一種測定轉(zhuǎn)鐵蛋白的試劑盒及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種測定轉(zhuǎn)鐵蛋白的試劑盒及其制備方法，包括彼此獨(dú)立的試劑R1和試劑R2雙液體組分，包括的成分及相應(yīng)含量為：試劑R1：緩沖液、表面活性劑、防腐劑、穩(wěn)定劑，試劑R2：緩沖液、表面活性劑、無機(jī)鹽離子、防腐劑、轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體，其溶劑為純化水，制備方法為：按照組分含量配制好試劑；將待測樣本與試劑R1和試劑R2混合，使其充分反應(yīng)；用全自動生化分析儀測定反應(yīng)后的吸光度差值；根據(jù)吸光度變化值計(jì)算出樣本中的轉(zhuǎn)鐵蛋白的濃度。本發(fā)明具有操作方便、準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】
一種測定轉(zhuǎn)鐵蛋白的試劑盒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)及生物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體來說是一種測定轉(zhuǎn)鐵蛋白的試劑盒及 其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 轉(zhuǎn)鐵蛋白又名運(yùn)鐵蛋白（TRF)，是血漿中主要的含鐵蛋白質(zhì)，負(fù)責(zé)運(yùn)載由消化管吸 收的鐵和由紅細(xì)胞降解釋放的鐵，以TRF-Fe 3+的復(fù)合物形式進(jìn)入骨髓中，供成熟紅細(xì)胞的生 成，轉(zhuǎn)鐵蛋白分子量約7.7萬，為單鏈糖蛋白，含糖量約6%，TRF可逆地結(jié)合多價離子，包括 鐵、銅、鋅、鈷等，每一分子TRF可結(jié)合兩個三價鐵原子，TRF主要由肝細(xì)胞合成，半衰期為7 天。血漿中TRF的濃度受鐵供應(yīng)的調(diào)節(jié)，在缺鐵狀態(tài)時，血漿TRF濃度上升，經(jīng)鐵有效治療后 恢復(fù)到正常水平。
[0003] 血漿中轉(zhuǎn)鐵蛋白水平可用于貧血的診斷和對治療的監(jiān)測，在缺鐵性的低血色素貧 血中TRF的水平增高，但其鐵的飽和度很低，相反，如果貧血是由于紅細(xì)胞對鐵的利用障礙， 則血漿中TRF正?；虻拖拢F的飽和度增高。在鐵負(fù)荷過量時，TRF水平正常，但飽和度可 超過50%，甚至達(dá)90%。
[0004]在急性時相反應(yīng)中往往降低，因此在炎癥、惡性病變時常隨著白蛋白、前白蛋白同 時下降，在慢性肝疾病及營養(yǎng)不良時亦下降，因此可以作為營養(yǎng)狀態(tài)的一項(xiàng)指標(biāo)。
[0005] 目前市場上的測定轉(zhuǎn)鐵蛋白的試劑普遍存在操作不便、測定準(zhǔn)確度低的缺陷，因 此需要進(jìn)行改進(jìn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是為了克服現(xiàn)有技術(shù)操作復(fù)雜、測定準(zhǔn)確度低的缺 陷，而提供一種測定轉(zhuǎn)鐵蛋白的試劑盒及其制備方法。
[0007] 本發(fā)明解決上述技術(shù)問題提供的技術(shù)方案是:本發(fā)明公開了一種測定轉(zhuǎn)鐵蛋白的 試劑盒，包括彼此獨(dú)立的試劑R1和試劑R2雙液體組分，包括的成分及相應(yīng)含量為： 試劑R1: 緩沖液 30~100 mmol/L 加速劑 10~35 g/L 表面活性劑 8.0~18.0 ml/L 防腐劑 0.1~0.7 g/L 穩(wěn)定劑 10~30 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 30~100 mmol/L 表面活性劑 8.0~18.0 ml/L 無機(jī)鹽離子 15CK250 mmol/L 防腐劑 0.1~0.7 g/L 轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體 3.0~14.0 ml/L 其溶劑為純化水。
[0008] 作為優(yōu)選，本發(fā)明公開了一種測定轉(zhuǎn)鐵蛋白的試劑盒，包括彼此獨(dú)立的試劑R1和 試劑R2雙液體組分，包括的成分及相應(yīng)含量為： 試劑R1: 緩沖液 65 mmol/L 加速劑 20 g/L 表面活性劑 13 ml/L 防腐劑 0.4 g/L 穩(wěn)定劑 20 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 65 mmol/L 表面活性劑 13ml/L 無機(jī)鹽離子 200 mmol/L 防腐劑 0.4 g/L 轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體 8 ml/L 其溶劑為純化水。
[0009] 作為優(yōu)選，所述的試劑R1中，所述的緩沖液采用三羥甲基氨基甲烷緩沖液、MOPS緩 沖液、PBS緩沖液、MES緩沖液、甘氨酸緩沖液中的一種或多種的組合，所述的加速劑采用聚 乙二醇-2000、聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一種或多種的組合，所述的表面活性劑 采用吐溫-80、聚氧乙烯苯基醚中的一種，所述的防腐劑采用苯酚、苯甲酸鈉、疊氮鈉中的一 種或多種的組合，所述的穩(wěn)定劑采用牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖中的一種或多種的組合。
[0010] 作為優(yōu)選，所述的試劑R2中，所述的緩沖液采用三羥甲基氨基甲烷緩沖液、MOPS緩 沖液、PBS緩沖液、MES緩沖液、甘氨酸緩沖液中的一種或多種的組合，所述的表面活性劑采 用吐溫-80、聚氧乙烯苯基醚中的一種，所述的無機(jī)鹽離子采用氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂中的 一種或多種的組合，所述的防腐劑采用苯酚、苯甲酸鈉、疊氮鈉中的一種或多種的組合。
[0011] 作為優(yōu)選，本發(fā)明還公開了上述測定轉(zhuǎn)鐵蛋白的試劑盒的制備方法和使用方法， 包括以下步驟： (a)按照下列組分含量配制好試劑： 試劑R1: 緩沖液 30~100 mmol/L 加速劑 10~35 g/L 表面活性劑 8.0~18.0 ml/L 防腐劑 0.1~0.7 g/L 穩(wěn)定劑 10~30 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 30~100 mmol/L 表面活性劑 8.0~18.0 ml/L 無機(jī)鹽離子 150~250 mmol/L 防腐劑 0.1~0.7 g/L 轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體 3.0~14.0 ml/L 其溶劑為純化水； (b) 將待測樣本與試劑R1和試劑R2混合，使其充分反應(yīng)； (c) 用全自動生化分析儀測定反應(yīng)后的吸光度差值； (d) 根據(jù)吸光度變化值計(jì)算出樣本中的轉(zhuǎn)鐵蛋白的濃度。
[0012]作為優(yōu)選，步驟(b)中，所述的試劑R1與試劑R2的體積比為3:1。
[0013] 作為優(yōu)選，步驟(b)中，所述的待測樣本與試劑R1和試劑R2的總體積的體積比在1: 5到1:200之間。
[0014] 本發(fā)明的檢測原理是:樣品中的轉(zhuǎn)鐵蛋白可與試劑R2中的轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體發(fā)生特異 性的抗原抗體反應(yīng)，形成抗原抗體免疫復(fù)合物，形成濁度，其濁度高低與樣本中轉(zhuǎn)鐵蛋白含 量成正相關(guān)。通過測定濁度并與轉(zhuǎn)鐵蛋白校準(zhǔn)曲線進(jìn)行換算，求出樣品中轉(zhuǎn)鐵蛋白的含量。
式中：A At以空白管吸光度作對照的樣品管吸光度值 A As以空白管吸光度作對照的校準(zhǔn)管吸光度值 Cs校準(zhǔn)液中轉(zhuǎn)鐵蛋白的濃度。
[0016]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益優(yōu)點(diǎn):本試劑中添加了助懸劑和加速劑，助 懸劑有利于抗體的分散和穩(wěn)定，加速劑則可以加速抗原抗體的反應(yīng)，即使較微弱的變化也 可以檢測出來，提高了試劑分析靈敏度。
【具體實(shí)施方式】
[0017]以下結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不僅限于這些實(shí)施例。
[0018] 實(shí)施例1 本發(fā)明的試劑盒包括彼此獨(dú)立的試劑R1和試劑R2雙液體組分，其中 試劑R1: 三羥甲基氨基甲烷緩沖液65 mmol/L 聚乙二醇-8000 20 g/L 吐溫-80 13 ml/L 疊氮鈉 0.4 g/L 牛血清白蛋白 20 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 三羥甲基氨基甲烷緩沖液 65 mmol/L 吐溫-80 13ml/L 氯化鈉 200 mmol/L 疊氮鈉 0.4 g/L 轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體 8 ml/L 其溶劑為純化水。
[0019] 實(shí)施例2 本發(fā)明的試劑盒包括彼此獨(dú)立的試劑R1和試劑R2雙液體組分，其中 試劑R1: MOPS緩沖液 30 mmol/L 聚乙二醇-2000 10 g/L 聚氧乙稀苯基醚 18.0 ml/L 苯甲酸鈉 0.1 g/L 鹿糖 30 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: MOPS緩沖液 30 mmol/L 吐溫-80 8.0 ml/L 氯化鉀 150 mmol/L 苯酚 0.7 g/L 轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體 14.0 ml/L 其溶劑為純化水。 實(shí)施例3 試劑盒的制備和使用方法 1、 按照下列組分含量配制好試劑： 試劑R1: 三羥甲基氨基甲烷緩沖液 65 mmol/L 聚乙二醇-8000 20 g/L 吐溫-80 13 ml/L 疊氮鈉 0.4 g/L 牛血清白蛋白 20 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 三羥甲基氨基甲烷緩沖液65 mmol/L 吐溫-80 13ml/L 氯化鈉 200 mmol/L 疊氮鈉 0.4 g/L 轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體 8 ml/L 其溶劑為純化水； 2、 全自動生化分析儀參數(shù)設(shè)置 (a) 檢測溫度:37°C; (b) 檢測波長:主波長340nm，副波長700nm; (C)反應(yīng)時間：10min，其中，孵育時間5min，加入試劑R2后立即測定讀取吸光度 Al，5min后讀取吸光度A2,計(jì)算吸光度變化AA = A2-A1 ; (d)反應(yīng)方向：正反應(yīng)； 3、檢測步驟 (a) 取225yl試劑R1與3yl待測樣本混勻； (b) 將混勻后的溶液在37°C的條件下孵育5min;
(c) 加入75yl試劑R2,立即測定讀取吸光度Al，5min后讀取吸光度A2,計(jì)算吸光度變化 AA = A2-A1; (d)根據(jù)樣本中轉(zhuǎn)鐵蛋白的活性 計(jì)算出樣本中的轉(zhuǎn)鐵蛋白 的濃度。
[0020] 實(shí)施例4 試劑盒的制備和使用方法 1、 按照下列組分含量配制好試劑： 試劑R1: MOPS緩沖液 30 mmol/L 聚乙二醇-2000 10 g/L 聚氧乙稀苯基醚 18.0 ml/L 苯甲酸鈉 0.1 g/L 鹿糖 30 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: MOPS緩沖液 30 mmol/L 吐溫-80 8.0 ml/L 氯化鉀 150 mmol/L 苯酚 0.7 g/L 轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體 14.0 ml/L 其溶劑為純化水； 2、 全自動生化分析儀參數(shù)設(shè)置 (a) 檢測溫度:37°C; (b) 檢測波長:主波長340nm，副波長700nm; (c) 反應(yīng)時間：10min，其中，孵育時間5min，加入試劑R2后立即測定讀取吸光度 Al，5min后讀取吸光度A2,計(jì)算吸光度變化AA = A2-A1 ; (d) 反應(yīng)方向：正反應(yīng)； 3、 檢測步驟 (a) 取225yl試劑R1與3yl待測樣本混勻； (b) 將混勻后的溶液在37°C的條件下孵育5min; (c) 加入75yl試劑R2,立即測定讀取吸光度Al，5min后讀取吸光度A2,計(jì)算吸光度變化 AA = A2-A1; (d)根據(jù)樣本中轉(zhuǎn)鐵蛋白的活性
計(jì)算出樣本中的轉(zhuǎn)鐵蛋白 的濃度。
[0021] 表1為實(shí)施例1所制得的測定轉(zhuǎn)鐵蛋白的試劑盒以及實(shí)施例2所制得的測定轉(zhuǎn)鐵蛋 白的試劑盒分別對質(zhì)控品1進(jìn)行測定的結(jié)果，其中質(zhì)控品1中的轉(zhuǎn)鐵蛋白的濃度為1.29 g/ L，測定結(jié)果見表1:
由表1可知，本發(fā)明所制得的測定轉(zhuǎn)鐵蛋白的試劑盒對質(zhì)控品1的測定結(jié)果偏差較小， 因此測定準(zhǔn)確度高，而且實(shí)施例1為最優(yōu)的選擇。
[0022] 表2為實(shí)施例1所制得的測定轉(zhuǎn)鐵蛋白的試劑盒以及實(shí)施例2所制得的測定轉(zhuǎn)鐵 蛋白的試劑盒分別對質(zhì)控品2進(jìn)行測定的結(jié)果，其中質(zhì)控品2中的轉(zhuǎn)鐵蛋白的濃度為3.38 g/L，測定結(jié)果見表2:
由表2可知，本發(fā)明所制得的測定轉(zhuǎn)鐵蛋白的試劑盒對質(zhì)控品2的測定結(jié)果偏差較小， 因此測定準(zhǔn)確度高，而且實(shí)施例1為最優(yōu)的選擇。
[0023] 表3為實(shí)施例3所制得的測定轉(zhuǎn)鐵蛋白的試劑盒對同一待測樣本進(jìn)行的多次反復(fù) 測定以及實(shí)施例4所制得的測定轉(zhuǎn)鐵蛋白的試劑盒對同一待測樣本進(jìn)行的多次反復(fù)測定， 對所得的結(jié)果進(jìn)行SD和CV的計(jì)算，結(jié)果如下：
由表3可知本發(fā)明所制得的測定轉(zhuǎn)鐵蛋白的試劑盒的精密度比較好，而且由表3可知， 實(shí)施例3為最優(yōu)的選擇。
[0024] 上述實(shí)施例僅例示性說明本發(fā)明的原理及其功效，而非用于限制本發(fā)明。任何熟 悉此技術(shù)的人士皆可在不違背本發(fā)明的精神及范疇下，對上述實(shí)施例進(jìn)行修飾或改變。因 此，舉凡所屬技術(shù)領(lǐng)域中具有通常知識者在未脫離本發(fā)明所揭示的精神與技術(shù)思想下所完 成的一切等效修飾或改變，仍應(yīng)由本發(fā)明的權(quán)利要求所涵蓋。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種測定轉(zhuǎn)鐵蛋白的試劑盒，其特征在于:包括彼此獨(dú)立的試劑R1和試劑R2雙液體 組分，包括的成分及相應(yīng)含量為： 試劑R1: 緩沖液 30~100 mmol/L 加速劑 10~35 g/L 表面活性劑 8.0~18.0 ml/L 防腐劑 0.1~0.7 g/L 穩(wěn)定劑 10~30 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 30~100 mmol/L 表面活性劑 8.0~18.0 ml/L 無機(jī)鹽離子 150~250 mmol/L 防腐劑 0.1~0.7 g/L 轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體 3.0~14.0 ml/L 其溶劑為純化水。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測定轉(zhuǎn)鐵蛋白的試劑盒，其特征在于:包括彼此獨(dú)立的試 劑R1和試劑R2雙液體組分，包括的成分及相應(yīng)含量為： 試劑R1: 緩沖液 65 mmol/L 加速劑 20 g/L 表面活性劑 13 ml/L 防腐劑 0.4 g/L 穩(wěn)定劑 20 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 65 mmol/L 表面活性劑 13ml/L 無機(jī)鹽離子 200 mmol/L 防腐劑 0.4 g/L 轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體 8 ml/L 其溶劑為純化水。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種測定轉(zhuǎn)鐵蛋白的試劑盒，其特征在于:所述的試劑R1 中，所述的緩沖液采用三羥甲基氨基甲烷緩沖液、MOPS緩沖液、PBS緩沖液、MES緩沖液、甘氨 酸緩沖液中的一種或多種的組合，所述的加速劑采用聚乙二醇-2000、聚乙二醇-8000、聚乙 烯吡咯烷酮中的一種或多種的組合，所述的表面活性劑采用吐溫-80、聚氧乙烯苯基醚中的 一種，所述的防腐劑采用苯酚、苯甲酸鈉、疊氮鈉中的一種或多種的組合，所述的穩(wěn)定劑采 用牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖中的一種或多種的組合。4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種測定轉(zhuǎn)鐵蛋白的試劑盒，其特征在于:所述的試劑R2 中，所述的緩沖液采用三羥甲基氨基甲烷緩沖液、MOPS緩沖液、PBS緩沖液、MES緩沖液、甘氨 酸緩沖液中的一種或多種的組合，所述的表面活性劑采用吐溫-80、聚氧乙烯苯基醚中的一 種，所述的無機(jī)鹽離子采用氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂中的一種或多種的組合，所述的防腐劑 采用苯酚、苯甲酸鈉、疊氮鈉中的一種或多種的組合。5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種測定轉(zhuǎn)鐵蛋白的試劑盒的制備方法和使用方法，其特 征在于:包括以下步驟： (a) 按照下列組分含量配制好試劑： 試劑R1: 緩沖液 30~100 mmol/L 加速劑 10~35 g/L 表面活性劑 8.0~18.0 ml/L 防腐劑 0.1~0.7 g/L 穩(wěn)定劑 10~30 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 30~100 mmol/L 表面活性劑 8.0~18.0 ml/L 無機(jī)鹽離子 150~250 mmol/L 防腐劑 0.1~0.7 g/L 轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體 3.0~14.0 ml/L 其溶劑為純化水； (b) 將待測樣本與試劑R1和試劑R2混合，使其充分反應(yīng)； (c) 用全自動生化分析儀測定反應(yīng)后的吸光度差值； (d) 根據(jù)吸光度變化值計(jì)算出樣本中的轉(zhuǎn)鐵蛋白的濃度。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種測定轉(zhuǎn)鐵蛋白的試劑盒的制備方法和使用方法，其特征 在于:步驟(b)中，所述的試劑R1與試劑R2的體積比為3:1。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種測定轉(zhuǎn)鐵蛋白的試劑盒的制備方法和使用方法，其特征 在于：步驟(b)中，所述的待測樣本與試劑R1和試劑R2的總體積的體積比在1: 5到1: 200之 間。
【文檔編號】G01N33/68GK106053838SQ201610544746
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年7月12日
【發(fā)明人】蔡曉輝, 莊慶華, 吳錚, 徐運(yùn)
【申請人】安徽伊普諾康生物技術(shù)股份有限公司