乳酸菌株及其引物組的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種乳酸菌株，尤指關(guān)于Lactobacillus paracasei subsp. paracasei NTU 101的一種乳酸菌株及其引物組。
【背景技術(shù)】
[0002] 乳酸菌是指能夠代謝醣類，并產(chǎn)生50%以上乳酸的細(xì)菌，例如：乳酸桿菌 (Lactobacillus)、鍵球菌（Streptococcus)、念球菌（Leuconostoc)等。人類飲用釀酵乳品 歷史非常悠久，所以，乳酸菌一直被認(rèn)為是非常安全的菌種（GRAS, generally recognized as safe)，是最具代表性的腸內(nèi)有益菌。
[0003] 乳酸菌是益生菌中最重要的一群，益生菌的定義為某一種或多種微生物當(dāng)喂食予 人類時(shí)可增進(jìn)人類腸內(nèi)菌叢的質(zhì)量。其中，乳酸菌能增進(jìn)腸內(nèi)菌叢質(zhì)量的作用機(jī)理有以下 幾種：
[0004] (1)生產(chǎn)有機(jī)酸、降低腸 PH ;
[0005] (2)和有害菌競爭養(yǎng)份；
[0006] (3)附著于腸粘膜上皮，減少有害菌增殖場所；以及
[0007] (4)產(chǎn)生抗菌物質(zhì)。
[0008]目前國內(nèi)許多釀酵乳產(chǎn)品，皆實(shí)施大規(guī)模人體飲用實(shí)驗(yàn)，證明其產(chǎn)品增進(jìn)腸道有 益菌的效果，且通過衛(wèi)生署的保健食品認(rèn)證。
[0009] Lactobacillus paracasei subsp. paracasei NTU 101 由臺(tái)灣國立大學(xué)微生物與 生化學(xué)研宄所所長潘子明教授及其研發(fā)團(tuán)隊(duì)所研發(fā)的一個(gè)優(yōu)良的本土乳酸菌株。目前，許 多文獻(xiàn)已證實(shí)L. paracasei subsp. paracasei NTU 101具有改善腸胃道菌相、降血壓、降血 月旨、降膽固醇、抗過敏等多種保健功效，深具市場潛力，已有多種產(chǎn)品上市或準(zhǔn)備上市。雖 然，L. paracasei subsp. paracasei NTU 101已成功商品化，但是仍缺乏菌株鑒別與申請(qǐng)專 利保護(hù)所需的DNA分子識(shí)別標(biāo)記。DNA分子識(shí)別標(biāo)記為可供鑒別特定菌株的DNA序列或是 DNA多型性圖譜。
[0010] 因此，為了提供L. paracasei subsp. paracasei NTU 101的可供鑒別特定菌株的 DNA序列及其DNA多型性圖譜，本案的發(fā)明人極力加以研宄發(fā)明，終于研發(fā)完成本發(fā)明的一 種NTU 101乳酸菌株及其引物組。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011] 在下文中給出關(guān)于本發(fā)明的簡要概述，以便提供關(guān)于本發(fā)明的某些方面的基本理 解。應(yīng)當(dāng)理解，這個(gè)概述并不是關(guān)于本發(fā)明的窮舉性概述。它并不是意圖確定本發(fā)明的關(guān) 鍵或重要部分，也不是意圖限定本發(fā)明的范圍。其目的僅僅是以簡化的形式給出某些概念， 以此作為稍后論述的更詳細(xì)描述的前序。
[0012] 本發(fā)明的主要目的，在于提供關(guān)于L. paracasei subsp. paracasei NTU 101的一 種乳酸菌株及其引物組。
[0013] 因此，為了達(dá)成上述本發(fā)明的主要目的，本案的發(fā)明人提出一種乳酸菌株，為 Lactobacillus paracasei subsp. paracasei NTU 101 (副干酪乳桿菌副干酪亞種），且 其系寄存于德國微生物菌種保藏中心，寄存編號(hào)為DSM 28047,其中該Lactobacillus paracasei subsp. paracasei NTU 101具有SEQ ID NO: 1的一核昔酸序列D前述的該核昔 酸序列可通過逢機(jī)增殖多型性DNA(Random Amplification of Polymorphic DNA，RAPD)以 及聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR)的技術(shù)進(jìn)而增幅多條引物增幅而 得。并且，該多條引物系包括具有SEQ ID N0:2的一核苷酸片段與具有SEQ ID N0:3的一 核苷酸片段。
[0014] 進(jìn)一步地，通過將該Lactobacillus paracasei subsp. paracasei NTU 101 與一 碳源置入一培養(yǎng)基之中，并經(jīng)過至少24小時(shí)的培養(yǎng)，該Lactobacillus paracasei subsp. paracasei NTU 101 會(huì)產(chǎn)生乳酸。
[0015] 進(jìn)一步地，該碳源為下列任一種：葡萄糖、半乳糖、D-核糖、木糖、果糖、α -乳糖、 麥芽糖、蔗糖、海藻糖、棉子糖、肌醇、山梨糖醇、D-甘露糖醇、檸檬酸、糊精、淀粉、以及糖蜜。
[0016] 進(jìn)一步地，通過將該 Lactobacillus paracasei subsp. paracasei NTU 101 與一 氮源置入一培養(yǎng)基之中，并經(jīng)過至少24小時(shí)的培養(yǎng)，該Lactobacillus paracasei subsp. paracasei NTU 101 會(huì)產(chǎn)生乳酸。
[0017] 進(jìn)一步地，該氮源為下列任一種：酵母萃取物、牛肉膏、蛋白胨、大豆胨、胰蛋白、玉 米漿、酪蛋白、尿素、檸檬酸銨、以及硫酸銨。
[0018] 并且，為了達(dá)成上述本發(fā)明的主要目的，本發(fā)明提出一種用以鑒別前述的 Lactobacillus paracasei subsp. paracasei NTU 101 乳酸菌株的引物組，該引物組為： (1)A3-5F3CGCCGAACGCGACTTACATC(SEQ ID N0:4);或（2)A3-5R3GGCAAATTTAAACTTGCCTTC AACG(SEQ ID N0:4)。其中，通過逢機(jī)增殖多型性DNA以及聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的技術(shù)可將該 A3-5F3引物增幅制成具有SEQ ID NO: 1的該核苷酸序列。
[0019] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：
[0020] 本發(fā)明使得相關(guān)技術(shù)人員于L. paracasei subsp. paracasei NTU 101的菌株鑒別 上可以有所依據(jù)；并且，進(jìn)一步地，相關(guān)技術(shù)人員還可通過DNA分子識(shí)別標(biāo)記來快速地鑒定 NTU 101菌株，而不需要培養(yǎng)分離菌株或者培養(yǎng)活菌。
【附圖說明】
[0021] 為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn) 有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本 發(fā)明的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)性的前提下，還可 以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。
[0022] 圖1為引物組合A、J與L的RAPD多型性圖譜的影像圖；
[0023] 圖2A為一引物組A與casei group乳酸桿菌的RAPD多型性圖譜的比對(duì)分析的影 像圖；
[0024] 圖2B為又一引物組A與casei group乳酸桿菌的RAPD多型性圖譜的比對(duì)分析的 影像圖；
[0025] 圖2C為再一引物組A與casei group乳酸桿菌的RAPD多型性圖譜的比對(duì)分析的 影像圖；
[0026] 圖3A為一引物組L與casei group乳酸桿菌的RAPD多型性圖譜的比對(duì)分析的影 像圖；
[0027] 圖3B為又一引物組L與casei group乳酸桿菌的RAPD多型性圖譜的比對(duì)分析的 影像圖；