復(fù)合生物活性因子脂質(zhì)體及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物領(lǐng)域，尤其涉及一種復(fù)合生物活性因子脂質(zhì)體及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 生物活性因子是由多種細(xì)胞類型通過旁分泌、自分泌或內(nèi)分泌的方式產(chǎn)生，能夠 調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化和免疫等功能，尤其是能夠有效的與皮膚細(xì)胞發(fā)生作用，參與炎癥發(fā) 生和創(chuàng)傷愈合。例如：生物活性因子能夠促進(jìn)上皮細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)代謝，預(yù)防皮膚受到紫外線、 自由基等侵害；生物活性因子還能促使真皮層膠原細(xì)胞的增生，加速術(shù)后皮膚的修復(fù)。
[0003] 常見的細(xì)胞分泌的生物活性因子有EGF(中文；表皮生長(zhǎng)因子，英文；epidermal growth factor)，BFGF(中文；堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，英文；basic fibroblast growth factor)，VEGF(中文；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，英文；vascular endothelial growth factor) 等。包含多種生活因子的組合體可W稱為復(fù)合生物活性因子。復(fù)合生物活性因子除了具備 各種生物活性因子自身的功能外，各種生物因子之間還可W相互促進(jìn)，所W，復(fù)合生物活性 因子在醫(yī)療和化妝品等行業(yè)具有重要作用。
[0004] 復(fù)合生物活性因子的保存方法直接影響其生物活性的高低W及保存時(shí)間的長(zhǎng)短， 進(jìn)而影響復(fù)合生物活性因子的應(yīng)用。脂質(zhì)體是脂類分子（類脂）的自組裝體，是一種由一 個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)雙層中間包覆微水相的結(jié)構(gòu)。在脂質(zhì)體的形成過程中，親水的頭部形成膜的 內(nèi)外表面層，而親油性的尾部處于膜的中間。脂質(zhì)體的送種結(jié)構(gòu)使其能夠攜帶生物制品，W 改善生物制品的保存條件。
[000引例如，公開號(hào)為CN 101444619A的專利，提供了一種重組人表皮生長(zhǎng)因子陽性離 子脂質(zhì)體及其制備方法，該方法包括：第一步：將一定質(zhì)量比的大豆磯脂和膽固醇的混合 物，加入陽離子附加劑十八胺，用無水己醇溶解；第二步：將上述混合液加入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，揮盡己醇，形成均勻的脂質(zhì)膜；第Η步：加入巧樣酸緩沖液并進(jìn)行水化處理， 得到脂質(zhì)體粗懸液；第四步：對(duì)脂質(zhì)體粗懸液進(jìn)行超聲處理，再加 W微孔濾膜整粒，得到空 白脂質(zhì)體；第五步：將重組人表皮生長(zhǎng)因子EGF溶液與生長(zhǎng)因子保護(hù)劑溶液混合物加入空 白脂質(zhì)體溶液，調(diào)節(jié)抑至6. 0-8. 0,在25-45°C條件下溫育10-40min，得到重組人表皮生長(zhǎng) 因子陽離子脂質(zhì)體。
[0006] 但是現(xiàn)有技術(shù)公開的脂質(zhì)體只包含單一的生物活性因子，營(yíng)養(yǎng)成分不全面，限制 了脂質(zhì)體的應(yīng)用，而且，復(fù)合生物活性因子包含的因子性質(zhì)各不相同，適用的抑值也不同， 所W，使用現(xiàn)有技術(shù)調(diào)節(jié)PH值賠育的方法，會(huì)造成復(fù)合生物活性因子的活性較低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的主要目的在于，提供一種復(fù)合生物活性因子脂質(zhì)體及其制備方法，提高 復(fù)合生物活性因子脂質(zhì)體的生物活性和穩(wěn)定性，且能夠延長(zhǎng)保存時(shí)間。
[000引為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0009] -方面，本發(fā)明實(shí)施例提供一種復(fù)合生物活性因子脂質(zhì)體，所述復(fù)合生物活性因 子脂質(zhì)體包括；1-5份的磯脂，0. 02-0. 2份膽固醇，0. 005-0. 01份復(fù)合生物活性因子，其中， 所述磯脂和膽固醇形成脂質(zhì)體，部分所述復(fù)合生物活性因子包封在所述脂質(zhì)體內(nèi)，形成復(fù) 合生物活性因子脂質(zhì)體，所述復(fù)合生物活性因子脂質(zhì)體的其余部分為純凈水。
[0010] 優(yōu)選的，所述復(fù)合生物活性因子至少包含：人表皮生長(zhǎng)因子hEGF、血管內(nèi)皮生 長(zhǎng)因子VEGF、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子FGF、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-目1TGF-目1、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-目2 TGF-目2、類膜島素一號(hào)增長(zhǎng)因子IGF-1、類膜島素二號(hào)增長(zhǎng)因子IGF-2、角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子 KGF、血小板衍生生長(zhǎng)因子PDGF。
[0011] 優(yōu)選的，所述磯脂由1 : 1的飽和磯脂和不飽和磯脂組成。
[0012] 優(yōu)選的，所述飽和磯脂為氨化大豆卵磯脂服PC，所述不飽和磯脂為大豆卵磯脂。
[0013] 優(yōu)選的，所述復(fù)合生物活性因子脂質(zhì)體還包括；0. 1-1份的維生素 E或者0. 1-1份 的維生素 C。
[0014] 優(yōu)選的，所述復(fù)合生物活性因子脂質(zhì)體的包封率大于等于30%。
[0015] 另一方面，本發(fā)明實(shí)施例提供一種復(fù)合生物活性因子脂質(zhì)體的制備方法，包括：
[0016] 用有機(jī)溶劑溶解1-5份磯脂和0. 02-0. 2份膽固醇，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，揮盡有機(jī)溶劑， 形成均勻透明的脂膜；
[0017] 將含0. 005-0. 01份復(fù)合生物活性因子的溶液與所述均勻透明的脂膜旋轉(zhuǎn)水合脫 膜，形成復(fù)合生物活性因子粗脂質(zhì)體；
[0018] 將所得復(fù)合生物活性因子粗脂質(zhì)體整粒成粒徑為50-100nm的復(fù)合生物活性因子 脂質(zhì)體。
[0019] 優(yōu)選的，所述旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的轉(zhuǎn)速為70-100rpm;所述旋轉(zhuǎn)水合脫膜的轉(zhuǎn)速為 40-70巧m，所述旋轉(zhuǎn)水合脫膜的溫度為20-25°C。
[0020] 優(yōu)選的，所述磯脂由1 : 1的飽和磯脂和不飽和磯脂組成，所述飽和磯脂為氨化大 豆卵磯脂HSPC，所述不飽和磯脂為大豆卵磯脂；所述有機(jī)溶劑為無水己醇或者氯仿。
[0021] 優(yōu)選的，在所述用有機(jī)溶劑溶解磯脂和膽固醇的過程中，所述有機(jī)溶劑還溶解 0. 1-1份的維生素 E ;
[0022] 或者，在將含0. 005-0. 01份復(fù)合生物活性因子的溶液與所述均勻脂膜旋轉(zhuǎn)水合 脫膜過程中，加入0. 1-1份的維生素 C。
[0023] 本發(fā)明實(shí)施例提供的復(fù)合生物活性因子脂質(zhì)體，含有多種生物活性因子，且性質(zhì) 穩(wěn)定，生物活性高，能達(dá)到60-70%，可W有效的與皮膚細(xì)胞發(fā)生作用，促進(jìn)上皮細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng) 代謝，預(yù)防皮膚受到紫外線、
[0024] 自由基等侵害，還可W促使真皮層膠原細(xì)胞的增生。因此對(duì)皮膚術(shù)后可W加速修 復(fù)，并具有撫平細(xì)紋，延緩皮膚老化等功能。
[0025] 本發(fā)明實(shí)施例提供的一種復(fù)合生物活性因子脂質(zhì)體的制備方法，在形成均勻脂膜 后，通過將復(fù)合生物活性因子的溶液與該均勻脂膜水合脫膜，可W在保證復(fù)合生物活性因 子較高活性的前提下，提高復(fù)合生物活性因子的包封率，并通過整粒，得到粒徑為50-100nm 且性質(zhì)穩(wěn)定的復(fù)合生物活性因子脂質(zhì)體，該方法工藝簡(jiǎn)單，成本合理，且所得復(fù)合生物活性 因子脂質(zhì)體所含的生物活性因子的活性可W保持60-70%，并且可冷藏保存6個(gè)月，極大地 改善了保存條件的要求。
【附圖說明】
[0026] 為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例描述 中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些 實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可W根據(jù)送些附 圖獲得其它的附圖。
[0027] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例提供的復(fù)合生物活性因子脂質(zhì)體的制備方法流程圖；
[0028] 圖2為本發(fā)明實(shí)施例中利用基因表達(dá)方式檢測(cè)復(fù)合生物活性因子脂質(zhì)體和原料 的生物活性的檢測(cè)結(jié)果示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0029] 現(xiàn)將詳細(xì)地提供本發(fā)明實(shí)施方式的參考，其一個(gè)或多個(gè)實(shí)例描述于下文。提供每 一實(shí)例作為解釋而非限制本發(fā)明。實(shí)際上，對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯而易見的是，可W對(duì) 本發(fā)明進(jìn)行多種修改和變化而不背離本發(fā)明的范圍或精神。例如，作為一個(gè)實(shí)施方式的部 分而說明或描述的特征可W用于另一實(shí)施方式中，來產(chǎn)生更進(jìn)一步的實(shí)施方式。因此，基于 本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他 實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0030] 本發(fā)明實(shí)施例所涉及的材料均可W通過商業(yè)途徑或通過申請(qǐng)人獲取。
[0031] 一方面，本發(fā)明實(shí)施例提供一種復(fù)合生物活性因子脂質(zhì)體，該復(fù)合生物活性因子 脂質(zhì)體包括；1-5份的磯脂，0. 02-0. 2份膽固醇，0. 005-0. 01份復(fù)合生物活性因子，其中，所 述磯脂和膽固醇形成脂質(zhì)體，部分所述復(fù)合生物活性因子包封在所述脂質(zhì)體內(nèi)，形成復(fù)合 生物活性因子脂質(zhì)體，所述復(fù)合生物活性因子脂質(zhì)體的其余部分為純凈水。
[0032] 優(yōu)選的，本實(shí)施例中復(fù)合生物活性因子至少包含如表1所示的生物活性因子。
[0033] 表 1
[0034]
[0035]
[0036] 其中，hEGF (中文：人表皮生長(zhǎng)因子，英文；human epidermal growth factor)，是 由53個(gè)氨基組成的生物活性多膚，藉由刺激表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體之酪氨酸磯酸化，達(dá)到 修補(bǔ)增生肌膚