瑪咖-乙內硫脲a的制備方法
【專利說明】瑪咖-乙內硫服A的制備方法
[0001] 所屬領域
[0002] 本發(fā)明屬于化學制備方法領域，具體地，設及一種瑪咖-己內硫脈A的方法。 技術背景
[000引瑪咖（MACA)為十字花科獨行菜（擬）L巧idiummeyenii的形似蘿h樣肥大的根 莖的植物，原產南美海撥3500-4500米區(qū)域；當?shù)亍乐顺０氧r根加蜂蜜和水果棒汁作為 一種飲料飲用。西班牙人在1533年來到秘魯時，發(fā)現(xiàn)在惡劣環(huán)境里，孩子、成人和牲畜卻十 分強壯。秘魯?shù)腗CA產量約400噸，是重要出口資源；其提取物也備受青睞。本世紀初，云 南麗江從秘魯引進了MCA進行推廣種植，目前已經達到30000畝W上，精耕細作的種植技 術使我國MCA產量遠超秘魯，成為一個新的MCA生產和消費大國。
[0004] 由于MCA的特殊功能作用，其營養(yǎng)成分、化學成分及其功能的研究持續(xù)不斷。有 許多研究報道：新鮮瑪咖含水分10. 4%、蛋白質10. 2%、脂肪2. 2%、碳水化合物59%、纖維 8. 5%、灰分4. 9%。其蛋白質主要由人體必需的氨基酸組成，包括：精氨酸化94% )、天口 冬氨酸化17% )、谷氨酸（15. 6% )和賴氨酸巧4. 5% )等；瑪咖的脂肪中不飽和脂肪酸的 含量占52. 7% (其中亞油酸18. 5%、亞麻酸8. 87% )，還含有芥子油巧（glucosinolates) 醬醇和鐘、巧、鐵等；瑪咖脂類部位中特征成分為瑪咖締（maceaene)及瑪咖酷（mecamide)， 還包括N-芐基辛酷胺、N-芐基-16-哲基-9-氧化-10E，12E，14E-辛葵S締酷胺、N-節(jié) 基-16哲基-9,16-二氧-10E，12E，14E-辛葵S締酷胺W及其它17瑣瑣碎碎S個瑪咖締和 瑪咖酷胺的同系物。一般認為瑪咖締和瑪咖酷胺是瑪咖提取物中具促進性功能的有效物質 之一?，斂В∕ACA)產品已有秘魯、美國、加拿大、英國、荷蘭、瑞±、日本、法國、澳大利亞、西 班牙等國生產的一百多種，大都W保健食品的形式銷售。最簡單的方法是將瑪咖（MACA)干 粉裝入硬膠囊，每粒500mg，每日服4-8粒（總量為2000-4000mg)，已成為世界十大暢銷保 健品之一。該其中不僅包括了瑪咖（MACA)保健品、復方制劑，也包括MCA食品，如MCA糖、 MCA咖啡、MCA餅干、MCA飲料、MCA酒等等。藥理研究報道；MCA具備多種保健和治療 功能，MCA干粉和各種提取物具有增強精力、提高生育力、改善性功能，可W治療更年期綜 合征、風濕癥、抑郁癥、貧血癥；還具有抗癌和抗白血病等作用；MACA具有抗疲勞、調節(jié)內分 泌等多種功效。
[0005] 瑪咖己內硫脈化合物生物活性比較強，特別是2-(2-芐基）-3-硫代六氨化咯 [1. 2-環(huán)]-咪挫-1-酬[(巧-2-benz;y；L-3-thioxohex油y化opyrrolo[l, 2-C]-imidazol-l -one]具有較強的神經系統(tǒng)生物活性，如；1)促進神經元的再生和生長，有利于神經素亂和 神經組織退化疾病的治療。2)促進頭發(fā)的生長用于治療脫發(fā)。3)用于治療視覺素亂疾病， 改善視力，此外可治療記憶缺陷，提高記憶力。4)但同時證實該類化合物沒有任何顯著的免 疫抑制活性或者說它們并非免疫抑制劑。美國GPI NIL冊LDINGS，INC.公司于2001年申 請了PCT專利（PCT Int.Appl. (2001)，W0 2001046195A120010628)。由于己內硫脈化合物 的顯著生物活性，一直有些學者改進、優(yōu)化合成路線。但一直未能有較完善和得率達93% W 上的合成和制備方法。2007年印度學者Sundaram，G. S. M.等完成了一個極為簡單的目標化 合物2- (2-芐基）-3-硫代六氨化咯[1. 2-環(huán)]-咪挫-1-酬[(巧-2-benz^-3-thiox0-hex油y化opyrrolo[l,2-C]-imidazol-l-〇ne]的合成工藝。因2-(2-芐基）-3-硫代六氨[I比咯 [1. 2-環(huán)]-咪挫-1-酬（瑪咖-己內硫脈A)[(巧-2-benz;y]_-3-thioxohex油y化opyrrolo[ 1, 2-口-imidazo；L-l-0ne] (maca-thiohydantoinA)活性顯著，備受關注，W92%的高收率 完成合成工藝的研究。成為己內硫脈合成的一個里程碑。
[0006]
【主權項】
1. 瑪咖-乙內硫脲A的制備方法，其特征在于該方法包括甲醇提取、石油醚萃取、硅膠 分離、反相硅膠RP-C18純化、硅膠再分離、DIOL硅膠純化步驟。
2. 如權利要求1所述的瑪咖-乙內硫脲A的制備方法，其特征在于所述的甲醇提取是 采集瑪咖（Lepidium meyenii)植物地上部分、根莖或同屬植物地上部分、根莖，在陽光下瞭 曬干燥，或采用其他方式干燥，干燥品切細粉碎后以甲醇浸泡，加熱回流提取三次，過濾除 去殘渣，濾液濃縮后得總浸膏。
3. 如權利要求1所述的瑪咖-乙內硫脲A的制備方法，其特征在于所述的石油醚萃取 是將甲醇提取得到的總浸膏水混懸分散后，以體積比1:1石油醚萃取3次，分液濃縮石油醚 部分，得石油醚總浸膏。
4. 如權利要求1所述的瑪咖-乙內硫脲A的制備方法，其特征在于所述的硅膠分離是 以適量氯仿溶解石油醚總浸膏后硅膠拌樣，裝硅膠柱粗分離，以丙酮/石油醚溶液作為流 動相，按丙酮％或石油醚=20%、30%、40%、50%、60%、、70%百分比例洗脫，其中目標化 合物主要是在對丙酮％或石油醚=50%、60%洗脫液濃縮回收得到的組分X部位X-E中。
5. 如權利要求1所述的瑪咖-乙內硫脲A的制備方法，其特征在于所述的反相硅膠 RP-C18純化是用適量甲醇溶解組分X部位X-E后反相硅膠RP-C18拌樣，裝相應反相膠硅柱 層析分離，以水/甲醇，甲醇％= 30% -80%百分比例進行梯度洗脫，得到6個主要部位Fr III-VIII，其中70%甲醇％洗脫下來部位，減壓回收溶劑后得目標化合物部位Fr VII。
6. 如權利要求1所述的瑪咖-乙內硫脲A的制備方法，其特征在于所述的硅膠再分離 是以適量氯仿溶解目標化合物部位Fr VII后硅膠拌樣，裝硅膠柱粗分離，得到純度90%的 瑪咖-乙內硫脲A粗產物Kmaca-4。
7. 如權利要求1所述的瑪咖-乙內硫脲A的制備方法，其特征在于所述的DIOL硅膠純 化是將粗產物Kmaca-4,經DIOL硅膠再次分離純化，得到高純度95%以上瑪咖-乙內硫脲 A0
8. 如權利要求1所述的瑪咖-乙內硫脲A的制備方法，其特征在于從瑪咖植物根莖中 分離原料藥物瑪咖-乙內硫脲A :用瑪咖植物根莖，采集瑪咖干燥根莖，切片粉碎后以甲醇 浸泡，加熱回流提取三次，過濾除去殘渣，濾液濃縮后得總浸膏，浸膏以20L水混懸分散后， 體積比1:1石油醚萃取3次，合并石油醚萃取液后，減壓濃縮回收石油醚，得石油醚萃取總 浸膏；剩余水相部分，用體積比1:1乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液后，減壓濃縮回 收乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取總浸膏；石油醚萃取總浸膏以適量氯仿溶解浸膏，用柱層析硅 膠分離填料，干法拌樣，然后用硅膠柱粗分離，以丙酮/石油醚溶液作為流動相，按丙酮％ =20%、30%、40%、50%、60%、、70%百分比例洗脫。對丙酮/石油醚按丙酮％=50%、、 60 %洗脫液濃縮回收得組X部位X-E，組分X部位X-E用適量甲醇溶解后反相硅膠RP-C18拌 樣，裝相應反相膠硅柱層析分離，以甲醇/水，甲醇％ = 30% -80%百分比例進行梯度洗脫， 得到6個主要部位Fr III-VIII，其中70%甲醇％洗脫下來部位，減壓回收溶劑后Fr VII， 以柱層析硅膠柱分離目標化合物部位Fr VII，得到目標化合物Kmaca-4,純度90%以上；再 次經分離純化，得到純度95 %以上的瑪咖-乙內硫脲A。
【專利摘要】瑪咖-乙內硫脲A的制備方法，該方法包括甲醇提取、石油醚萃取、硅膠分離、反相硅膠RP-C18純化、硅膠再分離、DIOL硅膠純化步驟。本發(fā)明的目的在于提供一種從植物瑪咖中直接分離提取目標化合物瑪咖-乙內硫脲A的方法。該方法首次從MACA植物分離得到保健品瑪咖植物中的有效成分之一即瑪咖-乙內硫脲類(maca-thiohydantoins)化合物，這是保健品功能植物瑪咖活性化學成分發(fā)現(xiàn)的一次關鍵性突破。
【IPC分類】C07D487-04
【公開號】CN104829621
【申請?zhí)枴緾N201510196865
【發(fā)明人】邱明華, 于慕湲, 王勁松, 萬落生, 彭惺蓉, 李忠榮, 周琳
【申請人】中國科學院昆明植物研究所, 香格里拉縣益科生物科技有限公司
【公開日】2015年8月12日
【申請日】2015年4月23日