一株彎曲假單胞菌及其應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一株彎曲假單胞菌及其應用，本發(fā)明分離得到彎曲假單胞菌PQ01，其在厭氧條件下能夠氧化降解百草枯，PQ01對難降解鹵素化合物DDT和四溴雙酚A亦具有良好的降解能力，且其電子利用譜廣，在有機污染土壤修復及廢水處理領域具有良好的應用前景。
【專利說明】一株彎曲假單胞菌及其應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及環(huán)境微生物【技術領域】，特別涉及一株分離于土壤的具有百草枯厭氧降解特性的彎曲假單胞菌iPseudomonas geniculata PQOI)及其應用。
【背景技術】
[0002]百草枯(Paraquat，PQ)是一種速效觸殺型滅生性除草劑，對大多數(shù)單子葉和雙子葉植物有很強的破壞作用，廣泛用于免耕種植、快速輪作、直播水稻等農(nóng)林生產(chǎn)中，用量僅次于除草劑草甘膦。百草枯在土壤中長期殘留，半衰期長達644天，且PQ具有很強的環(huán)境毒性，如:干擾土壤酶活性、影響魚蛙免疫系統(tǒng)、抑制土壤中微生物群落結構等，長期殘留PQ造成的環(huán)境污染已不容忽視。因此，PQ的降解與殘留控制受到業(yè)內(nèi)廣泛關注。
[0003]百草枯在土壤中的轉化以微生物降解為主。土壤中存在百草枯耐受菌群，這類菌能以百草枯為唯一碳源或氮源，或以共代謝形式進行呼吸代謝，并且目前已從土壤中分離得到百草枯好氧降解菌株，如真菌Neocosmospora basinfec ia、酵母菌Zipomycesstarkeyi。厭氧濕熱土壤中百草枯的轉化速率較好氧轉化快,且以微生物降解為主,但純培養(yǎng)的厭氧百草枯降解菌尚未見報道。目前尚無利用彎曲假單胞菌降解百草枯的文獻報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一株彎曲假單胞菌及其應用。
[0005]本發(fā)明所采取的技術方案是:
本發(fā)明提供的彎曲假單胞菌iPsoudomorms geniculata )PQOI,于2014年3月26日保藏于位于湖北武漢市武漢大學的中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏中心給予該菌株的保藏號為 CCTCC NO: M 2014107，建議的分類命名為 Aewi/offioaas geniculata PQOl0
[0006]本發(fā)明從多年使用百草枯的蔬菜地土壤中富集分離得到彎曲假單胞菌(.Pseudomonas) PQOI,其在厭氧條件下能夠氧化降解百草枯，PQOl對難降解齒素化合物DDT和四溴雙酚A亦具有良好的降解能力，且其電子利用譜廣，在有機污染土壤修復及廢水處理領域具有良好的應用前景。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0007]圖1是彎曲假單胞菌PQOl的16S rRNA系統(tǒng)發(fā)育樹；
圖2是PQOl利用不同電子供體還原AQDS的效果圖；
圖3是PQOl利用蔗糖為電子供體還原針鐵礦的效果圖；
圖4是PQOl厭氧降解DDT和四溴雙酚A的效果圖。
【具體實施方式】
[0008]下面結合具體實施例，進一步闡述本
【發(fā)明內(nèi)容】
。
[0009] 彎曲假單胞菌PQOl的富集與分離:1)取5g 土壤樣品(取自多年使用百草枯的蔬菜地)于IOOmL厭氧液體培養(yǎng)基中，每升培養(yǎng)基中含200mg百草枯標準品(純度> 98%)、0.412g AQDS (蒽醌-2，6- 二苯磺酸，電子受體，腐殖質(zhì)模式物)、2.5g NaHCO3^0.25g NH4CU0.68g NaH2PO4.2Η20、0.Ig KCl,10.0mL維生素儲備液、10.0mL微量元素儲備液。其中，維生素溶液是每升去離子水中含5.0mg葉酸、0.2mg維生素B6、6.5mg維生素Β2、3.0mg維生素BlUOmg煙酰胺、Img泛酸鈣、0.2mg維生素B12、2.0mg維生素H ;微量元素溶液是每升去離子水中含1.6g乙二胺四乙酸、3.0gMgSO4.7Η20、0.5g MnSO4.Η20、1.0g NaCl、0.1g CoCl2.6Η20、0.Ig CaCl2,0.01g CuSO4.5Η20、
0.01g AlK(SO4)2.12Η20、0.01g H3BO3>0.025g Na2MoO4.2Η20。向上述土壤-培養(yǎng)基體系中鼓充高純氮氣20分鐘排氧，充氣完畢立即蓋橡膠蓋并加壓鋁蓋密封，30°C靜置避光培養(yǎng)，觀察培養(yǎng)液的顏色變化情況；
2)當培養(yǎng)液顏色由無色變?yōu)槌壬敝敛辉僮兓瘯r，以10%的接種量轉接富集培養(yǎng)三
次；
3)最后一次富集培養(yǎng)液變?yōu)槌壬螅M行適當稀釋后均勻涂布于YPG固體培養(yǎng)基上(NaCl 5 g/L，牛肉浸膏3 g/L，細菌學蛋白胨5 g/L，酵母提取粉5 g/L，瓊脂粉15-20 g/L)，30°C培養(yǎng)48h，挑取單菌落進行單菌落分離與純化；
4)將純化得到的單菌落重新接到新鮮的厭氧液體培養(yǎng)基中，靜置厭氧培養(yǎng)。
[0010]彎曲假單胞菌PQOl的形態(tài)、生理生化及分子生物學特征:
I)菌體形態(tài)特征
光學顯微鏡下觀察，該菌株為革蘭氏陰性菌，直桿狀。
[0011]2)菌落形態(tài)特征
在pH為8.0的YPG瓊脂固體培養(yǎng)基平板上30°C好氧培養(yǎng)48小時后，菌落濕潤，表面光滑，半透明，邊緣整齊，菌落直徑為2~3mm。
[0012]3)生理生化特征
非發(fā)酵、兼性厭氧；生長溫度范圍25~37°C、pH范圍5~8、NaCl%范圍O~5 ;其他生理生化特征見表1。
[0013]表1彎曲假單胞菌PQOl的生理生化特性
【權利要求】
1.一株彎曲假單胞菌，其保藏編號為CCTCC NO: M 2014107。
2.保藏編號為CCTCCNO: M 2014107的彎曲假單胞菌在降解百草枯中的應用。
3.保藏編號為CCTCCNO: M 2014107的彎曲假單胞菌在鐵氧化物還原、腐殖質(zhì)還原中的應用。
4.保藏編號為CCTCCNO: M 2014107的彎曲假單胞菌在降解DDT、四溴雙酚A中的應用。
【文檔編號】C02F101/38GK103952342SQ201410151465
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2014年4月16日 優(yōu)先權日:2014年4月16日
【發(fā)明者】武春媛, 陳珊珊, 李勤奮, 鄧曉 申請人:中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院環(huán)境與植物保護研究所