJ,etal.Chest.2013,143(4):1117-1126)。乳腺癌是全世界婦女目前面臨的最為常見(jiàn)的癌癥,每年約有138萬(wàn)乳腺癌新發(fā)病例及45.8萬(wàn)例死亡。據(jù)報(bào)道：美國(guó)每年新增232,340例乳腺癌患者。2011年，美國(guó)有接近40,000女性死于乳腺癌；印度每年有100,000新增乳腺癌患者被確診，而且每28位女性中有1位會(huì)患乳腺癌(YadavDK,etal.Curr.Med.Chem.2014,21(9):1160-1170)；在我國(guó)，乳腺癌也成為女性最常見(jiàn)的癌癥，截止2008年，我國(guó)總計(jì)有169,452例新發(fā)乳腺癌患者，449,08例死亡，分別占世界的12.2%和9.6%。我國(guó)乳腺癌全年檢出人數(shù)是歐洲(2008年共計(jì)332,000例，總?cè)丝谒膬|九千八百萬(wàn))的一半，與美國(guó)(2008年共計(jì)182,000例，總?cè)丝谌齼|零四百萬(wàn))基本相當(dāng)。如果這一趨勢(shì)保持不變，到2021年，我國(guó)乳腺患者將高達(dá)250萬(wàn)，發(fā)病率將從不到60例/10萬(wàn)女性(年齡在55歲到69歲之間)增加到超過(guò)100例/10萬(wàn)女性(FanL,etal.LancetOncol.2014,15:e279-289)。就全球來(lái)看，女性患乳腺癌數(shù)量在不斷增加，乳腺癌對(duì)婦女的生存造成巨大威脅。結(jié)腸癌和直腸癌統(tǒng)稱大腸癌，是消化道常見(jiàn)惡性腫瘤，發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，平均每年遞增2%，在歐美國(guó)家病死率居腫瘤死亡的第2位，2003年美國(guó)大腸癌新發(fā)展病例數(shù)和死亡率均居第3位(徐富星.國(guó)際消化病雜志.2006,26(6):365-366)。近年來(lái)我國(guó)大腸癌的發(fā)病率以極快的速度上升，就全國(guó)范圍而言，大腸癌已上升至惡性腫瘤發(fā)病的第4位，在一些經(jīng)濟(jì)發(fā)展較快的城市中，如上海已高居第2位(李德録,等。中國(guó)腫瘤.2011,20(6):413-418)。然而大部分癌癥患者發(fā)覺(jué)病情時(shí)已是中期至晚期，臨床治療總體效果較差，尤其是多藥耐藥性的不斷出現(xiàn)，使得癌癥的治療困難重重。因此，開發(fā)出活性高、副作用低的新型抗癌藥物來(lái)滿足臨床的需求迫在眉睫。二茂鐵（Ferrocene）是一種具有獨(dú)特的夾心結(jié)構(gòu)化合物，二價(jià)鐵離子被夾在兩個(gè)平面環(huán)之間互為交錯(cuò)構(gòu)型。二茂鐵及其衍生物因其自身的特點(diǎn)：(1)芳香性，能發(fā)生取代反應(yīng)，易進(jìn)行修飾；(2)親脂性，能夠通過(guò)細(xì)胞膜與細(xì)胞內(nèi)的各種酶相互作用；(3)低毒性，能夠在體內(nèi)進(jìn)行代謝。二茂鐵衍生物在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域顯示出廣泛的藥理活性，尤其是在抗腫瘤領(lǐng)域藥理活性尤為突出：A.Rosenefeld等研究表明二茂鐵修飾的順鉑衍生物具有相當(dāng)強(qiáng)的抑制白血病活性，而且其腎毒比cis-DDP低的多(A.Rosenfeld,etal.Inorg.Chim.Acat.1992,201:219)；E.W.Neuse等人研究表明二茂鐵衍生物具有獨(dú)特的抗腫瘤、抗癌活性(E.W.Neuse.J.Inorga.Organoment.PolymersandMaterials.2005,15(1):3-32)；X.F.Huang等合成了一系列含吡唑環(huán)的二茂鐵衍生物，活性研究表明部分化合物具有比5-氟尿嘧啶強(qiáng)的抗癌活性(X.F.Huang,etal.J.Organomet.Chem.2012,706-707:113-123)；W.Liu等合成了一系列二茂鐵脲衍生物，活性研究表明部分化合物具有較強(qiáng)的抑制HIV-1蛋白酶活性(W.Liu,etal.Appl.Organomet.Chem.2012,26:189-193)；美國(guó)專利申請(qǐng)8426462B2公開了含芳香環(huán)的二茂鐵衍生物對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231和前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3具有很強(qiáng)的抑制活性。二茂鐵作為抗腫瘤藥物設(shè)計(jì)合成的先導(dǎo)化合物(E.W.Neuse.J.Inorg.Organoment.P.2005,15(1):3-32;S.S.Braga,etal.Organometallics,2013,32:5626-5639)。異噁唑雜環(huán)是一種具有潛在生物活性的藥效團(tuán)，通常被引入藥物分子以提高活性。在我們前期研究中，我們將異噁唑雜環(huán)引入二茂鐵母核，合成了一系列結(jié)構(gòu)新穎的含異噁唑雜環(huán)的二茂鐵衍生物，并研究了其初步的體外抑肺癌細(xì)胞株A549、大腸癌細(xì)胞株HCT-116和乳腺癌細(xì)胞株MCF-7活性，結(jié)果表明大部分化合物對(duì)A549，HCT116和MCF-7細(xì)胞株具有很強(qiáng)的抑制活性(雍建平，等.申請(qǐng)公開號(hào)CN103601762A)。基于前期良好的研究基礎(chǔ)，為了豐富該類化合物的種類，我們繼續(xù)設(shè)計(jì)合成該類含異噁唑雜環(huán)的二茂鐵甲酸衍生物，以期發(fā)現(xiàn)新的抗癌先導(dǎo)化合物或候選化合物。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于，提供了如式(I)所示的含異噁唑雜環(huán)的二茂鐵甲酸衍生物及其制備方法用途。其能體外抑大腸癌細(xì)胞株HCT-116、人肺癌細(xì)胞株A549和乳腺癌細(xì)胞株MCF-7研究結(jié)果表明：該類化合物對(duì)大腸癌細(xì)胞株HCT-116、人肺癌細(xì)胞株A549和乳腺癌細(xì)胞株MCF-7具有較強(qiáng)的抑制活性?？勺鳛榭拱┧幬锏暮蜻x化合物或先導(dǎo)化合物。本發(fā)明通過(guò)如下的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：一種式(I)所示的含異噁唑雜環(huán)的二茂鐵甲酸衍生物，或其藥學(xué)上可接受的鹽，或組合物或溶劑化物：(I)其中：R選自鹵素、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基或鹵代C1-6烷基；n為0-5的整數(shù)。當(dāng)n大于1時(shí)，R可以為相同或不同的基團(tuán)。Z選自NR1，S或O，其中R1為氫或C1-6烷基；根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案，式(I)中：Z優(yōu)選為NH或O；R選氟、氯、溴、氰基、甲基、乙基、叔丁基、甲氧基、硝基或三氟甲基，n優(yōu)選為1或2或3。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案，式(I)中：R優(yōu)選為2-氟、2-溴、3-溴、4-乙基、4-叔丁基、2,3,5-三甲基、2-甲氧基、3-甲氧基、2-三氟甲基、4-硝基、4-氰基。根據(jù)本發(fā)明，所述式(I)所示的二茂鐵甲酸衍生物優(yōu)選為下述任一種化合物：。式(I)所示的二茂鐵甲酸衍生物，可以分別選擇與藥學(xué)上可接受的酸形成藥學(xué)上可接受的鹽。其中術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”包括但不限于與無(wú)機(jī)酸形成的鹽，如鹽酸鹽、磷酸鹽、二磷酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、亞磺酸鹽、硝酸鹽、及其類似鹽；也包括與有機(jī)酸形成的鹽，如乳酸、草酸、蘋果酸鹽、馬來(lái)酸鹽、富馬酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、磺酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、2-羥乙基磺酸鹽、苯甲酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、三氟乙酸或氨基酸和鏈烷酸鹽如醋酸鹽，HOOC-(CH2)n-COOH（其中n是1-4的整數(shù)）的鹽，及其類似鹽。類似地，藥學(xué)上可接受的陽(yáng)離子包括但不限于鈉、鉀、鈣、鋁、鋰或銨。術(shù)語(yǔ)“溶劑化物”包括水合物和醇合物。本發(fā)明還提供一種藥物組合物，其包括前述任一項(xiàng)的式(I)所示的含異噁唑雜環(huán)的二茂鐵甲酸衍生物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物，以及至少一種藥學(xué)上可接受的、惰性的、無(wú)毒的賦形劑或載體或稀釋劑。根據(jù)所述的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物還包含一種或多種選自填充劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、助流劑、泡騰劑、矯味劑、防腐劑和包衣材料的藥學(xué)可接受的輔助材料。本發(fā)明還提供一種藥物制劑，其包含前述的式(I)所示的含異噁唑雜環(huán)的二茂鐵甲酸衍生物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物，以及至少一種藥學(xué)上可接受的、惰性的、無(wú)毒的賦形劑或載體或稀釋劑。本發(fā)明提供一種藥物制劑，其特征在于，所述制劑優(yōu)選為固體口服制劑、液體口服制劑或注射劑。根據(jù)本發(fā)明的藥物制劑，所述的制劑選自片劑、分散片、腸溶片、咀嚼片、口崩片、膠囊、顆粒劑、口服溶液劑、注射用水針、注射用凍干粉針、大輸液或小輸液。本發(fā)明還提供一種用作藥物的式(I)所示的含異噁唑雜環(huán)的二茂鐵甲酸衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽，尤其是一種有效用于治療腫瘤/癌癥的藥物或先導(dǎo)化合物。本發(fā)明還提供一種前述任意一項(xiàng)的式(I)所示的含異噁唑雜環(huán)的二茂鐵甲酸衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物在制備用于抗腫瘤或抗癌藥物中的應(yīng)用。根據(jù)本發(fā)明所述的應(yīng)用，其中所述的腫瘤或癌癥選自：膀胱癌，非小細(xì)胞肺癌，卵巢癌，乳腺癌，胃癌，食道癌，肺癌，頭頸癌，結(jié)腸癌，咽癌，和胰腺癌等，更優(yōu)選為非小細(xì)胞肺癌。本發(fā)明還提供了一種前述任一項(xiàng)式(I)所示的含異噁唑雜環(huán)的二茂鐵甲酸衍生物和/或藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物在制備用于抗腫瘤或癌癥藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了一種式(I)所示的含異噁唑雜環(huán)的二茂鐵甲酸衍生物的制備方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步驟：二茂鐵甲酸和3-取代苯基-5-羥甲基-異噁唑(式III)或3-取代苯基-5-氨甲基-異噁唑(式IV)，在干燥的有機(jī)溶劑和酯縮合劑體系中反應(yīng)制備得到式I-1所示的二茂鐵脂類化合物或式I-2所示的二茂鐵酰胺類化合物。同時(shí)，對(duì)于Z為其他取代基的式(I)化合物，例如Z為S時(shí)，可以丙炔硫醇為原料，按照化合物(III)的合成過(guò)程制備3-取代苯基-5-巰基甲基-異噁唑，接著采用化合物I-1的合成過(guò)程制備。根據(jù)本發(fā)明，所述反應(yīng)溫度為-20℃至回流條件，優(yōu)選室溫至回流條件。根據(jù)本發(fā)明，所述有機(jī)溶劑為芳烴、鹵代烴、四氫呋喃(THF)、二甲亞砜(DMSO)、二氧六環(huán)、乙腈、DMF及離子液體。優(yōu)選地，所述的溶劑選自苯，甲苯、二甲苯、二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃、乙腈或DMF，更優(yōu)選四氫呋喃。根據(jù)本發(fā)明：所述的縮合劑(1)為DCC/DMAP或DCC,HOBt/DMAP或DCC/NMM或DCC/HATU等。根據(jù)本發(fā)明，所述式(III)的中間體3-取代苯基-5-羥甲基-異噁唑通過(guò)如下的方法制備：(1)取代苯甲醛與羥胺或羥胺鹽酸鹽在甲醇/水體系中，在碳酸鈉的催化下反應(yīng)生成相應(yīng)的苯甲醛肟；(2)將步驟(1)制得的苯甲醛肟與丙炔醇在N-溴丁二酰亞胺(NCS)和堿性縛酸劑的作用下通過(guò)1,3-偶極環(huán)加成反應(yīng)形成式(III)異噁唑化合物。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選地，所述的堿性縛酸劑選自有機(jī)堿或無(wú)機(jī)堿，所述有機(jī)堿選自三乙胺、三丙胺、DMAP、DMF、N-甲基嗎啉等；所述的無(wú)機(jī)堿選自碳酸鉀、氫化鈉、碳酸鈉等。更優(yōu)選的堿性縛酸劑為三乙胺。所述反應(yīng)溫度為0℃至回流溫度，優(yōu)選為室溫至回流溫度。根據(jù)本發(fā)明，所述式(IV)的中間體3-取代苯基5-氨甲基-異噁唑通過(guò)如下的方法制備：(3)式(III)的異噁唑化合物(優(yōu)選通過(guò)前述方法獲得)與甲磺酰氯反應(yīng)獲得式(V)化合物；根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案，步驟(3)中，所述磺酰氯選自：甲磺酰氯、苯磺酰氯、取代苯磺酰氯(如鹵代苯磺酰氯、烷基苯磺酰氯)等，更優(yōu)選為甲磺酰氯。所述反應(yīng)溫度為-5℃至回流溫度，優(yōu)選室溫至回流溫度。所述反應(yīng)溶劑選自苯、甲苯、鹵代芳烴、鹵代烷烴(如氯仿或二氯甲烷)、四氫呋喃、乙腈及離子液體。更優(yōu)選地，所述反應(yīng)在二氯甲烷體系中回流反應(yīng)。(4)式(V)化合物與疊氮化鈉反應(yīng)，優(yōu)選在DMF體系中，60℃溫度下反應(yīng)獲得式(VI)化合物；(5)式(VI)化合物與氯化銨及鋅粉、鐵粉或鈀碳催化還原制備式(IV)化合物，優(yōu)選所述催化劑在無(wú)機(jī)酸條件下進(jìn)行催化，優(yōu)選為鹽酸或硫酸，所述催化劑優(yōu)選為鋅粉和氯化銨。步驟(5)中優(yōu)選的反應(yīng)溶劑是水或有機(jī)溶劑(例如醇類，鹵代烴類，芳烴類等)或其混合物，優(yōu)選為乙醇和水的反應(yīng)體系。優(yōu)選的合成路線如下所示：同時(shí)，對(duì)于Z為其他取代基的式(I)化合物，例如Z為S時(shí)，可采用丙炔基硫醇為原料，按照化合物(III)的合成過(guò)程制備3-取代苯基-5-巰基甲基-異噁唑，接著采用化合物I-1的合成過(guò)程來(lái)制備。術(shù)語(yǔ)”有效量”指的是，所述至少一種化合物和/或至少一種藥學(xué)上可接受的鹽對(duì)于能有效“治療”個(gè)體的一種疾病或不適的用量。如果是癌癥時(shí)，有效量能減少癌癥或腫瘤細(xì)胞的數(shù)目；縮小腫瘤的大小；抑制或阻止腫瘤細(xì)胞向周邊器官的侵入，例如，腫瘤蔓延入軟組織或骨骼中；抑制或阻止腫瘤的轉(zhuǎn)移；抑制或阻止腫瘤的生長(zhǎng)；一定程度上減輕一種或多種與癌癥相關(guān)的癥狀；減少發(fā)病率和死亡率；提高生活質(zhì)量；或者是上述效果的結(jié)合。有效量可以是通過(guò)抑制EGFR活性來(lái)減少疾病癥狀的用量。對(duì)于癌癥治療，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的效果可以通過(guò)評(píng)估如存活期、疾病進(jìn)展時(shí)間(TimetoDiseaseProgression，TTP)、反應(yīng)率(ResponseRates，RR)、持續(xù)反應(yīng)期和/或生活質(zhì)量來(lái)測(cè)量。專業(yè)人員已經(jīng)意識(shí)到，有效量可以隨著給藥的途徑、賦形劑的劑量、以及與其他藥物的合用而變化。術(shù)語(yǔ)“有效量”還可指得是所述至少一種化合物和/或其至少一種藥學(xué)上可接受的鹽對(duì)抑制EGFR的過(guò)度表達(dá)和/或活性過(guò)高有效的劑量。本發(fā)明所述的二茂鐵甲酸衍生物的制備方法，其特征在于，二茂鐵甲酸衍生物通過(guò)以二茂鐵甲酰氯分別和3-取代苯基-5-羥甲基-異噁唑(式III)或3-取代苯基-5-氨甲基-異噁唑(式IV)反應(yīng)來(lái)制備；其中二茂鐵甲酰氯通過(guò)以二茂鐵甲酸和二氯亞砜或三氯氧磷或五氯化磷或草酰氯反應(yīng)制備；如果需要，可以將(III)和(IV)中的任何官能團(tuán)予以保護(hù)；并且其后，如果有必要以任何次序：(1)除去任何保護(hù)劑，（2）形成式(I)化合物的藥物組合物。本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提供式(I)化合物、制備方法及醫(yī)藥用途，該類化合物對(duì)三種EGFR高表達(dá)的腫瘤株（A549,HCT116和MCF-7）均具有較強(qiáng)的抑制活性，其中化合物YJP-2抑制A549,HCT116和MCF-7腫瘤株的IC50分別為：244.7,401.8和699.3μM；化合物YJP-4對(duì)A549和MCF-7腫瘤株具有很強(qiáng)的抑制活性，其IC50分別為：184.2和139.2μM；化合物YJP-9對(duì)三種腫瘤株A549,HCT116和MCF-7均具有很強(qiáng)的抑制活性，其IC50分別為：290.2,246.9和144.0μM；該類化合物可以作為治療腫瘤、癌癥等疾病的候選藥物或先導(dǎo)化合物。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。需要說(shuō)明的是，下述實(shí)施例不能作為對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，任何在本發(fā)明基礎(chǔ)上做出的改進(jìn)都不違背本發(fā)明的精神。其中，中間體和目標(biāo)化合物的合成過(guò)程均以實(shí)施例中的代表說(shuō)明，其余的中間體和目標(biāo)化合物的合成過(guò)程同代表化合物。儀器與試劑：AVANCEIII核磁共振儀(400MHz,DMSO-d6,TMS為內(nèi)標(biāo))，離子阱液質(zhì)連用儀(DECAX-30000LCQDecaXP)，ShimadzuFTIR-8400S(日本島津制作所生產(chǎn))，XT5數(shù)字顯示顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀(北京市科儀電光儀器廠制造，溫度未經(jīng)校正)，可調(diào)波長(zhǎng)式微孔板酶標(biāo)儀(MolecularDeviesSPECTRAMAX190).實(shí)施例1中間體3-取代苯基-5-羥甲基-異噁唑(II)及3-取代苯基-5-氨甲基-異噁唑(III)的合成以取代苯甲醛為原料，通過(guò)合成肟、1,3-偶極環(huán)加成反應(yīng)、甲磺酰酯化反應(yīng)、疊氮化、還原反應(yīng)制備(R為2-氟、2-溴、3-溴、2,4,6-三甲基、4-叔丁基、4-乙基、2-甲氧基、3-甲氧基、2-三氟甲基、4-硝基或4-氰基；n為1，或3),具體見(jiàn)如下路線：中間體3-取代苯基-5-羥甲基-異噁唑(II)及3-取代苯基-5-氨甲基-異噁唑(III)的具體的合成過(guò)程詳見(jiàn)申請(qǐng)人在前期申請(qǐng)的公開號(hào)為CN103360382A、CN103664991A和CN103601762A。實(shí)施例2二茂鐵甲酸-[(3-(4-乙基-苯基)-異噁唑-5-基)-甲氧基-]-酯的合成過(guò)程：將0.23g(1mmol)的二茂鐵甲酸和8mL干燥的THF加入50mL單口圓底燒瓶，攪拌下將0.206g(1mmol)DCC和0.122g(1mmol)DMAP加入反應(yīng)體系，0℃反應(yīng)30min后，接著將0.203g(1mmol)3-(4-乙基-苯基)-5-羥甲基-異噁唑加入反應(yīng)體系，0℃反應(yīng)30min后自然升至室溫反應(yīng)，整個(gè)反應(yīng)過(guò)程在氮?dú)獗Ｗo(hù)下進(jìn)行。TLC檢測(cè)反應(yīng)完成后，反應(yīng)液減壓濃縮，殘?jiān)蛛x(V（石油醚）：V（乙酸乙酯）=5:1~2:1)即得目標(biāo)化合物二茂鐵甲酸-[(3-(4-乙基-苯基)-異噁唑-5-基)-甲氧基-]-酯(YJP-1)。其余的化合物按照二茂鐵甲酸-[(3-(4-乙基-苯基)-異噁唑-5-基)-甲氧基-]-酯的合成過(guò)程合成出（YJP-2，YJP-3，YJP-4，YJP-5,YJP-6,YJP-7,YJP-8,YJP-9,YJP-10,YJP-21）。實(shí)施例3N-[(3-(4-乙基-苯基)-異噁唑-5-基)-甲基]-二茂鐵甲酰胺的合成過(guò)程將0.23g(1mmol)的二茂鐵甲酸和8mL干燥的THF加入50mL單口圓底燒瓶，攪拌下將0.206g(1mmol)DCC，0.135g(1mmol)HOBT和0.122g(1mmol)DMAP加入反應(yīng)體系，0℃反應(yīng)30min后，接著將0.202g(1mmol)3-(4-乙基-苯基)-異噁唑-5-羥甲基-甲胺加入反應(yīng)體系，0℃反應(yīng)30min后自然升至室溫反應(yīng)，整個(gè)反應(yīng)過(guò)程在氮?dú)獗Ｗo(hù)下進(jìn)行。TLC檢測(cè)反應(yīng)完成后，反應(yīng)液減壓濃縮，殘?jiān)蛛xV（石油醚）：V（乙酸乙酯）=5:1~2:1）即得目標(biāo)化合物N-[(3-(4-乙基-苯基)-異噁唑-5-基)-甲基]-二茂鐵甲酰胺(YJP-11)。其余的化合物按照N-[(3-(4-乙基-苯基)-異噁唑-5-基)-甲基]-二茂鐵甲酰胺的合成過(guò)程合成出（YJP-12，YJP-13，YJP-14,YJP-15,YJP-16,YJP-17,YJP-18,YJP-19,YJP-20,YJP-22）。其結(jié)構(gòu)均通過(guò)1HNMR,ESI-MS等分析方法進(jìn)行了表征。優(yōu)選出的化合物的物性常數(shù)及光譜數(shù)據(jù)以列表的形式進(jìn)行說(shuō)明：優(yōu)選出的化合物的編號(hào)及名稱如下表所示：表1優(yōu)選化合物代號(hào)及名稱代號(hào)名稱代號(hào)名稱YJP-1二茂鐵甲酸-{[3-(4-乙基苯基)-異噁唑-5-基]-甲氧基}-酯YJP-11N-{[3-(4-乙基苯基)-異噁唑-5-基]-甲氨基}-二茂鐵甲酰胺YJP-2二茂鐵甲酸-{[3-(4-叔丁基-苯基)-異噁唑-5-基]-甲氧基}-酯YJP-12N-{[3-(4-叔丁基-苯基)-異噁唑-5-基]-甲氨基}-二茂鐵甲酰胺YJP-3二茂鐵甲酸-{[3-(2,4,6-三甲基苯基)-異噁唑-5-基]-甲氧基}-酯YJP-13N-{[3-(24,6-三甲基苯基)-異噁唑-5-基]-甲氨基}-二茂鐵甲酰胺YJP-4二茂鐵甲酸-{[3-(2-三氟甲基苯基)-異噁唑-5-基]-甲氧基}-酯YJP-14N-{[3-(2-三氟甲基苯基)-異噁唑-5-基]-甲氨基}-二茂鐵甲酰胺YJP-5二茂鐵甲酸-{[3-(4-硝基苯基)-異噁唑-5-基]-甲氧基}-酯YJP-15N-{[3-(4-硝基苯基)-異噁唑-5-基]-甲氨基}-二茂鐵甲酰胺YJP-6二茂鐵甲酸-{[3-(2-甲氧基苯基)-異噁唑-5-基]-甲氧基}-酯YJP-16N-{[3-(2-甲氧基苯基)-異噁唑-5-基]-甲氨基}-二茂鐵甲酰胺YJP-7二茂鐵甲酸-{[3-(3-甲氧基苯基)-異噁唑-5-基]-甲氧基}-酯YJP-17N-{[3-(3-甲氧基苯基)-異噁唑-5-基]-甲氨基-}-二茂鐵甲酰胺YJP-8二茂鐵甲酸-{[3-(2-氟苯基)-異噁唑-5-基]-甲氧基}-酯YJP-18N-{[3-(2-氟苯基)-異噁唑-5-基]-甲氨基-}-二茂鐵甲酰胺YJP-9二茂鐵甲酸-4-{[3-(2-溴苯基)-異噁唑-5-基]-甲氧基}-酯YJP-19N-{[3-(2-溴苯基)-異噁唑-5-基]-甲氨基}-二茂鐵甲酰胺YJP-10二茂鐵甲酸-4-{[3-(3-溴苯基)-異噁唑-5-基]-甲氧基}-酯YJP-20N-{[3-(3-溴苯基)-異噁唑-5-基]-甲氨基}-二茂鐵甲酰胺YJP-21二茂鐵甲酸-{[3-(4-氰基苯基)-異噁唑-5-基]-甲氧基}-酯YJP-22N-{[3-(4-氰基苯基)-異噁唑-5-基]-甲氨基}-二茂鐵甲酰胺表2表1化合物的1HNMR編號(hào)1HNMR(400MHz,CDCl3)YJP-11.21(t,3H,CH3,J=7.2Hz),2.62(q,2H,CH2,J=7.6Hz),4.23(s,5H),4.43(s,2H),4.88(s,2H),5.25(s,2H,isoxazole-CH2),6.57(s,1H,Hofisoxazole),7.22(d,2H,J=8.0Hz),7.67(d,2H,J=8.0Hz).YJP-21.35(s,9H,3CH3),4.17(s,5H),4.44(t,2H,J=1.6Hz),4.85(t,2H,J=1.6Hz),5.37(s,2H,isoxazole-CH2),6.68(s,1H,Hofisoxazole),7.48(d,2H,J=8.4Hz),7.76(d,2H,J=8.4Hz).YJP-32.15(s,6H,2CH3),2.31(s,3H,CH3),4.14(s,5H),4.44(t,2H,J=1.6Hz),4.86(t,2H,J=1.6Hz),5.40(s,2H,isoxazole-CH2),6.33(s,1H,Hofisoxazole),6.93(s,2H).YJP-44.17(s,5H),4.44(t,2H,J=1.6Hz),4.86(t,2H,J=1.6Hz),5.40(s,2H,isoxazole-CH2),6.61(s,1H,Hofisoxazole),7.56-7.65(m,3H),7.81(d,1H,J=7.6Hz).YJP-54.18(s,5H),4.46(t,2H,J=1.6Hz),4.85(t,2H,J=1.6Hz),5.41(s,2H,isoxazole-CH2),6.77(s,1H,Hofisoxazole),8.02(d,2H,J=8.8Hz),7.76(d,2H,J=8.8Hz).YJP-63.82(s,3H,OCH3),4.10(s,5H),4.38(t,2H,J=1.6Hz),4.77(t,2H,J=1.6Hz),5.31(s,2H,isoxazole-CH2),6.82(s,1H,Hofisoxazole),6.91-6.98(m,2H),7.32-7.36(m,1H),7.82(dd,1H,J=1.6,1.6Hz).YJP-73.82(s,3H,OCH3),4.10(s,5H),4.38(t,2H,J=1.6Hz),4.77(t,2H,J=1.6Hz),5.31(s,2H,isoxazole-CH2),6.82(s,1H,Hofisoxazole),6.91-6.98(m,3H),7.32-7.36(m,1H).YJP-84.46(s,5H),4.54(t,2H,J=1.6Hz),4.62(t,2H,J=1.6Hz),5.20(s,2H,isoxazole-CH2),6.89(s,1H,Hofisoxazole),7.08-7.18(m,3H),7.92(dd,1H,J=6.4,0.8Hz).YJP-94.10(s,5H),4.36(t,2H,J=1.6Hz),4.78(t,2H,J=1.6Hz),5.33(s,2H,isoxazole-CH2),6.77(s,1H,Hofisoxazole),7.19-7.33(m,2H),7.56-7.62(m,2H).YJP-104.17(s,5H),4.45(t,2H,J=1.6Hz),4.86(t,2H,J=1.6Hz),5.38(s,2H,isoxazole-CH2),6.68(s,1H,Hofisoxazole),7.31-7.35(m,1H),7.59(d,1H,J=7.6Hz),7.76(d,1H,J=8.0Hz),7.98(d,1H,J=1.6Hz).YJP-111.21(t,3H,CH3,J=7.2Hz),2.62(q,2H,CH2,J=7.6Hz),4.23(s,5H),4.43(s,2H),4.62(t,1H,NH-CO,J=4.5Hz),4.88(s,2H),5.25(s,2H,isoxazole-CH2),6.57(s,1H,Hofisoxazole),7.22(d,2H,J=8.0Hz),7.67(d,2H,J=8.0Hz).YJP-121.35(s,9H,3CH3),4.17(s,5H),4.44(t,2H,J=1.6Hz),4.62(t,1H,NH-CO,J=4.5Hz),4.85(t,2H,J=1.6Hz),5.37(s,2H,isoxazole-CH2),6.68(s,1H,Hofisoxazole),7.48(d,2H,J=8.4Hz),7.76(d,2H,J=8.4Hz).YJP-132.15(s,6H,2CH3),2.31(s,3H,CH3),4.14(s,5H),4.44(t,2H,J=1.6Hz),4.62(t,1H,NH-CO,J=4.5Hz),4.86(t,2H,J=1.6Hz),5.40(s,2H,isoxazole-CH2),6.33(s,1H,Hofisoxazole),6.93(s,2H).YJP-144.17(s,5H),4.44(t,2H,J=1.6Hz),4.62(t,1H,NH-CO,J=4.5Hz),4.86(t,2H,J=1.6Hz),5.40(s,2H,isoxazole-CH2),6.61(s,1H,Hofisoxazole),7.56-7.65(m,3H),7.81(d,1H,J=7.6Hz).YJP-154.18(s,5H),4.46(t,2H,J=1.6Hz),4.62(t,1H,NH-CO,J=4.5Hz),4.85(t,2H,J=1.6Hz),5.41(s,2H,isoxazole-CH2),6.77(s,1H,Hofisoxazole),8.02(d,2H,J=8.8Hz),7.76(d,2H,J=8.8Hz).YJP-163.82(s,3H,OCH3),4.10(s,5H),4.38(t,2H,J=1.6Hz),4.62(t,1H,NH-CO,J=4.5Hz),4.77(t,2H,J=1.6Hz),5.31(s,2H,isoxazole-CH2),6.82(s,1H,Hofisoxazole),6.91-6.98(m,2H),7.32-7.36(m,1H),7.82(dd,1H,J=1.6,1.6Hz).YJP-173.82(s,3H,OCH3),4.10(s,5H),4.38(t,2H,J=1.6Hz),4.62(t,1H,NH-CO,J=4.5Hz),4.77(t,2H,J=1.6Hz),5.31(s,2H,isoxazole-CH2),6.82(s,1H,Hofisoxazole),6.91-6.98(m,3H),7.32-7.36(m,1H).YJP-184.46(s,5H),4.54(t,2H,J=1.6Hz),4.56(t,1H,NH-CO,J=4.5Hz),4.62(t,2H,J=1.6Hz),5.20(s,2H,isoxazole-CH2),6.89(s,1H,Hofisoxazole),7.08-7.18(m,3H),7.92(dd,1H,J=6.4,0.8Hz).YJP-194.10(s,5H),4.36(t,2H,J=1.6Hz),4.63(t,1H,NH-CO,J=4.5Hz),4.78(t,2H,J=1.6Hz),5.33(s,2H,isoxazole-CH2),6.77(s,1H,Hofisoxazole),7.19-7.33(m,2H),7.56-7.62(m,2H).YJP-204.17(s,5H),4.45(t,2H,J=1.6Hz),4.70(t,1H,NH-CO,J=4.5Hz),4.86(t,2H,J=1.6Hz),5.38(s,2H,isoxazole-CH2),6.68(s,1H,Hofisoxazole),7.31-7.35(m,1H),7.59(d,1H,J=7.6Hz),7.76(d,1H,J=8.0Hz),7.98(d,1H,J=1.6Hz).YJP-214.18(s,5H),4.46(t,2H,J=1.6Hz),4.85(t,2H,J=1.6Hz),5.41(s,2H,isoxazole-CH2),6.77(s,1H,Hofisoxazole),8.02(d,2H,J=8.8Hz),7.76(d,2H,J=8.8Hz).YJP-224.18(s,5H),4.46(t,2H,J=1.6Hz),4.62(t,1H,NH-CO,J=4.5Hz),4.85(t,2H,J=1.6Hz),5.41(s,2H,isoxazole-CH2),6.77(s,1H,Hofisoxazole),8.02(d,2H,J=8.8Hz),7.76(d,2H,J=8.8Hz).實(shí)施例4N-{[3-(4-乙基苯基)-異噁唑-5-基]-甲氨基}-二茂鐵甲酰胺的鹽酸鹽和醋酸鹽的制備(1)N-{[3-(4-乙基苯基)-異噁唑-5-基]-甲氨基}-二茂鐵甲酰胺鹽酸鹽的制備:將0.5mmolN-[(3-苯基-異噁唑-5-基)-甲基-]-二茂鐵甲酰胺加入20mL（V:V,1:1）5%的鹽酸溶液和甲醇混合溶液中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下攪拌30min后，室溫緩慢蒸發(fā)結(jié)晶即得N-{[3-(4-乙基苯基)-異噁唑-5-基]-甲氨基}-二茂鐵甲酰胺鹽酸鹽，淡黃色固體，收率：70%。(2)N-{[3-(4-乙基苯基)-異噁唑-5-基]-甲氨基}-二茂鐵甲酰胺乙酸鹽的制備:將0.5mmolN-{[3-(4-乙基苯基)-異噁唑-5-基]-甲氨基}-二茂鐵甲酰胺加入盛有10mL干燥二氯甲烷的50mL單口圓底燒瓶中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下攪拌，緩慢滴加入2mL冰乙酸，攪拌30min，冷卻后冷藏結(jié)晶，過(guò)濾，真空干燥后即得N-{[3-(4-乙基苯基)-異噁唑-5-基]-甲氨基}-二茂鐵甲酰胺乙酸鹽，淡黃色固體，收率：82%。實(shí)施例5抗癌活性實(shí)驗(yàn)采用MTT法進(jìn)行了抑大腸癌細(xì)胞株(HCT-116)、人肺癌細(xì)胞株(A549)和乳腺癌細(xì)胞株MCF-7活性篩選。具體的實(shí)驗(yàn)篩選過(guò)程如下：(1)將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的大腸癌細(xì)胞株HCT-116接種于96孔培養(yǎng)板培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至90%,將1μL1×10-4M的藥品加入，其濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔，并設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照（吉非替尼），陰性對(duì)照為1μLDMSO。之后在37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)12小時(shí);(2)接著在每個(gè)孔中加入20μL5mg/mL的MTT溶液，放置4小時(shí)后將培養(yǎng)基吸出;(3)每孔加入100μLDMSO，用可調(diào)波長(zhǎng)式微孔酶標(biāo)儀測(cè)595nm波長(zhǎng)下的吸光度值(A595)。采用如下的公式計(jì)算抑制率。(2)抑肺癌細(xì)胞株A549和乳腺癌細(xì)胞株MCF-7的實(shí)驗(yàn)過(guò)程同大腸癌細(xì)胞株HCT-116的篩選過(guò)程。優(yōu)選的化合物抑制大腸癌細(xì)胞株(HCT-116)、人肺癌細(xì)胞株A549和乳腺癌細(xì)胞株MCF-7的活性結(jié)果見(jiàn)下表3、表4和表5。表3式I中部分實(shí)施例化合物抑制大腸癌細(xì)胞株(HCT-116)活性測(cè)試結(jié)果表4式I中部分實(shí)施例化合物抑制人肺癌細(xì)胞株(A549)活性測(cè)試結(jié)果表5式I中部分實(shí)施例化合物抑制乳腺癌細(xì)胞株(MCF-7)活性測(cè)試結(jié)果當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3