少60 %,優(yōu)選至少65 %,優(yōu)選至少70 %,優(yōu)選至少75 %,優(yōu)選至少80 %,優(yōu) 選至少85%,優(yōu)選至少90%,更優(yōu)選至少95%,甚至更優(yōu)選至少98 %同一,性的氨基酸序列 以及與SEQ ID N0:3有至少55%,優(yōu)選至少60%,優(yōu)選至少65%,優(yōu)選至少70%,優(yōu)選至 少75 %,優(yōu)選至少80 %,優(yōu)選至少85 %,優(yōu)選至少90 %,更優(yōu)選至少95 %,甚至更優(yōu)選至少 98%同一性的氨基酸序列組成。
[0096]根據(jù)另一個特別優(yōu)選的實(shí)施方案,在前述任一實(shí)施方案中使用的融合多肽或者 由前述任一實(shí)施方案的核酸編碼的融合多肽包含與SEQ ID N0:88有至少50%、優(yōu)選至少 55 %,優(yōu)選至少60 %,優(yōu)選至少65 %,優(yōu)選至少70 %,優(yōu)選至少75 %,優(yōu)選至少80 %,優(yōu)選至 少85%,優(yōu)選至少90%,更優(yōu)選至少95%,最優(yōu)選至少98 %同一,性的氨基酸序列。根據(jù)一 個更優(yōu)選的實(shí)施方案,該融合多肽包含氨基酸序列SEQ ID N0:88。根據(jù)一個更加優(yōu)選的實(shí) 施方案,該融合多肽由SEQ ID N0:88組成。
[0097] 根據(jù)本發(fā)明的又一個特別的實(shí)施方案,具有本發(fā)明方法任一實(shí)施方案中所需的 LPP合酶活性的多肽是這樣一種多肽,該多肽包含與SEQ ID N0:36~39 (它們是SEQ ID N0:1的截短形式)中的任一條序列有至少50%同一性的氨基酸序列。最好,所述多肽包含 與SEQ ID N0:36~39中的任一條序列有至少55%,優(yōu)選至少60%,優(yōu)選至少65%,優(yōu)選至 少70 %,優(yōu)選至少75 %,優(yōu)選至少80 %,優(yōu)選至少85 %,優(yōu)選至少90 %,更優(yōu)選至少95 %, 最優(yōu)選至少98%同一性的氨基酸序列。根據(jù)一個更優(yōu)選的實(shí)施方案,所述多肽包含SEQ ID N0:36~39中的任一條序列。根據(jù)一個更加優(yōu)選的實(shí)施方案,所述多肽由SEQ ID N0:36~ 39中的任一條序列組成。
[0098] 根據(jù)本發(fā)明的另一個特別的實(shí)施方案,具有本發(fā)明方法任一實(shí)施方案中所需的香 紫蘇醇合酶活性的多肽是這樣一種多肽,該多肽包含與SEQ ID N0:74 (它是SEQ ID N0:3 的截短形式)有至少50%同一性的氨基酸序列。最好,所述多肽包含與SEQ ID N0:74有至 少55 %,優(yōu)選至少60 %,優(yōu)選至少65 %,優(yōu)選至少70 %,優(yōu)選至少75 %,優(yōu)選至少80 %,優(yōu) 選至少85%,優(yōu)選至少90%,更優(yōu)選至少95%,最優(yōu)選至少98 %同一性的氨基酸序列。根 據(jù)一個更優(yōu)選的實(shí)施方案,所述多肽包含SEQ ID N0:74。根據(jù)一個更加優(yōu)選的實(shí)施方案,所 述多肽由SEQ ID N0:74組成。
[0099] 根據(jù)另一個特別的實(shí)施方案,在前述任一實(shí)施方案中使用的融合多肽或者由前述 任一實(shí)施方案的核酸編碼的融合多肽包含與SEQ ID N0:36~39中的任一條序列有至少 50 %、優(yōu)選至少55 %,優(yōu)選至少60 %,優(yōu)選至少65 %,優(yōu)選至少70 %,優(yōu)選至少75 %,優(yōu)選至 少80 %,優(yōu)選至少85 %,優(yōu)選至少90 %,更優(yōu)選至少95 %,甚至更優(yōu)選至少98 %同一,性的氨 基酸序列。在一個更加優(yōu)選的實(shí)施方案中,其包含SEQ ID N0:36~39中的任一條序列。
[0100] 根據(jù)另一個特別的實(shí)施方案,在前述任一實(shí)施方案中使用的融合多肽或者由前述 任一實(shí)施方案的核酸編碼的融合多肽包含與SEQ ID N0:74有至少50%、優(yōu)選至少55%, 優(yōu)選至少60 %,優(yōu)選至少65 %,優(yōu)選至少70 %,優(yōu)選至少75 %,優(yōu)選至少80 %,優(yōu)選至少 85 %,優(yōu)選至少90 %,更優(yōu)選至少95 %,甚至更優(yōu)選至少98 %同一,性的氨基酸序列。在一個 更加優(yōu)選的實(shí)施方案中,其包含SEQ ID N0:74。
[0101] 在一個更加優(yōu)選的實(shí)施方案中,在前述任一實(shí)施方案中使用的融合多肽或者由前 述任一實(shí)施方案的核酸編碼的融合多肽由SEQ ID N0:36~39中的任一條序列以及與SEQ ID N0:74有至少50%、優(yōu)選至少55%,優(yōu)選至少60%,優(yōu)選至少65%,優(yōu)選至少70%,優(yōu) 選至少75 %,優(yōu)選至少80 %,優(yōu)選至少85 %,優(yōu)選至少90 %,更優(yōu)選至少95 %,甚至更優(yōu)選 至少98%同一性的氨基酸序列組成。或者,在前述任一實(shí)施方案中使用的融合多肽或者由 前述任一實(shí)施方案的核酸編碼的融合多肽由SEQ ID N0:74以及與SEQ ID N0:36~39中 的任一條序列有至少50 %、優(yōu)選至少55 %,優(yōu)選至少60 %,優(yōu)選至少65 %,優(yōu)選至少70 %, 優(yōu)選至少75 %,優(yōu)選至少80 %,優(yōu)選至少85 %,優(yōu)選至少90 %,更優(yōu)選至少95 %,甚至更優(yōu) 選至少98%同一性的氨基酸序列組成。或者,該融合多肽由與SEQ ID N0:36~39中的任 一條序列有至少50 %、優(yōu)選至少55 %,優(yōu)選至少60 %,優(yōu)選至少65 %,優(yōu)選至少70 %,優(yōu)選 至少75 %,優(yōu)選至少80 %,優(yōu)選至少85 %,優(yōu)選至少90 %,更優(yōu)選至少95 %,甚至更優(yōu)選至 少98%同一性的氨基酸序列以及與SEQ ID N0:77有至少50%、優(yōu)選至少55%,優(yōu)選至少 60 %,優(yōu)選至少65 %,優(yōu)選至少70 %,優(yōu)選至少75 %,優(yōu)選至少80 %,優(yōu)選至少85 %,優(yōu)選至 少90%,更優(yōu)選至少95%,甚至更優(yōu)選至少98%同一性的氨基酸序列組成。在一個最優(yōu)選 的實(shí)施方案中,在前述任一實(shí)施方案中使用的融合多肽或者由前述任一實(shí)施方案的核酸編 碼的融合多肽由SEQ ID NO:36~39中的任一條序列以及SEQ ID NO:74組成。
[0102] 根據(jù)又一個實(shí)施方案,在前述任一實(shí)施方案中使用的編碼LPP合酶的核酸包含與 SEQ ID N0:28~31 (它們是SEQ ID N0:4的截短形式)中的任一條序列或其補(bǔ)體有至少 50%同一性的核苷酸序列。最好,所述核酸包含與SEQ ID N0:28~31中的任一條序列或 其補(bǔ)體有至少55 %,優(yōu)選至少60 %,優(yōu)選至少65 %,優(yōu)選至少70 %,優(yōu)選至少75 %,優(yōu)選至 少80 %,優(yōu)選至少85 %,優(yōu)選至少90 %,更優(yōu)選至少95 %,最優(yōu)選至少98 %同一性的核苷酸 序列。根據(jù)一個更優(yōu)選的實(shí)施方案,所述核酸包含SEQ ID N0:28~31中的任一條序列或 其補(bǔ)體。根據(jù)一個更加優(yōu)選的實(shí)施方案,所述核酸由SEQ ID N0:28~31中的任一條序列 或其補(bǔ)體組成。
[0103] 根據(jù)本發(fā)明的另一個特別的實(shí)施方案,在前述任一實(shí)施方案中使用的編碼香紫蘇 醇合酶的核酸包含與SEQ ID N0:73(它是SEQ ID N0:6的截短形式)或其補(bǔ)體有至少50% 同一性的核苷酸序列。最好,所述核酸包含與SEQ ID N0:73或其補(bǔ)體有至少55%,優(yōu)選至 少60 %,優(yōu)選至少65 %,優(yōu)選至少70 %,優(yōu)選至少75 %,優(yōu)選至少80 %,優(yōu)選至少85 %,優(yōu) 選至少90 %,更優(yōu)選至少95 %,最優(yōu)選至少98 %同一性的核苷酸序列。根據(jù)一個更優(yōu)選的 實(shí)施方案,所述核酸包含SEQ ID N0:73或其補(bǔ)體。根據(jù)一個更加優(yōu)選的實(shí)施方案,所述核 酸由SEQ ID N0:73或其補(bǔ)體組成。
[0104] 根據(jù)另一個特別的實(shí)施方案,在前述任一實(shí)施方案中使用的編碼融合多肽的核酸 包含與SEQ ID N0:28~31中的任一條序列或其補(bǔ)體有至少50%,優(yōu)選至少55%,優(yōu)選至 少60 %,優(yōu)選至少65 %,優(yōu)選至少70 %,優(yōu)選至少75 %,優(yōu)選至少80 %,優(yōu)選至少85 %,優(yōu) 選至少90%,更優(yōu)選至少95%,甚至更優(yōu)選至少98%同一,性的核苷酸序列。在一個更加優(yōu) 選的實(shí)施方案中,其包含SEQ ID N0:28~31中的任一條核苷酸序列或其補(bǔ)體。
[0105]根據(jù)另一個特別的實(shí)施方案,在前述任一實(shí)施方案中使用的編碼融合多肽的核酸 包含與SEQ ID N0:73或其補(bǔ)體有至少50%,優(yōu)選至少55%,優(yōu)選至少60%,優(yōu)選至少65%, 優(yōu)選至少70 %,優(yōu)選至少75 %,優(yōu)選至少80 %,優(yōu)選至少85 %,優(yōu)選至少90 %,更優(yōu)選至少 95%,甚至更優(yōu)選至少98%同一性的核苷酸序列。在一個更加優(yōu)選的實(shí)施方案中,其包含 SEQ ID N0:73的核苷酸序列或其補(bǔ)體。
[0106] 在一個更加優(yōu)選的實(shí)施方案中,在前述任一實(shí)施方案中使用的編碼融合多肽的核 酸由SEQ ID N0:28~31中的任一條序列或其補(bǔ)體以及與SEQ ID N0:73或其補(bǔ)體有至少 50 %,優(yōu)選至少55 %,優(yōu)選至少60 %,優(yōu)選至少65 %,優(yōu)選至少70 %,優(yōu)選至少75 %,優(yōu)選 至少80 %,優(yōu)選至少85 %,優(yōu)選至少90 %,更優(yōu)選至少95 %,甚至更優(yōu)選至少98 %同一性 的核苷酸序列組成?;蛘?,在前述任一實(shí)施方案中使用的編碼融合多肽的核酸由SEQ ID N0:73或其補(bǔ)體以及與SEQ ID N0:28~31中的任一條序列或其補(bǔ)體有至少50%,優(yōu)選至 少55 %,優(yōu)選至少60 %,優(yōu)選至少65 %,優(yōu)選至少70 %,優(yōu)選至少75 %,優(yōu)選至少80 %,優(yōu) 選至少85%,優(yōu)選至少90%,更優(yōu)選至少95%,甚至更優(yōu)選至少98 %同一性的核苷酸序列 組成?;蛘?,該編碼融合多肽的核酸由與SEQ ID N0:28~31中的任一條序列或其補(bǔ)體有 至少50 %,優(yōu)選至少55 %,優(yōu)選至少60 %,優(yōu)選至少65 %,優(yōu)選至少70 %,優(yōu)選至少75 %, 優(yōu)選至少80 %,優(yōu)選至少85 %,優(yōu)選至少90 %,更優(yōu)選至少95 %,甚至更優(yōu)選至少98 %同 一性的核苷酸序列以及與SEQ ID N0:73或其補(bǔ)體有至少50%,優(yōu)選至少55%,優(yōu)選至少 60 %,優(yōu)選至少65 %,優(yōu)選至少70 %,優(yōu)選至少75 %,優(yōu)選至少80 %,優(yōu)選至少85 %,優(yōu)選至 少90%,更優(yōu)選至少95%,甚至更優(yōu)選至少98%同一性的核苷酸序列組成。在一個最優(yōu)選 的實(shí)施方案中,在前述任一實(shí)施方案中使用的編碼融合多肽的核酸由SEQ ID NO:73或其補(bǔ) 體以及SEQ ID NO:28~31中的任一條序列或其補(bǔ)體組成。
[0107] 根據(jù)另一個優(yōu)選的實(shí)施方案,在前述任一實(shí)施方案中使用的該多肽或該核酸源自 快樂鼠尾草(Salvia sclarea)。
[0108] 實(shí)施本發(fā)明方法的一個重要工具是融合多肽本身。因此,能催化GGPP至香紫蘇醇 的轉(zhuǎn)化并包含與SEQ ID NO: 1或SEQ ID N0:2有至少50%同一性的氨基酸序列以及與SEQ ID N0:3有至少50%同一性的氨基酸序列的融合多肽是本發(fā)明的另一目的。
[0109] 根據(jù)一個優(yōu)選的實(shí)施方案,該融合多肽包含與SEQ ID NO: 1或SEQ ID N0:2有至 少55 %,優(yōu)選至少60 %,優(yōu)選至少65 %,優(yōu)選至少70 %,優(yōu)選至少75 %,優(yōu)選至少80 %,優(yōu) 選至少85 %,優(yōu)選至少90 %,更優(yōu)選至少95 %,甚至更優(yōu)選至少98 %同一,性的氨基酸序列。 根據(jù)一個更優(yōu)選的實(shí)施方案,該融合多肽包含氨基酸序列SEQ ID N0:1或SEQ ID N0:2。
[0110] 根據(jù)另一個優(yōu)選的實(shí)施方案,該融合多肽包含與SEQ ID NO: 3有至少55%,優(yōu)選至 少60 %,優(yōu)選至少65 %,優(yōu)選至少70 %,優(yōu)選至少75 %,優(yōu)選至少80 %,優(yōu)選至少85 %,優(yōu) 選至少90%,更優(yōu)選至少95%,甚至更優(yōu)選至少98%同一,性的氨基酸序列。根據(jù)一個更優(yōu) 選的實(shí)施方案,所述融合多肽包含氨基酸序列SEQ ID N0:3。
[0111] 在一個更加有效的實(shí)施方案中,該融合多肽由SEQ ID NO: 1或SEQ ID N0:2以及與 SEQ ID NO:3有至少50%,優(yōu)選至少55%,優(yōu)選至少60%,優(yōu)選至少65%,優(yōu)選至少70%, 優(yōu)選至少75 %,優(yōu)選至少80 %,優(yōu)選至少85 %,優(yōu)選至少90 %,更優(yōu)選至少95 %,甚至更優(yōu) 選至少98%同一性的氨基酸序列組成?;蛘撸撊诤隙嚯挠蒘EQ ID N0:3以及與SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2有至少50%,優(yōu)選至少55%,優(yōu)選至少60%,優(yōu)選至少65%,優(yōu)選至 少70 %,優(yōu)選至少75 %,優(yōu)選至少80 %,優(yōu)選至少85 %,優(yōu)選至少90 %,更優(yōu)選至少95 %, 甚至更優(yōu)選至少98%同一性的氨基酸序列組成。在一個最優(yōu)選的實(shí)施方案中,該融合多肽 由 SEQ ID N0:1 或 SEQ ID N0:2 以及 SEQ ID N0:3 組成。
[0112] 根據(jù)本發(fā)明的一個特別的實(shí)施方案,該融合多肽包含SEQ ID NO: 1的截短形式的 序列(例如SEQ ID N0:36~39)和/或SEQ ID N0:3的截短形式的序列(例如SEQ ID N0:74)。
[0113] 因此,根據(jù)本發(fā)明的一個特別的實(shí)施方案,該融合多肽包含與SEQ ID N0:36~ 39中的任一條序列有至少50%、優(yōu)選至少55%,優(yōu)選至少60%,優(yōu)選至少65%,優(yōu)選至少 70 %,優(yōu)選至少75 %,優(yōu)選至少80 %,優(yōu)選至少85 %,優(yōu)選至少90 %,更優(yōu)選至少95 %,甚 至更優(yōu)選至少98%同一性的氨基酸序列。在一個更加優(yōu)選的實(shí)施方案中,其包含SEQ ID NO:36~39中的任一條序列。
[0114] 根據(jù)另一個特別的實(shí)施方案,該融合多肽包含與SEQ ID N0:74有至少50%、優(yōu)選 至少55 %,優(yōu)選至少60 %,優(yōu)選至少65 %,優(yōu)選至少70 %,優(yōu)選至少75 %,優(yōu)選至少80 %, 優(yōu)選至少85%,優(yōu)選至少90%,更優(yōu)選至少95%,甚至更優(yōu)選至少98%同一,性的氨基酸序 列。在一個更加優(yōu)選的實(shí)施方案中,其包含SEQ ID N0:74。
[0115] 在一個更加優(yōu)選的實(shí)施方案中,該融合多肽由SEQ ID NO: 36~39中的任一條序 列以及與SEQ ID N0:74有至少50%、優(yōu)選至少55%,優(yōu)選至少60%,優(yōu)選至少65%,優(yōu)選至 少70 %,優(yōu)選至少75 %,優(yōu)選至少80 %,優(yōu)選至少85 %,優(yōu)選至少90 %,更優(yōu)選至少95 %, 甚至更優(yōu)選至少98%同一性的氨基酸序列組成?;蛘?,該融合多肽由SEQ ID NO:74以及與 SEQ ID NO:36~39中的任一條序列有至少50%、優(yōu)選至少55%,優(yōu)選至少60%,優(yōu)選至少 65 %,優(yōu)選至少70 %,優(yōu)選至少75 %,優(yōu)選至少80 %,優(yōu)選至少85 %,優(yōu)選至少90 %,更優(yōu)選 至少95%,甚至更優(yōu)選至少98%同一性的氨基酸序列組成。在一個最優(yōu)選的實(shí)施方案中, 該融合多肽由SEQ ID NO:36~39中的任一條序列以及SEQ ID NO:74組成。
[0116] 根據(jù)另一個特別優(yōu)選的實(shí)施方案,本發(fā)明的融合多肽包含與SEQ ID NO: 88有至少 50 %、優(yōu)選至少55 %,優(yōu)選至少60 %,優(yōu)選至少65 %,優(yōu)選至少70 %,優(yōu)選至少75 %,優(yōu)選至 少80%,優(yōu)選至少85%,優(yōu)選至少90%,更優(yōu)選至少95%,最優(yōu)選至少98%同一性的氨基酸 序列。根據(jù)一個更優(yōu)選的實(shí)施方案,該融合多肽包含氨基酸序列SEQ ID N0:88。根據(jù)一個 更加優(yōu)選的實(shí)施方案,該融合多肽由SEQ ID N0:88組成。
[0117] 在此使用的多肽指的是包含于此標(biāo)明的氨基酸序列的多肽或肽片段,以及截短的 或變體多肽,條件是它們要保持如上定義的它們的活性,并且它們與SEQ ID NO: 1、SEQ ID N0:2或SEQ ID N0:3的相應(yīng)片段有至少所定義百分比的同一性。
[0118] 變體多肽的例子為天然產(chǎn)生的蛋白質(zhì),其由選擇性mRNA拼接產(chǎn)生,或者由在此描 述的多肽的蛋白酶剪切產(chǎn)生。歸因于蛋白水解的變體例如包括:由于從本發(fā)明多肽上一個 或多個末端氨基酸的蛋白水解移除而產(chǎn)生的在不同類型宿主細(xì)胞中表達(dá)時N末端或C末端 的差異。如此后描述的由本發(fā)明的核酸的天然或人工突變獲得的核酸所編碼的多肽同樣包 括在本發(fā)明之內(nèi)。
[0119] 如上所述,本發(fā)明的編碼融合多肽的核酸是在體內(nèi)實(shí)施該方法時修飾將要使用的 非人宿主生物體或細(xì)胞的有用工具。
[0120] 因此,編碼上述任一實(shí)施方案的融合多肽的核酸也是本發(fā)明的一個目的。
[0121] 根據(jù)一個優(yōu)選的實(shí)施方案,該核酸包含與SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5或它們的補(bǔ) 體有至少55 %,優(yōu)選至少60 %,優(yōu)