本發(fā)明涉及新型氨基二硫代甲酸酯類化合物，其可藥用鹽、含有所述化合物的藥物組合物。本發(fā)明還涉及此類化合物在制備具有選擇性拮抗丙酮酸激酶m2亞型作用、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的抗腫瘤藥物中的用途。同時還涉及這些類化合物的制備方法。本發(fā)明屬于藥物合成技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

抗腫瘤藥物研究一直是全世界藥物研究的熱點領(lǐng)域之一。目前，有效的抗腫瘤藥物很多，但是藥效好、毒副作用低的抗腫瘤藥物卻很少。因此，目前抗腫瘤藥物研究要解決的關(guān)鍵問題是發(fā)現(xiàn)療效好、毒副作用低的抗腫瘤藥物。利用腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞在代謝過程中的區(qū)別，選擇性地干預(yù)腫瘤細(xì)胞代謝過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，有可能達(dá)到既不損傷正常細(xì)胞，又可以抑制腫瘤細(xì)胞生長的目的。

葡萄糖代謝是機體重要的供能方式，其主要有兩種形式——無氧酵解和有氧氧化。糖酵解是指在氧氣不足的條件下，葡萄糖分解為丙酮酸或乳酸的過程，并伴有少量atp的生成。而有氧條件下，丙酮酸可進(jìn)入三羧酸循環(huán)進(jìn)一步氧化分解生成co2和h2o，產(chǎn)生更多的atp，該過程稱為糖的有氧氧化。正常細(xì)胞，在氧氣充足的條件下，葡萄糖經(jīng)過有養(yǎng)氧化，產(chǎn)生充足的atp，只在氧氣不足的情況下，才進(jìn)行糖酵解從而產(chǎn)生乳酸和較少的atp。而腫瘤細(xì)胞無論氧氣充足與否，葡糖糖都通過糖酵解途徑，最后丙酮酸代謝成乳酸，產(chǎn)生少量的atp。糖代謝異常是腫瘤細(xì)胞的一個重要特征，這一現(xiàn)象在20世紀(jì)20年代由德國生物學(xué)家ottowarburg發(fā)現(xiàn)，故稱為warburg效應(yīng)(warburgeffect)(warburg,o.ontheoriginofcancercells,science,1956,123,309-314)。

雖然早在20世紀(jì)早期就發(fā)現(xiàn)了warburg效應(yīng)，但這種效應(yīng)是怎么產(chǎn)生的，對腫瘤的發(fā)生發(fā)展有什么意義等問題一直不清楚。近年來隨著腫瘤代謝研究的快速發(fā)展，科學(xué)家們慢慢揭示了warburg效應(yīng)對腫瘤的意義，即它為腫瘤細(xì)胞的增殖提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。(matthew,g.understandingthewarburgeffect:themetabolicrequirementsofcellproliferation.science,2009,324,1029-1033)。而在此過程中很關(guān)鍵的一個因素，就是催化糖酵解最后一步的關(guān)鍵酶-丙酮酸激酶。在腫瘤細(xì)胞中，丙酮酸激酶的m2亞型顯著高表達(dá)，正是其把守在糖酵解的最后一個關(guān)卡，控制著葡糖糖碳源的走向，在給細(xì)胞提供能量的同時給腫瘤細(xì)胞的增殖提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。2005年，mazurek,s發(fā)現(xiàn)的腫瘤細(xì)胞中pkm2亞型表達(dá)顯著增高(mazurek,s.；boschek,c.b.pyruvatekinasetypem2anditsroleintumorgrowthandspreading.semin.cancerbiol.,2005,15,300-308)，這一現(xiàn)象引起了人們的高度重視。越來越多的研究表明，pkm2的高表達(dá)與warburg效應(yīng)相關(guān)，促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的生長(fergusone.c，rathmellj.c.newrolesforpyruvatekinasem2:workingoutthewarburgeffect.trendsbiochemsci,2008,33,359-362)。丙酮酸激酶有4種亞型，即pkl、pkr、pkm1和pkm2亞型。pkl亞型特異性的表達(dá)于紅細(xì)胞，pkr亞型表達(dá)于肝和腎；在正常細(xì)胞組織中，大多數(shù)的成熟組織都是表達(dá)pkm1亞型的，pkm2亞型只在胚胎形成期表達(dá)；然而，pkm2亞型在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)并且慢慢替代了原組織的正常亞型。

抑制pkm2從而對腫瘤產(chǎn)生抑制作用的機制在裸鼠的成瘤實驗中已得到證實，該成果發(fā)表在2008年的nature雜志上。(christofk,h.r.；vanderheiden,m.g.them2spliceisoformofpyruvatekinaseisimportantforcancermetabolismandtumourgrowth.nature.2008,452,230-233)，因此，pkm2被認(rèn)為是一個非常有價值的抗腫瘤藥物新靶點?；谠摪悬c進(jìn)行抗腫瘤藥物研究，有可能發(fā)現(xiàn)高效、低毒的抗腫瘤新藥，解決目前抗腫瘤藥物研究中的關(guān)鍵問題。

pkm2在腫瘤細(xì)胞代謝過程中的分子機制研究取得的突破性進(jìn)展，引起了藥物化學(xué)家們的高度興趣，近年來以pkm2為靶點的抗腫瘤新藥研究開始受到重視。2008年，spoden等開發(fā)出一些適配子肽，用于抑制pkm2形成，這些適配子被證明能夠在低葡萄糖狀態(tài)下抑制細(xì)胞增殖(spoden,g.a.；mazurek,s.；morandell,d.；bacher,n.；ausserlechner,m.j.；jansen-durr,p.；eigenbrodt,e.；zwerschke,w.isotype-specificinhibitorsoftheglycolytickeyregulatorpyruvatekinasesubtypem2moderatelydeceleratetumorcellproliferation.intjcancer2008,123,312-321)。2010年，matthew等通過高通量篩選技術(shù)獲得三個pkm2小分子抑制劑，實驗證實它們能夠有效抑制h1299腫瘤細(xì)胞裂解液中pkm2的活性(vanderheiden,m.g.；christofk,h.r.；schuman,e.；subtelny,a.o.；sharfi,h.；harlow,e.e.；xian,j.；cantley,l.c.identificationofsmallmoleculeinhibitorsofpyruvatekinasem2.biochempharmacol2010,79,1118-1124)。2011年，chen等研究發(fā)現(xiàn)天然產(chǎn)物紫草素(shikonin)及其類似物可以明顯抑制a549和mcf-7腫瘤細(xì)胞的糖酵解(chen,j.；xie,j.；jiang,z.；wang,b.；wang,y.；hu,x.shikoninanditsanalogsinhibitcancercellglycolysisbytargetingtumorpyruvatekinase-m2oncogene2011,30,4297-4306)。

雖然目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了幾種pkm2的抑制劑，但活性低，且相對其它丙酮酸激酶亞型的選擇性不理想。因此，我們對小分子化合物庫進(jìn)行活性篩選，從中發(fā)現(xiàn)一種新結(jié)構(gòu)類型的pkm2抑制劑，并根據(jù)該抑制劑設(shè)計合成了一系列的化合物。通過酶活性測試，證實該類化合物對pkm2的抑制活性和選擇性都顯著優(yōu)于目前已有的pkm2抑制劑。

對本發(fā)明中的化合物分別進(jìn)行了丙酮酸激酶m2和m2亞型及mcf-7、hct116、hela、h1299四種腫瘤細(xì)胞系的殺傷作用測試?；钚詼y試證明此類化合物具有顯著的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一類新型具有選擇性拮抗丙酮酸激酶m2亞型作用的抗腫瘤化合物，以及這些化合物的制備方法和用途。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)手段：

本發(fā)明的一種氨基二硫代甲酸酯類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，具有通式i所示的結(jié)構(gòu)：

其中，

n為0-3的整數(shù)；

r為位于苯環(huán)上任意位置的取代基，r選自氫，c1-4烷基、c1-4烷氧基、鹵素、c1-4鹵代烷基、羥基、氰基、巰基、硝基和氨基所組成的組；

r’和r”滿足下述兩種情形之一：(1)r’和r”各自獨立地選自氫、烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基所組成的組；或者(2)r’和r”連同二者所連接的n原子共同形成5-6元雜環(huán)，所述雜環(huán)選自取代或非取代的以下基團：嗎啉基、硫嗎啉基、噻唑烷基、噁唑基、異噁唑基、咪唑烷基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基；所述雜環(huán)任選被一個或多個取代基取代時，所述取代基各自獨立地選自由烷基、?；⑾┗?、炔基、苯基以及芐基所組成的組；

r”’選自氫，c1-4烷基、c1-4烷氧基、鹵素、c1-4鹵代烷基、羥基、氰基、巰基、硝基、氨基所組成的組。

在本發(fā)明中，優(yōu)選的，通式i中：

n為0或1；

r選自氫；

r’和r”滿足下述兩種情形之一：(1)r’和r”各自獨立地選自氫、甲基、乙基、丙基、丁基、羥乙基、烯丙基、環(huán)己基、c1-4烷基取代或非取代的哌嗪基、c1-4烷基取代或非取代的哌啶基、c1-4烷基取代或非取代的芐基以及c1-4烷基取代或非取代的吡啶烷基；或者(2)r’和r”連同二者所連接的n原子共同形成嗎啉基、硫嗎啉基、2,6-二甲基嗎啉基、噻唑烷基、甲基哌嗪基、異丙基哌嗪基、乙?；哙夯?、苯基哌嗪基、芐基哌嗪基、哌啶基或吡咯烷基；

r”’選自甲基、氫、二乙基硫代氨甲酰硫甲基、二丙基硫代氨甲酰硫甲基、嗎啉-4-硫代氨甲酰硫甲基、哌啶-1-硫代氨甲酰硫甲基、二羥乙基硫代氨甲酰硫甲基、二甲基硫代氨甲酰硫甲基、吡咯烷-4-硫代氨甲酰硫甲基、噻唑烷-4-硫代氨甲酰硫甲基、二烯丙基氨基硫代氨甲酰硫甲基、硫嗎啉-4-硫代氨甲酰硫甲基所組成的組。

在本發(fā)明中，優(yōu)選的，所述的氨基二硫代甲酸酯類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，選自以下化合物所組成的組：

二乙基氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

二丙基氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

二丁基氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

雙二羥乙基氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

二烯丙基氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

嗎啉-4-氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

硫代嗎啉-4-氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

2,6-二甲基嗎啉-4-氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

噻唑烷-3-氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

吡咯烷-1-氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

哌啶-1-氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

4-甲基哌嗪-1-氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

4-異丙基哌嗪-1-氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

4-乙?；哙?1-氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

環(huán)己基甲基氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

甲氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

(4-甲基哌嗪-1)-二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

2-二乙氨基乙基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

哌啶-1-二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

芐基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

吡啶-3-甲基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

吡啶-2-甲基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

吡啶-4-甲基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

4-苯基哌嗪-1-二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

4-芐基哌嗪-1-二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

二乙基氨基二硫代甲酸-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

嗎啉-4-氨基二硫代甲酸-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

哌啶-1-氨基二硫代甲酸-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

4-苯基哌嗪-1-氨基二硫代甲酸--1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

二丙基氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-酯；

嗎啉-4-氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-酯；

哌啶-1-氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-酯；

4-乙?；哙?1-氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-酯；

二乙基氨基二硫代甲酸-3-二乙基硫代氨甲酰硫甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

二丙基氨基二硫代甲酸-3-二丙基硫代氨甲酰硫甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

嗎啉-4-氨基二硫代甲酸-3-嗎啉-4-硫代氨甲酰硫甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

哌啶-1-氨基二硫代甲酸-3-哌啶-1-硫代氨甲酰硫甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

二羥乙基氨基二硫代甲酸-3-二羥乙基硫代氨甲酰硫甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

二甲基氨基二硫代甲酸-3-二甲基硫代氨甲酰硫甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

吡咯烷-4-氨基二硫代甲酸-3-吡咯烷-4-硫代氨甲酰硫甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

噻唑烷-4-氨基二硫代甲酸-3-噻唑烷-4-硫代氨甲酰硫甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

二烯丙基氨基二硫代甲酸-3-二烯丙基氨基硫代氨甲酰硫甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯；

硫嗎啉-4-氨基二硫代甲酸-3-硫嗎啉-4-硫代氨甲酰硫甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯。

更進(jìn)一步的，本發(fā)明還提出了制備所述的氨基二硫代甲酸酯類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽方法，包括以下步驟：

以甲萘醌為原料，在醋酸溶劑中與甲醛和氯化氫發(fā)生親核加成和取代反應(yīng)生成2-氯甲基-3-甲基萘醌，即化合物1，2-氯甲基-3-甲基萘醌在溶劑中與二硫化碳和不同的胺反應(yīng)生成目標(biāo)化合物2-26；以aibn作為引發(fā)劑，甲萘醌和nbs發(fā)生溴代反應(yīng)生成2-溴甲基萘醌，即化合物27，2-溴甲基萘醌在溶劑中與二硫化碳和不同的胺反應(yīng)生成目標(biāo)化合物28-31；甲萘醌在溶劑中與二硫化碳和不同的胺直接反應(yīng)生成目標(biāo)化合物32-35；以萘醌為原料，在醋酸溶劑中與甲醛和氯化氫發(fā)生親核加成和取代反應(yīng)生成2，3-二氯甲基萘醌，即化合物36，2，3-二氯甲基萘醌在溶劑中與二硫化碳和不同的胺反應(yīng)生成目標(biāo)化合物37-46；

更進(jìn)一步的，本發(fā)明還提出了所述的氨基二硫代甲酸酯類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備抗腫瘤藥物中的用途。所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽對pkm2具有選擇性抑制的作用。

其中，優(yōu)選的，所述的腫瘤包括結(jié)腸癌、乳腺癌、宮頸癌細(xì)胞和肺癌。

再進(jìn)一步的，本發(fā)明還提出了一種用于治療腫瘤的藥物組合物，其含有所述的氨基二硫代甲酸酯類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。

本發(fā)明的藥物組合物可單獨給藥也可與其它抗腫瘤藥物聯(lián)合用藥。

所述的藥物組合物可為口服藥物、噴霧劑、直腸用藥、鼻腔用藥、頰部用藥或注射劑。本發(fā)明的藥物組合物可采用下面的任意方式施用：口服、噴霧吸入、直腸用藥、鼻腔用藥、頰部用藥、局部用藥、非腸道用藥，如皮下、靜脈、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、鞘內(nèi)、心內(nèi)室、胸骨內(nèi)或靜脈內(nèi)給藥方式。

當(dāng)口服用藥時，本發(fā)明化合物可制成任意口服可接受的制劑形式，包括但不限于片劑、膠囊、水溶液或水懸浮液。其中，片劑使用的載體可包括填充劑、潤滑劑、崩解劑、粘合劑。填充劑可包括但不限于淀粉、預(yù)膠化淀粉、糊精、糖粉、乳糖、甘露醇、微晶纖維素。潤滑劑包括但不限于硬脂酸、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、滑石粉、氧化植物油、聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉、微粉硅膠、滑石粉。崩解劑可包括但不限于交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚維酮、淀粉及其衍生物、低取代羥丙基纖維素、

泡騰崩解劑。粘合劑可包括但不限于羥丙基纖維素、聚維酮、淀粉漿、糊精、糖粉、糖漿、膠漿、纖維素及其衍生物。膠囊制劑使用的稀釋劑一般包括乳糖和干燥玉米淀粉。水懸乳液制劑則是將活性成分與適宜的懸浮劑混合使用，懸浮劑可包括但不限于潤濕劑、絮凝劑、反絮凝劑。任選地，以上口服制劑形式中還可加入一些甜味劑、芳香劑或著色劑。

具體實施方式

為了進(jìn)一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實施例。這些實施例完全是例證性的，它們僅用來對本發(fā)明進(jìn)行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對本發(fā)明的限制。

實施例1-46中分別給出了如下表1所示的化合物的制備方法：

表1化合物編號及其結(jié)構(gòu)式

實施例1：2-氯甲基-3-甲基-1,4-萘醌的制備(1)

將甲萘醌(1g，5.81mmol)溶解在冰醋酸(10ml)中，加入36％的甲醛水溶液(3ml)，冰浴條件下通入氯化氫氣體，攪拌反應(yīng)30min，直至溶液變成紅色，常溫攪拌反應(yīng)過夜。溶液變?yōu)樯詈稚?，將反?yīng)液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，用硅膠柱分離純化(石油醚/乙酸乙酯洗脫)得到黃色固體1，960mg，產(chǎn)率75.0％，¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.13-8.18(m,2h,arh),7.76-7.78(m,2h,arh),4.64(s,2h,ch2s),2.35(s,3h,c＝cch3).

實施例2：二乙基氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(2)

將二乙胺(123μl，1.2mmol)溶解在乙腈(10ml)中，加入二硫化碳(72μl，1.2mmol)，常溫攪拌反應(yīng)30min，分批加入2-氯甲基-3-甲基-1,4-萘醌(220mg,1mmol),常溫攪拌反應(yīng)，tlc檢測原料點消失，終止反應(yīng)，減壓旋干溶劑，加入少量水，用乙酸乙酯萃取，合并酯層,飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，用硅膠柱分離純化(石油醚/乙酸乙酯洗脫)得到黃色固體2，298mg，產(chǎn)率89.6％，mp155-156℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.11-8.14(m,2h,arh),7.73-7.74(m,2h,arh),4.65(s,2h,ch2s),4.06(q,2h,nch2),3.73(q,2h,nch2),2.37(s,3h,c＝cch3),1.30(t,6h,2ch2ch3).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ194.49,184.81,183.95,146.42,141.66,133.67,133.63,132.19,131.92,126.49,49.92,46.80,33.85,13.70,12.53,11.57.hr-ms(esi⁺)m/z:334.0936[m+h]⁺.found:334.0932[m+h]⁺.

實施例3：二丙基氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(3)

使用如上化合物2的合成方法，以2-氯甲基-3-甲基-1,4-萘醌和二丙胺為反應(yīng)物得到黃色固體3，收率86.0％，mp80-81℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.10-8.14(m,2h,arh),7.72-7.74(m,2h,arh),4.63(s,2h,ch2s),3.93(t,2h,nch2),3.61(t,2h,nch2),2.35(s,3h,c＝cch3),1.70-1.82(m,4h,2ch2ch3),0.92-0.98(m,6h,2ch2ch3).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ195.02,184.79,183.89,146.48,141.64,133.62,132.19,131.93,126.49,57.25,54.43,33.92,20.70,19.62,13.66,11.18.hr-ms(esi⁺)m/z:362.1249[m+h]⁺.found:362.1244[m+h]⁺.

實施例4：二丁基氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(4)

使用如上化合物2的合成方法，以2-氯甲基-3-甲基-1,4-萘醌和二丁胺為反應(yīng)物得到黃色固體4，收率90.5％，黃色粘稠狀液體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.11-8.15(m,2h,arh),7.73-7.75(m,2h,arh),4.63(s,2h,ch2s),3.98(t,2h,nch2),3.64(t,2h,nch2),2.36(s,3h,c＝cch3),1.67-1.75(m,4h,2ch2ch2ch3),1.32-1.41(m,4h,2ch2ch2ch3),0.93-1.00(m,6h,2ch2ch2ch3).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ194.80,184.81,183.88,146.48,141.67,133.60,132.21,131.97,126.48,55.46,52.60,33.93,29.69,29.38,26.36,20.12，13.81，13.65.hr-ms(esi⁺)m/z:390.1562[m+h]⁺.found:390.1558[m+h]⁺.

實施例5：雙二羥乙基氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(5)

使用如上化合物2的合成方法，以2-氯甲基-3-甲基-1,4-萘醌和二羥乙基胺為反應(yīng)物得到黃色固體5，收率82.4％，mp91-92℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.10-8.12(m,2h,arh),7.73-7.75(m,2h,arh),4.61(s,2h,ch2s),3.98-4.33(m,8h,2nch2ch2),2.78(s,2h,2oh),2.35(s,3h,c＝cch3).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ197.91,184.62,183.85,146.68,141.64,133.78,133.72,132.13,131.83,126.56,126.50,60.65,59.35,57.57,57.52,34.19,13.69.hr-ms(esi⁺)m/z:366.0834[m+h]⁺.found:366.0830[m+h]⁺.

實施例6：二烯丙基氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(6)

使用如上化合物2的合成方法，以2-氯甲基-3-甲基-1,4-萘醌和二烯丙基胺為反應(yīng)物得到黃色固體6，收率75.0％，mp95-96℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.10-8.12(m,2h,arh),7.72-7.75(m,2h,arh),5.81-5.91(m,2h,2ch＝ch2)，5.20-5.28(m,4h,2ch＝ch2),4.68(m,2h,nch2),4.65(s,2h,ch2s),4.31(m,2h,nch2),2.35(s,3h,c＝cch3).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ196.95,184.72,183.83,146.51,141.44,133.65,133.62,132.19,131.92,130.98,130.92,130.31,126.48,118.74,56.86,53.71,34.25,13.65.hr-ms(esi⁺)m/z:358.0936[m+h]⁺.found:358.0934[m+h]⁺.

實施例7：嗎啉-4-氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(7)

使用如上化合物2的合成方法，以2-氯甲基-3-甲基-1,4-萘醌和嗎啉為反應(yīng)物得到黃色固體7，收率86.4％，mp132-133℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.11-8.14(m,2h,arh),7.74-7.76(m,2h,arh),4.68(s,2h,ch2s),4.32(m,2h,nch2),3.99(m,2h,nch2),3.78(m,4h,ch2ch2),2.38(s,3h,c＝cch3).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ196.44,184.71,183.93,146.54,141.26,133.76,133.71,132.15,131.86,126.56,126.50,66.26,66.17,53.63,33.70,13.74.hr-ms(esi⁺)m/z:348.0728[m+h]⁺.found:348.0727[m+h]⁺.

實施例8：硫代嗎啉-4-氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(8)

使用如上化合物2的合成方法，以2-氯甲基-3-甲基-1,4-萘醌和硫嗎啉為反應(yīng)物得到黃色固體8，收率88.4％，mp157-158℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.12-8.13(m,2h,arh),7.73-7.75(m,2h,arh),4.67(s,2h,ch2s),4.55(t,2h,nch2),4.36(t,2h,nch2),2.77(s,4h,ch2sch2),2.37(s,3h,c＝cch3).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ195.78,184.68,183.91,146.54,141.27,133.74,133.69,132.16,131.87,126.54,126.49,60.19,54.19,33.92,27.27,13.71.hr-ms(esi⁺)m/z:364.0500[m+h]⁺.found:364.1151[m+h]⁺.

實施例9：2,6-二甲基嗎啉-4-氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(9)

使用如上化合物2的合成方法，以2-氯甲基-3-甲基-1,4-萘醌和二甲基嗎啉為反應(yīng)物得到黃色固體9，收率76.5％，mp141-142℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.11-8.14(m,2h,arh),7.73-7.76(m,2h,arh),5.48(m,1h,nch2ch),4.68(s,2h,ch2s),4.42(m,1h,nch2ch),3.67(t,2h,nch2),2.83(t,2h,nch2),2.37(s,3h,c＝cch3),1.25(d,3h,chch3),1.24(d,3h,chch3).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ195.87,184.70,183.97,146.52,141.33,133.75,133.69,132.16,131.86,126.55,126.49,71.33,71.30,33.65,18.56,13.71.hr-ms(esi⁺)m/z:376.1041[m+h]⁺.found:376.1039[m+h]⁺.

實施例10：噻唑烷-3-氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(10)

使用如上化合物2的合成方法，以2-氯甲基-3-甲基-1,4-萘醌和噻唑烷為反應(yīng)物得到黃色固體10，收率76.3％，mp148-149℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.11-8.14(m,2h,arh),7.73-7.76(m,2h,arh),5.07(s,1h,nch2s),4.70(s,1h,nch2s),4.67(s,2h,ch2s),4.35(t,1h,nch2ch2s),3.98(t,1h,nch2ch2s),3.21(t,1h,nch2ch2s),3.14(t,1h,nch2ch2s),2.38(s,3h,c＝cch3).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ192.87,184.80,183.98,146.43,141.25,133.78,133.71,132.16,131.83,126.56,126.49,56.61,52.58,33.82,31.18,13.78.hr-ms(esi⁺)m/z:350.0343[m+h]⁺.found:350.0339[m+h]⁺.

實施例11：吡咯烷-1-氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(11)

使用如上化合物2的合成方法，以2-氯甲基-3-甲基-1,4-萘醌和吡咯烷為反應(yīng)物得到黃色固體11，收率91.0％，mp171-172℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.11-8.12(m,2h,arh),7.72-7.74(m,2h,arh),4.68(s,2h,ch2s),3.97(t,2h,nch2),3.64(t,2h,nch2),2.38(s,3h,c＝cch3),2.05-2.12(m,2h,ch2ch2ch2ch2),1.97-2.03(m,2h,ch2ch2ch2ch2).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ191.67,184.80,184.02,146.18,141.82,133.64,133.60,132.20,131.92,126.48,126.45,55.37,50.52,33.19,26.11,24.25,13.72.hr-ms(esi⁺)m/z:332.0779[m+h]⁺.found:332.0777[m+h]⁺.

實施例12：哌啶-1-氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(12)

使用如上化合物2的合成方法，以2-氯甲基-3-甲基-1,4-萘醌和哌啶為反應(yīng)物得到黃色固體12，收率88.0％，mp146-147℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.10-8.12(m,2h,arh),7.72-7.74(m,2h,arh),4.66(s,2h,ch2s),4.25(m,4h,ch2nch2),2.37(s,3h,c＝cch3),1.72(m,6h,ch2ch2ch2).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ194.53,192.77,184.77,183.94,146.38,141.68,133.63,133.60,132.20,131.94,126.47,53.47,51.41,33.90,25.74,24.22,13.66.hr-ms(esi⁺)m/z:346.0936[m+h]⁺.found:346.0932[m+h]⁺.

實施例13：4-甲基哌嗪-1-氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(13)

使用如上化合物2的合成方法，以2-氯甲基-3-甲基-1,4-萘醌和n-甲基哌嗪為反應(yīng)物得到黃色固體13，收率97.2％，mp124-125℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.11-8.12(m,2h,arh),7.72-7.75(m,2h,arh),4.66(s,2h,ch2s),4.37(m,2h,s＝cnch2),3.96(m,2h,s＝cnch2),2.52(m,4h,ch2nch2),2.37(s,3h,nch3),2.35(s,3h,c＝cch3).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ195.86,184.72,183.93,146.47,141.41,133.70,133.66,132.17,131.89,126.52,126.48,54.34,45.56,33.86,13.71.hr-ms(esi⁺)m/z:361.1045[m+h]⁺.found:361.1035[m+h]⁺.

實施例14：4-異丙基哌嗪-1-氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(14)

使用如上化合物2的合成方法，以2-氯甲基-3-甲基-1,4-萘醌和n-異丙基哌嗪為反應(yīng)物得到黃色固體14，收率75.7％，mp157-158℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.11-8.12(m,2h,arh),7.72-7.75(m,2h,arh),4.66(s,2h,ch2s),4.37(m,2h,s＝cnch2),3.93(m,2h,s＝cnch2),2.76(m,1h,nch),2.61(m,4h,ch2nch2),2.37(s,3h,nch3),1.07(s,3h,chch3),1.06(s,3h,chch3).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ195.35,184.75,183.94,146.45,141.48,133.69,133.64,132.18,131.90,126.51,54.35,48.13,33.78,18.39,13.71.hr-ms(esi⁺)m/z:389.1358[m+h]⁺.found:389.1348[m+h]⁺.

實施例15：4-乙?；哙?1-氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(15)

使用如上化合物2的合成方法，以2-氯甲基-3-甲基-1,4-萘醌和n-乙酰基哌嗪為反應(yīng)物得到黃色固體15，收率92.8％，mp157-158℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.10-8.12(m,2h,arh),7.73-7.75(m,2h,arh),4.66(s,2h,ch2s),4.12-4.18(m,4h,ch2nch2),3.75(t,2h,s＝cnch2),3.62(t,2h,s＝cnch2),2.36(s,3h,o＝cch3),2.15(s,3h,c＝cch3).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ196.75,184.64,183.90,169.30,146.59,141.06,133.81,133.74,132.12,131.82,126.56,126.50,45.20,40.56,33.91,21.36,13.75.hr-ms(esi⁺)m/z:389.0994[m+h]⁺.found:389.0991[m+h]⁺.

實施例16：環(huán)己基甲基氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(16)

使用如上化合物2的合成方法，以2-氯甲基-3-甲基-1,4-萘醌和n-甲基環(huán)己胺為反應(yīng)物得到黃色固體16，收率75.0％，mp128-129℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.11-8.12(m,2h,arh),7.72-7.74(m,2h,arh),4.66(s,2h,ch2s),3.17-3.42(d,3h,nch3),2.36(s,3h,c＝cch3),1.11-1.87(m,11h,nchch2ch2ch2ch2ch2).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ196.02,184.75,183.90,146.53,146.50,141.60,133.63,133.60,132.21,131.96,126.48,62.92,62.12,37.75,33.91,33.69,30.22,29.42,25.47,25.17,13.65.hr-ms(esi⁺)m/z:374.1249[m+h]⁺.found:374.1247[m+h]⁺.

實施例17：甲氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(17)

使用如上化合物2的合成方法，以2-氯甲基-3-甲基-1,4-萘醌和甲胺為反應(yīng)物得到黃色固體17，收率90.7％，mp106-107℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.11-8.13(m,2h,arh),8.04(s,1h，nh)，7.75-7.77(m,2h,arh),4.40(s,2h,ch2s),3.29(s,3h,nch3),2.33(s,3h,c＝cch3).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ196.22,185.22,184.47,146.40,141.73,134.19,133.81,132.10,131.60,126.71,126.62,34.03,31.09,13.63.hr-ms(esi⁺)m/z:292.0466[m+h]⁺.found:292.0457[m+h]⁺.

實施例18：(4-甲基哌嗪-1)-二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(18)

使用如上化合物2的合成方法，以2-氯甲基-3-甲基-1,4-萘醌和4-甲基哌嗪-1-胺為反應(yīng)物得到黃色固體18，收率95.9％，mp162-163℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ11.11(s,1h，nh)，8.00-8.01(m,2h,arh),7.85-7.87(m,2h,arh),4.30(s,2h,ch2s),2.69-2.79(m,8h，2nch2ch2)，2.20(s,3h,c＝cch3),2.14(d,3h,nch3).¹³cnmr(100mhz,dmso)δ199.97,183.85,179.14,144.78,143.38,136.90,135.12,134.92,127.65,124.81,122.46,122.40,54.30,53.41,53.33,45.50,13.06.hr-ms(esi⁺)m/z:376.1153[m+h]⁺.found:374.1143[m+h]⁺.

實施例19：2-二乙氨基乙基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(19)

使用如上化合物2的合成方法，以2-氯甲基-3-甲基-1,4-萘醌和2-二乙氨基乙基胺為反應(yīng)物得到黃色固體19，收率73.3％，mp149-150℃.¹hnmr(400mhz,dmso)δ10.41(s,1h，nh)，8.01-8.03(m,2h,arh),7.85-7.88(m,2h,arh),4.94(s,2h,ch2s),3.99(m,2h,nhch2),3.31(m,2h,nhch2ch2),3.30(q,4h,ch3ch2nch2ch3),2.23(s,3h,c＝cch3)，1.22(t,6h,2ch2ch2).¹³cnmr(100mhz,dmso)δ197.34,184.60,183.74,145.89,141.16,134.68,134.60,132.14,131.79,126.58,126.46,48.31,47.19,41.62,31.35,13.80,8.88.hr-ms(esi⁺)m/z:377.1357[m+h]⁺.found:377.1348[m+h]⁺.

實施例20：哌啶-1-二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(20)

使用如上化合物2的合成方法，以2-氯甲基-3-甲基-1,4-萘醌和哌啶-1-胺為反應(yīng)物得到黃色固體20，收率90.9％，mp166-167℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.19(s,1h，nh)，8.10-8.12(m,2h,arh),7.72-7.74(m,2h,arh),4.51(s,2h,ch2s),3.18(m,4h,ch2nch2),2.34(s,3h,c＝cch3)，1.68(m,6h,ch2ch2ch2).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ201.01,184.80,183.88,146.34,142.05,133.61,132.17,131.94,126.48,56.06,30.51,25.22,22.87,13.59.hr-ms(esi⁺)m/z:361.1044[m+h]⁺.found:361.1031[m+h]⁺.

實施例21：芐基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(21)

使用如上化合物2的合成方法，以2-氯甲基-3-甲基-1,4-萘醌和芐胺為反應(yīng)物得到黃色固體21，收率84.8％，mp113-114℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.01-8.12(m,3h,phh),7.73-7.76(m,2h,arh),7.33-7.38(m,5h,arh,nh),4.95(d,2h,ch2nh),4.44(s,2h,ch2s),2.34(s,3h,c＝cch3).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ195.66,184.82,184.51,146.32,141.60,135.93,134.08,133.74,132.09,131.56,128.88,128.46,128.14,126.64,126.60,51.35,31.19,13.65.hr-ms(esi⁺)m/z:368.078[m+h]⁺.found:368.077[m+h]⁺.

實施例22：吡啶-3-甲基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(22)

使用如上化合物2的合成方法，以2-氯甲基-3-甲基-1,4-萘醌和吡啶-3-甲基胺為反應(yīng)物得到黃色固體22，收率76.1％，mp140-141℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ10.58(t,1h,nh),8.48-8.54(m,2h,pyh),7.99-8.02(m,2h,arh),7.84-8.86(m,2h,arh),7.71-7.73(d,1h,pyh),7.37-7.40(m,1h,pyh),4.86(d,2h,ch2nh),4.49(s,2h,ch2s),2.21(s,3h,c＝cch3).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ196.82,184.60,183.79,149.57,148.95,145.79,141.40,136.08,134.64,134.56,133.24,132.13,131.77,126.56,126.44,124.03,47.94,31.34,13.81.hr-ms(esi⁺)m/z:369.0731[m+h]⁺.found:369.0722[m+h]⁺.

實施例23：吡啶-2-甲基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(23)

使用如上化合物2的合成方法，以2-氯甲基-3-甲基-1,4-萘醌和吡啶-2-甲基胺為反應(yīng)物得到黃色固體23，收率72.5％，mp149-150℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.54(d,1h,nh),8.09-8.12(m,2h,arh),7.73-7.75(m,2h,arh),7.25-7.73(m,4h,pyh),5.02(d,2h,ch2nh),4.62(s,2h,ch2s),2.38(s,3h,c＝cch3).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ196.13,184.75,184.20,153.96,148.76,146.00,141.70,137.11,133.81,133.69,132.13,131.80,126.55,126.52,122.85,122.22,51.27,31.67,13.72.hr-ms(esi⁺)m/z:369.0731[m+h]⁺.found:369.0719[m+h]⁺.

實施例24：吡啶-4-甲基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(24)

使用如上化合物2的合成方法，以2-氯甲基-3-甲基-1,4-萘醌和吡啶-4-甲基胺為反應(yīng)物得到黃色固體24，收率78.5％，mp131-132℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.68(d,1h,nh),8.55-8.57(m,2h,arh),8.11-8.13(m,2h,pyh),7.72-7.77(m,2h,arh),7.28(s,2h,pyh),5.01(d,2h,ch2nh),4.43(s,2h,ch2s),2.33(s,3h,c＝cch3).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ196.96,185.11,184.37,149.99,146.59,145.39,141.42,134.27,133.86,132.07,131.49,126.74,126.56,122.74,49.34,31.22,13.65.hr-ms(esi⁺)m/z:369.0731[m+h]⁺.found:369.0722[m+h]⁺.

實施例25：4-苯基哌嗪-1-二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(25)

使用如上化合物2的合成方法，以2-氯甲基-3-甲基-1,4-萘醌和4-苯基哌嗪-1-胺為反應(yīng)物得到黃色固體25，收率96.4％.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.12-8.13(m,2h,arh),7.74-7.76(m,2h,arh),7.28-7.33(m,2h,phh)，6.94-6.96(m,3h,phh),4.69(s,2h,ch2s),4.11-4.51(m,4h,2nch2),3.33(s,4h,2nch2),2.39(s,3h,ch＝chch3).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ196.09,184.71,183.95,146.52,141.34,133.74,133.68,132.18,131.88,129.36,126.55,126.50,120.82,116.45,48.87,33.85,13.74.hr-ms(esi⁺)m/z:423.1201[m+h]⁺.found:423.1192[m+h]⁺.

實施例26：4-芐基哌嗪-1-二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(26)

使用如上化合物2的合成方法，以2-氯甲基-3-甲基-1,4-萘醌和4-芐基哌嗪-1-胺為反應(yīng)物得到黃色固體26，收率96.3％.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.11-8.12(m,2h,arh),7.72-7.75(m,2h,arh),7.29-7.35(m,5h,phh),4.66(s,2h,ch2s),3.94-4.38(m,4h,2nch2),3.56(s,2h,ch2ph),2.56(s,4h,2nch2),2.36(s,3h,ch＝chch3).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ195.63,184.72,183.92,146.48,141.42,133.69,132.17,131.89,129.13,128.42,127.46,126.51,62.46,52.34,33.84,13.70.hr-ms(esi⁺)m/z:437.1357[m+h]⁺.found:437.1351[m+h]⁺.

實施例27：2-溴甲基-1,4-萘醌的制備(27)

將甲萘醌(1g，5.9mmol)溶于醋酸酐(15ml)中，加入引發(fā)劑aibn(0.05g,0.3mmol)，加熱回流，分批加入nbs(1.05g,5.9mmol)，回流40min。將反應(yīng)液倒入冰水中攪拌，乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，用硅膠柱分離純化(石油醚/乙酸乙酯洗脫)得到黃色固體27，910mg，產(chǎn)率62.8％.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.10-8.18(m,2h,arh),7.70-7.81(m,2h,arh),7.13(s,1h,c＝ch),4.42(s,2h,ch2br).

實施例28：二乙基氨基二硫代甲酸-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(28)

將二乙胺(30μl，0.29mmol)溶解在二氯甲烷(10ml)中，加入二硫化碳(18μl，0.3mmol)，常溫攪拌反應(yīng)30min，分批加入2-溴甲基-1,4-萘醌(72.5mg,0.29mmol),常溫攪拌反應(yīng)，tlc檢測原料點消失，終止反應(yīng)，減壓旋干溶劑，加入少量水，用乙酸乙酯萃取，合并酯層,飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，用硅膠柱分離純化(石油醚/乙酸乙酯洗脫)得到黃色固體28，65mg，產(chǎn)率75.3％，mp118-119℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.07-8.14(m,2h,arh),7.75-7.79(m,2h,arh),7.23(s,1h,c＝ch),4.59(s,2h,ch2s),4.03(q,2h,nch2),3.78(q,2h,nch2),1.27-1.34(m,6h,2ch2ch3).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ193.65,185.11,184.76,146.42,135.88,133.90,133.72,132.21,132.08,126.63,126.20,50.14,46.84,34.42,12.63,11.54.hr-ms(esi⁺)m/z:320.0779[m+h]⁺.found:320.0770[m+h]⁺.

實施例29：嗎啉-4-氨基二硫代甲酸-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(29)

使用如上化合物18的合成方法，以2-溴甲基-1,4-萘醌和嗎啉為反應(yīng)物得到黃色固體29，收率68.9％，mp137-138℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.07-8.15(m,2h,arh),7.75-7.78(m,2h,arh),7.23(s,1h,c＝ch),4.61(s,2h,ch2s),4.27(m,2h,och2),4.01(m,2h,och2),3.78(m,4h,ch2nch2).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ195.65,184.97,184.66,145.92,136.06,133.97,133.77,132.19,132.03,126.64,126.24,66.25,66.17,34.23,29.67,22.68.hr-ms(esi⁺)m/z:334.0572[m+h]⁺.found:334.0567[m+h]⁺.

實施例30：哌啶-1-氨基二硫代甲酸-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(30)

使用如上化合物18的合成方法，以2-溴甲基-1,4-萘醌和哌啶為反應(yīng)物得到黃色固體30，收率70.9％，mp122-123℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.07-8.14(m,2h,arh),7.74-7.77(m,2h,arh),7.23(s,1h,c＝ch),4.59(s,2h,ch2s),4.03(m,2h,ch2nch2),3.78(m,2h,ch2nch2),1.27-1.34(m,6h,ch2ch2ch2).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ193.65,185.60,184.78,146.41,135.92,133.90,133.71,132.20,132.08,126.63,126.20，54.62,53.58,34.44,25.97,25.48,24.21.hr-ms(esi⁺)m/z:332.0779[m+h]⁺.found:332.0770[m+h]⁺.

實施例31：4-苯基哌嗪-1-氨基二硫代甲酸--1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(31)

使用如上化合物18的合成方法，以2-溴甲基-1,4-萘醌和n-苯基哌嗪為反應(yīng)物得到黃色固體31，收率72.7％，mp144-145℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.08-8.16(m,2h,arh),7.75-7.78(m,2h,arh),6.93-7.33(m,6h,phh,c＝ch),4.63(s,2h,ch2s),4.49(m,2h,nch2),4.15(m,2h,nch2),3.33(m,4h,ch2nch2).hr-ms(esi⁺)m/z:409.1045[m+h]⁺.found:409.1037[m+h]⁺.

實施例32：二丙基氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-酯的制備(32)

將二丙胺(273μl，2mmol)溶解在乙腈(10ml)中，加入二硫化碳(121μl，2mmol)，常溫攪拌反應(yīng)30min，分批加入甲萘醌(172mg,1mmol),常溫攪拌反應(yīng)，tlc檢測產(chǎn)物點不再增多，終止反應(yīng)，減壓旋干溶劑，加入少量水，用乙酸乙酯萃取，合并酯層,飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，用硅膠柱分離純化(石油醚/乙酸乙酯洗脫)得到黃色固體32，226mg，產(chǎn)率65.1％，mp129-130℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.12-8.16(m,2h,arh),7.73-7.76(m,2h,arh),3.80-3.89(m,4h,ch2nch2),2.40(s,3h,c＝cch3),1.97(m,2h,ch2ch3),1.80(m,2h,ch2ch3),1.08(m,3h,ch2ch3),0.95(m,3h,ch2ch3).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ191.34,184.09,180.30,151.16,142.25,133.80,133.50,132.15,127.20,126.24,57.37,56.19,21.28,19.71,15.95,11.28,11.19.hr-ms(esi⁺)m/z:348.1092[m+h]⁺.found:348.1088[m+h]⁺.

實施例33：嗎啉-4-氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-酯的制備(33)

使用如上化合物32的合成方法，以甲萘醌和嗎啉為反應(yīng)物得到黃色固體33，收率54.2％，mp140-141℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.13-8.18(m,2h,arh),7.75-7.78(m,2h,arh),4.15-4.27(m,4h,ch2och2),3.86-3.87(m,4h,ch2nch2),2.41(s,3h,c＝cch3).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ192.39,183.85,180.10,152.18,141.55,133.94,132.91,132.11,127.24,126.76,66.26,66.22,51.96,51.07,16.06.hr-ms(esi⁺)m/z:334.0572[m+h]⁺.found:334.0568[m+h]⁺.

實施例34：哌啶-1-氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-酯的制備(34)

使用如上化合物32的合成方法，以甲萘醌和哌啶為反應(yīng)物得到黃色固體34，收率65.4％，mp139-140℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.13-8.17(m,2h,arh),7.74-7.76(m,2h,arh),4.21(m,2h,nch2),4.08(m,2h,nch2),2.41(s,3h,c＝cch3),1.77-1.87(m,6h,ch2ch2ch2).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ190.63,184.07,180.36,151.21,141.96,133.83,133.53,133.10,132.14,127.22,126.66,53.34,52.44,26.37,25.28,24.03,15.94.hr-ms(esi⁺)m/z:332.0779[m+h]⁺.found:332.0775[m+h]⁺.

實施例35：4-乙?；哙?1-氨基二硫代甲酸-3-甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-酯的制備(35)

使用如上化合物32的合成方法，以甲萘醌和嗎啉為反應(yīng)物得到黃色固體35，收率69.5％，mp119-120℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.11-8.18(m,2h,arh),7.75-7.78(m,2h,arh),4.18-4.30(m,4h,ch2nch2),3.70-3.88(m,4h,ch2nch2),2.41(s,3h,c＝cch3),2.19(s,3h,o＝cch3).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ183.79,180.02,169.38,152.39,141.42,133.96,132.82,132.09,127.24,126.80,50.78,40.69,29.69,21.37,16.10.hr-ms(esi⁺)m/z:375.0837[m+h]⁺.found:375.0833[m+h]⁺.

實施例36：2,3-雙氯甲基-1,4-萘醌的制備(36)

將萘醌(1g，6.33mmol)溶解在冰醋酸(10ml)中，加入36％的甲醛水溶液(3ml)，冰浴條件下通入氯化氫氣體，攪拌反應(yīng)30min，直至溶液變成紅色，常溫攪拌反應(yīng)過夜。將反應(yīng)液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，用硅膠柱分離純化(石油醚/乙酸乙酯洗脫)得到黃色固體36，1.1g，產(chǎn)率68.9％.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.18-8.20(m,2h,arh),7.81-7.83(m,2h,arh),4.72(s,4h,2ch2cl).

實施例37：二乙基氨基二硫代甲酸-3-二乙基硫代氨甲酰硫甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(37)

將二乙胺(206μl，2.0mmol)溶解在乙腈(15ml)中，加入二硫化碳(120μl，2.0mmol)，常溫攪拌反應(yīng)30min，分批加入2,3-二氯甲基-1,4-萘醌(254mg,1mmol),常溫攪拌反應(yīng)24h，tlc檢測產(chǎn)物點不再增多，終止反應(yīng)，減壓旋干溶劑，加入少量水，用乙酸乙酯萃取，合并酯層,飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，用硅膠柱分離純化(石油醚/乙酸乙酯洗脫)得到黃色固體37，453mg，產(chǎn)率94.3％，mp130-131℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.12-8.14(m,2h,arh),7.74-7.76(m,2h,arh),4.83(s,4h,2ch2s),4.03(q,4h,2nch2),3.72(m,4h,2nch2),1.29(m,12h,4ch3).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ194.15,183.87,144.02,133.84,132.06,126.66,49.89,46.84,34.02,12.60,11.57.hr-ms(esi⁺)m/z:481.1112[m+h]⁺,503.0931[m+na]⁺.found:481.1111[m+h]⁺,503.0934[m+na]⁺.

實施例38：二丙基氨基二硫代甲酸-3-二丙基硫代氨甲酰硫甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(38)

使用如上化合物37的合成方法，以2,3-二氯甲基-1,4-萘醌和二丙胺為反應(yīng)物得到黃色固體38，收率92.9％，mp111-112℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.12-8.14(m,2h,arh),7.73-7.76(m,2h,arh),4.80(s,4h,2ch2s),3.91(q,4h,2nch2),3.60(m,4h,2nch2),1.73-1.79(m,8h,4ch2ch3),0.93-0.95(m,12h,4ch3).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ194.67,183.78,144.06,133.81,132.08,126.66,57.25,54.50,34.06,20.75,19.61,11.22.hr-ms(esi⁺)m/z:537.1738[m+h]⁺.found:537.1728[m+h]⁺,559.1567[m+na]⁺.

實施例39：嗎啉-4-氨基二硫代甲酸-3-嗎啉-4-硫代氨甲酰硫甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(39)

使用如上化合物37的合成方法，以2,3-二氯甲基-1,4-萘醌和嗎啉為反應(yīng)物得到黃色固體39，收率78.4％，mp153-154℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.11-8.13(m,2h,arh),7.75-7.77(m,2h,arh),4.89(s,4h,2ch2s),3.99-4.28(m,8h,4och2),3.76(s,8h,4nch2).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ196.10,183.92,143.72,134.00,131.95,126.70,66.28,66.20,33.96.hr-ms(esi⁺)m/z:509.0697[m+h]⁺.found:509.0686[m+h]⁺.

實施例40：哌啶-1-氨基二硫代甲酸-3-哌啶-1-硫代氨甲酰硫甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(40)

使用如上化合物37的合成方法，以2,3-二氯甲基-1,4-萘醌和哌啶為反應(yīng)物得到黃色固體40，收率84.2％，mp142-143℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.11-8.13(m,2h,arh),7.73-7.75(m,2h,arh),4.86(s,4h,2ch2s),4.29(q,4h,2nch2),3.87(q,4h,2nch2),1.70(m,12h,2ch2ch2ch2).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ194.21,183.95,143.97,133.84,132.05,126.65,34.11,24.25.hr-ms(esi⁺)m/z:505.1112[m+h]⁺,527.0931[m+na]⁺.found:505.1100[m+h]⁺,527.0903[m+na]⁺.

實施例41：二羥乙基氨基二硫代甲酸-3-二羥乙基硫代氨甲酰硫甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(41)

使用如上化合物37的合成方法，以2,3-二氯甲基-1,4-萘醌和二羥乙基胺為反應(yīng)物得到黃色固體41，收率64.2％，¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.03-8.05(m,2h,arh),7.88-7.91(m,2h,arh),4.89-5.04(m,4h,2ch2s),3.84-4.12(m,8h,4nch2),3.63-3.73(m,8h,4hoch2).hr-ms(esi⁺)m/z:545.0908[m+h]⁺.found:545.0918[m+h]⁺.

實施例42：二甲基氨基二硫代甲酸-3-二甲基硫代氨甲酰硫甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(42)

使用如上化合物37的合成方法，以2,3-二氯甲基-1,4-萘醌和二甲基胺為反應(yīng)物得到黃色固體42，收率92.0％，mp157-158℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.11-8.13(m,2h,arh),7.74-7.76(m,2h,arh),4.83(s,4h,2ch2s),3.56(s,3h,nch3),3.36(s,3h,nch3).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ195.73,183.91,143.82,133.90,132.00,126.67,45.74,41.54,34.05.hr-ms(esi⁺)m/z:425.0486[m+h]⁺,447.0305[m+na]⁺.found:425.0487[m+h]⁺,447.0304[m+na]⁺.

實施例43：吡咯烷-4-氨基二硫代甲酸-3-吡咯烷-4-硫代氨甲酰硫甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(43)

使用如上化合物37的合成方法，以2,3-二氯甲基-1,4-萘醌和吡咯烷為反應(yīng)物得到黃色固體43，收率88.2％，mp150-151℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.11-8.13(m,2h,arh),7.73-7.75(m,2h,arh),4.88(s,4h,2ch2s),3.95(q,4h,2nch2),3.64(q,4h,2nch2),1.96-2.09(m,8h,2ch2ch2).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ191.33,184.00,143.87,133.85,132.04,126.64,55.34,50.61,33.49,26.18,24.29.hr-ms(esi⁺)m/z:477.0799[m+h]⁺,499.0618[m+na]⁺.found:477.0791[m+h]⁺,499.0626[m+na]⁺.

實施例44：噻唑烷-4-氨基二硫代甲酸-3-噻唑烷-4-硫代氨甲酰硫甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(44)

使用如上化合物37的合成方法，以2,3-二氯甲基-1,4-萘醌和噻唑烷為反應(yīng)物得到黃色固體44，收率88.8％，mp158-159℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.11-8.14(m,2h,arh),7.75-7.77(m,2h,arh),5.04(s,4h,2nch2s),4.86(s,4h,2ch2s),3.96(q,4h,2nch2ch2),3.21(q,4h,2nch2ch2s).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ192.47,183.92,143.55,134.04,131.92,126.72,56.63,52.66,34.15,31.24,29.06.hr-ms(esi⁺)m/z:512.9927[m+h]⁺,534.9747[m+na]⁺.found:512.9944[m+h]⁺,534.9720[m+na]⁺.

實施例45：二烯丙基氨基二硫代甲酸-3-二烯丙基氨基硫代氨甲酰硫甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(45)

使用如上化合物37的合成方法，以2,3-二氯甲基-1,4-萘醌和二烯丙基胺為反應(yīng)物得到黃色粘稠狀液體45，收率83.3％.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.11-8.14(m,2h,arh),7.74-7.76(m,2h,arh),5.80-5.91(m,4h,4ch＝ch2),5.27(d,2h,ch＝ch2),5.25(d,2h,ch＝ch2),5.24(d,2h,ch＝ch2),5.20(d,2h,ch＝ch2),4.83(s,4h,4ch2s),4.66(d,4h,2nch2),4.30(d,4h,2nch2).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ196.56,183.79,143.87,133.89,132.00,131.03,130.34,126.68,118.85,118.67,56.85,53.75,34.41.hr-ms(esi⁺)m/z:529.1112[m+h]⁺.found:529.1113[m+h]⁺.

實施例46：硫嗎啉-4-氨基二硫代甲酸-3-硫嗎啉-4-硫代氨甲酰硫甲基-1,4-二氧-1,4-二氫萘-2-甲酯的制備(46)

使用如上化合物37的合成方法，以2,3-二氯甲基-1,4-萘醌和硫嗎啉為反應(yīng)物得到黃色固體46，收率90.7％，mp146-147℃.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.11-8.13(m,2h,arh),7.74-7.77(m,2h,arh),4.66(s,4h,2ch2s),4.57-4.58(m,4h,2nch2),4.26-4.29(m,4h,2nch2),2.76(s,8h,4ch2s).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ195.33,183.88,143.77,134.02,131.93,126.72,34.16,27.28.hr-ms(esi⁺)m/z:541.0240[m+h]⁺,563.0060[m+na]⁺.found:541.0343[m+h]⁺,563.0178[m+na]⁺.

實施例47：對所合成通式i類化合物進(jìn)行pkm2酶抑制活性評價

1、實驗方法：

向96孔板每孔中加入40μlbuffer+5μlfbp(終濃度2.5mm)+1μl化合物(dmso溶液)+pkm2酶，室溫孵育15min后加入stock溶液(30μlbuffer+5μlpep(終濃度0.5mm)+5μladp(終濃度4mm)+5μlnadh(終濃度0.12mm)+5μlldh(終濃度1unit))，立即通過熒光酶標(biāo)儀檢測熒光變化量(激發(fā)波長：340nm，發(fā)射波長460nm)，記錄斜率。

設(shè)置空白組和對照組?？瞻捉M：buffer代替pkm2酶；對照組：dmso代替化合物，其它試劑不變。

抑制率＝(lt-l)/(lb-l)*100％

其中，l為加藥組斜率，lt為對照組斜率，lb為空白組斜率。

根據(jù)斜率，計算ic50值。

2、結(jié)果

部分目標(biāo)化合物和陽性藥紫草素對pkm2的抑制作用如下表2所示：

表2：部分目標(biāo)化合物和陽性藥紫草素對pkm2的抑制作用

由圖表中數(shù)據(jù)可以看出，通式i化合物具有顯著抑制pkm2的作用，大部分目標(biāo)化合物的作用明顯強于陽性對照藥紫草素，其中化合物40活性最為顯著。

實施例48：對所合成通式i類化合物進(jìn)行pkm1酶選擇性評價

1、實驗方法：

向96孔板每孔中加入40μlbuffer+5μlfbp(終濃度2.5mm)+1μl化合物(dmso溶液)+pkm1酶，室溫孵育15min后加入stock溶液(30μlbuffer+5μlpep(終濃度0.5mm)+5μladp(終濃度4mm)+5μlnadh(終濃度0.12mm)+5μlldh(終濃度1unit))，立即通過熒光酶標(biāo)儀檢測熒光變化量(激發(fā)波長：340nm，發(fā)射波長460nm)，記錄斜率。

設(shè)置空白組和對照組?？瞻捉M：buffer代替pkm1酶；對照組：dmso代替化合物，其它試劑不變。

抑制率＝(lt-l)/(lb-l)*100％

其中，l為加藥組斜率，lt為對照組斜率，lb為空白組斜率。

根據(jù)斜率，計算ic50值。

2、結(jié)果

部分目標(biāo)化合物和紫草素對pkm1的抑制作用如下表3所示：

表3：部分目標(biāo)化合物和紫草素對pkm1的抑制作用

由以上數(shù)據(jù)可以看出，代表性目標(biāo)化合物對pkm1的抑制作用明顯低于pkm2，說明通式i類化合物對pkm2有選擇性，且選擇性優(yōu)于紫草素。

實施例49：對所合成通式i類化合物進(jìn)行細(xì)胞毒作用評價

1、實驗方法：

細(xì)胞株：hct116結(jié)腸癌細(xì)胞，mcf7乳腺癌細(xì)胞，hela宮頸癌細(xì)胞，h1299肺癌細(xì)胞

篩選方法：mtt法

作用時間：48h

2、結(jié)果

細(xì)胞毒測試結(jié)果如下表4所示：

表4：細(xì)胞毒測試結(jié)果(ic50值單位μm.l^-1)(“-”代表未檢測)

由以上數(shù)據(jù)可以看出，通式i化合物對hct116結(jié)腸癌細(xì)胞、mcf7乳腺癌細(xì)胞、hela宮頸癌細(xì)胞和h1299肺癌細(xì)胞具有顯著的殺傷作用。通式i化合物的對部分腫瘤細(xì)胞的殺傷作用強于紫草素，其中化合物2、7、8、12、22、24、37、40、42、43、44、46活性最為顯著。