肺病癥和其他病癥的治療的制作方法
【專利說明】肺病癥和其他病癥的治療
[0001] 本申請要求于2013年5月10日提交的美國臨時申請?zhí)?1/822, 224的權(quán)益，該文 獻(xiàn)通過引用整體納入本文。
[0002] 政府支持的確認(rèn)
[0003] 本發(fā)明是通過在由美國國立衛(wèi)生研究院資助的基金號HL093196的政府支持來完 成的。政府在本發(fā)明中享有一些權(quán)利。
【背景技術(shù)】
[0004] 肺是依賴精細(xì)結(jié)構(gòu)的器官，例如用于重要的氣體交換功能的肺泡-毛細(xì)管界面， 但是肺常常暴露于所吸氣體中的毒素和刺激物。其還可因感染所產(chǎn)生的毒素和炎性產(chǎn)物以 及身體中其他部位的錯位而損傷。因此，肺會經(jīng)歷廣泛種類的疾病，許多疾病的發(fā)病機(jī)理尚 未完全知曉。這些疾病和病癥中的一些具有可用的有效治療；這些治療可包括施用類固醇、 其他消炎劑、小分子或治療性抗體。但是，對于一些疾病和病癥以及患有其他病癥的患者亞 群，所有可用的治療的功效都是有限的。在許多情況下最經(jīng)常施用的治療是皮質(zhì)類固醇施 用，這常常與明顯的不良反應(yīng)相關(guān)聯(lián)。
[0005] 肺纖維化是一種可由暴露于輻射、感染、炎性過程或自體免疫疾病所導(dǎo)致的肺病。 在其他情況下，其被稱為特發(fā)性肺纖維化（IPF)，起因未知。無論觸發(fā)損害是什么，結(jié)果都是 不可控的炎癥、免疫活性、肺損傷/修復(fù)以及損害肺的纖維化過程。在這些疾病中發(fā)生的肺 的瘢痕形成降低了肺將氧遞送至血液的能力，從而引起血氧不足。治療肺纖維化的主要目 的是減輕炎癥和損傷以及增強(qiáng)肺修復(fù)，并從而阻擋導(dǎo)致不可逆纖維化的異常過程。目前針 對肺纖維化的可用治療是非常有限的。
[0006] 慢性阻塞性肺病（C0PD)是日漸成為問題。患者存在可與支氣管炎或氣腫有關(guān)的 咳嗽、產(chǎn)生過量粘液以及呼吸困難的癥狀。雖然支氣管炎代表氣道的炎癥，但是氣腫是更 晚期的疾病，其代表作為炎性過程的部分而釋放的氧化劑和蛋白酶對肺實質(zhì)的破壞。C0PD 的發(fā)展最經(jīng)常歸因于多年的吸煙或暴露于環(huán)境毒素，但是該疾病甚至在戒煙后亦會繼續(xù)進(jìn) 展。C0PD中的病理生理學(xué)特征還有因 HDAC(組蛋白脫乙?；福┟富钚越档徒閷?dǎo)的"抗類 固醇性"。因此，最常使用的消炎藥物幾乎沒有效果，并且不能阻擋疾病的進(jìn)展。對于C0PD 唯一可用的治療是施用緩解癥狀的藥物。
[0007] 具有常常與C0PD的癥狀重疊的癥狀的肺病是哮喘。哮喘中的氣道炎癥的特征是 多種免疫系統(tǒng)細(xì)胞的活化。哮喘的病理學(xué)特征是一些細(xì)胞因子（主要是與適應(yīng)性免疫相關(guān) 的Th2型）的產(chǎn)生升高，以及組織嗜曙紅細(xì)胞增多和IgE產(chǎn)生升高。哮喘的一個診斷性特征 是氣道對支氣管收縮劑例如乙酰甲膽堿的過度應(yīng)答。對于哮喘的最有效治療仍然是皮質(zhì)激 素類，通常通過吸入來施用。還可使用支氣管擴(kuò)張劑，常常與皮質(zhì)激素類組合使用。然而， 一些患者表現(xiàn)出不對皮質(zhì)激素類應(yīng)答的"抗類固醇性"哮喘。
[0008] 囊性纖維化是影響上皮細(xì)胞的膜中的氯化物離子通道的遺傳性疾病。氯化物離子 運(yùn)輸?shù)氖?dǎo)致產(chǎn)生厚的粘性分泌物。肺中的粘液產(chǎn)生是所影響的許多分泌物之一。囊性 纖維化的突出特征是炎癥，所述炎癥僅部分地歸因于也是該疾病的一個特征的經(jīng)常感染。 該富嗜中性粒細(xì)胞的炎癥是逐漸喪失肺功能從而最終導(dǎo)致死亡的一種因素。涉及減緩肺功 能下降的治療是有限的。
[0009] ALI (急性肺損傷）和ARDS (急性呼吸窘迫綜合征）是可由寬范圍種類的對肺的損 傷（無論是內(nèi)在性的還是外來性的）導(dǎo)致的肺病。在急性期中，存在支氣管上皮細(xì)胞和肺 泡上皮細(xì)胞二者的脫落，以及裸露的基底膜上富蛋白透明膜的形成。這導(dǎo)致炎癥，伴有嗜中 性粒細(xì)胞附著于受損的毛細(xì)管內(nèi)皮并通過間質(zhì)組織迀移至空氣空間中。在空氣空間中，肺 泡巨噬細(xì)胞分泌促炎性細(xì)胞因子，所述促炎性細(xì)胞因子在局部起作用以刺激趨化性并活化 釋放氧化劑、蛋白酶、白細(xì)胞三烯和其他促炎性分子例如血小板活化因子的嗜中性粒細(xì)胞。 這些氧化劑和蛋白酶產(chǎn)生更多損傷，并繼續(xù)循環(huán)。沒有針對ALI/ARDS的批準(zhǔn)的藥物治療。
[0010] 缺血-再灌注損傷發(fā)生于當(dāng)血流返回已經(jīng)極度缺氧的器官時。缺血接著再灌注 是在器官移植中不可避免的，但是也伴隨著諸如心肌梗塞和中風(fēng)之類的病癥。所涉及的機(jī) 理是復(fù)雜的，但是常常涉及炎癥并且與活性氧的產(chǎn)生有關(guān)?；钚匝跏强蓳p壞許多細(xì)胞的組 分的強(qiáng)氧化劑。在遭受再灌注的損傷之前器官可僅承受有限時間的缺血。通過移植之前的 治療來延長該時間的嘗試所取得的成功仍然有限，并且移植后治療表現(xiàn)出甚至更低的可用 性。用于延長缺血容許時間的最有效的現(xiàn)有方法是通過降低收集與再移植之間的時間期間 的器官代謝速率。
[0011] 肺高血壓被定義為特別是在肺血管中的異常高血壓。其常常為限制肺血流或氧化 的病癥的繼發(fā)病癥，但是還可在不存在可辨認(rèn)的起因下發(fā)生。該發(fā)病機(jī)理的重要特征是血 管細(xì)胞的異常增殖以及適當(dāng)?shù)蛲龅氖?。?dāng)前的控制集中于血管擴(kuò)張劑和癥狀減輕策略， 但正在研究阻斷細(xì)胞增殖以及其他途徑的化合物。
[0012] 在美國，肺癌是癌癥死亡的最大導(dǎo)致因素，被診斷為患有肺癌的患者僅16%能存 活長達(dá)五年。據(jù)估計，所有肺癌的80%至90%是由香煙的煙導(dǎo)致的。和可誘導(dǎo)肺癌的其他 環(huán)境致癌物一樣，香煙的煙中的致癌物引起突變，從而導(dǎo)致所影響的細(xì)胞不受控地增殖，并 還使它們?nèi)肭终＝M織。治療是手術(shù)、輻射和化療，其選擇在一定程度上取決于所涉及的特 定癌癥類型，但是僅手術(shù)去除尚未擴(kuò)散的腫瘤提供了長期存活的任何希望。如不良的長期 存活統(tǒng)計指示，需要更好的治療。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0013] 本文公開的一個實施方案涉及一種化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，
[0014] 所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)：
[0015] X^L-X2
[0016] 其中L是包含烯酮的連接部分；并且
[0017] X1和X 2各自獨(dú)立地為任選取代的N-雜環(huán)。
[0018] 本文公開的另一個實施方案涉及一種化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，所述化 合物包含親水性巰基與烯酮的加合物，所述加合物包含至少兩個N-雜環(huán)。
[0019] 本文公開的另一實施方案涉及一種化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，所述化合 物具有以下結(jié)構(gòu)：
[0020]
[0021] 其中:二二二?表示單鍵或雙鍵；
[0022] 如果==二是雙鍵貝j A是CH，或者如果二二=.r是單鍵則A是CH(S-R5)，其中R5是 肽、氨基酸、氨基酸衍生物、任選取代的烷基、任選取代的烯基、任選取代的炔基、任選取代 的環(huán)烷基或任選取代的環(huán)烯基；并且
[0023] X1和X 2各自獨(dú)立地為任選取代的N-雜環(huán)；或者
[0025] 其中二;表示單鍵或雙鍵;
[0026] 如果f二是雙鍵則A是CH，或者如果--是單鍵則A是CH (S-R5)，其中R5是 肽、氨基酸、氨基酸衍生物、任選取代的烷基、任選取代的烯基、任選取代的炔基、任選取代 的環(huán)烷基或任選取代的環(huán)烯基；
[0027] X1和X 2各自獨(dú)立地為任選取代的N-雜環(huán)；并且
[0028] R1、R2和R3各自獨(dú)立地是C或N ;或
[0030] 其中-------表示單鍵或雙鍵；
[0031] 如果---rr是雙鍵則A是CH，或者如果是單鍵則A是CH (S-R5)，其中R5是 肽、氨基酸、氨基酸衍生物、任選取代的烷基、任選取代的烯基、任選取代的炔基、任選取代 的環(huán)烷基或任選取代的環(huán)烯基；
[0032] X1和X 2各自獨(dú)立地為任選取代的N-雜環(huán)；并且
[0033] R1是 C 或 N;或
[0035] 其中------表示單鍵或雙鍵；
[0036] 如果是雙鍵貝j A是CH，或者如果二是單鍵則A是CH (S-R5)，其中R5是 肽、氨基酸、氨基酸衍生物、任選取代的烷基、任選取代的烯基、任選取代的炔基、任選取代 的環(huán)烷基或任選取代的環(huán)烯基；
[0037] R1和R2各自獨(dú)立地是C或N ;并且
[0038] X1和X 2各自獨(dú)立地為任選取代的N-雜環(huán)。
[0039] 本文公開的還有包含本文公開的化合物以及至少一種藥學(xué)上可接受的賦形劑的 藥物組合物。
[0040] 還公開了一種治療受試者的肺病的方法，包括向有需要的受試者施用治療有效量 的本文公開的化合物或藥物組合物。
[0041] 還公開了一種用于治療受試者的缺血-再灌注病癥的方法，包括向有需要的受試 者施用治療有效量的本文公開的化合物或藥物組合物。
[0042] 本文還公開了一種抑制受試者的NF-κ B活性的方法，包括向有需要的受試者施 用抑制量的本文公開的化合物或藥物組合物。
[0043] 本文還公開了一種抑制受試者的肺成纖維細(xì)胞增殖的方法，包括向有需要的受試 者施用抑制量的本文公開的化合物或藥物組合物。
[0044] 本文還公開了一種抑制受試者的成肌纖維細(xì)胞分化的方法，包括向有需要的受試 者施用抑制量的本文公開的化合物或藥物組合物。
[0045] 本文還公開了一種抑制受試者的肺組織中的氧化劑的方法，包括向有需要的受試 者施用治療有效量的本文公開的化合物或藥物組合物。
[0046] 本文還公開了一種緩解或預(yù)防受試者的急性或慢性移植器官排斥的方法，包括向 有需要的受試者施用治療有效量的本文公開的化合物或藥物組合物。
[0047] 本文還公開了一種于通過上調(diào)轉(zhuǎn)錄因子Nrf2的活性來提高受試者的內(nèi)源抗氧化 活性的方法，包括向有需要的受試者施用治療有效量的本文公開的化合物或藥物組合物。 [0048] 本文還公開了一種用于抑制受試者的肺膠原沉積的方法，包括向有需要的受試者 施用治療有效量的本文公開的化合物或藥物組合物。
[0049] 本文還公開了一種用于降低肺癌細(xì)胞的增殖以及誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞的凋亡的方法，包 括使所述細(xì)胞與有效量的本文公開的化合物或藥物組合物接觸。
[0050] 本文還公開了一種用于增強(qiáng)肺泡巨噬細(xì)胞的吞噬能力的方法，包括使所述巨噬細(xì) 胞與有效量的本文公開的化合物或藥物組合物接觸。
[0051] 本文還公開了一種用于降低受試者對變應(yīng)原的炎性應(yīng)答的方法，包括向有需要的 受試者施用治療有效量的本文公開的化合物或藥物組合物。
[0052] 本文還公開了一種用于降低受試者對致炎劑、刺激劑或細(xì)胞毒性劑的炎性應(yīng)答的 方法，包括向有需要的受試者施用治療有效量的本文公開的化合物或藥物組合物。
[0053] 本文還公開了一種用于降低受試者由變應(yīng)原誘導(dǎo)的對支氣管收縮劑（例如，乙酰 甲膽堿）的過度應(yīng)答的方法，包括向有需要的受試者施用治療有效量的本文公開的化合物 或藥物組合物。
[0054] 本文還公開了一種用于降低受試者由變應(yīng)原誘導(dǎo)的氣道重構(gòu)的方法，包括向有需 要的受試者施用治療有效量的本文公開的化合物或藥物組合物。
[0055] 本文還公開了一種用于降低受試者由缺氧誘導(dǎo)的肺血管重構(gòu)的方法，包括向有需 要的受試者施用治療有效量的本文公開的化合物或藥物組合物。
[0056] 前述內(nèi)容將從以下通過引用附圖的詳細(xì)描述中變得更加顯而易見。
【附圖說明】
[0057] 圖1示出了 PB141的霧化。將PB141溶解于水或不同濃度的PBS中，使用微栗霧化 器（Buxco Research Systems, Wilmington, NC)以10L空氣/分鐘的流動來使該溶液氣霧 劑化。使用安德森多級撞擊取樣器（Andersen cascade impactor)測量氣霧劑液滴尺寸。 (A)PB141氣霧劑液滴的尺寸分布。（B)通過在兩個獨(dú)立實驗中在霧化期間收集樣品并由分 光光度計分析來測量30分鐘霧化時間期間PB141的濃度。
[0058] 圖2示出，PB141表現(xiàn)出抗氧化活性。PB141的抗氧化活性通過該化合物與預(yù)先形 成的2, 2'-聯(lián)氮雙（3-乙基苯并噻唑啉）-6-磺酸的自由單價陽離子（ABTS+)反應(yīng)的能力 來測定。數(shù)據(jù)代表兩個獨(dú)立實驗中的一個；η = 3 ;***相對于Troxol而言P〈0. 001。
[0059] 圖3示出，PB141表現(xiàn)出抗氧化活性。PB141的抗氧化活性通過鐵還原/抗氧化力 (FRAP)試驗來測定，其中該化合物與鐵-三吡啶基三嗪絡(luò)合物反應(yīng)。數(shù)據(jù)代表兩個獨(dú)立實 驗中的一個；η = 3 ;***相對于Troxol而言Ρ〈0· 001。
[0060] 圖4示出，ΡΒ141從體循環(huán)快速清除。在肺遞送ΡΒ1417天后，從眼眶后血管叢的 間隔處收集血液，并分離血漿。通過等度HPLC來測定血漿ΡΒ141。
[0061] 圖5示出在長期高劑量的肺遞送ΡΒ141后不存在腎、肝或肺的毒性。通過霧化以 25mg/kg或250mg/kg的劑量將ΡΒ141遞送至小鼠，持續(xù)多至30天。（Α)切除肺，切片并進(jìn) 行組織學(xué)檢測，以顯示炎癥或損傷。（B)潛在的腎和肝損傷由肌酸酐、AST和ALT的血清水 平評估。（C)示出，霧化的PB141以濃度依賴的方式抑制LPS誘導(dǎo)的NF-κ B的上調(diào)。通過 氣管內(nèi)施用LPS來誘導(dǎo)小鼠急性肺損傷。三十分鐘后，通過霧化將PBS或多種濃度的PB141 遞送至籠空氣（cage air)中。在處死后，從肺分離核蛋白，并將其用于測定促炎性轉(zhuǎn)錄因 子NF-KB的p65亞基的DNA結(jié)合活性。
[0062] 圖6示出，體外PB141處理上調(diào)Nrf2并抑制NF-κ B活性。用多種濃度的PB141處 理BEAS-2B細(xì)胞24小時，然后（A)測量Nrf2活性，或（C)通過蛋白免疫印跡法測定核Nrf2 濃度。（B)在另一些實驗中，用多種濃度的PB141預(yù)處理細(xì)胞1小時，然后用LPS (500ng/ml) 處理6小時。然后分離細(xì)胞，并測量NF- κ B的活性。
[0063] 圖7示出，PB141抑制肺成纖維細(xì)胞增殖。將頂R-90細(xì)胞培養(yǎng)于包含10%熱失活 的胎牛血清、青霉素和鏈霉素（l〇〇IU/ml)的杜氏改良伊格爾氏培養(yǎng)基（DMEM)中。從單層 培養(yǎng)物中除去血清，保持24小時，并且如所指示地用不同濃度的PB141處理不同時間。然 后在第24小時、48小時和72小時處進(jìn)行細(xì)胞數(shù)量計數(shù)。數(shù)據(jù)代表兩個獨(dú)立實驗中的一個； η = 3〇
[0064] 圖8示出，ΡΒ141抑制TGF-β誘導(dǎo)的成肌纖維細(xì)胞分化。將頂R-90細(xì)胞培養(yǎng) 于包含10%熱失活的胎牛血清、青霉素和鏈霉素（100IU/ml)的杜氏改良伊格爾氏培養(yǎng)基 (DMEM)中。從單層培養(yǎng)物中除去血清，保持Μ小時，用0· 5 μ Μ PB141或用媒介物（鹽水） 預(yù)處理1小時，然后暴露于2ng/ml TGF-β，保持24小時。（Α)對α-平滑肌肌動蛋白的蛋 白免疫印跡分析。（Β)針對各種病況的量化值。***相對于Veh而言p〈0.001。（C)治療后 針對α-SMA的免疫熒光顯微鏡。印跡和圖像代表兩個獨(dú)立實驗。
[0065] 圖9示出，霧化的PB141降低博來霉素誘導(dǎo)的肺纖維化。通過氣管內(nèi)注射硫酸博來 霉素 （BLM ;0. 05單位）來誘導(dǎo)肺纖維化，然后霧化PB141 (25mg/kg)或媒介物（鹽水），并通 過微栗霧化器將其遞送至籠空氣中。21天后得到肺樣品。（A)肺羥基脯氨酸含量。（B)肺 纖維蛋白溶解。（C)肺膠原含量。（D)肺TGF-β含量。數(shù)據(jù)代表兩個獨(dú)立實驗中的一個， η = 5 至 7 只小鼠每組；**ρ〈0· 01，***ρ〈0· 001。
[0066] 圖10示出，霧化的ΡΒ141降低LPS誘導(dǎo)的肺炎癥和氧化性損傷。通過氣管內(nèi)注射 LPS (50 μ g)來誘導(dǎo)ALI，30分鐘后霧化PB141 (25mg/kg)或媒介物（鹽水），并通過微栗霧 化器將其遞送至籠空氣中。再過5. 5小時后，得到BAL流體、血漿和肺樣品。BAL流體中的 (A)總細(xì)胞和（B)嗜中性粒細(xì)胞數(shù)量；(C)肺組織和（D)BAL流體中的髓過氧化物酶活性； (E)對BAL流體染色后的顯微鏡檢驗；(F)H202產(chǎn)生；(G)硝酸鹽濃度，以及⑶肺中的丙二 醛/蛋白比率。（I)MIP-2、（J)IL-6、（K)TNF-a和（L)KC的血漿水平。數(shù)據(jù)代表兩個獨(dú)立 實驗中的一個，η = 5至8只小鼠每組；***p〈0. 001。
[0067] 圖11示出，霧化的PB141降低LPS誘導(dǎo)的肺損傷。通過氣管內(nèi)注射LPS(50yg) 來誘導(dǎo)ALI，30分鐘后霧化PB141 (25mg/kg)或媒介物（鹽水），并通過微栗霧化器將其遞送 至籠空氣中。再過5. 5小時后，得到BAL流體和肺樣品。（A)BAL流體中的蛋白濃度。（B) 肺的濕重：干重比。（C)在H&E染色后對肺的組織學(xué)檢查。數(shù)據(jù)代表兩個獨(dú)立實驗中的一 個，η = 5至8只小鼠每組；***ρ〈0· 001。
[0068] 圖12示出，ΡΒ141逆轉(zhuǎn)由LPS誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄因子Nrf2活性的降低。
[0069] 通過氣管內(nèi)注射LPS(50yg)來誘導(dǎo)ALI，30分鐘后霧化PB141(25mg/kg)或媒介 物（鹽水），并通過微栗霧化器將其遞送至籠空氣中。再過5.5小時后，切除肺，并測定轉(zhuǎn) 錄因子Nrf2的DNA結(jié)合活性。數(shù)據(jù)代表兩個獨(dú)立實驗中的一個，η = 4至6只小鼠每組； ***ρ〈0· 001。
[0070] 圖13示出，ΡΒ141降低LPS活化的肺泡巨噬細(xì)胞中炎性基因的轉(zhuǎn)錄并提高抗氧化 基因的轉(zhuǎn)錄。通過氣管內(nèi)注射LPS(50yg)來誘導(dǎo)ALI，30分鐘后霧化PB141(25mg/kg)或 媒介物（鹽水），并通過微栗霧化器將其遞送至籠空氣中。再過5.5小時后，得到BAL流體。 從BAL流體分離肺泡巨噬細(xì)胞，并涂布于DMEM+10 % FBS中。1小時后，分離RNA，并使用實 時PCR來測定所指示的基因的表達(dá)；將結(jié)果歸一化為相對于持家基因甘油醛-3-磷酸脫氫 酶（GAPDH)和9s rRNA的值。數(shù)據(jù)代表兩個獨(dú)立實驗中的一個，η = 6至8只小鼠每組； **ρ〈0· 01 ;***ρ〈0· 001。
[0071] 圖14示出，霧化的ΡΒ141降低A/J小鼠中4-甲基亞硝胺-1-(3-吡啶基）-1- 丁 酮（NNK)誘導(dǎo)的肺腫瘤發(fā)生。通過在第1、3和5天經(jīng)腹膜內(nèi)（i. p.)注射溶解于鹽水中的 50mg/kg NNK來誘導(dǎo)肺腫瘤發(fā)生，然后霧化PB141(25mg/kg)或媒介物（鹽水），并通過微栗 霧化器將其遞送至籠空氣中。8周后，在H&E染色后對肺進(jìn)行組織學(xué)檢查。（A)肺病變的數(shù) 量。（B)組織學(xué)示出肺腫瘤發(fā)生和負(fù)荷。數(shù)據(jù)代表兩個獨(dú)立實驗中的一個，η = 9至11只 小鼠每組。
[0072] 圖15示出，霧化的ΡΒ141降低卵白蛋白（0VA)誘導(dǎo)的氣道高反應(yīng)性。通過在第0 天和第7天經(jīng)腹膜內(nèi)（i. p.)注射0VA來進(jìn)行初始致敏并在第14至22天的偶數(shù)編號的天 數(shù)中經(jīng)氣管內(nèi)注射0VA來進(jìn)行激發(fā)，從而在小鼠中產(chǎn)生變應(yīng)原誘導(dǎo)的哮喘。在每次0VA激 發(fā)后30分鐘，霧化PB141 (25mg/kg)或媒介物（鹽水），并通過微栗霧化器將其遞送至籠空 氣中。在最后激發(fā)和霧化后二十四小時；通過強(qiáng)迫振蕩（flexiVent)法測定提高吸入的乙 酰甲膽堿的濃度的氣道高反應(yīng)性。（A)氣道抗性。（B)氣道彈性。數(shù)據(jù)代表兩個獨(dú)立實驗 中的一個，η = 6至8只小鼠每組。
[0073] 圖16示出，霧化的ΡΒ141降低卵白蛋白（0VA)誘導(dǎo)的肺炎癥和氧化性損傷。通 過在第0天和第7天經(jīng)腹膜內(nèi)（i. p.)注射0VA來進(jìn)行初始致敏并在第14至22天的偶數(shù) 編號的天數(shù)中經(jīng)氣管內(nèi)注射0VA來進(jìn)行激發(fā)，從而在小鼠中產(chǎn)生變應(yīng)原誘導(dǎo)的哮喘。在每 次0VA激發(fā)后30分鐘，霧化PB141 (25mg/kg)或媒介物（鹽水），并通過微栗霧化器將其遞 送至籠空氣中。在最后一次激發(fā)和霧化后二十四小時，得到BAL流體、血漿和肺樣品。（A) BAL流體中的總細(xì)胞計數(shù)和分化細(xì)胞計數(shù)。（B)對BAL流體染色后的顯微鏡檢查。（C)H202產(chǎn)生，⑶BAL流體中的蛋白濃度。數(shù)據(jù)代表兩個獨(dú)立實驗中的一個，η = 7至10只小鼠每 組；***ρ〈0· 001。
[0074] 圖17示出，霧化的ΡΒ141降低卵白蛋白（OVA)誘導(dǎo)炎性細(xì)胞浸潤和粘液產(chǎn)生。通 過在第0天和第7天經(jīng)腹膜內(nèi)（i. p.)注射0VA來進(jìn)行初始致敏并在第14至22天的偶數(shù) 編號的天數(shù)中經(jīng)氣管內(nèi)注射0VA來進(jìn)行激發(fā)，從而在小鼠中產(chǎn)生變應(yīng)原誘導(dǎo)的哮喘。在每 次0VA激發(fā)后30分鐘，霧化PB141 (25mg/kg)或媒介物（鹽水），并通過微栗霧化器將其遞 送至籠空氣中。在最后一次激發(fā)和霧化后二十四小時，得到肺樣品。在（A)H&E染色、（B)三 色染色和（C)高碘酸希夫氏（PAS)染色后對肺進(jìn)行組織學(xué)檢查。數(shù)據(jù)代表兩個獨(dú)立實驗中 的一個，η = 7至10只小鼠每組。
[0075] 圖18示出，霧化的ΡΒ141降低慢性阻塞性肺?。–0PD)的鼠科模型中炎癥相關(guān)細(xì) 胞對肺空間的浸潤以及炎性介質(zhì)的產(chǎn)生。通過將小鼠暴露于全體香煙的煙，保持5天來誘 導(dǎo)C0PD，結(jié)束時對小鼠進(jìn)行安樂死，并通過支氣管肺泡灌洗從肺空氣空間得到細(xì)胞和介質(zhì) 水平。一些小鼠同時接受PB141(25mg/kg)和香煙的煙（Α至