本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種糖皮質(zhì)激素的制備方法，特別是涉及一種具有特別理化性質(zhì)的糖皮質(zhì)激素依碳酸氯替潑諾的制備方法。本發(fā)明還涉及通過(guò)使用此種方法制得的糖皮質(zhì)激素依碳酸氯替潑諾作為藥用原料藥來(lái)制備眼用藥物組合物特別是眼用混懸液。本發(fā)明制備糖皮質(zhì)激素依碳酸氯替潑諾的方法具有下文所述優(yōu)異技術(shù)效果。
背景技術(shù)：
氯替潑諾(cas：82034-46-6，loteprednoletabonate)，通常亦稱作依碳酸氯替潑諾、依碳氯替潑諾，是由pharmoscorp.公司開(kāi)發(fā)的一種新型皮質(zhì)激素甾體類(lèi)抗炎藥物，其化學(xué)名為17α-[(乙氧甲?；?氧基]-11β-羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸氯甲基酯，分子式c24h31clo7，分子量466.96，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：
氯替潑諾作為“軟藥”是根據(jù)bodor原理研究設(shè)計(jì)的，解決了皮質(zhì)醇類(lèi)藥物的毒性問(wèn)題，同時(shí)抗炎性強(qiáng)的特點(diǎn)得到了進(jìn)一步的加強(qiáng)。與潑尼松龍不同，氯替潑諾易被水解為無(wú)活性的有機(jī)酸，當(dāng)用于眼睛后，迅速代謝為無(wú)活性的產(chǎn)物，降低了系統(tǒng)毒性，而抗炎作用比潑尼松龍更強(qiáng)。氯替潑諾是第一個(gè)特別適用于手術(shù)后眼部炎癥的藥物。首先該藥的眼內(nèi)壓升高的副作用較小，安全性高；其次在臨床應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)本品對(duì)創(chuàng)傷愈合有促進(jìn)作用，使用本品手術(shù)后形成的疤痕最輕。在國(guó)外市場(chǎng)該藥廣泛地用于白內(nèi)障患者手術(shù)后的抗炎。據(jù)調(diào)研，到2015年全球眼科用藥將超過(guò)170億美元，可見(jiàn)本品前景相當(dāng)樂(lè)觀。
1998年依碳氯替潑諾混懸滴眼液在美國(guó)批準(zhǔn)上市，2000年又在英國(guó)上市，之后又陸續(xù)上市了眼用油膏和眼用凝膠，用于治療眼部炎癥，尤其適用于眼瞼和球結(jié)膜、角膜和眼球前部的甾體敏感的炎癥以及手術(shù)后眼部癥狀的藥物。本品是新型藥物-軟藥(softdrug)的典型代表，被稱為軟藥皮質(zhì)激素甾體藥物，具有抗眼角膜炎、各種眼內(nèi)炎癥和抗過(guò)敏作用，其全身毒性小的特點(diǎn)已被藥理學(xué)研究證實(shí)，有很好的發(fā)展前景，和妥布霉素的復(fù)方制劑也已上市，國(guó)內(nèi)對(duì)該藥的研究也逐漸深入。目前該藥已在美國(guó)、中國(guó)和阿根廷等多個(gè)國(guó)家上市。例如已在中國(guó)市場(chǎng)上銷(xiāo)售的是bausch&lombinc.的氯替潑諾混懸滴眼液(loteprednoletabonateophthalmicsuspension)，商品名為露達(dá)舒或lotemax，藥品注冊(cè)證號(hào)為h20110477(h20160346)，其規(guī)格例如為0.5％(2.5ml/瓶，5ml/瓶)。此外，bausch&lombinc.還在中國(guó)市場(chǎng)銷(xiāo)售其復(fù)方制劑氯替潑諾妥布霉素滴眼液(例如國(guó)藥準(zhǔn)字j20150006等)。
美國(guó)fda披露的氯替潑諾混懸滴眼液lotemax的處方中包括：氯替潑諾5mg(0.5％)、edta二鈉、甘油、聚維酮、水、泰洛沙泊、防腐劑苯扎氯銨0.01％，ph5.3～5.6，滲透壓濃度為250～310mosmol/kg。另外，博士倫公司的專利文獻(xiàn)cn1964719a(中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?00580016030.0)中亦公開(kāi)了類(lèi)似處方。
鑒于氯替潑諾的水溶性差，其只能制成混懸型滴眼液以供眼科使用，為此，作為藥用原料藥的氯替潑諾需要在配制滴眼液之前預(yù)先進(jìn)行微粉化處理。然而由于氯替潑諾皮質(zhì)激素甾體藥物，這種微粉化處理工藝對(duì)于生產(chǎn)車(chē)間的環(huán)保要求、以及工人的健康保障要求都非常高；并且由于這種微粉化處理工藝是通過(guò)將大顆粒微粉化成小顆粒的過(guò)程，這種微粉化小顆粒在含水體系中存在重新聚集并生成更大顆粒的傾向。上述原料藥生產(chǎn)工藝與制劑質(zhì)量要求之間的矛盾，對(duì)于制藥工程人員是非常棘手的。
陳愛(ài)軍的《氯替潑諾的合成工藝改進(jìn)》中，是將17α-乙氧羰基氧基-11β-羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸乙基碳酸酐選擇性水解脫乙氧羰基成鹽，再與氯碘甲烷氯甲基化成酯而得，據(jù)信其總收率為56.4％。該文獻(xiàn)并未在解決上述原料藥微粉化與滴眼液微粒聚集之間的矛盾。
文獻(xiàn)[gb2079755a]報(bào)道氯替潑諾專利合成工藝流程如下：
該工藝過(guò)程中，反應(yīng)采用四氫呋喃和正己烷混合溶劑精制，得到的產(chǎn)品含有大量的雜質(zhì)，需要通過(guò)柱分離的方法達(dá)到分離純化的目的，不適合工業(yè)化生產(chǎn)。
而文獻(xiàn)[jsteroidbiochemmolbiol1991，38：149-154]采用如下工藝流程：
該工藝最后產(chǎn)物采用丙酮精制，據(jù)說(shuō)該工藝盡管純度能達(dá)到98％左右，但仍有近2％的雜質(zhì)難于去除，達(dá)不到藥用的要求。
cn102911231a(中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?01110222423.4，方明)公開(kāi)了一種氯替潑諾中間體的制備方法，特別是17α-乙氧羰基氧基-11β-羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸乙基碳酸酐的制備，由11β,17α-二羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β羧酸在相轉(zhuǎn)移催化劑四丁基硫酸氫銨的作用下與氯甲酸乙酯縮合制得。本工藝條件溫和，室溫下即可反應(yīng)，收率可達(dá)95％以上。
cn101942001a(中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?01010260874.2，山醫(yī))公開(kāi)了甾體類(lèi)抗炎藥物氯替潑諾的提純方法，其中采用乙醇、異丙醇或甲醇作為溶劑，通過(guò)將氯替潑諾樣品在50-100℃加熱溶解，加入活性炭重量與氯替潑諾溶液體積比為1-10％，進(jìn)行脫色，冷卻析晶的方法達(dá)到純化氯替潑諾的目的。
cn103183714a(中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?01110450450.7，方明)公開(kāi)了一種氯替潑諾的合成方法，包括以下步驟：ⅰ.(1)將17α-乙氧羰基氧基-11β-羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸乙基碳酸酐加入到水中，攪拌30分鐘；(2)向上述溶液中滴加三乙胺，直至溶液澄清，室溫反應(yīng)2小時(shí)；(3)反應(yīng)結(jié)束后向溶液中滴加酸，調(diào)ph值2～4，攪拌30分鐘，使ph值不變；(4)抽濾，水洗至ph5～7，干燥后即得17α-乙氧羰基氧基-11β-羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸；ii.(1)將17α-乙氧羰基氧基-11β-羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸加入到含有弱堿和碘化鈉溶液中，攪拌溶解；(2)加入二氯甲烷和相轉(zhuǎn)移催化劑四丁基硫酸氫銨，室溫滴加氯磺酸氯甲酯的二氯甲烷溶液，滴完反應(yīng)2～3小時(shí)；(3)有機(jī)相水洗，干燥劑干燥后蒸干；(4)加入無(wú)水乙醇，加熱溶解后，冷卻析晶，抽濾，干燥后得氯替潑諾。據(jù)信該工藝便于操作，收率高，達(dá)80％以上。
cn106279324a(中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?01510277704.8，金耀)公開(kāi)了一種依碳氯替潑諾一水合物及其晶型與制備方法，其x射線粉末衍射在衍射角2θ＝9.8°，15.0°，15.6°，16.6°，17.2°，18.1°，19.8°，23.0°，24.8°，26.3°處有特征峰，可以采用超臨界流體技術(shù)制備或者通過(guò)在依碳氯替潑諾的飽和溶液m中，加入晶種，冷卻析晶得到，所述溶液m由1體積份的乙醇，0.2～0.3體積份的水，0.2～0.3體積份的乙腈組成。
上述這些與氯替潑諾原料藥制備有關(guān)的文獻(xiàn)均未提供微粉化工藝以解決上文提及的原料藥微粉化與滴眼液微粒聚集之間的矛盾的技術(shù)方案。
cn101129385a(中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?00710016398.8，博士倫)公開(kāi)了含有氯替潑諾和加替沙星的混懸水溶液眼用組合物及其制作方法，該組合物特征是含有：(a)氯替潑諾及其鹽，粒徑在50微米以下，含量0.2％～2％；(b)加替沙星及其鹽，含量0.2％～1％，(c)一種或多種非離子聚合物做為助懸劑，含量0.5～2.5％；(d)其余為眼用賦形劑。制作方法的特征為將依碳酸氯替潑經(jīng)微粉化至粒徑在50微米以下，并經(jīng)無(wú)菌處理，與加替沙星、非離子聚合物及其他的眼用輔助劑一同轉(zhuǎn)變成一種適用的眼用劑型。該組合物的用途是用于制備治療和預(yù)防眼部炎癥和眼部細(xì)菌性感染的藥品。
cn103860466a(中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?01310597270.0，太湖)公開(kāi)了一種氯替潑諾納米膠束滴眼液，其包括如下質(zhì)量含量的組分：氯替潑諾或其鹽0.01％-5％，兩親性嵌段聚合物載體0.1％-50％，非離子型表面活性劑0-50％，其他眼用制劑附加劑0.01-20％，其余為注射用水。本發(fā)明制得的眼用制劑，能夠增加角膜細(xì)胞的滲透性，并延長(zhǎng)藥物在眼內(nèi)作用時(shí)間，提高療效。
cn101416940a(中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?00810238202.4，馬晶)公開(kāi)了一種含有依碳酸氯替潑諾的眼用無(wú)菌混懸液，含有0.5％依碳酸氯替潑諾微晶顆粒，選用0.3％～0.8％三氯叔丁醇作為防腐劑，0.1％～0.3％吐溫-80作為表面活性劑，0.1％～0.5％的羥丙甲基纖維素作為助懸劑，0.03％～0.08％依地酸二鈉作為金屬離子絡(luò)合劑，甘油和氯化鈉作為滲透壓調(diào)節(jié)劑。對(duì)依碳酸氯替潑諾和其他成分分別采用不同的滅菌方法制備而成。本發(fā)明除含有上述組分外，還可含有0.3％的妥布霉素。
cn1964719a(中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?00580016030.0，博士倫)公開(kāi)了在有需要的患者中治療中度至重度干眼癥的方法，所述方法包括局部給予所述患者在眼科可接受的載體中的依碳酸氯替潑諾。該發(fā)明中公開(kāi)了經(jīng)典的依碳酸氯替潑諾眼用混懸液的配方工藝。
上述這些與氯替潑諾制劑例如眼用液體制劑制備有關(guān)的文獻(xiàn)均未提供有效的制劑工藝以解決上文提及的原料藥微粉化與滴眼液微粒聚集之間的矛盾的技術(shù)方案。特別是，由于這種眼用液體藥物制劑在貯藏、流通過(guò)程中會(huì)接觸4～35℃不等的環(huán)境溫度，例如雖然此制劑不必冷藏保存，但是不能排除某些使用者因個(gè)人偏好而在購(gòu)入后置于4℃左右的冰箱中冷藏保存，這種環(huán)境溫度的改變對(duì)于混懸型藥液的物理性質(zhì)穩(wěn)定性可能產(chǎn)生新的問(wèn)題。
因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員迫切期待有一種制備氯替潑諾原料藥的方法，期待這種方法能夠在環(huán)境友好的條件下制得微粉化的氯替潑諾以供配制眼用混懸液使用，或者進(jìn)一步的期待使用此種微粉化原料藥制得的眼用混懸液具有優(yōu)異的藥學(xué)性質(zhì)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明目的在于提供一種制備氯替潑諾原料藥的方法，期待這種方法能夠在環(huán)境友好的條件下制得微粉化的氯替潑諾以供配制眼用混懸液使用，或者進(jìn)一步的期待使用此種微粉化原料藥制得的眼用混懸液具有優(yōu)異的藥學(xué)性質(zhì)。已經(jīng)出人意料的發(fā)現(xiàn)，使用本發(fā)明方法可以直接制得微粒尺寸令人滿意的微粉化氯替潑諾原料藥，使用此種微粉化氯替潑諾原料藥可以直接制備氯替潑諾眼用混懸液，并且制得的眼用混懸液具有優(yōu)異的藥學(xué)性質(zhì)例如具有優(yōu)異的粒子尺寸穩(wěn)定性。本發(fā)明基于此發(fā)現(xiàn)而得以完成。
為此，本發(fā)明第一方面提供了制備氯替潑諾的方法，該方法包括如下步驟：
使氯替潑諾原料溶解于第一有機(jī)溶劑中得到含藥溶液，在攪拌下向所得溶液中滴加第二有機(jī)溶劑，再繼續(xù)攪拌，過(guò)濾，用所述第二有機(jī)溶劑洗滌濾餅，使所述濾餅在真空干燥箱中干燥，即得。
根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述第一有機(jī)溶劑是二氯甲烷。
根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述第一有機(jī)溶劑是二氯甲烷，氯替潑諾原料與該第一有機(jī)溶劑的投料比為1：4～10(g/ml)，例如1：6。
根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述第二有機(jī)溶劑是石油醚，例如是石油醚(60～90℃)。
根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述第二有機(jī)溶劑是石油醚，氯替潑諾原料與該第二有機(jī)溶劑的投料比為1：10～20(g/ml)，例如1：15。
根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的方法，其中滴加第二有機(jī)溶劑時(shí)含藥溶液的溫度控制在15～35℃范圍內(nèi)，例如控制在室溫。
根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的方法，其中滴加完畢第二有機(jī)溶劑后，在15～35℃范圍的溫度下對(duì)物料進(jìn)行攪拌，例如在室溫下進(jìn)行攪拌。
根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的方法，其中在將氯替潑諾原料溶解于第一有機(jī)溶劑中時(shí)，還與該第一有機(jī)溶劑一起加入了二甲硅油。
根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的方法，其中在將氯替潑諾原料溶解于第一有機(jī)溶劑中時(shí)，還與該第一有機(jī)溶劑一起加入了二甲硅油，其中氯替潑諾原料與二甲硅油的投料比為1：0.1～1(g/ml)，例如1：0.2～0.3。
根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述氯替潑諾原料是照包括如下步驟的方法制備得到的：
步驟1)：將潑尼松龍加至含有四氫呋喃和甲醇組成的混合液中，攪拌溶解，滴加溫?zé)岬母叩馑徕c溶液，使反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時(shí)，減壓濃縮，蒸除四氫呋喃和甲醇，冷卻抽濾，水洗，干燥，得中間體i，即11α,17β-二羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸；
[在本步驟1)中，例如，四氫呋喃和甲醇的體積比為3～5：1，例如4：1；潑尼松龍與四氫呋喃的投料比為6～10：1(ml/g)，例如8：1；高碘酸鈉與潑尼松龍的重量比為1：0.5～1例如1：0.6]
步驟2)：將中間體ⅰ溶解于碳酸氫鈉水溶液中，加入二氯甲烷和四丁基硫酸氫銨，反應(yīng)混合物劇烈攪拌的同時(shí)加入氯甲酸乙酯，使反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2～5小時(shí)，分出有機(jī)層，濃縮至干，殘留物溶解于丙酮中，將此丙酮溶液加至冷水中，4℃放置過(guò)夜，得到的沉淀物真空干燥，得到中間體ii，即17α-乙氧羰基-11β-羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸乙基碳酰酐；
[在本步驟2)中，例如，中間體ⅰ與碳酸氫鈉的重量比為1：2～3，例如1：2.4；碳酸氫鈉水溶液的溶質(zhì)：溶劑比為20～30：100(g/ml)例如24：100(g/ml)；中間體ⅰ與二氯甲烷的投料比為1：5～15(克/毫升)例如1：10；中間體ⅰ與四丁基硫酸氫銨的摩爾比為1：0.02～0.1例如1：0.05；中間體ⅰ與氯甲酸乙酯的重量比為1：5～15，例如1：9.4]
步驟3)：將中間體ii加至水中，加入二乙胺，攪拌溶解，過(guò)濾，濾液用鹽酸溶液調(diào)節(jié)ph2到3之間，過(guò)濾，用水洗滌，干燥，得到中間體ⅲ，即17α-乙氧羰氧基-11β-羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸；
[在本步驟3)中，例如，中間體ii與水的投料比為1：3～8(g/ml)，例如1：5；中間體ii與二乙胺的摩爾比為1：1～3，例如1：2.2；鹽酸溶液濃度為10～30％例如20％]
步驟4)：將中間體ⅲ溶解于碳酸氫鈉水溶液中，加入二氯甲烷和四丁基硫酸氫銨，將含有氯磺酸氯甲基酯的二氯甲烷溶液滴加到上述混合物中，在室溫下攪拌1～5小時(shí)，分出有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液濃縮至干，加入丙酮加熱回流溶解，過(guò)濾，冷卻，析晶，得到17α-乙氧羰氧基-11β-羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸氯甲基酯，即氯替潑諾原料；
[在本步驟4)中，例如，中間體ⅲ與碳酸氫鈉重量比為1：0.5～1.5，例如1：1；所述碳酸氫鈉水溶液的濃度為5～15％，例如10％；中間體ⅲ與二氯甲烷的投料比為1：5～15(g/ml)例如1：10(g/ml)；中間體ⅲ與四丁基硫酸氫銨的摩爾比為1：0.02～0.1例如1：0.05；中間體ⅲ與氯磺酸氯甲基酯的摩爾比為1：1～1.5例如1：1.2；氯磺酸氯甲基酯的二氯甲烷溶液的濃度為20～30％例如24％]
根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的方法，其所制得的氯替潑諾的微粒的粒度分布為：d10＝2～4μm、d50＝4～8μm、d90均在8～15μm，例如為d10＝2～4μm、d50＝5～7μm、d90均在9～12μm。
進(jìn)一步的，本發(fā)明第二方面提供了一種氯替潑諾。
根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的氯替潑諾，其是照包括如下步驟的方法制備得到的：
使氯替潑諾原料溶解于第一有機(jī)溶劑中得到含藥溶液，在攪拌下向所得溶液中滴加第二有機(jī)溶劑，再繼續(xù)攪拌，過(guò)濾，用所述第二有機(jī)溶劑洗滌濾餅，使所述濾餅在真空干燥箱中干燥，即得。
根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的氯替潑諾，其中所述第一有機(jī)溶劑是二氯甲烷。
根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的氯替潑諾，其中所述第一有機(jī)溶劑是二氯甲烷，氯替潑諾原料與該第一有機(jī)溶劑的投料比為1：4～10(g/ml)，例如1：6。
根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的氯替潑諾，其中所述第二有機(jī)溶劑是石油醚，例如是石油醚(60～90℃)。
根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的氯替潑諾，其中所述第二有機(jī)溶劑是石油醚，氯替潑諾原料與該第二有機(jī)溶劑的投料比為1：10～20(g/ml)，例如1：15。
根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的氯替潑諾，其中滴加第二有機(jī)溶劑時(shí)含藥溶液的溫度控制在15～35℃范圍內(nèi)，例如控制在室溫。
根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的氯替潑諾，其中滴加完畢第二有機(jī)溶劑后，在15～35℃范圍的溫度下對(duì)物料進(jìn)行攪拌，例如在室溫下進(jìn)行攪拌。
根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的氯替潑諾，其中在將氯替潑諾原料溶解于第一有機(jī)溶劑中時(shí)，還與該第一有機(jī)溶劑一起加入了二甲硅油。
根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的氯替潑諾，其中在將氯替潑諾原料溶解于第一有機(jī)溶劑中時(shí)，還與該第一有機(jī)溶劑一起加入了二甲硅油，其中氯替潑諾原料與二甲硅油的投料比為1：0.1～1(g/ml)，例如1：0.2～0.3。
根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的氯替潑諾，其中所述氯替潑諾原料是照包括如下步驟的方法制備得到的：
步驟1)：將潑尼松龍加至含有四氫呋喃和甲醇組成的混合液中，攪拌溶解，滴加溫?zé)岬母叩馑徕c溶液，使反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時(shí)，減壓濃縮，蒸除四氫呋喃和甲醇，冷卻抽濾，水洗，干燥，得中間體i，即11α,17β-二羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸；
[在本步驟1)中，例如，四氫呋喃和甲醇的體積比為3～5：1，例如4：1；潑尼松龍與四氫呋喃的投料比為6～10：1(ml/g)，例如8：1；高碘酸鈉與潑尼松龍的重量比為1：0.5～1例如1：0.6]
步驟2)：將中間體ⅰ溶解于碳酸氫鈉水溶液中，加入二氯甲烷和四丁基硫酸氫銨，反應(yīng)混合物劇烈攪拌的同時(shí)加入氯甲酸乙酯，使反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2～5小時(shí)，分出有機(jī)層，濃縮至干，殘留物溶解于丙酮中，將此丙酮溶液加至冷水中，4℃放置過(guò)夜，得到的沉淀物真空干燥，得到中間體ii，即17α-乙氧羰基-11β-羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸乙基碳酰酐；
[在本步驟2)中，例如，中間體ⅰ與碳酸氫鈉的重量比為1：2～3，例如1：2.4；碳酸氫鈉水溶液的溶質(zhì)：溶劑比為20～30：100(g/ml)例如24：100(g/ml)；中間體ⅰ與二氯甲烷的投料比為1：5～15(克/毫升)例如1：10；中間體ⅰ與四丁基硫酸氫銨的摩爾比為1：0.02～0.1例如1：0.05；中間體ⅰ與氯甲酸乙酯的重量比為1：5～15，例如1：9.4]
步驟3)：將中間體ii加至水中，加入二乙胺，攪拌溶解，過(guò)濾，濾液用鹽酸溶液調(diào)節(jié)ph2到3之間，過(guò)濾，用水洗滌，干燥，得到中間體ⅲ，即17α-乙氧羰氧基-11β-羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸；
[在本步驟3)中，例如，中間體ii與水的投料比為1：3～8(g/ml)，例如1：5；中間體ii與二乙胺的摩爾比為1：1～3，例如1：2.2；鹽酸溶液濃度為10～30％例如20％]
步驟4)：將中間體ⅲ溶解于碳酸氫鈉水溶液中，加入二氯甲烷和四丁基硫酸氫銨，將含有4.75克氯磺酸氯甲基酯的二氯甲烷溶液滴加到上述混合物中，在室溫下攪拌1～5小時(shí)，分出有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液濃縮至干，加入丙酮加熱回流溶解，過(guò)濾，冷卻，析晶，得到17α-乙氧羰氧基-11β-羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸氯甲基酯，即氯替潑諾原料；
[在本步驟4)中，例如，中間體ⅲ與碳酸氫鈉重量比為1：0.5～1.5，例如1：1；所述碳酸氫鈉水溶液的濃度為5～15％，例如10％；中間體ⅲ與二氯甲烷的投料比為1：5～15(g/ml)例如1：10(g/ml)；中間體ⅲ與四丁基硫酸氫銨的摩爾比為1：0.02～0.1例如1：0.05；中間體ⅲ與氯磺酸氯甲基酯的摩爾比為1：1～1.5例如1：1.2；氯磺酸氯甲基酯的二氯甲烷溶液的濃度為20～30％例如24％]
根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的氯替潑諾，其微粒的粒度分布為：d10＝2～4μm、d50＝4～8μm、d90均在8～15μm，例如為d10＝2～4μm、d50＝5～7μm、d90均在9～12μm。
進(jìn)一步的，本發(fā)明第三方面提供了一種眼用藥物組合物，其為滴眼液形式的劑型，該組合物中包括氯替潑諾和藥學(xué)可接受的輔料。
根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的眼用藥物組合物，其具有如本發(fā)明下文任一組合物例所述的配方。
根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的眼用藥物組合物，其中所述氯替潑諾是照本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案所述方法制備得到的。
根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的眼用藥物組合物，其中所述氯替潑諾如本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案所述。
根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的眼用藥物組合物，其為混懸滴眼液的劑型，其中包含：氯替潑諾、聚維酮、苯扎氯銨、edta-2na、甘油、泰洛沙泊、酸堿調(diào)節(jié)劑和水。例如，其中氯替潑諾的濃度為0.5％；例如，其中聚維酮的濃度為0.6％；例如，其中苯扎氯銨的濃度為0.02％；例如，其中edta-2na為其二水合物，其濃度為0.01％；例如，其中甘油的濃度為2.4％；例如，其中泰洛沙泊的濃度為0.3％；例如，其中酸堿調(diào)節(jié)劑的用量是調(diào)節(jié)溶液的ph值至5.8～6.2。
根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的眼用藥物組合物，其中所含微粒的粒度分布為：d10＝2～4μm、d50＝4～8μm、d90均在8～15μm，例如為d10＝2～4μm、d50＝5～7μm、d90均在9～12μm。
根據(jù)本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案的眼用藥物組合物，其在經(jīng)40℃恒溫放置2個(gè)月、2～4℃恒溫放置1個(gè)月、40℃恒溫放置2個(gè)月、2～4℃恒溫放置1個(gè)月的方式處置6個(gè)月后，其中所含微粒的粒度分布為：d10＝2～6μm、d50＝4～10μm、d90均在8～25μm，例如為d10＝2～5μm、d50＝5～9μm、d90均在9～15μm。
進(jìn)一步的，本發(fā)明第四方面提供了一種本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案所述方法制備得到的氯替潑諾或者本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案所述氯替潑諾在制備用于治療或預(yù)防眼部炎癥或干眼癥的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明第四方面任一實(shí)施方案的用途，其中所述藥物如本發(fā)明第三方面任一實(shí)施方案所述的眼用藥物組合物。
在本發(fā)明上述制備方法的步驟中，雖然其描述的具體步驟在某些細(xì)節(jié)上或者語(yǔ)言描述上與下文具體實(shí)施方式部分的制備例中所描述的步驟有所區(qū)別，然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明全文的詳細(xì)公開(kāi)完全可以概括出以上所述方法步驟。
本發(fā)明的任一方面的任一實(shí)施方案，可以與本發(fā)明其它任一實(shí)施方案進(jìn)行組合，只要它們不會(huì)出現(xiàn)矛盾。此外，在本發(fā)明任一方面的任一實(shí)施方案中，任一技術(shù)特征可以適用于本發(fā)明其它任一實(shí)施方案中的該技術(shù)特征，只要它們不會(huì)出現(xiàn)矛盾。
下面對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述。
本發(fā)明所引述的所有文獻(xiàn)，它們的全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用并入本文，并且如果這些文獻(xiàn)所表達(dá)的含義與本發(fā)明不一致時(shí)，以本發(fā)明的表述為準(zhǔn)。此外，本發(fā)明使用的各種術(shù)語(yǔ)和短語(yǔ)具有本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的一般含義，即便如此，本發(fā)明仍然希望在此對(duì)這些術(shù)語(yǔ)和短語(yǔ)作更詳盡的說(shuō)明和解釋，提及的術(shù)語(yǔ)和短語(yǔ)如有與公知含義不一致的，以本發(fā)明所表述的含義為準(zhǔn)。
本發(fā)明方法制備得到的氯替潑諾是一種優(yōu)良的活性藥物，并且所得原料藥和制劑具有優(yōu)異的藥學(xué)性質(zhì)。
具體實(shí)施方式
通過(guò)下面的實(shí)施例可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的描述，然而，本發(fā)明的范圍并不限于下述實(shí)施例。本領(lǐng)域的專業(yè)人員能夠理解，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的前提下，可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種變化和修飾。本發(fā)明對(duì)試驗(yàn)中所使用到的材料以及試驗(yàn)方法進(jìn)行一般性和/或具體的描述。雖然為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的所使用的許多材料和操作方法是本領(lǐng)域公知的，但是本發(fā)明仍然在此作盡可能詳細(xì)描述。以下實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，而不是限制本發(fā)明。
一、化合物制備的實(shí)施例
實(shí)施例1：制備氯替潑諾
步驟1.氧化
在含有120毫升四氫呋喃和30毫升甲醇組成的混合液中，加入潑尼松龍14.9克(40mmol)，攪拌溶解，滴加溫?zé)岬母叩馑徕c溶液(25.7g克高碘酸鈉溶解在100毫升水中)，滴加完畢后，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時(shí)，減壓濃縮，蒸除四氫呋喃和甲醇，冷卻抽濾，水洗，干燥，得11α,17β-二羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸(中間體i)13克，為類(lèi)白色粉末，熔點(diǎn)258-260℃，收率90.8％。
步驟2.縮合
將10克中間體ⅰ(28.8mmol)加入到含有24.2克碳酸氫鈉的100毫升水中，攪拌溶解，然后加入100毫升二氯甲烷和0.57克四丁基硫酸氫銨(1.44mmol)，反應(yīng)混合物劇烈攪拌的同時(shí)加入氯甲酸乙酯9.4g(85mmol)，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3小時(shí)，分出有機(jī)層，濃縮至干，殘留物溶解到30毫升丙酮中，將此丙酮溶液加入到250毫升冷水中，4℃放置過(guò)夜，得到的沉淀物真空干燥，得到17α-乙氧羰基-11β-羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸乙基碳酰酐(中間體ii)13克，熔點(diǎn)為197.5-198.5℃。收率90.2％。
步驟3.胺解
取12克中間體ii(24.4mmol)加入到60毫升水中，攪拌均勻，加入二乙胺約5.52毫升(53.3mmol)，攪拌溶解，過(guò)濾，濾液滴加20％鹽酸調(diào)節(jié)ph2到3之間，過(guò)濾，水洗，干燥，得到10.1克17α-乙氧羰氧基-11β-羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸(中間體ⅲ)，熔點(diǎn)為187-191℃，收率99％。
步驟4.氯甲酯化
取10克中間體ⅲ(24mmol)，攪拌溶解到含有9.9克碳酸氫鈉的100毫升水溶液中，再加入100毫升二氯甲烷和0.47克(1.18mmol)四丁基硫酸氫銨，將含有4.75克氯磺酸氯甲基酯(29mmol)的20毫升二氯甲烷溶液滴加到上述混合物中，在室溫下攪拌2小時(shí)，分出有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液濃縮至干，加入100毫升丙酮加熱回流溶解，過(guò)濾，冷卻，析晶即得17α-乙氧羰氧基-11β-羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸氯甲基酯(氯替潑諾)，共得成品10.4克(92.8％收率)。含量為99.4％。
步驟5.微晶化
取氯替潑諾5g，加入30ml二氯甲烷和1g二甲硅油，攪拌溶解，得到溶液a。在250ml的園底燒瓶中，滴加入75ml石油醚(60～90℃)，打開(kāi)攪拌，控制溫度在20℃左右。將溶液a滴加到石油醚中，滴加完畢，再繼續(xù)攪拌0.5小時(shí)，過(guò)濾，用少量石油醚洗滌濾餅，將所得濾餅放入真空干燥箱中，在溫度75℃下真空干燥(干燥后雖然呈現(xiàn)碎塊狀，但是用玻棒輕觸即容易分散成細(xì)粉，在測(cè)定粒度分布時(shí)照該粒度分布測(cè)定法處理樣品而不需要特殊分散/粉碎處理即可測(cè)得其呈現(xiàn)極細(xì)微平均粒度的微晶)，共得氯替潑諾微晶4.85克(收率為97％，總收率73％)。
實(shí)施例2：制備氯替潑諾
步驟1.氧化
在含有120毫升四氫呋喃和30毫升甲醇組成的混合液中，加入潑尼松龍14.9克(40mmol)，攪拌溶解，滴加溫?zé)岬母叩馑徕c溶液(25.7g克高碘酸鈉溶解在100毫升水中)，滴加完畢后，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3小時(shí)，減壓濃縮，蒸除四氫呋喃和甲醇，冷卻抽濾，水洗，干燥，得11α,17β-二羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸(中間體i)13.3克，為類(lèi)白色粉末，熔點(diǎn)258-261℃。
步驟2.縮合
將10克中間體ⅰ(28.8mmol)加入到含有24.2克碳酸氫鈉的100毫升水中，攪拌溶解，然后加入100毫升二氯甲烷和0.57克四丁基硫酸氫銨(1.44mmol)，反應(yīng)混合物劇烈攪拌的同時(shí)加入氯甲酸乙酯9.4g(85mmol)，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2.5小時(shí)，分出有機(jī)層，濃縮至干，殘留物溶解到30毫升丙酮中，將此丙酮溶液加入到250毫升冷水中，4℃放置過(guò)夜，得到的沉淀物真空干燥，得到17α-乙氧羰基-11β-羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸乙基碳酰酐(中間體ii)13克，熔點(diǎn)為197-198℃。
步驟3.胺解
取12克中間體ii(24.4mmol)加入到60毫升水中，攪拌均勻，加入二乙胺約5.52毫升(53.3mmol)，攪拌溶解，過(guò)濾，濾液滴加20％鹽酸調(diào)節(jié)ph2到3之間，過(guò)濾，水洗，干燥，得到10克17α-乙氧羰氧基-11β-羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸(中間體ⅲ)，熔點(diǎn)為188-191℃。
步驟4.氯甲酯化
取10克中間體ⅲ(24mmol)，攪拌溶解到含有9.9克碳酸氫鈉的100毫升水溶液中，再加入100毫升二氯甲烷和0.47克(1.18mmol)四丁基硫酸氫銨，將含有4.75克氯磺酸氯甲基酯(29mmol)的20毫升二氯甲烷溶液滴加到上述混合物中，在室溫下攪拌5小時(shí)，分出有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液濃縮至干，加入100毫升丙酮加熱回流溶解，過(guò)濾，冷卻，析晶即得17α-乙氧羰氧基-11β-羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸氯甲基酯(氯替潑諾)，共得成品10.9克。含量為99.7％。
步驟5.微晶化
取氯替潑諾5g，加入30ml二氯甲烷和1.2g二甲硅油，攪拌溶解，得到溶液a。在250ml的園底燒瓶中，滴加入75ml石油醚(60～90℃)，打開(kāi)攪拌，控制溫度在25℃左右。將溶液a滴加到石油醚中，滴加完畢，再繼續(xù)攪拌1小時(shí)，過(guò)濾，用少量石油醚洗滌濾餅，將所得濾餅放入真空干燥箱中，在溫度75℃下真空干燥，共得氯替潑諾微晶4.8g(總收率達(dá)70～75％)。
實(shí)施例3：制備氯替潑諾
步驟1.氧化
在含有120毫升四氫呋喃和30毫升甲醇組成的混合液中，加入潑尼松龍14.9克(40mmol)，攪拌溶解，滴加溫?zé)岬母叩馑徕c溶液(25.7g克高碘酸鈉溶解在100毫升水中)，滴加完畢后，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌5小時(shí)，減壓濃縮，蒸除四氫呋喃和甲醇，冷卻抽濾，水洗，干燥，得11α,17β-二羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸(中間體i)13.3克，為類(lèi)白色粉末，熔點(diǎn)257-260℃。
步驟2.縮合
將10克中間體ⅰ(28.8mmol)加入到含有24.2克碳酸氫鈉的100毫升水中，攪拌溶解，然后加入100毫升二氯甲烷和0.57克四丁基硫酸氫銨(1.44mmol)，反應(yīng)混合物劇烈攪拌的同時(shí)加入氯甲酸乙酯9.4g(85mmol)，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3小時(shí)，分出有機(jī)層，濃縮至干，殘留物溶解到30毫升丙酮中，將此丙酮溶液加入到250毫升冷水中，4℃放置過(guò)夜，得到的沉淀物真空干燥，得到17α-乙氧羰基-11β-羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸乙基碳酰酐(中間體ii)13克，熔點(diǎn)為197-199℃。
步驟3.胺解
取12克中間體ii(24.4mmol)加入到60毫升水中，攪拌均勻，加入二乙胺約5.52毫升(53.3mmol)，攪拌溶解，過(guò)濾，濾液滴加20％鹽酸調(diào)節(jié)ph2.5到3.5之間，過(guò)濾，水洗，干燥，得到10克17α-乙氧羰氧基-11β-羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸(中間體ⅲ)，熔點(diǎn)為188-192℃。
步驟4.氯甲酯化
取10克中間體ⅲ(24mmol)，攪拌溶解到含有9.9克碳酸氫鈉的100毫升水溶液中，再加入100毫升二氯甲烷和0.47克(1.18mmol)四丁基硫酸氫銨，將含有4.75克氯磺酸氯甲基酯(29mmol)的20毫升二氯甲烷溶液滴加到上述混合物中，在室溫下攪拌2小時(shí)，分出有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液濃縮至干，加入100毫升丙酮加熱回流溶解，過(guò)濾，冷卻，析晶即得17α-乙氧羰氧基-11β-羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸氯甲基酯(氯替潑諾)，共得成品10.7克。含量為99.6％。
步驟5.微晶化
取氯替潑諾5g，加入30ml二氯甲烷和1.5g二甲硅油，攪拌溶解，得到溶液a。在250ml的園底燒瓶中，滴加入75ml石油醚(60～90℃)，打開(kāi)攪拌，控制溫度在20℃左右。將溶液a滴加到石油醚中，滴加完畢，再繼續(xù)攪拌3小時(shí)，過(guò)濾，用少量石油醚洗滌濾餅，將所得濾餅放入真空干燥箱中，在溫度70℃下真空干燥，共得氯替潑諾微晶4.84g(總收率達(dá)70～75％)。
實(shí)施例4：制備氯替潑諾
參照實(shí)施例1的操作條件和操作步驟，但是在各步驟中各物質(zhì)的投料量增加到實(shí)施例1相應(yīng)物質(zhì)投料量的5倍。制得氯替潑諾微晶(總收率達(dá)70～75％)。
實(shí)施例5：制備氯替潑諾
參照實(shí)施例2的操作條件和操作步驟，但是在各步驟中各物質(zhì)的投料量增加到實(shí)施例2相應(yīng)物質(zhì)投料量的10倍。制得氯替潑諾微晶(總收率達(dá)70～75％)。
實(shí)施例6：制備氯替潑諾
參照實(shí)施例3的操作條件和操作步驟，但是在各步驟中各物質(zhì)的投料量增加到實(shí)施例3相應(yīng)物質(zhì)投料量的25倍。制得氯替潑諾微晶(總收率達(dá)70～75％)。
在補(bǔ)充試驗(yàn)中，在上述實(shí)施例1-6中，改用市售的氯替潑諾原料藥或者按其它文獻(xiàn)制得的氯替潑諾原料藥，將其照這些實(shí)施例的步驟5進(jìn)行微晶化處理，用所得氯替潑諾微晶為原料藥照制劑例1法制備滴眼液。本補(bǔ)充試驗(yàn)所得氯替潑諾微晶照試驗(yàn)例1方法測(cè)定粒度，顯示其d10、d50、和d90值與實(shí)施例1所得微晶基本一致；本補(bǔ)充試驗(yàn)所得滴眼液照試驗(yàn)例3方法測(cè)定穩(wěn)定性，顯示其平均粒徑增加百分?jǐn)?shù)均小于60％，這些滴眼液其制劑在剛制得時(shí)其中活性成分在滴眼液中的粒度分布與其原料藥基本一致，并且在經(jīng)歷高-低溫循環(huán)的6個(gè)月后仍然呈現(xiàn)基本不變的粒度分布；本補(bǔ)充試驗(yàn)所得滴眼液試驗(yàn)例4方法測(cè)定穩(wěn)定性，顯示其活性成分殘余百分?jǐn)?shù)均大于96％，呈現(xiàn)基本上滿意的化學(xué)穩(wěn)定性。
實(shí)施例11：制備氯替潑諾
分別參照實(shí)施例1-6的操作條件和操作步驟，不同的僅是在步驟5的微晶化處理過(guò)程中，不添加二甲硅油，分別制得6批氯替潑諾，總收率均可達(dá)70～75％。
實(shí)施例12：制備氯替潑諾(#001b)
取本發(fā)明實(shí)施例3步驟4所得氯替潑諾50克，加入到1000毫升的四頸圓底燒瓶中，加入無(wú)水乙醇500毫升，加熱回流，內(nèi)溫78.5℃，攪拌溶解后，稍降溫，加入活性碳25克，繼續(xù)攪拌10分鐘，熱濾，濾液自然冷卻到室溫，自然結(jié)晶，密閉放置48小時(shí)后，抽濾，少量乙醇洗滌，50℃真空干燥，得到氯替潑諾精品43克，收率為86.6％，用hplc檢測(cè)，含量為99.5％，有關(guān)物質(zhì)雜質(zhì)峰的含量都在0.1％以下。
實(shí)施例13：制備氯替潑諾(#714a)
向1000ml三頸瓶中加入200ml水，攪拌狀態(tài)加入17α-乙氧羰基氧基-11β-羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸乙基碳酸酐(本發(fā)明實(shí)施例3步驟2所得)49.1g，攪拌30分鐘，室溫滴加三乙胺直至溶液澄清，室溫反應(yīng)2小時(shí)后滴加鹽酸調(diào)ph值到3，攪拌30分鐘復(fù)測(cè)ph值不變，抽濾，水洗至ph值6，干燥后即得17α-乙氧羰基氧基-11β-羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸37.8g。
向1000ml三頸瓶中加入含有12％碳酸氫鉀和3％碘化鈉的溶液300ml，攪拌狀態(tài)下加入17α-乙氧羰基氧基-11β-羥基-3-氧代雄甾-1,4-二烯-17β-羧酸30.0g，攪拌溶解后再加入二氯甲烷200ml及四丁基硫酸氫銨1.5g，室溫滴加70ml含有氯磺酸氯甲酯14.3g的二氯甲烷溶液，滴完反應(yīng)3小時(shí)，二氯甲烷層用300ml水洗一次，加入無(wú)水硫酸鈉干燥1小時(shí)，抽濾，蒸干二氯甲烷，加入無(wú)水乙醇重結(jié)晶，抽濾，干燥后即得氯替潑諾31.2g。
試驗(yàn)例1：粒度測(cè)定
使用激光粒度分布儀測(cè)定氯替潑諾原料藥的粒度/粒度分布。激光粒度分布儀使用mastersizer2000儀器(malvern公司)，照《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版四部(中華人民共和國(guó)藥典2015年版四部，國(guó)家藥典委員會(huì)編，中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015.6)第132頁(yè)之“0982粒度和粒度分布測(cè)定法”中的第三法(光散射法)所載的一般規(guī)范進(jìn)行。測(cè)定條件為干法測(cè)定。
采用上述光散射法測(cè)定粉碎粉末的粒度和粒度分布，并計(jì)算粉末粒子的d10、d50、和d90值。
經(jīng)測(cè)定：實(shí)施例1-6之步驟5所得各批氯替潑諾微晶，其d10均在2.2～3.8μm范圍內(nèi)，d50均在5.1～6.4μm范圍內(nèi)，d90均在9.4～11.3μm范圍內(nèi)，例如實(shí)施例1之步驟5所得各批氯替潑諾微晶d10＝2.63μm，d50＝6.16μm，d90＝10.16μm，顯示這些微粒具有優(yōu)異的粒度分布，并且可直接用于眼用藥液的配制；實(shí)施例1-6之步驟4所得各批氯替潑諾，其83％以上的粒子不能通過(guò)60目篩，需要預(yù)先進(jìn)行微粉化處理才能用于制備混懸型滴眼液；實(shí)施例11所得各批氯替潑諾以及實(shí)施例12～13所得各批氯替潑諾，其65％以上的粒子不能通過(guò)60目篩，需要預(yù)先進(jìn)行微粉化處理才能用于制備混懸型滴眼液。
試驗(yàn)例2：氯替潑諾微粉化處理
將實(shí)施例1-6之步驟4所得各批氯替潑諾、實(shí)施例11所得各批氯替潑諾以及實(shí)施例12～13所得各批氯替潑諾，使用wlfm-p-85型氣流粉碎機(jī)(北京微菱)進(jìn)行微粉化處理(粉碎氣流1.0mpa、進(jìn)料速度0.5kg/h)，直至達(dá)到d10在2～5μm范圍內(nèi)、d50在4～10μm范圍內(nèi)、d90在8～25μm范圍內(nèi)的粒度分布的程度，得到微粉化氯替潑諾。
制劑例1：制備混懸型滴眼液
以下配方(以每1ml的量列出)是氯替潑諾混懸滴眼液的經(jīng)典配方，亦是國(guó)內(nèi)外臨床上使用的氯替潑諾混懸滴眼液(例如市售露達(dá)舒)所使用的配方：
以上處方中，*25.0mg/ml甘油，96％相當(dāng)于24mg/ml(2.4w/w)甘油，100％。另外，上述微粉化依碳氯替潑諾是文獻(xiàn)中規(guī)定的，本發(fā)明中使用的氯替潑諾是經(jīng)本發(fā)明方法微粉化或微晶化的。
分別使用上文實(shí)施例1-6之步驟5所得各批氯替潑諾微晶(在該步驟5的有機(jī)溶劑中析出時(shí)即可實(shí)現(xiàn)無(wú)菌)、試驗(yàn)例2所得各批微粉化氯替潑諾(這些微粉化不能保證無(wú)菌，需要額外進(jìn)行無(wú)菌處理才能實(shí)現(xiàn)滿足藥用要求的無(wú)菌品質(zhì)，在本發(fā)明中預(yù)先使用射線滅菌工藝對(duì)這些微粉化氯替潑諾進(jìn)行無(wú)菌處理)作為原料藥，使用上述處方來(lái)制備氯替潑諾混懸滴眼液。該滴眼液的制備方法如下(實(shí)際制備時(shí)每批投料量至少1000ml)：
1.取處方量60％的滅菌注射用水加熱至80℃，加入(除酸堿調(diào)節(jié)劑外的)輔料，攪拌至完全溶解；
2.在百級(jí)環(huán)境中用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾兩次；
3.加入菌檢合格的主藥，用乳勻機(jī)攪拌30分鐘；
4.用預(yù)先經(jīng)滅菌處理的0.1m鹽酸和或0.1m氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph值至6.0左右；
5.加滅菌注射用水至全量，攪勻，過(guò)200目篩，在百級(jí)環(huán)境中不斷攪拌灌裝至預(yù)先經(jīng)滅菌處理過(guò)的低密度聚乙烯瓶中，每瓶5ml。
在本發(fā)明中，使用如下hplc色譜條件對(duì)各種物料進(jìn)行質(zhì)量控制，包括測(cè)定各原料藥及其制劑中的活性成分含量以及其色譜純度、包括雜質(zhì)含量：使用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-0.1m冰醋酸(50：50)混合液，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。
試驗(yàn)例3：氯替潑諾混懸滴眼液的穩(wěn)定性
以制劑例1所得各種氯替潑諾混懸滴眼液以及市售氯替潑諾混懸滴眼液(h20110477)為試樣，先測(cè)定其中微粒的平均粒徑(malvernzetasizer儀，測(cè)定前先用手振動(dòng)5分鐘使其分散均勻)作為0月時(shí)間點(diǎn)的平均粒徑(d0)；接著，將各試樣在40℃恒溫環(huán)境下放置2個(gè)月，再在2～4℃恒溫環(huán)境下放置1個(gè)月，再在40℃恒溫環(huán)境下放置2個(gè)月，再在2～4℃恒溫環(huán)境下放置1個(gè)月，測(cè)定經(jīng)如此處置6個(gè)月后的各試樣的平均粒徑作為6月時(shí)間點(diǎn)的平均粒徑(d6)，按下式計(jì)算平均粒徑增加百分?jǐn)?shù)：
平均粒徑增加百分?jǐn)?shù)＝[(d6-d0)÷d0]×100％
結(jié)果：使用實(shí)施例1-6之步驟5所得各批氯替潑諾微晶為原料藥物制得的滴眼液，其平均粒徑增加百分?jǐn)?shù)均在21～46％范圍內(nèi)；使用實(shí)施例1-6之步驟4所得各批氯替潑諾并經(jīng)微粉化為原料藥物制得的滴眼液，以及市售氯替潑諾混懸滴眼液，其平均粒徑增加百分?jǐn)?shù)均在253～481％范圍內(nèi)；使用實(shí)施例11所得各批氯替潑諾并經(jīng)微粉化為原料藥物制得的滴眼液，其平均粒徑增加百分?jǐn)?shù)均在236～494％范圍內(nèi)；使用實(shí)施例12和實(shí)施例13所得各批氯替潑諾并經(jīng)微粉化為原料藥物制得的滴眼液，其平均粒徑增加百分?jǐn)?shù)均在263～422％范圍內(nèi)；這些結(jié)果顯示，經(jīng)實(shí)施例1-6之步驟5所得各批氯替潑諾微晶可以直接用于制備氯替潑諾混懸滴眼液，并且所得滴眼液在模擬上市條件下，其具有優(yōu)異的物理穩(wěn)定性.
如上文所述，已經(jīng)測(cè)得實(shí)施例1-6之步驟5所得各批氯替潑諾微晶，其d10均在2.2～3.8μm范圍內(nèi)，d50均在5.1～6.4μm范圍內(nèi)，d90均在9.4～11.3μm范圍內(nèi)。在本試驗(yàn)例3中，還測(cè)定了上述0月和6月時(shí)各種滴眼液中的微粒的粒度分布，結(jié)果顯示：使用實(shí)施例1-6之步驟5所得各批氯替潑諾微晶為原料藥物制得的滴眼液，其0月時(shí)d10均在2.6～3.7μm范圍內(nèi)、d50均在5.3～6.6μm范圍內(nèi)、d90均在9.1～11.5μm范圍內(nèi)，6月時(shí)d10均在2.5～4.1μm范圍內(nèi)、d50均在5.2～7.1μm范圍內(nèi)、d90均在9.3～12.2μm范圍內(nèi)，這一結(jié)果表明以本發(fā)明方法所得氯替潑諾微晶為原料藥物制得的滴眼液其制劑在剛制得時(shí)其中活性成分在滴眼液中的粒度分布與其原料藥一致，并且在經(jīng)歷高-低溫循環(huán)的6個(gè)月后仍然呈現(xiàn)基本不變的粒度分布；使用實(shí)施例1-6之步驟4所得各批氯替潑諾并經(jīng)微粉化為原料藥物制得的滴眼液、市售氯替潑諾混懸滴眼液、使用實(shí)施例11所得各批氯替潑諾并經(jīng)微粉化為原料藥物制得的滴眼液、使用實(shí)施例12和實(shí)施例13所得各批氯替潑諾并經(jīng)微粉化為原料藥物制得的滴眼液，其0月時(shí)d10均在2～6μm范圍內(nèi)、d50均在5～11μm范圍內(nèi)、d90均在9～25μm范圍內(nèi)，但在6月時(shí)其d10、d50和d90均有顯著的增加，與其用平均粒徑增加百分?jǐn)?shù)所反映的結(jié)果那樣吻合，這一結(jié)果表明，以這些微粉化氯替潑諾為原料藥物制得的滴眼液其制劑在剛制得時(shí)其中活性成分在滴眼液中的粒度分布與其原料藥基本上是一致的，但是在經(jīng)歷高-低溫循環(huán)的6個(gè)月后平均粒徑顯著的增加了。
試驗(yàn)例4：氯替潑諾混懸滴眼液的化學(xué)穩(wěn)定性
使用實(shí)施例1-6之步驟5所得各批氯替潑諾微晶為原料藥物制得的滴眼液，以及市售氯替潑諾混懸滴眼液，將它們置于40℃恒溫環(huán)境下放置6個(gè)月，測(cè)定在0月時(shí)和6月時(shí)滴眼液中的活性成分氯替潑諾的含量，以6月含量除以0月含量再乘以100％所得的百分?jǐn)?shù)作為經(jīng)此穩(wěn)定性試驗(yàn)處置后藥品中活性成分的殘余百分?jǐn)?shù)。結(jié)果表明市售氯替潑諾混懸滴眼液的活性成分殘余百分?jǐn)?shù)為97.8％，使用實(shí)施例1-6之步驟5所得各批氯替潑諾微晶為原料藥物制得的6批滴眼液的活性成分殘余百分?jǐn)?shù)均在97.1～98.4％范圍內(nèi)，顯示本發(fā)明滴眼液與市售品相比具有基本上相同的活性成分化學(xué)穩(wěn)定性。另外照上述方法測(cè)定制劑例1中以微粉化氯替潑諾原料藥所得滴眼液的化學(xué)穩(wěn)定性結(jié)果顯示這些滴眼液6月時(shí)的活性成分殘余百分?jǐn)?shù)均在95.3～97.7％范圍內(nèi)，呈現(xiàn)基本上滿意的化學(xué)穩(wěn)定性。
以上所述實(shí)施例僅是為充分說(shuō)明本發(fā)明而所舉的較佳的實(shí)施例，本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于此。本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明基礎(chǔ)上所作的等同替代或變換，均在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。本發(fā)明的保護(hù)范圍以權(quán)利要求書(shū)為準(zhǔn)。