LC追蹤反應(yīng)進(jìn)度。粗產(chǎn)品由氫溴酸中和后由NaBr 的飽和溶液洗滌至中性，二氯甲烷萃取，硫酸鈉干燥有機(jī)層后旋蒸。采用柱層析（200-300 目）分離法對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行分離，洗脫劑為甲醇。收集綠色組分，蒸干溶劑后得到式一所示化合 物 33mg，收率：30%。
[0050] 化合物式一的 1H NMR(500MHz, CDCl3-D1) δ (ppm) : 6. 76 (s, 2H), 7. 20-7. 90 (m, 32H ),8. 35 (d, 2H), 12. 75 (s, 2H). LC-MS (API-ES) :m/zC6〇H38BF2N308S 4Calcdll05. 1603, found [ΜΗ] 1104. 1529.
[0051]
[0052] 制備式二化合物：
[0053] 在氦氣保護(hù)下，取連有三苯基膦基團(tuán)的突光團(tuán)（84. 6mg，0. lmmol)及連硫鄰苯二 甲酸（33. 7mg，0. llmmol)、DMAP (12. 2mg，0. lmmol)、EDCI (9. 6mg，0.05mmol)于盛有 20ml 干 燥的二氯甲烷的50ml燒瓶中，常溫下攪拌24h，TLC追蹤反應(yīng)進(jìn)度。粗產(chǎn)品由氫溴酸中和 后，用NaBr的飽和溶液洗滌至中性，二氯甲烷萃取，硫酸鈉干燥有機(jī)層后旋蒸。所得固體 用二氯甲烷溶解后，用硅膠柱色譜（200-300目）分離。洗脫劑為乙酸乙酯和甲醇梯度洗脫 (2:1-0:1/v/v)，收集綠色組分，蒸干溶劑后得到式二所示化合物27. 2mg,收率：24%。
[0054] 式二化合物的 1H NMR(500MHz, CDCl3-D1) δ (ppm) : L 32-1. 57 (m, 6H)，4. 07 (t, 2H), 6. 60 (s, 2H), 6. 99-7. 85 (m, 39H), 8. 41 (s, 2H), 12. 73 (s, 1H). LC-MS (API-ES) :m/z C68H52BF2N3 05PS2+Calcdll34. 3142, found[M+] 1134. 3141.
[0055]
[0056] 制備式三化合物：
[0057] 取已制備的連有線粒體定位基團(tuán)的突光團(tuán)（84. 6mg，0.1 mmol)及連硫鄰苯二甲酸 (33. 7mg, 0. 11mmol)、4_ 二甲氛基批陡 DMAP (12. 2mg，0· Immol)、1-乙基-(3_ 二甲基氛基丙 基）碳酰二亞胺鹽酸鹽EDCI (9. 6mg，0. 05mmol)溶于盛有20ml干燥的二氯甲烷的50ml燒 瓶中，常溫條件下攪拌24h，TLC追蹤反應(yīng)進(jìn)度。粗產(chǎn)品由氫溴酸中和后由NaBr的飽和溶 液洗滌至中性，二氯甲烷萃取，硫酸鈉干燥有機(jī)層后旋蒸。采用柱層析分離法對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行分 離，洗脫劑為乙酸乙酯和甲醇梯度洗脫（2:1-0:l/ V/v)。收集綠色組分，蒸干溶劑后得到式 三所示化合物24. 5mg，收率：26%。
[0058] 式三化合物的 1H NMR (500MHz, CDCl3-D1) δ (ppm) : L 82 (m, 2H)，2. 34-2. 45 (m, 6H ),3. 64 (t, 4H), 4. 05 (t, 2H), 6. 70 (s, 2H), 6. 99-7. 93 (m, 24H), 8. 50 (s, 2H), 12. 73 (s, 1H). LC-MS(API-ES) :m/z C53H43BF2N4O6S 2Calcd944. 2685, found [M+H]+945. 2759.
[0059]
[0060] 另外，通式I所示的其它化合物按照上述的記載制備獲得。
[0061] 現(xiàn)以式二所指化合物為例說(shuō)明測(cè)定過(guò)程，以下實(shí)施例中涉及到的探針化合物均為 式二所指化合物：
[0062] 實(shí)施例2
[0063] 將制備所得式二化合物作為探針應(yīng)用于水體系、模擬生理環(huán)境和細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行對(duì) HNO的檢測(cè)，模擬生理?xiàng)l件，以下各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)均在pH = 7. 4條件下進(jìn)行（HEPES緩沖溶液，濃度 為40mM)，探針濃度采用2 μ M。
[0064] 上述制備所得式二化合物對(duì)H2S的光譜響應(yīng)；于IOml比色管中加入2 μ M式二化 合物，再加入40mM HEPES，然后加入ΙΟμΜ H2S，超純水定容到10ml，搖勻溶液平衡IOmin 后，將上述工作液加入熒光皿中測(cè)定熒光光譜。熒光光譜變化如圖1所示。由圖1所示該 化合物可用于實(shí)現(xiàn)生物體內(nèi)的H2S檢測(cè)。同時(shí)，本發(fā)明實(shí)施例提供的探針與硫化氫反應(yīng)后 產(chǎn)物結(jié)構(gòu)如下；
[0065]
[0066] 實(shí)施例3
[0067] 式二化合物對(duì)硫化氫的選擇性
[0068] 測(cè)試液pH采用HEPES緩沖溶液控制。取多個(gè)IOml比色管，并在每個(gè)IOml比色管 中加入2 μ M式二化合物，再加入HEPES緩沖液，然后分別加入如圖2所示，待測(cè)物依次為： 硫化氫、谷胱甘肽、半胱氨酸、硫代硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、維生素 C、硫辛酸、環(huán)氧硫蛋白、金屬 硫蛋白、維生素 Ε、尿酸、組氨酸和酪氨酸。最后用超純水定容到10ml。搖勻溶液，25°C下平 衡IOmin后，將各個(gè)比色管中工作液分別倒入到熒光皿中測(cè)定熒光光譜。式二化合物對(duì)H 2S 的選擇性如圖2所示。并由圖可知式二化合物對(duì)硫化氫具有很好的選擇性，與H2S作用后， 式二化合物對(duì)應(yīng)的熒光增強(qiáng)。
[0069] 以上內(nèi)容是結(jié)合具體的優(yōu)選實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明所作的進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，不能認(rèn)定 本發(fā)明的具體實(shí)施只局限于這些說(shuō)明。對(duì)于本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在 不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干簡(jiǎn)單推演或替換，都應(yīng)當(dāng)視為屬于本發(fā)明的 保護(hù)范圍。作為熒光染料是本發(fā)明新化合物的一種用途，不能認(rèn)定本發(fā)明的化合物僅用于 熒光染料，對(duì)于本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在基于本發(fā)明化合物用作熒光 染料的相同作用機(jī)理的考慮下，還可以做出若干簡(jiǎn)單推理，得出本發(fā)明的化合物的其他應(yīng) 用用途，都應(yīng)當(dāng)視為屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種氟硼吡咯類衍生熒光化合物，其特征在于如通式I所示， 通式I中：札為連硫鄰苯二甲酸、連硒鄰苯二甲酸或連碲鄰苯二甲酸基團(tuán)； R2為連硫鄰苯二甲酸、連硒鄰苯二甲酸、連碲鄰苯二甲酸基團(tuán)、丁基三苯基鱗.基團(tuán)、 N-丙基嗎啉基團(tuán)或Q25的烷基鏈； X為H或鹵素； Y為N或C; Z為N或0。2. 按權(quán)利要求1所述的氟硼吡咯類衍生熒光化合物，其特征在于：所述通式I中札為 連硫鄰苯二甲酸；R2為丁基三苯基鎖基團(tuán)或N-丙基嗎啉基團(tuán)；X為H;Y為N;Z為0。3. -種權(quán)利要求1所述的氟硼吡咯類化合物的應(yīng)用，其特征在于：以所述通式I所示 的氟硼吡咯類化合物作為硫化氫的熒光探針。4. 一種熒光探針，其特征在于： 熒光探針為通式I所示的以（B0DIPY)染料作為熒光母體，并在母體上引入對(duì)具備線 粒體、溶酶體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位功能團(tuán)的季磷鹽、嗎啉、q25烷基碳鏈、連硫鄰苯二甲酸、連硒鄰 苯二甲酸或連碲鄰苯二甲酸基團(tuán)。5. 按權(quán)利要求4所述的熒光探針，其特征在于：所述熒光探針用于定性/定量的檢測(cè) 生理環(huán)境下、細(xì)胞或生物體內(nèi)的硫化氫。
【專利摘要】本發(fā)明涉及用于檢測(cè)硫化氫(H2S)的熒光探針，具體的說(shuō)是一種氟硼吡咯類衍生熒光化合物及其應(yīng)用。氟硼吡咯類衍生熒光化合物如通式Ⅰ所示，并以所述氟硼吡咯類化合物作為H2S的熒光探針。本發(fā)明H2S熒光探針的這類化合物，在H2S存在下對(duì)應(yīng)的熒光強(qiáng)度發(fā)生變化，可用于H2S的檢測(cè)，并可大大降低外部檢測(cè)條件的干擾，提高檢測(cè)精度。這類化合物作為熒光探針可用于細(xì)胞內(nèi)外H2S的檢測(cè)，不僅對(duì)闡明H2S對(duì)血管新生產(chǎn)生具有重要的科學(xué)意義，而且為H2S在不同濃度下對(duì)腫瘤凋亡和轉(zhuǎn)移奠定理論基礎(chǔ)。
【IPC分類】C07F5/02, C09K11/06, G01N21/64
【公開號(hào)】CN105017297
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410173946
【發(fā)明人】于法標(biāo), 陳令新, 高敏, 景曉彤, 陳浩
【申請(qǐng)人】中國(guó)科學(xué)院煙臺(tái)海岸帶研究所
【公開日】2015年11月4日
【申請(qǐng)日】2014年4月28日