一種含有靈芝多糖制劑的檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種含有靈芝多糖制劑的檢測(cè)方法，其特征是通過對(duì)制劑的粗多糖進(jìn)行醇沉提取，再用堿性硫酸銅純化后以苯酚硫酸顯色，照紫外-可見分光光度法的比色法測(cè)定制劑的靈芝多糖。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：采用特定的試劑，對(duì)制劑中的靈芝多糖進(jìn)行選擇性的沉淀，從而將其與糊精中所含多糖進(jìn)行分離，排除輔料干擾，達(dá)到對(duì)靈芝多糖的含量進(jìn)行準(zhǔn)確檢測(cè)的目的。該方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、試劑易得，并且檢測(cè)成本低，可用于含有靈芝多糖制劑的檢測(cè)。
【專利說明】一種含有靈芝多糖制劑的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥制劑領(lǐng)域，涉及一種含有靈芝多糖制劑的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]靈芝為多孔菌科赤芝Ganoderma lucidum ( Leyss.ex Fr.) Karst.或紫芝 G.sinense Zhao, Xu et Zhang的干燥子實(shí)體,具有補(bǔ)氣安神、止咳平喘的功效。靈芝多糖是藥用真菌靈芝中的主要藥效成分之一，現(xiàn)代藥理研究表明，靈芝多糖具有顯著的提高免疫力和抗腫瘤、清除自由基、抗衰老等活性。目前已分離得到的靈芝多糖有200多種，其中大部分為葡聚糖，少數(shù)為α -葡聚糖，多糖鏈由三股單糖鏈構(gòu)成，是一種螺旋狀立體構(gòu)形物。靈芝多糖大多為雜多糖，即除含有葡萄糖外，大多還含有少量阿拉伯糖、木糖、巖藻糖、鼠李糖、半乳糖等其他單糖。含有靈芝多糖的藥物制劑在制備工藝中，加入了糊精等藥用輔料，而糊精的主要成分為由葡萄糖組成的多糖，與靈芝多糖的組成單元相似。目前常使用的硫酸苯酚法或者硫酸蒽醌法檢測(cè)含靈芝多糖制劑中靈芝多糖的含量，由于受輔料糊精的干擾，這些方法都會(huì)在檢測(cè)靈芝多糖的同時(shí)，將糊精中所含多糖一并檢測(cè)出，從而導(dǎo)致含量檢測(cè)數(shù)據(jù)比實(shí)際高，檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。目前，國(guó)內(nèi)總多糖含量測(cè)定主要采取紫外分光光度法進(jìn)行，經(jīng)典的顯色體系有苯酹-硫酸法(λ max=490nm)和蒽酮-硫酸法(Xmax= 630nm),均選擇無水葡萄糖為對(duì)照品。也有采用滴定法測(cè)定總多糖含量的，常用有斐林氏滴定法和間接碘量滴定法。在國(guó)外對(duì)多糖的質(zhì)量控制多采用高效凝膠色譜法測(cè)定多糖分子量及其分布，這也是對(duì)多糖產(chǎn)品質(zhì)控手段之一，其對(duì)純度較高的多糖產(chǎn)品質(zhì)量控制較好，能有效的評(píng)價(jià)該產(chǎn)品的真?zhèn)?，但?duì)于主要含多糖類成分的靈芝多糖制劑的質(zhì)量控制方法較少，由于它們所含的有效多糖是一大類，很難對(duì)其多糖含量、分子量分布范圍來評(píng)價(jià)藥材及其制劑質(zhì)量的真?zhèn)魏蛢?yōu)劣，該評(píng)價(jià)方式不能反映它們整體的內(nèi)在質(zhì)量變化，存在一定的不合理性和不科學(xué)性，且專屬性也較差。
[0003]因此，如何采用低成本的顯色法檢測(cè)靈芝多糖，而排除糊精等含有葡萄糖結(jié)構(gòu)單元的物質(zhì)的干擾，建立準(zhǔn)確、穩(wěn)定的含靈芝多糖制劑的檢測(cè)方法顯得尤為重要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明提供了一種含有靈芝多糖制劑靈芝多糖含量的準(zhǔn)確測(cè)定方法，本發(fā)明的檢測(cè)方法能夠排除糊精等含有葡萄糖結(jié)構(gòu)單元物質(zhì)產(chǎn)生的干擾，檢測(cè)出的靈芝多糖含量準(zhǔn)確、穩(wěn)定，并且容易操作，檢測(cè)成本低。
[0005]本發(fā)明的方法是對(duì)顯色法的一種改進(jìn)，其原理是首先對(duì)藥物制劑中的粗多糖進(jìn)行醇沉提取，把糊精等低分子量的含有葡萄糖結(jié)構(gòu)單元物質(zhì)與高分子量的靈芝多糖分離，再用堿性硫酸銅純化后以苯酚硫酸顯色，照紫外-可見分光光度法中的比色法測(cè)定制劑中的靈芝多糖。
[0006]含有靈芝多糖制劑的檢測(cè)方法，包括如下步驟:
(I)稱取樣品2.5±0.5g，置于錐形瓶中，加水100ml，加熱回流提取35分鐘，靜置冷卻，離心，精密吸取IOml濾液置于離心管中，緩慢加入4倍體積的無水乙醇，混勻，在5000r/min下離心25分鐘，棄去上清液，殘?jiān)铀芙?，移?5ml量瓶中，加水定容至刻度，即得粗多糖溶液；
(2)精密吸取上述粗多糖溶液10ml，置于50ml離心管中，加入10%氫氧化鈉和銅試劑溶液混合溶液40ml，離心管置于90°C水浴40分鐘，取出放置10~15分鐘，在5000r/min轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，棄去上清液，殘?jiān)?0%硫酸轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻，即樣品測(cè)試液；
所述的10%氫氧化鈉和銅試劑溶液混合溶液是將10%的氫氧化鈉20ml加入銅試劑溶液20ml中，混勻；
(3)準(zhǔn)確吸取樣品測(cè)試液2.0ml，置于25ml比色管中，加入5%苯酚試液Iml，混勻，加入濃硫酸5ml，比色管置于90°C水浴中15分鐘，取出，放置15分鐘，分光光度計(jì)490nm處以空白試劑為參比，Icm比色皿測(cè)定其吸光度為A，以標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算靈芝多糖含量；
計(jì)算公式為:
【權(quán)利要求】
1.一種含有靈芝多糖制劑的檢測(cè)方法，其特征在于，靈芝多糖的檢測(cè)方法包括如下步驟: (1)稱取樣品2.5±0.5g，置于錐形瓶中，加水100ml，加熱回流提取35分鐘，靜置冷卻，離心，精密吸取IOml濾液置于離心管中，緩慢加入4倍體積的無水乙醇，混勻，在5000r/min下離心25分鐘，棄去上清液，殘?jiān)铀芙?，移?5ml量瓶中，加水定容至刻度，即得粗多糖溶液； (2)精密吸取上述粗多糖溶液10ml，置于50ml離心管中，加入10%的氫氧化鈉和銅試劑溶液混合溶液40ml，離心管置于90°C水浴40分鐘，取出放置10?15分鐘，在5000r/min轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，棄去上清液，殘?jiān)?0%硫酸轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻，即樣品測(cè)試液； 所述的10%氫氧化鈉和銅試劑溶液混合溶液是將10%的氫氧化鈉20ml加入銅試劑溶液20ml中，混勻； (3)準(zhǔn)確吸取樣品測(cè)試液2.0ml，置于25ml比色管中，加入5%苯酚試液Iml，混勻，加入濃硫酸5ml，比色管置于90°C水浴中15分鐘，取出，放置15分鐘，分光光度計(jì)490nm處以空白試劑為參比，Icm比色皿測(cè)定其吸光度為A，以標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算靈芝多糖含量。
2.如權(quán)利要求1所述的含有靈芝多糖制劑的檢測(cè)方法，其特征在于，所述的銅試劑溶液的配制方法為:稱取1.5g五水合硫酸銅，IOg枸櫞酸鈉，加水溶解至330ml，混勻，制得銅試劑儲(chǔ)備液；取銅試劑儲(chǔ)備液100ml，加入固體無水硫酸鈉12g使其溶解，混勻，即得銅試劑溶液。
3.如權(quán)利要求1所述的含有靈芝多糖制劑的檢測(cè)方法，其特征在于，所述的標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制方法是:精確吸取0、0.2,0.4,0.8、1.0、1.5ml葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液，重量含量為0.25mg/ml,分別置于25ml比色管中，精確補(bǔ)充水至2.0ml, 5%苯酹溶液Iml,混勻，加入濃硫酸5ml，混勻，比色管置于90°C水浴中15分鐘，取出于室溫下冷卻15分鐘，用分光光度計(jì)于490nm處以空白試劑為參比，Icm比色皿測(cè)定吸光度值；以葡聚糖濃度單位C,mg/ml為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線C=KA+B。
4.如權(quán)利要求1所述的含有靈芝多糖制劑的檢測(cè)方法，其特征在于，所述的空白試劑配制方法為:準(zhǔn)確吸取2.0ml水,加入5%的苯酹溶液Iml,混勻,加入濃硫酸5ml,混勻，比色管置于90°C水浴中15分鐘，取出于室溫下冷卻15分鐘，即得。
5.如權(quán)利要求1、3、4任一項(xiàng)所述的含有靈芝多糖制劑的檢測(cè)方法，其特征在于，所述的濃硫酸的重量含量為90-98%。
【文檔編號(hào)】G01N21/33GK103616339SQ201310547868
【公開日】2014年3月5日 申請(qǐng)日期:2013年11月7日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月7日
【發(fā)明者】林廣 , 黃志權(quán), 王德芳, 周永強(qiáng), 倪夕科 申請(qǐng)人:培力(南寧)藥業(yè)有限公司