從蘋果皮中提取原花青素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及從植物中提取原花青素的方法，具體涉及一種從蘋果皮重提取原花青 素的方法，屬于生物化工領(lǐng)域。
[0002]
【背景技術(shù)】
[0003] 原花青素 （Oligomer Procyanidoic Complexes)，簡稱 0PC，是一種有著特殊分子 結(jié)構(gòu)的生物類黃酮，是目前國際上公認的清除人體內(nèi)自由基最有效的天然抗氧化劑。一般 為紅棕色粉末，氣微、味澀，溶于水和大多有機溶劑。
[0004] 原花青素在生活中應(yīng)用很廣泛，例如在皮膚方面，原花青素具有獨特的化學(xué)和生 理活性，在護膚品中起到多重作用，如抗衰老、抗紫外線、抗輻射、增白、保濕等。原花青素對 多種因素造成的皮膚老化都有獨特的功效；原花青素對毛囊細胞有增殖和再生功能，從而 能促進毛發(fā)生長和再生等。所以對于原花青素的研宄是很有意義和前景的。
[0005] 原花青素在葡萄籽等植物中均有分布，目前研宄較多的是如何從葡萄籽中分離提 取原花青素。
[0006] 隨著植物研宄范圍的擴大，目前越來越多的基礎(chǔ)研宄顯示蘋果皮中也存在原花青 素。蘋果為我國產(chǎn)量最大的水果，資源十分豐富，有著很好的營養(yǎng)價值和特殊的保健作用， 蘋果中的多酚能夠抑制癌細胞的增殖。其中，原花青素為蘋果中的主要酚類成分，具有多種 生物活性，有很強的抗氧化效果。由于蘋果幼果富含原花青素，蘋果成熟后，原花青素主要 存在于果皮中。因此，用蘋果皮提取原花青素具有深遠的經(jīng)濟效益和社會效益。
[0007] 但是，現(xiàn)有技術(shù)中對于蘋果皮中原花青素的研宄還是空白，而目前較為成熟的原 花青素提取工藝又是以葡萄籽這類種子為研宄基礎(chǔ)，因此對從蘋果皮中提取原花青素的方 法指導(dǎo)參考意義較弱。
[0008]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明的目的在于填補目前技術(shù)中的空白，創(chuàng)造性的公開一種從蘋果皮中提取原 花青素的方法，所述提取方法是以微波聯(lián)合酶法來提取蘋果皮中的原花青素，所述提取方 法是將蘋果皮在復(fù)合酶的酶解作用后，再以微波萃取的方式提取其中的原花青素，所述的 酶是由纖維素酶、半纖維素酶以及果膠酶組成的復(fù)合酶。
[0010] 作為一種優(yōu)選的方式，我們公開了所述酶是由等質(zhì)量的纖維素酶、半纖維素酶以 及果膠酶組成的復(fù)合酶。
[0011] 同時，我們還公開了所述酶解的優(yōu)選條件為pH 4. 5~5. 0,酶解時間40~50分鐘，酶 解溫度40~60°C。
[0012] 進一步地，最為優(yōu)選地條件是pH 5. 0,酶解時間50分鐘，酶解溫度50°C。
[0013] 另外，我們還優(yōu)選所述復(fù)合酶的添加量為每100g蘋果中添加復(fù)合酶3mg。其中特 別優(yōu)選的方式是所述復(fù)合酶是由纖維素酶lmg、半纖維素酶lmg、果膠酶Img組成。
[0014] 另外，在微波萃取中，我們還優(yōu)選了所述微波功率為300W。
[0015] 最后，我們公開了這一微波聯(lián)合酶法從蘋果皮中提取原花青素的具體工藝，包括 以下步驟： (1) 將蘋果皮粉碎、制成粉末后過篩，加入PH為4. 5~5. 0的緩沖溶液； (2) 向蘋果皮的緩沖溶液中，加入纖維素酶、半纖維素、果膠酶形成的復(fù)合酶液，在 40~60°C的條件下，酶解40~50分鐘； (3 )將酶解后的混合液在微波功率300W，頻率2450MHz，溫度60~80 °C的條件下萃取2~5 分鐘； (4)將萃取液趁熱過濾，并將濾液在3000r/min的條件下離心，取上層清液，即為原花 青素溶液。
[0016] 優(yōu)選地，萃取時間為3分鐘；緩沖溶液的加入量與蘋果皮粉末的料液比為 lg/10mL〇
[0017] 采用本發(fā)明所公開的方法，填補了目前從蘋果皮中提取原花青素的技術(shù)空白，同 時也為從果實皮中提取原花青素提供了重要的技術(shù)指引。利用這一方法可以高收率、無破 壞的從蘋果皮中提取得到原花青素，具有重要的經(jīng)濟價值。
[0018]
【具體實施方式】
[0020] 實施例中所用的材料及試劑、儀器來源。
[0021] 蘋果購自南京曉莊學(xué)院水果超市，自行處理得到蘋果皮，粉碎，過40~60目篩，作 為蘋果皮待測試樣。
[0022] 試劑：無水乙醇，南京化學(xué)試劑有限公司； 甲醇，南京化學(xué)試劑有限公司； 正丁醇，南京化學(xué)試劑有限公司； 鹽酸，上海中試化工總公司； 硫酸鐵銨，國藥集團化學(xué)試劑有限公司； 原花青素標樣，中國藥品生物制品檢定所； 以上試劑均為分析純。
[0023] 纖維素酶，酶活彡30000u/g ;果膠酶，酶活彡30000u/g ;半纖維素酶，酶活 多10000u/g ;蛋白酶，酶活多50000u/g，上海藍季科技發(fā)展有限公司。
[0024] 儀器：電子天平，日本島津公司； 7230G可見分光光度計，上海精密科學(xué)有限公司； 國華數(shù)顯恒溫水浴鍋HH-4,國華電器有限公司； 臺式離心機，上海安亭科技儀器廠；鄭州長城科工貿(mào)有限公司； 微波合成萃取儀，上海新儀微波化學(xué)科技有限公司。
[0025] 實施例1 稱取原花青素標樣I. 〇〇〇〇mg，溶解于70%乙醇溶液中，定容至50mL，得到原花青素標準 儲備液，其中原花青素的濃度為〇. 〇2mg/ml。
[0026] 準確稱取原花青素標樣5mg，定容至25mL，制得濃度為0. 2mg/ml的標準液，分別吸 取 0· 2mg/ml 的標準液 0,0· 2ml，0. 4ml，0. 6ml，0. 8ml，I. 0ml，I. 2ml，并用 70% 的乙醇溶液稀 釋定容至 l〇ml，制成濃度為 0,0. 004,0. 008,0. 012,0. 016,0. 02,0. 024mg/ml 的標準液。
[0027] 將不同濃度的標準液分別吸取0. 2ml，分別置于7支IOml具塞的比色管中，各加入 1.0 mL甲醇溶液，再加入6. Oml的正丁醇-鹽酸溶液（95/5, V/V)和0. 2ml的2%硫酸鐵銨溶 液，搖勻后，置沸水浴95°C加熱40min，然后迅速冷卻，以甲醇代替標準品溶液作空白對照， 于最大吸收波長550nm處測定吸光度，繪制標準曲線并計算，得到回歸方程為A (吸光度） =3. 1705C (mg/ml) +0· 0023,相關(guān)系數(shù) R2=0. 9992。
[0028] 實施例2 將蘋果皮粉碎、過篩，準確稱取l〇〇g，加入IOml的pH為5. 0的緩沖溶液，50°C水浴震 蕩，加入Img纖維素酶、Img半纖維素、Img果膠酶形成的復(fù)合酶液，在50°C的條件下，酶解 40~50分鐘； 將酶解液在微波功率200~400W，頻率2450MHz，溫度60~80°C，的條件下萃取2~5分鐘； 將萃取液趁熱過濾，并將濾液在3000r/min的條件下離心，取上層清液，得到原花青素 溶液。
[0029] 將所得原花青素溶液于最大吸收波長550nm處測定吸光度。并利用回歸方程為A (吸光度）=3. 1705C (mg/ml) +0· 0023,計算得到原花青素的含量為12. 6mg。
[0030] 因此，采用本實施例中獲得的原花青素的的得率為12. 6mg/100g。
[0031] 實施例3 按照實施例2中的方式進行操作。
[0032] 與實施例2不同的是，分別用不同的纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶組成復(fù)合酶。 [0033] 表1 :不同的復(fù)合酶配方列表
【主權(quán)項】
1. 一種從蘋果皮中提取原花青素的方法，其特征是，所述提取方法是將蘋果皮在復(fù)合 酶的酶解作用后，再以微波萃取的方式提取其中的原花青素，所述的酶是由纖維素酶、半纖 維素酶以及果膠酶組成的復(fù)合酶。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，所述酶是由等質(zhì)量的纖維素酶、半纖維素 酶以及果膠酶組成的復(fù)合酶。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征是，所述酶解的條件為：pH條件4. 5~5. 0， 酶解時間40~50分鐘，酶解溫度40~60°C。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征是，所述酶解條件為：pH條件5. 0,酶解時間50 分鐘，酶解溫度50 °C。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，所述復(fù)合酶的添加量為每100g蘋果中添加 復(fù)合酶3mg。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征是，所述復(fù)合酶是由纖維素酶lmg、半纖維素酶 Img、果膠酶Img組成。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，所述微波萃取中，微波功率為300W。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，包括以下步驟： (1) 將蘋果皮粉碎、制成粉末后過篩，加入PH為4. 5~5. 0的緩沖溶液； (2) 向蘋果皮的緩沖溶液中，加入纖維素酶、半纖維素、果膠酶形成的復(fù)合酶液，在 40~60°C的條件下，酶解40~50分鐘； (3 )將酶解后的混合液在微波功率300W，頻率2450MHz，溫度60~80 °C的條件下萃取2~5 分鐘； (4)將萃取液趁熱過濾，并將濾液在3000r/min的條件下離心，取上層清液，即為原花 青素溶液。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征是，萃取時間為3分鐘。
10. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征是，緩沖溶液的加入量與蘋果皮粉末的料液 比為 lg/l〇mL。
【專利摘要】本發(fā)明涉及從植物中提取原花青素的方法，具體涉及一種從蘋果皮重提取原花青素的方法，屬于生物化工領(lǐng)域。創(chuàng)造性的公開一種從蘋果皮中提取原花青素的方法，所述提取方法是以微波聯(lián)合酶法來提取蘋果皮中的原花青素，所述提取方法是將蘋果皮在復(fù)合酶的酶解作用后，再以微波萃取的方式提取其中的原花青素，所述的酶是由纖維素酶、半纖維素酶以及果膠酶組成的復(fù)合酶。填補了目前從蘋果皮中提取原花青素的技術(shù)空白，同時也為從果實皮中提取原花青素提供了重要的技術(shù)指引。利用這一方法可以高收率、無破壞的從蘋果皮中提取得到原花青素，具有重要的經(jīng)濟價值。
【IPC分類】C07D311-62
【公開號】CN104860916
【申請?zhí)枴緾N201510160139
【發(fā)明人】朱媛, 薛蒙偉, 張雪松, 陸國飛, 宋華菊, 張鳳
【申請人】南京曉莊學(xué)院
【公開日】2015年8月26日
【申請日】2015年4月7日