專利名稱：：含糖柔性聚合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種含有糖類或糖類模擬部分的聚合物，一種制備這種聚合物的方法，一種包含這種聚合物的傳感器，一種制備這種傳感器的方法以及一種4吏用這種傳感器的方法。該傳感器可以用于使用光學(xué)技術(shù)測量或監(jiān)測流體中的糖類，例如體液中的葡萄糖。該傳感器特別適用于必須精密地監(jiān)測葡萄糖水平和/或必須重復(fù)地測量葡萄糖的情況，例如在糖尿病監(jiān)護(hù)中。
背景技術(shù)：
：在糖尿病監(jiān)護(hù)中，血液中葡萄糖的常規(guī)測量是必要的，以便確保恰當(dāng)?shù)囊葝u素劑量。另外，已經(jīng)表明在糖尿病患者的長期護(hù)理中，較好地控制血糖水平可以延緩(如果不能防止)視網(wǎng)膜病、循環(huán)問題和其它常常與糖尿病相關(guān)的退行性疾病的發(fā)作。因此，糖尿病患者需要可靠和精確地自我監(jiān)測血糖水平。希望測量可能出現(xiàn)在糖尿病患者中的濃度范圍內(nèi)的血糖，即，0~35mM或甚至更高。目前，糖尿病患者利用可商業(yè)得到的比色測試條或電化學(xué)生物傳感器(例如酶電極)來監(jiān)測血糖，但是它們在每次測量時(shí)都需要常規(guī)地使用柳葉刀型的工具以取出合適量的血液。大多數(shù)糖尿病患者平均每天要使用這種工具測量血糖兩次。但是，美國NationalInstituteofHealth推薦每天應(yīng)該進(jìn)行至少四次血糖測試，美國糖尿病協(xié)會(huì)(AmericanDiabetesAssociation)已經(jīng)認(rèn)可了該推薦。血糖測試頻率的增加給糖尿病患者造成了相當(dāng)大的負(fù)擔(dān)，不僅在金錢方面而且在疼痛和不適方面，尤其是給不得不定期使用柳葉刀從指尖采血的長期糖尿病患者。因此，亳無疑問地，需要不用從患者采血的較好的長期葡萄糖監(jiān)測系統(tǒng)。已經(jīng)有許多不需要從患者采血的葡萄糖測量技術(shù)的提議。觀察到分析物在皮下流體中的濃度與所述分析物在血液中的濃度相關(guān)，因此已經(jīng)有幾個(gè)使用位于皮下位置中的葡萄糖監(jiān)測裝置的報(bào)道。對可以遠(yuǎn)程詢問的葡萄糖竟?fàn)幗Y(jié)合檢測物(assay)的使用是尤其被關(guān)注。一種檢測竟?fàn)幗Y(jié)合的方法為使用基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分對(proximity-basedsignalgenerating/modulatingmoietypair)(在US6232120中討論)，所述部分對通常是能量轉(zhuǎn)移供體-受體對(包含能量供體部分和能量受體部分)。能量供體部分是光致發(fā)光的(通常是熒光的)。在該方法中，使能量轉(zhuǎn)移供體-受體對與待分析的樣品(例如皮下流體)接觸。然后樣品發(fā)光并且檢測所產(chǎn)生的發(fā)射。供體-受體對的或者能量供體部分或者能量受體部分與受體載體(例如糖類結(jié)合分子)結(jié)合，而供體-受體對的另一部分(結(jié)合到配體載體，例如糖類類似物)和存在的任何分析物(例如糖類)竟?fàn)幨荏w載體上的結(jié)合位點(diǎn)。當(dāng)使供體和受體在一起時(shí)它們之間發(fā)生能量轉(zhuǎn)移，這產(chǎn)生能量供體部分的熒光性的可檢測的壽命變化(減少)。由能量供體部分發(fā)射的部分熒光信號(hào)也猝滅。通過分析物的竟?fàn)幗Y(jié)合使壽命變化減少或甚至消失。因此，通過測量明顯的發(fā)光壽命，例如通過相調(diào)制熒光計(jì)或時(shí)間分辨熒光計(jì)(參見Lakowicz，PrinciplesofFluorescenceSpectroscopy,PlenumPress,1983,第3章)，可以測定樣品中分析物的量。應(yīng)當(dāng)注意能量轉(zhuǎn)移的效率取決于供體的量子產(chǎn)率、供體的發(fā)射光i普與受體的吸收光鐠的重疊、和供體與受體之間的相對距離和方向。在EP0561653中，7>開了一種如上所述的詢問受體和配體的方法。供體-受體能量轉(zhuǎn)移的例子為熒光共振能量轉(zhuǎn)移(F6rster共振能量轉(zhuǎn)移，F(xiàn)RET),其是從初始激發(fā)的供體(D)到受體(A)的非輻射的激發(fā)態(tài)能量轉(zhuǎn)移。供體通常在較短波長處發(fā)射，并且它的發(fā)射光譜與受體的吸收光i普重疊。沒有出現(xiàn)光子地發(fā)生能量轉(zhuǎn)移并且是供體和受體之間的長程偶極-偶極相互作用的結(jié)果。術(shù)語共振能量轉(zhuǎn)移(RET)是更準(zhǔn)確的，因?yàn)镕RET過程不包括光子的出現(xiàn)。但是FRET和RET通?？梢蕴鎿Q使用。FRET的重要特性在于它可以在相當(dāng)于生物大分子尺寸的距離內(nèi)發(fā)生。被稱為F6rster距離的FRET50%有效的距離，通常為20~60A。20~90A的F6rster距離便于竟?fàn)幗Y(jié)合研究。用供體(D)標(biāo)記分析物結(jié)合部分并用受體(A)標(biāo)記分析物類似物，或者反之亦然，將會(huì)生成可產(chǎn)生可基于供體-受體距離的測量響應(yīng)的檢測物。因此，D-"分析物結(jié)合部分，，結(jié)合到A-"分析物類似物，，導(dǎo)致供體強(qiáng)度或壽命的降低。樣品中的分析物竟?fàn)嶥-"分析物結(jié)合部分"上的分析物結(jié)合部分，從受體(A)釋放D-"分析物結(jié)合部分"。因此期望供體的強(qiáng)度衰減時(shí)間和相角隨葡萄糖濃度的增加而增加。將這些原理用于通過能量轉(zhuǎn)移感測葡萄糖。WO91/09312描述了一種采用基于通過光學(xué)裝置遠(yuǎn)程詢問的葡萄糖(引入能量轉(zhuǎn)移供體-受體對)的親和檢測物的皮下方法和裝置。例如W097/19188、WO00/02048、WO03/006992和WO02/30275每個(gè)描述通過產(chǎn)生可以被遠(yuǎn)程讀取的光學(xué)信號(hào)的能量轉(zhuǎn)移感測葡萄糖。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解受體可以是熒光團(tuán)。用波長在能量受體部分的吸收光鐠內(nèi)的入射輻射束激發(fā)后，由能量受體部分發(fā)射的任何焚光信號(hào)未受到FRET過程的影響。因此，可以將由能量受體部分發(fā)射的熒光信號(hào)的強(qiáng)度用作內(nèi)參比信號(hào)，例如在傳感器的連續(xù)校準(zhǔn)中，或者可以監(jiān)測傳感器降級(jí)的程度并因此指示需要植入或注入新傳感器。該信號(hào)下降到可接受的基線水平之下表明需要植入或注入新傳感器。但是，能量受體部分可以是非熒光染料。在這種情況下用具有熒光猝滅性能的化合物代替特定的能量受體部分。Tyagi等人在NatureBiotechnology(1998)18:第49頁給出強(qiáng)有力的和非特定的熒光猝滅劑的例子。上述體系基于植物凝集素伴刀豆球蛋白A(ConA)作為糖類結(jié)合分子。本發(fā)明人在PCT/EP2005/013114(WO06/061207)(要求其優(yōu)選權(quán))中已經(jīng)提出可以替代使用動(dòng)物凝集素例如甘露糖結(jié)合凝集素(MBL)。術(shù)語"凝集素"包括不明顯地涉及糖代謝的和不屬于任何免疫球蛋白主類的任何糖綴合蛋白。凝集素通過糖類識(shí)別域(carbohydraterecognitiondomains(CRDs))對糖類表現(xiàn)出選擇性結(jié)合。本發(fā)明人認(rèn)識(shí)到影響糖類類似物對指定糖類結(jié)合分子(尤其是凝集素)的親和力的參數(shù)包括-糖類(或糖類模擬)部分的數(shù)目；-糖類(或糖類模擬)部分對糖類結(jié)合分子的親和力；-鈣濃度(至少對于MBL)-糖類類似物的柔性。不能控制生理鉀濃度。但是，可以選擇其它參數(shù)以得到具有合適測量范圍的糖類類似物。之前沒有鑒別過或提出過糖類類似物柔性對檢測物性能的影響。在PCT/EP2005/013114(WO06/061207)和PCT/EP2005/013115(WO06/061208)中討論了對前兩個(gè)變量的控制。對MBL和其它凝集素的強(qiáng)結(jié)合是在多個(gè)位點(diǎn)結(jié)合的結(jié)果。對每個(gè)位點(diǎn)的結(jié)合是相對弱的(低親和力)但累積效應(yīng)是強(qiáng)結(jié)合(高親和力)。因此，與在全部結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合的糖類類似物相比，沒有在全部結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合的糖類類似物更容易被在全部結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合的糖類分析物取代，這解釋了為什么含有對MBL具有比葡萄糖更高親和力的甘露糖的糖類類似物可以被葡萄糖取代。先前公開的糖類類似物(例如US6232130公開的那些)包含綴合糖類和能量供體或能量受體部分的球狀蛋白質(zhì)。在這種分子中糖類和能量供體或能量受體部分具有固定的位置。這意味著糖類類似物不必采取使多個(gè)糖類部分綴合到凝集素CRDs的構(gòu)型。同樣地，當(dāng)分析物類似物和糖類結(jié)合部分綴合時(shí)，在該糖類類似物中的糖類和能量供體或能量受體部分的相對位置可能不能使得能量供體和受體部分之間的相互作用最佳。這將影響FRET并減弱光信號(hào)。最后，在生理釣濃度(通常為1.15~1.29mM)下，這些糖類類似物常常不綴合到凝集素。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)甘露糖的糖類綴合物(復(fù)合糖)對MBL的最佳綴合所需的鉤濃度為約20mM。還將糖類聚合物(例如任選衍生的葡聚糖和甘露聚糖)用作糖類類似物。在PCT/EP2005/013114(WO06/061207)中公開了在生理釣濃度下利用高碘酸鹽裂解使葡聚糖與MBL綴合。但是，所述葡聚糖衍生物的合成是復(fù)雜的(特別是還需要引入胺基以使能量供體或受體綴合到糖類類似物，并且這可能導(dǎo)致引起不希望沉淀的交聯(lián))。并且，糖類部分是糖類聚合物的骨架結(jié)構(gòu)單元的事實(shí)意味著不易控制糖類部分的數(shù)目。本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在生理葡萄糖濃度下，某些葡聚糖衍生物不易于被葡萄糖從MBL上替代，使得檢測靈敏度低。最后，在生理鉀濃度下到MBL的綴合仍然相當(dāng)弱?，F(xiàn)在本發(fā)明人開發(fā)一種用于葡萄糖或其它糖類的新型類似物。
發(fā)明內(nèi)容在第一方面，本發(fā)明涉及一種用于檢測或測量流體中的糖類分析物的傳感器，該傳感器包含其讀出為可檢測的或可測量的光學(xué)信號(hào)的竟?fàn)幗Y(jié)合檢測物組分，所述檢測物組分由允許分析物擴(kuò)散但不允許檢測物組分?jǐn)U散的材料保留，所述檢測物組分包含用基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分對之一標(biāo)記的糖類結(jié)合分子；能夠與分析物竟?fàn)幘Y合糖類結(jié)合分子的糖類類似物，該糖類類似物為柔性的水可溶性聚合物，該聚合物包含聚合的單體單元的殘基，該單體單元?dú)埢哂刑穷惢蛱穷惸M部分側(cè)鏈和為基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分對的另一個(gè)的側(cè)鏈部分；和/或第一單體單元和第二單體單元的共聚合殘基，該第一單體單元?dú)埢哂刑穷惢蛱穷惸M部分側(cè)鏈，第二單體單元?dú)埢哂袨榛诮咏缘男盘?hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分對的另一個(gè)的側(cè)鏈部分。在第二方面，本發(fā)明涉及一種制備上述聚合物的方法，包括下列步驟之一二a)聚合每個(gè)均具有糖類或糖類模擬部分側(cè)鏈和基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分側(cè)鏈的單體單元、和任選的第三單體單元；b)共聚合每個(gè)均具有糖類或糖類模擬部分側(cè)鏈的笫一單體單元、和每個(gè)均具有基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分側(cè)鏈的第二單體單元、和任選的第三單體單元；c)聚合每個(gè)均具有糖類或糖類模擬部分側(cè)鏈和用于連接基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分的側(cè)官能團(tuán)的單體單元、和任選的第三單體單元，然后使單體單元?dú)埢c基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分反應(yīng)；d)共聚合每個(gè)均具有糖類或糖類模擬部分側(cè)鏈的第一單體單元、和每個(gè)均具有用于連接基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分的側(cè)官能團(tuán)的第二單體單元、和任選的第三單體單元，然后使第二單體單元?dú)埢c基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分反應(yīng)；e)聚合每個(gè)均具有用于連接糖類或糖類模擬部分的側(cè)官能團(tuán)和用于連接基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分的不同側(cè)官能團(tuán)的單體單元、和任選的笫三單體單元，然后使單體單元?dú)埢c糖類或糖類模擬部分和基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分反應(yīng)；或f)共聚合每個(gè)均具有用于連接糖類或糖類模擬部分的側(cè)官能團(tuán)的第一單體單元、和每個(gè)均具有用于連接基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分的不同側(cè)官能團(tuán)的第二單體單元、和任選的第三單體單元，然后使第一單體單元?dú)埢c糖類或糖類模擬部分反應(yīng)、使第二單體單元?dú)埢c基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分反應(yīng)。以下制備聚合物的類似方法也在本發(fā)明的范圍內(nèi)，但是不是優(yōu)選的其中聚合前基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分存在于單一或第二單體單元中，并在聚合后引入糖類或糖類模擬部分。優(yōu)選地，分析物是單糖。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，分析物為葡萄糖。優(yōu)選地，傳感器適于檢測或測量體液(例如皮下流體)中的葡萄糖。希望傳感器適合用于體內(nèi)，并且下面將詳細(xì)討論。優(yōu)選糖類類似物能夠在生理鈣濃度下與葡萄糖竟?fàn)?。糖類類似物術(shù)語"糖類"包括蔗糖優(yōu)選地，檢測物能夠測量在0~35mM葡萄糖范圍的至少一部分內(nèi)的血糖濃度，例如在0~25mM的葡萄糖范圍內(nèi)。合適地，IQo值為約15mM葡萄糖。更優(yōu)選地，檢測物能夠測量在2~10mM葡萄糖范圍內(nèi)的葡萄糖濃度。希望在該范圍內(nèi)的劑量-響應(yīng)曲線盡可能地接近直線。合成人造聚合物而不是衍生蛋白或多糖類，使得易于控制聚合物的參數(shù)(例如分子柔性、水可溶性、分子量、糖類或糖類模擬部分的性質(zhì)、糖類或糖類模擬部分的數(shù)目、基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分的數(shù)目)，以改善檢測物性能。與多糖類相比，合成聚合物具有可以獨(dú)立于聚合物長度而控制糖類部分?jǐn)?shù)目的優(yōu)點(diǎn)。此外，與葡聚糖相比，在聚合物中使用不含環(huán)的單體例如丙烯酸-2-羥乙酯(HEA)得到增加的分子轉(zhuǎn)動(dòng)柔性。不希望限于該理論，如上所述，本發(fā)明人認(rèn)為重要的是基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分接近于綴合部分以產(chǎn)生強(qiáng)信號(hào)。球狀配體將結(jié)合部分和基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分集中在球面上，使得它們是接近的。在直鏈葡聚糖中，主鏈由結(jié)合部分組成，并因此不能控制結(jié)合是接近還是遠(yuǎn)離基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分。在合成聚合物中，這可以通過接近于基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分定位結(jié)合部分來控制。因此，優(yōu)選地，聚合物具有非糖類主鏈。術(shù)語"柔性的"包含能夠明顯地單體間轉(zhuǎn)動(dòng)的聚合物。優(yōu)選地，除了糖類或糖類模擬部分和基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分側(cè)鏈之外，聚合物不包含大的基團(tuán)(例如環(huán)結(jié)構(gòu)、叔丁基或其它空間位阻的大基團(tuán))。優(yōu)選地，該聚合物在主鏈結(jié)構(gòu)中具有很少的雙鍵(例如少于10%)。合適地，該聚合物不具有球狀三級(jí)結(jié)構(gòu)，盡管它們可以具有這種結(jié)構(gòu)。優(yōu)選地，聚合物是無支鏈的。這改善了聚合物的柔性。但是，聚合物可以在一定程度上是帶支鏈的或交聯(lián)的，前提是這不會(huì)導(dǎo)致水凝膠的形成。例如，在具有l(wèi)OOkDa整體分子量的聚合物中，1~5個(gè)支鏈?zhǔn)强梢越邮艿摹Ｐg(shù)語"水可溶性的"包含在室溫下具有至少4mg/ml水溶解度、優(yōu)選至少25mg/ml、更優(yōu)選至少50mg/ml、例如至少100mg/ml的聚合物。在體溫下溶解度將更高。聚合物為水可溶性的是重要的，以便當(dāng)如下面討論的傳感器用于體內(nèi)時(shí)它可以溶于組織液。甚至當(dāng)聚合物被綴合到糖類結(jié)合分子例如MBL時(shí)，聚合物也應(yīng)該是水可溶性的。優(yōu)選地，聚合物包含不多于1到5種類型的單體單元，更優(yōu)選不多于3種單體單元。合適地，聚合物為包含具有糖類或糖類模擬部分側(cè)鏈的第一單體單元?dú)埢途哂谢诮咏缘男盘?hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分側(cè)鏈的第二單體單元?dú)埢墓簿畚?。作為替代方案或附加方案，可以使用同時(shí)具有糖類或糖類模擬部分側(cè)鏈和基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分側(cè)鏈的單個(gè)單體單元?dú)埢?。?yōu)選使用第一單體單元和笫二單體單元，這是因?yàn)榭梢元?dú)立地控制糖類或糖類模擬部分和基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分的量。優(yōu)選地，如果存在，每個(gè)單個(gè)的單體單元?dú)埢哂刑穷惢蛱穷惸M部分側(cè)鏈和基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分側(cè)鏈，如果存在，每個(gè)第一單體單元?dú)埢兔總€(gè)第二單體單元?dú)埢謩e具有糖類或糖類模擬部分側(cè)鏈和基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分側(cè)鏈。優(yōu)選地，第一單體單元?dú)埢偷诙误w單元?dú)埢诮Y(jié)構(gòu)上是不同的，不僅僅在于如上所述的它們具有不同的側(cè)基。優(yōu)選地，共聚物為無規(guī)共聚物。但是，也可以為交替共聚物。不優(yōu)選使用具有大嵌段的嵌段共聚物。但是，可以使用具有低分子量(例如1~3kDa)嵌段的嵌段共聚物。優(yōu)選地，當(dāng)用在MBL作為糖類結(jié)合分子的檢測物中時(shí)，聚合物在OmM葡萄糖下對MBL的綴合至少相當(dāng)于氨基葡聚糖綴合強(qiáng)度的50%,更優(yōu)選至少和氨基葡聚糖的強(qiáng)度一樣，但是更易于被抑制。在0~35mM葡萄糖范圍內(nèi)，尤其是在2-15mM范圍內(nèi)，聚合物易于被抑制(大的總相位響應(yīng)比例)是特別希望的。這提供比使用氨基葡聚糖作為葡萄糖類似物的類似檢測物更靈敏的在特定生理意義的葡萄糖濃度內(nèi)的檢測物?？梢源嬖诰哂刑穷惢蛱穷惸M部分的多于一種類型的單體單元?dú)埢?。糖類或糖類模擬部分可以是不同的，對MBL和類似凝集素具有不同的親和力。同樣地，可以使用具有基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分的多于一種類型的單體單元?dú)埢??；诮咏缘男盘?hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分可以是不同的。第一單體單元(或單個(gè)單體單元)不必包含雙鍵。用在這種聚合物中的合適的糖類部分的實(shí)例為單糖和寡糖。優(yōu)選地，糖類部分對凝集素，尤其是MBL和其它人類或人源化凝集素、和/或植物凝集素伴刀豆球蛋白A具有高親和力。本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)普通糖類部分對MBL的親和力如下D-甘露糖、N-乙酰基-D-甘露糖胺、D-果糖、D-明串珠菌二糖、伊爾糖(erlose)、N-乙?；?D-葡糖胺、L-巖藻糖〉肌醇、D-葡萄糖、D-阿拉伯糖、D-帕拉金糖、D-松二糖、D-山梨糖醇、D-核糖、D-塔格糖》D-來蘇糖〉乳糖、L-阿拉伯糖、D-半乳糖。優(yōu)選地，糖類部分不是對MBL具有低親和力的半乳糖。普通糖類部分對伴刀豆球蛋白A的親和力如下(VanDamme等人，HandbookofPlantLectins:PropertiesandBiomedicalApplications,Wiley&Sons,1998，第142頁)甘露糖>葡萄糖>N-乙酰基-葡糖胺。合適的單糖為任選衍生的丁糖、戊糖、己糖、庚糖或較高的同源醛糖類或酮糖類，例如任選衍生的D-葡萄糖、D-甘露糖、N-乙酰基-D-葡糖胺、L-巖藻糖、D-果糖、D-塔格糖或D-山梨糖醇。合適的低聚物可以為直鏈的或帶支鏈的均寡聚物或混合的寡聚物，例如包含2~50個(gè)糖類單元。當(dāng)聚合物與作為糖類結(jié)合分子的MBL—起使用時(shí)，優(yōu)選的糖基化為1—6或1—2,因?yàn)轭A(yù)期1—3和1—4糖基化會(huì)干擾MBL綴合。例如，預(yù)期壬(1~>6)《-葡萄糖(葡聚糖1500Da)對MBL比1,3-(i-D-葡萄糖(例如laminanarihexaose)對MBL具有更高的親和力。合適的寡糖包括潘糖(pannose)、麥芽糖、麥芽三糖、異麥芽三糖、D-明串珠菌二糖、伊爾糖、D-帕拉金糖(D-palatinose)、D-松二糖或1~250kDa的葡聚糖(優(yōu)選1~40kDa的葡聚糖，例如lkDa、1.5kDa、5kDa、6kDa、10kDa、12kDa、20kDa、25kDa或40kDa的葡聚糖)。當(dāng)聚合物與作為糖類結(jié)合分子的伴刀豆球蛋白A—起使用時(shí)，預(yù)期1—6糖基化干擾通過C6-OH羥基對伴刀豆球蛋白A的綴合。在這種情況下，優(yōu)選的糖類部分包括任選衍生的甘露糖、麥芽糖、異麥芽糖、葡萄糖和槐糖(不是半乳糖)，尤其是a-D-吡喃甘露糖苷(a-D-Manp)、a-D-吡喃葡萄糖苷(a-D-Glup)和a-D-N-乙?；?葡糖胺吡喃糖苷(a-D-GluNAcp)。優(yōu)選地，聚合物包含選自D-果糖、D-明串珠菌二糖、N-乙?；?葡糖胺、D-甘露糖、L-巖藻糖、N-乙?；?甘露糖胺、D-阿拉伯糖、肌醇、D-塔格糖、伊爾糖、D-葡萄糖、D-帕拉金糖、D-松二糖、D-核糖、D-山梨糖醇中的至少一種糖類部分。更優(yōu)選地，聚合物包含至少一個(gè)葡萄糖部分和/或至少一個(gè)N-乙?；咸前凡糠趾?或至少一個(gè)甘露糖部分，這是因?yàn)樗鼈儗BL和其它動(dòng)物凝集素具有高的親和力。認(rèn)為這些部分通過它們的C3和C4羥基基團(tuán)綴合到凝集素的結(jié)合位點(diǎn)。合成的帶支鏈的糖類的例子為用于構(gòu)建樹枝狀高分子(例如源于具有胺連接基的三糖的TRIS，如下所示)的樹枝狀高分子"楔(wedge)"。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>術(shù)語"糖類模擬"包括綴合到通常綴合糖類的位點(diǎn)的非糖類分子，例如能夠與葡萄糖竟?fàn)幘Y合到MBL的非糖類分子。合適的糖類模擬部分包括肽，例如模擬N-乙?；咸前返慕堑鞍纂?SFGSGFGGGY)。已經(jīng)表明角蛋白肽可以抑制MBL(Mantacto等人2001J.Immunol.166，4148-4153)。合適地，每個(gè)第一單體單元(或單個(gè)單體單元)為糖類或糖類模擬部分的含雙鍵衍生物。但是，每個(gè)第一單體單元(或單個(gè)單體單元)可以為包含官能團(tuán)的含雙鍵分子，在聚合后，糖類或糖類模擬部分可以合適地連接到所述官能團(tuán)上。優(yōu)選地，糖類或糖類模擬部分的含雙鍵衍生物為糖類或糖類模擬部分的含烯丙基或乙烯基的衍生物。其它合適的糖類或糖類模擬部分的含雙鍵衍生物包括烯丙基衍生物的同系物，例如3-丁烯基或4-戊烯基衍生物，或在4位具有糖類或糖類模擬部分的苯乙烯衍生物。糖類或糖類模擬部分的其它合適的含雙鍵衍生物包括基于HEA、甲基丙烯酸-2-羥乙酯(HEMA)或乙烯醇(VA)的衍生物。糖類或糖類模擬部分可以連接到第一單體單元(或單個(gè)單體單元)的胺、酸、醇、炔、疊氮和/或砜官能團(tuán)上。例如，可以使用二乙烯基砜連接單體單元中的醇基和糖類或糖類模擬部分中的胺基。當(dāng)糖類為甘露糖時(shí)，優(yōu)選不通過C3-OH或C4-OH基團(tuán)連接，這是因?yàn)檫@些基團(tuán)在對MBL的綴合中是重要的。在這種情況下，二乙烯基砜連接可能是不合適的。可以通過二糖的還原胺化產(chǎn)生氨基衍生的糖類部分。這使得糖類部分在其異頭位置(C1)處連接?？梢酝ㄟ^費(fèi)歇爾(Fischer)苷化將糖類或糖類模擬部分連接到醇基(例如在HEA中)上。在優(yōu)選實(shí)施方案中，每個(gè)第一單體單元是l-烯丙基-a-D-吡喃甘露糖苷、l-烯丙基-2-乙酰胺基-2-脫氧-a-D-吡喃葡萄糖苷和/或l-烯丙基-a-D-吡喃葡萄糖苷。合適地，每個(gè)第二單體單元(或單個(gè)單體單元)為包含官能團(tuán)的含雙鍵分子，在聚合后，基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分可以合適地連接到所述官能團(tuán)上。合適的官能團(tuán)包括酸、醇和/或砜。聚合后的連接有助于最小化昂貴的基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分的損失。但是，第二單體單元(或單個(gè)單體單元)可以包含基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分。在這種情況下，適用以上關(guān)于合適的可聚合基團(tuán)和連接的討論。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，每個(gè)第二單體單元為N-(3-氨基丙基)曱基丙烯酰胺或其衍生物。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，每個(gè)單個(gè)的單體單元為含雙鍵的、含糖類或糖類模擬部分的賴氨酸衍生物。例子如下所示(多步反應(yīng)路線)在該反應(yīng)路線中的原料為甲基丙烯酰基-L-賴氨酸，得自PolysSciencesEurope(Eppelheim，Germany).聚合后，a氛基可以連接到基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分。優(yōu)選地，聚合物還包含不具有糖類或糖類模擬側(cè)鏈或基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分側(cè)鏈的第三單體單元?dú)埢?。這有助于增加柔性。優(yōu)選地，該第三單體單元?dú)埢诮Y(jié)構(gòu)上與單個(gè)的單體單元?dú)埢?、第一單體單元?dú)埢?或第二單體單元?dú)埢煌?不僅僅在于如上解釋它們具有不同的側(cè)基)。通過使用非空間位阻的第三單體單元例如HEA增加柔性。還通過使用不帶電荷的第三單體單元增加柔性。不包含笫三單體單元的聚合物會(huì)具有大量帶正電荷的銨基，需要使帶正電荷的銨基失活以最小化由靜電排斥導(dǎo)致的柔性降低。可以用第三單體單元來改變聚合物的總電荷。聚合物內(nèi)可以包含多于一種類型的第三單體。優(yōu)選地，每個(gè)第三單體單元為含親水基團(tuán)的含雙鍵分子，例如含羥基。不優(yōu)選第三單體單元是親油的含雙鍵分子例如苯乙烯。在優(yōu)選實(shí)施方案中，每個(gè)笫三單體單元為HEA、乙烯基吡咯烷酮、MMA、HEMA、乙烯醇和/或乙二醇。但是，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解存在許多其它可以使用的含親水基團(tuán)的含雙鍵分子。合適地，單體單元通過加成聚合反應(yīng)。該加成聚合可以是自由基引發(fā)的，例如使用過二硫酸鉀(PPS)或其它過氧化化合物。聚合方法可以是例如在甲苯和水的混合物中的乳液聚合(在US4952656中討論)。合適地，表面活性劑包含在乳液聚合反應(yīng)混合物中。聚合后可以通過破乳和透析除去表面活性劑?；蛘?，可以在單相例如在水中進(jìn)行聚合。與單相聚合相比，認(rèn)為乳液聚合產(chǎn)生分子量較低并且分子量分布較窄的聚合物。合適地，在加入引發(fā)劑前，混合單體單元。優(yōu)選地，聚合反應(yīng)進(jìn)行小于兩天。聚合時(shí)間的長短可以用來控制聚合物產(chǎn)物的分子量。合適地，聚合反應(yīng)在無氧條件下發(fā)生，例如在氮?dú)夥障?。合適地，聚合反應(yīng)在0。C到100。C下進(jìn)行，例如在室溫下或在60°C下進(jìn)行。其它的可能性為縮合聚合(例如離子縮合聚合)、開環(huán)聚合和原子轉(zhuǎn)移自由基聚合(ATRP)。本領(lǐng)域技術(shù)人類員應(yīng)當(dāng)理解單體單元的性質(zhì)將取決于希望的聚合方法(例如對于縮合聚合反應(yīng)，含雙鍵的單體單元不是必需的)。當(dāng)不使用單個(gè)單體單元時(shí)，第一單體單元可以以20-70mol。/o(或20~70wt。/。)的量、例如以30~50mol。/o(或30~50wt。/o)的量存在于反應(yīng)混合物中。但是，優(yōu)選地，第一單體單元以7090mol。/o的量、更優(yōu)選以7585mol%的量、例如以80mol%的量存在存在于反應(yīng)混合物中。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)使用這些量的第一單體單元可以改善聚合物溶液的穩(wěn)定性。本發(fā)明人遇到的穩(wěn)定性問題與溶解度相關(guān)，由聚合物沉淀的趨勢和干燥后不溶的趨勢可見。第二單體單元優(yōu)選以5~15mol%(或5~15wt%)的量存在于反應(yīng)混合物中。當(dāng)使用第三單體單元時(shí)，它們優(yōu)選以補(bǔ)足平衡的量存在于反應(yīng)混合物中，例如為0~80mol%(或0~80wt%)。應(yīng)理解聚合物的組成不能準(zhǔn)確地反映存在于反應(yīng)混合物中的單體單元的量。這是由于其它因素(例如位阻和溶解度)的影響。合適地，聚合物糖類含量為10~20wt%。但是，優(yōu)選地，聚合物糖類含量為40~50wt%。(這些范圍尤其適合于甘露糖，更高的糖類含量可能適合于葡萄糖)。對于某些糖類(包括甘露糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、巖藻糖和半乳糖醛酸)，可以如實(shí)施例A7所述的測定聚合物糖類含量，而其它的(包括N-乙?；咸前泛蚇-乙酰基神經(jīng)氨酸)則不行。還應(yīng)當(dāng)注意糖類類似物可以由一起作為糖類類似物的兩種或更多種分離的實(shí)體組成。特別地，糖類類似物可以由具有至少兩個(gè)糖類類似物部分的第一實(shí)體和為糖類結(jié)合分子例如凝集素的第二實(shí)體組成。例如，可以將受體標(biāo)記的MBL和供體標(biāo)記的MBL與作為模板的未標(biāo)記的合成聚合物一起使用，以使供體標(biāo)記的MBL和受體標(biāo)記的MBL彼此接近，使得發(fā)生FRET。(使用ConA的例子由Gestwicki等人在(2002)ChemistryandBiology9，163頁中給出)。(同樣地，受體標(biāo)記的聚合物和供體標(biāo)記的聚合物可以與未標(biāo)記的糖類結(jié)合分子一起使用)。優(yōu)選地，糖類類似物包含一種或更多種能量受體部分(例如HMCV-1或AlexaFluor594，如下所述)。但是，它也可以包含一種或更多種能量供體部分。如以上關(guān)于糖類或糖類模擬部分所述的，可以將基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分連接到糖類類似物上。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，合適地連接到基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分的活化羧酸衍生物(例如活化酯，例如琥珀酰亞胺酯)與合適地連接至單體單元或聚合物的親核基團(tuán)(例如胺)反應(yīng)。這樣的反應(yīng)可以在極性非質(zhì)子溶劑(例如DMSO)中進(jìn)行。合適地，反應(yīng)溫度為0。C到100°C,例如為室溫。連接基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分的替代方法是在疊氮基團(tuán)和炔基之間4吏用Huisgen1，3偶極環(huán)加成(如B.Sharpless所開發(fā)的)。糖類類似物應(yīng)該具有足夠高的分子量以防止從傳感器中漏出，但應(yīng)該足夠低以便當(dāng)糖類類似物綴合到糖類綴合分子時(shí)不發(fā)生沉淀。優(yōu)選平均分子量為25~250kDa的糖類類似物，更優(yōu)選100~250kDa，例如優(yōu)選150kDa。任選地，糖類類似物和糖類結(jié)合分子綴合在一起。糖類結(jié)合分子優(yōu)選地，糖類結(jié)合分子在檢測物中在至少10天內(nèi)提供穩(wěn)定的信號(hào)，更優(yōu)選至少14天。尤其優(yōu)選當(dāng)傳感器植入人體時(shí)提供穩(wěn)定的信號(hào)。優(yōu)選地，糖類結(jié)合分子是凝集素，更優(yōu)選是動(dòng)物凝集素。但是，也可以是其它類型的糖類結(jié)合分子例如抗體或植物凝集素例如伴刀豆球蛋白A。優(yōu)選地，凝集素為C-型(鈣依賴型)凝集素。優(yōu)選地，動(dòng)物凝集素為脊推動(dòng)物凝集素，例如哺乳動(dòng)物凝集素，更優(yōu)選人類或人源化凝集素。但是，作為可替代方案，它可以是鳥凝集素、魚凝集素或無脊推動(dòng)物凝集素例如昆蟲凝集素。合適地，凝集素為源于人體的人類凝集素。作為可替代方案，凝集素可以是重組制造的凝集素。作為另外的替代方案，凝集素可以是人源化的動(dòng)物凝集素，例如人源化的牛凝集素。這適用于存在相應(yīng)的人類凝集素的情況下?？梢砸灶愃瓶贵w的方式人源化凝集素。合適地，凝集素為多聚體形式。多聚體凝集素可以源于人體或動(dòng)物體。作為替代方案，凝集素可以為單體形式?？梢酝ㄟ^重組法或通過破壞源于人體或動(dòng)物體的天然多聚體凝集素中子單元之間的結(jié)合來形成單體凝集素。在US6232130中描述了該實(shí)例。優(yōu)選地，凝集素具有三個(gè)或更多個(gè)CRDs。更優(yōu)選地，凝集素具有6個(gè)或更多個(gè)CRDs。優(yōu)選地，凝集素為膠原凝素(膠原狀的凝集素)。這些是具有膠原狀序列(Gly-Xaa-Yaa三聯(lián)體(triplet))的C型動(dòng)物凝集素。MBL是C型膠原凝素，而伴刀豆球蛋白A是C型凝集素。通過膠原酶的作用可以制備單體膠原凝素CRDs。優(yōu)選地，凝集素為甘露糖綴合凝集素、膠固素或膠原凝素-43(例如牛CL-43)(全血清膠原凝素)或肺表面活性劑蛋白質(zhì)(肺膠原凝素)。合適地，凝集素基本上是三聚體和/或四聚體形式的MBL。作為替代方案，凝集素可以是選自SP-A和SP-D的肺表面活性劑蛋白質(zhì)。這些蛋白質(zhì)與MBL相似。其它合適的動(dòng)物凝集素為如下列出的那些PC-凝集素(US20030216300、US20040265898)CTL畫1(US179528/10)角質(zhì)形成細(xì)胞膜(Keratinocytemembrane)凝集素(ParfuemerieundKosmetik74，164-80)CD94(EurJImmunol25，2433-7)P35(又名人類L-纖維膠凝蛋白，一組凝集素)(ImmimolLett67，109-12)ERGIC-53(又名MR60)(Mo1BiolCell,7，483-93)HlP/PAP(EurJBiochem267，1665-71)CLECSF8(EurJImmunol34，210-20)DCL(凝集素組)(申請?zhí)?0231996/US)GLUT家族蛋白，尤其是GLUT1、GLUT4和GLUT11(PNAS97，1125-30)其它合適的動(dòng)物凝集素列于"HandbookofAnimalLectins:PropertiesandBiomedicalApplications",DavidC.Kilpatrick,Wiley2000的附錄A、B和C中。優(yōu)選地，用能量供體部分標(biāo)記糖類結(jié)合分子。檢測合適的檢測技術(shù)包括FRET、熒光能量轉(zhuǎn)移、熒光偏振、熒光幹滅、磷光、發(fā)光增強(qiáng)、發(fā)光猝滅、衍射或等離激元共振。產(chǎn)生光學(xué)信號(hào)的綴合檢測物應(yīng)該優(yōu)選為可逆的，以便可以實(shí)現(xiàn)分析物波動(dòng)水平的連續(xù)監(jiān)測。該可逆性是采用綴合檢測物形式的特殊優(yōu)點(diǎn)，其中不消耗檢測物組分。使用基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分對來產(chǎn)生可檢測的或可測量的光學(xué)信號(hào)。當(dāng)使該對的第一成員與該對的第二成員緊緊地接近時(shí)，產(chǎn)生或調(diào)制信號(hào)。優(yōu)選地，基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分對為能量供體部分和能量受體部分對。能量供體部分和能量受體部分也分別指供體和受體發(fā)色團(tuán)。不發(fā)射熒光的能量受體是指猝滅部分。在這種情況下，用能量供體和能量受體部分對之一來標(biāo)記糖類結(jié)合分子，用能量供體和能量受體部分對的另一個(gè)來標(biāo)記糖類類似物。本發(fā)明傳感器的最優(yōu)選實(shí)施方案引入使用上述FRET技術(shù)產(chǎn)生光讀出的檢測物。當(dāng)檢測物待用于體內(nèi)時(shí)，希望供體在550約700nm處發(fā)熒光，受體在約650nm處吸收光。這避免了供體熒光和體內(nèi)較短波長自身熒光之間的重疊。AlexaFluor594TM(例如為琥珀酰亞胺酯)是用于體內(nèi)的具有合適發(fā)射光i普的能量供體部分。該染料在594nm處吸收，并在620nm處發(fā)熒光。在WO05/05卯37中描述的HMCV染料是用于本發(fā)明的合適的能量受體部分。這些染料是穩(wěn)定的碳正離子。一個(gè)例子是六甲氧基-結(jié)晶紫琥珀酰亞胺酯(HMCV-1)。作為替代方案，可以將QSY21tm用作能量受體部分，將AlexaFluor594tm用作能量供體部分?？梢赃M(jìn)行熒光壽命或熒光強(qiáng)度的測量?？梢酝ㄟ^相位調(diào)制技術(shù)測量熒光壽命(下文討論)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，用作為能量供體部分的AlexaFluor594來標(biāo)記糖類結(jié)合分子，用作為能量受體部分的HMCV-1來標(biāo)記糖類類似物，并且通過相位調(diào)制技術(shù)測量熒光壽命。保持檢測物組分的物質(zhì)優(yōu)選為能量供體和能量受體部分提供足夠的空間，以當(dāng)彼此不結(jié)合時(shí)分開以便可以終止能量轉(zhuǎn)移。傳感器構(gòu)造優(yōu)選地，糖類結(jié)合分子與聚合物的比為115(pM糖類結(jié)合分子)/(mg/ml聚合物)，尤其優(yōu)選10(nM糖類結(jié)合分子)/(mg/ml聚合物)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)將MBL用作糖類結(jié)合分子時(shí)，檢測物靈敏度隨該最大為100aMMBL)/(mg/ml聚合物)的比而增加。同樣，采用高的糖類結(jié)合分子與聚合物的比使得較大數(shù)量的信號(hào)調(diào)制部分包含在聚合物中(由此增加相位移，從而提高檢測物靈敏度)，而不損害檢測物的總強(qiáng)度。優(yōu)選地，通過具有允許分析物擴(kuò)散但不允許檢測物組分?jǐn)U散的孔徑的材料保留檢測物組分。但是，這種選擇性可以通過其它方式實(shí)現(xiàn)，例如通過使用允許不帶電荷的物質(zhì)擴(kuò)散的材料。優(yōu)選地，通過殼或基質(zhì)材料保留檢測物組分?？梢詫⑻穷愵愃莆锖?或糖類結(jié)合分子接枝到該材料上。更優(yōu)選地，如在WO00/02048中所述的，該材料為可生物降解的。任選地，如在WO03/006992中所迷的，傳感器可以包含通過可生物降解材料的殼保留的微粒。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，通過可生物降解材料的殼包嚢檢測物組分來保留檢測物組分，同時(shí)使分析物與檢測物組分接觸，并且可生物降解材料包括具有疏水和親水單元的共聚物，如WO2005/110207所述的。一個(gè)或更多個(gè)檢測物組分室可以存在于殼內(nèi)。優(yōu)選地，共聚物是無規(guī)共聚物。優(yōu)選地，共聚物具有至少5.0xl0^cmVs的滲透率。術(shù)語"滲透率"用來指可以在實(shí)驗(yàn)上測量的分析物(葡萄糖)穿過水合共聚物的整體滲透率。優(yōu)選地，當(dāng)植入體內(nèi)時(shí)，共聚物就在一周到一年的時(shí)間降解，例如30天。對于厚度為5fim的普通聚合物來il,這相當(dāng)于0.17jim/天的降解速率。優(yōu)選地，對于葡萄糖的可動(dòng)性，可生物降解材料具有不大于25000Da的分子量截留限。更優(yōu)選地，可生物降解材料具有不大于10000Da的分子量截留限。優(yōu)選地，疏水單元的重量份數(shù)占共聚物的10~90%，更優(yōu)選占共聚物的10~50%。優(yōu)選地，每個(gè)親水單元的分子量為200~10000Da，更優(yōu)選400~4000Da。優(yōu)選地，共聚物的每個(gè)親水單元包含聚乙二醇和二元酸的酯。作為聚乙二醇的替代方案，可以使用混合的乙二醇和丙二醇的聚合物，和/或可以用疏水和/或親水基團(tuán)取代的聚醚主鏈。作為聚乙二醇的其它替代方案，可以使用聚四氫呋喃(聚-THF)。優(yōu)選地，親水單元包含對苯二甲酸和/或丁二酸作為二元酸。其它合適的二元酸為草酸、酒石酸、鄰苯二甲酸、天冬氨酸、丙二酸和寡聚或聚合的二元酸，例如聚(二聚酸-癸二酸)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，二酸僅為對苯二甲酸。在替代的優(yōu)選實(shí)施方案中，對苯二甲酸與丁二酸的摩爾比為1:2~2:1，合適地為1:1。作為可替代方案，共聚物的親水單元可以包含寡聚物。合適的寡聚物為甲基丙烯酸羥乙酯(HEMA)、乙烯吡咯烷酮、乙烯醇、糖類、環(huán)氧乙烷和/或2-丙烯酰胺基-2-甲基丙磺酸的寡聚物。當(dāng)親水單元包含HEMA時(shí)，在聚合物中提供可生物降解的連接(例如酯連接，例如對苯二甲酸酯連接)以增加可生物降解性。優(yōu)選地，每個(gè)疏水單元的分子量為400~5000Da。優(yōu)選地，共聚物的疏水單元包含丁-l,4-二醇和二元酸的酯。作為丁-l，4-二醇的替代方案，可以使用戊-l，5-二醇或己-l，6-二醇。優(yōu)選地，疏水單元包含對苯二甲酸和/或丁二酸作為二元酸。在優(yōu)選實(shí)施方案中，對苯二甲酸與丁二酸的摩爾比為1:22:1，合適地為1:1。作為替代方案，疏水單元僅包含對苯二甲酸作為二元酸。其它合適的二元酸如上所述。作為替代方案，共聚物的疏水單元可以包含曱基丙烯酸甲酯(MMA)的寡聚物、聚氨酯和/或聚酰胺(例如尼龍-6、寡聚-N-叔丁基丙烯酰胺或寡聚-N-異丙基丙烯酰胺)。當(dāng)疏水單元包含MMA時(shí)，在聚合物中提供可生物降解的連接(例如酯連接，例如對苯二甲酸酯連接)以增加可生物降解性。優(yōu)選的聚合物具有通式aPEG(T/S)bPB(T/S)c,其中"a，，表示PEG鏈的分子量，"b，，表示PEG(T/S)(聚對苯二曱酸乙二醇酯/聚丁二酸乙二醇酯)在所得聚合物中的重量份數(shù)，"c"表示PB(T/S)(聚對苯二甲酸丁二酯/聚丁二酸丁二酯)在所得聚合物中的重量份數(shù)。這種聚合物的實(shí)例為600PEGT80PBT20、1000PEGT80PBT20、2000PEGT80PBT20、4000PEGT80PBT20、1000PEGT50PBT50和1000PEG(T/S)60PB(T/S)40(T/S50%)。聚合物是可生物降解的、具有高的葡萄糖滲透率，并具有約25000Da的分子量截留性能。在US6383220和EP1247522中公開了這些聚合物中的一些。共聚物的包膜優(yōu)選具有1~50jim的厚度。在第三方面，本發(fā)明涉及制備本文描述的傳感器的方法。制備聚合物微嚢的化學(xué)方法包括相分離(凝聚)、溶劑蒸發(fā)和/或萃取。制備聚合物微嚢合適的物理方法包括噴霧千燥、噴涂、噴霧驟冷、轉(zhuǎn)盤霧化、流化床涂覆、共擠出(例如固定噴嘴共擠出、離心頭共擠出、或浸入式噴嘴共擠出)和平盤涂覆(pancoating)。傳感器的使用在第四方面，本發(fā)明涉及一種使用本文描述的傳感器檢測糖類分析物的方法，該方法包括將傳感器植入哺乳動(dòng)物皮膚中、使用外部光學(xué)裝置檢測或測量糖類分析物。在第五方面，本發(fā)明涉及一種使用上述要求保護(hù)的傳感器檢測糖類分析物的方法，該方法包括通過使用外部光學(xué)裝置照射存在于哺乳動(dòng)物皮膚中或皮膚下的所述傳感器來檢測或測量糖類分析物。優(yōu)選地，本方法還包括可生物降解材料在傳感器中的降解?？梢酝ㄟ^注射將傳感器引入皮膚內(nèi)，優(yōu)選使用注射器，或者通過其它方法，特別是通過WO00/02048中描述的任何方法。傳感器優(yōu)選具有適于通過窄規(guī)格針注射的尺寸，以最小化患者的不適。傳感器優(yōu)選具有20nmlmm的最大尺寸。但是，可以使用具有更大尺寸的桿形傳感器?？梢詫鞲衅饕氲秸嫫ず穸葍?nèi)、或真皮下，或者可以引入到表皮，雖然在后者情況下，其可能在可生物降解材料降解之前由于表皮的生長而可能被排出皮膚。由于傳感器位于皮膚內(nèi)，優(yōu)選透皮(即，通過皮膚的較上層)檢測傳感器內(nèi)產(chǎn)生的光學(xué)信號(hào)，由此避免可能導(dǎo)致感染的傳感器和外部環(huán)境之間的任何直接接觸的需要。但是，作為替代方案，可以通過中空的或透明的裝置(例如針或光學(xué)纖維)進(jìn)行檢測，其使傳感器被外部光學(xué)裝置照射而不使光穿過皮膚。一旦傳感器置于皮膚內(nèi)的位置，則可以進(jìn)行所需次數(shù)的分析物測量而沒有副作用。這對于糖尿病患者的長期護(hù)理是特別有利的，這是因?yàn)槿绻咸烟菧y量越頻繁，就可以越嚴(yán)密地保持血液中葡萄糖水平的控制，并且將降低與血糖調(diào)節(jié)不良相關(guān)病癥的發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn)，例如視網(wǎng)膜病、腎病、神經(jīng)病、普通的微血管損壞和大血管損壞以及循環(huán)不良。由于本發(fā)明的傳感器本身不包含詢問檢測物讀出所需的任何光學(xué)元件(這些優(yōu)選單獨(dú)提供并位于體外)，所以傳感器可以很容易地以具有對患者最小不適感的可注射的形式提供?？梢酝ㄟ^供給波長在能量供體部分的吸收光諉內(nèi)的入射輻射、并測量發(fā)射的熒光強(qiáng)度或激發(fā)態(tài)的壽命，來詢問引入使用FRET技術(shù)的檢測物的傳感器。通常已知的方法為1.穩(wěn)態(tài)測量2.時(shí)域壽命測量a.單光子計(jì)數(shù)b.超高速掃描照相機(jī)c.門控檢測(Gateddetection)(脈沖取樣)d.上轉(zhuǎn)換3.頻域壽命測量a.相調(diào)制熒光測定法(外差檢測)b.相敏檢測(零差檢測)在Lakowicz，J.R."PrinciplesofFluorescenceSpectroscopy,SecondEdition",1999中可以發(fā)現(xiàn)原理的進(jìn)一步的描述。詢問檢測物的優(yōu)選方法為相調(diào)制熒光測定法。詢問檢測物的合適的光學(xué)裝置(圖l)包括發(fā)光二級(jí)管(LED)ll，其在能量供體部分的發(fā)射光鐠內(nèi)發(fā)射光。通過激勵(lì)電路13操作LED，所述激勵(lì)電路在導(dǎo)致充分相位移的頻率下調(diào)制LED,優(yōu)選相位移在45°范圍內(nèi)。對于具有3ns壽命的熒光團(tuán)，優(yōu)選的頻率為50MHz。LED發(fā)射的光通過激發(fā)濾光片15過濾，并通過二向色分光鏡17導(dǎo)向到傳感器16，并通過透鏡19聚焦在注射的傳感器16的傳感器/皮膚上。通過透鏡19聚集傳感器發(fā)射的熒光。光經(jīng)過二向色分光鏡并通過發(fā)射濾光片21過濾。濾過的光通過透鏡23聚焦在檢測器25上，在這種情況下為雪崩光電二極管(APD)。APD通過APD偏壓電源27反向偏壓，所述偏壓電源通過信號(hào)處理和控制單元29控制。來自APD的信號(hào)通過跨阻放大器31放大，通過帶通濾光片33過濾，并通過第一模擬-數(shù)字轉(zhuǎn)換器(ADC)35釆樣。相應(yīng)地，LED的調(diào)制驅(qū)動(dòng)信號(hào)通過第二ADC37釆樣。在第一ADC35上采集的信號(hào)為Ai為從檢測物檢測的信號(hào)的振幅，f為調(diào)制頻率，帕為由供體熒光團(tuán)引起的相位滯后，化為由電子和光學(xué)裝置引起的固定相位滯后。在第二ADC37上采集的信號(hào)為A2為LED的調(diào)制驅(qū)動(dòng)信號(hào)的振幅，且92為由電子裝置引起的固定相位滯后。通過比較兩個(gè)采集的信號(hào)并補(bǔ)償通過電子和光學(xué)引入的固定的且已知的相位滯后，信號(hào)處理和控制單元導(dǎo)出由能量供體部分引起的相位滯后中fl。通過使熒光計(jì)接近皮膚并與傳感器對準(zhǔn)進(jìn)行測量。通過使用相位-分析物-校準(zhǔn)功能，將相位滯后轉(zhuǎn)換為分析物濃度，例如分才斤物濃度=A+Bx/(k+x),其中A是不存在分析物時(shí)的相位，B是最大響應(yīng)時(shí)的相位，x是所測量的相位，并且k是受體和分析物類似物之間的解離常數(shù)。27可替代的測量技術(shù)為測量熒光強(qiáng)度。在這種情況下，光學(xué)裝置應(yīng)該提供波長在能量供體部分的吸收光語內(nèi)的第一束入射輻射，和優(yōu)選提供波長在能量受體部分的吸收光鐠內(nèi)的第二束入射輻射(這適用于能量受體部分也是熒光團(tuán)的情況)。此外，光學(xué)裝置應(yīng)該優(yōu)選能夠在兩個(gè)不同的波長處測量在傳感器中產(chǎn)生的光信號(hào)；波長1在能量供體部分的發(fā)射光譜內(nèi)(與分析物的測量相關(guān)的產(chǎn)生的信號(hào))，并且波長2在能量受體部分的發(fā)射光譜內(nèi)(其可能是分析物信號(hào)或內(nèi)參比或校準(zhǔn)信號(hào))。熒光計(jì)分別測量下列參數(shù)在波長1處(能量供體部分)激發(fā)光強(qiáng)度，1(1,0)環(huán)境光強(qiáng)度，1(1，1)熒光和環(huán)境光結(jié)合的強(qiáng)度，1(1，2)在波長2處(能量受體部分)激發(fā)光強(qiáng)度，1(2，0)環(huán)境光強(qiáng)度，1(2，1)熒光和環(huán)境光結(jié)合的強(qiáng)度，1(2,2)再次，通過使熒光計(jì)接近皮膚并與傳感器對準(zhǔn)進(jìn)行測量。當(dāng)對在傳感器中產(chǎn)生的熒光信號(hào)進(jìn)行透皮測量時(shí)，必須考慮皮膚對信號(hào)的吸收。通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在400nm~卯Onm范圍內(nèi)人類皮膚的吸收率最小。提供的最終輸出為來自兩個(gè)熒光團(tuán)的熒光強(qiáng)度之間的歸一化的比，由下列關(guān)系式定義(方程1):最終輸出=(1(1,2)國1(1,1))*1(2，0)/(1(2,2)國1(2，1))*1(1，0)(1)優(yōu)選通過使用校準(zhǔn)數(shù)據(jù)的計(jì)算機(jī)將如上述方程1給出的來自光學(xué)裝置(例如熒光計(jì))的最終輸出轉(zhuǎn)換為分析物濃度，所述校準(zhǔn)數(shù)據(jù)可以基于在WO00/02048中所述的原理得到。本發(fā)明的其它方面在第六方面，本發(fā)明涉及一種上述聚合物?？梢詫㈥P(guān)于本發(fā)明的任何方面描述的特征應(yīng)用于本發(fā)明的其它方面。將參照實(shí)施例和附圖進(jìn)一步描述本發(fā)明，其中圖l顯示詢問檢測物的合適的光學(xué)裝置。圖2顯示在實(shí)施例A5中得到的尺寸排阻色譜結(jié)果。圖3顯示在實(shí)施例A8中得到的ELLA檢測結(jié)果。圖4顯示在實(shí)施例A9中得到的FRET檢測結(jié)果。圖4a顯示在實(shí)施例A9a中得到的FRET檢測結(jié)果。圖5顯示在實(shí)施例C3中得到的ELLA檢測結(jié)果。圖6顯示實(shí)施例C4的反應(yīng)物。圖7顯示實(shí)施例C4的聚合物產(chǎn)物的實(shí)例。圖8顯示在實(shí)施例C5中得到的ELLA檢測結(jié)果。具體實(shí)施方式實(shí)施例概要使用下列原料高硪酸鈉、生物素-N-羥基琥珀酰亞胺、o-亞苯基二鹽酸鹽、芐胺、氨、"^^硼氬化鈉(Sigma-Aldrich)。NuncF96MaxiSorp板(Nunc,Denmark)。PD-10柱(column)，鏈霉親和素-HRP(AmershamBioscience)。葡聚糖(Pharmacosmos，Denmark)。甘露聚糖綴合凝集素(可由幾種來源得到，例如StatensSerumInstitute,Copenhagen,Denmark)。伴刀豆球蛋白A過氧化物酶綴合物(Sigma-Aldrich，L6397)。透析管Spectra/Por(SpectrumLaboratories,Inc.,California,USA)。Float-A-LyzerTM25.000MWCO再生纖維素透析管來自SpectrumLaboratoriesEurope(Breda,TheNetherlands)。單油酸脫水山梨糖醇酯(Span⑧80)、偶氮二異丁腈(AIBN)和丙烯酸2-羥基乙酯來自Sigma-Aldrich。N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺鹽酸鹽來自PolySciencesEurope(Eppelheim，Germany)。2,2'國偶氮二[2-(2-咪唑淋畫2-基)丙烷二鹽酸鹽(VA-044)來自WakoGmbH(Neuss,Germany).蟑丙基a-D-吡喃葡萄糖苦和烯丙基2-乙酰胺基-2-脫氧-a-D-吡喃葡萄糖普來自GlyconBiochemicals，Germany.烯丙基a-D-吡喃半乳糖香來自Sigma-Aldrich。烯丙基a-D-吡喃甘露糖苷通過實(shí)施例CI的方法在室內(nèi)制備。PBS為20mM的轔酸鹽、150mM的NaCl，pH為7.4，且TBS為20mM的TRIS、150mM的NaCl、1.25mM的CaCl2，除非另作i兌明pH為7.4?？s寫MBL，甘露聚糖綴合凝集素；PBS，磷酸鹽緩沖鹽水；TBS，TRIS緩沖鹽水；ELLA，酶聯(lián)凝集素檢測物。實(shí)施例Al:MBL的染色將人類MBL緩沖變?yōu)?通過透析)含有150mM的NaCl和1.25mM的Ca2+、pH為8.7的lOmM的NaHC03緩沖液。用于染色的染料為AlexaFluor594琥珀酰亞胺酯(AF594-SE)(MolecularProbes,Eugene,Oregon,USA)。將染料溶于干燥的DMSO中，并緩慢地(10分鐘)加到在碳酸氫鹽緩沖液中的MBL中。使反應(yīng)進(jìn)行l(wèi)h。用15倍摩爾過量(相對于多肽單元)的染料進(jìn)行染色。通過用pH為7.4、150mMNaCl和L25mMCa2+的10mMTris緩沖液透析進(jìn)行純化。通過UV光譜測定得到的基于摩爾的染色蛋白質(zhì)的標(biāo)記度為每MBL子單元2.3個(gè)染料(用28kDa作為MBL子單元的分子量進(jìn)行計(jì)算)。實(shí)施例A2:葡聚糖的制備將150kDa葡聚糖(6.00g，0.4jimol)溶于pH為11.5的250mM的K2HPO4(600mL)中。加入硼氫化鈉(3g，0.08mol)，隨后加入二乙烯基砜(15ml,0.15mol)。在用濃鹽酸中和到pH為7.2之前，在RT下攪拌反應(yīng)混合物30分鐘。攪拌30分鐘后，在水(3x25L)中透析(MWCO10-12kDa)所得的混合物。將內(nèi)含物轉(zhuǎn)移到Erlenmeyer燒瓶中，并加入24%氨水(200mL)。2h后，將pH調(diào)到10.5，并攪拌反應(yīng)過夜。通it^水(8x25L)中透析(MWCO10-12k)除去過量的氨，并且凍千全部內(nèi)含物以得到為白色絨毛狀物質(zhì)的氨基葡聚糖5.75g(78%，基于185kDaMW的氨基葡聚糖)。使用元素分析法進(jìn)行分子量、胺引入、和引入的二乙烯l^l的量的粗略估計(jì)。(發(fā)現(xiàn)C39.86;H6.26;N0.16;S3.08%葡聚糖150k，~22DVS-NH2，~160DVS-OH,和~7201120,理論C39.55;H6.60;N0.16;S3.07%)。實(shí)施例A3:六甲氧基-結(jié)晶紫琥珀酰亞胺酯(HMCV-l)的制備HMCV-1的合成摩爾質(zhì)對BF":7"摩爾質(zhì)重CH:757合成路線l.I)4-(N-甲基JliO-丁酸鹽酸鹽(1當(dāng)量)、二異丙基乙胺，在乙腈中，20°C，20h。II)二甲胺(過量)。III)TSTU、二異丙基乙胺，在乙腈中，20。C,2h。4a(BF4-):將4-(曱基氨基)丁酸鹽酸鹽(1.36g;8.8mmol)、1(5.0g;8.3mmo1)、和二異丙基乙胺(5mL)溶于乙腈(120mL)中。在干燥的氮?dú)夥障?、?035。C下攪拌反應(yīng)混合物22h。加入二甲胺水溶液(40mL的40%溶液)，并再攪拌反應(yīng)混合物四天。在真空下除去溶劑和過量的二曱胺，并將剩下的物質(zhì)溶于氯仿。用鹽水清洗氯仿溶液兩次并用MgS04干燥，然后蒸發(fā)溶劑并從CH2Cl2/乙醚中再沉淀產(chǎn)物。產(chǎn)量4.4g(70%)深藍(lán)色粉末。MS(FAB+):m/z624(M+)工H國NMR(400MHz，DMSO-d6):68.34(1H，bs),6.03(2H,s)，5.83(4H，s)，3.49(2H，m),3.46(6H，s)，3.44(12H，s)，3.12(3H，s(掩蔽的))，3.08(12H，s)，1.94(2H，t)，1.70(2H，m)。HMCV-1(C1):將TSTU(2-琥珀酰亞胺基-l，l，3,3-四甲基脲四氟硼酸鹽；0.8g，2.6mmol)加到4a(0.9g，1.26mmol)和二異丙基乙胺(0.55g，4.5mmo1)在乙腈(15mL)中的溶液中。在將反應(yīng)混合物傾入用HCl-水溶液(4mL，2M)酸化的冰冷卻的接近飽和的NaCI溶液(約150mL)中之前，在密封的燒瓶中攪拌2h。用氯仿(2xl50mL)萃取水相。用鹽水(2x50mL)清洗合并的氯仿相，并用MgS04干燥。蒸發(fā)溶劑并從CH2CV乙醚中再沉淀，得到深藍(lán)色粉末(0.80g,84%)。MS(FAB+):m/z721(M+)iH-匪RiH國匪Rbr.(400MHz，DMSO-d6):85.88(2H，s)，5.85(4H，s)，3.60(2H，s)，3.46(12H，s)，3.45(6H，s)，3.15(12H，s)，3.12(3H，s)，2.85(4H,s),2.80(2H，t),1.95(2H，m)。實(shí)施例A4:40mol。/n甘露糖聚合物的合成如下制備40molV。甘露糖聚合物。將烯丙基a-D-吡喃甘露糖苷(1.77g，8.0mmo1)、丙烯酸國2-羥乙酯(1.36g，U.7mmo1)、N畫(3畫氨基丙基)曱基丙烯酰胺鹽酸鹽(89.6mg，0.5mmol)和2，2，-偶氮二-[2-(2-咪唑#"2-基)丙烷l二鹽酸鹽(23.7mg,0.073mmol)加入50ml圓底燒瓶中，然后加入水(28.8ml)。在室溫下在磁力攪拌下溶解混合物。用氮?dú)獯祾?分鐘后，將混合物加熱到60。C并在該溫度下聚合12小時(shí)。冷卻后得到淺黃色粘稠溶液。用水透析(25kMWCO再生纖維素)該溶液過夜，冷凍干燥得到毛絨狀的白色聚合物。在該聚合物干燥并暴露于空氣后，它僅部分可溶于水。實(shí)施例A4a:80mol。/o甘露糖聚合物的合成除了烯丙基a-D-吡喃甘露糖苷的量為3.548(1611111101)并且丙烯酸-2-羥乙酯的量為0.68g(5.85mmol)之外，如實(shí)施例A4所述的，制備80mol%甘露糖聚合物。該聚合物比在實(shí)施例A4中制備的聚合物更可溶。并且，在該聚合物干燥并暴露于空氣后，它仍可溶于水。實(shí)施例A5:用HMCV-1標(biāo)記實(shí)施例A4的40mol。/o甘露糖聚合物將實(shí)施例A4的聚合物(20mg)溶于10mM的碳酸鹽緩沖液(500pl，pH8.6),并加入如在實(shí)施例A3中制備的六甲氧基結(jié)晶紫琥珀酰亞胺酯(HMCV-1，6.1mg)在DMSO(200nl)中的溶液。在室溫下溫和攪拌混合物3小時(shí)，然后用pH為7.4的lOmM的TBS緩沖液透4斤(10kMWCO再生纖維素)，以除去未反應(yīng)的染料。得到基于重量的標(biāo)記度("DOL，，)值為0.085。利用下面的方程式確定"DOL"值"DOL"=[HMCV-ll(mg/ml)/[聚合物(mg/ml)其中，通過分光光度法測定HMCV-1的含量(mg/ml)=[A(632nm)/(s(HMCV-l,632nm)*1)]*M(HMCV-1)S'(HMCV-l,632nm)=42000M^cm—1;M(HMCV-1)=660.2g/mo1實(shí)施例A5a:用HMCV-1標(biāo)記實(shí)施例A4a的80moP/o甘露糖聚合物對實(shí)施例A4a的80mol。/。甘露糖聚合物進(jìn)行實(shí)施例A5的標(biāo)記方法。實(shí)施例A6:對實(shí)施例A4的40mol。/。甘露糖聚合物的尺寸排阻檢測采用尺寸排阻色諳法測定實(shí)施例A4的聚合物的分子量。在Agilent1100HPLC系統(tǒng)上操作TSKgelG4000PWXL柱(7.8mm內(nèi)徑x30.0cm長，TosohBiosciencesGmbH)。采用流動(dòng)相(0.1%乙酸，50mMNaCl,pH3.4)的等度洗脫(1.0ml/分鐘，25分鐘)。分子量基于HMCV綴合的氨基葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)物，使用下面的關(guān)系式Mw=10A(6.7336-0.5755*RT)。結(jié)果如圖2所示。實(shí)施例A7:實(shí)施例A4的聚合物的甘露糖含量測定該測試基于下述方法甘露糖(在80%石克酸中)脫水為相應(yīng)的5-羥甲基糠醛(5-HMF)，5-羥甲基糠醛隨后在加熱下與5%苯酴溶液反應(yīng)得到色原。由于該反應(yīng)是定量的，所以可以通過分光光度法測定甘露糖的初始濃度。使用96孔微孔板允許樣品的高生產(chǎn)能力。所用的方法由Masuko等人(2005)Anal.Biochem.，339，69-72的方法變化得到。將150pl濃硫酸快速加到在96孔微孔板的孔中的50jnl樣品中，以產(chǎn)生最大混合，隨后立即加入30^1在水中的5%苯酚。通過小心地4吏微孔板漂浮在水浴中在卯。C下培養(yǎng)15分鐘后，在另一個(gè)水浴中冷卻板5分鐘并擦干，以使用微孔板讀數(shù)儀測量Abs(490nm)。樣品由用來產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)曲線的在水中的12種不同濃度(0.003、0.02、0,03、0.05、0.15、0.2、0.3、0.5、1,0、1.5、2.0、3.0mM)的甘露醇(50pl/孔)，和三種不同濃度(0.5、1.0、2.0mg/ml)的實(shí)施例A4聚合物(50[il/孑L)組成。用三份樣品進(jìn)行所有的測量。結(jié)果如表l所示。表iY，H24040SPHEA40%甘露糖標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0，7752x+0,025(R2=0,9988)聚合物(mg/ml)吸光度(490)甘露糖(mM)lmg/ml中的甘露糖(DlM)重量％平均重量％2.01,5331鄰0,9721%1,00,5590,690,6915%17%0,50,2690,320，6314%實(shí)施例A7a:實(shí)施例A4a的聚合物的甘露糖含量測定采用在實(shí)施例A7中描述的方法分析實(shí)施例A4a的聚合物。結(jié)果如表la所示。表la<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>實(shí)施例A8:實(shí)施例A4的40moP/。甘露糖聚合物的ELLA檢測如下制備生物素化的MBL。將生物素-NHS(20ji1,在DMSO中7mg/ml，每MBL單體約10~15當(dāng)量)加到MBL(3ml，0.53mg)在PBS(3mL)中的溶液中。溫和地?cái)嚢枞芤?h，并且然后轉(zhuǎn)移到透析管(MWCO10-12k)中，并用TBS(2xlL)透析24h。未進(jìn)一步純4匕地《吏用所得的在TBS中的生物素化的MBL(0.2mg/ml)。如下制備標(biāo)準(zhǔn)ConAELLA檢測物，以確保用于下述MBLELLA檢測物的涂覆濃度足以充滿微孔板。用在ELLA檢測物中的PBS緩沖液為10mM的磷酸鹽、150mM的NaCl、O.lmM的CaCl2、O.lmM的MnCl"pH為7.4。用每個(gè)都具有在PBS中的抗原(來自實(shí)施例A4的聚合物和氛基葡聚糖)(100jd，100嗎/ml，2倍稀釋)的兩個(gè)柱(column)，在5"下涂覆96孔微量滴定板過夜。通過加入在PBS(150pl)中的0.5%(w/v)BSA阻擋剩余的結(jié)合位點(diǎn)。然后清洗孔(2x200jil的PBS)。加入在PBS中的l%(w/v)ConA-HRP(100nl)并培養(yǎng)l小時(shí)。然后清空并清洗(3x200ji1的PBS)板。通過加入培養(yǎng)基溶液(lmg的o-亞苯基二鹽酸鹽)使HRP的存在可視化，并在2分鐘后用1N的H2S04猝滅。通過讀取減去在630nm處的背景的在4卯nm處的吸光度來確定顯色。用每個(gè)都具有在TBS中的抗原(實(shí)施例A4的聚合物和M葡聚糖)(100nl，100fig/ml)的兩個(gè)柱，在5。C下涂覆96孑L微量滴定板過夜。通#入在TBS(150jil)中的0.5%(w/v)BSA阻擋剩余的結(jié)合位點(diǎn)。然后清洗孔(2x200pl的TBS)。將葡萄糖(從100mM到OmM)在生物素化的MBL(2ng/ml)中的稀釋液加到lOOfil的總體積。培養(yǎng)2h后，清空并清洗(2x200^1的TBS)板。加入在TBS中的0.P/o(v/v)鏈霉親和素-HRP(100nl)并培養(yǎng)lh。然后清空并清洗(3x200(il的TBS)板。通過加入培養(yǎng)基溶液(lmg的o-亞苯基二鹽酸鹽)使HRP的存在可視化，并在2分鐘后用IN的H2S04淬滅。通過讀取減去在630nm處背景的在4卯nm處的吸光度來確定顯色。結(jié)果如圖3所示。實(shí)施例A8a:實(shí)施例A4a的80mol。/。甘露糖聚合物的ELLA檢測采用在實(shí)施例A8中描述的方法對實(shí)施例A4a的聚合物進(jìn)行ELLA檢測。由該ELLA檢測產(chǎn)生的IC50值非常高于實(shí)施例A8的IC50值。與16.8mM的葡萄糖(A8)相比，IC50為5080mM葡萄糖。實(shí)施例A9:對實(shí)施例A5的40mol。/。甘露糖標(biāo)記的聚合物的FRET檢測利用頻域技術(shù)進(jìn)行測量。對于這些測量，使用得自ISSInc.,Urbana，IL，USA的KOALA儀器(KOALA自動(dòng)樣品室)。激發(fā)光源(圖1中的ll)是黃色LED。激發(fā)光通過540~590nm的帶通濾光器(圖1中的15)過濾，并用610~690iun的帶通濾光器(圖1中的21)分離發(fā)射,二者均得自O(shè)megaOpticalInc.,Brattleboro，VT，USA。多指數(shù)衰減模型最好地描述了熒光衰減。但是，對于葡萄糖感測不必分辨多指數(shù)衰減。在單一調(diào)制頻率下的相位或調(diào)制度測量足以測定葡萄糖濃度(L.Tolosa，H.Szmcinski，G.Rao和J.R.Lakowicz(1997)AnalyticalChemistry250，102-108)。認(rèn)為對于PreciSense檢測物化學(xué)品最佳調(diào)制頻率為61MHz。混合10fiM標(biāo)記的MBL(如在實(shí)施例Al中所制備的，但是標(biāo)記度為每MBL子單元0.5個(gè)染料)和2mg/ml標(biāo)記的聚合物(實(shí)施例A5)的50pl檢測物化學(xué)品，并在混合后靜置至少lh。然后用注射器將檢測物化學(xué)品(5pl)轉(zhuǎn)移到纖維素纖維中并將該纖維安放到常規(guī)設(shè)計(jì)的纖維固定器中。將纖維固定器安裝在標(biāo)準(zhǔn)熒光池(10mmxl0mm)中。因此，將標(biāo)準(zhǔn)的未改變的商用儀器用于測量。在水浴中將所有溶液預(yù)加熱到34。C，并且在34。C下記錄在KOALA儀器中的所有測量值。將包括纖維和纖維固定器裝置的熒光池置于KOALA的樣品固定器中，并且熒光池充滿含有葡萄糖的緩沖液。測量的相位是至少四十個(gè)相角記錄的平均值。測量完成后，使用吸管清空熒光池，并再次充滿含有下一濃度葡萄糖的緩沖液。在測量之間間隔20分鐘以4吏檢測物達(dá)到化學(xué)平衡。為了生成葡萄糖劑量響應(yīng)曲線(圖4),在0、2.5、5、10、30、100和500mM的葡萄糖時(shí)測量相位。在500mM葡萄糖時(shí)測量相角后，在60分鐘時(shí)間用10mM的TRIS緩沖液清洗幾次纖維。此時(shí)得到與初始時(shí)得到的0mM葡萄糖的相角相同的相角。這表明檢測的可逆性(數(shù)據(jù)未示出)。實(shí)施例A9a:對實(shí)施例A5和A5a的標(biāo)記聚合物的FRET檢測4吏用實(shí)施例A5和A5a的標(biāo)記聚合物進(jìn)行類似于實(shí)施例A9的方法。將每種聚合物包封在可生物降解的聚合物中并用小型化時(shí)間分辨熒光計(jì)進(jìn)行測量。在2天內(nèi)使葡萄糖濃度在2.5mM、5mM、15mM和30mM之間循環(huán)變化。以5分鐘的時(shí)間間隔進(jìn)行測量，并通過從隨后的相位值中減去在第一2.5mM葡萄糖水平下測量的相位值來計(jì)算相位移。結(jié)果如圖4a所示。80%甘露糖標(biāo)記的聚合物(實(shí)施例A5a)的相位移比40%甘露糖標(biāo)記的聚合物(實(shí)施例A5)的相位移大了約40%。觀察到40mol。/。甘露糖標(biāo)記的聚合物(實(shí)施例A5)的沉淀。沒有察到80%甘露糖標(biāo)記的聚合物(實(shí)施例A5a)的沉淀。認(rèn)為這與80mol。/o甘露糖標(biāo)記的聚合物的改進(jìn)的響應(yīng)有關(guān)。將實(shí)施例A4~A9結(jié)果概括在表2中。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>將實(shí)施例A4a~A9a的結(jié)果概括在表2a中。表2a<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>實(shí)施例A10:傳感器的配制和植入通過將直徑為700nm的玻璃棒浸入在二氯曱烷(DCM)中的15%w/w的1000PEGT80PBT20聚合物溶液中并使其在室溫下干燥，由1000PEGT80PBT20聚合物(如S.Fakirov和T.Gogeva在Macromol.Chem.191(1990)603-614中所述的制備，目標(biāo)是具有80wt。/o親7JC鏈段和20wt。/。疏水鏈段)制造纖維。這得到具有內(nèi)徑為700nm、外徑為卯Onm的中空纖維。該纖維充滿檢測物化學(xué)品(實(shí)施例A9)。加熱聚合物使其熔化以封閉纖維。在測試和插入之前測試該焊接纖維的滲漏性?？梢酝ㄟ^使用針將該類型纖維置于皮膚的上部。合適尺寸(足夠大以容納濕纖維)的針以約lmm深度平行于皮膚表面放置，使得針通過皮膚作為陰影可見。將纖維(仍然是濕的)置于針內(nèi)并且移走針。在插入步驟完成之后，通常在插入位置處觀察不到出血。當(dāng)纖維在適當(dāng)?shù)奈恢脮r(shí)，將讀取裝置直接置于纖維上方并可以開始測量。實(shí)施例B1:聚合物的合成如下通過乳液聚合制備水可溶性的40moP/。甘露糖的共聚物。將Span80表面活性劑(5.7g;HLB親水親油平衡值I4.3，基于甲苯10%w/w)、AIBN(30mg)和甲苯(57.3g)加到配備有機(jī)械攪拌器和氮?dú)夤艿?50ml三口圓底燒瓶中。密封燒瓶、用氮?dú)獯祾卟⒃谡麄€(gè)聚合過程中保持在氮?dú)夥障隆⑾┍鵤-D-吡喃甘露糖苷(3.52g)、丙烯酸-2-羥乙酯(2.552g)、和N-(3-氨基丙基)曱基丙烯酰胺鹽酸鹽(0,356g)溶于水(12.7g)中，并過濾以除去不可溶的物質(zhì)。通過橡膠塞將該混合物加到在圓底燒瓶中的劇烈攪拌的混合物中。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物直到形成穩(wěn)定的乳狀液(30分鐘)，然后在6(TC下保持4h。通過塞注入VA-044溶液(lml，60mg/ml)，繼續(xù)聚合過夜(17h)。將反應(yīng)混合物冷卻到室溫，并加入丙酮破乳。這使得聚合物沉淀，收集沉淀、再溶于水、并加入丙酮沉淀。產(chǎn)物在真空下干燥過夜，以得到3.2g(50Yo)粗淺黃色聚合物。將部分粗聚合物(1.0g)溶于水(10ml)中，并在水中透析(MWCO[分子量截留25000)以除去低分子量物質(zhì)。冷凍干燥得到0.46§(46%)毛絨狀的白色聚合物。實(shí)施例B2:實(shí)施例B1的聚合物的染色通常，聚合物的標(biāo)記按照由MolecularProbes(產(chǎn)品信息MP00143,Rev.June2001)提供的說明書進(jìn)行。將聚合物(實(shí)施例Bl)(88.6mg)溶于10mM的NaHC03溶液(3ml;pH8.5)中。將聚合物溶液平均分到三個(gè)Eppendorf小瓶中。將HMCV-1(實(shí)施例A3)(19.6mg;26.1nmol)溶于干燥的DMSO(600fd)中。將染料以每30秒lOjil等分地加到聚合物溶液中，使得第一小瓶總共得到lOOfil、第二小瓶得到200^1,第三小瓶得到300nl。在加入最后一份后，溫和地?cái)嚢栊∑縧h，然后在10mM的TRIS緩沖液中透析溶液(MWCO10-12000)，并幾次更換緩沖液，直到在透析緩沖液中看不到顏色(通常72小時(shí)更換6~8次500ml的緩沖液)。實(shí)施例B3:對實(shí)施例B2的聚合物的FRET檢測混合在10mMTRIS緩沖液中(12.5nL)的包含染色聚合物溶液(實(shí)施例B2)(4jiL)和染色MBL溶液(實(shí)施例Al)(8.5fiL)的檢測物化學(xué)品，并在混合后靜置至少lh。然后如實(shí)施例A9所述的，用注射器將檢測物化學(xué)品轉(zhuǎn)移到纖維中。該纖維被安放在適合于標(biāo)準(zhǔn)熒光池(10mmxl0mm)的常規(guī)設(shè)計(jì)的纖維固定器中。通過使用時(shí)間分辨熒光光鐠(頻域)測量葡萄糖響應(yīng)。實(shí)施例Cl:烯丙基a-D-吡喃甘露糖苷和氨基葡聚糖150k的合成基本上如Pekari等人在(2004)J.Org.Chem，66(22)，7432-7442中描述的，進(jìn)行烯丙基a-D-吡喃甘露糖苦的合成。在BF3-OEt2(0.58ml)存在下，在干燥的烯丙基醇(140ml)中回流D-甘露糖(12.1g，67mmol)過夜。第二天用Et3N(1.8ml)中和^^混合物，并蒸發(fā)溶劑。干柱減壓色鐠(內(nèi)徑為6cm;100ml級(jí)分；在DCM(v/v)中的0~45%的MeOH-ll份，5%增量+100%)得到為無色糖漿狀的9.38g(63。/o)產(chǎn)物。TLC(DCM-MeOH,9:1)Rf0.3;iH-NMR(300MHz，128次掃描，在700jilD20中4mg)33.27(s，2H，烯丙基)，3.52-4.21(m，6H)，4.84(bs，1H，aH)，5.16-5.34(m，2H，烯丙基)，5.82-5.98(m，1H,烯丙基)。如下進(jìn)行氨基葡聚糖150k的合成。將葡聚糖150k(6.00g，0.4nmol)溶于pH為11.5的250mMK2HP04(600mL)中。加入硼氫化鈉(3g，0.08mol)，隨后加入二乙烯基砜(15ml，0.15mol)。在用濃鹽酸中和到pH為7.2之前，在室溫下攪拌反應(yīng)混合物30分鐘。攪拌30分鐘后，在水(3x25L)中透析(MWCO10-12k)所得混合物。然后將內(nèi)含物轉(zhuǎn)移到Erlenmeyer燒瓶中，并加入24。/。的氨水(200mL)。2h后，將pH調(diào)到10.5，并攪^反應(yīng)過夜。通過在水(8x25L)中透析(MWCO10-12k)除去過量的氨，并且凍干全部內(nèi)含物，得到為白色絨毛狀物質(zhì)的M葡聚糖5.75g(78。/。，基于185kMW的氨基葡聚糖)。使用元素分析法進(jìn)行分子量、胺引入、和引入的二乙烯基砜的量的粗略估計(jì)。(發(fā)現(xiàn)C39.86;H6.26;N0.16;S3.08。/o葡聚糖150k,~22DVS-NH2，~160DVS-OH，和~7201120，理論C39.55;H6.60;N0.16;S3.07%)。實(shí)施例C2:聚合物的合成下列實(shí)施例說明如何制備50mol。/。甘露糖的共聚物。其它聚合物的制備概括在表3中。所用的單糖及它們的量概括在表4中。在PBS(50mM，pH7.4)中制備烯丙^i4l(AS)和N-(3-t^丙基)甲基丙烯酰胺鹽酸鹽(NAMH)的原液(100mg/ml)。在螺旋蓋塑料試管中將過二硫酸鉀(PPS)(150mg)溶于PBS緩沖液(50mM，pH為7.4;7.8ml)中。按照下列順序向該溶液中加入烯丙基a-D-吡喃甘露糖苷(烯丙基糖；AS)(2.20ml;220mg)、丙烯酸-2-羥乙酯(HEA)(llOjil)、N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺鹽酸鹽(NAMH)(89pl)和N,N，N，，N，-四曱基乙二胺(TMEDA)(100fU)。用氮?dú)獯祾呋旌衔?分鐘以除去溶解的氧。在定軌振蕩器中在室溫下聚合過夜。過濾反應(yīng)混合物并在甲醇(100ml)中沉淀。通過離心法(4000rpm，3分鐘)收集聚合物，并且然后用曱醇(3xl0ml)清洗。在脫水器中干燥最終得到的聚合物粒過夜。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>表4<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>實(shí)施例C3:對C2聚合物的ELLA檢測在ELLA檢測中使用的TBS緩沖液為20mMTRIS、150mMNaCl、1.25mMCaCl2(模擬生理鉀濃度)，pH為7.4。用每個(gè)都具有在TBS中的抗原(實(shí)施例C3的聚合物，實(shí)施例CI的氨基葡聚糖)(100ji1，100ng/ml)的兩個(gè)柱，在5。C下涂覆96孔微量滴定板過夜。通過加入^ETBS中的0.5。A(w/v)BSA(150pl)阻擋剩余的結(jié)合位點(diǎn)。然后清洗孔(2x200ji1的TBS)。將葡萄糖(從lOOmM到0mM)在生物素化的MBL(2ng/ml)中的稀釋液加到lOOfil的總體積。培養(yǎng)2h后，清空并清洗(2x200ji1的TBS)板。加入在TBS中的0.1。/。(v/v)鏈霉親和素-HRP(100nl)并培養(yǎng)lh。然后清空并清洗(3x200fi1的TBS)板。通it^入培養(yǎng)基溶液(lmg的o-亞苯基二鹽酸鹽)并在2分鐘后用2N的硫酸淬滅使HRP的存在可視化。通過讀取減去在630nm處的背景的在490nm處的吸光度來確定顯色。結(jié)果如圖l中的圖所示。高吸光度對應(yīng)于MBL對配體的綴合。基線吸光度對應(yīng)于MBL對配體沒有綴合。如圖5所示，與葡萄糖(ICso-18mM)相比，單糖單元需要對MBL具有更高的親和力，并優(yōu)選為甘露糖(ICso8mM)或N-乙?；?葡糖胺(IC5。6mM)。親和力較低的糖單體單元例如半乳糖(ICso36mM)在生理鈣濃度下沒有得到MBL綴合。用含有30%到50°/。甘露糖單體單元的共聚物得到最好結(jié)果，這是因?yàn)檫@些共聚物在0~10mM葡萄糖下最容易被抑制(斜率最陡)。因此，在優(yōu)化步驟(實(shí)施例C4)中，合成一系列甘露糖單體單元含量為30%到50%的甘露糖共聚物。實(shí)施例C4:聚合物合成(最優(yōu)化)制備方法如實(shí)施例C2。聚合物的制備概述于表5。反應(yīng)物如圖6所示。聚合物產(chǎn)物的實(shí)例示于圖7。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>實(shí)施例C5:對實(shí)施例C5的聚合物的ELLA檢測(最優(yōu)化)如在實(shí)施例C3中所描述的，進(jìn)行ELLA檢測。結(jié)果如圖8所示。圖8顯示35mol。/。甘露糖共聚物是最佳配體。在OmM葡萄糖時(shí)對MBL的綴合與氨基葡聚糖一樣強(qiáng)，但比氨基葡聚糖的綴合更容易被抑制。由抑制曲線可以計(jì)算氨基葡聚糖和最佳配體的ICs。值(表6)。(ICs。值^該特定的檢測有效。)表6<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>權(quán)利要求1.一種用于檢測或測量流體中的糖類分析物的傳感器，所述傳感器包括其讀出為可檢測的或可測量的光學(xué)信號(hào)的競爭結(jié)合檢測物組分，所述檢測物組分被允許所述分析物擴(kuò)散但不允許所述檢測物組分?jǐn)U散的材料保留，所述檢測物組分包含用基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分對之一標(biāo)記的糖類結(jié)合分子；和能夠與所述分析物競爭結(jié)合到所述糖類結(jié)合分子的糖類類似物，所述糖類類似物為柔性的水可溶性聚合物，該柔性的水可溶性聚合物包含聚合的單體單元?dú)埢?，所述單體單元?dú)埢哂刑穷惢蛱穷惸M部分側(cè)鏈和為所述基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分對的另一個(gè)的側(cè)鏈部分；和/或共聚合的第一單體單元和第二單體單元的殘基，所述第一單體單元?dú)埢哂刑穷惢蛱穷惸M部分側(cè)鏈，第二單體單元?dú)埢哂袨樗龌诮咏缘男盘?hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分對的另一個(gè)的側(cè)鏈部分。2.如權(quán)利要求1所述的傳感器，其中所述第一單體單元以20~70mol%或70~卯mol。/。的量存在于所述聚合反應(yīng)混合物中和/或所述第二單體單元以5~15mol。/n的量存在于所述反應(yīng)混合物中。3.如權(quán)利要求1或2所述的傳感器，其中所述糖類部分選自任選地衍生的甘露糖、麥芽糖、異麥芽糖、葡萄糖、槐糖和/或2-乙?；咸前?。4.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的傳感器，其中所述基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分連接到所述第二單體單元的胺、酸、醇、炔、疊氮和/或砜官能團(tuán)，或連接到所述第二單體單元。5.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的傳感器，其中所述基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分是能量供體或能量受體。6.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的傳感器，其還包含不具有糖類或糖類模擬部分或基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分的聚合的第三單體單元?dú)埢?.如權(quán)利要求6所述的傳感器，其中所述第三單體單元以0~80mol%的量存在于所述反應(yīng)混合物中。8.如權(quán)利要求6或7所述的傳感器，其中所述第三單體單元包含親水基團(tuán)。9.如權(quán)利要求8所述的傳感器，其中所述第三單體單元包括乙酸-2-羥乙酯、乙烯基吡咯烷酮、MMA、HEMA、乙烯醇和/或乙二醇。10.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的傳感器，其中所述聚合物的平均分子量為20250kDa。11.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的傳感器，其中所述糖類分析物是葡萄糖并且所述聚合物能夠在生理鈣濃度下與葡萄糖竟?fàn)帯?2.如權(quán)利要求ll所述的傳感器，其中所述檢測物能夠測量濃度在0~35mM葡萄糖范圍的至少一部分內(nèi)的血糖。13.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的傳感器，其中所述糖類結(jié)合分子是凝集素。14.如權(quán)利要求13所述的傳感器，其中所述糖類結(jié)合分子是甘露糖結(jié)合凝集素或伴刀豆球蛋白A。15.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的傳感器，其中所述檢測物組分通過殼或基質(zhì)材料保留。16.如權(quán)利要求15所述的傳感器，其中所述保留材料是可生物降解的。17.—種制備如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的傳感器的方法，所述方法包括相分離(凝聚)、溶劑蒸發(fā)、萃取、噴霧干燥、噴涂、噴霧驟冷、轉(zhuǎn)盤霧化、流化床涂覆、共擠出和平盤涂覆中的至少一種。18.—種檢測糖類分析物的方法，該方法使用如權(quán)利要求1~16中任一項(xiàng)所述的傳感器，該方法包括將所述傳感器植入哺乳動(dòng)物皮膚中并使用外部光學(xué)裝置經(jīng)皮檢測或測量糖類分析物。19.一種檢測糖類分析物的方法，該方法使用如權(quán)利要求1~16中任一項(xiàng)所述的傳感器，該方法包括通過使用外部光學(xué)裝置照射在哺乳動(dòng)物皮膚中或皮膚下的所述傳感器經(jīng)皮檢測或測量糖類分析物。20.—種合成柔性的水可溶性聚合物的方法，所述聚合物包含聚合的第一單體單元?dú)埢龅谝粏误w單元?dú)埢哂刑穷惢蛱穷惸M部分側(cè)鏈和為基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分對的另一個(gè)的側(cè)鏈部分；和/或共聚合的第一單體單元和第二單體單元的殘基，所述第一單體單元?dú)埢哂刑穷惢蛱穷惸M部分側(cè)鏈，所述第二單體單元?dú)埢哂袨榛诮咏缘男盘?hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分對的另一個(gè)的側(cè)鏈部分，所述方法包括下列步驟之一a)聚合每個(gè)均具有糖類或糖類模擬部分側(cè)鏈和基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分側(cè)鏈的單體單元、和任選的第三單體單元；b)共聚合每個(gè)均具有糖類或糖類模擬部分側(cè)鏈的第一單體單元、和每個(gè)均具有基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分側(cè)鏈的第二單體單元、和任選的第三單體單元；c)聚合每個(gè)均具有糖類或糖類模擬部分側(cè)鏈和用于連接基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分的側(cè)官能團(tuán)的單體單元、和任選的第三單體單元，然后使所述單體單元?dú)埢c所述基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分反應(yīng)；d)共聚合每個(gè)均具有糖類或糖類模擬部分側(cè)鏈的笫一單體單元、和每個(gè)均具有用于連接基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分的側(cè)官能團(tuán)的第二單體單元、和任選的笫三單體單元，然后使第二單體單元?dú)埢c基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分反應(yīng)；e)聚合每個(gè)均具有用于連接糖類或糖類模擬部分的側(cè)官能團(tuán)和用于連接基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分的不同側(cè)官能團(tuán)的單體單元、和任選的第三單體單元，然后使所述單體單元?dú)埢c糖類或糖類模擬部分和基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分反應(yīng)；或f)共聚合每個(gè)均具有用于連接糖類或糖類模擬部分的側(cè)官能團(tuán)的第一單體單元、和每個(gè)均具有用于連接基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分的不同側(cè)官能團(tuán)的第二單體單元、和任選的第三單體單元，然后使第一單體單元?dú)埢c糖類或糖類模擬部分反應(yīng)、使第二單體單元?dú)埢c基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分反應(yīng)。21.如權(quán)利要求20所述的方法，其中所述單體單元通過加成聚合進(jìn)行反應(yīng)o22.如權(quán)利要求20或21之一所述的方法，其中所述單體單元和/或第一單體單元包括糖類或糖類模擬部分的含烯丙基或乙烯基的衍生物。23.如權(quán)利要求20~22中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述單體單元和/或第二單體單元包括含有胺官能團(tuán)的含雙鍵分子。性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分對的另一個(gè)的側(cè)鏈部分，所述方法包括下列步驟之一a)聚合每個(gè)均具有糖類或糖類模擬部分側(cè)鏈和基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分側(cè)鏈的單體單元、和任選的第三單體單元；b)共聚合每個(gè)均具有糖類或糖類模擬部分側(cè)鏈的第一單體單元、和每個(gè)均具有基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分側(cè)鏈的第二單體單元、和任選的第三單體單元；c)聚合每個(gè)均具有糖類或糖類模擬部分側(cè)鏈和用于連接基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分的側(cè)官能團(tuán)的單體單元、和任選的第三單體單元，然后使所述單體單元?dú)埢c所述基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分反應(yīng)；d)共聚合每個(gè)均具有糖類或糖類模擬部分側(cè)鏈的笫一單體單元、和每個(gè)均具有用于連接基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分的側(cè)官能團(tuán)的第二單體單元、和任選的笫三單體單元，然后使第二單體單元?dú)埢c基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分反應(yīng)；e)聚合每個(gè)均具有用于連接糖類或糖類模擬部分的側(cè)官能團(tuán)和用于連接基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分的不同側(cè)官能團(tuán)的單體單元、和任選的第三單體單元，然后使所述單體單元?dú)埢c糖類或糖類模擬部分和基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分反應(yīng)；或f)全文摘要一種用于檢測或測量流體中的糖類分析物的傳感器，包含其讀出為可檢測的或可測量的光學(xué)信號(hào)的競爭結(jié)合檢測物組分，所述組分通過允許分析物擴(kuò)散但不允許檢測物組分?jǐn)U散的材料保留，所述檢測物組分包含用基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分對之一標(biāo)記的糖類結(jié)合分子；和能夠與所述分析物競爭結(jié)合所述糖類結(jié)合分子的糖類類似物，所述糖類類似物為柔性的水溶性聚合物，包含聚合的或共聚合的單體單元的殘基，所述單體單元?dú)埢哂刑穷惢蛱穷惸M部分側(cè)鏈和為基于接近性的信號(hào)產(chǎn)生/調(diào)制部分對的另一個(gè)的側(cè)鏈部分。文檔編號(hào)G01N33/543GK101365947SQ200680045824公開日2009年2月11日申請日期2006年12月6日優(yōu)先權(quán)日2005年12月7日發(fā)明者余藝華,克勞斯·格里戈里厄斯,卡斯珀·斯特魯韋,耶斯佩爾·斯文寧·克里斯滕森申請人:帕瑞薩森思公司