專利名稱：利用ZnS納米熒光探針測定奈韋拉平的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種利用半導(dǎo)體納米材料硫化鋅作為熒光探針測定奈韋拉平的方法， 屬光分析檢測技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
納米材料作為納米技術(shù)的重要研究對象，是現(xiàn)代科學(xué)研究中的一個重要方向。量子限域效應(yīng)使得納米材料與宏觀體相材料相比具有許多奇異的性能，如表面效應(yīng)、量子尺寸效應(yīng)和宏觀隧道效應(yīng)等。受這些效應(yīng)的影響，納米粒子表現(xiàn)出了有別于大塊物質(zhì)的特異的光、電、磁、熱、力學(xué)、機械等性能，利用其特殊的發(fā)光性能，人們可以把它作為納米熒光探針，應(yīng)用到各個領(lǐng)域中去。與傳統(tǒng)的有機熒光染料相比，納米熒光探針具有更加優(yōu)越的性能，例如寬且連續(xù)的激發(fā)光譜、窄且對稱的發(fā)射光譜、可精確調(diào)諧的發(fā)射波長、較長的熒光壽命以及可忽略的光漂白等，這些特征使得納米熒光探針越來越多的代替有機熒光染料應(yīng)用到熒光標(biāo)記、定量檢測等各個方面。其中，納米熒光探針在生命科學(xué)研究中的應(yīng)用受到了高度的關(guān)注，并迅速成為一個研究的熱點，已報道的大部分集中于熒光探針的識別和成像方面，如在研究與生物大分子如蛋白質(zhì)、核酸、DNA之間的相互作用，細(xì)胞的熒光標(biāo)記與成像以及活體成像等方面的應(yīng)用。與此同時，基于熒光猝滅或增敏的熒光探針定量檢測技術(shù)發(fā)展亦非常迅速。現(xiàn)如今被檢測的物質(zhì)主要有重金屬離子、無機離子、蛋白質(zhì)、維生素等，而利用半導(dǎo)體納米粒子測定藥物方面的應(yīng)用還并不多見。奈韋拉平是一種新型的非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，它可以抑制HIV-I的逆轉(zhuǎn)錄酶，抑制病毒復(fù)制，降低其致病性，具有口服吸收良好、毒性低等優(yōu)點。臨床上與抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物(如齊多夫定、地達諾辛)合用進行三聯(lián)療法，用于治療艾滋病病毒感染，單獨用藥可用于預(yù)防HIV感染和母嬰傳播。患者在服用奈韋拉平時必須嚴(yán)格遵守劑量要求，并且在治療期的初始8周，應(yīng)該對患者情況進行嚴(yán)密的監(jiān)測，以便及時發(fā)現(xiàn)潛在的嚴(yán)重和威脅生命的皮膚反應(yīng)或嚴(yán)重的肝炎、肝衰竭。有報道應(yīng)用奈韋拉平治療的患者中曾產(chǎn)生過嚴(yán)重的危及生命的皮膚反應(yīng)，包括Stevens-Johnson綜合征(SJS)、毒性表皮壞死溶解(TEN)、以皮疹、全身癥狀和內(nèi)臟受損為特點的過敏反應(yīng)。因此，建立一種簡單、快速、靈敏、準(zhǔn)確檢測奈韋拉平含量的分析方法在臨床醫(yī)學(xué)及藥理學(xué)研究方面有著重要的意義。目前對于奈韋拉平的測定方法有氣相色譜法、高效液相色譜-UV法、高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法、膠束電動色譜法、毛細(xì)管區(qū)帶電泳法等，但是使用納米熒光探針測定這種藥物的方法還未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種利用半導(dǎo)體納米材料硫化鋅作為納米熒光探針測定奈韋拉平藥物的方法。一種利用半導(dǎo)體納米材料硫化鋅作為納米熒光探針測定奈韋拉平的方法，其特征在于具有以下的過程和步驟
A. ZnS納米熒光探針的制備取0. 0100 g合成的白色納米ZnS納米顆粒于燒杯中，力口入一定量的二次蒸餾水，置于自動攪拌裝置上不斷攪拌；向燒杯中緩慢滴入配制好的0.10 M的NaOH溶液，調(diào)節(jié)溶液的pH值至12左右；取大約2. 0 ml的巰基乙酸于另一燒杯中，用二次蒸餾水將其稀釋至PH值為2左右；而后用稀釋后的巰基乙酸溶液逐滴加入納米ZnS溶液中，直至溶液PH值在9左右；繼續(xù)不斷地攪拌上述溶液約3 h。修飾后的納米ZnS溶液上層為溶膠，燒杯底部可見少量白色溶膠沉淀，用滴管吸取上層溶液即ZnS納米熒光探針。B.熒光測試條件的選擇設(shè)置激發(fā)波長為268 nm，此波長處奈韋拉平?jīng)]有吸收峰存在，而且熒光發(fā)射峰峰形較窄、強度較強；設(shè)置激發(fā)和發(fā)射狹縫寬度均為5 nm,掃描范圍設(shè)置為278 nm至350 nm ；
C. ZnS納米熒光探針對奈韋拉平的測定在一系列棕色、干燥的25 ml容量瓶中加入一系列已知濃度的奈韋拉平標(biāo)準(zhǔn)溶液和1 ml已經(jīng)合成好的巰基乙酸修飾的ZnS溶液。然后將其用磷酸緩沖溶液稀釋后定容至刻度。將配好的溶液在黑暗處放置一定的時間后做熒光測試。通過熒光光譜分析發(fā)現(xiàn)，ZnS納米熒光探針的熒光強度隨奈韋拉平濃度的增大而降低。在4.6 μΜ 200 μ M范圍內(nèi)，ZnS納米熒光探針的相對熒光強度與此濃度范圍內(nèi)奈韋拉平的濃度呈線性關(guān)系。本發(fā)明的優(yōu)點和特點如下所述
本發(fā)明利用半導(dǎo)體納米粒子獨特的光學(xué)特性，大的比表面積以及一些與尺寸相關(guān)的性質(zhì)，把半導(dǎo)體納米粒子作為納米熒光探針去檢測藥物。通過優(yōu)化溫度、加入順序、PH值和 ZnS熒光探針與奈韋拉平的反應(yīng)時間，得出了測定的最佳條件。由于量子點的光學(xué)特性依賴于它的表面性質(zhì)，量子點表面與分析物質(zhì)的相互作用會引起其光學(xué)性能的動態(tài)變化，因此在最佳條件下可以利用其作為熒光探針對分析物質(zhì)進行檢測。本發(fā)明中的巰基乙酸修飾ZnS納米熒光探針是一種新型的熒光試劑，通過優(yōu)化測試條件，能夠直接用于奈韋拉平的快速測定，具有簡單、快速、靈敏、準(zhǔn)確等特點。


圖1為本發(fā)明中用巰基乙酸修飾的ZnS納米熒光探針測定不同濃度奈韋拉平的熒光光譜圖。C(1(T7 mol/L)為)(A) 0，(B): 46，(C): 160，(D) 280，(E) 400， (F): 640，(G) 880，(H): 1200，(S) 1600，(J) 2000。從圖中可以看出，隨著奈韋拉平濃度的增加，ZnS納米熒光探針的熒光強度逐漸降低。圖2為本發(fā)明中ZnS納米熒光探針與不同濃度奈韋拉平存在下的相對熒光強度與奈韋拉平濃度的線性關(guān)系圖。
具體實施例方式
現(xiàn)將本發(fā)明的具體實施例敘述于后。 本實施例中的利用巰基乙酸修飾的ZnS納米熒光探針測定奈韋拉平的步驟如下 A. ZnS納米粒子的制備準(zhǔn)確稱取0. 7161 g鋅粉和0. 1172 g硫粉(摩爾比3:1)，一起放入規(guī)格為30 ml的聚四氟乙烯高壓反應(yīng)釜的內(nèi)襯中，然后加入25 ml配制好的3 M的 NaOH溶液；密封后置于烘箱內(nèi)在180°C溫度下反應(yīng)24 h。反應(yīng)完畢關(guān)閉烘箱，待聚四氟乙烯高壓容器自然冷卻至室溫；吸取上層清夜，將內(nèi)襯底部產(chǎn)物倒入燒杯，加入去離子水超聲、 離心、洗滌，接著用無水乙醇代替去離子水超聲、離心、洗滌數(shù)次直至超聲后燒杯底部無殘留固體顆粒為止；將離心后的產(chǎn)物以適量無水乙醇稍作分散，倒在表面皿上，置于烘箱內(nèi)， 在80 ！下加熱烘干產(chǎn)物，得到0. 12794 g ZnS納米粒子。B. ZnS納米熒光探針的制備取0.0100 g合成的白色納米ZnS納米顆粒于燒杯中，加入一定量的二次蒸餾水，置于自動攪拌裝置上不斷攪拌；想燒杯中緩慢滴入配制好的 0. 10 M的NaOH溶液，調(diào)節(jié)溶液的pH值至12左右；取大約2. 0 ml的巰基乙酸于另一燒杯中，用二次蒸餾水將其稀釋至PH值為2左右；而后用稀釋后的巰基乙酸溶液逐滴加入納米 ZnS溶液中，直至溶液pH值在9左右；繼續(xù)不斷地攪拌上述溶液約3 h。修飾后的納米ZnS 溶液上層為溶膠，燒杯底部可見少量白色溶膠沉淀，用滴管吸取上層溶液即ZnS納米熒光探針。 C.該納米熒光探針的使用方法及測定如下在一系列棕色、干燥的25 ml容量瓶中加入一系列已知濃度的奈韋拉平標(biāo)準(zhǔn)溶液和1 ml已經(jīng)合成好的巰基乙酸修飾的ZnS溶液。通過優(yōu)化實驗條件，把加入的溶液用pH=7的磷酸緩沖溶液稀釋后定容至刻度，將配好的溶液在黑暗處放置1 h后做熒光測試。設(shè)置激發(fā)波長為268 nm，此波長處奈韋拉平?jīng)]有吸收峰存在。設(shè)置激發(fā)和發(fā)射狹縫寬度均為5 nm,掃描范圍設(shè)置為278 nm至350 nm。熒光分析方法檢測奈韋拉平
在最佳測試條件下，如圖1所示，ZnS納米熒光探針的熒光強度隨奈韋拉平濃度的增大而降低。在4.6 μΜ 200 μ M范圍內(nèi)，ZnS納米熒光探針的相對熒光強度與此濃度范圍內(nèi)奈韋拉平的濃度呈線性關(guān)系，如圖2所示。線性方程為log(FQ/F)=0. 00729+6. 00846*103C (C, ΙΟ — 7 Μ)，線性相關(guān)系數(shù)為0.9996。本發(fā)明利用巰基乙酸修飾的ZnS納米熒光探針測定奈韋拉平的方法具有簡單、快速、靈敏、準(zhǔn)確的特點。用ZnS納米熒光探針測定奈韋拉平時，一些常見的金屬陽離子、陰離子、小分子生物分子對測定并無干擾。通過回收率實驗測定，回收率在95. 9%至101. 3%之間。其最低檢出限為0.73 μ M0
權(quán)利要求
1.利用硫化鋅納米熒光探針測定奈韋拉平的方法，其特征在于該方法具有以下的步驟A.ZnS納米熒光探針的制備取0.0100 g合成的白色納米ZnS納米顆粒于燒杯中，力口入一定量的二次蒸餾水，置于自動攪拌裝置上不斷攪拌；向燒杯中緩慢滴入配制好的0. 10 M的NaOH溶液，調(diào)節(jié)溶液的pH值至12 ；取2. 0 ml的巰基乙酸于另一燒杯中，用二次蒸餾水將其稀釋至PH值為2 ；而后用稀釋后的巰基乙酸溶液逐滴加入納米ZnS溶液中，直至溶液 PH值在9 ；繼續(xù)不斷地攪拌上述溶液約3 h ；修飾后的納米ZnS溶液上層為溶膠，燒杯底部可見少量白色溶膠沉淀，用滴管吸取上層溶液即ZnS納米熒光探針；B.熒光測試條件的選擇設(shè)置激發(fā)波長為268nm，設(shè)置激發(fā)和發(fā)射狹縫寬度均為5 nm,掃描范圍設(shè)置為278 nm至350 nm ；C.ZnS納米熒光探針對奈韋拉平的測定在一系列棕色、干燥的25 ml容量瓶中加入一系列已知濃度的奈韋拉平標(biāo)準(zhǔn)溶液和1 ml已經(jīng)合成好的巰基乙酸修飾的ZnS溶液；然后將其用pH=7磷酸緩沖溶液稀釋后定容至刻度；將配好的溶液在黑暗處放置1 h后做熒光測試；在4.6 μ M ^ 200 μ M范圍內(nèi)，利用ZnS納米熒光探針的相對熒光強度與奈韋拉平濃度的線性關(guān)系測定奈韋拉平。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種利用巰基乙酸修飾的ZnS納米顆粒作為納米熒光探針對奈韋拉平的快速測定方法，屬光分析檢測技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明主要是利用ZnS納米熒光探針與待測物奈韋拉平發(fā)生作用后熒光強度發(fā)生變化，通過熒光光譜分析對奈韋拉平進行靈敏的定量分析測定。本發(fā)明的要點是通過優(yōu)化溫度、加入次序、pH值和反應(yīng)時間這些實驗條件，在最佳條件下將熒光探針應(yīng)用于奈韋拉平的定量檢測。本發(fā)明的測定過程具有簡單、快速、靈敏、準(zhǔn)確等特點。
文檔編號C09K11/56GK102435592SQ20111034479
公開日2012年5月2日 申請日期2011年11月4日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月4日
發(fā)明者丁亞平, 李麗, 程瑜, 羅立強, 陸雅翔 申請人:上海大學(xué)