專利名稱：檢測肉制品中恩拉霉素殘留的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及檢測肉制品中恩拉霉素殘留的方法，屬于食品檢測技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
恩拉霉素(Enramycin)，又名恩來霉素、恩霉素、安來霉素、持久霉素，是由土壤中分離出來的放線菌Streptomyces fungicidious N0.B5477發(fā)酵產(chǎn)生的一種多肽類抗生素。該藥于1966年由日本武田藥品工業(yè)株式會社研發(fā)，1974年在日本正式注冊，其后在許多國家被注冊和廣泛使用。該藥對金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、檸檬色葡萄球菌、釀膿鏈球菌、肺炎球菌、枯草桿菌、炭疽桿菌、破傷風(fēng)梭菌、肉毒梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌等革蘭氏陽性菌有很強的殺菌活性，可通過抑制腸道中有害細菌的生長和繁殖來改變腸道內(nèi)的菌群平衡，增加飼料中營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和利用。長期使用該藥，不易產(chǎn)生耐藥性，與其他抗生素之間不產(chǎn)生明顯交叉耐藥，同時有化學(xué)性能穩(wěn)定，無致突、致畸、致癌作用，不易被吸收，殘留少，適口性好等優(yōu)勢，因此被世界上許多國家推薦作為抗生素促生長劑，常作為飼料添加劑用于促進動物增重和提高飼料利用效率。1988年我國農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)進口該藥，現(xiàn)在已有恩拉霉素預(yù)混料銷售，并且呈現(xiàn)良好的市場發(fā)展前景。隨著全球貿(mào)易自由化進程的加快，以及“二噁英”、藥物殘留等有毒有害物質(zhì)造成的重大動物源性食品污染事件的頻發(fā)，世界各國都構(gòu)筑起各具特色的動物產(chǎn)品質(zhì)量安全管理體系，從法律法規(guī)體系、檢驗檢疫監(jiān)管體系、標(biāo)準(zhǔn)體系、認(rèn)證體系等方面來保證動物源性產(chǎn)品的質(zhì)量安全。由于對動物產(chǎn)品藥殘檢測研究起步較晚，我國的藥殘檢測標(biāo)準(zhǔn)和檢測水平落后于發(fā)達國家。發(fā)達國家憑借在科技、管理、環(huán)保等方面的優(yōu)勢，從技術(shù)法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)、合格評定程序等方面對我國動物產(chǎn)品出口不斷設(shè)置新的“綠色貿(mào)易壁壘”門檻，致使在我國國內(nèi)合格的動物產(chǎn)品在出口后被進口國檢出抗生素、農(nóng)藥、獸藥殘超標(biāo)而被退回或銷毀的事件屢見不鮮，造成的直接和間接經(jīng)濟損失在百億美元以上。因此，提高我國動物產(chǎn)品藥殘的檢測水平勢在必行。獸藥殘留檢測是復(fù)雜混合物中痕量組分的分析技術(shù)，抗生素的殘留量一般都在微克到納克級，經(jīng)典的化學(xué)分析法無法檢測或定量不夠準(zhǔn)確，因此要求殘留抗生素檢測法必須達到靈敏、快速、高效?？股貧埩魴z測法總體可以歸為3大類:微生物檢測法、理化檢測法和免疫分析技術(shù)。微生物檢測法是應(yīng)用較廣泛的方法，其測定原理是根據(jù)抗生素對微生物的生理機能、代謝的抑制作用，來定性或定量確定樣品中抗生素微生物藥物殘留，其衍生出的紙片法(PD)對氯霉素最低檢出量0.01mg/L ;氯化三苯基四氮唑法(tripheye tetrazoliumchloride, TTC法)對青霉素的最低檢出量為0.004IU/mL ;管碟法對青霉素的敏感度為0.01U/mL ;戴爾沃檢測法(SP)其靈敏度為:青霉素3ng/mL，鏈霉素300ng/mL，慶大霉素400ng/mL。隨著研究的深入，還出現(xiàn)了拭子法、牛的抗生素和磺胺實驗法(CAST)、快速抗生素篩選法(FAST)等更為靈敏、準(zhǔn)確、簡便、快速的微生物檢測方法。微生物檢測方法能檢測出接近最高殘留限量濃度水平的樣品，能夠進行大批量、快速、靈敏的測定，且可以非實驗室環(huán)境下進行。微生物檢測法具有不需要特殊設(shè)備、操作簡單、易推廣、靈敏度高、適用于大批量樣品的同時檢測等優(yōu)點，缺點是操作繁瑣，檢測周期長，環(huán)境要求高，顯色狀態(tài)判斷通過肉眼判斷，其結(jié)果的主觀性強。理化檢測法是利用抗生素分子中的基團所具有的特殊反應(yīng)或性質(zhì)來測定其含量，如高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜法(GC)、質(zhì)譜法、聯(lián)用技術(shù)等，能進行定性、定量和藥物鑒定，敏感性較高，但有的檢測程序較復(fù)雜，檢測成本高，儀器設(shè)備要求高，操作規(guī)范嚴(yán)格。免疫分析技術(shù)是目前最理想的殘留篩選性分析方法之一。在目前藥物殘留分析中主要分為兩大類:一為相對獨立的分析方法，即免疫測定法(Immunoassays, IAs),如RIA、ELESA、固相免疫傳感器等；二是將免疫分析技術(shù)與常規(guī)理化分析技術(shù)聯(lián)用，如免疫親合色譜(IAC)，它可使獸藥殘留分析將免疫技術(shù)的高選擇性和理化技術(shù)的快速分離和靈敏性融為一體，避免了 IA直接測定樣本信息量太少、假陽性或理化分析技術(shù)選擇性低等不足，分析過程簡化。IAC-HPLC或IAC-GC是常見的聯(lián)用方式，如氯霉素、阿維菌素和伊維菌素等殘留分析。未來獸藥殘留分析技術(shù)中的免疫分析技術(shù)將向試劑標(biāo)準(zhǔn)化、使用更靈敏和抗干擾性強的標(biāo)記物和理化分析技術(shù)聯(lián)用方向發(fā)展。

免疫分析技術(shù)與常規(guī)的理化分析技術(shù)相比，最突出的優(yōu)點是操作簡單，速度快、分析成本低。如ELISA法，免疫測定方法取樣量小，前處理簡單，容量大，儀器化程度低，檢測與GC/MS或GC/ECD相似，可達到ng/g-pg/g級，分析效率則為HPLC或GC的幾十倍以上。目前大部分抗生素已經(jīng)建立了免疫測定法，如磺胺二甲嘧啶、氯霉素、沙拉沙星、鏈霉素、四環(huán)素、莫能菌素等。ELISA試劑盒是目前使用最廣泛、快速、靈敏的檢測抗生素殘留的方法，但是各類抗生素試劑盒多為國外生產(chǎn)，使得國內(nèi)檢測花費非常大，如德國拜耳公司生產(chǎn)的抗生素檢測試劑盒，一個96次檢測試劑盒要花3800元，每個樣品的檢測要花3(Γ50元，因此很有必要研制和開發(fā)出國產(chǎn)的試劑盒，以降低成本，提高經(jīng)濟效益。日本已建立畜、水產(chǎn)性食品中恩拉霉素殘留檢測方法，我國建立了恩拉霉素預(yù)混料和飼料級的檢測，袁而森(1999)在此基礎(chǔ)上探索過對肉制品殘留檢測，檢測限量為0.3ppm，其檢測方法都是微生物檢測法。Horie (1985)利用高效液相色譜分析豬、雞肌肉恩拉霉素殘留，檢測限量為0.2ppm。恩拉霉素的ELISA檢測方法和試劑盒都未曾見報道。由于目前世界各國的食品安全衛(wèi)生控制指標(biāo)限量逐步降低，食源性危害關(guān)鍵檢測技術(shù)趨向高科技化、系列化(多殘留檢測)、速測化、器具便攜化，建立新的高敏感度、便攜化的、低成本的恩拉霉素藥殘檢測方法以適應(yīng)現(xiàn)在的動物產(chǎn)品檢驗檢疫要求是非常有必要的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種檢測限更低的檢測肉制品中恩拉霉素殘留的方法。本發(fā)明檢測肉制品中恩拉霉素殘留的方法包括如下步驟:a、分別將待檢測肉制品提取液和系列濃度的恩拉霉素標(biāo)準(zhǔn)液加入到預(yù)包被恩拉霉素抗原的微孔中；其中，所述的肉制品提取液采用下述方法制備得到:取待檢測肉制品剪碎，勻衆(zhòng)，加濃度為50%v/v的甲醇-水溶液，勻漿，用濃HCl調(diào)整pH值3.5 4.0,混勻，8000 12000rpm離心8 12min，取上清液，用NaOH調(diào)節(jié)pH值至8.0,8000 12000離心8 12min，取上清液，即得待檢測肉制品提取液；所述的恩拉霉素抗原采用申請?zhí)枮镃N201010556432.2的方法制備得到；b、然后于各微孔中加入抗恩拉霉素抗體，混勻后孵育；C、于各微孔中加入辣根過氧化物酶HRP—羊抗兔IgG，混合后孵育；d、分別于各微孔中加入底物溶液，顯色；e、分別于各微孔中加入終止液終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀讀取各孔0D450值；f、對照恩拉霉素標(biāo)準(zhǔn)液所得的曲線回歸方程，計算出待檢測肉制品中的恩拉霉素含量。其中，采用a步驟中的方法制備肉制品提取液可以提高待檢測肉制品中的恩拉霉素的溶解性和回收率，同時還提高了提取液中的恩拉霉素的穩(wěn)定性。其中，本發(fā)明檢測肉制品中恩拉霉素殘留的方法，所述的恩拉霉素抗原可以采用申請?zhí)枮镃N201010556432.2，發(fā)明名稱為“一種恩拉霉素完全抗原的合成方法”的專利申請公開的方法制備得到。 其中，為了節(jié)約成本，本發(fā)明方法的b步驟中加入的抗恩拉霉素抗體可以采用含有抗恩拉霉素抗體的血清代替。其中，OD值為1.0左右時的抗原抗體濃度為最適工作濃度，經(jīng)本發(fā)明的發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明方法的a步驟中所述的預(yù)包被恩拉霉素抗原的包被濃度為2.30ug/mL, b步驟中加入的含有抗恩拉霉素抗體的血清的稀釋度為1:10000。此時抗原抗體濃度為最適工作濃度。其中，上述檢測肉制品中恩拉霉素殘留的方法，其e步驟中所述的終止液可以為ELISA法酶聯(lián)免疫實驗常用的終止液，如硫酸溶液。進一步的，本發(fā)明檢測肉制品中恩拉霉素殘留的方法，優(yōu)選包括如下步驟:a、分別將待檢測肉制品提取液和系列濃度的恩拉霉素標(biāo)準(zhǔn)液加入到預(yù)包被恩拉霉素抗原的微孔中；待檢測肉制品提取液和系列濃度的恩拉霉素標(biāo)準(zhǔn)液的加入量為50uL/孔；b、然后于各微孔中加入含有抗恩拉霉素抗體的血清50uL/孔，血清稀釋度為1:10000，37°C孵育lh，洗滌，拍干；C、于各微孔中加入辣根過氧化物酶HRP—羊抗兔IgGl:20000倍稀釋，IOOuL/孔，混合后于37°C孵育lh，洗滌，拍干；d、分別于各微孔中加入IOOuL底物溶液(可以為ELISA酶聯(lián)免疫實驗常用的底物溶液)，37°C顯色IOmin ；e、分別于各微孔中加入終止液2moL/mLH2S04終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀讀取各孔OD45tl值；f、以無恩拉霉素抑制時OD值為Bo,各相應(yīng)濃度恩拉霉素抑制時的OD450值為B值，以B/Bo為縱坐標(biāo)，以恩拉霉素濃度的對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，建立回歸方程，對照恩拉霉素標(biāo)準(zhǔn)液所得的曲線回歸方程，計算出待檢測肉制品中的恩拉霉素含量。其中，本發(fā)明方法適合于所有常見的肉制品，比如:為豬肉、羊肉、牛肉、雞肉、鴨肉、鵝肉、魚肉中至少一種，優(yōu)選為雞肉。
本發(fā)明方法對肉制品中的恩拉霉素的檢測限范圍為8.9ng/mL 982ng/mL，其靈敏度遠高于現(xiàn)有方法，取得了意料不到的技術(shù)效果。本發(fā)明方法提高了肉制品中的恩拉霉素的檢測限，其檢測范圍為:8.9ng/mL 982ng/mL,比已有的微生物檢測法更快捷、簡便、靈敏和靈活，同時也比高效液相色譜法的檢測成本更低，本發(fā)明為肉制品中的恩拉霉素殘留的檢驗提供了一種可行的方法，具有廣闊的應(yīng)用前景。


圖1為恩拉霉素抗血清效價測定曲線圖；圖2為恩拉霉素抗原抗體工作濃度的方陣滴定曲線圖；圖3為檢測恩拉霉素的間接競爭性ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
具體實施例方式本發(fā)明檢測肉制品中恩拉霉素殘留的方法包括如下步驟:a、分別將待檢測肉制品提取液和系列濃度的恩拉霉素標(biāo)準(zhǔn)液加入到預(yù)包被恩拉霉素抗原的微孔中；其中，所述的肉制品提取液采用下述方法制備得到:取待檢測肉制品剪碎，勻衆(zhòng)，加濃度為50%v/v的甲醇-水溶液，勻漿，用濃HCl調(diào)整pH值3.5 4.0，混勻，8000 12000rpm離心8 12min，取上清液，用NaOH調(diào)節(jié)pH值至8.0,8000 12000離心8 12min，取上清液，即得待檢測肉制品提取液；所述的恩拉霉素抗原采用申請?zhí)枮镃N201010556432.2的方法制備得到；b、然后于各微孔中加入抗恩拉霉素抗體，混勻后孵育；C、于各微孔中加入辣根過氧化物酶HRP-羊抗兔IgG，混合后孵育；d、分別于各微孔中加入底物溶液，顯色；e、分別于各微孔中加入終止液終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀讀取各孔OD450值；f、對照恩拉霉素標(biāo)準(zhǔn)液所得的曲線回歸方程，計算出待檢測肉制品中的恩拉霉素含量。其中，采用a步驟中的方法制備肉制品提取液可以提高待檢測肉制品中的恩拉霉素的溶解性和回收率，同時還提高了提取液中的恩拉霉素的穩(wěn)定性。其中，本發(fā)明檢測肉制品中恩拉霉素殘留的方法，所述的恩拉霉素抗原可以采用申請?zhí)枮镃N201010556432.2，發(fā)明名稱為“一種恩拉霉素完全抗原的合成方法”的專利申請公開的方法制備得到。其中，為了節(jié)約成本，本發(fā)明方法的b步驟中加入的抗恩拉霉素抗體可以采用含有抗恩拉霉素抗體的血清代替。其中，OD值為1.0左右時的抗原抗體濃度為最適工作濃度，經(jīng)本發(fā)明的發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明方法的a步驟中所述的預(yù)包被恩拉霉素抗原的包被濃度為2.30ug/mL, b步驟中加入的含有抗恩拉霉素抗體的血清的稀釋度為1:10000。此時抗原抗體濃度為最適工作濃度。其中，上述檢測肉制品中恩拉霉素殘留的方法，其e步驟中所述的終止液可以為ELISA法酶聯(lián)免疫實驗常用的終止液，如硫酸溶液。
進一步的，本發(fā)明檢測肉制品中恩拉霉素殘留的方法，優(yōu)選包括如下步驟:a、分別將待檢測肉制品提取液和系列濃度的恩拉霉素標(biāo)準(zhǔn)液加入到預(yù)包被恩拉霉素抗原的微孔中；待檢測肉制品提取液和系列濃度的恩拉霉素標(biāo)準(zhǔn)液的加入量為50uL/孔；b、然后于各微孔中加入含有抗恩拉霉素抗體的血清50uL/孔，血清稀釋度為1:10000，37°C孵育lh，洗滌，拍干；C、于各微孔中加入辣根過氧化物酶HRP—羊抗兔IgGl:20000倍稀釋，IOOuL/孔，混合后于37°C孵育lh，洗滌，拍干；d、分別于各微孔中加入IOOuL底物溶液(可以為ELISA酶聯(lián)免疫實驗常用的底物溶液)，37°C顯色IOmin ；e、分別于各微孔中加入終止液2moL/mLH2S04終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀讀取各孔OD45tl值；f、以無恩拉霉素抑制時OD值為Bo,各相應(yīng)濃度恩拉霉素抑制時的OD450值為B值，以B/Bo為縱坐標(biāo)，以恩拉霉素濃度的對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，建立回歸方程，對照恩拉霉素標(biāo)準(zhǔn)液所得的曲線回歸方程，計算出待檢測肉制品中的恩拉霉素含量。其中，本發(fā)明方法適合于所有常見的肉制品，比如:為豬肉、羊肉、牛肉、雞肉、鴨肉、鵝肉、魚肉中至少一種，優(yōu)選為雞肉。本發(fā)明方法對肉制品中的恩拉霉素的檢測限范圍為8.9ng/mL 982ng/mL，其靈敏度遠高于現(xiàn)有方法，取得了意料不到的技術(shù)效果。下面結(jié)合實施例對本發(fā)明的具體實施方式
做進一步的描述，并不因此將本發(fā)明限制在所述的實施例范圍之中。實施例1本發(fā)明檢測肉制品中恩拉霉素殘留的方法的建立1、試驗材料與試驗方法1.1試驗材料新西蘭大白兔；恩拉霉素人工抗原(Er-BSA和Er_0VA，采用申請?zhí)枮镃N201010556432.2，發(fā)明名稱為“一種恩拉霉素完全抗原的合成方法”的專利申請公開的方法合成);弗氏完全佐劑(FCA, Sigma公司)；弗氏不完全佐劑(FICA, Sigma公司)；酶標(biāo)二抗(山羊抗兔IgG-HRP，華美生物工程公司進口分裝)；96 孔酶標(biāo)板(COSTAR)；三甲基聯(lián)苯胺(TMB，AMRESC0公司)，其余化學(xué)試劑均為分析純。1.2試劑的配制與用品準(zhǔn)備1.2.1配制試劑0.85%生理鹽水溶液:0.85gNaCL溶于IOOmL去離子水；萘氏試劑溶液:11.50gHgI和8.0OgKI溶于50mL蒸餾水中，攪拌溶解后，再加入50mL20%Na0H ；飽和硫酸銨溶液:425g硫酸銨加入500mL去離子水中，然后邊加熱邊攪拌至基本溶解，趁熱過濾，待其冷卻到室溫后用氨水調(diào)PH到7.0 ；
包被緩沖液(CBS, 0.05M pH9.6):0.159g碳酸鈉和0.293g碳酸氫鈉溶解于離子水中，定容到IOOmL:稀釋緩沖液(PBS,0.0lM pH7.4):800gNaCL, 0.20gKCL, 0.20gKH2P04, 3.58g, Na2C03
12H20，溶于800mL去離子水中，用NaCL或HCL調(diào)pH7.2 7.4，定容到IOOOmL ；磷酸鹽洗滌緩沖液:將PBS緩沖液中添加0.05% Tween-20 ；TMB底物儲存液:IOmgTMB溶于2mLDMS0中，在4°C冰箱中避光保存；檸檬酸緩沖液(pH5.0):2.3328g 檸檬酸，9.2006gNa2C03 12H20,定容到 500mL ；底物緩沖液:將檸檬酸緩沖液(pH5.0) 500mL中加入0.5mLTween-20 ；樣品稀釋液；1.0LPBS 加 1.0mLTween-20 和 Ig 明膠；終止液:2mol/LH2S04;封閉液:明膠1.0g加入包被緩沖液(CBS) IOOmL ；1.2.2主要儀器酶標(biāo)儀(Bio- Tek ELX800 型)；各種規(guī)格移液槍(Eppendorf); BS100S型分析天平(北京賽多利斯公司);DF-101S型恒溫加熱磁力攪拌器(河南予華儀器公司)；漩渦振蕩儀；恒溫水浴鍋；ULT1386-3-V38型低溫冰箱(美國REVCO公司)；D⑶-172K型常規(guī)冰箱(美國伊萊克斯公司)；培養(yǎng)箱(浙江科通儀器公司)；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)；KQ-600型超聲波清洗器；1.3試驗方法1.3.1免疫方案選10只健康的2月齡雄性實驗用清潔級新西蘭大白兔，體重為2.(T2.50kg/只，用兔子分籠飼養(yǎng)，自由飲食；在免疫前采集陰性血清備用，免疫程序見表I。表I實驗動物免疫方案程序
權(quán)利要求
1.測肉制品中恩拉霉素殘留的方法，其特征在于包括如下步驟: a、分別將待檢測肉制品提取液和系列濃度的恩拉霉素標(biāo)準(zhǔn)液加入到預(yù)包被恩拉霉素抗原的微孔中；其中，所述的肉制品提取液采用下述方法制備得到:取待檢測肉制品剪碎，勻漿，加濃度為50%v/v的甲醇-水溶液，勻漿，用濃HCl調(diào)整pH值3.5 4.0，混勻，8000 12000rpm離心8 12min，取上清液，用NaOH調(diào)節(jié)pH值至8.0,8000 12000離心8 12min，取上清液，即得待檢測肉制品提取液；所述的恩拉霉素抗原采用申請?zhí)枮镃N201010556432.2的方法制備得到； b、然后于各微孔中加入抗恩拉霉素抗體，混勻后孵育； C、于各微孔中加入辣根過氧化物酶HRP—羊抗兔IgG，混合后孵育； d、分別于各微孔中加入底物溶液，顯色； e、分別于各微孔中加入終止液終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀讀取各孔OD45tl值； f、對照恩拉霉素標(biāo)準(zhǔn)液所得的曲線回歸方程，計算出待檢測肉制品中的恩拉霉素含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測肉制品中恩拉霉素殘留的方法，其特征在于:b步驟中加入抗恩拉霉素抗體為含有抗恩拉霉素抗體的血清。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測肉制品中恩拉霉素殘留的方法，其特征在于:a步驟中所述的預(yù)包被恩拉霉素抗原的包被濃度為2.30ug/mL, b步驟中加入的含有抗恩拉霉素抗體的血清的稀釋度為1:10000。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測肉制品中恩拉霉素殘留的方法，其特征在于:e步驟中所述的終止液為硫酸溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測肉制品中恩拉霉素殘留的方法，其特征在于包括如下步驟: a、分別將待檢測肉制品提取液和系列濃度的恩拉霉素標(biāo)準(zhǔn)液加入到預(yù)包被恩拉霉素抗原的微孔中；待檢測肉制品提取液和系列濃度的恩拉霉素標(biāo)準(zhǔn)液的加入量為50uL/孔； b、然后于各微孔中加入含有抗恩拉霉素抗體的血清50uL/孔，血清稀釋度為1:10000,37°C孵育lh，洗滌，拍干； C、于各微孔中加入辣根過氧化物酶HRP—羊抗兔IgG 1:20000倍稀釋，IOOuL/孔，混合后于37°C孵育lh，洗滌，拍干； d、分別于各微孔中加入IOOuL底物溶液，37°C顯色IOmin； e、分別于各微孔中加入終止液2moL/mLH2S04終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀讀取各孔OD45tl值； f、以無恩拉霉素抑制時OD值為Bo，各相應(yīng)濃度恩拉霉素抑制時的OD45tl值為B值，以B/Bo為縱坐標(biāo)，以恩拉霉素濃度的對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，建立回歸方程，對照恩拉霉素標(biāo)準(zhǔn)液所得的曲線回歸方程，計算出待檢測肉制品中的恩拉霉素含量。
6.根據(jù)權(quán)利要求1 5任一項所述的檢測肉制品中恩拉霉素殘留的方法，其特征在于:所述的待檢測肉制品為豬肉、羊肉、牛肉、雞肉、鴨肉、鵝肉、魚肉中至少一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測肉制品中恩拉霉素殘留的方法，其特征在于:所述的待檢測肉制品為雞肉。
全文摘要
本發(fā)明涉及檢測肉制品中恩拉霉素殘留的方法，屬于食品檢測技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明所解決的技術(shù)問題是提供了一種檢測限更低的檢測肉制品中恩拉霉素殘留的方法。本發(fā)明檢測肉制品中恩拉霉素殘留的方法包括如下步驟a、分別將待檢測肉制品提取液和系列濃度的恩拉霉素標(biāo)準(zhǔn)液加入到預(yù)包被恩拉霉素抗原的微孔中；b、然后于各微孔中加入抗恩拉霉素抗體，混勻后孵育；c、于各微孔中加入辣根過氧化物酶HRP—羊抗兔IgG，混合后孵育；d、分別于各微孔中加入底物溶液，顯色；e、分別于各微孔中加入終止液終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀讀取各孔OD450值；f、對照恩拉霉素標(biāo)準(zhǔn)液所得的曲線回歸方程，計算出待檢測肉制品中的恩拉霉素含量。
文檔編號G01N33/12GK103091467SQ201310007610
公開日2013年5月8日 申請日期2013年1月9日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月9日
發(fā)明者嚴(yán)玉寶, 余華, 葉健強, 廖黨金, 胡娟, 謝晶, 崔鵬博, 周岷江 申請人:中華人民共和國四川出入境檢驗檢疫局, 四川省畜牧科學(xué)研究院