專利名稱：：藥物顆粒送遞的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：聚合物納米顆粒(NP)在藥物送遞中起了重要作用，特別是可用于化療藥物的送遞。對(duì)于臨床應(yīng)用而言，納米顆粒大小和表面形態(tài)的控制是4艮重要的。顆粒系統(tǒng)設(shè)計(jì)的其他方面對(duì)于納米顆粒用作體內(nèi)送遞系統(tǒng)而言可能也很重要。優(yōu)選地，聚合物納米顆粒的藥物裝載量比較高，從而能夠提供改進(jìn)的效力。這對(duì)增強(qiáng)納米顆粒在癌癥治療中的效力而言特別重要w。高藥物裝載量4，5能夠降低每次給藥所需的劑量，因此降低能夠生產(chǎn)成本并提高患者的順應(yīng)性。此外，優(yōu)選地在給藥至患者時(shí)，納米顆粒送遞運(yùn)載體中的藥物分子基本保持為包封在所述聚合物納米顆粒中，從而使其能夠以持續(xù)方式隨時(shí)間釋放或在所需部位累積后釋放。更具體而言，對(duì)于用于癌癥治療的納米顆粒應(yīng)用而言，抗癌藥物保持包封狀態(tài)是重要的，這樣可以使得在血管中時(shí)不釋放藥物或僅釋放少量藥物，而僅在納米顆粒滲入腫瘤時(shí)釋放所述抗癌藥物。僅有少數(shù)幾種藥物送遞系統(tǒng)能夠?qū)崿F(xiàn)藥物釋放的良好控制，其中大部分系統(tǒng)都是脂質(zhì)體6。目前，大約有10種脂質(zhì)體型送遞運(yùn)栽體通過(guò)了臨床應(yīng)用的認(rèn)證，其中只有一種為聚合物納米顆粒送遞系統(tǒng)，即Abraxane,它是一種大小約為130nm的清蛋白結(jié)合紫杉醇(paclitaxel)的納米顆粒6，7。Abraxane"似乎在清蛋白納米顆粒的表面含有大量的脂類，這使得它們?cè)谡{(diào)節(jié)藥物釋放方面具有類似于脂質(zhì)體的特征。目前，仍沒(méi)有基于聚酯的納米膠嚢通過(guò)了臨床癌癥治療的i人證。最近有研究使用聚(乙二醇)-b-聚(丙交酯-共-乙交酯)(PEG-PLGA)進(jìn)-f亍多西他賽(docetaxel)的納米包封，以用于前列腺癌的體內(nèi)治療(Farokhzad，O.qCheng，J.;Teply，B.A.;Sherifi，I.;Jon，S.;Kantoff，P.W.;Richie,J.P.;Langer，R.Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)2006，103，6315-6320)，其中遇到的困難是難以控制制劑參數(shù)，例如藥物裝載量和包封效率。包封效率取決于多種參數(shù)，包括溶劑、聚合物的種類、聚合物的分子量以及被包封的藥物，因此包封效率在各批次之間會(huì)有所變化并且通常低于80%。藥物裝栽量通常會(huì)低于10%。在許多情況下，僅能獲得1%的藥物裝載量。藥物裝栽量高于5%的NP有時(shí)會(huì)含有不想要的大的聚集體(>1微米)，這可能是由未被包封的藥物分子的聚集導(dǎo)致的。具有混合的顆粒大小和較寬的大小分布的顆粒會(huì)導(dǎo)致在體內(nèi)復(fù)雜的生物分布和藥物代謝動(dòng)力學(xué)反應(yīng)。在脂質(zhì)體送遞系統(tǒng)中，藥物分子被包封在脂質(zhì)體的核心中，這樣通過(guò)脂雙層將藥物分子與外部環(huán)境隔離，由此防止包封的藥物分子的泄漏。與此相反的是，聚合物納米包嚢(聚合物納米顆粒)沒(méi)有這樣的防止治療性分子在循環(huán)過(guò)程中發(fā)生不想要的外泄的機(jī)制。在用于體內(nèi)藥物送遞的聚合物納米顆粒的應(yīng)用中，需要解決的一個(gè)最大問(wèn)題是顯著的初始突然釋放效應(yīng)。在具有顯著的初始突然釋放效應(yīng)的載體中，在納米顆粒表面或接近表面的未被完全包封的藥物分子會(huì)迅速地?cái)U(kuò)散至溶劑中，可能導(dǎo)致顯著的體內(nèi)毒性。1()當(dāng)藥物裝載量超過(guò)聚合物的包封閾值時(shí)，可能會(huì)有大量的藥物分子沉積在所述納米顆粒的表面，此時(shí)初始釋放尤其嚴(yán)重。納米包封(NE)通常表現(xiàn)出雙相藥物釋放模式，1(M2在最開(kāi)始的幾小時(shí)至幾十小時(shí)內(nèi)，有多達(dá)40-80%的包封的藥物分子釋放出來(lái)。1()在初始的24小時(shí)后至48小時(shí)之間，由于聚合物納米顆粒中包埋得更深的藥物分子的擴(kuò)散屏障增加，使得藥物釋放顯著減緩。當(dāng)這樣的半空甚至全空的納米顆粒最終到達(dá)需要它們的位置(例如腫瘤組織)并在該處累積時(shí)，它們通常已經(jīng)不剩余或僅剩余^f艮少的治療效力了。6，13在聚合物納米包封中同時(shí)獲得高藥物裝載量和高包封效率是極其困難的。包封效率不僅依賴于所使用的聚合物的種類、分子量和屬性，而且還顯著地受到治療分子的物理和化學(xué)性質(zhì)的影響。例如較低分子量的聚合物與較高分子量的聚合物相比可能容易具有更低的包封效率。親水性分子(例如阿霉素)不容易被包封在聚合物納米顆粒中(GrovenderT.etal.(l"9)J.ControlledRelease57(2)171-185)。在所有目前已開(kāi)發(fā)的納米包封中，藥物裝載量(藥物在聚合物納米顆粒中的重量百分比)和包封效率(^:包封的藥物占所使用藥物總量的百分比)在不同系統(tǒng)中有極大的差異，并且在同一系統(tǒng)的各批次時(shí)間也具有很大差異。對(duì)于疏水性小分子例如紫杉醇(paclitaxel，Ptxl)或多西他賽(Dtxl)而言，通常納米顆粒中的裝載量在18至5wt。/。之間，包封效率在約20至80%之間。10'14Anotherproblemencounteredin納米顆粒的藥物包封中面臨的另一個(gè)問(wèn)題是不想要的顆粒不均勻性。Nanoprecipitationof聚合物和藥物例如化療劑的納米沉淀經(jīng)常使得出現(xiàn)可以通過(guò)動(dòng)態(tài)光散射測(cè)量的多模式的分布，其范圍為約100nm至ljim或更高。顆粒不均勻性可能是由于在包封中含有不同的化學(xué)物質(zhì)(聚合物和藥物分子)，它們具有不同的分子量、柔性和剛性、疏水性以及形成晶體的趨勢(shì)。因此在納米沉淀的過(guò)程中，聚合物和藥物分子很可能傾向于各自聚集，從而導(dǎo)致顆粒的不均勻性。具有多模式分布的納米顆粒通常被視為具有相同組成而有不同聚集度的小納米顆粒的集合體。但是，這一假設(shè)并不一定正確。在最近的研究中，研究了多西他賽裝載量分別為1%、5%和10%時(shí)對(duì)所得的PEG-b-PLGA納米顆粒大小分布的影響(Cheng，J.etal.FormulationoffunctionalizedPLGA-PEGnanoparticlesforinvivotargeteddrugdelivery.Biomaterials28，8仍-76(加07))，發(fā)現(xiàn)所述顆粒制劑的多^L性在隨著多西他賽裝載量的增加而增加，所述多分散性在多西他賽裝載量為1%時(shí)為0.154、裝載量為5%時(shí)為0.203、裝載量為10%時(shí)為0.212。所述納米顆粒的大小分布呈現(xiàn)一種較小直徑顆粒分布與較大直徑顆粒分布相伴隨的雙相趨勢(shì)。與較小顆粒相應(yīng)的分布并不隨著藥物濃度的增加而改變。而上述雙相分布中的較大顆粒的分布位置會(huì)隨著藥物裝載量的增加而增加(所述大小由約300nm增加至約1200nm)。由于上述制劑中唯一的區(qū)別就是藥物裝栽量，因此，可能由于多西他賽的水溶性較差，使得未包封的多西他賽發(fā)生聚集而形成的大量納米顆粒。在上述研究和其他4吏用聚丙交酯和多西他賽的納米沉淀的研究中(Avgoustakis，K.etal.PLGA-mPEGnanoparticlesofcisplatin:invitronanoparticledegradation,invitrodrugreleaseandinvivodrugresidenceinbloodproperties.J./^/mw79，123-135(2002))，幾乎總是能夠觀察到^目型的顆粒分布。需要開(kāi)發(fā)一種能夠克服上述困難的方法學(xué)，用以提供在各批次間包封效率和藥物裝載量都保持穩(wěn)定的納米顆粒。本發(fā)明提供了一種用于制備藥物-多聚物(和藥物-寡聚物)綴合物的簡(jiǎn)單的一步方法，所述藥物-聚合物綴合物可用于形成納米顆粒，4吏得所得的納米顆粒具有100%的包封效率和預(yù)定的藥物裝載量。由本發(fā)明的方法通過(guò)使用藥物綴合物形成的納米顆粒在本文中被稱作納米綴合物，以與納米包封(NE)相區(qū)別。此外，本發(fā)明的方法還可廣泛用于提供各種有用化合物(生物活性物質(zhì)、藥物、試劑、診斷物、造影劑、報(bào)告分子、染料等)與多聚物和寡聚物相綴合的綴合物，以用于制備顆粒送遞系統(tǒng)。
發(fā)明內(nèi)容在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于有效制備特定的藥物-多聚物(或寡聚物)綴合物的一步方法，所述綴合物可用于制備用于體內(nèi)送遞治療性藥物的顆粒，包括微顆粒和納米顆粒。本發(fā)明還提供了特定的藥物-多聚物和藥物-寡聚物綴合物，所述綴合物可用于制備用于體內(nèi)送遞藥物的顆粒。本發(fā)明還提供了使用本發(fā)明的藥物-多聚物或藥物-寡聚物綴合物來(lái)制備顆粒藥物送遞系統(tǒng)或運(yùn)栽體的方法。本發(fā)明的多聚物和寡聚物綴合物可以用于本領(lǐng)域已知的任何由多聚物或寡聚物制備顆粒的方法中。本文所述的方法特別可用于制備用于藥物送遞的納米顆粒，更特別可用于制備用于化療應(yīng)用的納米顆粒。本發(fā)明的納米顆粒例如可通過(guò)納米沉淀的方法，由本發(fā)明所述的多聚物和/或寡聚物綴合物制備。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了含有選定的藥物以任選地用于持續(xù)藥物釋放或靶向藥物釋放的顆粒。在具體的實(shí)施方案中，選定的藥物基本上(藥物重量的90%或更多)與顆粒中的多聚物或寡聚物共價(jià)結(jié)合。例如，所述顆粒通過(guò)已知方法由含有藥物-聚合物和/或藥物-寡聚物綴合物的溶液制備。本發(fā)明的藥物綴合物在所述多聚物或寡聚物的聚合過(guò)程中形成，其中所述藥物被用作形成所述多聚物和/或寡聚物的單體發(fā)生聚合的引發(fā)劑。更具體而言，所述藥物綴合物是在存在合適的開(kāi)環(huán)聚合催化劑和引發(fā)劑(所述藥物)的條件下，由環(huán)狀單體的開(kāi)環(huán)聚合而形成。在具體的實(shí)施方案中，使用本發(fā)明的藥物-多聚物或藥物-寡聚物綴合物來(lái)制備多種類型的含有藥物的顆粒，所述顆?？捎糜谒幬锼瓦f，并且其大小通常在約2nm至約500微米之間。在其他的更具體的實(shí)施方案中，使用本發(fā)明的藥物-多聚物或藥物-寡聚物綴合物來(lái)制備含有藥物的微顆粒，所述顆粒的大小通常在約500nm至約IOO微米之間。s.在其他的實(shí)施方案中，使用本發(fā)明的藥物-多聚物或藥物-寡聚物綴合物來(lái)制備含有藥物的納米顆粒，所述顆粒的大小通常在約55nm至約600納米之間。在其他的實(shí)施方案中，使用本發(fā)明的藥物-多聚物或藥物-寡聚物綴合物來(lái)制備舍有藥物的顆粒，所述顆粒的大小通常在約2nm至約IOO納米之間。在其他的實(shí)施方案中，使用本發(fā)明的藥物-多聚物或藥物-寡聚物綴合物來(lái)制備含有藥物的顆粒，所述顆粒的大小通常在約200nm至約800納米之間。在其他的實(shí)施方案中，^:用本發(fā)明的藥物-多聚物或藥物-寡聚物綴合物來(lái)制備含有藥物的顆粒，所述顆粒的大小通常在約l微米至約500孩i米之間。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，可以使用本發(fā)明的方法來(lái)制備大小范圍為20-60nm的納米顆粒。例如，可以使用本文所述的多聚物或寡聚物綴合物，通過(guò)已知的微膠束化方法然后再與PEG加帽試劑(例如PEG-異氰酸酯)反應(yīng)，制備上述納米顆豐立。在另一個(gè)具體的實(shí)施方案中，可以使用本發(fā)明的方法來(lái)制備大小范圍為l-20nm的納米顆粒，所述顆粒可以特別用于向細(xì)胞的送遞。可以使用環(huán)狀A(yù)B2型單體或這種單體與本文所述的其他環(huán)狀酯和碳酸酯單體的混合物來(lái)形成上述納米顆粒。在本文所述的方法中，AB2型單體的聚合可形成與選定的藥物分子相綴合的高分支結(jié)構(gòu)或樹(shù)枝狀結(jié)構(gòu)的綴合物?？梢允褂猛ㄟ^(guò)AB2型單體的聚合直接形成的顆粒來(lái)進(jìn)行藥物送遞?；蛘?，可對(duì)所述顆粒進(jìn)行如下文所述的表面處理。本發(fā)明的方法可用于形成任何小分子藥物的多聚物或寡聚物綴合物，所述小分子藥物即不是基于肽類、糖類和核酸類的小分子藥物，前提是所述藥物中含有至少一個(gè)能夠作為開(kāi)環(huán)反應(yīng)引發(fā)劑的官能團(tuán)。所述藥物可以含有(但不是必須含有)多個(gè)這樣的聚合引發(fā)基團(tuán)，例如多個(gè)羥基或巰基。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述藥物僅含有一個(gè)這樣的聚合基團(tuán)。所述羥基可為伯羥基、仲羥基或叔羥基。類似地，所述巰基可為伯巰基、仲巰基或叔巰基。所述羥基還可以為酚羥基。在具體的實(shí)施方案中，所述藥物含有一個(gè)或多個(gè)非酚羥基。在具體的實(shí)施方案中，所述藥物含有一個(gè)或多個(gè)非酚羥基，并且它們是伯羥基或仲羥基。在具體的實(shí)施方案中，所述藥物含有單一的非酚羥基。在具體的實(shí)施方案中，所述藥物含有單一的伯羥基或仲羥基?？捎糜诒疚乃龇椒ǖ氖纠运幬镌趫D8和圖13中有列舉和說(shuō)明，另外的藥物列于下文。在具體的實(shí)施方案中，所述藥物為親水性藥物，在相關(guān)的實(shí)施方案中，所述藥物為水溶性藥物(例如在水中具有的溶解度在mg/mL的量級(jí)內(nèi))。在另一些具體實(shí)施方案中，所述藥物為疏水性藥物，在相關(guān)的實(shí)施方案中，所述藥物不溶于水或在水中具有很低的溶解度(例如在水中具有的溶解度在照/mL或更低的量級(jí)內(nèi))。在具體的實(shí)施方案中，按照本文所述的方法與多聚物或寡聚物相綴合的所述藥物為抗癌藥物或用于化療的藥物。在具體的實(shí)施方案中，所述藥物為紫杉烷。在另一些具體的實(shí)施方案中，所述藥物為蒽環(huán)類抗癌藥物。在其他的實(shí)施方案中，所述藥物為蛋白酶抑制劑。在另一些具體實(shí)施方案中，所述藥物為逆轉(zhuǎn)錄酶的抑制劑。在另一些具體的實(shí)施方案中，所述藥物為抗病毒劑。在另一些具體的實(shí)施方案中，所述藥物為抗真菌劑。在另一些具體實(shí)施方案中，所述藥物為酚類藥物，即具有一個(gè)或多個(gè)酚羥基的藥物。在另一些具體實(shí)施方案中，所述藥物為巰基藥物，即具有一個(gè)或多個(gè)巰基的藥物。本發(fā)明的方法還可用于肽類、蛋白類糖類和/或核酸類(DNA或RNA)藥物的送遞。在上述每一種情況下，所述藥物必須含有至少一個(gè)能夠在開(kāi)環(huán)聚合反應(yīng)中作為引發(fā)劑的官能團(tuán)，例如至少一個(gè)羥基或巰基。本發(fā)明的方法還可以更寬泛地適用于任何其他分子或化合物(包括合成的或天然存在的分子以及有機(jī)或無(wú)機(jī)化合物)，前提是所述分子或化合物含有至少一個(gè)能夠在開(kāi)環(huán)聚合反應(yīng)中作為引發(fā)劑的官能團(tuán)(例如羥基或巰基)，并且所述分子或化合物將要通過(guò)顆粒送遞系統(tǒng)(例如微顆粒或納米顆粒)被給予或送遞至體內(nèi)。所述方法還可用于將任何這類有用的化合物形成多聚物或寡聚物綴合物，所述化合物包括但不限于用于診斷方法的試劑、營(yíng)養(yǎng)物或維生素(它們也可被認(rèn)為是藥物)、或凈艮告分子(例如放射標(biāo)記或熒光標(biāo)記的分子)?？梢耘c所述多聚物或寡聚物相綴合的所述化合物可為親水性的、疏水性的、水溶性的或不溶于水的。所述化合物可以含有多個(gè)羥基或巰基，所述羥基可為伯羥基、仲羥基或叔羥基，也可為酚羥基。在具體的實(shí)施方案中，所述羥基為伯羥基或仲羥基。在具體的實(shí)施方案中，所述羥基為酚羥基。在具體的實(shí)施方案中，所述巰基為伯巰基或仲巰基。在具體的實(shí)施方案中，所述化合物不是糖類化合物。在具體的實(shí)施方案中，所述化合物不是碳水化合物。在上述所有環(huán)狀單體的具體實(shí)施方案中，Yi和Y2中的一個(gè)或兩個(gè)為卣代烷基，更特別地為氟烷基。本發(fā)明所描述和要求保護(hù)的范圍涵蓋使用所述環(huán)狀單體的外消旋形式，或者使用其分別的對(duì)映異構(gòu)體和非外消旋混合物。本文所述的方法中可以使用任何合適的開(kāi)環(huán)聚合催化劑，所述催化劑可為含金屬的催化劑或有機(jī)催化劑。在具體的實(shí)施方案中，所述催化劑選自Mg(II)或Zn(n)催化劑。在另一些具體實(shí)施方案中，使用1，5，7-三氮雜二環(huán)[4.4.0發(fā)國(guó)5國(guó)烯(TBD)、7V-曱基國(guó)TBD(MTBD)或1,8國(guó)二氮雜二環(huán)[5.4.0十一-7—烯(DBU)作為有機(jī)催化劑。所述混合的單體與引發(fā)劑的摩爾比最通常為2:1至5000:1，更特別地為5:1至200:1,再更特別地為10:1至100:1。在本文所述的方法中，可以在所述聚合反應(yīng)中使用兩種或多種不同環(huán)狀單體的組合，以形成共聚合物綴合物。在本文所述的方法中，可以在所述聚合反應(yīng)中先后加入兩種或多種不同環(huán)狀單體，以形成嵌段共聚合物綴合物。在本文所述的方法中，可以組合使用兩種或多種均含有至少一個(gè)羥基或巰基的化合物，以提供與不同的化合物相綴合的不同的多聚物或寡聚物綴合物的混合物。例如，在本文所述的聚合方法中，可以使用兩種均含有至少一個(gè)羥基或巰基的不同藥物，從而形成多聚物或寡聚物藥物綴合物的混合物。這在使用兩種或多種具有不同機(jī)理或作用的藥物治療相同或相關(guān)疾病、病癥或障礙的情況下會(huì)是有用的。在具體的實(shí)施方案中，通過(guò)本文所述的方法形成的顆粒特別是納米顆粒，所具有的藥物裝載量(或更一般而言是選定化合物的裝載量)為20%或更高、30%或更高、40%或更高或50%或更高。在具體的實(shí)施方案中，通過(guò)本文所述的方法形成的顆粒特別是納米顆粒，具有較長(zhǎng)的循環(huán)半衰期，可用于進(jìn)行有效的體內(nèi)送遞。當(dāng)所述顆粒經(jīng)過(guò)本文所述的方法或本領(lǐng)域已知的方法進(jìn)行了表面修飾之后更是如此。在具體的實(shí)施方案中，通過(guò)本文所述的方法形成的顆粒特別是納米顆粒具有在鹽溶液中的穩(wěn)定性。本發(fā)明的形成多聚物或寡聚物綴合物方法可以與本領(lǐng)域已知的用于形成顆粒的方法組合使用，所述已知方法包括納米沉淀法、微膠束化方法、乳化法和雙乳化法。本發(fā)明還提供了通過(guò)本文所述的聚合方法制備的某些多聚物或寡聚物綴合物。通常，所述綴合物可用于任何需要在顆粒送遞系統(tǒng)中被送遞的化合物，特別是藥物，最特別地為抗癌藥物或化療藥物。在具體的實(shí)施方案中，所述綴合物中的聚合物平均具有100個(gè)或更少的單體單元。在其他的實(shí)施方案中，所述綴合物中的聚合物平均具75個(gè)、50個(gè)或25個(gè)單體單元。在具體的實(shí)施方案中，所述綴合物中的聚合物的平均分子量為5000或更低、2500或更低、1500或更1氐或1000或更低。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了通過(guò)本文所述的聚合方法制備的某些多聚物或寡聚物綴合物，其中所述綴合物中的化合物僅與一種多聚物或寡聚物相綴合或結(jié)合。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了通過(guò)本文所述的聚合方法制備的某些多聚物或寡聚物綴合物，其中所述綴合物中的化合物僅以所述化合物中的某一位點(diǎn)與僅一種多聚物或寡聚物相綴合或結(jié)合。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了與親水性化合物特別是親水性藥物相綴合的多聚物或寡聚物綴合物。在另一些具體的實(shí)施方案中，疏水性化合物特別是疏水性藥物與所述多聚物或寡聚物相綴合。本發(fā)明還提供了含有本發(fā)明的多聚物綴合物或寡聚物綴合物的顆粒，包括微顆粒和納米顆粒，其中所述多聚物綴合物或寡聚物綴合物用于選定化合物的體內(nèi)送遞，所述選定化合物特別地為一種或多種藥物，最特別地為一種或多種抗癌藥物或化療藥物。在具體的實(shí)施方案中，所述顆粒(包括微顆粒或納米顆粒)經(jīng)過(guò)表面修飾，所述表面修飾通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法進(jìn)行，例如使用一種或多種抗體、使用一種或多種核酸分子(例如適體)、使用一種或多種肽或蛋白(例如酶)、使用一種或多種多聚物或寡聚物(例如兩親聚合物特別是含有PEG的兩親聚合物)。在本領(lǐng)域中已知，對(duì)顆粒進(jìn)行表面修飾可以促進(jìn)顆粒向某一組織的耙向定位，可以促進(jìn)顆粒進(jìn)入細(xì)胞，或可以增強(qiáng)顆粒的穩(wěn)定性。例如，由聚酯、聚碳水化合物或它們的混合物形成的納米顆?？梢浴嚼粲糜H水性聚合物(例如PEG)或含有PEG的兩親聚合物進(jìn)行包被，以延長(zhǎng)所述納米顆粒的循環(huán)半衰期。在另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有核心/外殼結(jié)構(gòu)或具有多層結(jié)構(gòu)的顆粒，其中所述核心或外殼中的至少一個(gè)或所述多層中的至少一層是由本發(fā)明的藥物(或其他化合物)-多聚物/寡聚物綴合物形成的層。具體而言，本發(fā)明涉及具有核心/夕卜殼結(jié)構(gòu)的納米顆粒，其中所述核心或外殼由本發(fā)明的多聚物/寡聚物綴合物形成。更具體而言，納米顆?？捎珊诵暮屯鈿ば纬桑龊诵挠傻谝环N多聚物/寡聚物綴合物形成，所述外殼由(l)聚合物例如親水性聚合物或兩親聚合物；或(2)本發(fā)明的第二種多聚物/寡聚物綴合物形成。在具體的實(shí)施方案中，所述第一種和第二種多聚物/寡聚物綴合物可以選自與下列藥物綴合的綴合物，所述藥物為紫杉烷、蒽環(huán)類抗生素或Shh拮抗劑，前提是它們應(yīng)具有能夠引發(fā)本文所述的聚合反應(yīng)的官能團(tuán)例如羥基或巰基。在更具體的實(shí)施方案中，所述第一種和第二種多聚物/寡聚物綴合物可以選自與下列藥物綴合的綴合物，所述藥物為Ptxl、Dtxl、Doxo、環(huán)杷明(cyclopamine)或喜樹(shù)堿(camptothecin)。本發(fā)明特別提供了含有三層或更多個(gè)不同層的多層納米顆粒，其中至少一層由本發(fā)明的多聚物/寡聚物綴合物形成。納米顆粒包括具有三層、四層或五層的納米顆粒。納米顆粒包括其中所有層均由本發(fā)明的多聚物/寡聚物綴合物形成的顆粒。納米顆粒包括如下所述的納米顆粒，其中至少一層由本發(fā)明的多聚物/寡聚物綴合物形成，并且至少另一層由聚合物(非綴合的聚合物)例如親水性、疏水性或或兩親聚合物形成。在具體的實(shí)施方案中，納米顆粒包括如下所述的納米顆粒，其中至少一層由本發(fā)明的多聚物/寡聚物綴合物形成，并且至少另一層由含有PEG的兩親聚合物形成。本發(fā)明還提供了使用本發(fā)明的多聚物或寡聚物綴合物制備藥物的方法，以及由所述方法制備的藥物。所述藥物為由本發(fā)明的綴合物形成的顆粒，特別是納米顆粒。本發(fā)明還提供了試劑盒，用于使用選定的具有至少一個(gè)羥基的化合物進(jìn)行本文所述的聚合反應(yīng)以形成多聚物或寡聚物綴合物。所述試劑盒包括裝有一種或多種環(huán)狀單體和一種或多種開(kāi)環(huán)聚合催化劑的一個(gè)或多個(gè)容器，任選地，還包括進(jìn)行所述聚合反應(yīng)的說(shuō)明書(shū)，制備顆粒的說(shuō)明書(shū)，用于進(jìn)行顆粒的表面修飾的一種或多種試劑或說(shuō)明書(shū)，用于進(jìn)行制備顆粒的聚合反應(yīng)的一種或多種溶劑，一種或多種對(duì)照引發(fā)劑，用于進(jìn)行所述反應(yīng)的另外的容器，以便形成顆?；蜻M(jìn)行表面修飾。在具體的實(shí)施方案中，本文所述的試劑盒包括用于與不同的寡聚物或多聚物形成綴合物的多種不同的環(huán)狀單體。在其他的實(shí)施方案中，本文所述的試劑盒還可包括用于形成綴合物的具有至少一個(gè)羥基的一種或多種不同的化合物。通過(guò)參照下文的具體描述、實(shí)施例和附圖，本發(fā)明的其他實(shí)施方案應(yīng)是顯而易見(jiàn)的。圖1A和1B分別為說(shuō)明現(xiàn)有技術(shù)中的納米包封和本發(fā)明的納米綴合物的形成的示意圖。在圖中說(shuō)明了納米包封和納米綴合物之間的結(jié)構(gòu)差異。圖2A為本發(fā)明的交酯聚合的示意圖，示例性說(shuō)明了在存在催化劑的條件下藥物引發(fā)的聚合，以用于制備高裝載量和100%裝載效率的用于體內(nèi)應(yīng)用的控釋納米綴合物。圖2B提供了示例性的聚乙二醇化的含pacitaxel的納米綴合物的合成的具體實(shí)例，其中在存在(BDI)MN(TMS)2(其中M=Mg或Zn)的條件下，使用Ptxl引發(fā)丙交酯的聚合，然后使用PLGA-mPEG進(jìn)行納米沉淀和非共價(jià)的表面聚乙二醇化。相信所述聚合是通過(guò)Ptxl形成(BDI)M-氧化物而引發(fā)的。圖3是在37。C和lxPBS中，Pxtl從Pxtl-LA納米綴合物中釋放的釋放動(dòng)力學(xué)圖，所述Pxtl-LA納米綴合物為Pxtl-LA25NC和Pxtl-LA50NC(藥物裝載量如圖中所示)。作為比較，在圖中還顯示了通過(guò)Ptxl和PLA(Pxtl/PLA(wt/wt)=1/12)的混合物進(jìn)行納米沉淀制備的Pxtl/PLA納米包封(NE)的釋放動(dòng)力學(xué)。圖4顯示了使用PC-3細(xì)胞在培養(yǎng)24小時(shí)后，通過(guò)MTT測(cè)定測(cè)得的PtXl-LA5。NC、PtXlLA25NC、Ptxl-LA1()NC和Pxtl的毒性。"*，，號(hào)表示在95%置信區(qū)間內(nèi)的顯著性水平。圖5顯示了當(dāng)將PLGA-mPEGsk加入至Pxt-LA，NC中時(shí)的顆粒大小的變化。顆粒大小作為兩親共聚物與藥物-聚合物綴合物的重量比的函數(shù)呈線性增加。圖6說(shuō)明了在處理前(國(guó))、用PLGA-mPEGsK處理后(令)或用mPEG5k處理后(參)，Ptxl-LA2O0NC在PBS中和37。C下的穩(wěn)定性。圖7A-D顯示了使用PC-3前列腺癌細(xì)胞通過(guò)MTT研究測(cè)得的Ptxl-LA、Dtx-LAI、CPT-LA和Doxo-LANC的細(xì)胞毒性的結(jié)果。圖8使用本發(fā)明方法引入至NC中的一些藥物或其他化合物(例如Cy5報(bào)告物染料)的化學(xué)式。圖9為制備樹(shù)枝狀納米顆粒的方法的示意圖，據(jù)信所述樹(shù)枝狀納米顆粒是一種單分子樹(shù)枝狀顆粒，在每一納米顆粒中含有一種藥物。所述聚合方法與所描述的類似。這些樹(shù)枝狀顆粒具有〈20nm的顆粒直徑，這樣的顆粒直徑是不能通過(guò)其他方法得到的。圖10A顯示了在多種藥物逐層沉淀的過(guò)程中，納米顆粒大小(nm)的變化。在該過(guò)程中，在納米沉淀的條件下，使用笫二種藥物-聚合物綴合物處理由本發(fā)明的藥物-聚合物綴合物通過(guò)納米沉淀形成的納米綴合物，從而在所述納米綴合物中形成第二種藥物聚合物層或外殼。該圖提供了含有Dtxl-LA糊作為核心和Doxo-LAIOO作為外殼或第二層的納米顆粒在形成過(guò)程中，納米顆粒大小變化的大小分布圖。圖10B顯示了在第二種藥物聚合物綴合物沉淀在第一種藥物聚合物綴合物形成的納米顆粒(NC)上的過(guò)程中，作為所述形成外殼的(第二種藥物-聚合物)綴合物的量的函數(shù)的納米顆粒大小(nm)的圖，該圖比較了作為加入的第二種藥物-聚合物綴合物的量的函數(shù)的納米顆粒大小變化。在一種情況下，所述第二種藥物綴合物與所述第一種藥物綴合物相同，此時(shí)該圖顯示了相同的藥物-聚合物綴合物的量逐漸增加時(shí)的效果。圖11A和11B顯示了向帶有編碼熒光素酶的Gli-l基因的Shh-Light2細(xì)胞中加入含有環(huán)杷明的NC后，進(jìn)行熒光素酶測(cè)定的結(jié)果。圖11A顯示了加入CA-LAh)和CA-LA2s的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，其中的裝載量在括號(hào)中顯示。該圖顯示，環(huán)杷明NC的ECso值顯著低于游離的環(huán)杷明的ECso值，表明使用納米綴合物能夠?qū)崿F(xiàn)環(huán)杷明向乾細(xì)胞的送遞以及在耙細(xì)胞中的濃縮累積和釋放。圖11B顯示了使用CANC以及含有Shh激動(dòng)劑purmorphamine的NE培養(yǎng)Shh-Light2細(xì)胞的結(jié)果。圖12提供了在綴合物的LA聚合合成過(guò)程中使用不同催化劑(如圖所示)所形成的Ptxl-LA綴合物的實(shí)際MW和PDI,通過(guò)GPC測(cè)得。Figure13列出了可用于本發(fā)明方法的一部分藥物。圖中還列出了結(jié)構(gòu)。具體實(shí)施例方式本發(fā)明至少部分地基于下述發(fā)現(xiàn)使用能夠作為開(kāi)環(huán)聚合反應(yīng)引發(fā)劑的藥物和其他化合物與一種或多種環(huán)狀單體和開(kāi)環(huán)聚合催化劑相組合，可以通過(guò)一步法反應(yīng)容易地制備所述藥物和其他化合物的多聚物和寡聚物綴合物。圖2示意性說(shuō)明了本發(fā)明的方法(A)，并說(shuō)明了使用與PLA相綴合的紫杉醇形成納米綴合物的具體實(shí)例。此外，還發(fā)現(xiàn)由此形成的聚合物和寡聚物綴合物可用于制備顆粒，所述顆粒包括微顆粒和納米顆粒，它們具有適用于體內(nèi)送遞化合物的顆粒大小。如圖2具體示出的那樣，可以使用納米沉淀法來(lái)形成含有本發(fā)明的綴合物的納米顆粒(納米綴合物)。另外，如圖2的納米顆粒所示，可以使用PEG處理所述納米綴合物，以實(shí)現(xiàn)所述納米顆粒表面的聚乙二醇化。通過(guò)本文所述的方法形成的多聚物和寡聚物綴合物與通過(guò)使用化合物(特別是藥物)與預(yù)先形成的聚合物相綴合而形成的綴合物有明顯的區(qū)別。通過(guò)本發(fā)明方法形成的綴合物中的聚合物具有的平均分子量顯著^f氐于預(yù)先形成的聚合物。。通過(guò)本發(fā)明方法形成的綴合物具有的多分散性也必然低于預(yù)先形成的聚合物。例如，本發(fā)明的聚合物綴合物具有的多*性可為1.5或更低、1.3或更低和1.2或更低。通常，。通過(guò)本文所述方法形成的綴合物與使用化合物與預(yù)先形成的聚合物相綴合形成的綴合物相比，在聚合物長(zhǎng)度上更為均一。如圖l所示，4吏用本發(fā)明的多聚物或寡聚物通過(guò)納米沉淀形成的納米綴合物(NC)在藥物裝載量、藥物包封、藥物釋放、顆粒分布以及制造的簡(jiǎn)易程度等各方面都與納米包封(NE)有著明顯的區(qū)別。NE僅具有很低或中等的藥物裝載量(l-5wt。/。)，并且該裝栽量還難以預(yù)先確定，而且在各批次之間也會(huì)有變化。NC具有能夠預(yù)先確定的藥物裝載量，并且該藥物裝載量在各批次之間的穩(wěn)定性比NE要高得多。NE具有不可控的包封效率(在10-80%之間變化)，并且該包封效率在各批次和各種系統(tǒng)之間都有所不同，此外，NE還不能包封親水性藥物。NC具有接近100。/。的包封效率，該包封效率在各批次和各種系統(tǒng)之間沒(méi)有差異或差異;f艮小，此外，親水性和疏水性藥物均可以形成NC。NE會(huì)表現(xiàn)出顯著的初始快速釋放，在最開(kāi)始的24小時(shí)內(nèi)就釋放40-80%的藥物。NC不表現(xiàn)或僅表現(xiàn)4艮少的藥物初始快速釋放，并能夠提供藥物的可調(diào)節(jié)和可控的釋放。NE通常具有多模式的顆粒分布。NC具有單模式的顆粒分布。NE的制造涉及一種多組分/多步驟的工藝過(guò)程，這難以擴(kuò)大目，并且不利于長(zhǎng)期儲(chǔ)存。此外，還難以除去未包封的藥物，并且需要^f吏用困難的過(guò)濾除菌。與^M目反，NC的制造僅涉及單組分系統(tǒng)，很容易擴(kuò)大,，并且在儲(chǔ)存得當(dāng)時(shí)，在儲(chǔ)存期內(nèi)藥物釋放僅有最小量的增加。由于基本上沒(méi)有需要被除去的游離藥物聚集物，這一方法實(shí)施起來(lái)簡(jiǎn)便而經(jīng)濟(jì)。在圖2A部分中所示的聚合過(guò)程中，起引發(fā)聚合作用的化合物(例如藥物)與一條或多條不斷延長(zhǎng)的寡聚物或多聚物鏈發(fā)生共價(jià)結(jié)合。這種聚合反應(yīng)是一種開(kāi)環(huán)聚合反應(yīng)，它優(yōu)選地具有活性聚合(livingpolymerization)的特征。在本文中，通過(guò)能夠在存在某些催化劑的條件下作為聚合引發(fā)劑的具有一個(gè)或多個(gè)的藥物和其他化合物，示例性說(shuō)明了本發(fā)明。如本文所述，開(kāi)環(huán)聚合可以使用各種環(huán)狀單體，包括含有環(huán)狀酯、環(huán)狀碳酸酯以及環(huán)狀硅氧烷和環(huán)狀磷化物的單體。所述聚合的實(shí)例可以為丙交酯或乙交酯與帶有一個(gè)或多個(gè)羥基或巰基的藥物化合物的聚合。已經(jīng)開(kāi)發(fā)了多種金屬醇鹽(RO-M)，由于進(jìn)行丙交酯和其他相關(guān)環(huán)狀單體的可控活性聚合,其中RO與聚丙交酯通過(guò)酯欲t生定量的末端綴合。16可以通過(guò)調(diào)整丙交酯/ROH的比例(例如所述單體與引發(fā)劑的摩爾比)來(lái)精確控制所得的聚丙交酯中的RO的量。在本發(fā)明中，ROH為將要與開(kāi)環(huán)聚合中形成的聚合物相綴合的含有一個(gè)或多個(gè)羥基的藥物或其他化合物。有多種有機(jī)催化劑例如TBD(l，5，7-三氮雜二環(huán)[4.4.0癸-5-烯)都可以與所述含羥基或巰基的引發(fā)劑(即將要綴合的藥物或其他化合物)配合使用，以形成本發(fā)明的綴合物。并且在這些反應(yīng)中，也可以通過(guò)控制單體/引發(fā)劑的比例來(lái)控制所得的多聚物(或寡聚物)中的藥物或其他化合物的量。其他的示例性催化劑在實(shí)施例6中有所描述。作為本發(fā)明的一部分，已經(jīng)證實(shí)，使用上述方法(如圖2B部分中所示的使用Mg(II)復(fù)合物((BDI)MgN(TMS)2用Ptxl進(jìn)行綴合以激活Ptxl的方法)可以將含有羥基的化療藥物定量地?fù)饺刖郾货?。這樣一來(lái)，就可以通過(guò)切割藥物-聚丙交酯的酯鍵來(lái)調(diào)控藥物從所述顆粒中的釋放速度，這遠(yuǎn)比包封的非共價(jià)鍵合的藥物從顆粒中擴(kuò)散出來(lái)的機(jī)制更容易控制?？梢酝ㄟ^(guò)調(diào)節(jié)藥物裝栽量和顆粒大小來(lái)控制藥物的釋放動(dòng)力學(xué)。由于可以控制聚合反應(yīng)從而提供定量的產(chǎn)率，因此可以簡(jiǎn)單地通過(guò)調(diào)整單體/藥物(或其他化合物)的摩爾比(單體與引發(fā)劑的摩爾比)而精確地控制藥物裝載量。由于本發(fā)明的方法能夠通過(guò)控制藥物-聚合物的組成而精確控制藥物裝載量，因此將能夠顯著地增強(qiáng)所述納米顆粒的臨床轉(zhuǎn)化率和用于臨床應(yīng)用的納米顆粒的可調(diào)節(jié)性。此外，已證實(shí)用本發(fā)明的方法生成的納米顆粒具有前所未有的高藥物裝載量(最高達(dá)約40%)?？梢允褂酶鞣N已知方法將本發(fā)明的多聚物和/或寡聚物綴合物制成納米顆粒。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中使用了納米沉淀法，其中將綴合物的溶液加入到一種不能溶解該綴合物的溶液中。使用本發(fā)明的綴合物進(jìn)行的用于形成納米顆粒的沉淀步驟比使用其他起始材料進(jìn)行的沉淀步驟要簡(jiǎn)便，因?yàn)槠渲袃H使用了一種類型的材料即所述綴合物。與^目比，使用游離藥物和聚合物進(jìn)行的沉淀和包封步驟(即使在二元系統(tǒng)中)也可能十分復(fù)雜。在相分離過(guò)程中對(duì)藥物和聚合物彼此整合的過(guò)程控制通常很難做到，特別是當(dāng)上述兩個(gè)要素具有不同的物理和化學(xué)性質(zhì)時(shí)更是如此。在納米包封中總是出現(xiàn)兩相的顆粒分布，這可能部分地歸因于由于相似相溶原理而產(chǎn)生的藥物或聚合物自身聚集。本發(fā)明的方法提供了具有單模式顆粒分布的顆粒。在使用任何能夠作為聚合引發(fā)劑并需要以顆粒形式進(jìn)行體內(nèi)送遞的化合物形成綴合物時(shí)，通常都能夠?qū)崿F(xiàn)上述的藥物-多聚物或藥物-寡聚物綴合物所具有的優(yōu)勢(shì)。此外，當(dāng)使用多聚物或寡聚物綴合物形成任意大小的可用于體內(nèi)送遞的顆粒時(shí)，還能夠?qū)崿F(xiàn)上述納米顆粒送遞組合物制劑的特殊優(yōu)勢(shì)。在各種NP制備方法中，納米沉淀法已被廣泛應(yīng)用于制備用作包封化療藥物的NP。在通常的方法中，將可降解的疏水性聚合物例如聚丙交酯與疏水性藥物在可與水混溶的溶劑(例如THF或DMF)中混合，并加入過(guò)量的水。有機(jī)溶劑在水中的擴(kuò)散可以促使隨機(jī)混合的藥物和聚合物分子形成大小小于約100nm的納米聚集體。更廣義而言，可以使用本領(lǐng)域中已知的用多聚物或寡聚物材料制備納米顆粒的多種方法中的任何一種來(lái)制備本發(fā)明的綴合物。在一方面，本發(fā)明涉及一種結(jié)合了藥物-引發(fā)的環(huán)狀酯(或碳酸酉旨)聚合反應(yīng)和納米沉淀方法的納米綴合物技術(shù)，所述技術(shù)用以制備含有藥物的納米顆粒，所述納米顆粒具有預(yù)定的藥物裝載量、接近100%的包封效率、最小的顆粒不均一性和顯著降低的初始快速釋放效應(yīng)。在癌癥化療應(yīng)用中，特別是在使用納米顆粒進(jìn)行的這類治療中，本發(fā)明的顆粒制劑可具有改進(jìn)的效力和更低的毒性。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及用于癌癥治療的聚合物納米顆粒。在本發(fā)明的這一方面中，所述藥物-多聚物或藥物-寡聚物綴合物包括抗癌藥物或化療藥物?？捎糜诎┌Y治療的納米顆?？砂ê袃煞N或多種抗癌藥物的綴合物的混合物。可以通過(guò)任何已知的方法將本發(fā)明的顆粒制劑送遞至受試者，只要所述方法與顆粒的大小以及顆粒中攜帶的治療劑、診斷試劑或其他試劑相適應(yīng)即可。本發(fā)明還涉及所述藥物-多聚物和藥物-寡聚物綴合物用于制備用于體內(nèi)送遞所述藥物的醫(yī)藥中的用途。所述藥物例如可為抗癌藥物。更具體而言，本發(fā)明涉及所述藥物用于制備治療癌癥的醫(yī)藥中的用途。在具體的實(shí)施方案中，所制備的醫(yī)藥為可通過(guò)任何合適的劑型給藥的顆粒形式，特別地為納米顆粒的形式。在具體的實(shí)施方案中，所述醫(yī)藥還包括可藥用的栽體或稀釋劑，特別地包括適用于所需給藥方式的載體或稀釋劑。本文所使用的術(shù)語(yǔ)"藥物"是相當(dāng)廣義的術(shù)語(yǔ)，包括能夠?yàn)樾枰撤N治療益處的個(gè)體提供該治療益處的任何化合物?？梢允褂脤⒁诩{米顆粒中被送遞的合適藥物或其他化合物來(lái)形成綴合物。所述藥物或其他化合物必須具有至少一個(gè)能夠在存在催化劑的條件下引發(fā)開(kāi)環(huán)聚合反應(yīng)的官能團(tuán)。據(jù)信所述官能團(tuán)一定是能和催化劑相互作用從而形成具有聚合活性的物質(zhì)。例如，羥基和巰基能夠引發(fā)開(kāi)環(huán)聚合反應(yīng)。所述羥基和巰基可為伯羥基或伯巰基、仲羥基或仲巰基、或叔羥基或叔巰基。如本領(lǐng)域所知，伯-、仲-或叔-羥基和巰基具有不同的立體結(jié)構(gòu)，可能具有不同的相對(duì)反應(yīng)活性。在本說(shuō)明書(shū)中所描述的化學(xué)基團(tuán)意欲表示其在本領(lǐng)域中最寬泛的含義。將所述具有至少一個(gè)能夠引發(fā)開(kāi)環(huán)聚合的官能團(tuán)的化合物與能夠通過(guò)開(kāi)環(huán)聚合反應(yīng)而聚合的一種或多種環(huán)狀單體和合適的開(kāi)環(huán)聚合催化劑在合適的溶劑中混合，在一定條件下反應(yīng)足夠的時(shí)間，以生成所需的寡聚物或多聚物。已知有多種化合物都能夠在存在催化劑的條件下引發(fā)開(kāi)環(huán)聚合。在這些化合物中，在化學(xué)結(jié)構(gòu)中含有一個(gè)或多個(gè)羥基或一個(gè)或多個(gè)巰基的化合物是本發(fā)明的化合物。對(duì)于給定化合物而言，使用本文教導(dǎo)的或本領(lǐng)域公知的材料和方法，能夠很容易地通過(guò)測(cè)試性聚合反應(yīng)評(píng)估該化合物在本發(fā)明的方法中引發(fā)聚合的能力，而不必進(jìn)行過(guò)多的實(shí)驗(yàn)。例如，可以使用圖8中所示的藥物和其他化合物成功地實(shí)施本發(fā)明的方法。圖13示出了可用于制備本發(fā)明的藥物綴合物和納米綴合物顆粒的多種含鞋基的藥物。可用于本發(fā)明的方法的其他帶有羥基的藥物包括但不限于地瑞那韋(Darunavir，TMC-114)、替拉那韋(Tipranavir，TPV)、沙查那韋(Saquinavir,SQV)、利托那韋(Ritonavir，RTV)、茚地那韋(Indinavir"奈非那韋(Nelfmavir，NFV)、安普那韋(Amprenavir，APV)、洛匹那韋(Lopinavir，ABT-378)、阿扎那韋(Atazanavir，ATV)、重酒石酸長(zhǎng)春瑞濱(Vinorelbinebitartrate)、氟維司群(fulvestrant)、Sarcodictyins、喜樹(shù)械(camptothecins)、長(zhǎng)春堿(Vinblastine)、吝蟲(chóng)內(nèi)西旨l(bryostatin1)、(+)國(guó)Cylindhcine、(+)-Lactacystin、銅綠菌素(Aeruginosin)298-A、(+)-Fostriecin、GarsubellinA/貫葉金絲杉匕素、(S)曙奧昔布寧(Oxybutynin)、埃博霉素A(EpothiloneA)、齊多夫定(Zidovudine，AZT)、拉米夫定(Lamivudine，3TC)、去羥肌苦(Didanosine，ddl)、阿巴卡韋(Abacavir，ABC)和恩曲他濱(Emtricitabine,FTC)。其他可用于本發(fā)明方法中的藥物包括含有酚羥基的具有各種結(jié)構(gòu)的藥物，它們包括但不限于巴美生(bamethane)、香草酰二乙胺(ethamivan)、六氯酚、水楊酰苯胺、鄰苯二酚(pyrocatechin)、百里酚(thymol)、噴他佐辛(pentazocine)、間苯三酚(phloroglucinol)、丁香酚(eugenol)、氯硝柳胺(niclosamide)、特布他林(terbutaline)、多巴胺(dopamine)、曱基多巴(methyldopa)、去曱腎上腺素(norepinephrine)、丁香酚(eugenol)、a-茶酚、多元酚、腎上腺素(adrenaline)、多巴胺(dopamine)、苯腎上腺素(phenyl印hrine)、間羥胺(metaraminol)、非諾特羅(fenoterol)、石克氯酚(bi也ionol)、a-生育酚(alpha醒tocopherol)、異丙腎上腺素(isoprenaline)、腎上腺素(adrenaline)、去曱腎上腺素(norepiniphrine)、沙丁胺醇(salbutamol)、非諾特羅(fenoterol)、硫氯酚(bithionol)、綠原酸/酯(chlorogenicacid/esters)、卡托普禾'J(captopril)、阿莫西林(amoxicillin)、倍他洛爾(betaxolol)、馬索羅酚(masoprocol)、染料木素(genistein)、大豆素(daidzein)、大豆戒(daidzin)、乙酖黃豆黃戒(acetylglycitin)、雌馬酚(equol)、黃豆黃素(glycitein)、iodoresiniferatoxin、SB202190和tyrphostinSU1498。對(duì)于某一種給定的將凍—吏用本發(fā)明方法進(jìn)行綴合的化合物而言，可能需要使用不同的催化劑進(jìn)行試驗(yàn)性的聚合反應(yīng)，例如，某些化合物可能更適合于有機(jī)金屬催化劑，而另一些化合物可能更適合于有機(jī)催化劑。例如，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，有些化合物雖然含有合適的官能團(tuán)，仍不能在某些基于金屬的催化劑存在的條件下引發(fā)聚合或者該功能受到限制，這是因?yàn)樗龌衔锟赡軙?huì)使所述催化劑失活。具體而言，PLA與米托蒽醌(mitoxantrone)的綴合就不能使用(BDI)MgN(TMS)2作為催化劑。據(jù)信這是因?yàn)槊淄休祯?式J)具有的羥基烷基氨基可能會(huì)使Mg催化劑失活。式J可以使用本文所述的任何環(huán)狀單體(包括AB2型環(huán)狀單體)與能夠引發(fā)聚合的化合物一起形成多聚物或寡聚物綴合物?？梢允褂萌魏文軌蛲ㄟ^(guò)開(kāi)環(huán)聚合而聚合的環(huán)狀單體來(lái)形成本發(fā)明的藥物綴合物和顆粒，特別是納米顆粒。具體而言，通?？梢允褂媚軌蛲ㄟ^(guò)活化的-OH或金屬醇鹽基團(tuán)進(jìn)行聚合的環(huán)狀單體，來(lái)形成本發(fā)明的藥物綴合物和顆粒。可以使用的環(huán)狀單體包括環(huán)狀酯和環(huán)狀碳酸酯。環(huán)狀酯包括內(nèi)酯、環(huán)狀二酯和環(huán)狀酯-酰胺，例如環(huán)縮酚酸肽(cyclodepsipeptide).環(huán)狀酯具有如下結(jié)構(gòu)式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>其中m+n的和為1-20,X為O或NH，x為0或1以表示存在或不存在酯基或酰胺基，A和Y2表示在環(huán)上的一個(gè)或多個(gè)碳原子被非氬取代基任選地取代。Y!和Y2的每一個(gè)彼此獨(dú)立地為不干擾本文所述的聚合反應(yīng)的取代基，例如可以選自氫、卣素、-COOR、-NRR，、-SR和-OR(其中R和R，獨(dú)立地為一個(gè)或多個(gè)氫、烷基或芳基)、胍鹽基、咪喳基、烷基、烯基、炔基、芳基(包括苯基或苯甲基)和-N3。Y!和Y2的每一個(gè)還可以為氨基酸或具有1至5個(gè)氬基酸殘基的短肽。K和Y2的每一個(gè)還可以包括被本領(lǐng)域已知的保護(hù)基團(tuán)保護(hù)起來(lái)的上述列出的基團(tuán)。烷基、烯基、炔基和芳基可以任選地被一個(gè)或多個(gè)囟原子(包括一個(gè)或多個(gè)氟)、-N3、畫(huà)COOR"、-NR"R，"、-SR"、-OR"取代，其中所述R"和R"，獨(dú)立地為氫或未被取代的烷基、烯基、炔基或芳基。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，L和/或Y2可為羥基烷基。在具體的實(shí)施方案中，Yi和Y2的每一個(gè)為氫或含有1至6個(gè)碳原子的烷基，特別是曱基。環(huán)狀碳酸酯具有如下結(jié)構(gòu)式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>式B其中p的范圍為1-20,K和Y2表示在環(huán)上的一個(gè)或多個(gè)碳原子被非氫取代基任選地取代，其中每一個(gè)Yi和Y2的定義如上文所述。在具體的實(shí)施方案中，K和Y2的每一個(gè)為氫或含有1至6個(gè)碳原子的烷基，特別是曱基。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，^和/或Y2可為羥基烷基。環(huán)狀酯包括但不限于內(nèi)酯，例如卩-丁內(nèi)酯(11=2)、8-戊內(nèi)酯(11=4)、s-己內(nèi)酯(11=5)、a-甲基-p-丙內(nèi)酯、p-曱基-p-丙內(nèi)酯、(o-十五內(nèi)酯、①-十二內(nèi)酯和任何丙交酯或乙交酯，包括它們的所有立體異構(gòu)體，例如SS-丙交酯RR-丙交酯RS-丙交酯丙交酯-乙交酯乙交酯,1t恩4M的內(nèi)又目百孰G又目ff:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>式C,任何具有6元環(huán)或7元環(huán)結(jié)構(gòu)的環(huán)縮酚酸肽(半酯和半酰胺)，包括但不限于下式Dl-D3分別所示的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>可以通過(guò)活化的-OH或金屬醇鹽聚合的其他環(huán)狀單體包括含磷的環(huán)狀酯，包括環(huán)狀磷酸酯和膦酸酯O(CH2〉q、Y3式E其中q-l至20,Y3的定義與上述K和Y2相同，&為Y3、或-OY;j(磷酸酯)。環(huán)狀亞磷酸酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>式F其中的各變量的定義如上文所述，含硅酮的環(huán)狀單體包括<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>其中每一個(gè)R獨(dú)立地選自氫或任選取代的烷基。在上述環(huán)狀單體的具體實(shí)施方案中，Yi至Y3的每一個(gè)為氫或含有l(wèi)至6個(gè)碳原子的烷基。在上述環(huán)狀單體的具體實(shí)施方案中，Yi至Y3均為氫或均為含有1至6個(gè)碳原子的烷基，或特別地它們均為曱基。在上述環(huán)狀單體的具體實(shí)施方案中，每一個(gè)R選自氫或含有1至6個(gè)碳原子的烷基。在上述環(huán)狀單體的具體實(shí)施方案中，所有的R，均為氫，或所有的R，均為含有1至6個(gè)碳原子的烷基，特別地，所有的R，均為甲基。在具體的實(shí)施方案中，單獨(dú)使用AB2型環(huán)狀可聚合單體，或?qū)⑵渑c其他環(huán)狀酯或環(huán)狀碳酸酯組合^f吏用。AB2型環(huán)狀酯單體包括下式所示的化合物OO式H其中z為1至6,Yi的定義如上文所述。在具體的實(shí)施方案中，K可為氫或含有1至6個(gè)碳原子的烷基。術(shù)語(yǔ)"烷基"指的是分枝或不分枝(直鏈或線性)的飽和一價(jià)烴基，或含有一個(gè)或多個(gè)環(huán)的環(huán)狀基團(tuán)。除非另外指明，優(yōu)選的烷基含有1至20個(gè)碳原子，更優(yōu)選的烷基含有1至10個(gè)碳原子。短鏈烷基為含有1至6個(gè)碳原子的烷基，包括甲基、乙基、丙基、丁基、戊基和己基，包括它們所有的異構(gòu)體。長(zhǎng)鏈烷基為含有8至20個(gè)碳原子的烷基,優(yōu)選地為含有12-20個(gè)碳原子的烷基以及含有12-20個(gè)碳原子和含有16-18個(gè)碳原子的烷基。術(shù)語(yǔ)"環(huán)烷基"指的是具有單環(huán)結(jié)構(gòu)或多環(huán)稠環(huán)結(jié)構(gòu)的環(huán)狀烷基，優(yōu)選地含有3至20個(gè)碳原子。環(huán)烷基包括例如單環(huán)結(jié)構(gòu)例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)辛基等，或多環(huán)結(jié)構(gòu)例如金剛烷基等。除非另外指明，否則烷基包括環(huán)烷基以及如下定義的任選取代的烷基。術(shù)語(yǔ)"烯基"含指的是有含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵的分枝或不分枝的一價(jià)烴基，或含有一個(gè)或多個(gè)環(huán)的環(huán)烯基，其中至少一個(gè)環(huán)中含有雙鍵。除非另外指明，優(yōu)選的烯基含有1至20個(gè)碳原子，更優(yōu)選的烯基含有I至IO個(gè)碳原子。烯基可包括一個(gè)或多個(gè)共軛或非共軛的雙鍵(C-C)。優(yōu)選的烯基為含有l(wèi)或2個(gè)雙鍵的烯基，也包括co-烯基。短鏈烯基為含有2至6個(gè)碳原子的烯基，包括乙烯基(vinyl)、丙烯基、丁烯基、戊烯基和己烯基，以及它們所有的異構(gòu)體。長(zhǎng)鏈烯基為含有8至20個(gè)碳原子的烯基，優(yōu)選地為含有12-20個(gè)碳原子的烯基以及含有12-20個(gè)碳原子和含有16-18個(gè)碳原子的烯基。術(shù)語(yǔ)"環(huán)烯基"指的是具有單環(huán)結(jié)構(gòu)或多環(huán)稠環(huán)結(jié)構(gòu)的環(huán)狀烯基，優(yōu)選地含有3至20個(gè)碳原子，并且其中至少一個(gè)環(huán)上含有雙鍵(C=C)。環(huán)烯基包括例如單環(huán)結(jié)構(gòu)例如環(huán)丙烯基、環(huán)丁烯基、環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、環(huán)辛烯基、環(huán)辛二烯基、環(huán)辛三烯基，以及多環(huán)結(jié)構(gòu)。除非另外指明，否則烯基包括環(huán)烯基以及如下定義的任選取代的烯基。術(shù)語(yǔ)"炔基"含指的是有含有一個(gè)或多個(gè)巻鍵(OC)的分枝或不分枝的一價(jià)烴基。除非另外指明，優(yōu)選的炔基含有1至20個(gè)碳原子，更優(yōu)選的炔基含有1至10個(gè)碳原子。炔基包括乙炔基、丙炔基等。短鏈炔基為含有2至6個(gè)碳原子的炔基，也包括它們所有的異構(gòu)體。長(zhǎng)鏈炔基為含有8至20個(gè)碳原子的炔基，優(yōu)選地為含有12-20個(gè)碳原子的炔基以及含有12-16個(gè)碳原子和含有16-18個(gè)碳原子的炔基。術(shù)語(yǔ)"環(huán)炔基"指的是具有單環(huán)結(jié)構(gòu)或多環(huán)稠環(huán)結(jié)構(gòu)的環(huán)狀炔基，優(yōu)選地含有3至20個(gè)碳原子，并且其中至少一個(gè)環(huán)上含有巻鍵((C三C)。除非另外指明，否則炔基包括環(huán)炔基以及如下定義的任選取代的炔基。術(shù)語(yǔ)"芳基"指的是含有至少一個(gè)芳香環(huán)的一價(jià)基團(tuán)。所述基團(tuán)在形式上是通過(guò)將環(huán)上碳原子的氬取代后衍生而成的。芳基含有一個(gè)或多個(gè)環(huán)，其中至少一個(gè)環(huán)為芳香性的。芳基中的環(huán)可通過(guò)單鍵或雙鍵連接，或可為稠合的。示例性的芳基包括苯基、聯(lián)苯基和萘基。芳基包括含有6至30個(gè)碳原子的芳基和含有6-12個(gè)碳原子的芳基。除非另外指明，否則芳基可為如下所述的任選取代的芳基。術(shù)語(yǔ)芳基包括"芳基烷基"，指的是含有至少一個(gè)烷基和至少一個(gè)芳基的基團(tuán)，所述芳基可取代于烷基上(例如苯曱基，W-CH2-C6H5)，或者所述烷基可取代與芳基上(例如曱苯基，即-C6H4-CH3)。除非另外指明，否則所述芳基烷基中的烷基部分或芳基部分均可如本文所述被取>(戈。如本領(lǐng)域所知，用于形成本發(fā)明的綴合物的聚合反應(yīng)可在多種反應(yīng)條件(溫度，溶劑、濃度)下進(jìn)行。在選擇這些條件時(shí)應(yīng)部分地考慮到能保留任何化合物特別是將要被綴合的藥物的活性。所述聚合反應(yīng)可在合適的溶劑或溶劑的混合物中進(jìn)行。在具體的實(shí)施方案中，所述溶劑為無(wú)水的可與水混溶的溶劑。進(jìn)行聚合反應(yīng)所使用的溶劑與隨后制備顆粒時(shí)所〗吏用的溶劑可以相同或不同。聚合反應(yīng)中可用的溶劑包括但不限于THF、丙酮、二氯曱烷、氯仿、二曱基甲酰胺、DMSO、乙腈，或它們的混合物。本文所使用的術(shù)語(yǔ)"多分散性"指的是多分散性指數(shù)(PDI)，它是給定樣本中的聚合物分子量分布的量度。用重量平均分子量除以數(shù)量平均分子量而得到所述多分散性，這一指標(biāo)與給定的聚合物樣本中個(gè)體分子量的分布相關(guān)。當(dāng)給定樣本中聚合物鏈接近于均一的鏈長(zhǎng)度時(shí)，PDI就接近1。如本領(lǐng)域所知，可以對(duì)本發(fā)明的顆粒進(jìn)行表面修飾，以改進(jìn)其作為藥物送遞載體的應(yīng)用。對(duì)于顆粒特別是能夠成功地?cái)y帶藥物分子或其他化合物到達(dá)體內(nèi)部位(例如胂瘤位置)并進(jìn)入癌細(xì)胞的納米顆粒而言，優(yōu)選地，應(yīng)纟艮好地控制其特性以使其能夠克服各種生理屏障而到達(dá)腫瘤組織。通過(guò)全身途徑給予的未經(jīng)過(guò)合適的修飾納米顆粒通常會(huì)迅速地被從循環(huán)系統(tǒng)中清除，并主要聚集于肝臟和脾臟。嚴(yán)重的肝和脾中的滯留不僅會(huì)顯著減少納米顆粒到達(dá)靶組織(例如腫瘤組織)的量，還會(huì)對(duì)肝和脾造成損害。上述清除是由于肝臟Kupffer細(xì)胞和脾臟巨噬細(xì)胞的清除作用。通過(guò)這種被動(dòng)的和位點(diǎn)特異性機(jī)制，納米顆粒可在幾分鐘至幾十分鐘內(nèi)被清除。此外，納米顆粒的表面特征和大小在血液調(diào)理素作用中也起了很重要的作用，所述血液調(diào)理素作用是例如纖連蛋白(fibronectin)的調(diào)理素的沉積過(guò)程，這一過(guò)程會(huì)引發(fā)免疫應(yīng)答，并促進(jìn)巨噬細(xì)胞從血液中清除所述納米顆粒。當(dāng)所述納米顆粒的表面特征被4艮好地控制時(shí)，可以顯著地減少調(diào)理素與納米顆粒表面的結(jié)合。例如，納米顆粒表面的聚乙二醇化為一種公知的能夠減少蛋白結(jié)合的方法，該方法能夠形成可以顯著減少蛋白結(jié)合和減少肝和脾攝入的親水層。聚乙二醇化能夠產(chǎn)生鞘狀結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)與某些病原性微生物所具有的機(jī)制類似，可以避開(kāi)免疫系統(tǒng)的檢測(cè)。由此可以抑制調(diào)理素作用，通過(guò)這種抑制作用可以增強(qiáng)納米顆粒在循環(huán)系統(tǒng)中的被動(dòng)滯留時(shí)間，并且在納米顆粒與血液接觸時(shí)能夠避免所述納米顆粒被巨噬細(xì)胞捕獲。這種對(duì)納米顆粒表面進(jìn)行處理的方法雖然簡(jiǎn)單，但是卻可以獲得顯著的效果，通過(guò)聚乙二醇化可以使得納米顆粒在循環(huán)系統(tǒng)中的半衰期從幾分鐘提高到幾小時(shí)或幾十小時(shí)。表面聚乙二醇化成為目前廣泛使用的減少巨噬細(xì)胞識(shí)別的方法。除了表面形態(tài)之外，納米顆粒的大小也是另一個(gè)能夠顯著影響生物分布和體內(nèi)效力的重要參數(shù)。納米顆粒的大小可以極大地影響清除速率。顆粒大小在200nm或更大的顆粒與較小顆粒相比更容易引起巨噬細(xì)胞免疫應(yīng)答和激活Kupffer細(xì)胞的才聶入。肝中內(nèi)皮竇的孔的大小可達(dá)到150nm。脾內(nèi)皮細(xì)胞間的縫隙約為200-250nm，當(dāng)顆粒大小超過(guò)該縫隙的大小時(shí)，脾過(guò)濾現(xiàn)象就會(huì)變得很顯著。因此，當(dāng)納米顆粒被用于抗癌藥物的送遞時(shí)，為了延長(zhǎng)其循環(huán)時(shí)間，顆粒的大小通常^皮控制在150nm或更小。然而，所述納米顆粒的大小也不能太小，否則顆粒就會(huì)通過(guò)腎被快速地濾掉(當(dāng)顆粒大小<10nm時(shí))，這是分子量為40kDa或更小的聚合物-藥物綴合物經(jīng)常遇到的問(wèn)題。極小的顆粒(1-20nm)從血管中滲到細(xì)胞間隙的速度也會(huì)較慢，并且會(huì)通過(guò)淋巴管而在淋巴結(jié)中累積。顆粒大小小于20nm的納米顆粒很容易通過(guò)開(kāi)放的孔從血管中滲漏到毛細(xì)血管。因此，納米顆粒應(yīng)該足夠大，大到能夠防止從循環(huán)系統(tǒng)中不想要的滲漏；納米顆粒還不能太大，以盡量避免免疫應(yīng)答。用于抗癌藥物送遞的大多數(shù)納米顆粒的大小都在20至150nm之間。為了改進(jìn)抗癌送遞，人們致力于開(kāi)發(fā)鞘技術(shù)，以增加長(zhǎng)循環(huán)半衰期的NP在易漏的腫瘤脈管中的滲透。腫瘤的脈管是高度不均一的。才艮據(jù)具體部位不同，腫瘤組織的脈管可能壞死，也可能脈管高度發(fā)達(dá)以使得腫瘤能夠得到充足的養(yǎng)分和氧氣以供其快速生長(zhǎng)。腫瘤的血管也是高度不均一的，并且與正常血管相比也有某些異常。通常，肺瘤血管比正常血管更易漏，并且表現(xiàn)出特征性的截留孔徑，該孔徑在380至780nm之間。這些孔成為NP離開(kāi)循環(huán)系統(tǒng)而進(jìn)入腫瘤間隙的途徑。因此，顆粒大小為150nm或更小的NP可以通過(guò)這些易漏的管孔自由的擴(kuò)散，而顆粒大小超過(guò)400nm的顆粒則相對(duì)很難滲入腫瘤組織。由于肺瘤組織中淋巴管系統(tǒng)很不發(fā)達(dá)，因此通過(guò)上述易漏的腫瘤脈管系統(tǒng)的孔滲入的納米顆粒不會(huì)被4艮快清除。因此，在循環(huán)系統(tǒng)中的持續(xù)濃度能夠?qū)е录{米顆粒隨時(shí)間不停累積增加。這一效應(yīng)就是在癌癥藥物送遞中廣為人知的增強(qiáng)滲透和滯留(EPR)效應(yīng)被動(dòng)乾向機(jī)制。通過(guò)反應(yīng)引入所需的末端官能團(tuán)，可以對(duì)本發(fā)明的多聚物和寡聚物綴合物進(jìn)行化學(xué)修飾?？捎糜谒幬锼瓦f應(yīng)用的末端官能團(tuán)包括但不限于羥基、巰基、M、疊氮基、炔基、烯基、酮基、酚基、卣代基、咪哇基、胍鹽基、羧酸酯基或磷酸酯基。通過(guò)公知的化學(xué)方法，可以將這些所需的官能團(tuán)引入至本發(fā)明的多聚物或寡聚物的末端。還可以使用這些官能團(tuán)將本發(fā)明的多聚物或寡聚物綴合物與其他化合物相綴合，和/或?yàn)橛蒦^發(fā)明的綴合物制備的納米顆粒提供表面修飾的位點(diǎn)，所述其他化合物例如其他多聚物、其他寡聚物、碳水化合物、肽、蛋白、抗體、核酸、適體等等。本發(fā)明還涉及這樣一種多層顆粒，其中使用對(duì)通過(guò)本文所述方法制備的顆粒進(jìn)行處理或包被，或在所述納米顆粒上提供第二聚合物層。所述第二聚合物與顆粒中的聚合物綴合物中的聚合物可以相同或不同。本發(fā)明的顆粒也可含有兩種或多種綴合的化合物，例如在給定應(yīng)用中相容的兩種或多種不同化合物。本發(fā)明的顆?？珊胁煌膶踊虿糠?，其中所述化合物或藥物的濃度不同。例如，外層中含有的給定化合物(例如藥物)的濃度可以比內(nèi)層高或者低。例如，外層可含有PEG，而內(nèi)層含有另一種聚合物的綴合物。例如，第一內(nèi)層可含有第一種藥物多聚物或寡聚物綴合物，第二外層可含有第二種藥物的多聚物或寡聚物綴合物。在本發(fā)明方法和材料中使用的多聚物和寡聚物優(yōu)選地為生物相容性和可生物降解的(根據(jù)所需的應(yīng)用)。優(yōu)選地，它們?cè)谑褂弥胁槐憩F(xiàn)出不想要的毒性或表現(xiàn)出很小的不想要的毒性?？完?duì)本發(fā)明的顆粒進(jìn)行表面修飾以使其優(yōu)先耙向于某些細(xì)胞類型。顆表面而實(shí)現(xiàn)。本文所使用的術(shù)語(yǔ)"顆粒"通常指具有給定形狀和大小以適用于通過(guò)某些給藥方法進(jìn)行體內(nèi)送遞的顆粒。所述顆粒可為膠束、聚集體、微球或不規(guī)則性狀。本文所使用的術(shù)語(yǔ)"顆粒大小"與其在本領(lǐng)域中通用的含義相同，并可以通過(guò)本文的實(shí)施例中所述的方法進(jìn)行測(cè)定。本發(fā)明涉及多聚物或寡聚物的綴合物。最通常而言，聚合物為含有彼此鍵合的多個(gè)重復(fù)單元的化合物。聚合物可以含有多于一種的不同的重復(fù)單元。所述重復(fù)單元通常衍生于單體的聚合。共聚物專門(mén)指含有兩種或多種結(jié)構(gòu)上不同的重復(fù)單元的聚合物。聚合物中的不同重復(fù)單元可以在聚合物鏈中隨機(jī)排序，或在聚合物中聚集為連續(xù)的嵌段。當(dāng)聚合物中存在兩種或多種重復(fù)單元的連續(xù)嵌段時(shí)，該聚合物為嵌段共聚物。本文所使用的術(shù)語(yǔ)"多聚物"指的是含有總共多于10個(gè)重復(fù)單元的化合物(其中可以有一種或多種重復(fù)單元)。本文所使用的術(shù)語(yǔ)"寡聚物"指的是具有2至10個(gè)重復(fù)單元的化合物。本發(fā)明的綴合物由具有至少一個(gè)羥基或一個(gè)巰基的化合物與寡聚物或聚合物通過(guò)開(kāi)環(huán)聚合而形成。所述化合物必須含有至少一個(gè)能夠在反應(yīng)條件下作為聚合引發(fā)劑的官能團(tuán)。所述羥基最通常為與碳原子相連的伯(1，)羥基、仲(2，)羥基或叔(3，)羥基，或?yàn)榕c芳香環(huán)的碳原子相連的羥基，這在本文中通常被稱為"酚羥基"。酚羥基為直接與芳香環(huán)上的碳原子相連的羥基。術(shù)語(yǔ)"羥基"和"氫氧基"在本文中可以互換使用。羥基不包括-COOH基團(tuán)(羧,)中的-OH部分，其中的氫為酸性。酚羥基中的氫的比醇中的氫酸性大，但是比羧酸基中的氫酸性小。本文所使用的術(shù)語(yǔ)"羥基"也不包括與N、P或S原子鍵合的-OH部分。如本領(lǐng)域所知，伯羥基指的是與該羥基相鍵合的碳原子還與兩個(gè)氫原子鍵合(例如-CHrOH)。仲羥基指的是與該羥基相鍵合的碳原子還與一個(gè)氫原子鍵合(例如-CH(M)-OH，其中M為一個(gè)非氬原子或其他基團(tuán)，在許多情況下M為一個(gè)含碳的基團(tuán))。叔羥基指的是與該羥勤目鍵合的碳原子不與氫原子鍵合，通常該羥勤目^^合的碳原子還與另外三個(gè)碳原子鍵合。所述巰基最通常為與碳原子相連的伯(1，)巰基、仲(2，)巰基或叔(3，)巰基，其中伯、仲和叔的定義與上文關(guān)于羥基的定義類似。本發(fā)明的顆粒制劑可用于治療多種疾病、障礙或病癥。本發(fā)明的治療方法包括給予需要治療的個(gè)體治療有效量的藥物，其中所述藥物包含于通過(guò)本發(fā)明方法制備的納米顆粒中。本文所使用的術(shù)語(yǔ)"治療有效量"指的是如下所述的給定藥物的量，當(dāng)以顆粒形式給予所述個(gè)體時(shí)，該量能夠有效地至少部分地治療該個(gè)體所患的障礙、疾病或病癥，或能夠至少部分地緩解該障礙、疾病或病癥的癥狀。如本領(lǐng)域所知，給定化合物的治療有效量至少部分地依賴于給藥方式、所使用的載體或運(yùn)載體(例如溶液、乳液等)、具體的障礙或病癥以及具體的將被給予所述化合物的個(gè)體(年齡、體重、狀況、性別等等)。要達(dá)到"治療有效量"所需的劑量會(huì)依賴于所使用的具體組合物、給藥途徑、表現(xiàn)癥狀的嚴(yán)重程度和被治療具體受試者。如本領(lǐng)域所知，可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)藥物學(xué)測(cè)試方法的結(jié)果來(lái)確定活性化合物可用的每日劑量。本文所述的顆粒制劑可為例如干粉的形式并可合適時(shí)被水化。所述顆粒制劑可為單位劑型，例如為膠嚢劑、懸液、干粉等。在這些劑型中，所述制劑可被分為含有合適量活性成分的單位劑型；所述單位劑型可為包裝的組合物，例如被包裝的粉末、小管、安瓿、預(yù)裝注射器或含有液體的藥袋。所述單位劑型可為例如膠嚢，或可為合適數(shù)量的包裝形式的任意這類組合物。如本領(lǐng)域所知，所-使用的劑量可在寬范圍內(nèi)變動(dòng)，并應(yīng)在每一具體病例中針對(duì)個(gè)體需要進(jìn)行調(diào)整。在本發(fā)明方法中可以使用任何合適的給藥形式。本發(fā)明的顆?？梢酝ㄟ^(guò)口服、靜脈內(nèi)、皿內(nèi)、皮下或肌內(nèi)劑型給予，這些劑型均是制藥領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所熟知的。本發(fā)明的化合物還可以通過(guò)使用合適的鼻內(nèi)給藥運(yùn)載體以局部應(yīng)用的方式進(jìn)行鼻內(nèi)給藥。對(duì)于鼻內(nèi)或氣管內(nèi)吸入而言，可將本發(fā)明的化合物配制為水性或部分水性的溶液，然后以氣溶膠的形式給藥。本發(fā)明提供了治療哺乳動(dòng)物特別是人類的障礙、疾病、病癥和癥狀的方法，所述方法是通過(guò)給予需要所述治療或預(yù)防的哺乳動(dòng)物個(gè)體治療有效量的本發(fā)明的顆粒制劑。治療的效果可為所述障礙、病癥或其一種或多種癥狀的部分或未完全緩解、抑制、預(yù)防、減輕或消除。給藥包括本領(lǐng)域已知的對(duì)給定疾病或障礙類型有效的任何給藥方式，并意圖包括以任何合適的劑型給藥的方式。需要所述治療或預(yù)防的個(gè)體包括已被確診患有給定障礙或病癥的個(gè)體和疑似患有這類障礙或病癥的個(gè)體(例如已表現(xiàn)出某些癥狀)。術(shù)語(yǔ)"藥物"包括藥物的"可藥用鹽"和前藥。本文所使用的術(shù)語(yǔ)"前藥"意為可以在體內(nèi)通過(guò)代謝方式(例如通過(guò)水解)轉(zhuǎn)化為藥物的化合物?？梢允褂萌魏我阎姆椒▽?duì)本發(fā)明的顆粒進(jìn)行表面修飾，以改進(jìn)其表面性質(zhì)以用于體內(nèi)送遞或其他應(yīng)用。例如，可以使用本領(lǐng)域已知的聚乙二醇化對(duì)顆粒表面進(jìn)行修飾?？梢允褂帽绢I(lǐng)域已知的聚合物進(jìn)行涂覆以修飾顆粒表面。當(dāng)本文公開(kāi)一組取代基時(shí)，應(yīng)當(dāng)理解的是，該組中和所有其子集中的所有個(gè)別的成員也被分別地公開(kāi)，其中包括該組成員的任何亞型、對(duì)映異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)體。當(dāng)本文中使用馬庫(kù)什組或其他分組時(shí)，所述公開(kāi)內(nèi)容中還意圖包括該組中所有個(gè)別成員的所有可能的組合和亞組合。在本文中公開(kāi)了可變定義的多個(gè)具體的組合。而本文公開(kāi)內(nèi)容中意在分別包括可變定義的具體組合的所有組合和亞組合。當(dāng)本文中描述一種化合物時(shí)，雖然為具體指明該化合物的具體亞型、對(duì)映異構(gòu)體或非對(duì)映異構(gòu)體(例如以結(jié)構(gòu)式或化學(xué)名進(jìn)行描述)，但是本說(shuō)明書(shū)意在包括曾被個(gè)別描述或組合描述的化合物的每一種亞型和對(duì)映異構(gòu)體。此外，除非特別指明，本發(fā)明公開(kāi)內(nèi)容中還意在涵蓋本文公開(kāi)的化合物的所有同位素變體。例如，能夠理解的是在本文公開(kāi)的分子中的一個(gè)或多個(gè)氬可以被氖或氖代替換。分子學(xué)和生物學(xué)研究中。包括放射性同位素的同位素變體還可用于診斷測(cè)定和治療。制備這類同位素變體的方法是本領(lǐng)域已知的?；衔锏木唧w名稱意為示例性的，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可能對(duì)相同的化合物具有不同的命名。本文所公開(kāi)的許多分子都含有一個(gè)或多個(gè)可離子化的基團(tuán)[可以在該基團(tuán)上移去一個(gè)質(zhì)子(例如-COOH)或加上一個(gè)質(zhì)子(例如^J^)，或該基團(tuán)可被季銨化(例如^JO。本文的公開(kāi)內(nèi)容意在分別包括這類分子的所有可能的離子形式和鹽形式。關(guān)于本發(fā)明化合物的鹽，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)給定的應(yīng)用，從多種可用的平衡離子中選擇適于制備本發(fā)明的鹽的平衡離子。在具體應(yīng)用中，選擇特定的陰離子或陽(yáng)離子來(lái)制備鹽，可能導(dǎo)致所述鹽的溶解性增高或降低。除非特別指明，否則本文所述或所示例的每種制劑或組分的結(jié)合都可用于實(shí)施本發(fā)明。當(dāng)本說(shuō)明書(shū)中給出一個(gè)范圍，例如溫度范圍、時(shí)間范圍或組分或濃度的范圍時(shí)，包括在所給范圍內(nèi)的所有中間范圍、子范圍以及所有個(gè)別的數(shù)值點(diǎn)都意圖包括在本發(fā)明的公開(kāi)內(nèi)容中。應(yīng)當(dāng)理解的是，在本說(shuō)明書(shū)中給出的范圍中的任何子范圍或個(gè)別的數(shù)值點(diǎn)都可被本申請(qǐng)的權(quán)利要求所排除。在本說(shuō)明書(shū)中提及的所有專利文獻(xiàn)和出版物意在指示本發(fā)明所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員的技術(shù)水平。本文所引用的參考文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容均通過(guò)援引的方式納入本文，并意在指示其出版日或公開(kāi)日前的現(xiàn)有技術(shù)狀況，本文意圖在需要時(shí)使用這些信息并排除現(xiàn)有技術(shù)中的具體實(shí)施方案。例如，當(dāng)本發(fā)明要求保護(hù)一種物質(zhì)的組分時(shí)，應(yīng)當(dāng)理解的是，在本發(fā)明做出之前的現(xiàn)有技術(shù)中已知的和可獲得的化合物，包括本文引用文獻(xiàn)中公開(kāi)的化合物提供的化合物，并不意圖包括在本申請(qǐng)要求保護(hù)的物質(zhì)的組分中。通過(guò)援引的方式納入本文的參考文獻(xiàn)是為了提供本發(fā)明的其他的環(huán)狀單體、其他的催化劑、其他的反應(yīng)條件、其他的具有至少一個(gè)羥基的藥物和其他化合物、其他的表面處理方法或修飾方法和試劑，以及本發(fā)明的方的其他應(yīng)用。本文所使用的術(shù)語(yǔ)"包括"與"包含"、"含有"或"特征為"是同義的，都是表示包括的開(kāi)放式表述，并不排除其他的未指明的要素或方法步驟。本文所使用的術(shù)語(yǔ)"由......組成"則排除了除要求保護(hù)的要素之外未指明的任何其他要素、步驟或成分。本文所使用的術(shù)語(yǔ)"基本上由......組成"則不排除不會(huì)實(shí)質(zhì)上影響權(quán)利要求的基本特征或新穎性特征的物質(zhì)或步驟。在本文的所有情況中，術(shù)語(yǔ)"包括"、"基本上由......組成"和"由......組成"可能可以彼此互換使用。在本文中示例性描述的本發(fā)明可能在缺少本文未具體公開(kāi)的任何要素或限定的條件下也能夠?qū)嵤１绢I(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解的是，不必進(jìn)行過(guò)多的試驗(yàn)，就能夠使用本文具體實(shí)例之外的起始原料(例如環(huán)狀單體、具有至少一個(gè)羥基的藥物和其他化合物、生物材料)、試劑(例如開(kāi)環(huán)聚合催化劑)、合成方法、純化方法、分析方法、測(cè)定方法和生物學(xué)方法來(lái)實(shí)施本發(fā)明。本發(fā)明意在包括本發(fā)明任何物質(zhì)和方法的所有本領(lǐng)域中已知的功能性等同物。所使用的術(shù)語(yǔ)和表述都是用于描述而不是用于限制，使用這些術(shù)語(yǔ)和表述并不意在排除所述或所顯示的特征或其部分的任何等同物，應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，在本發(fā)明要求保護(hù)的范圍內(nèi)可能有多種變化方案。因此，應(yīng)當(dāng)理解，雖然通過(guò)優(yōu)選實(shí)施方案和任選特征具體公開(kāi)了本發(fā)明，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員可以基于本發(fā)明理念而采用各種變化和修飾的方案，如后附權(quán)利要求所限定的那樣，這些變化和修飾的方案也被認(rèn)為是包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。實(shí)施例實(shí)施例1:聚丙交酯-紫杉醇(Paclitaxel)納米綴合物顆粒本發(fā)明的納米顆粒設(shè)計(jì)是基于使用藥物作為開(kāi)環(huán)聚合反應(yīng)的引發(fā)劑，以形成藥物-多聚物(和藥物-寡聚物)綴合物，其中所述藥物與所述多聚物或寡聚物共價(jià)鍵合。由于使用所述藥物作為聚合反應(yīng)的引發(fā)劑，因此所述藥物與所述多聚物(寡聚物)的綴合效率非常高，理想地為100%。此外，如果在活性聚合(例如其中藥物分子作為引發(fā)劑)中所有的藥物分子均能有效摻入，通過(guò)調(diào)節(jié)單體/引發(fā)劑的比例將能夠精確控制藥物裝載量百分比。為初步證實(shí)這一策略，在存在合適的催化劑的條件下，使用紫杉醇(Ptxl)引發(fā)丙交酯的聚合。使用含有鞋基基團(tuán)的分子作為丙交酯的活性開(kāi)環(huán)聚合的引發(fā)劑是成熟的技術(shù)。紫杉醇(Paclitaxel)是在美國(guó)銷量最大的化療藥物，它含有三個(gè)羥基基團(tuán)。金屬-氧化物(M-OR)是廣泛使用的環(huán)狀酯的活性開(kāi)環(huán)聚合的引發(fā)劑，所述環(huán)狀酯例如本研究中使用的例如DL-丙交酯(LA)。所述金屬氧化物可以通過(guò)混合含輕基的化合物和活性金屬?gòu)?fù)合物(例如金屬-氨基化合物(metal-amidocompound))而在原位制備(B.M.Chamberlain,M.Cheng,D.R.Moore，T.M.Ovitt，E.B.Lobkovsky,G\￥.Coates,/爿附.C/^柳.5Vc2001，123，3229)。在原位形成的M-OR可以引發(fā)可控的LA的活性聚合，從而實(shí)現(xiàn)OR的定量摻入到PLA的末端并實(shí)現(xiàn)100%的單體轉(zhuǎn)化率。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，通過(guò)金屬-Ptxl氧化物介導(dǎo)的LA的聚合，可以在聚酯中摻入Ptxl。這樣，通過(guò)調(diào)整LA與Ptxl的比值，能夠精確控制藥物裝載量。由于金屬-OR通常是在瞬間定量地形成，因此Ptxl在所得的PLA中的摻入效率可以達(dá)到100%。在聚合后，Ptxl分子通過(guò)可水解的酯鍵與PLA的末端共價(jià)地連接，并可通過(guò)水解進(jìn)行持續(xù)釋放。對(duì)Ptxl-PLA綴合物進(jìn)行納米沉淀以生成聚合的NP，其中納米綴合物(NC)含有共價(jià)結(jié)合的Ptxl。為了保證LA(丙交酯)在室溫下快速而完全地聚合，使用了活性很高的LA聚合催化劑-(BDI)MgN(TMS)2(Chamberlain，etal.2001，見(jiàn)上文)(該催化劑的結(jié)構(gòu)示于圖2)。將Ptxl與1當(dāng)量的(BDI)MgN(TMS)2混合，在室溫下，LA的聚合在幾分鐘內(nèi)就能完成，并且在所得的PLA中含有基本定量摻入的Ptxl(表1)。相信原位形成的(BDI)Mg-Ptxl復(fù)合物(結(jié)構(gòu)未表征；可能為單體Mg-Ptxl氧化物)引發(fā)了聚合。在使用0.1-1M的NaOH處理Ptxl-PLA后，在所述聚合物綴合物中摻入的Ptxl以其初始形式和其他降解產(chǎn)物一起釋放，這表明Ptxl通過(guò)可水解的酯鍵與PLA相綴合。Ptxl-PLA綴合物的納米沉淀生成小于100nm的NP(表1)。為了與NE相區(qū)分，將這些由Ptxl-PLA綴合物的納米沉淀生成的NP稱為納米綴合物(NC)。在本文中，具體的綴合的聚合物被命名為藥物(或其他化合物)-LAn，其中藥物或其他化合物以簡(jiǎn)寫(xiě)形式表示(例如Ptxl、Dtxl、Doxo、Pyr或Cy5)，PLA表示為L(zhǎng)An,其中n為M/I比值。在某些情況下，NC一一即由綴合的聚合物形成的納米沉淀，被命名為藥物-LAn的NC。這些術(shù)語(yǔ)的含義在其上下文中是清楚的。通過(guò)Ptxl-PLA綴合物的納米沉淀總是能夠獲得具有單模式顆粒分布和低多*性的NC。由于NE的多模式分布部分地歸因于未包封的游離藥物的聚集(J.Cheng，B.A.Teply，I.Sherifi，J.Sung,G.Luther,F.X.Gu，E.Levy-Nissenbaum，A.F.Radovic-Moreno，R.Langer，O.C.Farokhzad，5/o附"teWflfe2007,28，869)，在NC中觀察到的單模式分布可能與形成NC的Ptxl-PLA綴合物的單分子結(jié)構(gòu)有關(guān)。所使用的溶劑和聚合物的濃度對(duì)于通過(guò)納米沉淀制備的NP的大小有著顯著的影響。具有高水混溶性的溶劑(例如DMF)比低水混溶性的溶劑(例如THF或丙酮)更容易在水中快速擴(kuò)散(Chengetal，20(T7，見(jiàn)上文)。因此當(dāng)溶解于高水混溶性溶劑中的疏水性聚合物被加入至水中時(shí)，預(yù)計(jì)聚合物可以快速聚集成核。這樣，當(dāng)溶液中的聚合物濃度保持不變時(shí)，由于快速成核產(chǎn)生的顆粒數(shù)量更多，導(dǎo)致顆粒大小減小。當(dāng)溶劑類型和溶劑與水的比值保持不變時(shí)，由于在該條件下顆粒的數(shù)量基本上也保持不變，因此顆粒大小通常與聚合物的濃度呈線性相關(guān)。表l.具有高裝載量、高摻入效率、小顆粒尺寸和低顆粒分布的藥物-PLA納米綴合物(NC)的形成<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>a:M/I=單體/引發(fā)劑的比值。對(duì)所有樣本，都是先溶于DMF,然后在快速攪拌的條件下滴加至水中；b:使用FTIR(1771cm-l)通過(guò)分析未反應(yīng)的丙交酯測(cè)定；c:摻入效率?；谟坞x分子的RP-HPLC分析。由于藥物分子是與聚丙交酯綴合而不是被包封于聚丙交酯中，因此使用摻入效率這一術(shù)語(yǔ)代替包封效率；d:通過(guò)動(dòng)態(tài)光^:射測(cè)定，SD-標(biāo)準(zhǔn)差；e:當(dāng)通過(guò)動(dòng)態(tài)光散射儀測(cè)定多分散性時(shí)，該值為顯示顆粒大小的分散性的統(tǒng)計(jì)學(xué)指標(biāo)。Ptxl-PLA綴合物的納米沉淀遵循上述規(guī)律。當(dāng)Ptxl-PLA綴合物的濃度保持不變時(shí)，通過(guò)沉淀Ptxl-PLA綴合物的DMF溶液制備的NC大小通常比使用丙酮或THF作為溶劑制備的顆粒小20-30nm。當(dāng)使用DMF作為溶劑以及DMF/水的比值為1/20(v/v)的條件下進(jìn)行納米沉淀時(shí)，Ptxl-LA2W)NC的大小與Ptxl-LA2oo綴合物的濃度呈線性相關(guān)，并且可以通過(guò)改變Ptxl-LA2O0的濃度而在60nm至100nm之間的范圍內(nèi)精確控制該顆粒大小。當(dāng)使用其他藥物-聚合物綴合物通過(guò)納米沉淀法形成納米綴合物時(shí)，也觀察到類似的線性相關(guān)關(guān)系。與常規(guī)的納米沉淀技^M目比，其中在較小顆粒中的藥物裝載量和包封效率可能很低，通過(guò)本發(fā)明制備的納米綴合物在聚合物基質(zhì)中應(yīng)全部含有完全相同的藥物濃度(例如Ptxl濃度)，因?yàn)樵诩{米沉淀過(guò)程中聚合物-綴合物的藥物裝載量保持不變。藥物初始快速釋放會(huì)導(dǎo)致不利的副作用，并降低納米包封的治療效力。由于Ptxl-PLANC中的Ptxl釋放動(dòng)力學(xué)是由Ptxl-PLA酯鍵的水解和藥物擴(kuò)散這兩個(gè)因素決定，Ptxl從NC中釋放的動(dòng)力學(xué)將更容易控制，由此能夠顯著降低初始快速釋放效應(yīng)。在NC中觀察到良好受控的Ptxl釋放(圖3)。在第一天時(shí)，從PtXl-LA鄰(10.6wt。/o)和PtXl-LA25(19.2wt。/o)中釋放的Ptxl分別為7.0%和8.7%;在第六天時(shí)，從PtXl-LA鄰(10.6wt。/。)和PtXl-LA25(19,2wt。/o)中釋放的Ptxl分別為43%和70.4%。與^M目比，在24小時(shí)內(nèi)，從PtxI/PLANE中釋放的Ptxl為89%(圖3)。Ptxl從PtXl-LA50NC中的釋放要比它從PtXl-LA25NC中的釋放更慢，這可能是因?yàn)镻tXl-LAs。的分子量更高，并且其顆粒聚集更緊密。事實(shí)上，在所有所研究的藥物-PLANC中，低裝載量的NC表現(xiàn)出更慢的藥物釋放。NC的體外毒性是通過(guò)Ptxl的釋放量測(cè)定；因此該毒性與藥物裝載量密切相關(guān)(圖4)。在PC-3細(xì)胞中通過(guò)MTT測(cè)定測(cè)得的具有相似大小(約100nm)的PtXl國(guó)LA^、PtXl-LA25和PtXl曙L(fēng)A50NC的ICso值分別為111nm、370nm和855nM。PtXl-LA15NC與游離的Ptxl(87nM)具有相近的IC50;而PtXl-LA知NC的ICso則要高一個(gè)數(shù)量級(jí)。因此，通過(guò)簡(jiǎn)單地控制NC的藥物裝栽量就可以在較寬的范圍內(nèi)調(diào)整NC的毒性。使用聚(乙二醇)(PEG)對(duì)NP進(jìn)行表面修飾是一種用于延長(zhǎng)NP的循環(huán)時(shí)間和減少NP在血液中聚集的常用手段(P.Caliceti，F(xiàn).M.Veronese,^wwim/De//ve/j及ev/ews2003，55，1261;R.Gref，Y.Minamitake，M.T.Peracchia，V.Trubetskoy，V.Torchilin，R.Langer，Science1994，263，1600.)。起初，使用非共價(jià)方法對(duì)NC表面進(jìn)行聚乙二醇化以減少除去未反應(yīng)試劑和副產(chǎn)物的工作量。例如J吏用具有13kDa的PLGA和5kDa的PEG區(qū)段的兩親共聚物——聚(乙交酯-共-丙交酯)-b-甲氧基化PEG(PLGA-mPEG)——進(jìn)行NC的聚乙二醇化。據(jù)Pierri等人報(bào)道(JournalofBiomedicalMaterialsResearchPartA;2005;639-647),當(dāng)疏水性嵌段中PEG的含量超過(guò)70V?；虻陀?0%時(shí)，可以顯著降低兩親共聚物PLA-b國(guó)PEG的微膠束化。預(yù)計(jì)PLGA嵌段與NC通過(guò)疏水相互作用形成強(qiáng)的相互作用，從而形成穩(wěn)定的PEG外殼。NP表面聚乙二醇化中也使用過(guò)類似的技術(shù)(X.H.Gao，Y.Y.Cui，R.M.Levenson，L.W.K.Chung,S.M.Nie，AW.5,》fec/^"/.2004，22，969)。向Ptxl-LA細(xì)中按順序加入0.4至2當(dāng)量(質(zhì)量當(dāng)量)的PLGA-mPEG可以使得顆粒大小從54.5nm線性增加至100.3nm(圖5)。經(jīng)過(guò)PLGA-mPEG修飾的Ptxl-LA200NC與未經(jīng)處理的NC或僅使用mPEG處理的NC相比，表現(xiàn)出在PBS中的顯著提高的穩(wěn)定性(圖6)，這表明疏水性PLGA區(qū)段對(duì)PLGA-mPEG和NC之間的非共價(jià)相互作用十分重要。NC在靜脈內(nèi)給藥后立刻被稀釋，這可導(dǎo)致PLGA-mPEG與NC解離。然而，用PBS將經(jīng)過(guò)PLGA-mPEG處理的Ptxl-LA20()NC連續(xù)地從1mg/mL稀釋至0.01mg/mL的過(guò)程中，顆粒大小并沒(méi)有表現(xiàn)出任何增加。這一研究表明,如上所述形成的PEG外殼在全身循環(huán)中能夠保持與NC的緊密結(jié)合。使用PEG涂覆NC的表面可以生成循環(huán)時(shí)間較長(zhǎng)的納米顆粒。當(dāng)將PLA-PEG加入至Ptxl-PLA納米顆粒中時(shí)觀察到納米顆粒的大小線性增加，這表明由于PLA-PEG和PLA-紫杉醇的疏7jc相互作用而在納米顆粒的表面形成分層結(jié)構(gòu)。PEG冠很容易形成。使用上述方法產(chǎn)生的納米顆粒在鹽溶液中4MI定。這種制備在鹽溶液中穩(wěn)定的納米顆粒的簡(jiǎn)便方法將使得納米顆粒在系統(tǒng)性研究中很容易被傳遞。PEG也可以與NC共價(jià)綴合，這是本領(lǐng)域已知的(O.C.Farokhzad，丄J.Cheng，B.A.Teply，I.Sherifi，S.Jon，P.W.Kantoff，J.P.Richie,R.Langer，尸mM2006，103，6315)。Ptxl分別在其C-2，、C-l和C-7位上有三個(gè)羥基基團(tuán)。這三個(gè)羥基基團(tuán)的每一個(gè)都能夠有效地引發(fā)LA聚合，這樣得到的Ptxl-PLA綴合物中與Ptxl相連接的PLA鏈可能有1至3條，為了減少Ptxl-PLA的不均一性，Ptxl-PLA綴合物優(yōu)選地含有單--條PLA鏈。已發(fā)現(xiàn)，可在所述藥物(例如Ptxl)的特定羥基基團(tuán)上對(duì)聚合進(jìn)行控制，以制備含有單一一條PLA鏈的PLA綴合物。Ptxl的三個(gè)鞋基基團(tuán)的空間位阻不同，其順序?yàn)?，-OH<7-OH<l-OH。其中的1-OH為叔羥基，它是最難接近的，通常沒(méi)有活性(D.Mastropaolo，A.Camerman，Y.GLLuo，GLD.Brayer,N.Camerman，TVfl汰K&A1995，92，6920)。其中的2，-OH是Ptxl中最容易接近和活性最強(qiáng)的羥基基團(tuán)，而7-OH的活性也不弱，它可以有力地與2，-OH竟?fàn)幗Y(jié)合金屬催化劑?？紤]到不同羥基基團(tuán)之間的空間位阻不同，因此應(yīng)使用具有較大體積基團(tuán)的催化劑，例如具有大體積的螯合配體的金屬催化劑可能能夠區(qū)分2，-OH和7-OH，從而能夠優(yōu)先地甚至專一地通過(guò)2，-OH形成Ptxl-金屬?gòu)?fù)合物以，進(jìn)行LA聚合。由于原料過(guò)于復(fù)雜，因此使用NMR法測(cè)定PLA鏈與哪個(gè)(些)羥基基團(tuán)相連接的嘗試并不成功。為了測(cè)定PLA到底是與2，-OH連接還是與7-OH連接，使Ptxl-PLA中的Ptxl與四丁基硼氬化銨(Bii4NBH4)反應(yīng)。據(jù)報(bào)道，該試劑能夠定量地將Ptxl中的13-酯鍵還原為巴卡亭m(BAC)和(lS，2R)-AT-l-(l-苯基-2，3-二羥基丙基)苯曱酰胺(PDB)(N.F.Magri，D.GI.Kingston,C.Jitrangsri,T.Piccahello，/Org.Oieiw.1986，51，3239)。BAC帶有Ptxl的7-OH，而PDB帶有Ptxl的2，-OH。使用不同的金屬催化劑Mg(N(TMS)2)2和(BDI)MgN(TMS)2來(lái)制備Ptxl-LAs并與Bii4NBH4-反應(yīng)Mg(N(TMS)2)2是一種不帶有螯合配體的催化劑而(BDI)MgN(TMS)2帶有螯合配體。使用Mg(N(TMS)2)2時(shí)，會(huì)在反應(yīng)后生成PDB-PLA和BAC-PLA，這表明這種催化劑在Ptxl的2'-OH和7-OH上均引發(fā)聚合。當(dāng)使用(BDI)MgN(TMS)2時(shí)，所生成的BAC-PLA的量顯著降低，這表明使用這種催化劑的LA聚合主要發(fā)生在Ptxl的2，-OH上。雖然(BDI)MgN(TMS)2能夠在金屬/Ptxl引發(fā)的聚合反應(yīng)中提供顯著改進(jìn)的位點(diǎn)特異性控制，但是所得的Ptxl-PLA通常具有相當(dāng)寬的MWD(例如Ptxl-LA200Mw/Mn=1.47)。這一現(xiàn)象是因?yàn)樵贛g催化劑引發(fā)的聚合反應(yīng)中，鏈延長(zhǎng)的速度要比引發(fā)反應(yīng)的速度快得多(Chamberlainetal.,2001見(jiàn)上文)。催化劑(BDI)ZnN(TMS)2與(BDI)MgN(TMS)2具有相同的螯合配體，雖然其反應(yīng)活性要比它的Mg類似物低得多，但是它能夠提供明顯改善的LA聚合。當(dāng)在Ptxl引發(fā)的M/I=200的聚合反應(yīng)中使用(BDI)ZnN(TMS)2時(shí)，所得的Ptxl-LA細(xì)具有極窄的PDI(MW/Mn=1.02)，所得的MWMn=28,100kDa。而預(yù)計(jì)的Mn=29.700kDa。對(duì)如上所述l吏用(BDI)ZnN(TMS)2制備又與Bii4NBH4反應(yīng)的PtXl-LAs進(jìn)行HPLC分析，結(jié)果表明引發(fā)和聚合都專一地發(fā)生在Ptxl的2，-OH上。藥物引發(fā)的聚合方法可以應(yīng)用于制備其他含羥基藥物的NC,以及含有一個(gè)或多個(gè)巰基基團(tuán)的藥物的NC。例如，使用這種金屬/藥物復(fù)合物引發(fā)LA聚合和隨后納米沉淀的方法，容易地制備了具有高藥物裝載量、大于95%的裝載效率和小于100nm的顆粒大小的多西他賽(Dtxl)-LAi。和喜樹(shù)堿(CPT)-LAn)NC(其高藥物裝載量分別為35.9wt。/。和19.5wt。/o)(表1)。CPT與Ptxl和Dtxl的不同之處在于它沒(méi)有固有的酯鍵。因此，需要在使用NaOH進(jìn)行處理后從CPT-PLANC中定量回收CPT。從CPT-PLA在PBS中的水解混合物中分離CPT，并用制備型HPLC收集，其1HNMR譜與權(quán)威的CPT鐠相同。本研究還證實(shí)，在溫和的聚合反應(yīng)和納米沉淀的反應(yīng)條件下，所摻入的藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)保持不變。在NC中摻入的藥物可以以其原始形式釋放出來(lái)。與Ptxl畫(huà)LANC相似，Dtxl-LANC、Doxo-LANC和CPT-PLANC在PBS中均未顯示出初始快速釋放。Dtxl-PLA和CPT-PLANC的毒性-藥物裝載量的關(guān)系均與Ptxl-PLANC相似(圖7A-D)。本發(fā)明的方法使得可以制備具有相當(dāng)高的藥物裝載量(最高達(dá)35%)、接近定量的裝載效率、沒(méi)有初始快速釋放效應(yīng)的可控釋放特性和很窄的顆粒分布的聚合物-藥物綴合物納米顆粒(NC)。在本發(fā)明的制劑中使用安全的和有營(yíng)養(yǎng)的金屬；有機(jī)螯合配體可以通過(guò)溶劑萃取而被容易地除去。此外，只需要幾小時(shí)就可以制備出克量級(jí)的、高裝載量的和在鹽溶液中穩(wěn)定的NC。如上所述，在制備NC時(shí)，通過(guò)使用不同的環(huán)狀酯單體，還可以有效地控制藥物釋^L特性。Ptxl-PLANC的制備將(BDI)MgN(SiMe,W6.2mg，0.01mmol)和Ptxl(8.5mg，0.01mmol)在0.5ml的無(wú)水THF中混合。滴加溶于2ml無(wú)水THF中的DL-丙交酯(144mg，1mmol)。當(dāng)LA完全耗盡時(shí)(通過(guò)FT-IR或1HNMR監(jiān)測(cè))，將聚合反應(yīng)溶液置于乙醚(25ml)中沉淀，以生成Ptxl-LA100綴合物。使用(BDI)ZnN(SiMe3)2或Mg(N(SiMe3)2)2的聚合反應(yīng)也類似地進(jìn)行。將Ptxl-LAK)o的丙酮或DMF溶液(100jd，10mg/mL)滴加至快速攪拌的納米級(jí)純水(2ml)中，以進(jìn)行沉淀。將PLGA-mPEG5k(MW=18,300g/mo1，5mg/mL溶于DMF，100jd)或mPEG5k(5mg/mL溶于DMF，100pL)滴加至NC。Ptxl-PLANC的表征和評(píng)估使用ZetaPALS動(dòng)態(tài)光散射檢測(cè)儀(BrookhavenInstruments,Holtsville，NY，USA)或通過(guò)SEM表征NC的大小。使用超濾純化所得的NC;使用MTT測(cè)定在PC-3細(xì)胞中評(píng)估其體外毒性(在37。C下培養(yǎng)24小時(shí))。為了測(cè)定Ptxl-PLA的釋放動(dòng)力學(xué)，將NC的PBS溶液等分為幾份并在37。C下培養(yǎng)。在預(yù)定時(shí)間時(shí)終止釋放研究。加入DMF溶液以溶解所有沉淀。然后將所有樣本干燥后重溶于DCM中，并與Bii4NBH4反應(yīng)1.5小時(shí)。向溶液中加入一滴乙酸。攪拌溶液20分鐘，然后蒸干溶劑。將所得的殘留固體重溶于乙腈以進(jìn)行RPHPLC分析(Curosil，250x4.6mm，5ji;Phenomenex，Torrence，CA，USA)。發(fā)明人已經(jīng)證實(shí)了通過(guò)圖2所示的方法能夠使用不同的小分子和肽形成綴合物。這些分子的結(jié)構(gòu)示于圖8。代表性的納米綴合物的數(shù)據(jù)示于表1。示例性的具體PLA-藥物聚合反應(yīng)條件在下文中有述。納米顆粒的形成、表征和釋放評(píng)估的方法均與上述用于PLA-紫杉醇納米顆粒的方法相似。實(shí)施例2:聚丙交酯-阿霉素(doxorubicin)聚合物(Doxo-PLA)催化劑(BDI)MgN(TMS)2和D，L-丙交酯按照與Ptxl-PLA聚合反應(yīng)中相同的方法進(jìn)行處理。在手套式操作箱中進(jìn)行聚合反應(yīng)。所有的反應(yīng)容器均使用鋁箔覆蓋，并關(guān)閉操作箱中的燈光。首先，將阿霉素溶于DMF并攪拌10分鐘直至其完全溶解。然后加入(BDI)MgN(SiMe3)2并^f吏其溶于THF中。將阿霉素和(BDI)MgN(SiMe3)2的溶液混合15-20min，溶液由橙紅色變?yōu)樽仙?。在HPLC分析中可以看出阿霉素的峰發(fā)生了位移，表明形成了阿霉素和(BDI)MgN(SiMe3)2的復(fù)合物。將UV檢測(cè)儀設(shè)為450nm。將D，L-丙交酯溶于THF并滴加至阿霉素和(BDI)MgN(SiMe3)2的快速攪拌的混合物中。通過(guò)HPLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程直至觀察不到未反應(yīng)的阿霉素為止。Doxo-LA的UV鐠顯示在325-400nm處具有吸收，這與阿霉素的400-500nm的吸收不同。通過(guò)納米沉淀形成納米顆粒的方法與上述Ptxl-PLA納米顆i^立的方法相似。實(shí)施例3:使用1，5，7-三氮雜二環(huán)[4.4.0癸-5-烯(TBD)或BDI-Mg畫(huà)N(TMS)2制備的Dtxl-PLA將TBD或BDI-Mg-N(TMS)2催化劑與多西他賽混合，并在上述催化劑和引發(fā)劑的混合物中加入丙交酯。例如，將多西他賽和TBD溶于THF中并攪拌5至10min(在HPLC分析中可以看出，多西他賽的峰發(fā)生了位移，表明TBD與多西他賽形成了復(fù)合物)。將D，L-丙交酯溶于THF中并滴加至多西他賽和TBD的混合物中。反應(yīng)過(guò)程與紫杉醇-PLA的類似，并通過(guò)FTIR和HPLC監(jiān)測(cè)。由多西他賽-Mg(II)復(fù)合物引發(fā)的聚合反應(yīng)的進(jìn)行與上述使用紫杉醇的反應(yīng)相似。形成納米顆粒的方法也與上述Ptxl-PLA納米顆粒的方法相似。實(shí)施例4:PLA-芘曱氧基聚合反應(yīng)將芘曱醇(Pyrenemethanol)(TCIAmerica)溶于THF和CaH2并攪拌過(guò)夜，過(guò)濾后真空干燥，以進(jìn)行純化，然后儲(chǔ)存于手套式冰箱中。將芘曱醇與LA和BDI-Mg-N(TMS)2混合。選擇單體與引發(fā)劑(Pyr)的比例。在24小時(shí)后終止反應(yīng)并用曱醇和乙醚洗滌三次以進(jìn)行純化。通過(guò)NMR檢測(cè)證實(shí)綴合的芘甲醇與PLA形成了共聚物。形成納米顆粒的方法與上述Ptxl-PLA納米顆凈立的方法相似。實(shí)施例5:PLA-LHRH聚合戈舍瑞林(Goserelin)獲自Bachem，并儲(chǔ)存于冰箱中。催化劑(BDI)MgN(SiMe3)2和D，L-丙交酯按照與Ptxl-PLA聚合反應(yīng)中相同的方法進(jìn)行處理。在手套式操作箱中進(jìn)行聚合反應(yīng)。將戈舍瑞林溶于DMF中并攪拌10小時(shí)。將(BDI)MgN(SiMe3)2溶于THF中?；旌细晟崛鹆趾?BDI)MgN(SiMe3)2的溶液并攪拌30min。將D，L-丙交酯溶于THF的溶液加入至上述混合物中。選擇丙交酯與戈舍瑞林的比例。在聚合反應(yīng)中，溶液可能會(huì)變得混濁，表明生成了某些沉淀。如果發(fā)生上述現(xiàn)象，則加入DMSO以保證組分和產(chǎn)物處于溶解狀態(tài)。通過(guò)HPLC監(jiān)測(cè)戈舍瑞林的轉(zhuǎn)化。但是觀察到的轉(zhuǎn)化率低于95%。使用戈舍瑞林綴合物形成納米顆粒的方法與上述Ptxl-PLA納米顆豐立的方法相似。實(shí)施例6:Zn、Ca和Fe催化劑和有機(jī)催化劑Mg(II)復(fù)合物能夠使得發(fā)生快速的聚合反應(yīng)。但是在某些情況下，Mg(II)可能會(huì)使得鏈延長(zhǎng)的速度比引發(fā)反應(yīng)的速度快得多，這對(duì)于活性聚合的進(jìn)行是不利的。Coates證實(shí)某些Zn催化劑能夠促進(jìn)快速的引發(fā)和相對(duì)較慢的鏈延長(zhǎng)，并且Zn介導(dǎo)的丙交酯聚合反應(yīng)可生成具有很窄的多分散性的聚合物。19因此，在本發(fā)明的方法中可以使用(BDI)Zn-(多西他賽)和(BDI)Zn-(阿霉素)作為引發(fā)劑。可用于上述方法的其他催化劑包括類似的含Ca和Fe的催化劑。16Mg、Zn、Ca和Fe都是人體中存在的元素，因此上述催化劑比例如含有Al或Sn的其他活性催化劑要更安全。示例性的催化劑包括但不限于<formula>formulaseeoriginaldocumentpage44</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage45</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage46</formula>Ar=2，6-(/Pr)2C6H3或Ar=2，6-(乙基)2<:6113實(shí)施例7.釋放研究芘曱醇-PLA釋放研究使用游離的芘曱醇校準(zhǔn)濃度-HPLC峰面積(或強(qiáng)度)曲線。在乙腈(10mg/ml)-水(l/10)體系中形成納米顆粒，并使用DI水洗滌三次以除去未共價(jià)結(jié)合的小分子。在第O天，在幾個(gè)小管中制備PBS1X-NP溶液并在37。C下培養(yǎng)。在一次試驗(yàn)中使用兩個(gè)小管。將一個(gè)管中的內(nèi)容物在4000rpm離心30min,以沉淀所有的NP，并測(cè)定上清液中的芘曱醇濃度。向另一管中加入1N的NaOH溶液并在37。C放置30-90min,以降解所有的NP,并測(cè)量芘曱醇的總濃度(100%)。(在注入至HPLC之前，用乙酸將溶液的pH值調(diào)節(jié)至7)。在選定的時(shí)間點(diǎn)，將管從37。C培養(yǎng)箱中取出，離心除去NP并得到上清液，制備為1/1PBS-乙腈溶液并注入HPLC。記錄積分的峰和強(qiáng)度并與納米顆粒中的總芘曱醇濃度為100%的測(cè)量值相比較，以測(cè)定釋放特性。HPLC檢測(cè)儀測(cè)量227nm和265rnn處的吸收。所使用的流動(dòng)相為含有0.05%TFA的50/50的乙腈/DI水。多西他賽-PLA釋放研究使用游離的多西他賽校準(zhǔn)HPLC分析中的標(biāo)準(zhǔn)曲線。將PLA-多西他賽納米顆粒完全分敉于lxPBS溶液中并用l-辛醇萃取。將1-辛醇萃取物直接注入HPLC。所用的分析條件與上述PLA-芘曱醇研究中的一樣，檢測(cè)儀測(cè)量227nm和265nm處的吸收。通過(guò)將測(cè)量結(jié)果與聚合物中摻入100%的多西他賽以及相同的HPLC注入濃度時(shí)的測(cè)量值相比，測(cè)定釋放百分率。實(shí)施例8.2-20nm范圍內(nèi)的樹(shù)枝狀納米綴合物由于藥物釋放動(dòng)力學(xué)與納米顆粒的表面積直接相關(guān)，因此進(jìn)一步減小納米顆粒會(huì)導(dǎo)致更快速的藥物釋放。此外，小納米顆粒與大納米顆粒相比，在藥物送遞和其他應(yīng)用方面可能具有截然不同的特性。例如，小納米顆?？赡芫哂胁煌募?xì)胞吸收特性。對(duì)于相對(duì)較大(約100nm)的顆粒而言，顆?？赡芡ㄟ^(guò)胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞。而當(dāng)NP的大小在約10nm的范圍時(shí)，顆?？赡苣軌蛑苯油ㄟ^(guò)滲透作用或通過(guò)溶液的吞飲作用(胞飲作用)而進(jìn)入細(xì)胞。嵌段共聚物的微膠束化通常會(huì)使得顆粒的大小大于10nm的范圍。為制備小尺寸納米顆粒，可以使用樹(shù)枝狀多聚物或寡聚物綴合物。這類綴合物通過(guò)AB2型環(huán)狀單體(例如鞋基丙交酯，見(jiàn)下式)的聚合而形成其中z為1-6，和K的定義如前所述。在具體的實(shí)施方案中，K為H。例如，可以使用式H中所示且z為1和^為H的AB2單體。這種單體可以通過(guò)下述反應(yīng)路線1的方法合成。在存在具有至少一個(gè)羥基或巰基的藥物的條件下，羥基丙交酯分子的聚合可形成如圖9所示的具有樹(shù)枝狀結(jié)構(gòu)或高分枝結(jié)構(gòu)的綴合物。在其他具體的實(shí)施方案中，所述藥物或其他化合物具有一個(gè)羥基，單向連接的聚合物可以在藥物分子周圍形成高分枝結(jié)構(gòu)。在具體的實(shí)施方案中，所述藥物或其他化合物具有兩個(gè)或多個(gè)鞋基，多向連接的聚合物可以在藥物分子周圍形成高分枝結(jié)構(gòu)。這種實(shí)施方案示例性地示于圖9。應(yīng)當(dāng)理解的是，在所述藥物或其他化合物中，不是所有的羥基都具有相同的引發(fā)聚合和與所述多聚物或寡聚物連接的活性。因此，對(duì)于給定的藥物或其他化合物而言，可能在其中的幾個(gè)羥基位置上形成多聚物或寡聚物。對(duì)于給定的一群多聚物/寡聚物綴合物而言,它們與每一種藥物或其他化合物連接的多聚物/寡聚物的數(shù)量也可能不完全相同，也就是說(shuō)，不是所有的綴合物都具有相同數(shù)量的連接的多聚物/寡聚物。形成足夠多的高分枝結(jié)構(gòu)就能形成單分子的樹(shù)枝狀納米顆粒。使用環(huán)狀A(yù)B2型單體的上述方法能夠形成含有選定藥物的小顆粒尺寸(20nm或更小)的納米顆粒。由于高分枝聚酯結(jié)構(gòu)的外圍具有很多羥基，因此所得的納米顆粒是水溶性的。式H<formula>formulaseeoriginaldocumentpage49</formula>在反應(yīng)路線1所示的合成中，將H-Ser(Z)-OH(30.0mg，154mmol)溶于400ml的1M硫酸和400ml的乙腈中。將NaN02(21.7g，313mmol)溶于150ml水中并用30min將其滴加至反應(yīng)燒瓶中。在氮?dú)獗Ｗo(hù)下攪拌反應(yīng)物18-24小時(shí)。將溶液用500ml二氯甲烷和乙酸乙酯萃取3次。合并有^M目并用硫酸鎂干燥，過(guò)濾并在真空條件下濃縮。將所得的產(chǎn)物(25.4g，129mmol)溶于二氯曱烷(300ml)和17.9ml三乙胺中，在冰浴條件下用30分鐘滴加2-溴丙酰溴(13.51111129mmol)和溶于150ml二氯甲烷的DMAP(l,58g，129mmol)溶液。然后在氮?dú)獗Ｗo(hù)下攪拌反應(yīng)物18-24小時(shí)。使用乙醚沉淀所得的混合物，然后過(guò)濾剩余的溶液。合并有機(jī)溶液并蒸發(fā)，得到淺黃色的油狀物(第二步反應(yīng)的產(chǎn)物)。將上述第二步反應(yīng)產(chǎn)物(4.11g，12.4mmol)溶于500ml丙酮，加入碘4匕鈉(18.59g，1.24mol，10當(dāng)量)，將反應(yīng)混合物回流過(guò)夜。溫度控制為55-60。C并用氮?dú)獗Ｗo(hù)。第二天，終止反應(yīng)并使其冷卻。使用硅藻土過(guò)濾溶劑(丙酮)并蒸發(fā)丙酮。將所得的棕色油狀物重新溶于丙酮中并用2M的Na2S2O3(300ml)萃取三次，得到黃色溶液，用MgS04干燥。最后蒸發(fā)溶劑得到粗產(chǎn)物(第三步反應(yīng)產(chǎn)物)，不經(jīng)過(guò)純化而直接用于下一步驟。將上述產(chǎn)物(4.53g12.1mmol)溶于100mlDCM中，滴加至回流的含DIEA(4.6ml,27.7mmol)的1000ml的丙酮溶液中，回流8小時(shí)。溫度控制在7(TC。通過(guò)HPLC確認(rèn)反應(yīng)完全。使用珪膠柱，通過(guò)氯仿和甲基叔丁基醚(1/1)洗脫以分離非對(duì)映異構(gòu)體。蒸發(fā)溶劑，并將所得的固體重新溶于曱基叔丁基醚，然后向溶液中加入過(guò)量己烷以沉淀出白色固體。將上述白色固體(1.511111101，375.0mg)溶于曱醇(1.5ml),用112和10%Pd/C催化劑(40mg)使Cbz基團(tuán)脫保護(hù)。兩天后，蒸發(fā)溶劑得到白色固體。<吏用NMR和EI-MS確i人其結(jié)構(gòu)。在手套式操作箱中進(jìn)行羥基取代的環(huán)狀單體(l.Ommol，160mg)的聚合。將所述單體溶于50OulDMF溶液中。將(BDI)MgN(SiMes)2(0.03mmo1，18.0mg)溶于1mlTHF中并與含多西他賽(O.Olmmol，8.1mg)的THF溶液混合10-30min。用10分鐘將上述單體溶液非常緩慢地加入混合物中。通過(guò)HPLC在227nm和265nm處監(jiān)測(cè)反應(yīng)。當(dāng)反應(yīng)完成后，使用SEC柱和反相半制備性HPLC純化聚合物。通過(guò)AFM和動(dòng)態(tài)光散射測(cè)量，發(fā)現(xiàn)所述聚合物在水溶液中形成膠束，所形成的顆粒大小為5-30nm。實(shí)施例9.20-60nm范圍的納米綴合物的i殳計(jì)制備小于60nm的納米顆粒是一個(gè)難題，特別是通過(guò)疏水性PLA或Dtxl-PLA的沉淀制備則更難。然而，可以使用微膠束化將制備的納米顆粒的大小精確控制在20-60nm的范圍內(nèi)。PEG與Dtxl-LA的末端羥勤目綴合?？梢栽诰酆暇Y合之后進(jìn)行PEG的綴合?；蛘?，可以使用一步反應(yīng)。在每一次聚合反應(yīng)后，末端羥基對(duì)于加帽基團(tuán)例如異氰酸酯都有反應(yīng)活性。例如可以使用PEG-異氰酸酯作為加帽試劑，保護(hù)藥物-PLA綴合物的末端羥基。通過(guò)將PEG-NH2與三光^X應(yīng)，可以容易地制備PEG-異氰酸酯。PEG-異氰酸酯與Dtxl-LA-OH的反應(yīng)速度很快，并定量地生成Dtxl-LA-尿烷連接物-PEG。在使用SEC柱純化綴合的聚合物之后，將純化的綴合的聚合物用于制備膠束。當(dāng)使用較高的平均分子量的PEG時(shí)，可以容易地生成具有小顆粒尺寸(20nm-60nm)的膠束。Kataoka20、Kwon21，22和本發(fā)明人"，24深入研究了使用PEG-聚(天冬氨酸)-藥物綴合物形成共聚物膠束。在具體實(shí)例中，將500mg(0.1mmol)的mPEG5k-NH2溶于不停攪拌的二氯曱烷(10ml)中。向溶液中加入269.8mg(lmmol)的三光氣，將反應(yīng)混合物在50-60。C回流至少2小時(shí)。通過(guò)FTIR監(jiān)測(cè)反應(yīng)，其中異氰酸酯峰出現(xiàn)在2250cm"處。通過(guò)^f吏用定量的芘曱醇滴定mPEG5k-NCO，以確定溶液中的mPEG5k-NCO濃度，從而計(jì)算產(chǎn)率。在反應(yīng)進(jìn)行完全后，蒸發(fā)溶劑并用己烷和冷乙醚洗滌聚合物3次。使用尺寸排阻柱，以THF或乙腈/己烷作為洗脫液，從產(chǎn)物中分離未反應(yīng)的mPEG5k-NH2。真空干燥產(chǎn)物并在氮?dú)鈿夥盏乃渲袃?chǔ)存。實(shí)施例10.以Dtxl-LA綴合物為例，說(shuō)明納米顆粒(100-600nm)的雙乳化法設(shè)計(jì)使用油-水-油(W/OAV)溶劑蒸發(fā)法，制備藥物包封的孩i顆粒。簡(jiǎn)而言之，使用探頭超聲儀(8011&&MaterialsInc，Danbury，CT，USA),以10W的功率將50ml水與50mg聚合物綴合物(Dtxl-LA)溶于1ml二氯甲烷的溶液乳化15-30秒。然后將所得的乳液倒入50ml的PVA水溶液(1%)或膽酸鈉溶液(1%w/v)中，混勻該混合物1分鐘(8000rpm)。在溫和攪拌的條件下，將所得的乳液倒入150ml的PVA水溶液或膽酸鈉溶液(0.3%w/v)中，然后在室溫下攪拌2小時(shí)以蒸發(fā)有機(jī)溶劑，或使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器快速除去有機(jī)溶劑。最后以在6000rpm離心30min以分離納米顆粒，用蒸條水洗滌，并以蒸餾水(6ml)中的乳液形式保存于-15。C?；蛘撸黾{米顆?？杀粌龈色@得粉末。實(shí)施例11.雙乳化法制備微顆粒(600nm-100jim)也可以使用油-水-油(W/OAV)溶劑蒸發(fā)法(雙乳化法)，制備藥物包封的微顆粒。簡(jiǎn)而言之，使用探頭超聲儀(Sonic&MaterialsInc，Danbury，CT，USA),以10W的功率將50ml水與50mg聚合物綴合物(Doxo-LA)溶于1ml二氯曱烷的溶液乳化15-30秒。然后將所得的乳液倒入50ml的PVA水溶液(1%)或膽酸鈉溶液(1%w/v)中，混勻該混合物1分鐘(速度為500-8000rpm)。在溫和攪拌的條件下，將所得的乳液倒入150ml的PVA水溶液或膽酸鈉溶液(0.3%w/v)中，然后在室溫下攪拌2小時(shí)以蒸發(fā)有機(jī)溶劑，或使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器快速除去有機(jī)溶劑。最后以在6000rpm離心30min以分離納米顆粒，用蒸餾水洗滌，并以蒸餾水(6ml)中的乳液形式保存于-15。C,或者，所述納米顆?？蒦L凍干獲得粉末。實(shí)施例12.使用赫賽汀(Herceptin)進(jìn)行表面功能化將曲妥珠單抗(Trastuzumab，Herceptin)以1mg/ml的濃度溶于磷酸緩沖液(pH-8.0)中。將2-硫醇亞胺(5.7mg)溶于5ml磷酸緩沖液(pH8.0)中。將2-硫醇亞胺溶液(8.04ml)與1ml曲妥珠單抗'溶液在20。C混合6小時(shí)?？梢允褂肈extranDesaltingSEC柱，以磷酸緩沖液作為洗脫液純化所得的硫醇化抗體，并在280nm處進(jìn)行檢測(cè)。使用Microcon30000微濃縮器進(jìn)一步濃縮抗體。可以使用Ellman試劑測(cè)定抗體溶液中的巰基濃度。在室溫下，將250fil抗體溶液與6.25jd的4mg/ml的Ellman試劑溶液(溶于pH=8.0的磷酸緩沖液)混合15min，通過(guò)UV分光光度計(jì)在412nm處進(jìn)行檢測(cè)。相對(duì)于L-半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液計(jì)算巰基的數(shù)量。在室溫下，將MAL-PEG5k-異氰酸酯(其中MAL為馬來(lái)酰亞胺基團(tuán))與Doxo-PLA綴合8小時(shí)，然后使用SEC柱純化聚合物。將聚合物以10mg/ml的濃度溶于丙酮，然后在強(qiáng)烈攪拌的條件下將其滴加入水中，使得丙酮:水的比例為1/20。然后在室溫下，在納米級(jí)純水中進(jìn)行抗體的巰基和聚合物的馬來(lái)酰亞胺基的偶聯(lián)反應(yīng)。反應(yīng)至少進(jìn)行12小時(shí)。使用SEC柱檢測(cè)水相中的未結(jié)合的硫醇化抗體。在綴合之后，通過(guò)比較相同濃度下SEC柱測(cè)得的反應(yīng)前后的硫醇化抗體的峰面積來(lái)測(cè)定反應(yīng)效率。還可以使用另一種方法引入石危醇化抗體。PLGA-PEG-MAL(末端帶有馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)的聚(乳酸-乙醇酸)-聚(乙二醇)共聚物)或PLA-PEG-MAL(末端帶有馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)的聚(乳酸)-聚(乙二醇)共聚物)可以通過(guò)商購(gòu)獲得或通過(guò)已知方法制備。首先，將Doxo-LAis溶于丙酮，將所述原料進(jìn)行納米沉淀形成納米顆粒。然后向所述納米顆粒中滴加含PLGA-PEG-MAL或PLA-PEG-MAL的丙酮溶液。j吏用這種方法可以4吏得顆粒分布保持不變。馬來(lái)酰亞胺和抗體的巰基的進(jìn)一步綴合按照上文所述的方法進(jìn)行。在綴合后，使用赫賽汀對(duì)納米顆粒進(jìn)行表面修飾?？梢詼y(cè)試抗體的功能。將所述納米顆粒與MCF-7和SK-BR-3細(xì)胞一起培養(yǎng)3天，然后進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析。使用表達(dá)HER2的SK-BR-3細(xì)胞和MCF7細(xì)胞作為陰性對(duì)照。實(shí)施例13:環(huán)杷明(CA)NC的制備CA-LA柳納米綴合物的制備包括兩個(gè)步驟。第一步是將CA與PLA聚合物相綴合。簡(jiǎn)而言之，在手套式操作箱中，將環(huán)杷明(4.11mg，0.01mmol)溶于l.Oml的THF中。將CA與(BDI)MgN(SiMe3)2(6.0mg，0.01mmol)混合5-15min。然后在強(qiáng)烈攪拌的條件下，向CA和(BDI)MgN(SiMe3)2的混合物中滴加含DL-丙交酯(144mg，1.0mmol)的1mLTHF溶液。使用FTIR計(jì)算丙交酯的轉(zhuǎn)化率。反應(yīng)進(jìn)行過(guò)夜，獲得CA-LA，聚合物綴合物。第二步為使用該聚合物溶液通過(guò)納米沉淀法直接制備NP。將含有CA-LA徹聚合物的DMF溶液滴加至20倍體積的納米級(jí)純水(非溶劑)中。所得的NP懸液可以通過(guò)超濾進(jìn)行純化(15min，3000g,AmiconUltra,10,000NMWL的Ultracel膜，Millipore，Billerica,MA)。實(shí)施例14:環(huán)孢菌素(CP)NC的制備CA-LA則納米綴合物的制備包括兩個(gè)步驟。第一步是將CP與PLA聚合物相綴合。簡(jiǎn)而言之，在手套式操作箱中，將環(huán)孢菌素(12.02mg，0.01mmol)溶于1.0ml的THF中。將CP與(BDI)MgN(SiMe3)2(6.0mg，0.01mmol)混合5-15min。然后在強(qiáng)烈攪拌的條件下，向CA和(BDI)MgN(SiMe3)2的混合物中滴加含DL-丙交酯(144mg，1.0mmol)的1mLTHF溶液。使用FTIR計(jì)算丙交酯的轉(zhuǎn)化率。最后，反應(yīng)進(jìn)行過(guò)夜，獲得CA-LA則聚合物綴合物。第二步為使用該聚合物溶液通過(guò)納米沉淀法直接制備NP。通常，將含有CA-100聚合物的DMF溶液滴加至20倍體積的納米級(jí)純水(非溶劑)中。所得的NP懸液可以通過(guò)超濾進(jìn)行純化(15min，3000g，AmiconUltra,10,000匪WL的Ultracel膜，Millipore,Billerica，MA)。實(shí)施例15:含有兩種或多種藥物的核心-夕卜殼納米綴合物(50-200nm范圍)的制備將D0X0-LA25聚合物(5mg/mL溶于DMF，100jiL)滴加至2mL納米級(jí)純水中，生成Doxo-LA25NC。然后向Doxo-25NP中滴加PLGA-mPEG5k(MW=18,300g/mol，5mg/mL溶于DMF,100jil)或mPEG5k(5mg/mL溶于DMF,lOOjil)。所得的NC為具有核心-外殼結(jié)構(gòu)的NC，其中核心為Doxo-LA25，外殼為PLGA-mPEG5k或mPEG5k。將PtXl-LA細(xì)綴合物(2mg/mL溶于DMF，100fiL)滴加至2mL納米級(jí)純水中，生成Ptxl-LA2O0NC。然后在強(qiáng)烈攪拌的條件下，向Ptxl-LA辦NC溶液中順序加入PLA-PEG3k(MW=17,500g/mol，2mg/mL溶于DMF)。所得的NC為具有核心-外殼結(jié)構(gòu)的NC。使用本文所述的方法制備的藥物-聚合物綴合物都可以通過(guò)與上述類似的方法形成類似的具有核心-外殼結(jié)構(gòu)的納米綴合物。Dtxl國(guó)LA則(核心)/Doxo國(guó)LA則(外殼)NC:將溶于DMF的Dtxl-LA100(10mg/mL，100nL)滴加至2mL納米級(jí)純水中，生成納米顆粒(NC)，然后在強(qiáng)烈攪拌(3000rpm)的條件下，向所述納米顆粒溶液中以50nL/min的速度加入溶于DMF的Doxo-LA，(IOmg/mL，IOOjiL)。所得的NC為如圖IOA所示的雙重藥物的核心-外殼結(jié)構(gòu)的NC。在該圖中，顯示了顆粒的大小由約80rnn變化為約100nm。Ptxl-LA則/CPT-LA則將溶于DMF的Ptxl畫(huà)100(10mg/mL，100jiL)滴加至2mL納米級(jí)純水中，然后在強(qiáng)烈攪拌(3000rpm)的條件下，向所述納米顆粒溶液中以50jiL/min的速度加入溶于DMF的CPT-100(10mg/mL,lOOjiL)。使用由本文所述的方法制備的任何藥物-聚合物綴合物，都可以通過(guò)上述方法制備含有多種藥物的NC。上述方法還可以用于制備核心和外殼由含有相同藥物的不同聚合物綴合物制成的NC，例如Ptxl-LA2O0/Ptxl-LA柳，或Ptxl-LA則/Ptxl-LA20()。在上述方法中，可以根據(jù)需要調(diào)整聚合物綴合物的相對(duì)量，以獲得所需的大小和特性。圖10B顯示了在向NC中加入不同聚合物綴合物以形成具有核心-夕卜殼結(jié)構(gòu)的NC時(shí)，NC的顆粒大小的變化。圖IOA和10B中的顆粒大小是通過(guò)動(dòng)態(tài)光散射法測(cè)定的。更具體而言，使用ZetaPALS動(dòng)態(tài)光散射(DLS)儀(15mW激光器，入射光=676nm;BrookhavenInstruments,Holtsville，NY)。實(shí)施例16:NC的細(xì)胞毒性測(cè)試將PC-3細(xì)胞鋪于96孔培養(yǎng)板中放置24h(每孔10,000細(xì)胞)。在實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，用預(yù)熱的PBS洗滌細(xì)胞，然后加入新鮮制備的NC(在lxPBS中制備)。對(duì)照細(xì)胞也在培養(yǎng)基中培養(yǎng)。在5%的C02氣氛下總共培養(yǎng)細(xì)胞24小時(shí)。然后，移去培養(yǎng)基并加入MTT溶液和OptiMEM培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)3小時(shí)。將所得的晶體溶解，并使用微量滴定板讀數(shù)儀在655nm處比色讀數(shù)，以評(píng)估細(xì)胞存活率。圖7A-D顯示了一些細(xì)胞毒性研究的結(jié)果，其中的NC是使用Ptxl、Dtxl、CPT和Doxo通過(guò)不同的M/I比值制得的，圖中還顯示了游離藥物的對(duì)照。使用含有多種藥物的NC,對(duì)人類前列腺癌細(xì)胞PC-3細(xì)胞培養(yǎng)72小時(shí)并進(jìn)行了類似的MTT細(xì)胞毒性測(cè)試。表3列出了通過(guò)ICso測(cè)量的一系列NC的相對(duì)細(xì)胞毒性。表3:裝載有多種藥物的NC的MTT細(xì)胞毒性ICPM-UWCA-LA25剛-LWCA-LA,o837.22±29.81622.14±14.6116訓(xùn)±雷9286,68±5,65Do脅'LA2s/CA-LAs測(cè).16±像36Dox》UWGA-LA，84.89土7.14如表3的結(jié)果所示，含有兩種藥物的NC(紫杉醇和環(huán)杷明的組合，或蒽環(huán)類抗生素(阿霉素)和環(huán)杷明的組合)對(duì)前列腺癌細(xì)胞表現(xiàn)出協(xié)同作用。不拘囿于任何具體的活性理論，相信紫杉烷和蒽環(huán)類抗生素對(duì)于癌細(xì)胞的效力能夠顯著提高環(huán)杷明對(duì)于Shh的抑制作用。實(shí)施例17:使用熒光素酶測(cè)定，評(píng)估含有環(huán)杷明的NC對(duì)于刺猬途徑的抑制Shh-LIGHT2細(xì)胞中穩(wěn)定整合了Gli-依賴性螢火蟲(chóng)焚光素酶和組成型海腎熒光素酶報(bào)告物，在96孔板中將該細(xì)胞培養(yǎng)至匯合，然后用下述藥物處理(l)各種濃度的含有環(huán)杷明的PLA-環(huán)杷明NC(例如CA-LA1()NC或CA-LA25NC)，懸于含0.5。/。小牛血清的DMEM，并添加或不添加(2)PLA-purmorphamineNE。圖11A顯示了作為環(huán)杷明濃度(mM)的函數(shù)的相對(duì)海腎熒光素酶活性。將經(jīng)過(guò)處理的細(xì)胞在標(biāo)準(zhǔn)條件下培養(yǎng)36小時(shí)，然后根據(jù)生產(chǎn)廠商的說(shuō)明，使用雙熒光素酶試劑盒(Promega)測(cè)定螢火蟲(chóng)熒光素酶和海腎熒光素酶的活性。實(shí)施例18:催化劑對(duì)綴合物結(jié)構(gòu)的影響如實(shí)施例1所述，當(dāng)所述藥物或其他化合物帶有一個(gè)以上的能夠在存在催化劑的條件下引發(fā)聚合的官能團(tuán)時(shí)，催化劑的結(jié)構(gòu)或性質(zhì)可能影響是哪個(gè)官能團(tuán)參與聚合，以及生長(zhǎng)的聚合物連接到所述藥物(或其他化合物)的哪個(gè)或哪些位點(diǎn)上。圖12顯示了使用不同催化劑時(shí)，通過(guò)本文所述的方法制備的藥物-聚合物綴合物的分子量和多介敦性(PDI)。具體而言，該圖顯示了使用不同催化劑對(duì)于綴合物形成的影響，制備所述綴合物時(shí)使用的LA/PtxI/催化劑的摩爾比為200/1/1，制備出的Pxtl-LA20()的預(yù)期MW為29,653。Ptxl本身含有三個(gè)能夠引發(fā)聚合的羥基(2，-OH、l-OH和7-OH)。然而如前所述，因?yàn)樵谠摲磻?yīng)中羥基需要形成金屬氧化物，所以由于空間位阻的關(guān)系，認(rèn)為l-OH不容易參與引發(fā)反應(yīng)。相信在所形成的Pxtl-LA綴合物中，多*性的主要原因是由于一部分綴合物中的聚合物與藥物分子上的兩個(gè)位點(diǎn)相連接。如圖所示，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)凝膠滲透色鐠法測(cè)量的Pxtl-LA2。o綴合物的實(shí)際MW和PDI與所使用的催化劑密切相關(guān)。使用具有大體積配體的Zn催化劑(圖12中所示的催化劑4和5)會(huì)使得綴合物具有較低的多分散性。據(jù)信這種較低的多*性是因?yàn)榫酆衔飳?duì)連接至某一位點(diǎn)(例如Ptxl的2'-OH位點(diǎn))具有更高的選擇性。實(shí)施例19:使用凝膠滲透色譜法測(cè)定藥物-聚合物綴合物的MW和PDI使用藥物作為L(zhǎng)A聚合的引發(fā)劑，(在存在催化劑的條件下)如前述實(shí)施例所述制備藥物-聚合物綴合物。使用公知的凝膠滲透色謙法測(cè)量實(shí)際的MW和PDI。<table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table>1.Duncan,R.Thedawningeraofpolymertherapeutics.A/a^/reRew'ewsOmgD/scov^y2，347-360(2003).2.Duncan,R.Polymerconjugatesasanticancernanomedicines.A/aftvre尺ew'ewsCancer6，688-701(2006).3.Haag,R.&Kratz,F.Polymertherapeutics:Conceptsandapplications./A叩ewa/ofteCAe/77/e-/nfemaf/'ona/E她'OA45，"98-1215(2006).4.Kim,C.丄Effectsofdrugsolubility,drugloading,andpolymermolecularweightondrugreleasefrompolyox(R)tablets.。mgDei/e/opmenfa/raf/n勿s她/P/jam7acy24,645-651(1998).5.Kataoka.'K.，Harada，A.&Nagasaki,Y，Blockcopolymermicellesfordrugdelivery:design,characterizationandbiologicalsignificance.>W/ancec/DmgOe//VeAy尺eWews47，113-131(2001)■6.Wagner,V.,Dullaart，A.,Bock,A.K.&Z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，其中所述聚合反應(yīng)在選自THF、丙酮、亞甲基氯、氯仿、二曱基曱酰胺、DMSO、乙腈或它們的混合物的溶劑中進(jìn)行。24.權(quán)利要求l-23任一項(xiàng)的方法，其中通過(guò)將所述共價(jià)藥物-多聚物綴合物或所述藥物-寡聚物綴合物溶于可以與水混溶的溶劑中形成的溶液與過(guò)量的水相混合，以形成所述納米顆粒。25.權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的方法，其中所述環(huán)狀單體與所述藥物引發(fā)劑的摩爾比為5000/1至2/1。26.權(quán)利要求l的方法，其中所述藥物為含有羥基的有機(jī)小分子。27.權(quán)利要求l-25任一項(xiàng)的方法，其中所述藥物為大分子。28.權(quán)利要求l-25任一項(xiàng)的方法，其中所述藥物為肽、糖或核酸。29.權(quán)利要求1-28任一項(xiàng)的方法，其中所述環(huán)狀單體為環(huán)狀酯、環(huán)狀碳酸酯或它們的組合。30.—種共價(jià)藥物-寡聚鉤或藥物-多聚物綴合物，其是通過(guò)對(duì)一種或多種選自下列的環(huán)狀單體進(jìn)行聚合而制備，所述環(huán)狀單體選自環(huán)狀酯、環(huán)狀碳酸酯、環(huán)狀磷酸酯、環(huán)狀硅氧烷、環(huán)狀肽或M酸衍生物或者環(huán)狀磷腈，所述聚合反應(yīng)是在存在所述具有包含一個(gè)或多個(gè)羥基基團(tuán)的結(jié)構(gòu)的藥物和開(kāi)環(huán)聚合催化劑的條件下進(jìn)行，其中所述包含一個(gè)或多個(gè)羥基基團(tuán)的藥物是所述聚合反應(yīng)的引發(fā)劑。31.權(quán)利要求30的共價(jià)藥物-聚合物綴合物，其中所述寡聚物含有5000個(gè)或更少的開(kāi)環(huán)單體的重復(fù)單元。32.權(quán)利要求30的共價(jià)藥物-聚合物綴合物，其中所述寡聚物含有500個(gè)或更少的開(kāi)環(huán)單體的重復(fù)單元。33.權(quán)利要求30的共價(jià)藥物-寡聚物綴合物，其中所述寡聚物含有50個(gè)或更少的開(kāi)環(huán)單體的重復(fù)單元。34.權(quán)利要求30的共價(jià)藥物-寡聚物綴合物，其中所述寡聚物含有20個(gè)或更少的開(kāi)環(huán)單體的重復(fù)單元。35.權(quán)利要求30的共價(jià)藥物-寡聚物綴合物，其中所述寡聚物含有10個(gè)或更少的開(kāi)環(huán)單體的重復(fù)單元。36.—種藥物組合物，包括通過(guò)權(quán)利要求l-29任一項(xiàng)的方法制備的顆粒。37.—種藥物組合物，包括由權(quán)利要求30-35任一項(xiàng)的共價(jià)藥物-寡聚物或藥物-多聚物綴合物制得的顆粒。38.—種納米顆粒，包含核心/外殼結(jié)構(gòu)或多層結(jié)構(gòu)，其中所述核心或外殼中的至少一個(gè)或所述多層中的至少一層是由下述藥物-多聚物或藥物-寡聚物綴合物形成的，所述藥物-多聚物或藥物-寡聚物綴合物是通過(guò)下述方法制備:在存在所述藥物作為聚合引發(fā)劑和存在聚合催化劑的條件下，在無(wú)水的可與水混溶的溶劑中，進(jìn)行選自下列的一種或多種環(huán)狀單體的開(kāi)環(huán)聚合反應(yīng)，以形成所述藥物-寡聚物或藥物-多聚物綴合物，其中所述單體選自環(huán)狀酯、環(huán)狀碳酸酯、環(huán)狀磷酸酯、環(huán)狀硅酮、環(huán)狀肽或M酸衍生物或者環(huán)狀磷腈，或它們的組合。39.—種用于將藥物送遞至有需要的個(gè)體的方法，包括給予所述個(gè)體權(quán)利要求38的納米顆?；蛲ㄟ^(guò)權(quán)利要求l-29任一項(xiàng)的方法制備的納米顆粒，所述納米顆粒中包括所述與含有開(kāi)環(huán)單體重復(fù)單元的寡聚物或多聚物共價(jià)綴合的藥物。40.權(quán)利要求39的方法，其中所述單體選自丙交酯、乙交酯或它們的組合。41.一種制備醫(yī)藥的方法，所述醫(yī)藥中含有一種其結(jié)構(gòu)中包含一個(gè)或多個(gè)羥基或巰基基團(tuán)的藥物，所述方法包括通過(guò)在開(kāi)環(huán)聚合反應(yīng)中引入所述藥物作為聚合的引發(fā)劑以進(jìn)行開(kāi)環(huán)聚合,從而將所述藥物與寡聚物或多聚物共價(jià)連接。42.—種制備用于體內(nèi)送遞含有至少一個(gè)幾基或巰基的化合物的顆粒的方法，所述方法包括下述步驟(a)在存在所述含有至少一個(gè)羥基的化合物作為聚合引發(fā)劑和存在聚合催化劑的條件下，在無(wú)水的可與水混溶的溶劑中，進(jìn)行選自下列的一種或多種環(huán)狀單體的開(kāi)環(huán)聚合反應(yīng)，以形成共價(jià)的藥物-寡聚物或藥物-多聚物綴合物，其中所述單體選自環(huán)狀酯、環(huán)狀碳酸酯、環(huán)狀磷酸酯、環(huán)狀硅酮、環(huán)狀肽或氨基酸衍生物或者環(huán)狀磷腈，或它們的組合；以及(c)形成含有所述藥物-寡聚物或藥物-多聚物綴合物的大小為2納米至100孩t米之間的顆豐立。43.—種寡聚物或多聚物綴合物，通過(guò)對(duì)一種或多種選自下列的環(huán)狀單體進(jìn)行聚合而制備，所述環(huán)狀單體選自環(huán)狀酯、環(huán)狀碳酸酯、環(huán)狀磷酸酯、環(huán)狀硅氧烷、環(huán)狀肽或a酸衍生物或者環(huán)狀磷腈，所述聚合反應(yīng)在存在其結(jié)構(gòu)包含一個(gè)或多個(gè)羥基基團(tuán)的化合物和開(kāi)環(huán)聚合催化劑的條件下進(jìn)行，其中所述包含一個(gè)或多個(gè)鞋基基團(tuán)的藥物是所述聚合反應(yīng)的引發(fā)劑。44.權(quán)利要求42的方法或權(quán)利要求43的綴合物，其中所述化合物選自診斷試劑、肽、糖、碳水化合物、無(wú)機(jī)化合物、造影劑、維生素、營(yíng)養(yǎng)物、核酸、RNA分子、siRNA或DNA分子。全文摘要本發(fā)明提供了有效制備藥物-聚合物綴合物的方法，所述藥物-聚合物綴合物包括用于在體內(nèi)送遞藥物以進(jìn)行治療應(yīng)用的微粒和納米顆粒。本發(fā)明還提供了使用本發(fā)明的藥物-多聚物/寡聚物綴合物通過(guò)納米沉淀技術(shù)制備的納米顆粒。所述藥物綴合物是在存在合適的開(kāi)環(huán)聚合催化劑和所述藥物的條件下，通過(guò)環(huán)狀單體的開(kāi)環(huán)聚合而形成。所述方法特別適用于用藥物和其他含有一個(gè)或多個(gè)羥基或巰基基團(tuán)的化合物形成多聚物/寡聚物綴合物。文檔編號(hào)B82B1/00GK101679021SQ200880014287公開(kāi)日2010年3月24日申請(qǐng)日期2008年3月2日優(yōu)先權(quán)日2007年3月2日發(fā)明者嶸同,程建軍申請(qǐng)人:伊利諾伊大學(xué)評(píng)議會(huì)