人copb2基因的用途及其相關(guān)藥物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，更具體地涉及人C0PB2基因的用途及其相關(guān)藥物。
【背景技術(shù)】
[0002] 核糖核酸干擾（RNA interference, RNAi)現(xiàn)象是指當(dāng)與內(nèi)源性mRNA編碼區(qū)某 段序列同源的雙鏈RNA (dsRNA)導(dǎo)入細胞后，該mRNA發(fā)生特異性降解，而導(dǎo)致該基因 表達的沉默。研究表明，長度為21-23nt的雙鏈RNA能夠在轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后水平特異性 的引起 RNAi (Tuschl T, Zamore PD,Sharp PA, Bartel DP. RNAi:double-stranded RNA directs the ATP-dependent cleavage of mRNA at2Ito23nucleotide intervals. Cell2000;101:25-33.)。腫瘤是威脅人類健康的主要疾病。腫瘤患者雖經(jīng)化療、放療和綜 合治療，但五年生存率仍很低，如能對腫瘤發(fā)病和進展有關(guān)的基因進行干預(yù)，將能為腫瘤的 治療開辟新途徑。近年來，RNAi已成為腫瘤的基因治療的有效策略。利用RNAi技術(shù)可以 抑制原癌基因、突變的抑癌基因、細胞周期相關(guān)基因、抗凋亡相關(guān)基因等的表達來抑制腫瘤 的發(fā)生和發(fā)展（Uprichard, Susan L. The therapeutic potential of RNA interference. FEBS Letters2005;579:5996-6007. )〇
[0003] C0PB2 (coatomer protein complex, subunit beta2)是一種衣被蛋白復(fù)合體，亞 基β2(β原初），是一種蛋白轉(zhuǎn)運蛋白，主要分布在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基堆疊、膜、COPI膜泡衣 被，參與細胞內(nèi)蛋白運輸、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)商爾基I旲泡介導(dǎo)運輸、退行I旲泡介導(dǎo)運輸，商爾基內(nèi)質(zhì) 網(wǎng)、內(nèi)商爾基I旲泡介導(dǎo)運輸?shù)取?br>[0004] 有研究發(fā)現(xiàn)，C0PB2在多種腫瘤組織呈現(xiàn)高表達。Erdogan等人發(fā)現(xiàn)在肺 腺癌中，C0PB2基因呈現(xiàn)高表達，在肺癌侵襲過程中發(fā)揮了一定的作用，Meta-分析 發(fā)現(xiàn)在乳腺癌、宮頸癌、前列腺癌和胰腺癌以及腦膠瘤的樣本中與PKCiota的表達有 密切的關(guān)系。（Erdogan E, Klee EW, Thompson EA, Fields AP.，Meta-analysis of oncogenic protein kinase Ciota signaling in lung adenocarcinoma. Clin Cancer Res. 2009Marl;15(5) :1527-33)。Sudo等人發(fā)現(xiàn)，在間皮瘤細胞中，敲減Copb2基因的表 達后，能明顯抑制細胞增殖，有一定的抗凋亡作用。（Sudo H, Tsuji AB, Sugyo A, Kohda M, Sogawa C, Yoshida C, Harada YN, Hino 0, Saga T. Knockdown of COPA, identified by loss-〇f-function screen, induces apoptosis and suppresses tumor growth in mesothelioma mouse model. Genomics. 2010Apr;95(4) :210-6.)，基于以上研究，推測其可 能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有一定的聯(lián)系。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于公開與人 COPB2 (coatomer protein complex, subunit beta2) 基因相關(guān)的治療方法及藥物，以RNA干擾（RNAi)為手段研究C0PB2基因在腫瘤細胞的存活 和凋亡過程中的作用。
[0006] 本發(fā)明第一方面，以RNA干擾為手段，研究了 C0PB2基因在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中的作 用，公開了一種抑制或降低腫瘤細胞生長、增殖、分化和/或存活的方法，該方法包括：向腫 瘤細胞施用一種能夠特異性抑制C0PB2基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯，或能夠特異性抑制eIF5B蛋白 的表達或活性的分子，以此來抑制腫瘤細胞的生長、增殖、分化和/或存活。
[0007] 所述腫瘤細胞選自其生長與C0PB2蛋白的表達或活性相關(guān)的腫瘤細胞。較優(yōu)的， 所述腫瘤細胞選自肺癌、結(jié)腸癌之任一。
[0008] 所述抑制或降低腫瘤細胞生長、增殖、分化和/或存活的方法中，所述分子的施用 量為足夠降低C0PB2基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯，或者足夠降低C0PB2蛋白的表達或活性的劑量。進 一步的，所述C0PB2基因的表達至少被降低50%、80%、90%、95%或99%。
[0009] 所述分子可選自但不限于：核酸分子、碳水化合物、脂類、小分子化學(xué)藥、抗體藥、 多肽、蛋白或干擾慢病毒。
[0010] 所述核酸包括但不限于：反義寡核苷酸、雙鏈RNA (dsRNA)、核酶、核糖核酸內(nèi)切酶 ΠΙ制備的小干擾RNA (esiRNA)或者短發(fā)夾RNA (shRNA)。
[0011] 所述雙鏈RNA、核酶、esiRNA或者ShRNA含有C0PB2基因的啟動子序列或C0PB2基 因的信息序列。
[0012] 進一步的，所述雙鏈RNA為小干擾RNA(SiRNA)。所述小干擾RNA包含第一鏈和第 二鏈，所述第一鏈和所述第二鏈互補共同形成RNA二聚體，并且所述第一鏈的序列與C0PB2 基因中15-27個連續(xù)的核苷酸序列基本相同。所述小分子干擾RNA能特異性結(jié)合靶序列所 編碼的mRNA片段，并特異性沉默人C0PB2基因的表達。
[0013] 進一步的，所述小干擾RNA的第一鏈序列與C0PB2基因中的靶序列基本相同。較 優(yōu)的，所述C0PB2基因中的靶序列含有SEQ ID NO: 1-10中之任一序列。
[0014] 所述C0PB2基因中的靶序列即為所述小分子干擾RNA特異性沉默C0PB2基因表達 時，與所述的小分子干擾RNA互補結(jié)合的mRNA片段所對應(yīng)的C0PB2基因中的片段。
[0015] 較佳的，所述C0PB2基因來源于人。
[0016] 本發(fā)明第一方面還公開了一種分離的人C0PB2基因在制備或篩選腫瘤治療藥物， 或者在制備腫瘤診斷藥物中的用途。
[0017] 進一步的，所述腫瘤選自肺癌或結(jié)腸癌之任一。
[0018] 所述將分離的C0PB2基因用于制備或篩選腫瘤治療藥物包括兩方面的內(nèi)容：其 一，將C0PB2基因作為藥物或制劑針對腫瘤細胞的作用靶標(biāo)應(yīng)用于制備腫瘤治療藥物或制 劑 ;其二，將C0PB2基因作為藥物或制劑針對腫瘤細胞的作用靶標(biāo)應(yīng)用于篩選腫瘤治療藥 物或制劑。
[0019] 所述將C0PB2基因作為藥物或制劑針對腫瘤細胞的作用靶標(biāo)應(yīng)用于制備腫瘤治 療藥物或制劑具體是指：將C0PB2基因作為RNA干擾作用的靶標(biāo)，來研制針對腫瘤細胞的藥 物或制劑，從而能降低腫瘤細胞內(nèi)C0PB2基因的表達水平。
[0020] 所述將C0PB2基因作為藥物或制劑針對腫瘤細胞的作用靶標(biāo)應(yīng)用于篩選腫瘤治 療藥物或制劑具體是指：C0PB2基因作為作用對象，對藥物或制劑進行篩選，以找到可以抑 制或促進人C0PB2基因表達的藥物作為腫瘤治療備選藥物。如本發(fā)明所述的C0PB2基因小 分子干擾RNA (SiRNA)即是以人C0PB2基因為作用對象篩選獲得的，可用作具有抑制腫瘤 細胞增殖作用的藥物。除此之外，諸如抗體藥物，小分子藥物等也可將C0PB2基因及其蛋白 作為作用對象。
[0021] 所述將C0PB2基因用于制備腫瘤診斷藥物，是指將C0PB2基因表達產(chǎn)物作為一項 腫瘤診斷指標(biāo)應(yīng)用于腫瘤診斷藥物的制備。
[0022] 所述腫瘤治療藥物為能夠特異性抑制C0PB2基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯，或能夠特異性抑 制C0PB2蛋白的表達或活性的分子，從而降低腫瘤細胞中C0PB2基因的表達水平，達到抑制 腫瘤細胞的增殖、生長、分化和/或存活的目的。
[0023] 所述通過分離的C0PB2基因制備或篩選獲得的腫瘤治療藥物或者腫瘤診斷藥物 包括但不限于：核酸分子、碳水化合物、脂類、小分子化學(xué)藥、抗體藥、多肽、蛋白或干擾慢病 毒。
[0024] 所述核酸包括但不限于：反義寡核苷酸、雙鏈RNA (dsRNA)、核酶、核糖核酸內(nèi)切酶 ΠΙ制備的小干擾RNA (esiRNA)或者短發(fā)夾RNA (shRNA)。
[0025] 所述腫瘤治療藥物的施用量為足夠降低人C0PB2基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯，或者足夠降 低人C0PB2蛋白的表達或活性的劑量。以使人C0PB2基因的表達至少被降低50%、80%、90%、 95% 或 99%。
[0026] 采用前述腫瘤治療藥物治療腫瘤的方法，主要是通過降低人C0PB2基因的表達水 平抑制腫瘤細胞的增殖來達到治療的目的。具體的，治療時，將能有效降低人C0PB2基因表 達水平的物質(zhì)給藥于患者。
[0027] 本發(fā)明第二方面公開了一種降低腫瘤細胞中C0PB2基因表達的分離的核酸分子， 所述核酸分子包含：
[0028] a)雙鏈RNA，所述雙鏈RNA中含有能夠在嚴(yán)緊條件下與C0PB2基因雜交的核苷酸 序列；或者
[0029] b) shRNA，所述shRNA中含有能夠在嚴(yán)緊條件下與C0PB2基因雜交的核苷酸序列。
[0030] 進一步的，所述雙鏈RNA包含第一鏈和第二鏈，所述第一鏈和所述第二鏈互補共 同形成RNA二聚體，并且所述第一鏈的序列與C0PB2基因中15-27個連續(xù)的核苷酸序列基 本相同