阿立哌唑的抗體及其用圖
【專利說明】阿立脈唑的抗體及其用途
[0001] 相關(guān)申請的交叉引用
[0002] 本申請要求2012年8月21日提交的美國臨時申請61/691，522的權(quán)益。
技術(shù)領(lǐng)域
[0003] 本發(fā)明涉及免疫測定領(lǐng)域，并且具體地涉及結(jié)合至阿立哌唑的抗體，這些抗體可 用于檢測阿立哌唑的免疫測定中。
【背景技術(shù)】
[0004] 精神分裂癥為一種慢性且使人衰弱的精神疾病，影響了約0. 45% -1%的世界人 口（van 0s，J. Kapur，S. "'Schizophrenia" Lancet 2009, 374,635-645)。治療的主要目的 是實現(xiàn)對精神癥狀的持續(xù)緩解、降低復發(fā)的風險和后果、以及改善患者機能和總體生活質(zhì) 量。雖然許多患有精神分裂癥的患者能夠用可用的抗精神病藥物實現(xiàn)癥狀穩(wěn)定性，但對藥 物的低遵從性是在每日施用的口服藥物下復發(fā)的常見原因。若干探索不依從性的后果的 研宄（Abdel_Baki，A. ;Ouellet_Plamondon，C. ;Malla，A. "Pharmacotherapy Challenges in Patients with First-Episode Psychosis"Journal of Affective Disorders 2012， 138, S3-S14)顯示不按處方服用其藥物的患有精神分裂癥的患者具有較高的復發(fā)率、入院 率和自殺率以及增加的死亡率。據(jù)估計，40%至75%患有精神分裂癥的患者難以遵從每日 口服治療方案（Lieberman，J.A. ;Stroup，T.S. ;McEvoy，J.P. ;Swartz，M.S. ;Rosenheck， R. A. ；Perkins, D. 0. ；Keefe, R. S. E. ；Davis, S. M. ；Davis, C. E. ；Lebowitz, B. D. ；Severe, J. ；Hsiao, J. K. "Effectiveness of Antipyschotic Drugs in Patients with Chronic Schizophrenia" New England Journal of Medicine 2005,353 (12)，1209-1223)。
[0005] 治療藥物監(jiān)測（TDM)是對藥物，包括抗精神病藥物的血清或血漿濃度的量化，目 的是治療監(jiān)測和優(yōu)化。這種監(jiān)測允許例如識別未遵從其藥物方案、未達到治療劑量、在治療 劑量下無應(yīng)答、具有次優(yōu)耐藥性、具有藥代動力學藥物-藥物互相作用或具有導致不適當 的血漿濃度的異常代謝的患者?；颊呶?、分布、代謝以及排出抗精神病藥物的能力存在相 當大的個體差異。這種不同可由并發(fā)疾病、年齡、伴隨藥物或遺傳特性引起。不同的藥物制 劑也可影響抗精神病藥物的代謝。TDM允許針對個體患者進行劑量優(yōu)化，改善治療和功能結(jié) 果。TDM還允許處方臨床醫(yī)生確保對處方劑量的依從性且確保達到有效血清濃度。
[0006] 至今，用于確定抗精神病藥物的血清或血漿濃度的水平的方法涉及具有UV的液相 色譜（LC)或質(zhì)譜檢測以及放射免疫測定的使用（參見例如，Woestenborghs等人，1990"0n the selectivity of some recently developed RIA' s''，Methodological Surveys in Biochemistry and Analysis 20 :241_246 ;Analysis of Drugs and Metabolites， Including Anti-infective Agents ;Heykants 等人，1994 "The Pharmacokinetics of Risperidone in Humans :A Summary''，J Clin Psychiatry 55/5,增干丨J : 13-17 ;Huang等人， 1993 "Pharmacokinetics of the novel anti-psychotic agent risperidone and the prolactin response in healthy subjects''，Clin Pharmacol Ther 54 :257_268) 〇 放身寸 免疫測定檢測利培酮和帕潘立酮之一或二者。在美國專利8, 088, 594中Salamone等人公開 了使用檢測利培酮和帕潘立酮二者，但不檢測藥理學上非活性代謝物的抗體，用于利培酮 的競爭性免疫測定。針對特定免疫原開發(fā)了競爭性免疫測定中使用的抗體。ID Labs Inc. (London，Ontario, Canada)出售針對另一種精神病藥物奧氮平的ELISA，它也利用了競爭 格式。使用說明指示測定被設(shè)計用于篩選目的并且旨在用于法醫(yī)或研宄用途，并且具體地 不旨在用于治療用途。使用說明推薦使用氣相色譜/質(zhì)譜（GC-MS)來確認所有陽性樣品， 并且指示所使用的抗體檢測奧氮平和氯氮平（參見ID Labs Inc./'Instructions For Use Data Sheet IDEL-F083"，修訂日期2011年8月8日）。這些方法中的一些，即HPLC和GC/ MS可能是昂貴且勞動密集型的，并且通常僅在具有適當設(shè)備的大型或?qū)I(yè)實驗室中執(zhí)行。
[0007] 存在對用于確定抗精神病藥物的水平的其它方法的需要，具體地講是能夠在處方 臨床醫(yī)生辦公室（在這里可相應(yīng)地以更加及時的方式調(diào)整對個體患者的治療）和缺乏LC 或GC/MS設(shè)備或需要快速測試結(jié)果的其它醫(yī)療設(shè)施中執(zhí)行的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明涉及分離的抗體或其結(jié)合片段，所述分離的抗體或其結(jié)合片段結(jié)合至阿立 哌唑，并且所述分離的抗體或其結(jié)合片段：（i)為選自由下列項組成的組的抗體：a)包含 輕鏈可變區(qū)的分離的抗體或其片段，該輕鏈可變區(qū)包含氨基酸序列SEQ ID NO :43、SEQ ID NO :47、SEQ ID NO :51或SEQ ID NO :55 ;b)包含重鏈可變區(qū)的分離的抗體或其片段，該重鏈 可變區(qū)包含氨基酸序列 SEQ ID N0:44、SEQ ID N0:48、SEQ ID N0:52 或 SEQ ID N0:56;c) 包含輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)的分離的抗體或其片段，該輕鏈可變區(qū)具有氨基酸序列SEQ ID NO :43,該重鏈可變區(qū)具有氨基酸序列SEQ ID NO :44 ;d)包含輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū) 的分離的抗體或其片段，該輕鏈可變區(qū)具有氨基酸序列SEQ ID N0 :47,該重鏈可變區(qū)具有 氨基酸序列SEQ ID NO :48 ;e)包含輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)的分離的抗體或其片段，該輕 鏈可變區(qū)具有氨基酸序列SEQ ID N0:51，該重鏈可變區(qū)具有氨基酸序列SEQ ID N0:52;f) 包含輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)的分離的抗體或其片段，該輕鏈可變區(qū)具有氨基酸序列SEQ ID NO :55,該重鏈可變區(qū)具有氨基酸序列SEQ ID NO :56 ;或（ii)競爭與（i)的抗體所結(jié)合 的表位相同的表位。
[0009] 主題發(fā)明的抗體可提供于測定試劑盒和測定裝置中，其中目前優(yōu)選的裝置為提供 床旁（point-of-care)分析的側(cè)流測定裝置。
[0010] 本發(fā)明還提供一種檢測樣品中阿立哌唑的方法。該方法包括：（i)使樣品與根據(jù) 主題發(fā)明的抗體接觸，該抗體用可檢測標記物標記，其中標記抗體和存在于樣品中的阿立 哌唑形成標記復合物；以及（ii)檢測標記復合物以便檢測樣品中的阿立哌唑。
[0011] 還提供了一種用于檢測樣品中阿立哌唑的競爭性免疫測定方法。該方法包括：（i) 使樣品與根據(jù)主題發(fā)明的抗體和阿立哌唑或阿立哌唑的競爭性結(jié)合配偶體接觸，其中用可 檢測標記物標記抗體和阿立哌唑或其競爭性結(jié)合配偶體中的一者，并且其中樣品阿立哌唑 與該阿立哌唑或其競爭性結(jié)合配偶體競爭結(jié)合至抗體；以及（ii)檢測標記以便檢測樣品 阿立哌唑。
[0012] 由下文的優(yōu)選實施例的詳細描述，本發(fā)明更多的目的、特征和優(yōu)點對于本領(lǐng)域技 術(shù)人員而g是顯而易見的。
【附圖說明】
[0013] 圖1示出了由雜交瘤3C1生成的競爭性ELISA結(jié)果；
[0014] 圖2示出了由雜交瘤3D7生成的競爭性ELISA結(jié)果；
[0015] 圖3示出了在側(cè)流測定裝置上使用的競爭性免疫測定格式；
[0016]圖4示出了根據(jù)主題發(fā)明的側(cè)流測定裝置的芯片設(shè)計；
[0017] 圖5示出了由抗體5C7和標記阿立哌唑競爭性結(jié)合配偶體生成的針對阿立哌唑陽 性對照的典型劑量反應(yīng)曲線；
[0018] 圖6示出了由抗體4G9-1和標記奧氮平競爭性結(jié)合配偶體生成的針對奧氮平陽性 對照的典型劑量反應(yīng)曲線；
[0019] 圖7示出了由抗體11和標記喹硫平競爭性結(jié)合配偶體生成的針對喹硫平陽性對 照的典型劑量反應(yīng)曲線；
[0020] 圖8示出了由抗體5-9和標記利培酮競爭性結(jié)合配偶體生成的針對利培酮陽性對 照的典型劑量反應(yīng)曲線；
[0021] 圖9示出了在標記阿立哌唑競爭性結(jié)合配偶體的存在下，由阿立哌唑抗體5C7生 成的針對包含阿立哌唑的樣品的典型劑量反應(yīng)曲線，對于奧氮平、喹硫平或利培酮在其各 自的標記競爭性結(jié)合配偶體的存在下無劑量反應(yīng)曲線；
[0022] 圖10示出了在標記奧氮平競爭性結(jié)合配偶體的存在下，由奧氮平抗體4G9-1生成 的針對包含奧氮平的樣品的典型劑量反應(yīng)曲線，對于阿立哌唑、喹硫平或利培酮在其各自 的標記競爭性結(jié)合配偶體的存在下無劑量反應(yīng)曲線；
[0023] 圖11示出了在標記喹硫平競爭性結(jié)合配偶體的存在下，由喹硫平抗體11生成的 針對包含喹硫平的樣品的典型劑量反應(yīng)曲線，對于阿立哌唑、奧氮平或利培酮在其各自的 標記競爭性結(jié)合配偶體的存在下無劑量反應(yīng)曲線；
[0024] 圖12示出了在標記利培酮競爭性結(jié)合配偶體的存在下，由利培酮抗體5-9生成的 針對包含利培酮的樣品的典型劑量反應(yīng)曲線，對于阿立哌唑、奧氮平或喹硫平在其各自的 標記競爭性結(jié)合配偶體的存在下無劑量反應(yīng)曲線；
[0025] 圖13示出了在標記阿立哌唑競爭性結(jié)合配偶體的存在下，由阿立哌唑抗體5C7生 成的針對包含阿立哌唑的樣品的典型劑量反應(yīng)曲線，對于奧氮平、喹硫平或利培酮在其各 自的抗體和標記競爭性結(jié)合配偶體的存在下無劑量反應(yīng)曲線；
[0026] 圖14示出了在標記奧氮平競爭性結(jié)合配偶體的存在下，由奧氮平抗體4G9-1生成 的針對包含奧氮平的樣品的典型劑量反應(yīng)曲線，對于阿立哌唑、喹硫平或利培酮在其各自 的抗體和標記競爭性結(jié)合配偶體的存在下無劑量反應(yīng)曲線；
[0027] 圖15示出了在標記喹硫平競爭性結(jié)合配偶體的存在下，由喹硫平抗體11生成的 針對包含喹硫平的樣品的典型劑量反應(yīng)曲線，對于阿立哌唑、奧氮平或利培酮在其各自的 抗體和標記競爭性結(jié)合配偶體的存在下無劑量反應(yīng)曲線；
[0028] 圖16示出了在標記利培酮競爭性結(jié)合配偶體的存在下，由利培酮抗體5-9生成的 針對包含利培酮的樣品的典型劑量反應(yīng)曲線，對于阿立哌唑、奧氮平或喹硫平在其各自的 抗體和標記競爭性結(jié)合配偶體的存在下無劑量反應(yīng)曲線；
[0029] 圖17示出了作為陽性對照生成的阿立哌唑劑量反應(yīng)曲線與在多重格式中生成的 阿立哌唑劑量反應(yīng)曲線的比較結(jié)果；
[0030] 圖18示出了作為陽性對照生成的奧氮平劑量反應(yīng)曲線與在多重格式中生成的奧 氮平劑量反應(yīng)曲線的比較結(jié)果；
[0031] 圖19示出了作為陽性對照生成的喹硫平劑量反應(yīng)曲線與在多重格式中生成的喹 硫平劑量反應(yīng)曲線的比較結(jié)果；并且
[0032] 圖20示出了作為陽性對照生成的利培酮劑量反應(yīng)曲線與在多重格式中生成的利 培酮劑量反應(yīng)曲線的比較結(jié)果。
【具體實施方式】
[0033] 使用以下術(shù)語描述兩個或更多個多核苷酸或氨基酸序列之間的序列關(guān)系："參 考序列"、"比較窗"、"序列同一性"、"序列同一性百分比"、"基本上相同"、"相似性"和"同 源"。"參考序列"是用作序列比較的基礎(chǔ)的限定序列；參考序列可以是較大序列的子集，例 如序列表中給定的全長cDNA或基因序列的片段，或可包含完整的cDNA或基因序列；參考 序列可包含如序列表中給定的編碼蛋白質(zhì)的完整氨基酸序列的片段，或可包含編碼蛋白質(zhì) 的完整氨基酸序列。一般來講，參考序列為至少18個核苷酸或6個氨基酸的長度，通常為 至少24個核苷酸或8個氨基酸的長度，并且經(jīng)常為至少48個核苷酸或16個氨基酸的長 度。因為兩個多核苷酸或氨基酸序列可各自（1)包含在兩個分子之間類似的序列（即，完 整的核苷酸或氨基酸序列的一部分），以及（2)還可包含在兩個多核苷酸或氨基酸序列之 間存在分歧的序列，所以典型地通過在"比較窗"上比較兩個分子的序列來進行兩個（或更 多個）分子之間的序列比較，以鑒定和比較具有序列相似性的局部區(qū)域。如本文所用，"比 較窗"是指至少18個連續(xù)核苷酸位置或6個氨基酸的概念性片段，其中多核苷酸序列或氨 基酸序列可與至少18個連續(xù)核苷酸或6個氨基酸的參考序