凝血酶原時間測定試劑盒及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及一種體外診斷試劑盒及其制備方法，用于人血漿標本凝血酶原時間的 測定。更具體地，是一種利用組織因子醋化物制備的凝血酶原時間測定試劑盒及其制備方 法，屬于生物技術領域。
【背景技術】
[0002] 醫(yī)院臨床實驗室常規(guī)凝血實驗，即凝血常規(guī)四項包括凝血酶原時間測定（PT)、部 分活化凝血活酶時間測定（APTT)、凝血酶時間測定（TT)、纖維蛋白原濃度測定（FIB)，主要 用于出血性疾病的篩查與診斷、血栓性疾病與血栓前狀態(tài)檢查、各種抗凝治療監(jiān)測W及手 術前檢查。其中，PT為反應機體外源性凝血途徑的主要檢測指標，常用于：1血液凝固異常 可疑包括凝血酶原復合物多個因子（II、VII、X)，因子V，纖維蛋白原及去纖維蛋白原血癥 的篩選實驗；2監(jiān)測及調(diào)整維生素K括抗劑，香豆素誘導劑的治療；3監(jiān)測維生素K缺乏及肝 臟疾病；4術前篩選可能的止血異常疾病。
[0003] 目前PT的臨床檢測多采用如ick法，其原理為在缺乏血小板的血漿內(nèi)加入組織 促凝血酶原激酶（組織因子）和Ca2+后凝血酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槟?，通過產(chǎn)生的凝血酶使纖 維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白。PT測定結果報告方式有Ξ種：秒值、根據(jù)標準曲線計算的百 分活度，國際標準化比率（internationalnormalizedratioINR)。PT測定結果受眾多 因素的影響，其中凝血酶原試劑為最重要的影響因素。商品化的組織因子在敏感性上與 WK)推薦的有所不同，因此生產(chǎn)商需要對每批試劑確定一個敏感因子，此即國際敏感指數(shù) ISI(internationalsensitivityindex)，它用來表示試劑中組織凝血活酶相對活性的指 數(shù)。不同來源的組織凝血活酶對凝血因子的敏感性不同，為了使不同敏感性的組織凝血活 酶在PT檢測中得到同樣的結果，必須要制定一個共同遵循的敏感指標。WHO先后制備或發(fā) 出了凝血活酶的多種國際參考品（IRP)，用已知ISI值的國際參考試劑與待測組織活酶試 劑檢測同一標本，對結果進行比較分析，就可得出試劑的ISI數(shù)值。
[0004] 目前用于生產(chǎn)和出售的組織凝血活酶試劑必須標有ISI數(shù)值。PT測定影響因素很 多，其中最關鍵的是凝血酶原試劑，由于所用凝血酶原試劑的敏感度不同，即使在相同條件 下對同一標本測得的結果也不同，而我國醫(yī)生常用的凝血酶原百分活動度則因為標準血漿 不統(tǒng)一而相差更大，甚至達到難W比較的程度。因此WK)于1981年提出PT標準化報告方 式為INR，INR= (PTR)ISI，其中ISI為國際敏感度指數(shù)，PTR為PT測定秒值（S)與PT標準 對照秒值（S)的比值。經(jīng)上述公式換算成INR值后，能克服試劑之間敏感度差異的影響，使 INR值報告方式具有可比性和可信度。國內(nèi)多數(shù)文獻報告人工屯、臟瓣膜置換術后采用國際 正常標準化比值對口服抗凝藥物治療的監(jiān)測，結果穩(wěn)定、可靠，具有可比性。在口服抗凝藥 治療中，華法林類藥物是非常有效的抗凝藥物，它在不同病人體內(nèi)的新陳代謝率不同，因而 它的劑量必須仔細監(jiān)測，否則就會因超劑量而造成出血或因為劑量不足導致疾病復發(fā)，血 栓形成。由此可見在凝血酶原時間的測定中，準確的INR結果對臨床抗凝治療藥物的監(jiān)測 非常重要。但是不同ISI值的PT試劑測得的INR結果差異非常顯著，而且當標本的INR值 越高時，測定結果差異越顯著。理論上，ISI值越接近1. 0,表明試劑越敏感。 陽〇化]但是由于實驗室使用PT試劑質(zhì)量上的不同，使得同一個患者在不同醫(yī)院測定的 結果相差懸殊，造成檢測結果的不一致，影響對疾病的正確、及時診斷。因此，PT試劑的質(zhì) 量成了獲得準確結果及診斷的關鍵。同時，由于試劑復溶后的穩(wěn)定性差，造成浪費，導致醫(yī) 療單位成本增加，患者負擔加重，同時配制過程中的分裝、凍干等步驟也會導致試劑間的差 異，從而造成檢測結果的不準確，此外使用起來還需要復溶等步驟，造成操作過程的繁瑣。 所W研制一種安全、可靠、準確、穩(wěn)定，保存時間長、操作簡便的PT試劑，對臨床診斷疾病來 說是十分必要的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為了克服上述現(xiàn)有【背景技術】中的不足，本發(fā)明提供一種凝血酶原時間測定試劑盒 及其制備方法，該凝血酶原時間測定試劑盒通過含有多種有效成分的緩沖液體系與組織因 子醋化物的結合，保證了試劑的穩(wěn)定性，同時也免去了配制過程中的分裝和凍干等步驟，得 到準確性、重復性及穩(wěn)定性等總體性能更好且操作更簡便的凝血酶原時間測定試劑。
[0007] 為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種凝血酶原時間測定試劑盒，包括凝血酶原時 間測定試劑，所述凝血酶原時間測定試劑由緩沖液體系和溶解在所述緩沖液體系中的凝血 活酶組成，所述凝血活酶為組織因子醋化物，所述凝血活酶為組織因子醋化物，它在緩沖液 體系中的用量占緩沖液重量的0. 05~Iwt%;所述緩沖液體系各組分含量為：0. 05~3wt% 的牛血清白蛋白、6~20mM的氯化巧、20~200mM的緩沖劑、0. 05~0. 5wt%的疊氮化鋼、 0. 05~Iwt%的氯化鋼、其余為水，所述緩沖液體系的抑值為5. 0~8. 0,所述緩沖劑選自 于Tris-Hcl、MP0S、肥陽S、TRICI肥、TAPS0、PBS。
[0008] 優(yōu)選地，在上述技術方案中，所述組織因子醋化物在緩沖液體系中的用量占緩沖 液重量的0. 15~0. 3wt%。
[0009] 優(yōu)選地，在上述技術方案中，所述牛血清白蛋白在緩沖液體系中的含量為1~ 2wt%。
[0010] 優(yōu)選地，在上述技術方案中，所述氯化巧在緩沖液體系中的含量為9~15mM。
[0011] 優(yōu)選地，在上述技術方案中，所述緩沖劑在緩沖液體系中的含量為30~45mM。
[0012] 優(yōu)選地，在上述技術方案中，所述疊氮化鋼在緩沖液體系中的含量為0. 1~ 0. 15wt%。
[0013] 優(yōu)選地，在上述技術方案中，所述氯化鋼在緩沖液體系中的含量為0. 1~ 0. 3wt%。
[0014] 優(yōu)選地，在上述技術方案中，所述緩沖劑為MP0S、PBS體積比為1:2. 5的混合物。
[0015] 本發(fā)明還提供一種制備上述凝血酶原時間測定試劑盒的方法，包括如下步驟：（1) 按照不同配比配制緩沖液體系，將抑調(diào)至5. 0~8. 0,加入組織因子醋化物，攬拌混勻后得 到初始的凝血酶原時間測定試劑；（2)將初始試劑在血凝儀上進行質(zhì)控的測定，將質(zhì)控測 定結果調(diào)至符合該機型血凝儀配套質(zhì)控說明書要求的范圍，測定結果最接近質(zhì)控平均值的 試劑配方確定為相應機型最終的試劑配比；（3)W最終的試劑配比，按照步驟（1)的配制方 法即得凝血酶原時間測定試劑盒。
[0016] 本發(fā)明的有益效果：提供一種凝血酶原時間測定試劑盒及其制備方法，該凝血酶 原時間測定試劑盒免去了配制過程中的分裝和凍干等步驟，避免了因凍干和復溶過程造成 的試劑的瓶間差異，從而導致測定結果之間的較大差異。本發(fā)明試劑無需凍干，即可保證試 劑的穩(wěn)定性，確保了開瓶后試劑的最優(yōu)有效性持續(xù)至少一個月，避免了實驗結果間的較大 差異，同時節(jié)約了試劑的用量，開瓶即用，操作起來更加快捷簡便。
【具體實施方式】
[0017]W下結合具體實施例對本發(fā)明作進一步的詳細描述。
[0018] 本發(fā)明的凝血酶原時間測定試劑盒，包括凝血酶原時間測定試劑，凝血酶原時間 測定試劑由緩沖液體系和溶解在緩沖液體系中的凝血活酶組成，凝血活酶為組織因子醋化 物，它在緩沖液體系中的用量占緩沖液重量的0. 05~Iwt% ;緩沖液體系各組分含量為： 0. 05~3wt%的牛血清白蛋白、6~20mM的氯化巧、20~200mM的緩沖劑、0. 05~0. 5wt% 的疊氮化鋼、0. 05~Iwt%的氯化鋼、其余為水，緩沖液體系的抑值為5. 0~8. 0,緩沖劑選 自于Tris-Hcl、MP0S、肥陽S、TRICI肥、TAPS0、PBS。使用本發(fā)明試劑盒時，待測血漿與凝血 酶原時間測定試劑用量的體積比為1:1. 9~2. 2。
[0019] 制備上述凝血酶原時間測定試劑盒的方法，包括如下步驟：（1)按照不同配比配 制緩沖液體系，將抑調(diào)至5. 0~8. 0,加入組織因子醋化物，攬拌混勻后得到初始的凝血酶 原時間測定試劑；（2)將初始試劑在血凝儀上進行質(zhì)控的測定，將質(zhì)控測定結果調(diào)至符合 該機型血凝儀配套質(zhì)控說明書要求的范圍，測定結果最接近質(zhì)控平均值的試劑配方確定為 相應機型最終的試劑配比；（3)W最終的試劑配比，按照步驟（1)的配制方法即得凝血酶原 時間測定試劑盒。 陽〇2〇] 實施例1
[0021] 凝血酶原時間測定試劑盒，包括凝血酶原時間測定試劑，凝血酶原時間測定試劑 由緩沖液體系和溶解在所述緩沖液體系中的凝血活酶組成，凝血活酶為組織因子醋化物， 組織因子醋化物在緩沖液體系中的用量占緩沖液重量的0. 05wt% ;緩沖液體系各組分含量 為：3wt%的牛血清白蛋白、20mM的氯化巧、20mM的肥陽S、0. 5wt%的疊氮化鋼、0. 05wt%的 氯化鋼、其余為水，緩沖液體系的抑值為7. 0。