專利名稱：一種達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供一種含有微量達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷的樣品檢測方法。
背景技術(shù)：
現(xiàn)代研究表明中藥人參、西洋參、三七中的皂苷類物質(zhì)是活性成分，且均含有達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷(中藥化學(xué)，匡海學(xué)P231-232)，其苷元主要有20(S)-原人參二醇型和20(S)-原人參三醇型兩種，在C3、C12和C20位有β-OH存在。原人參二醇型和原人參三醇型的區(qū)別僅在于后者還具有C6位的α-OH，成苷的位置通常在C3、C20和C6位。
目前為止，人們對三七(Panax notoginseng F.H.Chen以及himalaicus)的不同部位分離得到了28種單體皂苷。其中，原人參三醇型皂苷13種，原人參二醇型皂苷15種，原人參三醇型皂苷與原人參二醇型皂苷的含量比為3∶1(1.Masayuki Yoshikawa，et a1.Bioactive Saponinsand Glycosides.VIII.Notoginseng(1)New Dammarane-TriterpeneOligoglycosides，Notoginsenosides-A，-B，-C，and-D，from the Dried Root of Panax notoginseng(Burk.).Chem PharmBull，1997，45(6)1039。
人參(Panax ginseng)中含原人參三醇型皂苷5種，原人參二醇型皂苷8種(中藥化學(xué)，匡海學(xué)P252-257)。
西洋參(Panax quinquefolium L.)中含5種原人參二醇型皂苷(曹敏.概述西洋參化學(xué)成分研究的近況，江蘇藥學(xué)與臨床研究，2004，12(2)25)。
但是由于口服這類皂苷后血漿中的皂苷濃度太低，現(xiàn)有技術(shù)無法檢測到，從而對于其生物利用度，體內(nèi)作用機(jī)制等無法進(jìn)行深入的評價(jià)與研究。因此，如果建立一種能夠檢測到口服這類皂苷后血漿中的皂苷及其苷元或次生苷元的方法，將有利于上述研究的發(fā)展。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供了一種新的用于檢測達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷中單體皂苷在血漿中含量的方法，本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供了一種新的用于含有達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷中單體皂苷制劑的質(zhì)量控制方法。
技術(shù)方案本發(fā)明的檢測方法是采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行的，用于檢測達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷，其中包括三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1以及原人參二醇型皂苷的次生苷元人參二醇、原人參三醇型皂苷的次生苷元人參三醇的檢測方法。本發(fā)明所述的皂苷來自三七總皂苷、及其提取物和以三七為活性成分的片劑、膠囊、顆粒劑、口服液、以及其他制劑形式，亦可適用于人參皂苷，絞股藍(lán)皂苷，西洋參皂苷等四環(huán)三萜皂苷類。本發(fā)明的檢測方法可以用于含有上述達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷藥物制劑的質(zhì)量控制。
其中本發(fā)明高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀的高效液相色譜條件為色譜柱ODS(十八烷基鍵合相)C18柱，流動相
檢測器三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜檢測柱溫20-38℃質(zhì)譜條件離子源Turbo Ionspray源，噴射電壓3000-5000V，Tem250-300℃，正離子檢測掃描方式為多反應(yīng)檢測(MRM)CE17-36V； DP80-110V檢測離子對一級全掃描質(zhì)譜的達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷的單體皂苷的準(zhǔn)分子離子峰進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離，得到二級碎片離子，采用多反應(yīng)檢測(MRM)掃描方式，對上述離子反應(yīng)進(jìn)行定量分析。其中，例如達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷中單體皂苷的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1以及原人參二醇型皂苷的次生苷元人參二醇、原人參三醇型皂苷的次生苷元人參三醇的一級全掃描質(zhì)譜準(zhǔn)分子離子峰及進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離得到二級碎片離子的峰值為一級全掃描質(zhì)譜的三七皂苷R1準(zhǔn)分子離子峰為m/z 355.6，m/z 405.8，m/z 423.6，m/z441.7，m/z 735.7，m/z 753.9，m/z 950.8，m/z 956.0，m/z 971.8，m/z 1006.9，對其進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離，得到二級碎片離子分別為m/z 203.3，m/z 643.1，m/z 723.5，m/z 423。
人參皂苷Rg1一級全掃描質(zhì)譜的準(zhǔn)分子離子峰為m/z 374.3，m/z 396.6，m/z 405.7，m/z 423.0，m/z 441.7，m/z 491.6，m/z 603.7，m/z 801.6，m/z 823.8，m/z 830.7，m/z 840.6，m/z 874.9，m/z 878.6，m/z 915.9，m/z 940.7，m/z 962.8，m/z 1006.9，對其進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離，得到二級碎片離子分別為m/z 203.3，m/z 643.1，m/z 823.5，m/z 423.5。
人參皂苷Rb1一級全掃描質(zhì)譜的準(zhǔn)分子離子峰為m/z 1109.9，m/z 1112.2，m/z 1127.0，m/z 1129.3，m/z 1132.8，m/z 1148.9，m/z 1173.7，m/z 1217.6，m/z 1216.1，m/z m/z 1231.7，m/z 1300.6，對其進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離，得到二級碎片離子分別為m/z 144.7，m/z 163.4，m/z 325.4，m/z 487.3。
人參二醇一級全掃描質(zhì)譜的準(zhǔn)分子離子峰為m/z 425.6，m/z 443.6，m/z 444.7，m/z 459.6，m/z 461.5，m/z 462.6，m/z 463.6，m/z 483.6，m/z 484.4，m/z 499.5，m/z 524.5，m/z 534.6，對其進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離，得到二級碎片離子分別為m/z 99.0，m/z 109.4，m/z 122.0，m/z 127.1，m/z 191.5，m/z 203.2，m/z 206.9，m/z 217.5，m/z 235.0，m/z 271.3，m/z 369.4，m/z 407.6，m/z 425.4，m/z 443.5，m/z 461.4。
人參三醇的一級全掃描質(zhì)譜的準(zhǔn)分子離子峰為m/z 127.2，m/z 423.5，m/z 441.6，m/z 459.6，m/z 477.5，m/z 499.6，m/z 550.7，對其進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離，得到二級碎片離子分別為m/z 99.1，m/z 109.6，m/z 123.0，m/z 127.1，m/z 187.6，m/z 203.1，m/z 205.2，m/z 207.2，m/z 217.3，m/z 405.7，m/z 423.5，m/z 441.5，m/z 459.6，m/z 477.5。
血漿樣品的處理方法精密量取血漿0.5ml，加入2-5倍體積量的有機(jī)溶媒沉淀蛋白，渦旋并高速離心后，取上清液進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為20μl。
處理方法還可以是精密量取血漿0.5ml，8000-15000r/min轉(zhuǎn)速離心，吸取上清液上固相萃取小柱，采用2ml重蒸水，2ml 15-25％甲醇淋洗后，以2ml色譜甲醇洗脫，收集洗脫液，50-70℃下氮?dú)獯蹈?，?0-70％甲醇溶液復(fù)溶，高速離心后取上清液進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為20μl。
血漿樣品的處理方法可以優(yōu)選為a.精密量取血漿0.5ml，加入3或4倍體積量的有機(jī)溶媒沉淀蛋白，渦旋并高速離心后，取上清液進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為20μl；或b.精密量取血漿0.5ml，10000r/min轉(zhuǎn)速離心，吸取上清液上固相萃取小柱，采用2ml重蒸水，2ml 20％甲醇淋洗后，以2ml色譜甲醇洗脫，收集洗脫液，60℃下氮?dú)獯蹈?，?0％甲醇溶液復(fù)溶，高速離心后取上清液進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為20μl。
上述高效液相(HPLC)-質(zhì)譜(MS)分析系統(tǒng)優(yōu)選條件為色譜柱Kromasil C18柱(50mm×2.1mm，5μm)，流動相采用甲醇、10mM醋酸銨進(jìn)行梯度洗脫，0時(shí)刻甲醇、10mM醋酸銨的體積比為50％∶50％，以第4分鐘時(shí)甲醇、10mM醋酸銨的體積比為50％∶50％，在第4.1分鐘時(shí)甲醇、10mM醋酸銨的體積比為90％∶10％，在第14.0分鐘時(shí)甲醇、10mM醋酸銨的體積比為90％∶10％，在第25分鐘時(shí)甲醇、10mM醋酸銨的體積比為50％∶50％，流速為0.25(ml/min)；質(zhì)譜條件中離子源Turbo Ionspray源，噴射電壓4000V，正離子檢測，溫度為300℃。
有益效果本發(fā)明建立的高效液相(HPLC)-質(zhì)譜(MS)分析系統(tǒng)一次進(jìn)樣能同時(shí)準(zhǔn)確地測定出達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷單體皂苷的濃度，從而能準(zhǔn)確地反映達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷單體皂苷的血藥濃度。該方法適合于含有達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷單體皂苷藥物的動物和臨床試驗(yàn)中達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷單體皂苷的血藥濃度的檢測，對評價(jià)生物體對達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷單體皂苷的吸收和作用機(jī)理有著重要的作用。該方法特別能準(zhǔn)確地反映三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、原人參二醇型皂苷的次生苷元人參二醇、原人參三醇型皂苷的次生苷元人參三醇的血藥濃度。該方法也更適合于含有三七總皂苷的藥物的動物和臨床試驗(yàn)中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、原人參二醇型皂苷的次生苷元人參二醇、原人參三醇型皂苷的次生苷元人參三醇的血藥濃度的檢測，對評價(jià)生物體對三七總皂苷的吸收和作用機(jī)理有著重要的作用。本發(fā)明檢測方法具有優(yōu)良的靈敏度及線性關(guān)系，能夠滿足微量(10-9g/ml)樣品的分析要求。同時(shí)通過加樣回收率實(shí)驗(yàn)各種單體都能達(dá)到回收率的要求。
下面實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。
實(shí)施例1口服市售三七皂苷片(血塞通片)的比格犬體內(nèi)血藥濃度檢測試驗(yàn)1.給藥方法試驗(yàn)前比格犬禁食12h，清晨按三七總皂苷90mg/kg劑量給藥。服藥前取空白血，于服藥后0.5、1、2、3、4、、6、8、10、12、16、24、36、48h取前腿靜脈血3ml，肝素抗凝，立即于3000rpm離心5min，分離出血漿于-20℃保存?zhèn)溆谩?br>
2.血漿樣品的處理精密量取血漿0.5ml，10000r/min轉(zhuǎn)速離心，吸取上清液上固相萃取小柱，采用2ml重蒸水，2ml 20％甲醇淋洗后，以2ml色譜甲醇洗脫，收集洗脫液，60℃下氮?dú)獯蹈桑?0％甲醇溶液復(fù)溶，高速離心后取上清液進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為20μl。
3.分析條件高效液相色譜條件色譜柱Kromasil C18柱(50mm×2.1mm，5μm)流動相
檢測器三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜檢測柱溫22℃質(zhì)譜條件離子源Turbo Ionspray源，噴射電壓4000V，正離子檢測，Tem300℃掃描方式為多反應(yīng)檢測(MRM)CE17-36V；DP80-110V檢測離子一級全掃描質(zhì)譜的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參二醇、人參三醇的準(zhǔn)分子離子峰分別為m/z 950.8、m/z 801.6、m/z 1127.0、m/z 461.5和m/z 477.5，對其進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離，得到二級碎片離子分別為m/z 423、m/z 423.5、m/z 487.3、m/z 127.1和m/z 127.1，采用多反應(yīng)檢測(MRM)掃描方式，對以上述離子反應(yīng)進(jìn)行定量分析，保留時(shí)間分別為2.13min，2.85min，9.06min，12.47min，9.51min。內(nèi)標(biāo)物為格列里脲，其的二級碎片離子保留時(shí)間為6.21min。
以濃度為橫坐標(biāo)，與內(nèi)標(biāo)物的峰面積之比為縱坐標(biāo)，通過加權(quán)最小二乘法進(jìn)行回歸運(yùn)算，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算出血漿濃度。
4.標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立精密量取空白血漿0.5ml，置離心管中，分別精密加入三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參二醇和人參三醇的不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，渦旋混合1min，加入2ml甲醇沉淀蛋白，渦旋并高速離心后，取上清液進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為20μl，記錄色譜圖。
標(biāo)準(zhǔn)曲線以血漿中三七皂苷R1，人參皂苷Rg1，人參皂苷Rb1、人參二醇和人參三醇的濃度為橫坐標(biāo)，與內(nèi)標(biāo)物的峰面積之比為縱坐標(biāo)，通過加權(quán)最小二乘法進(jìn)行回歸運(yùn)算，所得直線回歸方程即為標(biāo)準(zhǔn)曲線。
結(jié)果如下(1)三七皂苷R1標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍2.8-140ng/ml檢測限為0.5ng/mly檢測二級離子峰面積/內(nèi)標(biāo)峰面積x濃度ng/ml(10-9g/ml)R相關(guān)系數(shù)方程為y＝0.0024x+0.0068R＝0.9967(2)人參皂苷Rg1標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍3.8-190ng/ml，檢測限為0.8ng/mly檢測二級離子峰面積/內(nèi)標(biāo)峰面積x濃度ng/ml(10-9g/m1)R相關(guān)系數(shù)方程為y＝0.001x+0.0015R＝0.9991(3)人參皂苷Rb1標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍18-900ng/ml檢測限為1ng/mly檢測二級離子峰面積/內(nèi)標(biāo)峰面積x濃度ng/m1(10-9g/m1)R相關(guān)系數(shù)方程為y＝0.001x+0.0197R＝0.9982(4)人參二醇標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍1.0ng/ml-1000ng/ml檢測限0.5ng/mly檢測二級離子峰面積/內(nèi)標(biāo)峰面積x濃度ng/ml(10-9g/ml)R相關(guān)系數(shù)方程為y＝0.0201x+0.8045
R＝0.9951(5)人參三醇標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍0.53-26.5ng/ml檢測限0.05ng/mly檢測二級離子峰面積/內(nèi)標(biāo)峰面積x濃度ng/ml(10-9g/ml)R相關(guān)系數(shù)方程為y＝0.0083x+0.0147R＝0.9969以上結(jié)果表明，所建立的方法具有很好的靈敏度及線性關(guān)系，能夠滿足微量(10-9g/ml)樣品的分析要求。
5.方法回收率考察精密量取空白血漿0.5ml，分別精密加入三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參二醇和人參三醇的高、中、低三種濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述實(shí)驗(yàn)例1血漿處理方法操作，記錄色譜圖，另取同樣濃度標(biāo)準(zhǔn)品直接進(jìn)樣，記錄色譜圖。平行測定三份，計(jì)算相對回收率。
相對回收率＝(處理后測得量/加入量)×100％結(jié)果如下三七皂苷R1
人參皂苷Rg1
人參皂苷Rb1
人參二醇
人參三醇
結(jié)果符合分析方法的要求。
6.血漿濃度結(jié)果如下表三七皂苷R1
人參皂苷Rg1
人參皂苷Rb1
人參二醇
人參三醇
實(shí)施例2口服西洋參膠囊后比格犬體內(nèi)血藥濃度的檢測試驗(yàn)給藥方法試驗(yàn)前比格犬禁食12h，清晨按西洋參皂苷100mg/kg劑量給藥。服藥前取空白血，于服藥后0.5、1、2、3、4、、6、8、10、12、16、24、36、48h取前腿靜脈血3ml，肝素抗凝，立即于3000rpm離心5min，分離出血漿于-20℃保存?zhèn)溆谩?br>
血漿樣品的處理精密量取血漿0.5ml，置離心管中，加入2ml甲醇沉淀蛋白，渦旋并高速離心后，取上清液進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為20μl，記錄色譜圖。
分析條件高效液相色譜條件色譜柱SGE C18柱(50mm×2.1mm，5μm)流動相
檢測器三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜檢測柱溫25℃質(zhì)譜條件離子源Turbo Ionspray源，噴射電壓4000V，正離子檢測，Tem280℃為多反應(yīng)檢測(MRM)CE17-36V； DP80-110V檢測離子一級全掃描質(zhì)譜的人參皂苷Rb1、人參二醇、人參三醇的準(zhǔn)分子離子峰分別為m/z 1183、m/z 461.1和m/z 477.6，選擇性對其進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離，得到二級碎片離子分別為m/z 487.2、m/z 127.1和m/z 127.1，采用多反應(yīng)檢測(MRM)掃描方式，對以上述離子反應(yīng)進(jìn)行定量分析，保留時(shí)間分別為1.93min，11.52min，8.51min，內(nèi)標(biāo)物為格列里脲，其的二級碎片離子保留時(shí)間為6.21min。
以濃度為橫坐標(biāo)，與內(nèi)標(biāo)物的峰面積之比為縱坐標(biāo)，通過加權(quán)最小二乘法進(jìn)行回歸運(yùn)算，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算出血漿濃度。
血漿濃度結(jié)果如下表人參皂苷Rb1
人參二醇
人參三醇
權(quán)利要求
1.一種達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷的檢測方法，其特征在于該方法采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，其中高效液相色譜條件為色譜柱ODS C18柱，流動相采用甲醇、10mM醋酸銨進(jìn)行梯度洗脫，0時(shí)刻甲醇、10mM醋酸銨的體積比為40-60％∶60-40％，以第4分鐘時(shí)甲醇、10mM醋酸銨的體積比為40-60％∶60-40％，在第4.1分鐘時(shí)甲醇、10mM醋酸銨的體積比為70-90％∶30-10％，在第14.0分鐘時(shí)甲醇、10mM醋酸銨的體積比為70-90％∶30-10％，在第25分鐘時(shí)甲醇、10mM醋酸銨的體積比為40-60％∶60-40％，流速為0.2-0.4(ml/min)，檢測器三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜檢測，柱溫20-38℃；質(zhì)譜條件離子源Turbo Ionspray源，噴射電壓3000-5000V，Tem250-300℃，正離子檢測，掃描方式為多反應(yīng)檢測(MRM)，CE17-36V，DP80-110V，檢測離子對一級全掃描質(zhì)譜的達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷單體皂苷的準(zhǔn)分子離子峰進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離，得到二級碎片離子，采用多反應(yīng)檢測(MRM)掃描方式，對上述離子反應(yīng)進(jìn)行定量分析。
2.如權(quán)利要求1所述的達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷的檢測方法，其特征在于該方法中流動相采用甲醇、10mM醋酸銨進(jìn)行梯度洗脫，0時(shí)刻甲醇、10mM醋酸銨的體積比為50％∶50％，以第4分鐘時(shí)甲醇、10mMNH4Oac的體積比為50％∶50％，在第4.1分鐘時(shí)甲醇、10mM醋酸銨的體積比為90％∶10％，在第14.0分鐘時(shí)甲醇、10mM醋酸銨的體積比為90％∶10％，在第25分鐘時(shí)甲醇、10mM醋酸銨的體積比為50％∶50％，流速為0.25(ml/min)，色譜柱ODS C18柱(50mm×2.1mm，5μm)；質(zhì)譜條件中離子源Turbo Ionspray源，噴射電壓4000V，正離子檢測，溫度為300℃。
3.如權(quán)利要求1或2所述的達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷的檢測方法，其特征在于該方法中血漿樣品的處理方法包括如下方法的任一種a.精密量取血漿0.5ml，加入2-5倍體積量的有機(jī)溶媒沉淀蛋白，渦旋并高速離心后，取上清液進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為20μl；b.精密量取血漿0.5ml，8000-15000r/min轉(zhuǎn)速離心，吸取上清液上固相萃取小柱，采用2ml重蒸水，2ml 15-25％甲醇淋洗后，以2ml色譜甲醇洗脫，收集洗脫液，50-70℃下氮?dú)獯蹈?，?0-70％甲醇溶液復(fù)溶，高速離心后取上清液進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為20μl。
4.如權(quán)利要求1、2或3所述的達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷的檢測方法，其特征在于所述達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷為三七總皂苷中的單體皂苷。
5.如權(quán)利要求4中所述的達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷的檢測方法，其特征在于所述達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、原人參二醇型皂苷的次生苷元人參二醇、原人參三醇型皂苷的次生苷元人參三醇。
6.如權(quán)利要求5中所述的達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷的檢測方法，其特征在于質(zhì)譜條件中檢測離子一級全掃描質(zhì)譜的三七皂苷R1準(zhǔn)分子離子峰為m/z 355.6，m/z 405.8，m/z 423.6，m/z 441.7，m/z 735.7，m/z 753.9，m/z 950.8，m/z 956.0，m/z 971.8，m/z 1006.9，對其進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離，得到二級碎片離子分別為m/z 203.3，m/z 643.1，m/z 723.5，m/z 423；人參皂苷Rg1一級全掃描質(zhì)譜的準(zhǔn)分子離子峰為m/z 374.3，m/z 396.6，m/z 405.7，m/z 423.0，m/z 441.7，m/z 491.6，m/z 603.7，m/z 801.6，m/z 823.8，m/z 830.7，m/z 840.6，m/z 874.9，m/z 878.6，m/z 915.9，m/z 940.7，m/z 962.8，m/z 1006.9，對其進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離，得到二級碎片離子分別為m/z 203.3，m/z 643.1，m/z 823.5，m/z 423.5；人參皂苷Rb1一級全掃描質(zhì)譜的準(zhǔn)分子離子峰為m/z 1109.9，m/z 1112.2，m/z 1127.0，m/z 1129.3，m/z 1132.8，m/z 1148.9，m/z 1173.7，m/z 1217.6，m/z 1216.1，m/z m/z 1231.7，m/z 1300.6，對其進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離，得到二級碎片離子分別為m/z 144.7，m/z 163.4，m/z 325.4，m/z 487.3；人參二醇一級全掃描質(zhì)譜的準(zhǔn)分子離子峰為m/z 425.6，m/z 443.6，m/z 444.7，m/z 459.6，m/z 461.5，m/z 462.6，m/z 463.6，m/z 483.6，m/z 484.4，m/z 499.5，m/z 524.5，m/z 534.6，對其進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離，得到二級碎片離子分別為m/z 99.0，m/z 109.4，m/z 122.0，m/z 127.1，m/z 191.5，m/z 203.2，m/z 206.9，m/z 217.5，m/z 235.0，m/z 271.3，m/z 369.4，m/z 407.6，m/z 425.4，m/z 443.5，m/z 461.4；人參三醇的一級全掃描質(zhì)譜的準(zhǔn)分子離子峰為m/z 127.2，m/z 423.5，m/z 441.6，m/z 459.6，m/z 477.5，m/z 499.6，m/z 550.7，對其進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離，得到二級碎片離子分別為m/z 99.1，m/z 109.6，m/z 123.0，m/z 127.1，m/z 187.6，m/z 203.1，m/z 205.2，m/z 207.2，m/z 217.3，m/z 405.7，m/z 423.5，m/z 441.5，m/z 459.6，m/z 477.5。
7.如權(quán)利要求6中所述的達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷的檢測方法，其特征在于質(zhì)譜條件中檢測離子一級全掃描質(zhì)譜的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參二醇、人參三醇的準(zhǔn)分子離子峰分別為m/z 950.8、m/z 801.6、m/z 1127.0、m/z 461.5和m/z 477.5，對其進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離，得到二級碎片離子分別為m/z 423、m/z 423.5、m/z 487.3、m/z 127.1和m/z 127.1。
8.一種含有達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷藥物制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法應(yīng)用上述如權(quán)利要求7中所述的達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷的檢測方法。
9.如權(quán)利要求8所述的含有達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷藥物制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于含有達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷藥物制劑是指三七總皂苷或其提取物或以三七為活性成分或人參皂苷、絞股藍(lán)皂苷、西洋參皂苷的各種制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷與次生苷元的檢測方法，該方法采用高效液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀，其中高效液相色譜條件為色譜柱ODS C18柱，柱溫20－38℃；質(zhì)譜條件離子源Turbo Ionspray源，噴射電壓3000－5000V，Tem250－300℃，檢測器三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜檢測，正離子檢測，掃描方式為多反應(yīng)檢測(MRM)，CE17－36V，DP80－110V，檢測離子對一級全掃描質(zhì)譜的達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷單體皂苷的準(zhǔn)分子離子峰進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離，得到二級碎片離子，采用多反應(yīng)檢測(MRM)掃描方式，對上述離子反應(yīng)進(jìn)行定量分析。能準(zhǔn)確地反映達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷單體皂苷與次生苷元的血藥濃度。
文檔編號G01N30/06GK1885032SQ20051007723
公開日2006年12月27日 申請日期2005年6月20日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月20日
發(fā)明者朱春燕, 陳衛(wèi) 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所