專利名稱：冬凌草莖水提物、其制備方法、指紋圖譜及作為抗血栓劑的應(yīng)用的制作方法
冬凌草莖水提物、其制備方法、指紋圖譜及作為抗血栓劑的應(yīng)用發(fā)明領(lǐng)域
本發(fā)明涉及冬凌草莖用蒸餾水80°C提取制備水提物、涉及該水提物的HPLC-(-)ES1-Q-TOF-MS/MS指紋圖譜、涉及該水提物的HPLC-(+) ES1-Q-TOF-MS/MS指紋圖譜、進一步涉及該水提物在大鼠血栓形成模型上的抗血栓活性及作為抗血栓劑的應(yīng)用。本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
血栓性疾病是一種常見的心腦血管病，常表現(xiàn)為心肌梗死、缺血性腦梗死、靜脈血栓栓塞等。每年每一千人之中就有I 3人發(fā)生不同形式的血栓性疾病。血栓性疾病嚴(yán)重地影響人類健康。預(yù)防血栓形成，是人類社會面監(jiān)的重要課題。目前監(jiān)床常用抗栓藥物預(yù)防血栓形成。由于這些藥物都存在著這樣或那樣的缺點。例如可引起出血、損傷肝臟、損傷胃黏膜以及停藥之后血栓反彈。尋找安全、有效、無出血反應(yīng)、不損傷肝臟和胃黏膜的抗栓藥物是新藥研究的重要方向。
冬凌草(DLC),是唇形科香茶菜屬植物碎米極Rabdosia rubescens (Hemsl.) Hara的全草。冬凌草為多年生草本植物，廣泛分布于我國黃河長江流域，主產(chǎn)于河南濟源太行山、王屋山區(qū)一帶。因具有清熱解毒、清咽利喉和消腫止痛功能，民間常年將冬凌草葉當(dāng)作茶葉煮水飲用。
在過去的30多年里，冬凌草的化學(xué)成分及藥理作用研究主要集中在葉的脂溶性部分，代表性成分為冬凌草甲素和冬凌草乙素。迄今沒有任何與冬凌草莖的化學(xué)成分及藥理作用相關(guān)的研究見諸文獻。與葉相比，雖然冬凌草莖在全草中所占的比例高很多，但是冬凌草莖并沒有被有效地應(yīng)用于人類 的健康事業(yè)。
通過長期的抗血栓藥物研究積累，發(fā)明人鎖定酚酸與二萜為具有抗血栓活性的結(jié)構(gòu)類型。通過生源分析發(fā)明人預(yù)測到冬凌草莖中含豐富的酚酸與二萜。按照這些認(rèn)識，發(fā)明人提出本發(fā)明，用 HPLC-(-)ES1-Q-TOF-MS/MS 指紋圖譜和 HPLC-(+)ES1-Q-TOF-MS/MS 指紋圖譜揭示冬凌草莖水提物的化學(xué)成分、用大鼠血栓形成模型揭示冬凌草莖水提物的抗血栓作用。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的第一個技術(shù)問題是提供一種制備冬凌草莖水提物的方法。
本發(fā)明所要解決的第二個技術(shù)問題是建立HPLC-㈠ES1-Q-TOF-MS/MS和HPLC-(+)ES1-Q-TOF-MS/MS分析方法，獲取冬凌草莖水提物的指紋圖譜以便控制冬凌草莖水提物的質(zhì)量。
本發(fā)明所要解決的第三個技術(shù)問題是用大鼠血栓形成模型評價冬凌草莖水提物的抗血栓作用，為預(yù)防血栓性疾病提供冬凌草莖水提物作為抗血栓活性高無副作用的物質(zhì)。
本發(fā)明涉及冬凌草莖水提物的制備工藝，該工藝包括冬凌草莖用熱水提取、水提物過濾、濾液減壓濃縮至干、得到的干粉用HPLC-㈠ES1-Q-TOF-MS/MS和HPLC- (+)ES1-Q-TOF-MS/MS分析得指紋圖譜、得到的干粉用大鼠血栓形成模型評價冬凌草莖水提物的抗血栓作用。
為了進一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實施例。這些實施例完全是例證性的，它們僅用來對本發(fā)明進行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對本發(fā)明的限制。


圖1a冬凌草莖水提物在(_) ES1-Q-OF-MS檢測的離子流指紋圖譜
圖1b冬凌草莖水提物在(+) ES1-Q-TOF-MS檢測的離子流指紋圖譜具體實施方式
實施例1冬凌草莖水提物的制備
40g干冬凌草莖自來水洗凈、涼干、切成大約1cm長的莖段、加1000-1800mL溫度為70-900C的熱蒸鎦水滲濾，優(yōu)選加1200mL溫度為80°C的熱蒸鎦水滲濾。滲濾液流出的速度為10-30mL/分鐘，優(yōu)選20mL/分鐘。流出液于40_60°C減壓濃縮，優(yōu)選于50°C減壓濃縮，得到3g冬凌草莖水提物，為淡黃色固體。研成粉末，供后面的研究使用。
實施例2 冬凌草莖水提物的 HPLC-(-) ES1-Q-TOF-MS/MS 和 HPLC-(+)ES1-Q-TOF-MS/MS 指紋圖譜
HPLC:ffaters 2795Separations Module ；
Detector:ffaters 2489Dual absorbance detector ；
Kromasil C18 (Dikma)反相柱(5_ μ m, 250_mm_X_4.6_mm)；
保護柱(5_μ m, 10_mm_X_4.6_mm)；
流動相:乙腈/水(含0.5 %和0.05 %冰醋酸)；
流動相流速:0.3ml/min ;
進樣量:50μ1;
洗脫方式:梯度洗脫(具體梯度見表1)。
表I冬凌草莖水提物HPLC-分析流動相梯度表a
權(quán)利要求
1.冬凌草莖水提物的制備工藝，該工藝包括將干冬凌草莖用自來水洗凈之后切碎，按I: 40 (g/mL)的比例用70-90°C的熱水滲濾，滲濾液流出的速度為10-30mL/分鐘，流出液于40-60°C減壓濃縮，得到冬凌草莖水提物干粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中干冬凌草莖與用于滲濾的熱水的比例為I: 30(g/mL)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中用于滲濾的熱水的溫度為80°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中滲濾液流出的速度為20mL/分鐘。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中流出液減壓濃縮的溫度為50°C。
6.權(quán)利要求1-6的任一方法制備得到的冬凌草莖水提物，其特征在于該冬凌草莖水提物減壓濃縮得到的干粉為淡黃色固體。
7.冬凌草莖水提物的HPLC-PAD/(-)ES1-MS-MS指紋圖譜。
8.冬凌草莖水提物的HPLC-PAD/(+)ES1-MS-MS指紋圖譜。
9.冬凌草莖水提物作為抗血栓劑的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及冬凌草莖用蒸餾水80℃提取制備水提物、涉及該水提物的HPLC-(-)ESI-Q-TOF-MS/MS指紋圖譜、涉及該水提物的HPLC-(+)ESI-Q-TOF-MS/MS指紋圖譜、進一步涉及該水提物在大鼠血栓形成模型上的抗血栓活性及作為抗血栓劑的應(yīng)用。
文檔編號G01N30/02GK103142690SQ20111040658
公開日2013年6月12日 申請日期2011年12月7日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月7日
發(fā)明者彭師奇, 趙明, 姚興河, 彭莉 申請人:彭莉