本發(fā)明屬于生物材料領(lǐng)域，具體涉及一種絲膠/甘油共混膜的制備方法，還涉及由該方法制得的產(chǎn)品和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：：絲膠(sericin)和絲素(fibroin)是構(gòu)成蠶絲蛋白的主要成分，絲膠蛋白占總蠶絲蛋白的25％-30％。絲膠具有18種氨基酸，其中大部分氨基酸具有羥基、羧基、氨基等極性基團(tuán)，這些極性親水基團(tuán)賦予了絲膠良好的保濕性、吸濕性和反應(yīng)活性。絲膠是一種天然的、容易獲取的，且價(jià)格便宜的蛋白質(zhì)資源。絲膠的高親水性可保持傷口的濕潤(rùn)環(huán)境和吸收傷口滲出液，進(jìn)而有助于傷口的治愈。絲膠蛋白能抗氧化、抗凝血，具有良好的生物相容性、反應(yīng)活性和生物可降解性，因此絲膠蛋白被認(rèn)為是理想的生物醫(yī)用材料(參見(jiàn)文獻(xiàn)：1、zhang,y.q.,applicationsofnaturalsilkproteinsericininbiomaterials.biotechnologyadvances2002,20(2),91-100；2、teramoto,h.,t.kamedaandy.tamada."preparationofgelfilmfrombombyxmorisilksericinanditscharacterizationasawounddressing."bioscibiotechnolbiochem72,no.12(2008):3189-96；3、cao,t.t.；zhang,y.q.,processingandcharacterizationofsilksericinfrombombyxmorianditsapplicationinbiomaterialsandbiomedicines.materialsscience&engineering.c,materialsforbiologicalapplications2016,61,940-52.)。但純絲膠固有的脆性使其成形困難，這極大地限制了絲膠在生物材料領(lǐng)域的應(yīng)用?，F(xiàn)有技術(shù)通過(guò)在絲膠基材料中添加peg-de、戊二醛、n,n0-mbaam和dmu等化學(xué)交聯(lián)劑來(lái)增加絲膠材料拉伸性能的報(bào)道。但化學(xué)交聯(lián)劑的引入會(huì)帶來(lái)毒性和生物相容性低的問(wèn)題。納米銀因高效的抗菌效果被作為新型的抗菌劑使用。納米銀對(duì)真菌、病毒、革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性細(xì)菌顯示出廣譜的抗菌活性。納米銀已廣泛用于傷口敷料、服裝、食品容器、藥膏和植入涂料等領(lǐng)域。隨著納米技術(shù)的發(fā)展，借助紫外線在材料的表面原位合成納米銀成為了一種簡(jiǎn)單有效的方法(參見(jiàn)文獻(xiàn)：1、rai,m.,a.yadavanda.gade."silvernanoparticlesasanewgenerationofantimicrobials."biotechnoladv27,no.1(2009):76-83；2、ghosh,s.,r.kaushik,k.nagalakshmi,s.l.hoti,g.a.menezes,b.n.harishandh.n.vasan."antimicrobialactivityofhighlystablesilvernanoparticlesembeddedinagar-agarmatrixasathinfilm."carbohydrres345,no.15(2010):2220-7；3、lara,humbertoh.,nildav.ayala-lilianadelcarmenixtepanturrentandcristinarodríguezpadilla."bactericidaleffectofsilvernanoparticlesagainstmultidrug-resistantbacteria."worldjournalofmicrobiologyandbiotechnology26,no.4(2009):615-621；4、zhang,k.,g.liandy.hu."insituloadingofwell-dispersedsilvernanoparticlesonnanocrystallinemagnesiumoxideforreal-timemonitoringofcatalyticreactionsbysurfaceenhancedramanspectroscopy."nanoscale7,no.40(2015):16952-9；5、wang,xumei,wenrangao,shupingxuandweiqingxu."luminescentfibers:insitusynthesisofsilvernanoclustersonsilkviaultravioletlight-inducedreductionandtheirantibacterialactivity."chemicalengineeringjournal210,(2012):585-589.)。因此，研發(fā)一種綠色無(wú)毒的，具有一定形狀、穩(wěn)定性和力學(xué)性能，同時(shí)具備良好生物相容性的絲膠基抗菌材料，具有重要的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)意義。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明的目的之一在于提供一種絲膠/甘油共混膜的制備方法；本發(fā)明的目的之二在于提供由所述制備方法制得的絲膠/甘油共混膜；本發(fā)明的目的之三在于提供絲膠/甘油共混膜制備納米銀/絲膠/甘油共混膜的方法，本發(fā)明的目的之四在于提供由上述方法制得的納米銀/絲膠/甘油共混膜；本發(fā)明的目的之五在于提供所述納米銀/絲膠/甘油共混膜在制備抗菌材料中的應(yīng)用。為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：1、一種絲膠/甘油共混膜的制備方法，包括如下步驟：將絲膠溶液與甘油混合后倒入模具中，烘干成膜，獲得絲膠/甘油共混膜。本發(fā)明中，所述絲膠溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1～5％，所述甘油加入量按加入后甘油對(duì)絲膠的質(zhì)量比為10～50％。本發(fā)明中，所述烘干優(yōu)選25～65℃下烘干，更優(yōu)選為65℃。本發(fā)明中，絲膠溶液由以下方法制備：將蠶繭剪成碎片，于120℃、0.1mpa條件下處理，然后置于-80℃的條件下冷凍8h，冷凍干燥，得到絲膠粉末，重溶制得絲膠溶液。2、由所述制備方法制得的絲膠/甘油共混膜。3、利用所述絲膠/甘油共混膜制備納米銀/絲膠/甘油共混膜的方法，將所述絲膠/甘油共混膜浸入硝酸銀溶液，紫外輻射，制得納米銀/絲膠/甘油共混膜。本發(fā)明中，所述硝酸銀濃度為20～50mm。本發(fā)明中，所述紫外輻射為在365nm下照射20～60min。4、由所述方法制得的納米銀/絲膠/甘油共混膜。5、所述納米銀/絲膠/甘油共混膜在制備抗菌材料中的應(yīng)用。優(yōu)選的，所述抗菌為抗大腸桿菌和金黃色葡萄球菌。有益效果在于：本發(fā)明利用絲膠蛋白和甘油的特性先制備絲膠/甘油共混膜，然后以綠色原位合成納米銀，制得的納米銀/絲膠/甘油共混膜具有以下優(yōu)點(diǎn)：添加甘油能克服絲膠固有的脆性和成形困難的缺點(diǎn)，增加絲膠膜的柔韌性，適當(dāng)提升絲膠膜的吸濕和保濕能力，使絲膠膜可與皮膚溫和，柔軟地接觸；納米銀具有強(qiáng)大的抑菌、殺菌作用和廣譜的抑菌活性，可有效抑制大腸桿菌(革蘭氏陰性菌)和金黃色葡萄球菌(革蘭氏陽(yáng)性菌)的生長(zhǎng)。這種納米銀/絲膠/甘油共混膜克服了絲膠的脆性問(wèn)題，能有效阻擋外來(lái)細(xì)菌對(duì)創(chuàng)面的侵襲，且制作方便、環(huán)保、高效、價(jià)格便宜，同時(shí)共混膜中的絲膠蛋白因其自身的優(yōu)良性質(zhì)將會(huì)促進(jìn)創(chuàng)面的愈合。附圖說(shuō)明為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和有益效果更加清楚，本發(fā)明提供如下附圖進(jìn)行說(shuō)明：圖1為絲膠/甘油共混膜的力學(xué)性能測(cè)試；圖2為絲膠/甘油共混膜的接觸角測(cè)試；圖3為絲膠/甘油共混膜的吸濕率和保水率測(cè)試；圖4為絲膠/甘油共混膜及納米銀/絲膠/甘油復(fù)合材料的掃描電鏡表征；圖5為用抑菌圈檢測(cè)納米銀/絲膠/甘油共混膜分別對(duì)大腸桿菌及金黃色葡萄球菌的抑菌作用；圖6為用抑菌生長(zhǎng)曲線檢測(cè)納米銀/絲膠/甘油共混膜分別對(duì)大腸桿菌及金黃色葡萄球菌的抑菌作用。具體實(shí)施方式下面將結(jié)合附圖，對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)的描述。實(shí)施例1一種絲膠/甘油共混膜的制備方法，包括如下步驟：(1)絲膠蛋白溶液的制備：將蠶繭剪成約1cm2的碎片，置于燒杯中，按1g蠶繭/20ml水加入去離子水，在121℃、0.1mpa高溫高壓30min，過(guò)濾除去不溶解的絲素，收集濾液，冷凍干燥獲得絲膠粉；按照一定比例取絲膠粉加入去離子水煮沸溶解，獲得質(zhì)量濃度為5％的絲膠溶液；(2)絲膠/甘油共混膜的制備：分別將20μl、40μl、60μl、80μl、100μl甘油(密度1.25g/ml)分別加至裝有4.98ml、4.96ml、4.94ml、4.92ml和4.90ml質(zhì)量濃度為5％絲膠溶液的離心管中，混合均勻后，倒入模具中，65℃烘箱烘干成膜，分別獲得甘油對(duì)絲膠質(zhì)量比為10％、20％、30％、40％和50％的絲膠/甘油共混膜。本實(shí)施例中，在25～65℃下烘干均可實(shí)現(xiàn)發(fā)明目的。力學(xué)性能測(cè)試，使用動(dòng)態(tài)機(jī)械分析儀(dmaq800，ta，usa)對(duì)絲膠/甘油共混膜(甘油對(duì)絲膠質(zhì)量比為10％、20％、30％、40％和50％)進(jìn)行拉伸強(qiáng)度和斷裂伸長(zhǎng)率測(cè)試。將絲膠/甘油共混膜切成長(zhǎng)度為20mm、寬度為4mm的條帶備用，在進(jìn)行測(cè)試之前，將每個(gè)樣品的厚度輸入到測(cè)試軟件中。在室溫條件下以0.1n的力進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，夾具之間的標(biāo)準(zhǔn)長(zhǎng)度為10mm。利用應(yīng)力-應(yīng)變曲線計(jì)算膜的拉伸強(qiáng)度和斷裂伸長(zhǎng)率。每種類型的共混膜測(cè)試至少3個(gè)樣品，結(jié)果如圖1所示。結(jié)果顯示，甘油質(zhì)量比越高，拉伸強(qiáng)度越低，斷裂伸長(zhǎng)率越高，即柔韌性越好。接觸角測(cè)試，使用形狀滴定分析儀(dsa100，kruss，germany)對(duì)絲膠/甘油共混膜的接觸角進(jìn)行測(cè)試。將樣品切成約1cm2大小，平放在樣品臺(tái)上。隨后，通過(guò)注射器將4μl去離子超濾水滴落在膜上，使用計(jì)算機(jī)配置的視頻系統(tǒng)計(jì)算出與基底表面接觸的水滴左側(cè)和右側(cè)的接觸角大小，每種類型的共混膜測(cè)試至少3個(gè)樣品，結(jié)果如圖2所示。結(jié)果顯示，甘油質(zhì)量比越高，接觸角越低，即吸水能力越強(qiáng)。吸濕率和保濕率測(cè)試，將甘油對(duì)絲膠不同質(zhì)量比的共混干膜切成1cm×1cm大小，稱重精確(m1)。將干膜放置在相對(duì)濕度65％，溫度25℃的條件下24小時(shí)，然后取出薄膜稱重(m2)。每種類型的共混膜測(cè)試至少3個(gè)樣品。膜的吸濕率等于(m2-m1)/m1×100％，結(jié)果如圖3中a所示，結(jié)果顯示，甘油質(zhì)量比為10％～40％范圍內(nèi)，隨著甘油濃度升高，膜的吸濕率增加，當(dāng)甘油質(zhì)量比達(dá)到50％時(shí)，膜的吸濕率降低；將甘油對(duì)絲膠不同質(zhì)量比的共混干膜切成片(1cm×1cm)，小心稱重(m3)，然后在65℃烘箱中烘烤2小時(shí)，冷卻后稱重(m4)。每種類型的共混膜測(cè)試至少3個(gè)樣品，保水率等于m4/m3×100％，結(jié)果如圖3中b所示。結(jié)果表明，甘油質(zhì)量比對(duì)膜的保水率影響小。實(shí)施例2納米銀/絲膠/甘油共混膜的制備方法，包括如下步驟：配制濃度為50mm的硝酸銀溶液，將甘油對(duì)絲膠的質(zhì)量比為40％的混合膜剪成小塊，浸入現(xiàn)配好的硝酸銀溶液中，用365nm紫外光分別照射20min、40min、60min，取出室溫干燥后，獲得不同輻射還原時(shí)間的納米銀/絲膠/甘油共混膜。本實(shí)施例中，硝酸銀溶液濃度在20～50mm條件下均可實(shí)現(xiàn)發(fā)明目的。用掃描電子顯微鏡(sem)(jcm-5000，jeol，tokyo，japan)對(duì)絲膠/甘油共混膜及納米銀/絲膠/甘油共混膜的表面形態(tài)進(jìn)行觀察，以確認(rèn)納米銀在絲膠/甘油共混膜的表面原位合成。在觀察之前，將樣品的表面噴金3分鐘。結(jié)果如圖4所示，結(jié)果表明納米銀以紫外輻射時(shí)間依賴性的方式在絲膠/甘油共混膜表面高效原位合成。用抑菌圈檢測(cè)納米銀/絲膠/甘油共混膜分別對(duì)大腸桿菌及金黃色葡萄球菌的抑菌效果，將大腸桿菌和金黃色葡萄球菌接種在100mlluria-bertani(lb)培養(yǎng)基中并分別用振蕩培養(yǎng)箱以220rpm的速度37℃培養(yǎng)過(guò)夜。取停滯期的細(xì)菌均勻涂布在瓊脂培養(yǎng)基平板上；將直徑1.0cm的絲膠/甘油共混膜和納米銀/絲膠/甘油共混膜在紫外線下照射滅菌30分鐘，放入用于抗菌試驗(yàn)的平板中，在37℃細(xì)菌培養(yǎng)箱培養(yǎng)12小時(shí)后，根據(jù)細(xì)菌圈的大小評(píng)價(jià)樣品的抗菌活性。所有抗菌活性試驗(yàn)進(jìn)行一式三份，抑菌圈結(jié)果參見(jiàn)圖5和表1。結(jié)果顯示，經(jīng)不同時(shí)間照射制得的納米銀/絲膠/甘油共混膜均出現(xiàn)抑菌圈，而絲膠/甘油共混膜未出現(xiàn)抑菌圈，表明絲膠/甘油共混膜對(duì)大腸桿菌及金黃色葡萄球菌無(wú)抑菌效果，合成納米銀后對(duì)大腸桿菌及金黃色葡萄球菌具有良好的抑菌效果。表1、細(xì)菌圈的大小用抑菌生長(zhǎng)曲線檢測(cè)納米銀/絲膠/甘油共混膜分別對(duì)大腸桿菌及金黃色葡萄球菌的抑菌效果，將停滯期的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌接種到10mlluria-bertani(lb)培養(yǎng)基中，并用振蕩培養(yǎng)箱220rpm、37℃培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期。將加入和未加入絲膠/甘油共混膜和納米銀/絲膠/甘油共混膜的對(duì)數(shù)期細(xì)菌在37℃以恒定的振蕩速度(220rpm)培養(yǎng)。收集不同時(shí)間間隔的細(xì)菌，測(cè)定其600nm處的光密度(od600)。所有生長(zhǎng)曲線試驗(yàn)進(jìn)行一式三份，結(jié)果如圖6所示。結(jié)果表明納米銀/絲膠/甘油共混膜能夠明顯抑制大腸桿菌及金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)。最后說(shuō)明的是，以上優(yōu)選實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管通過(guò)上述優(yōu)選實(shí)施例已經(jīng)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的描述，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以在形式上和細(xì)節(jié)上對(duì)其作出各種各樣的改變，而不偏離本發(fā)明權(quán)利要求書(shū)所限定的范圍。當(dāng)前第1頁(yè)12當(dāng)前第1頁(yè)12