實施例3 6-氯-N-(4-(6-氯煙酰胺)芐基)煙酰胺（I)的合成
[0031]
[0032] 將 1 ·53g(1 Ommo 1)化合物（II)、0 ·49g(5mmo 1)化合物（III)、0· 10g Ru/C催化劑(Ru 含量為5% (g/g))，和25mL鄰二氯苯加入到反應(yīng)瓶中，25°C下敞口攪拌反應(yīng)5小時，升溫160 °C反應(yīng)30小時，TLC監(jiān)測反應(yīng)，待反應(yīng)完全，將反應(yīng)液過濾，濾渣用二氯甲烷洗滌兩次，合并 濾液，干燥，層析柱離，制得6-氯-N-(4-(6-氯煙酰胺)芐基)煙酰胺（1)1.67g收率63%.
[0033]實施例4 6-氯-N-(4_(6-氯煙酰胺)芐基)煙酰胺（I)的合成
[0034]
[0035] 將2 · 29g(15mmo 1)化合物（II)、0 ·49g(5mmo 1)化合物（III)、0·60g Ru/C催化劑（Ru 含量為1 % (g/g))，和30mL硝基苯加入到反應(yīng)瓶中，40°C下敞口攪拌反應(yīng)3.5小時，升溫170 °C反應(yīng)24小時，TLC監(jiān)測反應(yīng)，待反應(yīng)完全，將反應(yīng)液過濾，濾渣用二氯甲烷洗滌兩次，合并 濾液，干燥，層析柱分離，制得6-氯-N-(4-(6-氯煙酰胺）芐基）煙酰胺（I)1.797g收率 67.0% .
[0036]實施例5 6-氯-N-(4_(6-氯煙酰胺)芐基)煙酰胺（I)的合成
[0037]
[0038] 將2.298(15111111〇1)化合物（11)、0.498(5111111〇1)化合物（111)、0.0758 1?11/(：催化劑 (Ru含量為10% (g/g))，和25mL鄰二氯苯加入到反應(yīng)瓶中，40°C下敞□攪拌反應(yīng)5小時，升溫 170 °C反應(yīng)22小時，TLC監(jiān)測反應(yīng)，待反應(yīng)完全，將反應(yīng)液過濾，濾渣用二氯甲烷洗滌兩次，合 并濾液，干燥，層析柱分離，制得6-氯-N-(4-(6-氯煙酰胺)芐基)煙酰胺（1)1.8g收率68%。 [0039]實施例64單胺氧化酶抑制活性的測試
[0040] (1)樣品配制
[0041 ] 將實施例1制備的化合物（I)溶于二甲基亞砜(DMS0)中，配成0.5、1、10、25、50、 100、200、400、800、1600ymol/L 濃度梯度的樣品液。
[0042] (2)6-氯-N-(4-(6-氯煙酰胺)芐基)煙酰胺（I)對單胺氧化酶-A抑制活性測試檢測 方法
[0043]向裝有371μ〇1酸緩沖液(pH=8.4)的EP管中加入15yL單胺氧化酶-A和10yL步驟 (1)配制的樣品液，再將混合物在38°C水浴中反應(yīng)3h，然后分別向上述10份EP管中加入2yL 式（珊）所示的探針7-(3-氨基丙氧基）-4-甲基香豆素（20mmol/ml)和2yL的牛血清蛋白 (BSA，20mg/mL)，并各個EP管置于38°C水浴中繼續(xù)反應(yīng)1.5h。與其同時需檢測未加抑制劑的 ΜΑ0-Α的酶活，即向裝有381μ〇1酸緩沖液(pH = 8.4)的EP管中加入15yL單胺氧化酶-A(MA〇-A)，在38°C水浴中反應(yīng)3h，再加入2yL探針（20mmol/ml)和2yL的BSA同樣也在38°C水浴中反 應(yīng)1·5h〇
[0044]
[0045] 最后在每個EP管(微量離心管）中取出100yL加入96孔板中并用全功能熒光分光光 度計（Aex/Aem = 365/460nm) (spectraMax M,美國分子儀器公司）檢測樣品。根據(jù)所測的焚 光值計算樣品的IC5Q，化合物(I)對單胺氧化酶-A活性抑制測試結(jié)果見表1。
[0046] 化合物的抑制效果用半數(shù)抑制濃度（IC5Q)來表示。IC5Q是指"反應(yīng)"被抑制一半時 抑制劑的濃度，化合物抑制能力越強(qiáng)，該數(shù)值越低。
[0047] IC5Q可以用以下方法計算：
[0048] 1)檢測并計算只加酶與探針緩沖液的平均熒光強(qiáng)度(Fm);
[0049] 2)計算含有不同濃度梯度抑制劑的各組分酶的熒光強(qiáng)度(要扣除背景值）；
[0050] 3)根據(jù)不同濃度梯度抑制劑的各組分酶的熒光強(qiáng)度做抑制劑的濃度(C)與熒光強(qiáng) 度(F)之間關(guān)系的直線回歸，建立得到方程:F = aC+b(通過回歸直線確定方程系數(shù)a和截踞 b)；
[0051 ] 4)根據(jù)方程，求F = 1 /2Fm下的對應(yīng)的抑制劑濃度，即可求出抑制率為50 %時的抑 制劑濃度，即為IC5〇
[0052] (3)6-氯-N-(4-(6-氯煙酰胺)芐基)煙酰胺（I)對單胺氧化酶-B抑制活性測試
[0053] 將單胺氧化酶A換成單胺氧化酶B，樣品配制及操作同步驟(2)，結(jié)果如表1所示。
[0054] 表1 6-氯-N-(4_(6-氯煙酰胺)芐基)煙酰胺(I)對單胺氧化酶A和B的抑制活性[a] [00551
[0056] [a]抑制劑的活性用IC5Q表示，每個樣品做5個濃度梯度，每組3個平行；[b]對酶的 選擇性用SI表不，SI: selectivity index = IC5q(MA〇-A)/IC5q(MA〇-B) 〇
[0057] 從表1可以看出，化合物（I)對單胺氧化酶A和單胺氧化酶B都有極強(qiáng)的抑制活性， 可用于制備單胺氧化酶抑制劑。
【主權(quán)項】
1.6-氯-N-(4-(6-氯煙酰胺)芐基)煙酰胺，其結(jié)構(gòu)如式(I)所示：(1)〇2. -種制備如權(quán)利要求1所述的6-氯-N-(4-(6-氯煙酰胺）芐基）煙酰胺的方法，包括： 使過量的化合物（II)和化合物（III)在Ru/C催化劑作用下進(jìn)行反應(yīng)，制得6-氯-N-(4-(6-氯 煙酰胺)芐基)煙酰胺(I);反應(yīng)式如下所示：3. 如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于:所述反應(yīng)在有機(jī)溶劑中進(jìn)行，所述有機(jī)溶劑 為鄰二氯苯或硝基苯。4. 如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于:反應(yīng)溫度在25-175°C之間，反應(yīng)時間為25-40 小時。5. 如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于:所述反應(yīng)先在25~40°C反應(yīng)3~5小時，然后 升溫至155~175°C反應(yīng)20~30小時。6. 如權(quán)利要求2~5之一所述的方法，其特征在于:化合物（II)與化合物(III)的投料摩 爾比不超過4。7. 如權(quán)利要求2~5之一所述的方法，其特征在于:Ru/C催化劑中Ru的質(zhì)量百分含量為1 ~10%，此/(：催化劑的質(zhì)量用量為每5_ 〇1化合物（111)使用0.05~0.608。8. 如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于：Ru/C催化劑的質(zhì)量用量為每5mmol化合物 (III)使用 0.05 ~0.60g。9. 如權(quán)利要求1所述的6-氯-N-(4-(6-氯煙酰胺）芐基)煙酰胺在制備單胺氧化酶抑制 劑中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了6-氯-N-(4-(6-氯煙酰胺)芐基)煙酰胺及其制備和應(yīng)用，所述6-氯-N-(4-(6-氯煙酰胺)芐基)煙酰胺的結(jié)構(gòu)如式(I)所示，其制備方法如反應(yīng)式所示。所述6-氯-N-(4-(6-氯煙酰胺)芐基)煙酰胺對于單胺氧化酶具有極強(qiáng)的抑制活性，故可用于制備單胺氧化酶抑制劑。
【IPC分類】A61P25/24, A61P25/16, C07D213/82
【公開號】CN105601563
【申請?zhí)枴緾N201510960746
【發(fā)明人】王宇光, 朱冰春, 吳中禮
【申請人】浙江工業(yè)大學(xué)
【公開日】2016年5月25日
【申請日】2015年12月17日