專利名稱：用于檢測對治療性抗IgE抗體特異性的抗體的測定法及其在過敏反應中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一般涉及用于檢測針對治療性抗IgE抗體的屬于IgE同種型的抗藥物抗體的方法和試劑，及用于評估過敏性風險的方法領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
IgE是免疫球蛋白家族的一個成員，介導變態(tài)反應，諸如哮喘、食物過敏、I型超敏感性和熟悉的竇炎(影響廣泛)。IgE由B細胞或B淋巴細胞分泌且在B細胞或B淋巴細胞的表面上表達。IgE經(jīng)由其Fe區(qū)結(jié)合稱作Fe ε RH的低親和カIgE受體而結(jié)合B細胞(以及單核細胞、嗜曙紅細胞和血小板)。在哺乳動物暴露于過敏原時，攜帯表面結(jié)合的對抗原特異性的IgE抗體的B細胞“活化”并發(fā)展成IgE分泌性漿細胞。所得過敏原特異性IgE然后經(jīng)由血流循環(huán)并經(jīng)由也稱作Fe ε RI的高親和カ受體變得結(jié)合組織中肥大細胞和血液中嗜堿性細胞的表面。肥大細胞和嗜堿性細胞由此變得對過敏原敏化。隨后對過敏原的暴露引起嗜堿性細胞和肥大細胞Fe ε RI的交聯(lián)，導致這些細胞的脫粒和組胺、白三烯和血小板活化因子、嗜曙紅細胞和嗜中性細胞趨化因子和細胞因子IL-3、IL-4、IL-5和GM-CSF (它們對臨床超敏感性和過敏性負有責任)的釋放。阻斷IgE-受體復合物形成的拮抗劑作為用于預防變態(tài)反應的治療劑是有用的。已經(jīng)開發(fā)了幾種治療性抗IgE抗體。這些抗IgE抗體阻斷IgE去結(jié)合在嗜堿性細胞和肥大細胞上找到的高親和カ受體Fe ε RI，并由此阻止組胺和其它導致病理狀況的過敏性因子的釋放。已經(jīng)報告了在接受抗IgE抗體,諸如omalizumab (例如Xolair 1)之后在患者中發(fā)生過敏性。過敏性是ー種急性系統(tǒng)性(多系統(tǒng))且很嚴重的I型超敏感性變態(tài)反應。它是由肥大細胞和嗜堿性細胞脫粒引起的且由IgE介導。在2006年，57，269名哮喘患者中124人(約O. 2%)在omalizumab施用之后具有過敏性。雖然沒有omalizumab所致致命過敏性的報告，但是一些病例是嚴重的，而且潛在危及生命的。因為這個原因，F(xiàn)DA推薦在omalizumab施用之后在內(nèi)科醫(yī)師的辦公室中對接受omalizumab的患者監(jiān)測一段時間，而且施用omalizumab的健康護理提供者應當準備好控制可能危及生命的過敏性。報告的病例(124)中百分之六十是在頭兩劑omalizumab之后。因此，可能該反應來自患者中預先存在的識別omalizumab上表位的抗體,而非藥物施用后發(fā)展的抗藥物反應。因為過敏性與屬于IgE同種型的抗體有關(guān)，所以需要開發(fā)用于檢測和量化患者中對治療性抗IgE抗體特異性的IgE的量的測定法以評估過敏性風險(優(yōu)選在此類抗IgE抗體處理之前)及鑒定高風險患者。通過述及完整收錄本文中引用的所有參考文獻，包括專利申請和出版物。
發(fā)明概述在ー個方面，本發(fā)明提供用于檢測樣品中結(jié)合治療性抗IgE抗體的屬于IgE同種型的抗藥物抗體的方法，包括下述步驟a)使可能含有該抗藥物抗體的樣品與相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變的突變型治療性抗體接觸，其中該突變型治療性抗體對IgE (諸如人IgE)的相對結(jié)合親和カ是該治療性抗IgE抗體對該IgE的相對結(jié)合親和カ的約10%或更少；并13)檢測該抗藥物抗體對該突變型治療性抗體的結(jié)合。在一些實施方案中，突變型治療性抗體的相對結(jié)合親和カ是治療性抗IgE抗體的相對結(jié)合親和カ的約7. 5%或更少、約5%或更少、約2. 5%或更少、約2. 0%或更少、約I. 5%或更少、約1%或更少、約O. 9%或更少、約O. 8%或更少、約O. 7%或更少、約O. 5%或更少、約 O. 25%或更少、約O. 1%或更少。在另ー個方面，本發(fā)明提供用于檢測樣品中結(jié)合治療性抗IgE抗體的屬于IgE同種型的抗藥物抗體的方法，包括下述步驟a)使可能含有該抗藥物抗體的樣品與相對于該治療性抗IgE抗體具有至少ー處氨基酸突變的突變型治療性抗體接觸，其中該突變型治療性抗體對IgE (諸如人IgE)的效カ是該治療性抗IgE抗體對該IgE的效カ的約10%或更少；并幻檢測該抗藥物抗體對該突變型治療性抗體的結(jié)合。在一些實施方案中，突變型治療性抗體的效カ是治療性抗IgE抗體的效カ的約7. 5%或更少、約5%或更少、約2. 5%或更少、約2. 0%或更少、約I. 5%或更少、約1%或更少、約O. 9%或更少、約O. 8%或更少、約O. 7%或更少、約O. 5%或更少、約O. 25%或更少、約O. 1%或更少?？梢允褂帽疚闹刑峁┑娜魏瓮蛔冃椭委熜钥贵w。在一些實施方案中，突變型治療性抗體包含治療性抗IgE抗體的重和/或輕鏈的⑶R序列中的ー處、兩處、三處、四處、五處、或六處氨基酸突變。在一些實施方案中，治療性抗IgE抗體是omalizumab，而且突變型治療性抗體包含omalizumab的輕鏈的第一⑶R中的ー處、兩處、或三處氨基酸突變。在一些實施方案中，治療性抗IgE抗體是omalizumab,而且突變型治療性抗體包含omalizumab的輕鏈(SEQ ID NO :1)中第34位(Asp)處的氨基酸替代。在一些實施方案中，突變型治療性抗體包含重鏈氨基酸序列SEQ ID NO :2和輕鏈氨基酸序列SEQID NO :1，其中輕鏈中第30位(Asp)和第34位(Asp)或第32位(Asp)和第34位(Asp)處的氨基酸被替代。在ー些實施方案中，突變型治療性抗體包含重鏈氨基酸序列SEQ ID NO :2和輕鏈氨基酸序列SEQ IDNO :1，其中輕鏈中第30位、第32位、和第34位處的氨基酸D (Asp)被替代。在一些實施方案中，氨基酸Asp被Ala替代。在一些實施方案中，突變型治療性抗體包含重鏈氨基酸序列SEQ ID NO: 2和輕鏈氨基酸序列SEQ ID NO : I及輕鏈中第30位、第32位、和第34位處Asp變成Ala的氨基酸替代。在一些實施方案中，治療性抗IgE抗體是omalizumab，而且突變型治療性抗體包含omalizumab的重鏈的第三⑶R中的ー處、兩處、或三處氨基酸突變。在一些實施方案中，突變型治療性抗體包含重鏈氨基酸序列SEQ ID NO 2和輕鏈氨基酸序列SEQID NO :1，其中重鏈(SEQ ID NO :2)中第 101 位(His)、第 105 位(His)和第 107 位(His)處的氨基酸被替代。在一些實施方案中，氨基酸His被Ala替代。在一些實施方案中，突變型治療性抗體包含重鏈氨基酸序列SEQ IDNO 2及重鏈中第101位、第105位、和第107位處His變成Ala的氨基酸替代和輕鏈氨基酸序列SEQ ID NO :1。在一些實施方案中，將突變型治療性抗體固定化或捕捉至表面。在一些實施方案中，將突變型治療性抗體直接固定化至表面。在一些實施方案中，將突變型治療性抗體與標記物綴合并經(jīng)由特異性結(jié)合該標記物的捕捉劑固定化或捕捉至表面，其中將該捕捉劑固定化至表面。在一些實施方案中，標記物是生物素且捕捉劑是鏈霉親合素。在一些實施方案中，標記物是洋地黃毒苷(digoxigenin)且捕捉劑是抗洋地黃毒苷抗體。在一些實施方案中，使樣品與固定化或捕捉至表面的突變型治療性抗體接觸。在一些實施方案中，在將突變型治療性抗體捕捉至表面之前，使樣品與突變型治療性抗體接觸。在一些實施方案中，在將樣品與突變型治療性抗體接觸之后及在檢測抗藥物抗體對突變型治療性抗體的結(jié)合之前，將突變型治療性抗體捕捉至表面。在一些實施方案中，用檢測劑來檢測抗藥物抗體對突變型治療性抗體的結(jié)合。在一些實施方案中，檢測劑是結(jié)合IgE Fe區(qū)的Fe eRIa多肽?？梢允褂帽疚闹刑峁┑娜魏蜦e ε RI α多肽。在一些實施方案中，F(xiàn)e ε RI α多肽包含F(xiàn)e ε RI α亞基胞外域。在ー些實施方案中，F(xiàn)e ε RI α多肽包含與IgG恒定區(qū)融合的Fe ε RI α亞基胞外域。在一些實施方案中，F(xiàn)e ε RI α多肽是經(jīng)過標記的。在一些實施方案中，標記物選自下組生物素，洋地黃毒 苷，釕，放射性標記物，光致發(fā)光標記物，化學發(fā)光標記物，突光標記物，電化學發(fā)光標記物，和酶標記物。在一些實施方案中，F(xiàn)ceRIa多肽是經(jīng)過生物素標記的，而且通過鏈霉親合素-HRP來檢測抗藥物抗體對突變型治療性抗體的結(jié)合。在一些實施方案中，F(xiàn)e ε RI α多肽是經(jīng)過洋地黃毒苷標記的，而且通過HRP綴合的抗洋地黃毒苷抗體來檢測抗藥物抗體對突變型治療性抗體的結(jié)合。在一些實施方案中，F(xiàn)e ε RI α多肽是經(jīng)過釕標記的，而且通過電化學發(fā)光測定法來檢測抗藥物抗體對突變型治療性抗體的結(jié)合。在一些實施方案中,樣品含有人血清或血衆(zhòng)。在一些實施方案中，樣品含有治療性抗IgE抗體。在一些實施方案中，樣品不含治療性抗IgE抗體。在一些實施方案中，血清或血衆(zhòng)含有omalizumab。在其它實施方案中，血清或血衆(zhòng)不含omalizumab。在一些實施方案中，本發(fā)明的方法進ー步包括將抗藥物抗體對突變型治療性抗體的結(jié)合與參照比較的步驟。在一些實施方案中，參照是在突變型治療性抗體和對照抗體之間檢測到的結(jié)合。在一些實施方案中，對照抗體是以相似親和カ結(jié)合治療性抗IgE抗體和突變型治療性抗體二者的陽性對照抗體。在一些實施方案中，陽性對照抗體包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，該重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO :7所示氨基酸序列，該輕鏈可變區(qū)包含SEQID NO :8所示氨基酸序列。在一些實施方案中，陽性對照抗體進ー步包含來自人IgE的重鏈和輕鏈恒定區(qū)。在另ー個方面，本發(fā)明還提供用于檢測樣品中結(jié)合治療性抗IgE抗體的屬于IgE同種型的抗藥物抗體的試劑盒，包含(a)相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變的突變型治療性抗體，其中該突變型治療性抗體對IgE (諸如人IgE)的相對結(jié)合親和力是該治療性抗IgE抗體對該IgE的相對結(jié)合親和カ的約10%或更少；和b)結(jié)合IgE Fe區(qū)的檢測劑?？梢允褂帽疚闹刑峁┑娜魏瓮蛔冃椭委熜钥贵w。在一些實施方案中，檢測劑是Fe ε RI α多肽。試劑盒中可以包括本文中提供的任何Fe ε RI α多肽。在一些實施方案中，F(xiàn)e ε RI α多肽包含F(xiàn)e ε RI α亞基胞外域。在一些實施方案中，F(xiàn)e ε RI α多肽包含與IgG恒定區(qū)融合的Fe ε RI α亞基胞外域。在一些實施方案中，F(xiàn)e ε RI α多肽是經(jīng)過標記的(諸如用生物素，洋地黃毒苷，釕，等標記的)。在一些實施方案中，試劑盒進ー步包含鏈霉親合素-HRP或Amdex SA-HRP0在一些實施方案中，試劑盒進ー步包含HRP綴合的抗洋地黃毒苷抗體，其用于檢測洋地黃毒苷標記的Fe ε RI α多肽。在一些實施方案中,試劑盒進ー步包含以相似親和カ結(jié)合治療性抗IgE抗體和突變型治療性抗體二者的陽性對照抗體。在一些實施方案中，陽性對照抗體包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，該重鏈可變區(qū)包含SEQ IDNO 7所示氨基酸序列，該輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO :8所示氨基酸序列。在一些實施方案中，陽性對照抗體進ー步包含來自人IgE的重鏈和輕鏈恒定區(qū)。在另ー個方面，本發(fā)明還提供用于檢測樣品中結(jié)合治療性抗IgE抗體的屬于IgE同種型的抗藥物抗體的試劑盒，包含a)相對于該治療性抗 IgE抗體具有至少ー處氨基酸突變的突變型治療性抗體，其中該突變型治療性抗體對IgEa者如人IgE)的效カ是該治療性抗IgE抗體對該IgE的效カ的約10%或更少；和b)結(jié)合IgE Fe區(qū)的檢測劑?？梢允褂帽疚闹刑峁┑娜魏瓮蛔冃椭委熜钥贵w。在一些實施方案中，檢測劑是Fe ε RIa多肽。試劑盒中可以包括本文中提供的任何Fe ε RI α多肽。在一些實施方案中，F(xiàn)e ε RI α多肽包含F(xiàn)e ε RI a亞基胞外域。在一些實施方案中，F(xiàn)e ε RI α多肽包含與IgG恒定區(qū)融合的Fe ε RI α亞基胞外域。在一些實施方案中，F(xiàn)ee RI α多肽是經(jīng)過標記的(諸如用生物素、洋地黃毒苷、釕、等標記的)。在一些實施方案中，試劑盒進ー步包含鏈霉親合素-HRP或Amdex SA-HRP。在一些實施方案中，試劑盒進ー步包含HRP綴合的抗洋地黃毒苷抗體，其用于檢測洋地黃毒苷標記的Fe ε RI α多肽。在一些實施方案中，試劑盒進ー步包含以相似親和カ結(jié)合治療性抗IgE抗體和突變型治療性抗體二者的陽性對照抗體。在一些實施方案中，陽性對照抗體包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，該重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO :7所示氨基酸序列，該輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO :8所示氨基酸序列。在一些實施方案中，陽性對照抗體進ー步包含來自人IgE的重鏈和輕鏈恒定區(qū)。在另ー個方面，本發(fā)明還提供用于檢測樣品中結(jié)合治療性抗IgE抗體的屬于IgE同種型的抗藥物抗體的方法，包括下述步驟(a)使可能含有該抗藥物抗體的樣品與(i)突變型治療性抗體和(ii)結(jié)合人IgE Fe區(qū)的Fe ε RI α多肽接觸，其中該突變型治療性抗體相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變，且該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ是該治療性抗IgE抗體對所述人IgE的相對結(jié)合親和カ的約10%或更少；(b)將該突變型治療性抗體捕捉至表面；并(c)檢測該抗藥物抗體對該突變型治療性抗體的結(jié)合。在一些實施方案中，在步驟(a)中使過量的Fe ε RI α多肽與樣品接觸。在ー些實施方案中,在步驟(a)中使過量至少約2倍、至少約3倍、至少約4倍、至少約5倍、至少約6倍、至少約7倍、至少約8倍、至少約9倍、或至少約10倍的Fe ε RI α多肽與樣品接觸?？梢允褂帽疚闹刑峁┑娜魏蜦e ε RI α多肽。在一些實施方案中，F(xiàn)e ε RI α多肽包含F(xiàn)e ε RI α亞基胞外域。Fe ε RI α多肽可以標記或不標記?？梢允褂帽疚闹刑峁┑娜魏瓮蛔冃椭委熜钥贵w。在一些實施方案中，突變型治療性抗體是經(jīng)過標記的且通過特異性結(jié)合標記物的捕捉劑捕捉至表面。在一些實施方案中，標記物是生物素且用鏈霉親合素包被表面。在一些實施方案中，通過經(jīng)過標記的抗人IgE抗體來檢測抗藥物抗體對突變型治療性抗體的結(jié)合。在一些實施方案中，F(xiàn)e ε RIa多肽是經(jīng)過標記的且通過特異性結(jié)合Fe ε RI α多肽上的標記物的檢測劑來檢測抗藥物抗體對突變型治療性抗體的結(jié)合。在一些實施方案中，F(xiàn)ceRIa多肽是經(jīng)過洋地黃毒苷標記的，而且通過HRP綴合的抗洋地黃毒苷抗體來檢測抗藥物抗體對突變型治療性抗體的結(jié)合。在一些實施方案中，F(xiàn)e ε RI α多肽是經(jīng)過釕標記的，而且通過電化學發(fā)光測定法來檢測抗藥物抗體對突變型治療性抗體的結(jié)合。在另ー個方面，本發(fā)明還提供用于檢測樣品中結(jié)合治療性抗IgE抗體的屬于IgE同種型的抗藥物抗體的試劑盒，包含(a)相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變的突變型治療性抗體，其中該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ是該治療性抗IgE抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ的約10%或更少；和(b)結(jié)合人IgE Fe區(qū)的Fe ε RI α多肽?？梢允褂帽疚闹刑峁┑娜魏瓮蛔冃椭委熜钥贵w?？梢允褂帽疚闹忻枋龅娜魏蜦e ε RI α多肽。在一些實施方案中，試劑盒中提供過量的Fe ε RI α多肽。在ー些實施方案中，F(xiàn)e eRIa多肽是經(jīng)過標記的。在一些實施方案中，試劑盒進ー步包含特異性結(jié)合Fe ε RI α多肽上的標記物的檢測劑。在一些實施方案中，試劑盒進ー步包含抗人IgE抗體。在一些實施方案中,抗人IgE抗體是經(jīng)過標記的。在另ー個方面，本發(fā)明還提供用于檢測樣品中結(jié)合治療性抗IgE抗體的屬于IgE同種型的抗藥物抗體的方法，包括下述步驟(a)將可能含有該抗藥物抗體的樣品與過量的結(jié)合人IgE Fe區(qū)的Fe ε RI α多肽一起預溫育；(b)將來自步驟(a)的經(jīng)過預溫育的樣品與該治療性抗IgE抗體或相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變的突變型治療性抗體一起溫育，而且該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ與該治療性抗IgE抗體對所述人IgE的相對結(jié)合親和カ相比降低；并(c)檢測該抗藥物抗體對該治療性抗IgE抗體或該突變型治療性抗體的結(jié)合?？梢允褂帽疚闹刑峁┑娜魏瓮蛔冃椭委熜钥贵w。在一些實施方案中，突變型治療性抗體相對于治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變,而且突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ是治療性抗IgE抗體對所述人IgE的相對結(jié)合親和カ的約10%或更少。在一些實施方案中，在步驟(a)中將樣品將過量至少約2倍、至少約3倍、至少約4倍、至少約5倍、至少約6倍、至少約7倍、至少約8倍、至少約9倍、或至少約10倍的Fe ε RI α多肽與樣品一起預溫育?？梢允褂帽疚闹刑峁┑娜魏蜦e ε RI α多肽。在一些實施方案中，在步驟(b)中與樣品一起溫育之前或之后將治療性抗IgE抗體或突變型治療性抗體捕捉至表面。在一些實施方案中，在步驟(b)中與樣品一起溫育之前將治療性抗IgE抗體或突變型治療性抗體直接固定化至表面。在一些實施方案中，治療性抗IgE抗體或突變型治療性抗體是經(jīng)過標記的,而且經(jīng)由固定化的特異性結(jié)合標記物的捕捉劑捕捉至表面。在一些實施方案中，治療性抗IgE抗體或突變型治療性抗體是經(jīng)過生物素標記的，而且捕捉至鏈霉親合素包被的表面。在一些實施方案中，通過HRP綴合的抗人IgE抗體來檢測抗藥物抗體對治療性抗體或突變型治療性抗體的結(jié)合。在一些實施方案中，F(xiàn)ceRIa多肽是經(jīng)過標記的，而且通過檢測標記物來檢測抗藥物抗體對治療性抗IgE抗體或突變型治療性抗體的結(jié)合。在一些實施方案中，F(xiàn)e ε RI α多肽是經(jīng)過洋地黃毒苷標記的，而且通過HRP綴合的抗洋地黃毒苷抗體來檢測抗藥物抗體對治療性抗體或突變型治療性抗體的結(jié)合。在一些實施方案中，F(xiàn)e ε RI α多肽是經(jīng)過釕標記的，而且通過電化學發(fā)光測定法來檢測抗藥物抗體對治療性抗IgE抗體或突變型治療性抗體的結(jié)合。
在另ー個方面，本發(fā)明還提供用于檢測樣品中結(jié)合治療性抗IgE抗體的屬于IgE同種型的抗藥物抗體的試劑盒，包含(a)該治療性抗IgE抗體或其突變型治療性抗體，其中該突變型治療性抗體相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變，其中該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ與該治療性抗IgE抗體對人IgE的相對結(jié)合親和力相比降低；和(b)結(jié)合人IgE Fe區(qū)的Fe ε RI α多肽?？梢允褂帽疚闹刑峁┑娜魏瓮蛔冃椭委熜钥贵w。在一些實施方案中，試劑盒進ー步包含抗人IgE抗體。在一些實施方案中，抗人IgE抗體是經(jīng)過標記的?？梢允褂帽疚闹刑峁┑娜魏蜦e ε RI α多肽。在一些實施方案中，F(xiàn)e eRIa多肽是經(jīng)過標記的。在一些實施方案中，試劑盒進ー步包含特異性結(jié)合Fe ε RI α多肽上的標記物的檢測劑。在另ー個方面，本發(fā)明提供鑒定具有針對治療性抗IgE抗體的過敏反應風險的患者的方法，包括下述步驟(a)使來自該患者的樣品與相對于該治療性抗IgE抗體包含至少一處氨基酸突變的突變型治療性抗體接觸，其中該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ是該治療性抗IgE抗體對所述人IgE的相對結(jié)合親和カ的約10%或更少；并(b)檢測屬于IgE同種型的抗藥物抗體對該突變型治療性抗體的結(jié)合，其中該樣品中該抗藥物抗體的存在和/或水平指示該患者具有針對該治療性抗IgE抗體的過敏反應風險。 在另ー個方面，本發(fā)明提供鑒定具有針對治療性抗IgE抗體的過敏反應風險的患者的方法，包括下述步驟(a)使來自該患者的樣品與相對于該治療性抗IgE抗體包含至少一處氨基酸突變的突變型治療性抗體接觸，其中該突變型治療性抗體對人IgE的效カ是該治療性抗IgE抗體對所述人IgE的效カ的約10%或更少；并(b)檢測屬于IgE同種型的抗藥物抗體對該突變型治療性抗體的結(jié)合，其中該樣品中該抗藥物抗體的存在和/或水平指示該患者具有針對該治療性抗IgE抗體的過敏反應風險。在另ー個方面，本發(fā)明提供鑒定具有針對治療性抗IgE抗體的過敏反應風險的患者的方法，包括下述步驟(a)使來自患者的樣品與(i)突變型治療性抗體和(ii)結(jié)合人IgE Fe區(qū)接觸的Fe eRIa多肽，其中該突變型治療性抗體相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變，而且該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ是該治療性抗IgE抗體對所述人IgE的相對結(jié)合親和カ的約10%或更少；(b)將該突變型治療性抗體捕捉至表面；并(c)檢測屬于IgE同種型的抗藥物抗體對該突變型治療性抗體的結(jié)合，其中該樣品中該抗藥物抗體的存在和/或水平指示該患者具有針對該治療性抗IgE抗體的過敏反應風險。在另ー個方面，本發(fā)明提供鑒定具有針對治療性抗IgE抗體的過敏反應風險的患者的方法，包括下述步驟(a)將來自患者的樣品與過量的結(jié)合人IgE Fe區(qū)的Fee RIa多肽一起預溫育；(b)將來自步驟(a)的經(jīng)過預溫育的樣品與該治療性抗IgE抗體或相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變的突變型治療性抗體一起溫育，而且該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ與該治療性抗IgE抗體對所述人IgE的相對結(jié)合親和カ相比降低；并(c)檢測屬于IgE同種型的抗藥物抗體對該治療性抗IgE抗體或該突變型治療性抗體的結(jié)合，其中該樣品中該抗藥物抗體的存在和/或水平指示該患者具有針對該治療性抗IgE抗體的過敏反應風險。在另ー個方面，本發(fā)明提供治療具有IgE介導的病癥的患者的方法，包括下述步驟(a)測定來自該患者的樣品中針對治療性抗IgE抗體的屬于IgE同種型的抗藥物抗體的水平；(b)如果該樣品中該抗藥物抗體的水平?jīng)]有指示該患者具有針對該治療性抗IgE抗體的過敏反應風險的話，對該患者施用有效量的該治療性抗IgE抗體?？梢酝ㄟ^本文中提供的任何方法來測定抗藥物抗體的水平。在另ー個方面，本發(fā)明提供相對于治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變的突變型治療性抗體在制備用于檢測樣品中結(jié)合該治療性抗IgE抗體的屬于IgE同種型的抗藥物抗體的試劑盒中的用途，其中該檢測包括下述步驟(a)使可能含有該抗藥物抗體的樣品與該突變型治療性抗體接觸，其中該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ是該治療性抗IgE抗體對所述人IgE的相對結(jié)合親和カ的約10%或更少；并(b)檢測該抗藥物抗體對該突變型治療性抗體的結(jié)合。在另ー個方面，本發(fā)明提供相對于治療性 抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變的突變型治療性抗體在制備用于檢測樣品中結(jié)合該治療性抗IgE抗體的屬于IgE同種型的抗藥物抗體的試劑盒中的用途，其中該檢測包括下述步驟(a)使可能含有該抗藥物抗體的樣品與該突變型治療性抗體接觸，其中該突變型治療性抗體對人IgE的效カ是該治療性抗IgE抗體對所述人IgE的效カ的約10%或更少；并(b)檢測該抗藥物抗體對該突變型治療性抗體的結(jié)合。在另ー個方面，本發(fā)明提供⑴突變型治療性抗體和(ii)結(jié)合人IgE Fe區(qū)的Fe ε RI α多肽在制備用于檢測樣品中結(jié)合該治療性抗IgE抗體的屬于IgE同種型的抗藥物抗體的試劑盒中的用途，其中該檢測包括下述步驟(a)使可能含有該抗藥物抗體的樣品與(i)該突變型治療性抗體和(ii)該Fe eRIa多肽接觸，其中該突變型治療性抗體相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變，而且該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ是該治療性抗IgE抗體對所述人IgE的相對結(jié)合親和カ的約10%或更少；(b)將該突變型治療性抗體捕捉至表面；并(c)檢測該抗藥物抗體對該突變型治療性抗體的結(jié)
ム
ロ ο在另ー個方面，本發(fā)明提供(i)治療性抗IgE抗體或相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變的突變型治療性抗體和(ii)結(jié)合人IgE Fe區(qū)的Fe eRI α多肽在制備用于檢測樣品中結(jié)合該治療性抗IgE抗體的屬于IgE同種型的抗藥物抗體的試劑盒中的用途，其中該檢測包括下述步驟(a)將可能含有該抗藥物抗體的樣品與過量的該Fe ε RI α多肽一起預溫育；(b)將來自步驟(a)的經(jīng)過預溫育的樣品與該治療性抗IgE抗體或該突變型治療性抗體一起溫育，而且該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ與該治療性抗IgE抗體對所述人IgE的相對結(jié)合親和カ相比降低；并(C)檢測該抗藥物抗體對該治療性抗IgE抗體或該突變型治療性抗體的結(jié)合。在另ー個方面，本發(fā)明提供相對于治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變的突變型治療性抗體在制備用于鑒定具有針對該治療性抗IgE抗體的過敏反應風險的患者的試劑盒中的用途，其中該鑒定包括下述步驟(a)使來自該患者的樣品與該突變型治療性抗體接觸，其中該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ是該治療性抗IgE抗體對所述人IgE的相對結(jié)合親和カ的約10%或更少；并(b)檢測屬于IgE同種型的抗藥物抗體對該突變型治療性抗體的結(jié)合，其中該抗藥物抗體的存在和/或水平指示該患者具有針對該治療性抗IgE抗體的過敏反應風險。在另ー個方面，本發(fā)明提供相對于治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變的突變型治療性抗體在制備用于鑒定具有針對該治療性抗IgE抗體的過敏反應風險的患者的試劑盒中的用途，其中該鑒定包括下述步驟(a)使來自該患者的樣品與該突變型治療性抗體接觸，其中該突變型治療性抗體對人IgE的效カ是該治療性抗IgE抗體對所述人IgE的效カ的約10%或更少；并(b)檢測屬于IgE同種型的抗藥物抗體對該突變型治療性抗體的結(jié)合，其中該樣品中該抗藥物抗體的存在和/或水平指示該患者具有針對該治療性抗IgE抗體的過敏反應風險。在另ー個方面，本發(fā)明提供⑴突變型治療性抗體和(ii)結(jié)合人IgE Fe區(qū)的Fe ε RI α多肽在制備用于鑒定具有針對治療性抗IgE抗體的過敏反應風險的患者的試劑盒中的用途，其中該鑒定包括下述步驟(a)使來自患者的樣品與(i)該突變型治療性抗體和(ii)該Fe eRIa多肽接觸，其中該突變型治療性抗體相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變，而且該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ是該治療性抗IgE抗體對所述人IgE的相對結(jié)合親和カ的約10%或更少；(b)將該突變型治療性抗體捕捉至表面；并(c)檢測屬于IgE同種型的抗藥物抗體對該突變型治療性抗體的結(jié)合，其中該樣品中該抗藥物抗體的存在和/或水平指示該患者具有針對該治療性抗IgE抗體的過敏反應風險。 在另ー個方面，本發(fā)明提供⑴結(jié)合人IgE Fe區(qū)的Fe ε RI α多肽和(ii)治療性抗IgE抗體或相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變的突變型治療性抗體在制備用于鑒定具有針對該治療性抗IgE抗體的過敏反應風險的患者的試劑盒中的用途，其中該鑒定包括下述步驟(a)將來自患者的樣品與過量的該Fe ε RI α多肽一起預溫育；(b)將來自步驟(a)的經(jīng)過預溫育的樣品與該治療性抗IgE抗體或該突變型治療性抗體一起溫育，而且該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ與該治療性抗IgE抗體對所述人IgE的相對結(jié)合親和カ相比降低；并(c)檢測屬于IgE同種型的抗藥物抗體對該治療性抗IgE抗體或該突變型治療性抗體的結(jié)合，其中該樣品中該抗藥物抗體的存在和/或水平指示該患者具有針對該治療性抗IgE抗體的過敏反應風險。在另ー個方面，本發(fā)明還提供包含治療性抗IgE抗體的組合物，其用于治療具有IgE介導的病癥的患者，其中已經(jīng)測定來自該患者的樣品中針對該治療性抗IgE抗體的屬于IgE同種型的抗藥物抗體的水平，而且該樣品中該抗藥物抗體的水平?jīng)]有指示該患者具有針對該治療性抗IgE抗體的過敏反應風險。在另ー個方面，本發(fā)明提供治療性抗IgE抗體，其用于治療具有IgE介導的病癥的患者，其中已經(jīng)測定來自該患者的樣品中針對該治療性抗IgE抗體的屬于IgE同種型的抗藥物抗體的水平，而且該樣品中該抗藥物抗體的水平?jīng)]有指示該患者具有針對該治療性抗IgE抗體的過敏反應風險。要理解，可以組合本文中描述的各個實施方案的ー個、ー些、或所有特征以形成本發(fā)明的其它實施方案。本發(fā)明的這些和其它方面對本領(lǐng)域技術(shù)人員會變得顯而易見。附圖簡述圖IA顯示了抗體E25的輕鏈氨基酸序列(SEQ ID NO :1)。圖IB顯示了抗體E25的重鏈氨基酸序列(SEQ ID NO 2)0 Chothia所定義的CDR區(qū)以粗體顯示，而Kabat所定義的CDR區(qū)以方括號勾劃出來。圖2A是比較E25和E25-AAA突變型對純化的人IgE的結(jié)合親和力的ELISA測定法的圖示。圖2B是顯示E25-AAA突變型對人IgE的結(jié)合相較于E25對人IgE的結(jié)合的圖。E25-AAA突變型對IgE具有比E25小約100倍的親和力。
圖3是治療性抗IgE抗體的效カ測定法的圖示。圖4A是顯示AME2對E25之結(jié)合相較于AME2對E25-AAA突變型之結(jié)合的圖。圖4B是顯示AMElO對E25之結(jié)合相較于AMElO對E25-AAA突變型之結(jié)合的圖。圖4C是顯示AMEl對E25之結(jié)合相較于AMEl對E25-AAA突變型之結(jié)合的圖。圖4D是顯示AME7對E25之結(jié)合相較于AME7對E25-AAA突變型之結(jié)合的圖。圖4E是顯示AME9對E25之結(jié)合相較于AME9對E25-AAA突變型之結(jié)合的圖。圖4F是顯示AME13對E25之結(jié)合相較于AME13對E25-AAA突變型之結(jié)合的圖。圖4G是顯示AME4對E25之結(jié)合相較于AME4對E25-AAA突變型之結(jié)合的圖。圖4H是顯示AME5對E25之結(jié)合相較于AME5對E25-AAA突變型之結(jié)合的圖。圖5顯示了工程化改造為作為測定系統(tǒng)之陽性對照抗體的E25特異性IgE嵌合抗體。嵌合抗體的可變區(qū)來自特異性結(jié)合E25之Fab片段的抗體AME2,而嵌合抗體的恒定區(qū)來自人IgE抗體。 圖6A是用于測試嵌合E25特異性IgE陽性對照抗體對E25抗體或E25-AAA突變型抗體之結(jié)合的測定系統(tǒng)的圖示。圖6B是顯示嵌合的E25特異性IgE陽性對照抗體以相似親和カ結(jié)合E25和25-AAA突變型的圖。圖7是使用E25-AAA突變型抗體檢測屬于IgE同種型的E25特異性抗體之測定法的圖示。圖8顯示用于測定使用E25-AAA突變型抗體檢測屬于IgE同種型的E25特異性抗體之測定法之靈敏度的E25特異性IgE標準曲線。此圖顯示了利用圖7中所述之測定形式的結(jié)果。圖9顯示了在濃度逐漸增加之E25存在下使用E25-AAA突變型抗體檢測屬于IgE同種型的E25特異性抗體之測定法的藥物耐受度。

圖10是用半均質(zhì)ELISA形式檢測屬于IgE同種型的E25特異性抗體之測定法的圖示。圖11是用半均質(zhì)MSD-ECLA形式檢測屬于IgE同種型的E25特異性抗體之測定法的圖示。圖12是用“阻斷”均質(zhì)ELISA形式檢測屬于IgE同種型的E25特異性抗體之測定法的圖示。圖13是用“阻斷”均質(zhì)ELISA形式檢測屬于IgE同種型的E25特異性抗體之測定法的圖示。圖14是用均質(zhì)MSD-ECLA形式檢測屬于IgE同種型的E25特異性抗體之測定法的圖示。圖15是用半均質(zhì)ELISA形式檢測屬于IgE同種型的E25特異性抗體之測定法的圖示。圖15左分圖顯示了使用生物素標記的E25 (或生物素標記的E25突變型)的測定法。圖15右分圖顯示了使用E25 (或E25突變型)的測定法。圖16是用半均質(zhì)ELISA形式檢測屬于IgE同種型的E25特異性抗體之測定法的圖示。圖16左分圖顯示了使用生物素標記的E25 (或生物素標記的E25突變型)的測定法。圖16右分圖顯示了使用E25 (或E25突變型)的測定法。圖17是用半均質(zhì)MSD-ECLA形式檢測屬于IgE同種型的E25特異性抗體之測定法的圖示。圖17左分圖顯示了使用生物素標記的E25 (或生物素標記的E25突變型)的測定法。圖17右分圖顯示了使用E25 (或E25突變型)的測定法。發(fā)明詳述本發(fā)明提供可用于檢測對治療性抗IgE抗體(諸如omalizumab，XOLAIRて)特異性的IgE同種型抗藥物抗體的方法和試劑。開發(fā)此類測定法的挑戰(zhàn)包括區(qū)分內(nèi)源IgE (Fe區(qū)可被抗IgE治療性抗體結(jié)合的IgE)和對治療性抗IgE抗體特異性的IgE的困難，因為內(nèi)源IgE干擾對治療性抗IgE抗體特異性的IgE的檢測。本發(fā)明提供能區(qū)分內(nèi)源IgE和對治療性抗IgE抗體特異性的IgE，且特異性檢測對治療性抗IgE抗體特異性的IgE的方法和試齊 。Α.通用技術(shù)除非另有說明，本發(fā)明的實踐會采用分子生物學(包括重組技術(shù))、微生物學、細 胞生物學、生物化學、和免疫學的常規(guī)技術(shù)，它們在本領(lǐng)域的技術(shù)范圍之內(nèi)。文獻中完整解釋了此類技術(shù)，諸如“Molecular Cloning:ALaboratory Manual”，第 2 版(Sambrooket al. , 1989) ; “Oligonucleotide Synthesis”(M. J. Gait, ed.，1984) ; “AnimalCell Culture” (R. I. Freshney, ed. , 1987) ; “Methods in Enzymology(AcademicPress, Inc. ) ; “Current Protocols in Molecular Biology(F. M. Ausubel etal. , eds. , 1987,及定期更新)；iiPCR: The Polymerase Chain Reaction”(Mullis etal. , eds. , 1994)。除非另有定義，本文中使用的技術(shù)和科學術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員的共同理解相同的含義。Singleton et al. , Dictionary of Microbiology andMolecular Biology,第 2版，J. Wiley & Sons (New York, N. Y. 1994),及 March, AdvancedOrganic Chemistry Reactions, Mechanisms and Structure,第 4 版,John Wiley &Sons (New York, N. Y. 1992),給本領(lǐng)域技術(shù)人員提供了本申請中使用的許多術(shù)語的一般指導。B.定義如本文中使用的，“抗藥物抗體”指如下的抗體，其中該抗體的可變區(qū)結(jié)合治療性抗IgE抗體。例如,本文中描述的可變區(qū)結(jié)合治療性抗體omalizumab的抗體(E25)是抗藥物抗體。術(shù)語“抗體”以最廣義使用，具體涵蓋單克隆抗體(包括全長的單克隆抗體)、多克隆抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)、及抗體片段，只要它們展現(xiàn)出期望的生物學活性或功能?！翱贵w片段”包含全長抗體的一部分，通常是抗體的抗原結(jié)合區(qū)或可變區(qū)?？贵w片段的例子包括Fab、Fab’、F(ab' )2和Fv片段；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子；及由抗體片段形成的多特異性抗體?！癋ab”片段包含輕鏈的可變域和恒定域及重鏈的可變域和第一恒定域(CH1)。F (ab’)2抗體片段包含ー對Fab片段，它們一般在它們羧基末端附近通過鉸鏈半胱氨酸共價連接。還知道抗體片段的其它化學偶聯(lián)形式。“Fv”是包含完整抗原識別和結(jié)合位點的最小抗體片段。此片段由緊密、非共價聯(lián)合的一個重鏈可變區(qū)和一個輕鏈可變區(qū)的ニ聚體組成。從這兩個結(jié)構(gòu)域的折疊中散發(fā)出六個高變環(huán)(重鏈和輕鏈各3個環(huán))，貢獻出抗原結(jié)合的氨基酸殘基并賦予抗體以抗原結(jié)合特異性。然而，即使是單個可變區(qū)(或只包含對抗原特異性的三個CDR的半個Fv)也具有識別和結(jié)合抗原的能力，盡管親和力低于完整結(jié)合位點。術(shù)語“單克隆抗體”在用于本文時指從一群基本上同質(zhì)的抗體獲得的抗體，即構(gòu)成群體的各個抗體相同和/或結(jié)合相同表位，除了生產(chǎn)單克隆抗體的過程中可能產(chǎn)生的可能變體外，此類變體一般以極小量存在。此類單克隆抗體典型地包括包含結(jié)合靶物的多肽序列的抗體，其中靶物結(jié)合多肽序列是通過包括從眾多多肽序列中選擇單一靶物結(jié)合多肽序列在內(nèi)的過程得到的。例如，選擇過程可以是從眾多克隆諸如雜交瘤克隆、噬菌體克隆或重組DNA克隆的集合中選擇獨特克隆。應當理解，選定的靶物結(jié)合序列可進ー步改變，例如為了提高對靶物的親和力、將靶物結(jié)合序列人源化、提高其在細胞培養(yǎng)物中的產(chǎn)量、降低其在體內(nèi)的免疫原性、創(chuàng)建多特異性抗體等，而且包含改變后的靶物結(jié)合序列的抗體也是本發(fā)明的單克隆抗體。與典型地包含針對不同決定簇(表位)的不同抗體的多克隆抗體制備物不 同，單克隆抗體制備物的每種單克隆抗體針對抗原上的単一決定簇。在它們的特異性以外，單克隆抗體制備物的優(yōu)勢在于它們一般未受到其它免疫球蛋白的污染。修飾語“單克隆”指示抗體從基本上同質(zhì)的抗體群獲得的特征，不應解釋為要求通過任何特定方法來生成抗體。例如，有待依照本發(fā)明使用的單克隆抗體可通過多種技術(shù)來生成，包括例如雜交瘤法(例如 Kohler et al. , Nature 256:495(1975);Harlow et al. , Antibodies: A LaboratoryManual, Cold Spring Harbor Laboratory Press,果 2 版,1988;Hammerling et al.,于:Monoclonal Antibodies and T-CelIHybridomas, 563-681, Elsevier, N. Y. , 1981)>重組DNA法(參見例如美國專利No. 4,816, 567)、噬菌體展示技術(shù)(參見例如Clackson etal. ,Nature 352:624-628 (1991);Marks et al.，J. Mol. Biol. 222:581-597(1991);Sidhuet al.，J. Mol. Biol. 338(2) :299-310(2004) ;Lee et al. , J. Mol. Biol. 340(5) :1073-1093(2004) ;Fellouse, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 101 (34) : 12467-12472(2004);及Lee et al. , J. Immunol. Methods 284 (1-2) : 119-132 (2004))、及用于在具有部分或整個人免疫球蛋白基因座或編碼人免疫球蛋白序列的基因的動物中生成人或人樣抗體的技術(shù)(參見例如 WO 1998/24893; WO 1996/34096; WO 1996/33735; W01991/10741; Jakobovits et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:2551(1993);Jakobovits et al. , Nature362:255-258 (1993);Bruggemann et al. , Year in Tmmuno. 7:33(1993);美國專利No. 5，545，806; 5, 569，825; 5, 591，669(都屬于 GenPharm) ; 5, 545，807; WO 1997/17852;美國專利 No. 5，545，807; 5，545，806; 5, 569，825; 5, 625，126; 5, 633，425;及 5，661，016; Marks etal. , Bio/TechnologylO:779-783(1992);Lonberg et al. , Nature 368:856-859(1994);Morrison,Nature368:812-813(1994);Fishwild et al. , Nature Biotechnology 14:845-851 (1996);Neuberger, Nature Biotechnology 14:826 (1996);及 Lonberg andHuszar, Intern. Rev. Tmmunol · 13:65-93(1995)X單克隆抗體在本文中明確包括“嵌合”抗體?！扒逗稀笨贵w(免疫球蛋白)中重鏈和/或輕鏈的一部分與衍生自特定物種或?qū)儆谔囟贵w類別或亞類的抗體中的相應序列相同或同源，而鏈的剰余部分與衍生自另一物種或?qū)儆诹愆`抗體類別或亞類的抗體中的相應序列相同或同源，以及此類抗體的片段，只要它們展現(xiàn)出期望的生物學活性(美國專利No. 4，816，567;及 Morrison et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855(1984))。本文中所使用的人源化抗體是嵌合抗體的ー個子集。非人(例如鼠)抗體的“人源化”形式指最低限度包含衍生自非人免疫球蛋白的序列的嵌合抗體。在極大程度上，人源化抗體指人免疫球蛋白(受體抗體)中的高變區(qū)殘基用具有期望特異性、親和カ和能力的非人物種(供體抗體)諸如小鼠、大鼠、家兔或非人靈長類動物的高變區(qū)殘基替換的免疫球蛋白。在有些情況中，將人免疫球蛋白的Fv框架區(qū)(FR)殘基用相應的非人殘基替換。此外，人源化抗體可包含在受體抗體或供體抗體中沒有找到的殘基。進行這些修飾是為了進ー步改進抗體的性能諸如結(jié)合親和力。一般而言，人源化抗體會包含至少ー個、通常兩個基本上整個如下可變域，其中所有或基本上所有高變環(huán)對應于非人免疫球蛋白的高變環(huán)，且所有或基本上所有FR是人免疫球蛋白序列的FR，盡管FR區(qū)可包含一處或多處提高結(jié)合親和カ的氨基酸替代。FR中這些氨基酸替代的數(shù)目通常在重鏈中不超過6處，在輕鏈中不超過3處。人源化抗體任選還會包含至少部分免疫球蛋白恒定區(qū)(Fe)，通常是人免疫球蛋白的恒定區(qū)。更多細節(jié)參見Jones et al. , Nature321:522-525 (1986);Riechmann et al. , Nature 332:323-329(1988);和 Presta,Curr. Op. Struct. Biol.2:593-596(1992)?！叭丝贵w”指擁有與由人生成的抗體的氨基酸序列對應的氨基酸序列和/或使用用于生成人抗體的任何已知技術(shù)生成的抗體。人抗體的這種定義明確排除包含非人抗原結(jié)合殘基的人源化抗體。術(shù)語“高變區(qū)”、“HVR”或“HV”在用于本文時指抗體可變域中序列上高度可變和/或形成結(jié)構(gòu)上定義的環(huán)的區(qū)域。通常，抗體包含六個HVR:三個在VH中(H1、H2、H3)，三個在VL中(LI、L2、L3)。在天然抗體中，H3和L3展示這六個HVR的最大多祥性，而且認為特別是H3在賦予抗體以精密特異性中發(fā)揮獨特作用。參見例如Xu et al. , Immunity 13:37-45(2000);Johnson and Wu,于:Methods in MolecularBiology 248:1-25 (Lo, ed. , Human Press, Totowa, NJ, 2003) 事實上，僅由重鏈組成的天然存在駱駝(camelid)抗體在缺乏輕鏈時是有功能的且穩(wěn)定的。參見例如Hamers-Casterman et al. , Nature 363:446-448(1993);Sheriff et al. , Nature Struct.Biol.3:733-736(1996)。本文中使用且涵蓋許多HVR的敘述。Kabat互補決定區(qū)(⑶R)是以序列變異性為基礎的，而且是最常用的(Kabat et al. , Sequences of Proteins ofImmunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes ofHealth, Bethesda, MD. (1991))。Chothia 改為指結(jié)構(gòu)環(huán)的位置(Chothia and Lesk J. Mol.Biol. 196:901-917(1987) )。AbM HVR 代表 Kabat HVR 與 Chothia 結(jié)構(gòu)環(huán)之間的折衷，而且得到Oxford Molecular的AbM抗體建模軟件的使用。“接觸”HVR是以對可獲得的復合物晶體結(jié)構(gòu)的分析為基礎的。下文記錄了這些HVR中每ー個的殘基。
環(huán) KabatAbMChothia 接融
LI L24-L34 L24-L34 L26-L32 L30-L36 LI L50-L56 L50-L56 し50-L52 L46-L55 L3 L89-L97 L89-L97 L91-L96 L89-L96
Hl H31-H35B H26-H35B H26-H32 H30-H35B (Kabat編號方式)
Hl H31-H35 H26-H35 H26-H32 H30-H35 (Chothia編號方式)
H2 H50-H65 H50-H58 H53-H55 H47-H58
H3 H95-H102 H95-H102 H96-H101 H93-H101HVR 可包括如下“延伸的 HVR”:VL 中的 24-36 或 24-34 (LI),46-56 或 50-56 (L2)和 89-97 或 89-96 (L3)及 VH 中的 26-35 (Hl)、50_65 或 49-65 (H2)和 93-102、94_102 或95-102 (H3)。對于這些定義中的每ー個，可變域殘基是依照Kabat等，見上文編號的?！翱蚣堋被颉癋R”殘基指可變域中除本文中所定義的HVR殘基外的那些殘基。術(shù)語“如Kabat中的可變域殘基編號方式”或“如Kabat中的氨基酸位置編號方式”及其變化形式指Kabat等，見上文中用于抗體重鏈可變域或輕鏈可變域編輯的編號系統(tǒng)。使用此編號系統(tǒng)，實際的線性氨基酸序列可以包含較少的或另外的氨基酸，對應于可變域FR或HVR的縮短或插入。例如，重鏈可變域可以包含H2殘基52后的單ー氨基酸插入(依照Kabat的殘基52a)和重鏈FR殘基82后的插入殘基(例如依照Kabat的殘基82a、82b和82c等)。給定抗體的Kabat殘基編號可以通過將抗體序列與“標準” Kabat編號序列對比同源區(qū)來確定。Kabat編號系統(tǒng)一般在提及可變域中的殘基(大約是輕鏈殘基1-107和重鏈殘基 1-113)時使用(例如 Kabat et al. , Sequences of Immunological Interest. 5thEd. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)Χ‘ υ編號系統(tǒng)”或“EU索引”一般在提及免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)中的殘基時使用(例如Kabat etal.,見上文中報道的EU索引)。“Kabat中的EU索引”指人IgGlEU抗體的殘基編號方式。除非本文中另有說明，提及抗體可變域中的殘基編號指根據(jù)Kabat編號系統(tǒng)的殘基編號方式。除非本文中另有說明，提及抗體恒定域中的殘基編號指根據(jù)EU編號系統(tǒng)的殘基編號方式(例如參見美國臨時申請No. 60/640, 323，EU編號方式的圖)。術(shù)語“Fe區(qū)”用于定義免疫球蛋白重鏈的C-端區(qū)域，其可以通過用木瓜蛋白酶消化完整抗體而產(chǎn)生。Fe區(qū)可以是天然序列Fe區(qū)或變異Fe區(qū)。雖然免疫球蛋白重鏈Fe區(qū)的邊界可以變化，但是人IgG重鏈Fe區(qū)通常定義為自Fe區(qū)的大約Cys226位置或大約Pro230位置的氨基酸殘基至羧基末端的區(qū)段。免疫球蛋白的Fe區(qū)一般包含兩個恒定域，即CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域，而且任選包含CH4結(jié)構(gòu)域?！癋e區(qū)鏈”在本文中指Fe區(qū)的兩條多肽鏈之一 O“結(jié)合”或“特異性結(jié)合”一般指兩個分子之間(諸如抗體和ー種或多種靶物，抗IgE抗體和IgE，和抗藥物抗體和藥物之間)具有足夠親和カ的結(jié)合。優(yōu)選地，抗體對無關(guān)分子的結(jié)合程度小于抗體對靶物的結(jié)合的約10%，如例如通過放射免疫測定法(RIA)測量的。在一些實施方案中，結(jié)合其靶物的抗體具有彡ΙμΜ、彡ΙΟΟηΜ、彡10nM、彡InM、或彡0. InM的解離常數(shù)(Kd)。
“結(jié)合親和力”通常指分子(例如抗體)的單ー結(jié)合位點與其結(jié)合配偶體(例如抗原)之間全部單價相互作用總和的強度。除非另有說明，在用于本文吋，“結(jié)合親和力”指反映結(jié)合對的成員(例如抗體與抗原)之間I:I相互作用的內(nèi)在結(jié)合親和力。分子X對其配偶體Y的親和カ通?？捎媒怆x常數(shù)(Kd)來表述。親和カ可通過本領(lǐng)域知道的常用方法來測量，包括本文中所描述的那些。低親和カ抗體通常緩慢的結(jié)合抗原且趨于容易解離，而高親和カ抗體通常更快速的結(jié)合抗原且趨于保持更長時間的結(jié)合。本領(lǐng)域知道測量結(jié)合親和力的多種方法，其中任ー種都可用于本發(fā)明的目的。下文描述了測量結(jié)合親和力的具體的示例性和例示性實施方案。在一個實施方案中，依照本發(fā)明的“ Kd”或“ Kd值”是通過如下測定法所述使用Fab型式的目的抗體及其抗原進行的放射性標記抗原結(jié)合測定法(RIA)來測量的通過在存在未標記抗原的滴定系列的條件下，用最小濃度的(125I)標記抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗體包被的平板捕捉結(jié)合的抗原來測量Fab對抗原的溶液結(jié)合親和力(參見例如Chen, et al. , J Mol Biol 293:865-881(1999))。為了確定測定條件，用 50mM 碳酸鈉(pH9. 6)中的 5 μ g/ml 捕捉用抗Fab抗體(Cappel Labs)包被MICROTITER 多孔板(ThermoScientific)過夜，隨后用PBS中的2% (w/v)牛血清清蛋白在室溫(約23° C)封閉2-5小 時。在非吸附平板(Nunc#269620)中，將IOOpM或26pM[125I]-抗原與連續(xù)稀釋的目的Fab混合(例如與 Presta et al. , Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)中抗 VEGF 抗體，F(xiàn)ab-12 的評估一致)。然后將目的Fab溫育過夜；不過，溫育可持續(xù)更長時間(例如約65個小時)以保證達到平衡。此后，將混合物轉(zhuǎn)移至捕捉板以進行室溫溫育(例如I小吋)。然后除去溶液，并用含O. l%Tween-20 的PBS洗板8次。平板干燥后，加入150 μ I/孔閃爍液(MICR0SCINT-20 ；Packard)，然后在T0PC0UNT 伽馬計數(shù)器(Packard)上對平板計數(shù)10分鐘。選擇各Fab給出小于或等于最大結(jié)合之20%的濃度用于競爭性結(jié)合測定法。依照另ー實施方案，Kd或Kd值可以通過表面等離振子共振測定法使用BIACORE -2000 或BIACORE -3000 (BIAcore, Inc. , Piscataway, NJ)在 25。C 使用固定化抗原CM5芯片在約10個響應単位(RU)測量。簡而言之，依照供應商的說明書用鹽酸N-こ基-N’ -(3-ニ甲基氨基丙基)-碳化ニ亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物傳感器芯片(CM5，BIACORE, Inc.)。用IOmMこ酸鈉pH 4. 8將抗原稀釋至5 μ g/ml (約O. 2 μ M)，然后以5 μ I/分鐘的流速注入至獲得約10個響應單位(RU)的偶聯(lián)蛋白質(zhì)。注入抗原后，注入IMこ醇胺以封閉未反應基團。為了進行動力學測量，在25。C以約25 μ I/分鐘的流速注入在含O. 05%TWEEN-20 表面活性劑的PBS (PBST)中兩倍連續(xù)稀釋的Fab (O. 78nM至500nM)。使用簡單一對一朗格繆爾(Langmuir)結(jié)合模型(BIACORE Evaluation Software version 3· 2)通過同時擬合結(jié)合和解離傳感圖計算結(jié)合速率(km)和解離速率(k0ff)o平衡解離常數(shù)(Kd)以比率kof f/kon計算。參見例如Chenet al. , J Mol Biol 293:865-881 (1999)。如果根據(jù)上文表面等離振子共振測定法，結(jié)合速率超過106M-1 s-1，那么結(jié)合速率可使用熒光淬滅技術(shù)來測定，即根據(jù)分光計諸如配備了斷、/I裝Sc白勺分光光度>十(a stop-flow equipped spectrophometer； (Aviv Instruments；或8000系列SLM-AMINC0 分光光度計(ThermoSpectronic)中用攪拌比色杯的測量，在存在濃度漸增的抗原的條件下，測量PBS，pH 7. 2中的20nM抗抗原抗體(Fab形式)在25° C的突光發(fā)射強度(激發(fā)=295nm ;發(fā)射=340nm, 16nm帶通)的升高或降低。
依照本發(fā)明的“結(jié)合速率，，(on-rate,rate of association, association rate)或“kon”也可如上所述使用BIACORE -2000 或BIACORE_ -3000 系統(tǒng)(BIAcore，Inc.，Piscataway, NJ)來測定。短語“基本上相似”或“基本上相同”在用于本文時表示兩個數(shù)值(例如，一個涉及本發(fā)明的抗體而另ー個涉及參照/比較抗體)之間足夠高的相似程度，以致本領(lǐng)域技術(shù)人員會認為在用所述數(shù)值(例如相對結(jié)合親和カ值)所測量的生物學特性背景內(nèi)兩個數(shù)值之間的差異具有很小的或沒有生物學和/或統(tǒng)計學顯著性。作為參照/比較值的函數(shù)，所述兩個數(shù)值之間的差異例如小于約50%、小于約40%、小于約30%、小于約20%、和/或小于約10%。如本文中使用的，術(shù)語“樣品”指自感興趣受試者獲得或衍生的組合物。樣品包括但不限于來自個體的全血、血清、或血漿?！翱侷gE”指樣品中存在的IgE的總量，包括游離的、未結(jié)合的IgE和與結(jié)合配偶復合的IgE?！坝坞xIgE”指未與結(jié)合配偶結(jié)合的IgE。本文中使用的“受試者”、“個體”、或“患者”指哺乳動物，更優(yōu)選人。哺乳動物包括但不限于人、靈長類動物、牲畜、運動用動物(例如馬)、嚙齒類動物、和寵物(例如犬和貓)。如本文中使用的，用于“幫助評估”的方法指幫助做出臨床決策(例如過敏性風險)的方法，而且可以在確定性評估方面是或不是決定性的。如本文中使用的，“參照值”可以是絕對值；相對值；具有上和/或下限的值；值的范圍；平均值；中值；均值；或與特定對照或基線值比較的值。術(shù)語“檢測”以最廣義使用來包括特定分子的定性和定量測量，本文中測量特定分析物分子諸如IgE或抗藥物抗體。在ー個方面，利用本文所描述的檢測方法僅僅來鑒定樣品中感興趣分析物分子的存在。在另ー個方面，可利用檢測方法來量化樣品中分析物分子的量。在又ー個方面，可利用所述方法來測定感興趣分析物分子對靶分子的相對結(jié)合親和力。術(shù)語“檢測劑”和“檢測試劑”可互換使用，指檢測分析物分子的藥劑，或是直接經(jīng)由可連接至檢測劑的標記物，諸如熒光、酶、放射性、或化學發(fā)光標記物，或是間接經(jīng)由經(jīng)過標記的結(jié)合配偶，諸如特異性結(jié)合檢測劑的抗體或受體。檢測劑的例子包括但不限于抗體、抗體片段、可溶性受體、受體片段、等等。“關(guān)聯(lián)”或“聯(lián)系”指以任何方式將第一分析或方案的性能和/或結(jié)果與第二分析或方案的性能和/或結(jié)果進行比較。例如，可以將第一分析或方案的結(jié)果用于實施第二分析或方案，和/或，可以使用第一分析或方案的結(jié)果來決定是否應當實施第二分析或方案。術(shù)語“測定表面”或“表面”表示如下的基片，在它上面可固定化捕捉劑供免疫測定法使用。合適的測定表面包括聚合物測定板、芯片、流動卡(fluidity card),磁珠、樹脂、纖維素聚合物海綿、等等。術(shù)語“結(jié)合域”指多肽中結(jié)合另一分子的區(qū)。在Fe受體多肽或FcR的情況中，結(jié)合域可包含其多肽鏈(例如其α鏈)中負責結(jié)合免疫球蛋白或其它含有Fe區(qū)的分子的Fe區(qū)的部分。ー種有用的結(jié)合域是Fe受體α鏈多肽的胞外域(ECD)。如本文中描述的，F(xiàn)e ε RIa 鏈的胞外域含有結(jié)合Ig，例如IgE Fe區(qū)的結(jié)合域。術(shù)語“捕捉劑”或“捕捉試劑”指能夠結(jié)合和捕捉樣品中靶分子或分析物分子的藥齊U。典型地，捕捉劑或試劑是固定化的，例如在固體基片上，諸如微粒或珠、微量滴定板、柱樹脂、芯片、流動卡、磁珠、纖維素聚合物海綿、等等。捕捉劑可以是抗原、可溶性受體、抗體、不同抗體的混合物、等等?！扒逗稀倍嚯闹溉缦碌亩嚯?，其中多肽序列的一部分衍生自一種物種，而至少一個其它部分對應于自一不同物種衍生的序列。術(shù)語“標記物”在用于本文時指與試劑諸如核酸探針、多肽或抗體直接或間接偶聯(lián)或融合，以便于檢測或捕捉它所偶聯(lián)或融合的試劑的化合物或組合物。標記物可以是自身可檢測的(例如放射性同位素、熒光、發(fā)光、化學發(fā)光、或電化學發(fā)光標記物)，結(jié)合另一分子后可檢測的，或者在酶標記物的情況中，可催化可檢測的底物化合物或組合物的化學改變。術(shù)語“靶分子”指分析物分子的特異性結(jié)合靶。靶分子可以是例如抗原，如果分析 物分子是抗體的話。靶分子可以是例如具有治療活性的多肽或抗體。在一個實施方案中，靶分子是治療性抗體，而分析物分子是結(jié)合該治療性抗體的抗藥物抗體。如本文中使用的，“分析物”和“分析物分子”指通過本發(fā)明的方法分析的分子，而且包括但不限于抗藥物抗體?！爸委煛被颉疤幚怼敝冈噲D改變所治療個體或細胞的自然進程的臨床干預，可以是為了預防或在臨床病理學的進程中進行。治療的期望效果包括預防疾病的發(fā)生或復發(fā)、緩解癥狀、削弱疾病的任何直接或間接病理學后果、減緩疾病進展的速率、改善或減輕疾病狀態(tài)、及免除或改善預后。在有些實施方案中，本文中描述的治療性抗體用于延遲疾病或病癥的發(fā)生或減緩疾病或病癥的進展?！坝行Я俊敝冈诒匦璧膭┝亢蜁r間上有效實現(xiàn)期望的治療或預防效果的量。治療劑的“治療有效量”可根據(jù)諸如個體的疾病狀態(tài)、年齡、性別和重量及該抗體在個體中引發(fā)期望應答的能力等因素而變化。治療有效量還指該治療劑的治療有益效果勝過任何有毒或有害后果的量?！邦A防有效量”指在必需的劑量和時間上有效實現(xiàn)期望的預防效果的量。通常而非必然，由于預防劑量是在疾病發(fā)作之前或在疾病的早期用于受試者的，因此預防有效量會低于治療有效量。如本文中使用的，“保守替代”將選定氨基酸用特征實質(zhì)性不同的另一種替換。依照特征分組的氨基酸包括帶正電荷的氨基酸Lys, Arg, His ;帶負電荷的氨基酸Asp, Glu ；酰胺氨基酸Asn, Gln ;芳香族氨基酸Phe, Tyr, Trp ;疏水性氨基酸Pro, Gly, Ala, Val,Leu, He,Met ;和不帶電荷的親水性氨基酸Ser,Thr。下文顯示了優(yōu)選的保守氨基酸替代保守氨基酸替代
權(quán)利要求
1.一種用于檢測樣品中結(jié)合治療性抗IgE抗體的屬于IgE同種型的抗藥物抗體的方法，包括下述步驟 (a)使可能含有該抗藥物抗體的樣品與相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變的突變型治療性抗體接觸，其中該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ是該治療性抗IgE抗體對所述人IgE的相對結(jié)合親和カ的約10%或更少；并 (b)檢測該抗藥物抗體對該突變型治療性抗體的結(jié)合。
2.權(quán)利要求I的方法，其中該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ是該治療性抗IgE抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ的約5%或更少。
3.權(quán)利要求I或2的方法，其中該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ是該治療性抗IgE抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ的約2. 5%或更少。
4.權(quán)利要求1-3任ー項的方法，其中該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ是該治療性抗IgE抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ的約1%或更少。
5.權(quán)利要求1-4任ー項的方法，其中通過比較在ELISA測定法中對人IgE的結(jié)合來測量相對結(jié)合親和力。
6.一種用于檢測樣品中結(jié)合治療性抗IgE抗體的屬于IgE同種型的抗藥物抗體的方法，包括下述步驟 (a)使可能含有該抗藥物抗體的樣品與相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變的突變型治療性抗體接觸，其中該突變型治療性抗體對人IgE的效カ是該治療性抗IgE抗體對所述人IgE的效カ的約10%或更少；并(b)檢測該抗藥物抗體對該突變型治療性抗體的結(jié)合。
7.權(quán)利要求1-6任ー項的方法，其中該突變型治療性抗體包含該治療性抗IgE抗體重和/或輕鏈CDR序列中的ー處、兩處、三處、四處、五處、或六處氨基酸突變。
8.權(quán)利要求1-7任ー項的方法，其中該治療性抗IgE抗體為omalizumab，且該突變型治療性抗體包含輕鏈第一⑶R中的ー處、兩處、或三處氨基酸突變。
9.權(quán)利要求8的方法，其中該突變型治療性抗體包含重鏈氨基酸序列SEQIDNO 2和輕鏈氨基酸序列SEQ ID NO :1，其中輕鏈中第30位、第32位、和第34位處的氨基酸Asp被替代。
10.權(quán)利要求9的方法，其中該突變型治療性抗體包含重鏈氨基酸序列SEQIDN0:2和輕鏈氨基酸序列SEQ ID NO :1及第30位、第32位、和第34位處氨基酸Asp變成Ala的替代。
11.權(quán)利要求ι- ο任ー項的方法，其中該突變型治療性抗體被捕捉至表面。
12.權(quán)利要求11的方法，其中該突變型治療性抗體被直接固定化至該表面。
13.權(quán)利要求11的方法，其中該突變型治療性抗體是經(jīng)過標記的且經(jīng)由特異性結(jié)合標記物的捕捉劑被捕捉至表面，其中該捕捉劑被固定化至表面。
14.權(quán)利要求13的方法,其中該標記物為生物素且該捕捉劑為鏈霉親合素。
15.權(quán)利要求13的方法,其中該標記物為洋地黃毒苷且該捕捉劑為抗洋地黃毒苷抗體。
16.權(quán)利要求1-15任ー項的方法，其中使該樣品與被捕捉至表面的該突變型治療性抗體接觸。
17.權(quán)利要求1-15任ー項的方法，其中在該突變型治療性抗體被捕捉至表面之前使該樣品與該突變型治療性抗體接觸。
18.權(quán)利要求1-17任ー項的方法，其中用檢測劑來檢測該抗藥物抗體對該突變型治療性抗體的結(jié)合。
19.權(quán)利要求18的方法，其中該檢測劑為結(jié)合人IgEFe區(qū)的Fe ε RI α多肽。
20.權(quán)利要求19的方法，其中該Feε RI α多肽包含F(xiàn)e ε RI α亞基胞外域。
21.權(quán)利要求20的方法，其中該Feε RI α多肽包含與IgG恒定區(qū)融合的Fe ε RI α亞基胞外域。
22.權(quán)利要求19-21任ー項的方法，其中該Feε RI α多肽是經(jīng)過標記的。
23.權(quán)利要求22的方法，其中該Feε RI α多肽上的標記物選自下組生物素，洋地黃 毒苷，釕，放射性標記物，光致發(fā)光標記物，化學發(fā)光標記物，突光標記物，電化學發(fā)光標記物，和酶標記物。
24.權(quán)利要求22或23的方法，其中通過特異性結(jié)合該FeeRIa多肽上的標記物的第ニ檢測劑來檢測該Fe ε RI α多肽上的標記物。
25.權(quán)利要求1-7和11-24任ー項的方法，其中該治療性抗IgE抗體為omalizumab。
26.權(quán)利要求1-25任ー項的方法，其中該樣品含有人血清或血漿。
27.權(quán)利要求26的方法，其中該血清或血漿含有該治療性抗體。
28.權(quán)利要求26的方法，其中該血清或血漿不含該治療性抗體。
29.權(quán)利要求1-28任ー項的方法，進ー步包括將步驟b)中檢測到的該抗藥物抗體對該突變型治療性抗體的結(jié)合與參照比較的步驟。
30.權(quán)利要求29的方法，其中該參照為在該突變型治療性抗體和對照抗體之間檢測到的結(jié)合。
31.權(quán)利要求30的方法，其中該對照抗體為以相似親和カ結(jié)合該治療性抗IgE抗體和該突變型治療性抗體二者的陽性對照抗體。
32.權(quán)利要求31的方法，其中該陽性對照抗體包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，該重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO :7所示氨基酸序列，該輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO :8所示氨基酸序列。
33.一種用于檢測樣品中結(jié)合治療性抗IgE抗體的屬于IgE同種型的抗藥物抗體的試劑盒，包含 (a)相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變的突變型治療性抗體，其中該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ是該治療性抗IgE抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ的約10%或更少；和 (b)結(jié)合人IgEFe區(qū)的檢測劑。
34.權(quán)利要求33的試劑盒，其中該檢測劑為包含F(xiàn)eε RI α亞基胞外域的Fe ε RI α多肽。
35.權(quán)利要求34的試劑盒，其中該Feε RI α多肽包含與IgG恒定區(qū)融合的Fe ε RI α亞基胞外域。
36.權(quán)利要求33-35任ー項的試劑盒，進一歩包含以相似親和カ結(jié)合該治療性抗IgE抗體和該突變型治療性抗體二者的陽性對照抗體。
37.權(quán)利要求36的試劑盒，其中該陽性對照抗體包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，該重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO :7所示氨基酸序列，該輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO :8所示氨基酸序列。
38.一種用于檢測樣品中結(jié)合治療性抗IgE抗體的屬于IgE同種型的抗藥物抗體的試劑盒，包含 (a)相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變的突變型治療性抗體，其中該突變型治療性抗體對人IgE的效カ是該治療性抗IgE抗體對人IgE的效カ的約10%或更少；和 (b)結(jié)合人IgEFe區(qū)的檢測劑。
39.權(quán)利要求38的試劑盒，其中該檢測劑為包含F(xiàn)eε RI α亞基胞外域的Fe ε RI α多肽。
40.權(quán)利要求39的試劑盒，其中該Feε RI α多肽包含與IgG恒定區(qū)融合的Fe ε RI α亞基胞外域。
41.權(quán)利要求38-40任ー項的試劑盒，進一歩包含以相似親和カ結(jié)合該治療性抗IgE抗體和該突變型治療性抗體二者的陽性對照抗體。
42.權(quán)利要求41的試劑盒，其中該陽性對照抗體包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，該重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO :7所示氨基酸序列，該輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO :8所示氨基酸序列。
43.一種用于檢測樣品中結(jié)合治療性抗IgE抗體的屬于IgE同種型的抗藥物抗體的方法，包括下述步驟 (a)使可能含有該抗藥物抗體的樣品與(i)突變型治療性抗體和(ii)結(jié)合人IgEFe區(qū)的Fe ε RI α多肽接觸，其中該突變型治療性抗體相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變，且該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ是該治療性抗IgE抗體對所述人IgE的相對結(jié)合親和カ的約10%或更少； (b)將該突變型治療性抗體捕捉至表面；并 (C)檢測該抗藥物抗體對該突變型治療性抗體的結(jié)合。
44.權(quán)利要求43的方法，其中在步驟(a)中使過量的FeeRIa多肽與該樣品接觸。
45.權(quán)利要求44的方法，其中在步驟(a)中使過量至少約10倍的Feε RI α多肽與該樣品接觸。
46.權(quán)利要求43-45任ー項的方法，其中該Feε RI α多肽包含F(xiàn)e ε RI α亞基胞外域。
47.權(quán)利要求43-46任ー項的方法，其中該突變型治療性抗體是經(jīng)過標記的且通過特異性結(jié)合標記物的捕捉劑被捕捉至表面。
48.權(quán)利要求47的方法，其中該標記物為生物素且該表面經(jīng)鏈霉親合素包被。
49.權(quán)利要求43-48任ー項的方法，其中通過經(jīng)標記的抗人IgE抗體來檢測該抗藥物抗體對該突變型治療性抗體的結(jié)合。
50.權(quán)利要求43-48任ー項的方法，其中該FeeRIa多肽是經(jīng)過標記的且通過特異性結(jié)合該Fe ε RI α多肽上的標記物的檢測劑來檢測該抗藥物抗體對該突變型治療性抗體的彡ロロ。
51.一種用于檢測樣品中結(jié)合治療性抗IgE抗體的屬于IgE同種型的抗藥物抗體的試劑盒，包含 (a)相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變的突變型治療性抗體，其中該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ是該治療性抗IgE抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ的約10%或更少；和 (b)結(jié)合人IgEFe區(qū)的Fe ε RI α多肽。
52.權(quán)利要求51的試劑盒,進ー步包含抗人IgE抗體。
53.權(quán)利要求52的試劑盒,其中該抗人IgE抗體是經(jīng)過標記的。
54.權(quán)利要求51-53任ー項的試劑盒，其中該Feε RI α多肽是經(jīng)過標記的。
55.權(quán)利要求51-54任一項的試劑盒，進ー步包含特異性結(jié)合該Feε RI α多肽上的標記物的檢測劑。
56.一種用于檢測樣品中結(jié)合治療性抗IgE抗體的屬于IgE同種型的抗藥物抗體的方法，包括下述步驟 (a)將可能含有該抗藥物抗體的樣品與過量的結(jié)合人IgEFe區(qū)的Fe ε RI α多肽一起預溫育； (b)將來自步驟(a)的經(jīng)過預溫育的樣品與該治療性抗IgE抗體或相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變的突變型治療性抗體一起溫育，而且該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ與該治療性抗IgE抗體對所述人IgE的相對結(jié)合親和カ相比降低；并 (c)檢測該抗藥物抗體對該治療性抗IgE抗體或該突變型治療性抗體的結(jié)合。
57.權(quán)利要求56的方法，其中該突變型治療性抗體相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變，而且該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ是該治療性抗IgE抗體對所述人IgE的相對結(jié)合親和カ的約10%或更少。
58.權(quán)利要求56或57的方法，其中在步驟(a)中將過量至少約10倍的Feε RI α多肽與該樣品一起預溫育。
59.權(quán)利要求56-58任ー項的方法，其中在步驟(b)中在與該樣品一起溫育之前或之后將該治療性抗IgE抗體或該突變型治療性抗體捕捉至表面。
60.權(quán)利要求56-59任ー項的方法，其中在步驟(b)中在與該樣品一起溫育之前將該治療性抗IgE抗體或該突變型治療性抗體直接固定化至表面。
61.權(quán)利要求56-59任ー項的方法，其中該治療性抗IgE抗體或該突變型治療性抗體是經(jīng)過標記的且經(jīng)由特異性結(jié)合標記物的固定化捕捉劑被捕捉至表面。
62.權(quán)利要求61的方法，其中該治療性抗IgE抗體或該突變型治療性抗體是經(jīng)過生物素標記的且被捕捉至經(jīng)鏈霉親合素包被的表面。
63.權(quán)利要求56-62任ー項的方法，其中通過HRP綴合的抗人IgE抗體來檢測該抗藥物抗體對該治療性抗IgE抗體或該突變型治療性抗體的結(jié)合。
64.權(quán)利要求56-62任ー項的方法，其中該FeeRIa多肽是經(jīng)過標記的，且通過檢測標記物來檢測該抗藥物抗體對該治療性抗IgE抗體或該突變型治療性抗體的結(jié)合。
65.權(quán)利要求64的方法，其中該FeeRIa多肽是經(jīng)過洋地黃毒苷標記的，且通過HRP綴合的抗洋地黃毒苷抗體來檢測該抗藥物抗體對該治療性抗IgE抗體或該突變型治療性抗體的結(jié)合。、
66.權(quán)利要求64的方法，其中該FeeRIa多肽是經(jīng)過釕標記的，且經(jīng)由電化學發(fā)光來檢測該抗藥物抗體對該治療性抗IgE抗體或該突變型治療性抗體的結(jié)合。
67.一種用于檢測樣品中結(jié)合治療性抗IgE抗體的屬于IgE同種型的抗藥物抗體的試劑盒，包含 (a)該治療性抗IgE抗體或其突變型治療性抗體，其中該突變型治療性抗體相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變，其中該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ與該治療性抗IgE抗體對人IgE的 相對結(jié)合親和カ相比降低；和 (b)結(jié)合人IgEFe區(qū)的Fe ε RI α多肽。
68.權(quán)利要求67的試劑盒,進ー步包含抗人IgE抗體。
69.權(quán)利要求68的試劑盒,其中該抗人IgE抗體是經(jīng)過標記的。
70.權(quán)利要求67-69任ー項的試劑盒，其中該Feε RI α多肽是經(jīng)過標記的。
71.權(quán)利要求70的試劑盒，進一歩包含特異性結(jié)合該Feε RIa多肽上的標記物的檢測齊 。
72.—種鑒定具有針對治療性抗IgE抗體的過敏反應風險的患者的方法,包括下述步驟 (a)使來自該患者的樣品與相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變的突變型治療性抗體接觸，其中該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ是該治療性抗IgE抗體對所述人IgE的相對結(jié)合親和カ的約10%或更少；并 (b)檢測屬于IgE同種型的抗藥物抗體對該突變型治療性抗體的結(jié)合，其中該抗藥物抗體的存在和/或水平指示該患者具有針對該治療性抗IgE抗體的過敏反應風險。
73.—種鑒定具有針對治療性抗IgE抗體的過敏反應風險的患者的方法,包括下述步驟 (a)使來自該患者的樣品與相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變的突變型治療性抗體接觸，其中該突變型治療性抗體對人IgE的效カ是該治療性抗IgE抗體對所述人IgE的效カ的約10%或更少；并 (b)檢測屬于IgE同種型的抗藥物抗體對該突變型治療性抗體的結(jié)合，其中該樣品中該抗藥物抗體的存在和/或水平指示該患者具有針對該治療性抗IgE抗體的過敏反應風險。
74.—種鑒定具有針對治療性抗IgE抗體的過敏反應風險的患者的方法,包括下述步驟 (a)使來自患者的樣品與⑴突變型治療性抗體和(ii)結(jié)合人IgEFe區(qū)的Fe ε RI α多肽接觸，其中該突變型治療性抗體相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變，且該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ是該治療性抗IgE抗體對所述人IgE的相對結(jié)合親和カ的約10%或更少； (b)將該突變型治療性抗體捕捉至表面；并 (c)檢測屬于IgE同種型的抗藥物抗體對該突變型治療性抗體的結(jié)合，其中該樣品中該抗藥物抗體的存在和/或水平指示該患者具有針對該治療性抗IgE抗體的過敏反應風險。
75.—種鑒定具有針對治療性抗IgE抗體的過敏反應風險的患者的方法,包括下述步驟 (a)將來自患者的樣品與過量的結(jié)合人IgEFe區(qū)的Fe ε RI α多肽一起預溫育； (b)將來自步驟(a)的經(jīng)過預溫育的樣品與該治療性抗IgE抗體或相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變的突變型治療性抗體一起溫育，而且該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ與該治療性抗IgE抗體對所述人IgE的相對結(jié)合親和カ相比降低；并 (c)檢測屬于IgE同種型的抗藥物抗體對該治療性抗IgE抗體或該突變型治療性抗體的結(jié)合，其中該樣品中該抗藥物抗體的存在和/或水平指示該患者具有針對該治療性抗IgE抗體的過敏反應風險。
76.一種治療具有IgE介導的病癥的患者的方法，包括下述步驟 (a)測定來自該患者的樣品中針對治療性抗IgE抗體的屬于IgE同種型的抗藥物抗體的水平； (b)如果該樣品中該抗藥物抗體的水平?jīng)]有指示該患者具有針對該治療性抗IgE抗體的過敏反應風險的話，對該患者施用有效量的該治療性抗IgE抗體以治療該IgE介導的病癥。
77.權(quán)利要求76的方法，其中通過包括下述步驟的方法來測定該樣品中該抗藥物抗體的水平 (a)使來自該患者的樣品與相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變的突變型治療性抗體接觸，其中該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ是該治療性抗IgE抗體對所述人IgE的相對結(jié)合親和カ的約10%或更少；并 (b)檢測屬于IgE同種型的抗藥物抗體對該突變型治療性抗體的結(jié)合。
78.權(quán)利要求76的方法，其中通過包括下述步驟的方法來測定該樣品中該抗藥物抗體的水平 (a)使來自該患者的樣品與相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變的突變型治療性抗體接觸，其中該突變型治療性抗體對人IgE的效カ是該治療性抗IgE抗體對所述人IgE的效カ的約10%或更少；并 (b)檢測屬于IgE同種型的抗藥物抗體對該突變型治療性抗體的結(jié)合。
79.權(quán)利要求76的方法，其中通過包括下述步驟的方法來測定該樣品中該抗藥物抗體的水平 (a)使來自患者的樣品與⑴突變型治療性抗體和(ii)結(jié)合人IgEFe區(qū)的Fe ε RI α多肽接觸，其中該突變型治療性抗體相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變，且該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ是該治療性抗IgE抗體對所述人IgE的相對結(jié)合親和カ的約10%或更少； (b)將該突變型治療性抗體捕捉至表面；并 (c)檢測屬于IgE同種型的抗藥物抗體對該突變型治療性抗體的結(jié)合。
80.權(quán)利要求76的方法，其中通過包括下述步驟的方法來測定該樣品中該抗藥物抗體的水平 (a)將來自患者的樣品與過量的結(jié)合人IgEFe區(qū)的Fe ε RI α多肽一起預溫育； (b)將來自步驟(a)的經(jīng)過預溫育的樣品與該治療性抗IgE抗體或相對于該治療性抗IgE抗體包含至少ー處氨基酸突變的突變型治療性抗體一起溫育，而且該突變型治療性抗體對人IgE的相對結(jié)合親和カ與該治療性抗IgE抗體對所述人IgE的相對結(jié)合親和カ相比降低；并 (c)檢測屬于IgE同種型的抗藥物抗體對該治療性抗IgE抗體或該突變型治療性抗體的結(jié)合。
全文摘要
本發(fā)明提供對檢測針對治療性抗IgE抗體的屬于IgE同種型的抗藥物抗體有用的方法和試劑，及用于評估針對治療性抗IgE抗體施用的過敏性的風險的方法。
文檔編號G01N33/53GK102695956SQ201080059348
公開日2012年9月26日 申請日期2010年10月26日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月26日
發(fā)明者D.L.貝克, G.R.納卡穆拉, H.B.洛曼, S.菲舍爾 申請人:基因泰克公司