本發(fā)明屬于分子標(biāo)記領(lǐng)域，具體涉及與芝麻抗莖點(diǎn)枯病主效基因位點(diǎn)緊密連鎖的ssr分子標(biāo)記及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：芝麻是我國(guó)四大重要的油料作物之一，種植分布廣泛，以黃淮和長(zhǎng)江中下游地區(qū)較為集中，占全國(guó)芝麻面積的70％。芝麻的生育期約90天，屬喜溫作物，一般生長(zhǎng)在6～8月份，主要產(chǎn)區(qū)芝麻生長(zhǎng)期處在高溫多雨季節(jié)，高溫高濕易誘發(fā)莖點(diǎn)枯病。芝麻莖點(diǎn)枯病又稱莖腐病、炭腐病，其病原為菜豆殼球孢(macrophominaphaseoli(maubl.)ashby.)，屬半知菌亞門真菌。該病原菌寄主范圍廣，可侵染75個(gè)科的500多種植物，除芝麻外，尚有麻類、豆類、苜蓿類、瓜類、向日葵、煙草、番茄、茄子、辣椒、甘蔗、高粱、玉米、茶、咖啡、椰子和香蕉等。芝麻莖點(diǎn)枯病常年大面積發(fā)生，是造成我國(guó)芝麻減產(chǎn)的主要病害種類之一。該病病原菌以菌核及分生孢子器在種子、土壤及病株殘?bào)w上越冬。初次侵染來源以菌核為主，田間分生孢子借雨水和氣流傳播，進(jìn)行多次再侵染。芝麻苗期及盛花期最易感病。病菌發(fā)育最適溫度為25～30℃。苗期染病則幼苗根部變褐，地上部萎蔫枯死，幼莖上密生黑色小點(diǎn)。開花結(jié)果期染病則從根部開始發(fā)病，后向莖擴(kuò)展，有時(shí)從葉柄基部侵入后蔓延至莖部。根部染病，主根、支根變褐，剝開皮層可見布滿黑色小菌核，致根部枯死。莖部染病多發(fā)生在中下部，初呈黃褐色水浸狀，后擴(kuò)展很快繞莖一周，中心有銀灰色光澤，其上密生黑色小粒點(diǎn)，表皮下及髓部產(chǎn)生大量小菌核，莖稈中空易折斷。連鎖分析主要是基于基因數(shù)據(jù)、表型數(shù)據(jù)通過統(tǒng)計(jì)學(xué)的方法去判斷感興趣的基因位點(diǎn)與已知的標(biāo)記位點(diǎn)間的相對(duì)位置，重組率是連鎖分析的重要參數(shù)。常規(guī)連鎖分析群體是運(yùn)用有限親本的人工控制授粉群體，因此其經(jīng)過有限次數(shù)的重組，通常基于有限親本，其等位基因的個(gè)數(shù)也有限。關(guān)聯(lián)分析是基于自然變異群體，利用連鎖不平衡規(guī)律來研究遺傳變異與目標(biāo)性狀相關(guān)的研究方法，與傳統(tǒng)qtl定位相比，關(guān)聯(lián)分析不需要構(gòu)建作圖群體、廣度大、精度高、能檢測(cè)到同一位點(diǎn)多個(gè)等位基因。但由于群體背景復(fù)雜，存在亞群結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致易產(chǎn)生假陽(yáng)性，而且自然群體的連鎖衰減較快，因此在群體里想找到足夠的變異，需要高密度的分子標(biāo)記。關(guān)聯(lián)分析結(jié)合連鎖分析，可以發(fā)揮兩者的優(yōu)勢(shì)，提高定位中的陽(yáng)性率及精度，提高復(fù)雜數(shù)量性狀的挖掘效率。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供與芝麻抗莖點(diǎn)枯病主效基因位點(diǎn)緊密連鎖的ssr分子標(biāo)記。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供與芝麻抗莖點(diǎn)枯病主效基因位點(diǎn)緊密連鎖的ssr分子標(biāo)記的引物。本發(fā)明的再一個(gè)發(fā)明目的在于提供與芝麻抗莖點(diǎn)枯病主效基因位點(diǎn)緊密連鎖的ssr分子標(biāo)記的引物的應(yīng)用。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：與芝麻抗莖點(diǎn)枯病主效基因位點(diǎn)緊密連鎖的ssr分子標(biāo)記組，共四個(gè)，分別命名為zmm0913、zmm3752、zmm5636和zmm5775，各分子標(biāo)記引物序列為；zmm0913引物序列為：zmm0913f：5’-ctcatgtggaacgaggcata-3’，如seq.id.no.1所示。zmm0913r：5’-atggccaccacctaacattc-3’，如seq.id.no.2所示。zmm3752引物序列為：zmm3752f：5’-caacgatgagatggctttga-3’，如seq.id.no.3所示。zmm3752r：5’-tcttgcacgcacagtagtcc-3’，如seq.id.no.4所示。zmm5636引物序列為：zmm5636f：5’-ctgctcatcacctctggaaag-3’，如seq.id.no.5所示。zmm5636r5’-tgacctatgatgtgataacagttgg-3’，如seq.id.no.6所示。zmm5775引物序列為：zmm5775f：5’-ttcactttgcttttgttgcc-3’，如seq.id.no.7所示。zmm5775r：5’-gcccattccatgagtttttg-3’，如seq.id.no.8所示。其中：ssr分子標(biāo)記zzm0913和zzm3752與影響芝麻莖點(diǎn)枯病抗性的主效基因位點(diǎn)qccr12.2(位于第12連鎖群89.8cm處)緊密連鎖；ssr分子標(biāo)記zmm5636和zzmzmm5775與影響芝麻莖點(diǎn)枯病抗性的主效基因位點(diǎn)qccr3.2緊密連鎖(位于第3連鎖群39.3cm處)。與芝麻抗莖點(diǎn)枯病主效基因位點(diǎn)緊密連鎖的ssr分子標(biāo)記的引物組，其特征在于：引物序列為；zmm0913引物序列為：zmm0913f：5’-ctcatgtggaacgaggcata-3’，如seq.id.no.1所示；zmm0913r：5’-atggccaccacctaacattc-3’，如seq.id.no.2所示；zmm3752引物序列為：zmm3752f：5’-caacgatgagatggctttga-3’，如seq.id.no.3所示；zmm3752r：5’-tcttgcacgcacagtagtcc-3’，如seq.id.no.4所示；zmm5636引物序列為：zmm5636f：5’-ctgctcatcacctctggaaag-3’，如seq.id.no.5所示；zmm5636r5’-tgacctatgatgtgataacagttgg-3’，如seq.id.no.6所示；zmm5775引物序列為：zmm5775f：5’-ttcactttgcttttgttgcc-3’，如seq.id.no.7所示；zmm5775r：5’-gcccattccatgagtttttg-3’，如seq.id.no.8所示。與芝麻抗莖點(diǎn)枯病主效基因位點(diǎn)緊密連鎖的ssr分子標(biāo)記鑒定方法，其特征在于：用zmm0913引物、zmm3752引物、zmm5636引物和zmm5775引物分別擴(kuò)增芝麻葉片總dna，如果能分別擴(kuò)增得到166bp、258bp、278bp和199bp的擴(kuò)增片段，則表明存在本發(fā)明所述的芝麻抗抗莖點(diǎn)枯病主效基因，預(yù)測(cè)該芝麻具有較高的抗莖點(diǎn)枯病能力。本發(fā)明所述的與芝麻抗莖點(diǎn)枯病主效基因位點(diǎn)緊密連鎖的ssr分子標(biāo)記的篩選獲得方法，包括如下步驟：(1)利用芝麻抗莖點(diǎn)枯病品種中芝13為母本和敏感種質(zhì)“密蒴芝麻”進(jìn)行雜交，獲得f1種子，f1植株自交產(chǎn)生f2代種子，f2植株自交產(chǎn)生f3代種子，f3代開始按株行種植并自交產(chǎn)生種子，每個(gè)株行只收獲1個(gè)單株的種子，種植成為下一代的1個(gè)株行，以此類推，最終獲得f7代分離群體，即重組自交系(ril)群體；(2)采用ctab法提取步驟(1)親本及ril分離群體葉片基因組總dna；(3)基于芝麻基因組序列和cdna序列自主開發(fā)的7702對(duì)ssr標(biāo)記引物對(duì)親本dna進(jìn)行pcr擴(kuò)增，產(chǎn)物在變性聚丙烯酰胺凝膠中電泳，染色及帶型統(tǒng)計(jì)，篩選親本間有多態(tài)性的引物；(4)將篩選得到的498對(duì)多態(tài)性引物對(duì)重組自交系(ril)群體進(jìn)行基因型分析和遺傳圖譜的構(gòu)建，結(jié)合其抗莖點(diǎn)枯病病情指數(shù)數(shù)據(jù)進(jìn)行qtl定位，檢測(cè)到芝麻第12連鎖群的89.8cm和第3連鎖群的39.3cm各具有一個(gè)主效基因位點(diǎn)qcrr12.2和qcrr3.2，貢獻(xiàn)率分別為14％和12％，與qcrr12.2緊密連鎖的ssr分子標(biāo)記為zzm0913和zzm3752，與qcrr3.2緊密連鎖的ssr分子標(biāo)記為zzm5636和zzm5775。利用上述技術(shù)措施，申請(qǐng)人最終獲得了與芝麻抗莖點(diǎn)枯病主效基因位點(diǎn)緊密連鎖的ssr標(biāo)記zmm0913、zmm3752、zmm5636和zmm5775。上述與芝麻抗莖點(diǎn)枯病主效基因位點(diǎn)緊密連鎖的ssr分子標(biāo)記組在芝麻抗莖點(diǎn)枯病種質(zhì)篩選中的應(yīng)用，具體應(yīng)用方法為：用ssr分子標(biāo)記zmm0913引物、zmm3752引物、zmm5636引物和zmm5775引物分別擴(kuò)增芝麻f2群體葉片總dna，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳后，如果能擴(kuò)增分別得到166bp、258bp、278bp和199bp的擴(kuò)增片段，則表明存在本發(fā)明所述的芝麻抗莖點(diǎn)枯病主效基因，預(yù)測(cè)該芝麻具有較高的抗莖點(diǎn)枯病能力。上述ssr分子標(biāo)記zmm0913、zmm3752、zmm5636和zmm5775在芝麻育種中的應(yīng)用，具體應(yīng)用方法為：用所述ssr分子標(biāo)記zmm0913引物、zmm3752引物、zmm5636引物和zmm5775引物擴(kuò)增芝麻株系或品種總dna，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳后，如果能擴(kuò)增分別得到166bp、258bp、278bp和199bp的擴(kuò)增片段，則表明存在本發(fā)明所述的芝麻抗莖點(diǎn)枯病主效基因，預(yù)測(cè)該芝麻具有較高的抗莖點(diǎn)枯病能力。本發(fā)明采用的莖點(diǎn)枯病田間鑒定方法及病情調(diào)查標(biāo)準(zhǔn)，參照張秀榮等(2006)的芝麻種質(zhì)資源描述規(guī)范和數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)中的莖點(diǎn)枯病抗性鑒定方法、病情調(diào)查與分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)以及病情指數(shù)計(jì)算方法(第67頁(yè))。本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)定位了2個(gè)提高芝麻莖點(diǎn)枯病抗性的主效基因位點(diǎn)，可解釋表型14％和12％的變異，將芝麻抗莖點(diǎn)枯病主效基因定位在第12連鎖群上89.8cm處，位于zzm0913和zzm3752標(biāo)記間，以及在第3連鎖群上39.3cm處，位于zzm5636和zzm5775標(biāo)記間。使得芝麻莖點(diǎn)枯病抗性主效基因位點(diǎn)的定位工作居于同領(lǐng)域前列。f2群體驗(yàn)證表明這四個(gè)分子標(biāo)記zmm0913、zmm3752、zmm5636和zmm5775組合可以預(yù)測(cè)芝麻抗莖點(diǎn)枯病的強(qiáng)弱，進(jìn)而可以快速篩選抗莖點(diǎn)枯病株系用于芝麻抗病育種，輔助抗莖點(diǎn)枯病選擇，目標(biāo)明確，成本較低。傳統(tǒng)抗病育種方法中，芝麻抗莖點(diǎn)枯病表型鑒定費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且受環(huán)境影響很大，準(zhǔn)確性低，且年份田塊間自然鑒定重復(fù)性較差。本發(fā)明中抗莖點(diǎn)枯病主效基因位點(diǎn)的檢測(cè)方便快速，不受環(huán)境影響，可以在苗期進(jìn)行篩選和淘汰，大大提高了選擇效率，節(jié)約了生產(chǎn)成本。附圖說明圖1為芝麻ril群體莖點(diǎn)枯病發(fā)病后病情指數(shù)分布圖。圖2為第3和12連鎖群圖譜。圖中*號(hào)所示為抗莖點(diǎn)枯病性狀主效基因位點(diǎn)qcrr3.2和qcrr12.2在連鎖群上的位置，與其緊密連鎖的分子標(biāo)記分別為zzm5636和zzm5775以及zzm0913和zzm3752。圖3為分子標(biāo)記zzm5636、zzm5775、zzm0913和zzm3752在f2群體1-20號(hào)單株中擴(kuò)增后聚丙烯酰氨凝膠電泳的膠板照片示意圖。具體實(shí)施方式下述實(shí)施例中按照《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》(第三版)(黃培堂等譯，北京：科學(xué)出版社，2002)所述的條件進(jìn)行dna提取、pcr及聚丙烯酰胺凝膠電泳等。實(shí)驗(yàn)過程中涉及的所有試劑成分均可從商業(yè)途徑獲得，并按照實(shí)驗(yàn)手冊(cè)中的條件或所用試劑制造廠商所建議的條件使用。實(shí)施例1：與芝麻莖點(diǎn)枯病性狀相關(guān)基因緊密連鎖的ssr分子標(biāo)記的發(fā)掘(1)構(gòu)建抗/感莖點(diǎn)枯病芝麻重組自交系(ril)群體并鑒定莖點(diǎn)枯病抗性利用芝麻抗莖點(diǎn)枯病品種中芝13為母本和敏感種質(zhì)“密蒴芝麻”進(jìn)行雜交，獲得f1種子，f1植株自交產(chǎn)生f2代種子，f2植株自交產(chǎn)生f3代種子，f3代開始按株行種植并自交產(chǎn)生種子，每個(gè)株行只收獲1個(gè)單株的種子，種植成為下一代的1個(gè)株行，以此類推，最終獲得f7代分離群體，即重組自交系(ril)群體；鑒定親本及ril各株系莖點(diǎn)枯病抗性，統(tǒng)計(jì)ril分離群體感病后病情指數(shù)，結(jié)果見圖1，統(tǒng)計(jì)分析表明ril分離群體感病后的病情指數(shù)分布呈連續(xù)性分布，變異分布呈正態(tài)分布，且變異范圍很寬，證明芝麻莖點(diǎn)枯病屬于數(shù)量性狀。(2)親本及ril分離群體葉片基因組總dna的提取利用ctab法提取葉片基因組總dna，具體步驟如下：a.在親本及f7ril群體植株4-5對(duì)真葉期，將各親本及ril分離群體頂端幼嫩組織適量放入已編號(hào)離心管中，經(jīng)液氮速凍后超低溫冰箱-80℃存放，備用。使用時(shí)，自超低溫冰箱(-80℃)取出適量樣品置于5ml離心管中，立即加入液氮后用玻璃棒迅速搗碎至粉狀后；快速轉(zhuǎn)入2ml離心管中，加入800ul在65℃的水浴鍋中預(yù)熱過的ctab提取液(2％ctab，2％pvp-k30，0.1mtris-hcl，1.4mnacl，20mmedta，ph8.0)，混合均勻，放入65℃的水浴鍋中水浴40-60min，水浴過程中每隔10min取出離心管輕微震蕩混勻一次，使組織得到充分裂解；b.水浴后取出離心管，待離心管冷卻至室溫后加入等體積的氯仿和異戊醇按體積比為24:1混合的混合液，緩慢上下顛倒混勻10min，12000rpm離心10min；c.取離心后的上清于另一離心管中，重復(fù)b步驟一次。然后再取上清加入2.5倍體積冰冷無(wú)水乙醇中，緩慢顛倒離心管，直至有絮狀沉淀集結(jié)為止。然后置于-20℃靜置10min，12000rpm離心10min，棄上清。用75％(體積比)乙醇漂洗2-3次，干燥后加無(wú)菌水溶解，于-20℃冰箱中保存?zhèn)溆?，即得各親本及ril分離群體葉片基因組總dna。(3)引物開發(fā)及pcr擴(kuò)增基于芝麻轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果自主開發(fā)的1770對(duì)ssr標(biāo)記引物以及基于芝麻基因組序列自主開發(fā)的6002對(duì)ssr標(biāo)記引物，對(duì)群體親本進(jìn)行pcr擴(kuò)增，篩選多態(tài)性標(biāo)記。pcr程序如下：a.自父母本中各隨機(jī)選擇5株的dna等量混合，總濃度調(diào)整至20ng/ul，用作篩選引物的dna模板。b.pcr擴(kuò)增反應(yīng)。具體反應(yīng)體系及擴(kuò)增程序如下：pcr反應(yīng)體系：pcr擴(kuò)增程序：(4)pcr擴(kuò)增產(chǎn)物凝膠電泳測(cè)試獲得多態(tài)性篩選結(jié)果將以上獲得的pcr擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳，以獲得雙親多態(tài)性篩選結(jié)果，具體步驟如下：膠板制備：玻璃板用10％(質(zhì)量比)naoh溶液浸泡24小時(shí)，洗凈，晾干。短膠板用餐巾紙均勻涂抹硅烷化劑(ammresco)，長(zhǎng)膠板涂抹1ml反硅烷化劑，放置5min后，將玻璃裝好，并以邊條隔開，四周用制膠夾夾緊。準(zhǔn)備就緒后用注射器將6％(質(zhì)量比)聚丙烯酰胺膠液60ml緩慢注入玻璃間的縫隙中，直至灌滿到玻璃板模具的頂部，注意避免產(chǎn)生氣泡。小心插入梳子不帶齒的一邊，并用夾子夾牢，聚合2小時(shí)以上。反硅烷化劑：500ml稀釋液(95％無(wú)水乙醇，0.5％冰醋酸，4.5％ddh2o)中加1-2ml親和硅烷；6％(質(zhì)量比)聚丙烯酰胺膠液:5.7％(質(zhì)量比)丙烯酰胺，0.3％(質(zhì)量比)n,n’-甲叉二丙烯酰胺，42％(質(zhì)量比)尿素，1×tbe緩沖液。灌膠前每60ml膠液加入10％(質(zhì)量比)過硫酸銨390ul和temed39ul；電泳：去掉制膠夾，取出膠板，小心的取出梳子，沖洗并擦凈玻璃外側(cè)，固定于電泳槽上，上下槽各加500ml1×tbe緩沖液，以恒功率75w電泳30min直到電壓回升，用注水器沖洗凝膠的上表面以沖走析出的尿素和碎膠，插上梳子。在pcr產(chǎn)物中加入0.5倍體積的上樣緩沖液，95℃變性5min，冰浴冷卻3min以上，每個(gè)點(diǎn)樣孔點(diǎn)樣5ul，1800伏恒壓電泳約80min，當(dāng)二甲苯青ff到達(dá)2/3膠板時(shí)停止電泳。取下膠板，用自來水沖洗降溫。1×tbe：tris-base108g，硼酸55g，0.5medta(ph8.0)40ml，定容至1000ml即成10×tbe，使用時(shí)稀釋10倍即為1×tbe工作液；上樣緩沖液：98％(體積比)去離子甲酰胺,10mmol/ledta,0.005％(質(zhì)量比)二甲苯青ff,0.005％(質(zhì)量比)溴酚藍(lán)。銀染法染色：將兩塊玻璃板分離開來，長(zhǎng)玻璃板連同凝膠用蒸餾水漂洗3次，每次3min，放入染色液(含0.15％的agno3)中染色10min，用蒸餾水快速漂洗5-6s。放入顯影液(含0.2％的naoh，0.04％的甲醛，35℃)中顯影，至帶型清晰，然后在蒸餾水中漂洗1次，室溫下自然晾干，拍照保存。觀察膠板上各引物在雙親中的擴(kuò)增帶型，雙親帶型有差異的引物即為多態(tài)性引物。(5)篩選得到的多態(tài)性引物在ril群體中的分析篩選結(jié)果表明，有498對(duì)引物在雙親間有多態(tài)性。以550個(gè)ril群體為模板，利用498對(duì)多態(tài)性引物進(jìn)行基因型檢測(cè)。統(tǒng)計(jì)基因型結(jié)果，將與父本一致的帶型記為a，與母本一致的帶型記為b，雜合的記為h。在此基礎(chǔ)上，采用joinmap4.0進(jìn)行遺傳圖譜構(gòu)建，然后利用ril群體的莖點(diǎn)枯病病情指數(shù)數(shù)據(jù)、基因型數(shù)據(jù)及遺傳連鎖圖譜數(shù)據(jù)，運(yùn)行winqtlcart4.0軟件進(jìn)行基因定位分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)2個(gè)影響芝麻莖點(diǎn)枯病抗性的主效基因位點(diǎn)qccr12.2和qccr3.2，分別位于第12和第3連鎖群，分別解釋抗莖點(diǎn)枯病表型14％的變異(即貢獻(xiàn)率14％)和12％的變異(即貢獻(xiàn)率12％)，與qccr12.2(位于第12連鎖群89.8cm處)緊密連鎖的ssr分子標(biāo)記分別為zzm0913和zzm3752；與qccr3.2緊密連鎖(位于第3連鎖群39.3cm處)的ssr分子標(biāo)記分別為zzm5636和zzm5775，各分子標(biāo)記引物序列分別為：zmm0913f：5’-ctcatgtggaacgaggcata-3’，zmm0913r：5’-atggccaccacctaacattc-3’zmm3752f：5’-caacgatgagatggctttga-3’zmm3752r：5’-tcttgcacgcacagtagtcc-3’zmm5636f：5’-ctgctcatcacctctggaaag-3’zmm5636r：5’-tgacctatgatgtgataacagttgg-3’zmm5775f：5’-ttcactttgcttttgttgcc-3’zmm5775r：5’-gcccattccatgagtttttg-3’實(shí)施例2：與芝麻抗莖點(diǎn)枯病主效基因緊密連鎖的分子標(biāo)記在芝麻抗病育種中的應(yīng)用利用中芝13與另一莖點(diǎn)枯病敏感種質(zhì)“加樣芝麻”雜交后獲得500個(gè)f2單株，由于不能對(duì)f2單株進(jìn)行田間莖點(diǎn)枯病抗性鑒定，所以種植500個(gè)f2單株獲得其對(duì)應(yīng)的500個(gè)f2:3家系，f2:3家系的莖點(diǎn)枯病抗性代表f2單株的莖點(diǎn)枯病抗性。在苗期對(duì)f2單株進(jìn)行分子鑒定，具體步驟包括葉片總dna的提取(具體如實(shí)施例1中的dna提取方法)和利用抗莖點(diǎn)枯病主效基因位點(diǎn)qcrr12.2和qcrr3.2緊密連鎖的4對(duì)分子標(biāo)記zzm0913、zzm3752、zzm5636和zzm5775進(jìn)行分子鑒定，即經(jīng)pcr擴(kuò)增、聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)試及帶型統(tǒng)計(jì)(具體如實(shí)施例1中的pcr擴(kuò)增、凝膠電泳及帶型統(tǒng)計(jì)方法)，保留4對(duì)標(biāo)記引物擴(kuò)增分別可得到166bp、258bp、278bp和199bp大小條帶的f2單株共107個(gè)，其中f2群體1-20號(hào)單株凝膠電泳后染色得到的膠板圖片見圖3，圖中可看出：第12、16和18號(hào)單株4個(gè)分子標(biāo)記分別可擴(kuò)增到166bp、258bp、278bp和199bp大小條帶。另將所有500個(gè)f2單株對(duì)應(yīng)的500個(gè)f2:3家系進(jìn)行莖點(diǎn)枯病抗性鑒定試驗(yàn)并統(tǒng)計(jì)各株系的平均病情指數(shù)，結(jié)果表明：通過分子標(biāo)記輔助選擇得到的107個(gè)f2單株對(duì)應(yīng)的f2:3家系中，莖點(diǎn)枯病發(fā)病后的平均病情指數(shù)低于500個(gè)f2:3家系群體均值(42％)的株系占81.3％(見表1，共87個(gè))。與常規(guī)抗病育種方法相比，利用4個(gè)組合分子標(biāo)記zzm0913、zzm3752、zzm5636和zzm5775鑒定輔助選擇抗莖點(diǎn)枯病株系，可以大大提高選擇效率，從而縮短芝麻抗莖點(diǎn)枯病品種的育種周期。表1莖點(diǎn)枯病發(fā)病后平均病情指數(shù)超過群體均值的87個(gè)株系株系編號(hào)病情指數(shù)(％)株系編號(hào)病情指數(shù)(％)株系編號(hào)病情指數(shù)(％)ag01828ag19825ag37323ag02620ag20340ag37516ag03336ag20536ag37611ag03916ag2079ag37917ag04614ag21327ag38119ag08024ag2146ag3829ag0945ag2227ag38411ag09713ag22317ag38641ag09918ag22428ag40122ag10220ag23011ag40639ag10817ag23224ag41124ag11625ag23339ag42828ag11919ag23621ag44033ag14030ag24037ag45115ag14314ag24232ag46723ag1487ag25933ag46941ag14935ag27429ag47327ag15137ag28711ag47640ag15322ag29436ag48215ag1556ag32710ag48339ag15628ag32835ag48824ag15717ag33127ag49520ag15810ag33322ag50833ag16237ag34227ag51616ag16725ag34418ag52213ag16842ag36016ag52411ag17134ag36330ag52926ag18728ag36533ag53840ag1969ag36915ag53925sequencelisting<110>中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所<120>與芝麻抗莖點(diǎn)枯病主效基因位點(diǎn)緊密連鎖的ssr分子標(biāo)記及應(yīng)用<160>8<170>patentinversion3.3<210>1<211>20<212>dna<213>1<400>1ctcatgtggaacgaggcata20<210>2<211>20<212>dna<213>2<400>2atggccaccacctaacattc20<210>3<211>20<212>dna<213>3<400>3caacgatgagatggctttga20<210>4<211>20<212>dna<213>4<400>4tcttgcacgcacagtagtcc20<210>5<211>21<212>dna<213>5<400>5ctgctcatcacctctggaaag21<210>6<211>25<212>dna<213>6<400>6tgacctatgatgtgataacagttgg25<210>7<211>20<212>dna<213>7<400>7ttcactttgcttttgttgcc20<210>8<211>20<212>dna<213>8<400>8gcccattccatgagtttttg20當(dāng)前第1頁(yè)12