種突變株，其中：
[0072] -蛋白NcMIC3的功能通過在調(diào)節(jié)蛋白NcMIC3表達的核苷酸序列中一個或多個核 苷酸的突變、缺失或插入來消除，和
[0073] -蛋白NcMICl的功能通過在調(diào)節(jié)蛋白NcMICl表達的核苷酸序列中一個或多個核 苷酸的突變、缺失或插入來消除。
[0074] 在一個特別的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的新孢子蟲屬物種突變株為犬新孢子蟲的 突變株。
[0075] 本發(fā)明的目標(biāo)還在于提供藥物組合物，該藥物組合物包含其中蛋白NcMIC3的功 能和/或蛋白NcMICl的功能被消除的新孢子蟲屬突變株。
[0076] 本發(fā)明的目標(biāo)還在于提供藥物組合物，該藥物組合物包含其中蛋白NcMIC3的功 能和任選地蛋白NcMICl的功能被消除的新孢子蟲屬突變株。
[0077] 所述藥物組合物包含上面所描述的突變株和藥學(xué)上可接受的載體。
[0078] 更特別地，這樣的藥物組合物以IO2至IO9個新孢子蟲屬物種突變株的速殖子的單 位劑量進行施用。
[0079] 更特別地，這樣的藥物組合物以IO2至10 9個株系Neo ncmicl_3K0的速殖子的單 位劑量進行施用。
[0080] 更加特別地，這樣的藥物組合物以IO3至10 8個，尤其是10 4至10 7個，尤其是IO5 至IO6個株系Neo ncmicl-3K0的速殖子的單位劑量進行施用。
[0081] 更加特別地，這樣的藥物組合物以IO2至108個，尤其是10 2至107個，尤其是102至 IO6個，尤其是10 2至10 5個，尤其是10 2至10 4個，尤其是10 2至10 3個株系Neo ncmicl-3K0 的速殖子的單位劑量進行施用。
[0082] 更加特別地，這樣的藥物組合物以102、103、10 4、105、IO6UO7UO8或10 9個株系Neo ncmicl-3K0的速殖子的單位劑量進行施用。
[0083] 在一個更特別的實施方案中，首次施用之后可以是可能的以后的追加施用，按照 前面所指出的單位劑量。
[0084] 此外，本發(fā)明的目標(biāo)在于提供疫苗組合物，其包含根據(jù)本發(fā)明的新孢子蟲屬物種 突變株和藥學(xué)上可接受的載體。
[0085] 這樣的藥物組合物或疫苗組合物可以通過腸胃外途徑（靜脈內(nèi)、皮下、真皮內(nèi)、肌 內(nèi)和腹膜內(nèi)）或通過腸途徑進行施用。
[0086] 在這樣的藥物組合物或疫苗組合物中所包含的藥學(xué)上可接受的載體的選擇可以 按照基于本領(lǐng)域技術(shù)人員的知識所考慮的施用方式來進行。
[0087] 這樣的藥物組合物或疫苗組合物可以用于在伴侶動物例如狗和馬以及農(nóng)用動物 例如綿羊、山羊、牛、豬、駱駝科動物和鹿科動物中治療初次感染的、重激活的或再感染的新 孢子蟲病。
[0088] 更特別地，這樣的藥物組合物或疫苗組合物可以用于在伴侶動物例如狗和馬以及 農(nóng)用動物例如綿羊、山羊、牛、豬、駱駝科動物和鹿科動物中治療初次感染的、重激活的或再 感染的新孢子蟲病，和尤其是用于防止寄生蟲的母-胎傳播以便減少流產(chǎn)數(shù)目以及母親至 其后代的垂直污染的風(fēng)險。
[0089] 更加特別地，這樣的藥物組合物或疫苗組合物可以用于在伴侶動物例如狗和馬以 及農(nóng)用動物例如綿羊、山羊、牛、豬、駱駝科動物和鹿科動物中治療初次感染的、重激活的或 再感染的新孢子蟲病，和尤其是用于防止寄生蟲的母-胎傳播以便減少流產(chǎn)數(shù)目以及在妊 娠過程中（即急性感染）和在妊娠之前（即慢性感染）的感染的情況下母親至其后代的垂 直污染的風(fēng)險。
[0090] 本發(fā)明還涉及體外診斷方法，其使得能夠區(qū)別用突變株Neo ncmiclKO、Neo ncmic3K0、Neo ncmicl-3K0進行疫苗接種的動物與被犬新孢子蟲野生株天然地感染的動 物。這些稱為 DIVA (Differentiating Infected from Vaccinated Animal:區(qū)別被感染 的動物與經(jīng)疫苗接種的動物）的診斷測試越來越多地被管理機構(gòu)所要求，尤其是為了藥物 警戒性和流行病學(xué)研宄，以及為了鑒定出在經(jīng)疫苗接種的動物中突然發(fā)生的流產(chǎn)的可能原 因。
[0091] 本發(fā)明還涉及體外鑒別診斷方法，其用于區(qū)分用本發(fā)明的組合物進行疫苗接種的 哺乳動物與未經(jīng)疫苗接種的哺乳動物，所述方法包括下述步驟：
[0092] 在所述哺乳動物的生物學(xué)樣品中，
[0093] -測定抗-NcMICl和/或抗-NcMIC3和/或抗-DHFR和/或抗-CAT-GFP抗體的濃 度，和/或
[0094] -測定抗原NcMICl和/或NcMIC3和/或DHFR和/或CAT-GFP的濃度，
[0095] -測定基因 ncmicl、ncmic3、dhfr和/或cat-gfp的表達水平，和/或
[0096] -測定基因 ncmicl、ncmic3、dhfr和/或cat-gfp的存在或不存在。
[0097] 本發(fā)明還涉及體外鑒別診斷方法，其用于區(qū)分用本發(fā)明的組合物進行疫苗接種的 哺乳動物與未經(jīng)疫苗接種的哺乳動物，所述方法包括下列步驟：
[0098] 在所述哺乳動物的生物學(xué)樣品中，
[0099] i)測定抗-NcMICl和/或抗-NcMIC3和/或抗-DHFR和/或抗-CAT-GFP抗體的 濃度，
[0100] 和/或
[0101] 測定抗原NcMICl和/或NcMIC3和/或DHFR和/或CAT-GFP的濃度，
[0102] ii)測定基因 ncmicl、ncmic3、dhfr 和 / 或 cat-gfp 的表達水平，
[0103] 和/或
[0104] 測定基因 ncmicl、ncmic3、dhfr和/或cat-gfp的存在或不存在。
[0105] 根據(jù)一個特別的實施方案，本發(fā)明的方法可以在選自下列的生物學(xué)樣品上實施： 血液和血清，以及某些組織和器官例如胎盤、腦、肌肉等。
[0106] 犬新孢子蟲野生株在其基因組中具有基因 ncmicl和ncmic3并且表達蛋白NcMICl 和 NcMIC3。
[0107] 根據(jù)本發(fā)明所定義的犬新孢子蟲突變株分別具有：
[0108] -基因 ncmicl和選擇基因 dhfr，對于突變株Neo ncmic3K0 ;在該突變株的基因組 中通過同源重組插入選擇基因 dhfr以代替基因 ncmic3。突變株Neo ncmic3K0表達蛋白 NcMICl和DHFR而不表達蛋白NcMIC3。
[0109] -基因 ncmic3和選擇基因 cat-gfp，對于突變株Neo ncmiclKO ;在該突變株的基 因組中通過同源重組插入選擇基因 cat-gfp以代替基因 ncmicl。突變株Neo ncmiclKO表 達蛋白NcMIC3和CAT-GFP而不表達蛋白NcMICl。
[0110] -選擇基因 dhfr和cat-gfp，對于突變株Neo ncmicl_3K0 ;在該突變株的基因組 中通過同源重組插入選擇基因 dhfr和cat-gfp以分別代替基因 ncmic3和基因 ncmicl。突 變株Neo ncmicl-3K0表達蛋白DHFR和CAT-GFP而不表達蛋白NcMICl和NcMIC3。
[0111] 用本發(fā)明的突變株進行疫苗接種的動物與被犬新孢子蟲野生株感染的動物之間 的診斷可以是間接的并且基于抗體的檢測和鑒定，或者是直接的并且基于用免疫學(xué)技術(shù)或 分子技術(shù)來進行的感染因子的檢測。
[0112] 本發(fā)明還涉及用于在生物學(xué)樣品（其尤其選自源自哺乳動物的血液和血清）中檢 示抗-NcMICl抗體和/或抗-NcMIC3抗體和/或抗-DHFR抗體和/或抗-CAT-GFP抗體的 方法，所述方法包括下列步驟：
[0113] -通過與參考生物學(xué)樣品進行比較，通過免疫復(fù)合物的體外形成來測定在事先 從哺乳動物中獲取的生物學(xué)樣品中存在的至少一種抗體的存在，所述免疫復(fù)合物由與 抗-NcMICl抗體結(jié)合的蛋白NcMICl或者與抗-NcMIC3抗體結(jié)合的蛋白NcMIC3或者與 抗-DHFR抗體結(jié)合的蛋白DHFR或者與抗-CAT-GFP抗體結(jié)合的蛋白CAT-GFP構(gòu)成。
[0114] "免疫復(fù)合物"意指抗原與特異地針對該抗原的抗體之間的物理相互作用。在本發(fā) 明中，該相互作用在體外在蛋白NcMICl、NcMIC3、DHFR、CAT-GFP與特異地針對這些蛋白質(zhì) 中每一個的抗體之間發(fā)生。
[0115] "抗體的檢測和鑒定"是指檢測對于所研宄的并且存在于個體血清中的抗原特異 的抗體?？贵w的檢測通過傳統(tǒng)的間接ELISA技術(shù)或者競爭性ELISA技術(shù)來進行。
[0116] 間接ELISA技術(shù)基于在使用固定在固相支持物上的抗原。將待診斷的個體的血清 放置在支持物上以產(chǎn)生在經(jīng)固定的抗原與可能存在于待診斷的個體的血清中的抗體之間 的相互作用。在洗滌之后，通過使用經(jīng)標(biāo)記的二抗（其特異地識別經(jīng)綴合的抗物種抗體） 來檢示抗原-抗體相互作用。檢示出針對蛋白DHFR和/或CAT-GFP的抗體使得能夠表明 先前用突變株對該個體進行了接種。相反地，檢示出針對蛋白NcMICl和NcMIC3的抗體表 明該個體以前被犬新孢子蟲野生株污染。
[0117] 競爭性ELISA基于可能存在于待診斷的個體的血清中的抗體與存在于檢測血清 中的抗體之間的競爭。將抗原固定在固相支持物上。將待診斷的個體的血清和競爭血清放 置在支持物上。檢測抗體的特異性結(jié)合通過使用合適的且經(jīng)標(biāo)記的抗物種綴合物來檢示。 在待診斷的個體的血清中抗體的可能存在產(chǎn)生與存在于檢測血清中的抗體的競爭，并且導(dǎo) 致揭示減小。使用蛋白DHFR和/或CAT-GFP的間接ELISA使得能夠表明給動物接種了本 發(fā)明的突變株。使用蛋白NcMICl和NcMIC3的間接EL