專(zhuān)利名稱：一種復(fù)式微囊及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，確切地說(shuō)它是一種復(fù)式微囊及其制備方法。該發(fā)明的復(fù)式微囊可用于包裹化學(xué)藥物、中藥、生物制品藥物、細(xì)胞、組織塊等，能控制藥物口服或注射后在體內(nèi)釋藥部位藥物釋放的速度，而且可用于細(xì)胞、組織的體內(nèi)外培養(yǎng)，酶的固定，生物藥物的血管內(nèi)移植。
背景技術(shù)：
微囊劑是近20多年興起的技術(shù)，在國(guó)外已得到了廣泛的應(yīng)用。除了香料、化妝品、紡織等產(chǎn)業(yè)，微囊劑也在藥品、保健品上被廣泛使用，比如用于加工口腔速崩劑和易氧化、易分解、口味不佳的藥物。
微囊系利用天然的或合成的高分子材料(統(tǒng)稱為囊材)作為囊膜壁殼，將固態(tài)或液態(tài)藥物包裹成為藥庫(kù)型微型膠囊。微囊的優(yōu)點(diǎn)包括可制成多種藥物制劑；液態(tài)藥物可改制成固體劑型；延緩藥物釋放，制備緩釋長(zhǎng)效制劑；掩蓋藥物的不良嗅味，可易于吞服；減少?gòu)?fù)方藥物的配伍變化；改善口服藥物消化道副反應(yīng)；提高藥物的穩(wěn)定性，減少?gòu)?fù)方制劑的配伍禁忌；使藥物在靶部位起作用；半透性微囊對(duì)酶制劑還有特殊的效應(yīng)，如門(mén)冬酰胺酶對(duì)人體具免疫反應(yīng)，如將其制成不溶化半透性微囊，可使血液能通過(guò)半透膜與門(mén)冬酰胺酶作用以治療白血病；微囊還可改善某些藥物的物理特性，如可壓性與流動(dòng)性。應(yīng)用最多的微囊優(yōu)點(diǎn)是通過(guò)微囊化方法形成緩控釋制劑和靶向制劑；一些微囊還可以將活細(xì)胞或者生物活性物質(zhì)包裹在囊內(nèi)。微囊的囊材要無(wú)毒無(wú)刺激、化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、具有適宜的釋藥性、有一定的強(qiáng)度、有合格的粘度等特性，常用的囊材主要有天然高分子囊材，如明膠、阿拉伯膠、瓊脂、海藻酸及其鹽、殼聚糖等；半合成高分子囊材，如羧甲基纖維素鈉、醋酸纖維素碳酸酯、乙基纖維素、甲基纖維素、羥丙基纖維素；合成高分子囊材包括生物降解的聚碳酯、聚氨基酸、聚乳糖、丙交酯乙交酯共聚物、聚乳酸-聚乙二醇嵌段共聚物，非生物降解的聚酰胺、硅橡膠等。微囊的外形可取決于囊心物質(zhì)的性質(zhì)和囊材的凝聚方式及操作熟練程度，囊形可呈球狀實(shí)體或呈平滑的球狀膜殼形、串珠形以及表面平滑、折疊的不規(guī)則結(jié)構(gòu)等。各種形狀微囊的直徑，常用者為幾微米 幾十微米。制成的微囊可供散劑、膠囊劑、顆粒劑、沖劑、片劑、丸劑、注射劑、植入劑及軟膏劑等各種劑型制備的基礎(chǔ)原料。將酶、蛋白質(zhì)和激素等生物活性物質(zhì)包封在選擇性透過(guò)膜中，形成球狀微膠囊，稱之為“生物微膠囊”。通過(guò)微膠囊膜的選擇透過(guò)作用，使囊外大于某一分子量的物質(zhì)不能擴(kuò)散進(jìn)入，而生物環(huán)境中的營(yíng)養(yǎng)成分和囊內(nèi)生物活性物質(zhì)或細(xì)胞分泌的小分子產(chǎn)物可以自由出入微膠囊，從而達(dá)到免疫隔離目的。微囊可擴(kuò)展油類(lèi)原料在工業(yè)和日常生活中的應(yīng)用。如胡蘿卜素、維生素Α、維生素Ε、魚(yú)油、月見(jiàn)草油、葡萄子油、蘇子油等油類(lèi)物質(zhì)利用常規(guī)工藝難以加工成固體劑，而利用微囊劑可將油類(lèi)加工成固體劑，從而進(jìn)一步加工成片劑、膠囊劑甚至粉狀物等固體產(chǎn)品O
另外，利用微囊劑技術(shù)還可將其它各種保健油類(lèi)原料加工成無(wú)味粉狀物并加入到牛奶、咖啡、等食品里，從而大大擴(kuò)展了魚(yú)油等油類(lèi)保健品的應(yīng)用范圍。隨著材料工藝學(xué)日新月異的發(fā)展，一些價(jià)廉物美的新材料被陸續(xù)開(kāi)發(fā)成為適合加工成微囊外殼的新原料，微囊劑的生產(chǎn)成本開(kāi)始大幅下降。按其性質(zhì)的不同，目前國(guó)外已開(kāi)發(fā)使用的囊殼材料主要有以下6類(lèi)I、多糖/水凝膠類(lèi)物質(zhì)，如淀粉、褐藻膠、瓊脂、果膠、卡拉膠(角叉菜膠)及其它膠類(lèi)。2、蛋白質(zhì)及白蛋白，如明膠、酪胺、玉米蛋白、大豆蛋白與白蛋白等。3、脂肪與脂肪酸類(lèi)，如甘油單酯、甘油雙酯和甘油三酯、月桂酸、辛酸、棕櫚酸、硬脂酸及其鹽。
4、纖維素酯類(lèi)，如甲基纖維素、乙基纖維素、CMC、HPMC等等。5、親水性與親油性蠟，如蟲(chóng)膠、蜂蠟、巴西棕櫚蠟和大分子聚乙二醇等。6、蔗糖衍生物，如蔗糖脂肪酸酯等，這類(lèi)物質(zhì)具有良好的水溶性以及很好的成膜堅(jiān)牢度，故非常適合魚(yú)油、月見(jiàn)草油和VE、VA及其它油狀原料加工成微囊劑。制備微囊的過(guò)程稱為微囊化，常用的微囊化方法有物理化學(xué)方法、物理機(jī)械方法、化學(xué)法。傳統(tǒng)的微囊加工技術(shù)采用水法加工，即利用雙噴嘴將噴出液滴狀微囊經(jīng)自由落體落入事先裝有冷卻水的盛盤(pán)里。柔軟的熱微囊在冷卻水中迅速冷卻，由于水的張力作用而自動(dòng)成為圓珠狀囊體，最后經(jīng)干燥即成為成品。這一技術(shù)目前在世界各地的不少企業(yè)仍在使用；因其工藝簡(jiǎn)單，無(wú)需復(fù)雜的干燥設(shè)備，故非常適合中小型制藥公司采用。由于微囊劑的應(yīng)用范圍逐漸擴(kuò)大，所以對(duì)其技術(shù)的開(kāi)發(fā)也隨之不斷加深，比如將微囊劑加工成直徑僅I微米左右的超微微囊，可用于進(jìn)一步開(kāi)發(fā)成口腔快溶片、速崩片或腸溶片等全新劑型，這為新藥的順利開(kāi)發(fā)奠定了基礎(chǔ)。微囊劑加工技術(shù)在藥品、保健品生產(chǎn)或其它各行各業(yè)中有著巨大發(fā)展空間，某些原料在加工成微囊劑后可大大提高其實(shí)用性。在可以預(yù)見(jiàn)的將來(lái)，微囊劑將成為國(guó)際醫(yī)藥市場(chǎng)上最常見(jiàn)的產(chǎn)品之一，其市場(chǎng)前景極其光明。國(guó)內(nèi)對(duì)微囊的研究，有用桃膠、CAP、CMC等多聚物與明膠等作為囊材，用復(fù)凝聚法包囊及用明膠或CAP單凝聚微囊工藝也取得一定的進(jìn)展，并開(kāi)展了水溶性藥物如硫酸軟骨素，以及聚乙二醇6000為囊材進(jìn)行包囊的研究，初步探索了驅(qū)絳蟲(chóng)藥鶴草酚微囊的體外釋放試驗(yàn)；在中藥制劑方面也采用了復(fù)凝聚法，將牡荊油制成了牡荊油微囊片。另外有的單位對(duì)黃荊葉油、線葉菊油等也進(jìn)行了研究；有的單位對(duì)大蒜中所含O. 2%揮發(fā)油進(jìn)行了研究，油中大蒜辣素與大蒜新素在光線、溫度影響下易氧化及對(duì)消化道粘膜有刺激性，經(jīng)將大蒜揮發(fā)油制成大蒜素微囊后，不但使液態(tài)藥物變成了固態(tài)劑型，并提高了穩(wěn)定性，掩蓋了強(qiáng)烈的刺激嗅辣味，并經(jīng)臨床觀察155例急慢性菌痢，有效率達(dá)94. 2%。自從1980年加拿大多倫多大學(xué)生理研究室Lim和孫綿方(A. M. Sun)教授發(fā)明了海藻酸鈉-聚賴氨酸-海藻酸鈉(alginate-polylysine_alginate,APA)微囊以來(lái),生物活性細(xì)胞或組織的APA微囊化移植已經(jīng)成為了臨床上進(jìn)行生物細(xì)胞或組織移植治療體內(nèi)相關(guān)臟器或組織功能缺失病癥的最有前景的實(shí)驗(yàn)方法。但微囊的大小、強(qiáng)度、通透性及移植細(xì)胞的活性直接關(guān)系到細(xì)胞或組織在體內(nèi)的移植部位、存活的時(shí)間、副作用等一系列根本性問(wèn)題。如果微囊太小，則細(xì)胞可能包裹不佳，微囊的缺陷率也隨著微囊囊形變小而增加，移植部位選擇困難，小微囊強(qiáng)度不夠，微囊破裂造成細(xì)胞外泄，必然會(huì)引起排斥反應(yīng)；大微囊的囊形缺陷率較小，而且強(qiáng)度較高，但營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的交換和細(xì)胞的生長(zhǎng)困難，體積較大也會(huì)導(dǎo)致易引起機(jī)體的排斥反應(yīng)；大微囊液化囊心較差，也易導(dǎo)致通透性不好，直接影響微囊的免疫隔離和對(duì)內(nèi)源性物質(zhì)的應(yīng)答效果。殼聚糖是一種多功能材料，無(wú)毒、化學(xué)穩(wěn)定性好，制備海藻酸鈣-殼聚糖微膠囊通常是將制得的海藻酸鈣芯粒子懸浮在配制好的殼聚糖鈣鹽膠體溶液中形成膜，制備條件溫和，不需要有機(jī)溶劑，適合于有生物活性的蛋白質(zhì)類(lèi)藥物，在化工、食品科學(xué)等也有很好的應(yīng)用。但其囊膜的通透性和機(jī)械強(qiáng)度依然是困擾其廣泛應(yīng)用的兩大因素。文獻(xiàn)報(bào)道Ca2+和Ba2+也均可與殼聚糖成膜，用來(lái)制備微囊。本發(fā)明結(jié)合了小微囊和大微囊的優(yōu)勢(shì)，制備了一種復(fù)式微囊，復(fù)式微囊外囊直徑可以為I 5mm,而小囊直徑可為50 800 μ m,兩種微囊材料均為微囊制備的常用材料,夕卜囊的優(yōu)點(diǎn)是強(qiáng)度高、完整性好、隔離效果好，而內(nèi)囊的優(yōu)點(diǎn)是死體積小、比表面積大、藥物包封率高，但內(nèi)囊因?yàn)轶w積較小而存在破損率大，免疫隔離效果差，強(qiáng)度稍差等缺點(diǎn)，可被外 囊彌補(bǔ)；外囊也可以延緩內(nèi)囊中藥物的釋放，避免內(nèi)囊中藥物的快速釋放，增加了內(nèi)囊的免疫隔離效果，也可以使藥物的包封率、載藥量、穩(wěn)定性進(jìn)一步提高，包裹細(xì)胞或生物組織的復(fù)囊還可進(jìn)一步減少一些小分子物質(zhì)對(duì)內(nèi)囊中細(xì)胞的破壞。以此制備的復(fù)式微囊，具有如下優(yōu)點(diǎn)1、可以實(shí)現(xiàn)內(nèi)囊中較小的死體積和較大的比較面積，使組織細(xì)胞在內(nèi)囊中存活時(shí)，保持較好的活性；2、外囊體積增大，使其在體內(nèi)外應(yīng)用時(shí)途徑增加，可制成口服緩控釋制劑；3、一旦外囊破裂或表面有變形，導(dǎo)致通透性增力口，免疫系統(tǒng)也不會(huì)馬上對(duì)內(nèi)囊中的移植細(xì)胞產(chǎn)生排異反應(yīng)；4、由于外囊的阻隔，因此外囊即使皺縮內(nèi)囊也不會(huì)流出到大囊外，可以防止內(nèi)囊中物質(zhì)的外流；5、包裹細(xì)胞或生物組織進(jìn)行體外培養(yǎng)或體內(nèi)移植的復(fù)囊，由于外囊和內(nèi)囊的阻隔，培養(yǎng)液中和體內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)能夠進(jìn)入內(nèi)囊中營(yíng)養(yǎng)囊內(nèi)細(xì)胞，而宿主的免疫隔離系統(tǒng)則更難進(jìn)入內(nèi)囊中，使免疫隔離效果更好，內(nèi)囊中的細(xì)胞核組織分泌的活性物質(zhì)可以產(chǎn)生治療效果；6、外囊和內(nèi)囊中可分別包裹化學(xué)藥物、中藥、生物細(xì)胞或組織，抗凝劑、生長(zhǎng)因子等物質(zhì)，可幫助移植物存活和增加防凝抗凝效果。而單囊藥物釋放速度較快，小微囊的缺陷率也較大。對(duì)于復(fù)式乳劑的制備，國(guó)內(nèi)已有穩(wěn)定的復(fù)乳劑(200880021575. 4)，該專(zhuān)利對(duì)復(fù)乳的制備進(jìn)行了研究；其余(I)由復(fù)乳法制造緩釋性微球的方法(00128884.9)，(2)復(fù)乳法制備磁性高分子微球(200310113439. 7)等，也均是用復(fù)乳的制備方法，來(lái)制備相關(guān)的緩控釋微球；其他相關(guān)微囊的專(zhuān)利也有(I)利用海藻酸鈉-殼聚糖-海藻酸鈉微囊包埋細(xì)胞或組織的方法(02116987. X)，(2)注射用莪術(shù)油毫微囊凍干粉針及其制備工藝(01131732. 9)等多項(xiàng)專(zhuān)利申請(qǐng)，但均為制備成單囊，制備工藝簡(jiǎn)單，但藥物的包封率、穩(wěn)定性、釋放等依然變動(dòng)較大，處方、工藝復(fù)雜，甚至無(wú)緩控釋效果。本復(fù)式微囊制備的給藥系統(tǒng)與單囊制劑及復(fù)乳制劑相比，具有藥物選擇范圍大、釋放更可控、處方簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性好、制備工藝簡(jiǎn)單、重復(fù)率高、成本低、效率高等優(yōu)點(diǎn)，本復(fù)式微囊系統(tǒng)在人工胃液中不溶，藥物釋放較慢，在人工腸液中藥物緩慢溶解，在水中藥物釋放也較慢，使藥物能在胃腸道和機(jī)體其他部位內(nèi)緩慢釋放
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了提供一種制備簡(jiǎn)單、藥物選擇范圍廣，并能使藥物緩慢釋放的復(fù)式微囊給藥系統(tǒng)及其制備方法。與單囊相比，本發(fā)明在藥物緩控釋和體內(nèi)外應(yīng)用上優(yōu)勢(shì)明顯，其免疫隔離效果得到了大大提高。本發(fā)明的目的是這樣來(lái)實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明的一種復(fù)式微囊及其制備方法，其復(fù)式微囊由1-100個(gè)內(nèi)囊再外包I層外囊構(gòu)成，內(nèi)囊包裹化學(xué)藥物、中藥、生物細(xì)胞和組織樣品中的一種或幾種組合，外囊為包裹內(nèi)囊、化學(xué)藥物、中藥、生物細(xì)胞和組織樣品中的一種或幾種組合。所述的一種復(fù)式微囊及其制備方法，其在內(nèi)囊完成的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步混懸至外囊成囊溶液中，進(jìn)行二次成囊，在幾個(gè)內(nèi)囊外形成一層外囊，添加凍干保護(hù)劑進(jìn)行冷凍干燥或添加細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行體外培養(yǎng)。所述的一種復(fù)式微囊及其制備方法，其內(nèi)囊的成囊材料為以海藻酸鈉、氯化鈣、 氯化鋇、殼聚糖、聚左賴氨酸等為成囊材料，海藻酸鈉為符合美國(guó)和中國(guó)藥典的可食用和藥用輔料，用作紡織品的上漿劑和印花漿，同時(shí)作為增稠劑、穩(wěn)定劑、乳化劑大量應(yīng)用于食品工業(yè)中；我國(guó)規(guī)定可用于各類(lèi)食品，按生產(chǎn)需要適量使用。具有使膽固醇排出體外，抑制Pb、Cd、Sr被人體吸收以及保護(hù)胃腸道、整腸、減肥、降血糖的作用。在藥劑上主要用作助懸劑、穩(wěn)定劑、乳化劑、增稠劑、黏稠劑、分散劑、膠凝劑、被膜劑、懸浮劑、微囊的囊材等；內(nèi)囊的制備為先用蒸餾水配制濃度為O. 5% -3. O %的海藻酸鈉溶液，將藥物或生物組織與其混勻，通過(guò)高壓靜電發(fā)生器和微泵，調(diào)整電壓、平頭針和針頭離液面高度，滴至帶磁力攪拌的25-200mmol/l的氯化鈣、氯化鋇兩種溶液中的一種，得到粒徑大小為50-800 μ m的膠珠，反應(yīng)IOmin后除去上清液，用生理鹽水洗滌2次；將膠珠投至O. 01% -O. 5%聚左賴氨酸溶液、O. 05% -I. O %的殼聚糖兩溶液中之一者繼續(xù)攪拌5min，除去上清并用生理鹽水洗滌2次，然后再投入至O. 05% -O. 5%的海藻酸鈉溶液中攪拌5min，除去上清液并用生理鹽水洗滌2次后得到內(nèi)囊。所述的一種復(fù)式微囊及其制備方法，其內(nèi)囊的另一種制備方法為將上述經(jīng)過(guò)O. 05% -O. 5%的海藻酸鈉包裹和生理鹽水洗滌后的內(nèi)囊，再投至20-100mM的檸檬酸鈉溶液中攪拌，3 lOmin，用生理鹽水洗滌2次，來(lái)得到內(nèi)囊。所述的一種復(fù)式微囊及其制備方法，其外囊的成囊材料為以海藻酸鈉、氯化鈣、氯化鋇、殼聚糖、聚左賴氨酸等為成囊材料；外囊的制備為先用蒸餾水將海藻酸鈉配成濃度為O. 5 % -3. O %的溶液，將內(nèi)囊、化學(xué)藥物、中藥、生物細(xì)胞和組織樣品中的一種或幾種組合與該海藻酸鈉溶液混勻；采用滴管，將混有內(nèi)囊的海藻酸鈉溶液滴至帶磁力攪拌的25-200mmol/l的氯化I丐、氯化鋇兩種溶液中的一種，反應(yīng)IOmin后除去上清液,得到粒徑大小為l-5imm的膠珠，用生理鹽水洗滌2次；將膠珠投至O. 01% -O. 5%聚左賴氨酸溶液、O. 05% -I. O %的殼聚糖兩溶液中之一者繼續(xù)攪拌5min，除去上清液并用生理鹽水洗滌2次；然后再投入至O. 05% -O. 5%的海藻酸鈉溶液中攪拌5min，除去上清液并用生理鹽水洗滌2次后得到復(fù)式微囊；將復(fù)式微囊置于凍干保護(hù)劑乳糖、氯化鈉，甘露醇溶液中的一種或幾種組合，進(jìn)行冷凍干燥；或添加細(xì)胞培養(yǎng)溶液，在37±0. 5°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。所述的一種復(fù)式微囊及其制備方法，其外囊的另一種制備方法為按上述投入至
O.05% -O. 5%的海藻酸鈉溶液并用生理鹽水洗滌后得到復(fù)式微囊，再投至20-100mM的檸檬酸鈉溶液中攪拌3 20min，用生理鹽水洗滌2次，得到復(fù)式微囊；將復(fù)式微囊置于凍干保護(hù)劑乳糖、氯化鈉，甘露醇溶液中的一種或幾種組合，進(jìn)行冷凍干燥；或添加細(xì)胞培養(yǎng)溶液，在37±0. 5°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。


圖I是本發(fā)明的復(fù)式微囊示意2是根據(jù)實(shí)施例I制備的吲哚美辛復(fù)式微囊的藥物釋放曲線3是根據(jù)實(shí)施例3制備的吲哚美辛復(fù)式微囊的藥物釋放曲線圖
具體實(shí)施例方式見(jiàn)圖1，該復(fù)式微囊由外囊I和內(nèi)囊2組成，該復(fù)式微囊可用于包裹化學(xué)藥物、中藥、生物細(xì)胞和組織等，能控制藥物釋放速率，提高藥物的穩(wěn)定性，提高生物細(xì)胞和組織的免疫隔離效果。 實(shí)施例I :卩引噪美羊-ACA-Ca-Ca復(fù)式微囊的制備(I)內(nèi)囊的制備A、將吲哚美辛過(guò)100目篩，與1-1. 5mll. 8%的海藻酸鈉溶液混勻后吸至20ml注射器。B、用高壓靜電法，調(diào)整電壓、采用6#平頭針頭和針頭離液面高度2cm，將含藥的海藻酸鈉液滴入帶磁力攪拌的80mlIOOmM的CaCl2溶液中，形成粒徑500-700 μ m的不溶性海藻酸鈣微球，IOmin后除去上清液，用生理鹽水洗滌2次，得到膠珠。C、將膠珠投至O. 3%殼聚糖溶液中繼續(xù)攪拌5min，除去上清液并用生理鹽水洗滌2次。D、將包裹殼聚糖后的膠珠投入至O. 15%的海藻酸鈉溶液中攪拌5min，除去上清液并用生理鹽水洗滌2次，盡量去除生理鹽水，即得含藥內(nèi)囊。(2)外囊的制備A、將上述制備得到的含藥內(nèi)囊再次與2倍體積的I. 8%的海藻酸鈉均勻混合。B、采用一次性塑料滴管，將混有吲哚美辛內(nèi)囊的海藻酸鈉溶液滴加至帶磁力攪拌的IOOmM CaCl2溶液中，反應(yīng)lOmin，形成含APA微囊的海藻酸鈣微珠；用生理鹽水洗滌2次。C、盡量棄去上清液，將微囊加至O. 3%殼聚糖溶液IOml中，反應(yīng)5min，用生理鹽水洗滌2次，棄去上清液。D、將微膠珠混懸于O. 15%的海藻酸鈉溶液15ml中，反應(yīng)5min，用生理鹽水洗2次,除去多余的海藻酸鈉,棄去上清液,得到含吲哚美辛的復(fù)式ACA-Ca-Ca微囊。(3)藥物釋放試驗(yàn)取含吲哚美辛的復(fù)囊10顆，投至藥物溶出儀的轉(zhuǎn)籃中。按照《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版二部釋放度測(cè)定方法第一法，以250ml新沸防冷的蒸餾水，加I %的十二烷基硫酸鈉為釋放介質(zhì)，轉(zhuǎn)速I(mǎi)OOr介質(zhì)溫度(37. 04±0. 5) °C,分別于不同時(shí)間取樣5mL,同時(shí)補(bǔ)充等體積同溫釋放介質(zhì)，過(guò)O. 45 μ m微孔濾膜過(guò)濾后于265nm處測(cè)吸光度，以釋放介質(zhì)為空白，計(jì)算藥物的累積釋放百分率，并畫(huà)出藥物釋放曲線。藥物的釋放曲線見(jiàn)圖2，其中I為吲哚美辛-ACA-Ca-Ca復(fù)式微囊的藥物釋放，2為吲哚美辛-ACA-Ca單囊的藥物釋放，由圖可見(jiàn)，藥物包裹至ACA-Ca-Ca復(fù)式微囊后，釋放時(shí)間較包裹至單囊中的吲哚美辛有延長(zhǎng)。實(shí)施例2:大鼠膜島-APA-Ca-Ca復(fù)式微囊的制備(I)內(nèi)囊的制備A、將純化后 的大鼠胰島與1-1. 5mll. 8%的海藻酸鈉溶液混勻后吸至20ml注射器。B、用高壓靜電法(或稱銳孔-凝固浴法)，調(diào)整電壓、采用9#平頭針和針頭離液面高度2cm，將含胰島的海藻酸鈉液滴入帶磁力攪拌的80mlIOOmM的CaCl2溶液中，形成粒徑400-600 μ m的不溶性海藻酸鈣微球，IOmin后除去上清液，用生理鹽水洗滌2次。C、將膠珠投入至O. 05%聚左賴氨酸溶液(PLL)中繼續(xù)攪拌5min，除去上清液并用生理鹽水洗滌2次。D、將包裹PLL后的膠珠投至O. 15%的海藻酸鈉溶液中攪拌5min，除去上清液并用生理鹽水洗滌2次。盡量除盡生理鹽水，即得含大鼠胰島的APA-Ca內(nèi)囊。(2)外囊的制備A、l. 8%的海藻酸鈉經(jīng)O. 45μπι,0. 22 μ m的微孔濾膜過(guò)濾，將上述制備得到的內(nèi)囊與2倍體積的I. 8%的海藻酸鈉均勻混合。B、采用玻璃滴管，將混有大鼠胰島-APA微囊的海藻酸鈉溶液滴加至IOOmM CaCl2溶液中，用磁力攪拌器攪拌分散)，反應(yīng)lOmin，形成含APA內(nèi)囊的海藻酸鈣微珠；用生理鹽水洗漆2次。C、盡量棄去上清液，將微囊加至O. 05%聚左賴氨酸溶液IOml中，反應(yīng)5min。用生理鹽水洗滌2次，棄去上清液。D、將微膠珠混懸于O. 15%的海藻酸鈉溶液15ml中，反應(yīng)5min，用生理鹽水洗2次,除去多余的海藻酸鈉,棄去上清液。E、將微球混懸于55mM的枸櫞酸溶液中，反應(yīng)lOmin，液化囊心，用生理鹽水洗滌2次，沉淀后棄去上清液，除去過(guò)量枸櫞酸和液態(tài)海藻酸鈉，得到含大鼠胰島-APA-Ca內(nèi)囊的復(fù)式APA-Ca-Ca微囊。F、將復(fù)式微囊置于RPMI1640溶液中，在37±0· 5°C培養(yǎng)過(guò)夜。(3)糖刺激胰島素釋放實(shí)驗(yàn)將復(fù)式微囊化的胰島按50IEQ的量置24孔培養(yǎng)板中37°C培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h，棄去培養(yǎng)液后，加滿低葡萄糖(2. 22mmol/L)的RPMI1640培養(yǎng)液，37°C靜止培養(yǎng)Ih后，吸盡培養(yǎng)液，每管lml，-2(TC保存；再加滿高葡萄糖(22. 2mmol/L) RPMI1640培養(yǎng)液，37°C靜止培養(yǎng)Ih后吸盡培養(yǎng)液，每管1ml，-20°C保存，用大鼠胰島素酶免試劑盒測(cè)定胰島素濃度，同時(shí)按以下公式計(jì)算刺激指數(shù)(SI)
高糖環(huán)境下胰島素的分泌濃度 刺激 曰數(shù)(奶=麗. ■下病通的芬泌濃度-結(jié)果胰島在低糖下的胰島素分泌濃度為15. 51±2. 68mIU/L,高糖下胰島素分泌濃度為27. 85±3. 64mIU/L，高糖刺激下胰島素釋放量為低糖刺激的I. 8倍，SI值為
I.80±0. 49。說(shuō)明大鼠胰島復(fù)式微囊化后依然有活性，并能在葡萄糖的刺激下有胰島素的釋放。實(shí)施例3 Π引噪美羊-ACA-Ba-Ba復(fù)式微囊的制備I、內(nèi)囊的制備A、將吲哚美辛過(guò)100目篩后與1-1. 5mll. 8%的海藻酸鈉溶液混勻后吸至20ml注射器。B、用高壓靜電法，調(diào)整電壓、采用4#平頭針頭和針頭離液面高度1cm，將海藻酸鈉液滴入帶磁力攪拌的80ml25mM的BaCl2溶液中，形成不溶性海藻酸鈣微球，IOmin后除去上清液，用生理鹽水洗滌2次，得到膠珠。 C、將膠珠投至O. 5%殼聚糖溶液中繼續(xù)攪拌8min，除去上清液并用生理鹽水洗滌2次。D、將包裹殼聚糖后的膠珠投入至O. 15%的海藻酸鈉溶液中攪拌5min，除去上清液并用生理鹽水洗滌2次，盡量除盡生理鹽水，即得吲哚美辛-ACA-Ba內(nèi)囊。2、外囊的制備A、將上述制備得到的內(nèi)囊與2倍體積的I. 8%的海藻酸鈉均勻混合。B、采用一次性塑料滴管，將混有吲哚美辛-ACA-Ba微囊的海藻酸鈉溶液滴加至IOOmMBaCl2溶液中，用磁力攪拌器攪拌分散，反應(yīng)lOmin，形成含ACA-Ba-Ba的海藻酸鋇復(fù)式微珠；用生理鹽水洗滌2次。C、盡量棄去上清液，將微囊加至O. 8%殼聚糖溶液IOml中，反應(yīng)5min。用生理鹽水洗滌2次，棄去上清液。D、將微膠珠混懸于O. 15%的海藻酸鈉溶液15ml中，反應(yīng)5min，用生理鹽水洗2
次,棄去上清液。E、將復(fù)式微球混懸于55mM的枸櫞酸溶液中，反應(yīng)lOmin，液化囊心，用生理鹽水洗漆2次，沉淀后棄去上清液，得到Π引哚美辛-ACA-Ba-Ba復(fù)式微囊。F、在微囊加入適量甘露醇溶液，置于_20°C冰箱中凍結(jié)實(shí)，再進(jìn)行冷凍干燥。取出凍干的含吲哚美辛的復(fù)囊，投至藥物溶出儀的轉(zhuǎn)籃中。按照《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版二部釋放度測(cè)定方法第一法，以250ml新沸防冷的蒸餾水，加1%的十二燒基硫酸鈉為釋放介質(zhì)，轉(zhuǎn)速I(mǎi)OOr mirT1,介質(zhì)溫度(37. 0±0. 5) °C,分別于不同時(shí)間取樣5mL,同時(shí)補(bǔ)充等體積同溫釋放介質(zhì)，過(guò)O. 45 4!11微孔濾膜過(guò)濾后于26511111處測(cè)吸光度，以釋放介質(zhì)為空白，計(jì)算藥物的累積釋放百分率，并畫(huà)出藥物釋放曲線圖。藥物的釋放曲線見(jiàn)圖3，其中I為吲哚美辛-ACA-Ba單囊的藥物釋放，2為吲哚美辛-ACA-Ba-Ba復(fù)式微囊的藥物釋放，由圖3可見(jiàn)，藥物包裹至ACA-Ba-Ba復(fù)式微囊后，釋放時(shí)間較包裹至單囊中的吲哚美辛大大延長(zhǎng)。
權(quán)利要求
1.一種復(fù)式微囊，由內(nèi)囊和外囊組成，其特征在于由1-100個(gè)內(nèi)囊再外包I層外囊構(gòu)成，內(nèi)囊包裹化學(xué)藥物、中藥、生物細(xì)胞和組織樣品中的一種或幾種組合，外囊為包裹內(nèi)囊、化學(xué)藥物、中藥、生物細(xì)胞和組織樣品中的一種或幾種組合。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種復(fù)式微囊及其制備方法，其特征在于內(nèi)囊以海藻酸鈉、氯化鈣、氯化鋇、殼聚糖、聚左賴氨酸中的一種或幾種組合為成囊材料；內(nèi)囊的制備方法為先用蒸餾水配制濃度為0.5% -3.0%的海藻酸鈉溶液，將藥物或生物組織與其混勻，通過(guò)高壓靜電發(fā)生器和微泵，調(diào)整電壓、平頭針和針頭離液面高度，滴至帶磁力攪拌的25-200mmol/l的氯化鈣、氯化鋇兩種溶液中的一種,得到粒徑大小為50-800 u m的膠珠,反應(yīng)IOmin后除去上清液，用生理鹽水洗滌2次；將膠珠投至0. 01%-0. 5%聚左賴氨酸溶液、0.05% -I. 0%的殼聚糖兩溶液中之一者繼續(xù)攪拌5min，除去上清并用生理鹽水洗滌2次，然后再投入至0. 05% -0. 5%的海藻酸鈉溶液中攪拌5min，除去上清液并用生理鹽水洗滌2次后得到內(nèi)囊；
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種復(fù)式微囊及其制備方法，其特征在于內(nèi)囊的另一種制備方法為按權(quán)利要求2得到的內(nèi)囊再投至20-100mM的檸檬酸鈉溶液中攪拌3 lOmin，用生理鹽水洗滌2次，來(lái)得到內(nèi)囊。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種復(fù)式微囊及其制備方法，其特征在于外囊的成囊材料為以海藻酸鈉、氯化鈣、氯化鋇、殼聚糖、聚左賴氨酸中的一種或幾種組合為成囊材料；夕卜囊的制備方法為先用蒸餾水將海藻酸鈉配成濃度為0. 5% -3. 0%的溶液，將內(nèi)囊、化學(xué)藥物、中藥、生物細(xì)胞和組織樣品中的一種或幾種組合與該海藻酸鈉溶液混勻；采用滴管，將混有內(nèi)囊的海藻酸鈉溶液滴至帶磁力攪拌的25-200mmol/l的氯化鈣、氯化鋇兩種溶液中的一種，反應(yīng)IOmin后除去上清液，得到粒徑大小為l_5mm的膠珠，用生理鹽水洗滌2次；將膠珠投至0. 01% -0. 5%聚左賴氨酸溶液、0. 05% -I. 0%的殼聚糖兩溶液中之一者繼續(xù)攪拌5min，除去上清液并用生理鹽水洗滌2次；然后再投入至0. 05% -0. 5%的海藻酸鈉溶液中攪拌5min，除去上清液并用生理鹽水洗滌2次后得到復(fù)式微囊；將復(fù)式微囊置于凍干保護(hù)劑乳糖、氯化鈉，甘露醇溶液中的一種或幾種組合，進(jìn)行冷凍干燥；或添加細(xì)胞培養(yǎng)溶液，在37±0. 5°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種復(fù)式微囊及其制備方法，其特征在于外囊的另一種制備方法為按權(quán)利要求4得到的復(fù)式微囊再投至20-100mM的檸檬酸鈉溶液中攪拌3 20min，用生理鹽水洗滌2次，得到復(fù)式微囊；將復(fù)式微囊置于凍干保護(hù)劑乳糖、氯化鈉，甘露醇溶液中的一種或幾種組合，進(jìn)行冷凍干燥；或添加細(xì)胞培養(yǎng)溶液，在37±0. 5°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種復(fù)式微囊及其制備方法，該復(fù)式微囊由內(nèi)囊和外囊組成，主要成分為海藻酸鈉、氯化鈣、氯化鋇、殼聚糖、聚左賴氨酸、檸檬酸鈉中的幾種成分組合而成，可包裹化學(xué)藥物、中藥、生物藥物、生物細(xì)胞或組織。本發(fā)明的復(fù)式微囊采用高壓靜電法制備內(nèi)囊，用滴制方法在多個(gè)內(nèi)囊的外面再包一層外囊，制備方法簡(jiǎn)單，并能使藥物達(dá)到緩慢釋放效果，也可用于生物組織和細(xì)胞的體外培養(yǎng)和體內(nèi)移植。
文檔編號(hào)B01J13/02GK102805741SQ20121027344
公開(kāi)日2012年12月5日 申請(qǐng)日期2012年8月2日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月2日
發(fā)明者傅紅興, 李慧, 潘仁彪, 朱雁林, 趙應(yīng)征 申請(qǐng)人:溫州醫(yī)學(xué)院