用于版納病毒熒光rt-pcr檢測(cè)的引物探針組及其試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于分子生物學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及用于版納病毒熒光RT-PCR檢測(cè)的引 物探針組及其試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002] 版納病毒（Banna virus，BAV)為12節(jié)段雙鏈RNA病毒，是近10多年來新分離到 的一種蟲媒病毒，主要經(jīng)蚊蟲傳播。版納病毒是由我國科學(xué)家徐普庭等在云南省西雙版納 地區(qū)醫(yī)院采集的不明原因發(fā)熱和腦炎患者的腦脊液及血清標(biāo)本中分離到一種新環(huán)狀病毒， 并根據(jù)分離地將其命名為版納病毒。2005年國際病毒命名委員會(huì)第8次分類報(bào)告中正式 確定版納病毒為新建立病毒屬一Seadornavirus (東南亞十二節(jié)段RNA病毒屬）的代表株。 目前該病毒主要分布在我國和印度尼西亞的某些地區(qū)。除了印度尼西亞和我國分離到版納 病毒之外，有報(bào)道從越南分離到多株版納病毒，表明版納病毒可能廣泛分布于亞洲地區(qū)。 目前認(rèn)為版納病毒是脊椎動(dòng)物體和人類腦炎的致病原。在我國部分地區(qū)的病毒性腦炎病人 中發(fā)現(xiàn)有版納病毒特異性抗體陽性或4倍增高，提示版納病毒可能是我國引起病毒性腦炎 的重要病原體之一。作為一種引起人類疾病且分布范圍廣泛的新發(fā)蟲媒病毒，對(duì)版納病毒 的檢測(cè)對(duì)公共衛(wèi)生和病毒性腦炎的防治具有重要的意義。
[0003] 自版納病毒于1987年從云南省西雙版納地區(qū)首次分離到以后，我國又先后多次 從北京、海南、貴州、新疆、河南、云南等地采集的蚊蟲標(biāo)本中分離到該種病毒。版納病毒有 兩個(gè)主要進(jìn)化支，即中國分離株（A型，typeA)和印度尼西亞分離株（B型，typeB)，顯示出 病毒分布的地域性差異。蚊蟲是版納病毒的主要傳播媒介，滅蚊是對(duì)版納病毒引起的病毒 性腦炎最重要的防范工作。隨著與世界各國交通往來的日益頻繁，該病毒隨時(shí)有在境內(nèi)外 傳播的危險(xiǎn)，因此，有必要建立一套蚊類攜帶該病毒的檢驗(yàn)方法，特別是在國境口岸，應(yīng)用 于該病毒的監(jiān)測(cè)，可進(jìn)一步加強(qiáng)防止該病傳入我國的監(jiān)測(cè)工作，目前還沒有相關(guān)的國家標(biāo) 準(zhǔn)或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為克服上述技術(shù)缺陷，本發(fā)明提供了用于版納病毒熒光RT-PCR檢測(cè)的引物探針 組及其試劑盒。該引物探針組和試劑盒可以實(shí)現(xiàn)對(duì)版納病毒快速簡(jiǎn)便的檢測(cè)。
[0005] 本發(fā)明的用于版納病毒熒光RT-PCR檢測(cè)的引物探針組，序列如SEQ ID NO :1-3所 不O
[0006] 本發(fā)明的一種用于版納病毒熒光RT-PCR檢測(cè)的試劑盒，包括無 RNA酶的滅菌雙蒸 水、RT-PCR緩沖液、RT-PCR酶混合液、陽性對(duì)照模板、陰性對(duì)照模板，其特征在于，還包括引 物探針組，所述引物探針組的核酸序列如SEQ ID NO :1-3所示；所述引物的核酸序列如SEQ ID NO :1-2所示；所述探針的核酸序列如SEQ ID NO :3所示。具體序列如表1所示，表1是 版納病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)的引物和探針列表。
[0007] 表 1
[0008]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 用于版納病毒熒光RT-PCR檢測(cè)的引物探針組，其特征在于，所述引物探針組序列如 SEQ ID NO : 1-3 所示。
2. -種用于版納病毒熒光RT-PCR檢測(cè)的試劑盒，所述試劑盒包括無 RNA酶的滅菌雙蒸 水、RT-PCR緩沖液、RT-PCR酶混合液、陽性對(duì)照模板、陰性對(duì)照模板，其特征在于，還包括引 物探針組，所述引物探針組的核酸序列如SEQ ID NO : 1-3所示； 所述引物的核酸序列如SEQ ID NO : 1-2所示； 所述探針的核酸序列如SEQ ID NO :3所示。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于版納病毒熒光RT-PCR檢測(cè)的引物探針組及其試劑盒。本發(fā)明的用于版納病毒熒光RT-PCR檢測(cè)的引物探針組，序列如SEQ？ID？NO：1-3所示。本發(fā)明的試劑盒，包括無RNA酶的滅菌雙蒸水、RT-PCR緩沖液、RT-PCR酶混合液、陽性對(duì)照模板、陰性對(duì)照模板，還包括引物探針組，所述引物的核酸序列如SEQ？ID？NO：1-2所示；所述探針的核酸序列如SEQ？ID？NO：3所示。本發(fā)明的引物探針組和試劑盒為版納病毒的實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)，特別是國境口岸蚊類攜帶版納病毒的實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)提供了較好的檢測(cè)方法。該引物探針組和試劑盒可以實(shí)現(xiàn)對(duì)版納病毒快速簡(jiǎn)便的檢測(cè)。
【IPC分類】C12Q1-68, C12Q1-70, C12N15-11
【公開號(hào)】CN104561370
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410740855
【發(fā)明人】洪燁, 鄭夔, 戴俊, 師永霞, 黃吉城, 李小波
【申請(qǐng)人】廣東出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心
【公開日】2015年4月29日
【申請(qǐng)日】2014年12月4日