專利名稱：：一種單面針?biāo)幉牡蔫b別方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體的說，涉及一種單面針?biāo)幉牡蔫b別方法。
背景技術(shù)：
：中藥現(xiàn)代化是當(dāng)代中藥發(fā)展中的一個最熱門的研究方向，已成為國內(nèi)外醫(yī)藥界的一大熱點(diǎn)。其中中藥材，中成藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)代化是中藥現(xiàn)代化的一個重要組成部分。由于中藥材品種繁多，地區(qū)用藥習(xí)慣各異，古代本草記載簡單，誤傳錯用和用藥演變等因素，導(dǎo)致中藥材同物異名，同名異物以及正品，非正品都入藥的混亂現(xiàn)象非常嚴(yán)重。更為普遍的是影響中藥成分的因素復(fù)雜，即使是同一藥材，其有效化學(xué)成分常因生態(tài)環(huán)境，釆集時間，儲存和炮制方法等不同而有差異，這些問題嚴(yán)重影響了中藥的質(zhì)量和用藥的安全與有效。如何根據(jù)中醫(yī)藥的特點(diǎn)提出一整套具有中醫(yī)藥特點(diǎn)又具有高科技特征的中藥材、中成藥現(xiàn)代化標(biāo)準(zhǔn)，是一重要課題。建立中藥材單味藥和復(fù)方全組成的指紋圖譜是一種具有先進(jìn)性的切實(shí)可行的方法，現(xiàn)在這方法已成為國際上通用的方法，而且指紋圖譜已成為國際公認(rèn)的控制中藥或天然藥物質(zhì)量的最有效的手段"。中藥指紋圖譜是在中醫(yī)藥基礎(chǔ)理論指導(dǎo)下針對中藥的品種和質(zhì)量，在現(xiàn)有認(rèn)知水平基礎(chǔ)上，以整體信息和藥效指標(biāo)為依據(jù)，釆用多種分析方法和技術(shù)，建立的客觀、整體和多指標(biāo)的綜合評價體系。中藥指紋圖譜的建立，將對中藥的規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化、產(chǎn)業(yè)化和國際化提供科學(xué)的技術(shù)平臺，對中藥現(xiàn)代化的戰(zhàn)略行動具有科學(xué)的指導(dǎo)意義。單面針，Z朋仏o;t^Mmcfcw'加m//ems/,蕓香科木質(zhì)藤本，細(xì)時為灌木狀；莖枝著生略下變的皮刺。單數(shù)羽狀復(fù)葉；小葉3-9，對生堅(jiān)紙質(zhì)至革質(zhì)，狹矩圓形到卵狀矩圓形，長7-16厘米，寬3-6厘米，有時背面中脈上著生有下變的鉤狀刺，聚傘狀圓錐花序，腋生，花4數(shù)；萼片寬卵形；花瓣卵狀矩圓形；雄花的雄蕊開花時伸出花瓣外，頂端2-4駐裂；雌花無退化雄蕊。朞突果成熟時淡褐色，外形似蜆。分布于西南、廣東、廣西、湖南、湖北、陜西。生山地林中。根、莖皮及葉均供藥用，能祛風(fēng)活絡(luò)、散瘀止痛、解毒消腫。單面針不是藥典和部頒標(biāo)準(zhǔn)藥材，現(xiàn)在的中藥成藥中以該藥材入藥的也不多見，更沒有中成藥以單面針的主要成分來進(jìn)行質(zhì)量控制，因此關(guān)于單面針?biāo)幉牡挠行С煞值难芯繕O少。中藥指紋圖譜是指某種中藥材或中成藥中所共有的、具有特征性的某類或數(shù)類成分的色譜或光譜的圖譜。在現(xiàn)階段中藥的有效成分絕大多數(shù)沒有明確的情況下，有效控制中藥材或中成藥的質(zhì)量具有重要的意義。日本漢方藥主要生產(chǎn)企業(yè)在20世紀(jì)80年代就已經(jīng)在企業(yè)中釆用高效液相指紋圖譜控制質(zhì)量。德國、法國在對銀杏葉提取物聯(lián)合開發(fā)的過程中，發(fā)現(xiàn)銀杏葉提取物的醫(yī)療作用是提取物所得物質(zhì)群的整體作用結(jié)果，而對這樣一個整體的質(zhì)量控制，亦釆用高效液相指紋圖譜方法。美國FDA最近幾年制定的植物草藥指南中已經(jīng)明確把指紋圖譜作為混合物質(zhì)群的質(zhì)量控制方法。指紋圖譜作為中草藥及其提取物質(zhì)量控制方法，目前已經(jīng)成為國際共識。為有效控制單面針?biāo)幉牡馁|(zhì)量，本申請人對不同產(chǎn)地單面針進(jìn)行了考察比較，為建立單面針?biāo)幉馁|(zhì)量的綜合控制方法，特以國家食品藥品監(jiān)督管理局2000年頒發(fā)的關(guān)于中藥材指紋圖譜技術(shù)要求，對湖南省張家界地區(qū)釆集的單面針30批藥材進(jìn)行了研究，建立起單面針指紋圖譜測定方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種單面針?biāo)幉牡蔫b別方法。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供了一種單面針?biāo)幉牡蔫b別方法，包括如下步驟第一步，建立單面針?biāo)幉牡腍PLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，包括1)供試品溶液的制備精密稱取單面針?biāo)幉姆勰?jīng)石油醚預(yù)處理后，揮干石油醚，殘?jiān)屑尤爰状技訜峄亓?，合并濾液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至容量瓶中，定容至刻度，得到供試品溶液；2)高效液相色譜分析精密吸取供試品溶液進(jìn)樣，色譜條件色譜柱為KromasilRP隱C184.6mmx250mm，5fxm;HPG1313A自動進(jìn)樣系統(tǒng)；流動相為乙腈-0.2%轔酸三乙胺溶液；釆用梯度洗脫方式0min-10min-30min-70min,乙腈與0.2%磷酸三乙胺溶液的體積比為5:95-10:90-10:90-40:60;檢測波長210~366nm;得到單面針?biāo)幉腍PLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；3)測定精密吸取30批單面針?biāo)幉牡墓┰嚻啡芤焊?-20nl，分別注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到30批單面針?biāo)幉牡腍PLC指紋圖譜并進(jìn)行比較，得到由共有特征峰構(gòu)成的單面針?biāo)幉腍PLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。所述單面針標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有特征峰有8個，計算各個特征峰與總峰面積的積分相對比值(相對峰面積)，其中l(wèi)號峰的平均Rt為3.364min,相對峰面積為4.2~7.8%;2號峰的平均Rt為4.620min，相對峰面積為0.8~1.6%;3號峰的平均Rt為10.772min，相對峰面積為1.5~3.3%;4號峰的平均Rt為12.799min,相對峰面積為3.7-9.9%;5號峰的平均Rt為13.828min，相對峰面積為4.5~16.3%;6號峰的平均Rt為34.015min，相對峰面積為46.9~73.1%;7號峰的平均Rt為58.820min,相對峰面積為5.3~10.7%;8號峰的平均Rt為62.179min，相對峰面積為2.7~7.5%;第二步，以上述相同的方法測定待測單面針?biāo)幉臉悠返闹讣y圖譜；第三步，將第二步所測定的待測單面針?biāo)幉臉悠分讣y圖譜與第一步構(gòu)建的單面針標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，篩選符合單面針?biāo)幉臉?biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的合格單面針?biāo)幉?。所述第一步l)中，單面針?biāo)幉姆勰┘?xì)度優(yōu)選為40目。所述第一步l)中，加入石油醚加熱回流不少于10分鐘，其中，lg單面針?biāo)幉募尤胧兔蚜坎簧儆?0ml，優(yōu)選lg單面針?biāo)幉募尤胧兔?0ml加熱回流30分鐘。所述第一步3)中，優(yōu)選精密吸取單面針?biāo)幉牡墓┰嚻啡芤?0ptl。所述第一步l)中，加入甲醇加熱回流l次以上，每次不少于IO分鐘，其中l(wèi)g單面針?biāo)幉募尤爰状剂坎簧儆?0ml，優(yōu)選加入甲醇30ml加熱回流2次，每次1小時。所述第一步l)中，殘?jiān)鼉?yōu)選用甲醇定容至2ml。所述第一步l)中，供試品溶液高效液相分析前優(yōu)選用0.45pm微孔濾膜濾過。所述第一步2)中，檢測波長優(yōu)選為280nm。所述8個共有特征峰的相對保留時間為，l號峰的平均相對保留時間Rt為3.364min，標(biāo)準(zhǔn)偏差SD為0.019;2號峰的平均相對保留時間Rt為4.620min，標(biāo)準(zhǔn)偏差SD為0.008;3號峰的平均相對保留時間Rt為4號峰的平均相對保留時間Rt為5號峰的平均相對保留時間Rt為6號峰的平均相對保留時間Rt為7號峰的平均相對保留時間Rt為8號峰的平均相對保留時間Rt為10.772min,標(biāo)準(zhǔn)偏差SD為0.102;12.799min,標(biāo)準(zhǔn)偏差SD為0.082;13.828min,標(biāo)準(zhǔn)偏差SD為0.101:34.015min,標(biāo)準(zhǔn)偏差SD為0.603;58.820min，標(biāo)準(zhǔn)偏差SD為0.074;62.179min，標(biāo)準(zhǔn)偏差SD為0.256;現(xiàn)階段未發(fā)現(xiàn)有對單面針有效成分及其質(zhì)量控制方法的深入研究，本發(fā)明人運(yùn)用國際通用的對不能明確有效成分的天然藥物以指紋圖譜來綜合控制質(zhì)量的方法，特以國家食品藥品監(jiān)督管理局2000年頒發(fā)的關(guān)于中藥材指紋圖譜技術(shù)要求，對湖南省張家界地區(qū)釆集的單面針30批藥材進(jìn)行了研究，獨(dú)創(chuàng)性地建立起單面針指紋圖譜測定方法。該方法通過指紋圖譜有效地對不同產(chǎn)地、不同時間、不同批次的單面針?biāo)幉牡挠行С煞治镔|(zhì)群整體進(jìn)行控制，從而從整體上有效地表征單面針?biāo)幉馁|(zhì)量，達(dá)到有效控制單面針?biāo)幉馁|(zhì)量的目的。圖1四種檢測波長下的HPLC圖譜，其中，檢測波長的選擇(由上至下分別為210nm、254nm、280nm、366nm)。圖2單面針液相色譜指紋圖譜。圖330批單面針?biāo)幉闹讣y圖譜相似性評價結(jié)果。圖4樣本9的原始液相色譜圖譜。圖5整體相似度在0.90以上的樣本(17批)指紋共有模式(以平均值方法生成)。圖6相似度大于0.90的樣品中各特征峰峰面積與8個特征峰總峰面積的比例關(guān)系。圖7相似度大于0.90的樣品各特征峰與參照峰峰面積的比例關(guān)系。圖8整體相似度在0.80以上的樣本(21批)指紋共有模式(以平均值方法生成)。圖9相似度大于0.80的樣品中各特征峰峰面積與8個特征峰總峰面積的比例關(guān)系。圖10相似度大于0.80的樣品各特征峰與參照峰峰面積的比例關(guān)系。具體實(shí)施方式以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例l單面針?biāo)幉墓┰嚇悠穯蚊驷槥槭|香科植物單面針Z朋仏o;cy/Mmifc^wm//ems/.的干燥根和莖。藥材由湖南省株洲千金藥業(yè)股份有限公司提供，共30批，分別編號為l、2、3........28、29、30。見表1:表1單面針?biāo)幊?共試樣品<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實(shí)施例2供試品的制備藥材經(jīng)粉碎后過40目篩，取各批藥材粉末1.0g,精密稱定，置于50ml圓底燒瓶中，加石油醚30ml加熱回流30min,棄去石油醚液，殘?jiān)鼡]千溶劑，再加甲醇30ml加熱回流提取2次，每次lh,趁熱濾過，合并兩次濾液，蒸干，殘?jiān)眉状级ㄈ葜?ml，作為供試品溶液，高效液相分析前用0.45pm微孔濾膜濾過。實(shí)施例3參照物的選擇單面針?biāo)幉慕?jīng)上述方法提取后，經(jīng)HPLC分析出現(xiàn)多個色譜峰，由于目前尚沒有單面針專屬成分的標(biāo)準(zhǔn)品，故經(jīng)過詳細(xì)比較多批次單面針?biāo)幉牡闹讣y圖譜，確定一個穩(wěn)定出現(xiàn)的色譜峰(6號峰，Rt34min)作為參照物(結(jié)構(gòu)尚未鑒定)進(jìn)行指紋圖譜的分析和評價，經(jīng)過系統(tǒng)比較分析，證明該方法可行。實(shí)施例4檢測方法儀器HP1100Series高效液相色譜儀(AgilentTechnologies,USA),配置HPG1311A四元梯度泵，HPG1313A自動進(jìn)樣系統(tǒng)，HPG1315A二極管陣列檢測器，HPG1313真空在線脫氣機(jī)，HPG1316A柱溫箱及HPChemStation4.0色譜工作站；KromasilRP-C18(4.6mmx250mm,5,)色譜分析柱。流動相的選擇試驗(yàn)過程中共試用了3種流動相系統(tǒng)①<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>302080406040709010③T(min)ACN0.2%磷酸三乙胺095101090301090704060結(jié)果表明，上述梯度洗脫中以梯度③為最佳，譜圖上各個色譜峰(280nm)的分離度較好，保留時間適中，因此選用該流動相系統(tǒng)作為單面針?biāo)幉牡腍PLC指紋圖譜檢測的流動相。檢測波長的確定試驗(yàn)過程中共選擇了210nm、254nm、280nm、366nm四種波長，在這四種檢測波長下的HPLC圖譜中均有多個色譜峰(見圖1，由上至下分別為210nm、254nm、280nm、366nm)，但是檢測波長在280nm時色譜峰較多且峰形較好，基線也比較平穩(wěn)，因此綜合考慮，選定280nm為制定指紋圖譜的檢測波長。穩(wěn)定性試驗(yàn)以編號為4的藥材制備供試品，分別在1、2、4、8、12、24小時后進(jìn)樣，記錄各共有色譜峰保留時間和積分面積?？疾焐V峰保留時間的一致性，各主要色譜峰保留時間的RSD分別為0.06-0.15%,同時考察1~8#特征色譜峰的相似度，各圖譜的相似度均達(dá)0.90以上。精密度試驗(yàn)以編號為4的藥材制備供試品，l天內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄各共有色譜峰保留時間和積分面積。考察色譜峰保留時間的一致性，各主要色譜峰保留時間的RSD分別為0.04~0.70%。同時考察1~8#特征色譜峰的相似度，各圖譜的相似度均達(dá)0.90以上。重現(xiàn)性試驗(yàn)取編號為4的藥材6份，按3項(xiàng)下方法進(jìn)行供試品制備并檢測，考察各色譜峰相對保留時間、峰面積比值的一致性，同時計算各色譜指紋圖譜的相似度。結(jié)果表明，所考察的共有峰的相對保留時間及相對峰面積具有較好的重現(xiàn)性，各主要色譜峰保留時間的RSD分別為0.08~0.16%。同時考察1~8#特征色譜峰的相似度，各圖譜的相似度均達(dá)0.90以上。實(shí)施例5單面針HPLC指紋圖譜建立指紋特征峰確定綜合分析30批供試品HPLC圖譜，確定了8個穩(wěn)定出現(xiàn)的主要色譜峰作為單面針的特征指紋峰，各批次樣品中8個主要色譜峰的絕對保留時間見表2，積分面積見表3，平均保留時間見表4。代表性指紋圖譜見圖2表230批單面針?biāo)幉慕^對保留時間表<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>表330批單面針?biāo)幉母魈卣鞣宸e分面積<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表430批單面針8個特征峰平均保留時間表<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>單面針?biāo)幉闹讣y圖譜的分析與評價詳細(xì)比較30批次單面針的液相色譜圖，8個特征指紋的有無及含量差異分別構(gòu)成各自的特征(見圖3)，對30批次樣品所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行相似性分析所得結(jié)果見表5:表5<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>從此結(jié)果可以看出，所檢測30批樣本的相似度在0.378~0.946間，各樣品差異雖然較大，但也有17批樣本的相似度在0.9以上，這17批樣品顯示了較好的一致性；另有4批樣本相似度在0.8~0.9之間，查看這21批相似度在0.8以上樣本的原始液相色譜圖，發(fā)現(xiàn)它們均有一共同點(diǎn)6#峰的表觀豐度與峰面積比較高而且差別不明顯。另外，樣品9的相似度低(小于0.8)卻是由于7#和8#峰的表觀豐度均較6#峰的為高，和構(gòu)建的指紋圖譜共有模式中7#、8#與6#峰的比例關(guān)系正好相反，因此它和指紋圖譜共有模式的相似性較差，見圖4。單面針?biāo)幉闹讣y圖譜共有模式的建立上述分析表明，單面針?biāo)幉呐g質(zhì)量差異大，以30批樣本的指紋圖共建的共有模式難以體現(xiàn)樣本之間的差異，為此，根據(jù)其相似程度，分別建立共有模式并進(jìn)行評價整體相似度在0.90以上的樣本(17批)指紋共有模式(以平均值方法生成，見圖5):分別計算滿足該相似度要求的17批藥材(1、12、14、18、19、20)8個特征峰峰面積的平均數(shù)(A)、標(biāo)準(zhǔn)平均偏差(SD),見表6;各特征峰峰面積與8個特征峰總峰面積的比值、表7，圖6);各特征峰峰面積與參照峰(6#)峰面積的比值(表8，圖7)。表6相似度大于0.90的17批單面針?biāo)幉姆迕娣e參數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>表7相似度大于0.90的樣品中各特征峰峰面積與8個特征峰總峰面積的比值<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>*注峰面積比例計算公式I=A/A和I=A/A;其中A表示各特征峰峰面積，<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>A表示某批次藥材中8個特征峰的總峰面積，A表示某批次樣品中6#特征峰total6的峰面積。表8相似度大于0.90的樣品各特征峰峰面積與參照峰峰面積的比值<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>從以上幾個圖表所顯示出的信息可知，這17批樣品中各特征峰峰面積與總峰面積及參照峰峰面積的比值較為穩(wěn)定，即無論這17批樣品中各特征峰峰面積的絕對值高低如何變化，它們與總峰面積及參照峰峰面積的比例關(guān)系是一致的，這也是這17批樣品相似度較高的根本原因。擬定相似度0.90以上樣品的各指紋峰與總峰面積、參照峰峰面積的比例關(guān)系見表9。表9<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>表8相似度0.90^上樣品的各!旨紋峰與總峰面積、參照峰峰面積的最小比值"*注劃定依據(jù)為x-SD，其中^表示多批次樣品中同一特征峰與總峰面積或參照峰峰面積比值的平均值；SD表示多批次樣品中同一特征峰與總峰面積或參照峰峰面積比值的相對標(biāo)準(zhǔn)平均偏差。整體相似度在0.80以上的樣本(21批)指紋共有模式(以平均值方法生成，如圖8):同前法分析與評價相似度在0.8以上的21批藥材(1、3、4、5、6、7、10、11、12、13、14、15、16、18、19、20、21、22、23、24、29)的指紋圖譜，分別計算這21批藥材的8個特征峰峰面積的平均數(shù)(A)、標(biāo)準(zhǔn)平均偏差(SD)，見表10;21批樣品中各特征峰峰面積占總峰面積的比例(見表ll，圖9);21批合格樣品中各特征峰峰面積與參照峰峰面積的比例關(guān)系(見表12,圖IO)表10相似度大于0.8的21批單面針?biāo)幉姆迕娣e參數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>表11相似度大于0.80的21批樣品中各特征峰峰面積占總峰面積的比例<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>230.0560.0110.0310.0650.0770.6770.0450.038240.0780.0140.0240.1400.2180.3600.1280.037290.0650.0090.0210.1040.2000.4680.1060.026平均值0.0600.0120.0240.0680.1040.6000.0800.051表12相似度大于0.80的21批樣品各指紋峰與參照峰(6#)峰面積的比值峰號樣品號1#2#3#4#5#6#7#8#10.1510.0250.0510.1220.22110.1830扁30.0340.0070.0190.0480.05610.0590.03340扁0.0070細(xì)0.0150.02710.0780.04950.1120.0170細(xì)0.1360.16010.0940.06360.0750.0130.0250細(xì)0.05310.0830鄉(xiāng)70.1120.0200.0850.2120.32810.1700.107100.1240.0230.0500.1490.26310.1000,249110.0530細(xì)0.0140.0280.01610.0600細(xì)120.0720.0130.0330.1260.17710.1390.068130.2130雄0.0750.1400.45310.2210.129140.1170.0170.0370扁0.13110.1710.154150.0830扁0.0500.1460.17910.2320.097160.1590.0340.0720.2030.27310.2310層180.0880.0230.0490.1110.15210.1730.137190.0940.0250.0340.0710頻10.1070細(xì)200.1400.0260.0490.1600.23810.0970.124210.0460.0100馬0.0360扁10.0840.062220.1590.0460.0540.1740.26210.1360.103230.0820扁0.0460.0970.11310.0670,056240.2180.0390細(xì)0.3900.60410.3550.103290.1380.0190.0450.2230.42910.2270.056平均值0.1100皿0.0450.1300.20310.1460.091以上幾個圖表所顯示出的信息可知，這21批樣品中各特征峰峰面積與總峰面積及參照峰峰面積的比值較為穩(wěn)定，即不管這21批樣品中各特征峰峰面積的絕對值高低如何變化，它們與總峰面積及6#內(nèi)標(biāo)峰峰面積的比例關(guān)系是比較一致的。擬定相似度0.80以上樣品的各指紋峰與總峰面積、參照峰面積的比例關(guān)系見表13。表13相似度0.80以上樣品的各指紋峰與總峰面積、參照峰峰面積的最小比值<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>小結(jié)本研究共測試30批單面針?biāo)幉?，研究結(jié)果表明由于該藥材藥用部位、生長期、采收時間等的差異，造成30批藥材整體指紋圖譜差異極大，為此，考慮到企業(yè)的生產(chǎn)實(shí)際情況，為擴(kuò)大單面針?biāo)幵吹倪x擇，釆用相似度0.80以上樣品來構(gòu)建共有模式并作為評價標(biāo)準(zhǔn)。權(quán)利要求1.一種單面針?biāo)幉牡蔫b別方法，包括如下步驟第一步，建立單面針?biāo)幉牡腍PLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，包括1)供試品溶液的制備精密稱取單面針?biāo)幉姆勰?，?jīng)石油醚預(yù)處理后，揮干石油醚，殘?jiān)屑尤爰状技訜峄亓?，合并濾液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓D(zhuǎn)移至容量瓶中，定容至刻度，得到供試品溶液；2)高效液相色譜分析精密吸取供試品溶液進(jìn)樣，色譜條件色譜柱為KromasilRP-C184.6mm×250mm，5μm；HPG1313A自動進(jìn)樣系統(tǒng)；流動相為乙腈-0.2％磷酸三乙胺溶液；采用梯度洗脫方式0min-10min-30min-70min，乙腈與0.2％磷酸三乙胺溶液的體積比為5∶95-10∶90-10∶90-40∶60；檢測波長210～366nm；得到單面針?biāo)幉腍PLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；3)測定精密吸取30批單面針?biāo)幉牡墓┰嚻啡芤焊?-20μl，分別注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到30批單面針?biāo)幉牡腍PLC指紋圖譜并進(jìn)行比較，得到由共有特征峰構(gòu)成的單面針?biāo)幉腍PLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。所述單面針標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有特征峰有8個，計算各個特征峰與總峰面積的積分相對比值(相對峰面積)，其中1號峰的平均Rt為3.364min，相對峰面積為4.2～7.8％；2號峰的平均Rt為4.620min，相對峰面積為0.8～1.6％；3號峰的平均Rt為10.772min，相對峰面積為1.5～3.3％；4號峰的平均Rt為12.799min，相對峰面積為3.7～9.9％；5號峰的平均Rt為13.828min，相對峰面積為4.5～16.3％；6號峰的平均Rt為34.015min，相對峰面積為46.9～73.1％；7號峰的平均Rt為58.820min，相對峰面積為5.3～10.7％；8號峰的平均Rt為62.179min，相對峰面積為2.7～7.5％；第二步，以上述相同的方法測定待測單面針?biāo)幉臉悠返闹讣y圖譜；第三步，將第二步所測定的待測單面針?biāo)幉臉悠分讣y圖譜與第一步構(gòu)建的單面針標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，篩選符合單面針?biāo)幉臉?biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的合格單面針?biāo)幉摹?、如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，所述第一步l)中，單面針?biāo)幉姆勰┘?xì)度為40目。3、如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，所述第一步l)中，加入石油醚加熱回流不少于10分鐘，其中，lg單面針?biāo)幉募尤胧兔蚜坎簧儆?0ml;加入甲醇加熱回流l次以上，每次不少于10分鐘，其中l(wèi)g單面針?biāo)幉募尤爰状剂坎簧儆?0ml。4、如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述第一步l)中，lg單面針?biāo)幉募尤胧兔?0ml加熱回流30分鐘；加入甲醇30ml加熱回流2次，每次1小時。5、如切糸I^步1所^的古法.JL步吉^F右千.所^繁一擊3〗精密吸取單面針?biāo)幉牡墓┰嚻啡芤?0^1。6、如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，所述第一步l)中，殘?jiān)眉状级ㄈ葜?ml。7、如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，所述第一步l)中，供試品溶液高效液相分析前用0.45pm微孔濾膜濾過。8、如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，所述第一步2)中，檢測波長為280nm。9、如權(quán)利要求l所述的單面針?biāo)幉蔫b別方法，其特征在于所述8個共有特征峰的相對保留時間為，l號峰的平均相對保留時間Rt為3.364min，標(biāo)準(zhǔn)偏差SD為0.019;2號峰的平均相對保留時間Rt為4.620min，標(biāo)準(zhǔn)偏差SD為0.008;3號峰的平均相對保留時間Rt為10.772min，標(biāo)準(zhǔn)偏差SD為0.102;4號峰的平均相對保留時間Rt為12.799min,標(biāo)準(zhǔn)偏差SD為0.082;5號峰的平均相對保留時間Rt為13.828min，標(biāo)準(zhǔn)偏差SD為0.101;6號峰的平均相對保留時間Rt為34.015min,標(biāo)準(zhǔn)偏差SD為0.603;7號峰的平均相對保留時間R,為58.820min，標(biāo)準(zhǔn)偏差SD為0.074;8號峰的平均相對保留時間Rt為62.179min，標(biāo)準(zhǔn)偏差SD為0.256。10.<image>imageseeoriginaldocumentpage4</image>全文摘要本發(fā)明涉及一種單面針?biāo)幉牡蔫b別方法，包括建立單面針?biāo)幉牡腍PLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜、以上述相同的方法測定待測單面針?biāo)幉臉悠返闹讣y圖譜和將第二步所測定的待測單面針?biāo)幉臉悠分讣y圖譜與第一步構(gòu)建的單面針標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，篩選符合單面針?biāo)幉臉?biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的合格單面針?biāo)幉摹Ｆ渲?，建立單面針?biāo)幉牡腍PLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜包括制備供試品溶液，在色譜柱為KromasilRP-C184.6mm×250mm，5μm；流動相為乙腈-0.2％磷酸三乙胺溶液；采用梯度洗脫方式0min-10min-30min-70min，乙腈與0.2％磷酸三乙胺溶液的體積比為5∶95-10∶90-10∶90-40∶60；檢測波長280nm；得到單面針?biāo)幉腍PLC指紋圖譜，并通過對30批單面針?biāo)幉牡腍PLC指紋圖譜進(jìn)行比較，確定了其共有指紋特征，得到單面針?biāo)幉牡臉?biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。本發(fā)明為單面針?biāo)幉牡馁|(zhì)量控制和真?zhèn)舞b別提供了一種全新的方法。文檔編號G01N30/02GK101266233SQ200710064499公開日2008年9月17日申請日期2007年3月16日優(yōu)先權(quán)日2007年3月16日發(fā)明者左之文,朱大安,暉滕,王振勇,祝晨陳申請人:株洲千金藥業(yè)股份有限公司