一種長枝木霉菌及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種對草奪炭痕病具有高枯抗生物的新木 霉困困株。
【背景技術(shù)】
[0002] 草奪炭痕病是草奪苗期的主要病害之一，是一種普遍性的真菌病害。草奪炭痕病 主要發(fā)生在育苗期和定植初期，主要危害甸旬莖、葉柄、葉片、巧葉、花瓣、花彎和果實(shí)。在夏 季高溫多雨氣候條件下，炭痕病發(fā)病嚴(yán)重，造成大量死苗，成苗率低，是目前草奪育苗中的 世界性難題，嚴(yán)重影響了草奪種植的經(jīng)濟(jì)效益。
[0003] 此病由真菌半知菌亞口毛盤抱屬草奪炭痕菌Colletotrichum化agariae化ooks 侵染所致，其有性階段為子囊菌亞口小叢殼屬的Glomerella化agariae。病菌W分生抱子 在發(fā)病組織或落地病殘體中越冬。在田間分生抱子借助雨水及帶菌的操作工具、病葉、病果 等進(jìn)行傳播。其中，病菌侵染最適氣溫為28-32C，相對濕度在90%W上；此外±壤會酸化、 板結(jié)，其本身的團(tuán)粒結(jié)構(gòu)被破壞，從而使±壤營養(yǎng)平衡嚴(yán)重失調(diào)，±壤自身失去了自我調(diào)節(jié) 及對抗病蟲害的能力，進(jìn)一步引發(fā)了草奪炭痕病的發(fā)生。
[0004] 對于該病，常規(guī)手段是采用噴灑和灌根來防治。目前用于防治草奪炭痕病 的化學(xué)藥物主要有嚼菌醋（azo巧strobin)、離菌醋（kresoxim-methyl)、苯離甲環(huán)哇 (difenoconazole)等。例如：使用25%嚼菌醋1500倍液巧5%百菌清800倍液，25%化哇 離菌醋乳油1500倍液+有機(jī)娃3000倍液噴施。
[0005]長期W來，由于多頻次、多劑量施用化學(xué)藥劑，造成病原菌對常用化學(xué)藥劑產(chǎn)生了 不同程度的抗（耐）藥性，生產(chǎn)上屢屢出現(xiàn)防治失敗的事例，如在治療草奪炭痕病農(nóng)藥使用 過程中常存在用量大的問題，用量少了達(dá)不到防治效果，長期大用量使用農(nóng)藥會對草奪生 長環(huán)境產(chǎn)生破壞影響。雖然在短時間內(nèi)可W取得很好的防止草奪炭痕病的效果，但長久來 看將農(nóng)藥作為防治炭痕病方法將會被淘汰。
[0006] 現(xiàn)有技術(shù)中針對上述的問題也做了改進(jìn)，如專利CN103719152A中公開了一種采 用殼聚糖混合物用W防止草奪炭痕病，其中具體公開了采用殼聚糖粉末10-30 %，竹炭粉末 30-60%，余量為牡頓殼粉末。該專利采用低分子殼聚糖的抗菌性等性能作用，并通過調(diào)節(jié) ±壤的酸堿度從而減少病害的發(fā)生。但是由于草奪炭痕病的發(fā)生是由多方面共同作用而形 成的，只對其中幾個方面進(jìn)行調(diào)整，雖可W緩和炭痕病，但是無法從根源上解決草奪炭痕病 的問題。
[0007] 因此，有必要對不會產(chǎn)生耐藥性、藥效持久，并且可W從根源上解決草奪炭痕病的 問題技術(shù)進(jìn)行進(jìn)一步研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明旨在提供一種產(chǎn)抱量多、可高效防治草奪炭痕病的木霉菌株，從而解決目 前防治草奪炭痕病的化學(xué)農(nóng)藥量多且農(nóng)藥對環(huán)境產(chǎn)生不良影響的問題。
[0009]本發(fā)明的第一方面提供了一種通過篩選而獲得的木霉菌，其具體為長枝木霉菌 (TrichodermaIongibranchiatum),所述長枝木霉菌已于2014年1月14日保藏于中國微生 物菌種保藏管理委員會普通微生物中必，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏編 號為CGMCCNo. 8723。
[0010] 優(yōu)選地，所述的長枝木霉菌包括SEQIDNO;1與SEQIDNO;2序列。
[0011] 本發(fā)明所述的長枝木霉菌具有W下性質(zhì)：
[0012] 所述長枝木霉菌的生抱子階段為半知菌n，絲抱綱，絲抱目，淡色抱科，木霉屬，其 有性態(tài)是屬于子囊菌口，子囊菌綱，肉座菌目，肉座菌科。
[0013] 1)本發(fā)明所述長枝木霉菌的微觀形態(tài)特性為：
[0014] 在PDA培養(yǎng)基上分生抱子為綠色、楠圓或細(xì)長楠圓形，光滑；
[0015] 厚垣抱子為亞球形或球形，間生厚垣抱子為其母細(xì)胞形狀；
[0016] 所述分生抱子梗包括發(fā)育強(qiáng)壯的中軸，在中軸上向頂端產(chǎn)生單生的瓶梗，并能隨 著單生的瓶梗離頂端的延伸，產(chǎn)生成對的、且長度逐漸增加的二次分枝；瓶梗直接著生在二 次分枝上；其中，所述瓶梗為單生，圓柱形，若為潤狀排列，則中間部分膨大或呈甸旬狀、直 或彎曲成鉤狀；所述瓶梗直接產(chǎn)生于二次分枝上。
[0017] 2)本發(fā)明所述長枝木霉菌的培養(yǎng)特性為：
[0018] 所述長枝木霉菌在PDA培養(yǎng)基中在3(TC-4(TC時24h內(nèi)形成分生抱子，其中， 在3(TC-35C時分生抱子的產(chǎn)量最大；若在培養(yǎng)瓶中加入培養(yǎng)液并接種抱子懸浮液，則在 32C環(huán)境下振蕩培養(yǎng)，可在5天后收獲大量的抱子。
[0019] 3)本發(fā)明所述長枝木霉菌的代謝特性：
[0020] 將所述長枝木霉菌接種到培養(yǎng)基中，經(jīng)過培養(yǎng)形成大量的分生抱子，得到如幾了 質(zhì)酶、葡聚糖酶等真菌細(xì)胞壁降解酶。
[0021] 在本發(fā)明一個較為優(yōu)選的實(shí)施例中，對所述長枝木霉菌進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育學(xué)鑒定：提 取本發(fā)明所述長枝木霉菌的DNA，W口S4和口S5為引物，擴(kuò)增rDNA的口S1-5. 8S-口S2區(qū) 序列，得到一序列段（ITS1-5. 8S-ITS2)，所述長枝木霉菌的ITS1-5. 8S-ITS2序列如SEQID NO;1所示；
[002引 將沈QIDNO;1序列通過NCBIGenBank建立的DNA序列數(shù)據(jù)庫中數(shù)據(jù)進(jìn)行比對， 發(fā)現(xiàn)本發(fā)明所述長枝木霉菌與長枝木霉（TrichodermaIongibranchiatum)相似度達(dá)到 100%。
[0023] 在本發(fā)明另一個較為優(yōu)選的實(shí)施例中，對所述長枝木霉菌進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育學(xué)鑒定： 提取本發(fā)明所述長枝木霉菌的DNA，WEf728和TeflaR為引物，擴(kuò)增Tefla序列得到的序 列段，所述Tefla序列如SEQIDNO;2中所示，通過NCBIGenBank建立的DNA序列數(shù)據(jù)庫 中數(shù)據(jù)進(jìn)行比對，所述Tefla序列與長枝木霉（TrichodermaIongibranchiatum)的相似度 達(dá)到100%。
[0024] 本發(fā)明的另一方面提供了一種上述長枝木霉菌的應(yīng)用，用于防治草奪炭痕病。
[00巧]本發(fā)明所述長枝木霉菌對病原菌主要通過枯抗作用、競爭作用、重寄生作用、誘導(dǎo) 抗性和促生作用來防治炭痕病的發(fā)生。
[0026] 其中，重寄生性是本發(fā)明所述長枝木霉菌對病原菌的主要作用方式，通過在本發(fā) 明所述長枝木霉菌自身產(chǎn)生的真菌細(xì)胞壁降解酶如幾了質(zhì)酶、葡聚糖酶等，所述的送些酶 可W溶解病原菌細(xì)胞壁并滲透進(jìn)入其細(xì)胞中形成大量的分枝和有性結(jié)構(gòu)，使病原真菌生長 受抑制而死亡，從而實(shí)現(xiàn)防治草奪炭痕病的效果。
[0027] 本發(fā)明的第H方面提供了一種可用于防治草奪炭痕病的制劑，所述制劑中包括上 述的長枝木霉菌。
[0028] 所述制劑的劑型可為水乳劑、乳油、水分散粉劑、懸浮劑、微乳劑、可溶粉劑、可濕 性粉劑、顆粒劑中的任意一種。
[002引所述的助劑可W選自填料、潤濕劑、分散劑、乳化劑、助懸劑、增稠劑、固著劑中的 一種或多種。
[0030] 填料可選自如高嶺±、娃藻±、滑石粉、白炭黑、輕質(zhì)碳酸巧或白陶±中的一種或 幾種。
[0031] 潤濕劑又稱滲透劑，所述潤濕劑可選用了基蔡礙酸鋼、十二烷基硫酸鋼、十二烷基 苯礙酸鋼、十二烷基苯礙酸巧、苯己帰基苯基聚氧己帰離、木質(zhì)素礙酸鹽、異丙基蔡礙酸鋼、 烷基芳基礙酸鋼等中的一種或多種。
[0032] 分散劑可選用磯酸醋、礙酸鹽類、烷基蔡礙酸鹽縮聚物、駿酸鹽高分子、聚駿酸鹽 高分子改性樹脂、烷基硫酸鹽、改性烷基礙酸鹽、烷基蔡礙酸縮聚物鋼鹽、蔡礙酸鹽（縮聚 物）類、蔡礙酸鹽甲醒縮合物、烷基酪聚氧己帰離、甲醒縮合物礙酸鹽、木質(zhì)素礙酸鹽、馬來 酸-丙帰酸共聚物鋼鹽、烷基礙基玻巧酸鹽等中的一種或是多種。
[0033] 乳化劑可選用十二烷基苯礙酸巧、H苯己基苯酪聚氧己帰離、烷基酪甲醒樹脂聚 氧己帰離、脂肪醇聚氧己帰離、烷基酪聚氧己帰離、藍(lán)麻油聚氧己帰離、壬基酪聚氧己帰離、 辛基酪聚氧己帰離、脂肪醇聚氧己帰聚氧丙帰離、脂肪醇聚氧己帰離改性物、脂肪胺聚氧己 帰離、烷基芳基聚氧己帰聚氧丙帰離、油酸聚氧己帰離、苯己基苯酪聚氧己帰離、壬基酪磯 酸醋等中的一種或多種。
[0034] 助懸劑可選用磯酸醋、礙酸鹽類、烷基蔡礙酸鹽縮聚物、駿酸鹽高分子、聚駿酸鹽 高分子改性樹脂、烷基硫酸鹽、改性烷基礙酸鹽、烷基蔡礙酸縮聚物鋼鹽、蔡礙酸鹽（縮聚 物）類、聚駿酸鹽高分子分散劑、多苯己帰苯離磯酸醋分散劑、蔡礙酸鹽甲醒縮合物、烷基 酪聚氧己帰離甲醒縮合物礙酸鹽、木質(zhì)素礙酸鹽、白炭黑、娃酸鎮(zhèn)鉛等中的一種或多種。
[0035] 增稠劑可選用黃原膠、聚己二醇4000、聚己二醇6000、阿拉伯樹膠、明膠、環(huán)氧大 豆油等中的一種或多種。
[0036]固著劑可選用如聚己帰醇、明膠或淀粉中的一種或幾種。
[0037] 本發(fā)明所述長枝木霉菌自身產(chǎn)生的真菌細(xì)胞壁降解酶如幾了質(zhì)酶、葡聚糖酶等， 送些酶可W溶解病原菌細(xì)胞壁并滲透進(jìn)入其細(xì)胞中形成大量的分枝和有性結(jié)構(gòu)，使病原真 菌生長受抑制而死亡，從而實(shí)現(xiàn)防治草奪炭痕病的效果。
[0038] 本發(fā)明所述長枝木霉菌可W高效抑制草奪炭痕病的病原真菌，減少草奪炭痕病的 發(fā)生，替代化學(xué)農(nóng)藥用W抑制草奪炭痕病，減少化學(xué)農(nóng)藥的使用對草奪產(chǎn)品與種植±壤的 危害，并提局早奪廣品的品質(zhì)。
【附圖說明】
[0039] 圖1為本發(fā)明