專利名稱：五仁醇膠囊的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥成方制劑中有效成分的檢測方法，特別是涉及一種五仁醇膠囊中有效成分的檢測方法。
背景技術(shù)：
五仁醇膠囊是《衛(wèi)生部藥品標準》中藥成方制劑第十九冊收載的品種，標準編號為WS3 - B - 3553 一 98，為五仁醇浸膏制成的膠囊。五仁醇浸膏是由五味子仁干燥，粉碎，力口75%乙醇回流提取三次，合并提取液，靜置48小時，吸取上清液，減壓回收乙醇，再加90%乙醇回流2小時，濾過，收集濾液，減壓回收乙醇而制得。所以五仁醇膠囊是純中藥制成的膠囊制劑。五味子主含木脂素類成分，如五味子甲素、五味子乙素、丙素、五味子醇甲、醇乙、五味子酯甲等，其中五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子酯甲等成分均具有不同程度的保肝作用，尤以五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲與制劑的功能主治最相吻合。它具有滋補肝腎的作用，臨床用于急慢性、遷延性肝炎(GPT偏高)而具肝腎陰虛之癥者，是目前市場上用于治療急慢性、遷延性肝炎疾病的常用藥品。但是原標準中沒有對處方中的有效成分進行完善檢測的方法，僅有其中部分成份的鑒別方法，對另外的部分有效成份也缺少檢測手段，更沒有含量測定方法。有的廠家在生產(chǎn)藥品時就可能不嚴格按照處方的劑量配料或者工藝控制不嚴格或者工藝手段不佳而造成五仁醇膠囊中的一些有效成份不全或者其含量不夠等問題，尤其是現(xiàn)在五味子藥材被食品和保健品使用的量也大，其資源明顯不足，價格也很高，不法廠商就可能偷工減料，致使藥品的療效明顯下降，影響藥品的安全有效，嚴重損害患者的利益。另外，原有的檢測方法也有不足，特別是薄層鑒別方法中用到氯仿，不僅圖譜效果不好，同時也影響環(huán)境，影響實驗者的身體健康。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的，是提供一種五仁醇膠囊的檢測方法。本發(fā)明提供的有效成份五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲成分的鑒別，五味子甲素、五味子乙素的含量測定，能監(jiān)測不法廠商少投或不投相應(yīng)原料，有效地檢測五仁醇膠囊的成分含量，使該藥品安全有效，從而保證了該膠囊制劑的臨床療效，維護了患者的利益，而且，該方法不使用氯仿，不影響環(huán)境，不影響實驗者的身體健康。本發(fā)明一種五仁醇膠囊的檢測方法，包括鑒別及含量測定項目，所述鑒別包括對膠囊中五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲的鑒別；所述含量測定包括對膠囊中五味子甲素和五味子乙素的含量測定；所述檢測方法包括以下:
(I)五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲的鑒別
取本品內(nèi)容物1.5 2.5g,加甲醇30 80ml,超聲處理10 20分鐘,濾過,濾液蒸干，殘渣加甲醇I 3ml使溶解，作為供試品溶液；另取五味子甲素、五味子乙素和五味子醇甲對照品，加甲醇制成每Iml含有Img五味子甲素、Img五味子乙素和Img五味子醇甲的混合溶液，作為對照品溶液；吸取上述兩種溶液各5ul，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以乙酸乙酯:甲酸=7 11: 2 6為展開劑，展開，取出，晾干，置波長為254nm的紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
(2)五味子甲素、五味子乙素的含量測定
用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈:水=70: 50為流動相，檢測波長為254nm，理論板數(shù)按五味子甲素峰計算應(yīng)不低于5000 ;取五味子甲素和五味子乙素對照品，加流動相制成每Iml含五味子甲素30Pg和五味子乙素IOOPg的混合溶液作為對照品溶液；取本品裝量差異項下的內(nèi)容物，混勻，取0.2 0.3克，置50ml量瓶中，加流動相40 50ml，超聲處理10 20分鐘，放冷，加流動相至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，吸取上述兩種溶液各10ul，分別注入液相色譜儀，測定，即得本品中五味子甲素和五味子乙素的含量。本品每粒含五味子以五味子甲素(C24H32O6)與五味子乙素(C23H28O6)的總量計，不得少于1.5mg。本發(fā)明具體的檢測方法為:
(1)五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲的鑒別
取本品內(nèi)容物2.0g，加甲醇50ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取五味子甲素、五味子乙素和五味子醇甲對照品，加甲醇制成每Iml含有Img五味子甲素、Img五味子乙素和Img五味子醇甲的混合溶液,作為對照品溶液；吸取上述兩種溶液各5ul,分別點于同一娃膠GF254薄層板上，以乙酸乙酯:甲酸=9: 4為展開劑，展開，取出，晾干，置波長為254nm的紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
(2)五味子甲素、五味子乙素的含量測定
用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈:水=70: 50為流動相，檢測波長為254nm，理論板數(shù)按五味子甲素峰計算應(yīng)不低于5000 ;取五味子甲素和五味子乙素對照品，加流動相制成每Iml含五味子甲素30Pg和五味子乙素IOOPg的混合溶液作為對照品溶液；取本品裝量差異項下的內(nèi)容物，混勻，取0.25克，置50ml量瓶中，加流動相45ml，超聲處理15分鐘，放冷，加流動相至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，吸取上述兩種溶液各IOul，分別注入液相色譜儀，測定，即得本品中五味子甲素和五味子乙素的含量。本品每粒含五味子以五味子甲素(C24H32O6)與五味子乙素(C23H28O6)的總量計，不得少于1.5mg。其中，步驟(2)中所述的超聲處理其功率為250W，頻率為20kHz。為了確保本發(fā)明的檢測方法科學(xué)、合理、可行，本申請人對發(fā)明中的鑒別和含量檢測方法進行了研究，具體實驗資料如下:
五味子甲素、五味子乙素和五味子醇甲的鑒別方法:
取本品內(nèi)容物1.5 2.5g,加甲醇30 80ml,超聲處理10 20分鐘,濾過,濾液蒸干，殘渣加甲醇I 3ml使溶解，作為供試品溶液；另取五味子甲素、五味子乙素和五味子醇甲對照品，加甲醇制成每Iml含有Img五味子甲素、Img五味子乙素和Img五味子醇甲的混合溶液，作為對照品溶液；吸取上述兩種溶液各5ul，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以乙酸乙酯:甲酸=7 11: 2 6為展開劑，展開，取出，晾干，置波長為254nm的紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。進一步鑒別: 取本品內(nèi)容物2.0g，加甲醇50ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取五味子甲素、五味子乙素和五味子醇甲對照品，加甲醇制成每Iml含有Img五味子甲素、Img五味子乙素和Img五味子醇甲的混合溶液,作為對照品溶液；吸取上述兩種溶液各5ul,分別點于同一娃膠GF254薄層板上，以乙酸乙酯:甲酸=9: 4為展開劑，展開，取出，晾干，置波長為254nm的紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。五味子甲素、五味子乙素的含量測定:
原標準收載于中華人民共和國《衛(wèi)生部藥品標準》第十九冊，標準編號為WS3 — B—3553—98，原來無含量測定項目，不能很好的保證制劑的質(zhì)量。鑒于五味子藥材主含木脂素類成分，常見如:五味子甲素、五味子乙素、丙素、五味子醇甲、醇乙、五味子酯甲等，其中法定對照品有五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子酯甲，故本次研究增加用高效液相色譜法測定制劑中五味子甲素、五味子乙素總量，并進行了一系列詳細的方法學(xué)考察，結(jié)果表明該方法分離效果好，精密度與重現(xiàn)性俱佳，回收率高，能夠更好保證制劑的質(zhì)量，且方法科學(xué)、合理、可行。對三批試產(chǎn)品的含量進行測定，均能達到萬分之一的最低要求，從而確定了適宜的含量限度，達到了衡量工藝的穩(wěn)定性與保證制劑質(zhì)量的目的。1、儀器與試藥
1.1 HPllOO高效液相色譜儀，配置為G1311A四元泵、G1313A自動進樣器、G1316A柱溫箱、G1314A紫外檢測器、HP化學(xué)工作站。1.2 色譜柱: BDS—C18 柱 Agilent (250mmX4.6mm)。BDS—C18 柱 Phenomen (250mmX 4.6mm)。BDS—C18 柱 Macherey-Nagel (25OmmX4.6臟)。1.3五味子甲素與五味子乙素對照品(由中國生物制品研究所提供，批號為0764-200107、110765-200407);乙腈(色譜純)；水為自制二次蒸餾水。2、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈:水=70: 50為流動相；檢測波長為254nm;理論板數(shù)按五味子甲素、五味子乙素峰計算均應(yīng)不低于5000。3、對照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥24小時的五味子甲素對照品0.00350g、五味子乙素對照品0.01334g于25ml量瓶內(nèi)，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取2.0ml于IOml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得每Iml含五味子甲素28Pg、五味子乙素106.7 Pg的混合對照品溶液。4、供試品溶液的制備取本品裝量差異項下的內(nèi)容物，混勻，取0.25克，精密稱定，置50ml量瓶中，加流動相20ml，超聲處理(功率250W，頻率20kHz )15分鐘，放冷，加流動相至刻度，搖勻，以微孔濾膜(0.45 μ m)濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，即得。5、測定法精密吸取上述三種溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得。6、方法學(xué)考察
6.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗
用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈:水=70:50為流動相，檢測波長為254nm，流速為l.0ml/min ;用紫外檢測器檢測。在此條件下，五味子甲素、五味子乙素與其他組分均能達到基線分離，實驗表明:供試品中五味子甲素、五味子乙素保留時間與對照品一致，分離度R>1.5，符合藥典規(guī)定。6.2線性范圍的考察:
分別精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥24小時的五味子甲素對照品0.00355g、五味子乙素對照品0.02668g于25ml量瓶內(nèi)，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每Iml含五味子甲素280Pg、五味子乙素1.067mg的混合對照品溶液,精密吸取該對照品溶液0.5ml、1.0 ml,2.0 ml,3.0 ml、4.0ml于IOml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻。分別精密吸取10μ1注入高效液相色譜儀，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標進行回歸處理，得五味子甲素的回歸方程:A=23.9905907C+1.2638577，r=0.99995 (n=5 )，結(jié)果表明五味子甲素對照品進樣量在0.07 μ g— 0.56 μ g之間呈良好的線性關(guān)系；得五味子乙素回歸方程:A=16.172394C+3.9297146
r=0.99992(n=5)，結(jié)果表明:五味子乙素對照品進樣量在0.267 μ g— 2.134 μ g之間呈良好的線性關(guān)系。結(jié)果見表1、表2。表I五味子甲素線性范圍考察結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種五仁醇膠囊的檢測方法，該檢測方法包括鑒別及含量測定項目，其特征在于:所述鑒別包括對膠囊中五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲的鑒別；所述含量測定包括對膠囊中五味子甲素和五味子乙素的含量測定；所述檢測方法包括以下: (1)五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲的鑒別 取本品內(nèi)容物1.5 2.5g,加甲醇30 80ml,超聲處理10 20分鐘,濾過,濾液蒸干，殘渣加甲醇I 3ml使溶解，作為供試品溶液；另取五味子甲素、五味子乙素和五味子醇甲對照品，加甲醇制成每Iml含有Img五味子甲素、Img五味子乙素和Img五味子醇甲的混合溶液，作為對照品溶液；吸取上述兩種溶液各5ul，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以乙酸乙酯:甲酸=7 11: 2 6為展開劑，展開，取出，晾干，置波長為254nm的紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； (2)五味子甲素、五味子乙素的含量測定 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈:水=70: 50為流動相，檢測波長為254nm，理論板數(shù)按五味子甲素峰計算應(yīng)不低于5000 ;取五味子甲素和五味子乙素對照品，加流動相制成每Iml含五味子甲素30Pg和五味子乙素IOOPg的混合溶液作為對照品溶液；取本品裝量差異項下的內(nèi)容物，混勻，取0.2 0.3克，置50ml量瓶中，加流動相40 50ml，超聲處理10 20分鐘，放冷，加流動相至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，吸取上述兩種溶液各10ul，分別注入液相色譜儀，測定，即得本品中五味子甲素和五味子乙素的含量； 本品每粒含五味子以五味子甲素與五味子乙素的總量計，不得少于1.5mg。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的五仁醇膠囊的檢測方法，其特征在于，更具體的檢測方法包括以下項目: (1)五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲的鑒別 取本品內(nèi)容物2.0g，加甲醇50ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取五味子甲素、五味子乙素和五味子醇甲對照品，加甲醇制成每Iml含有Img五味子甲素、Img五味子乙素和Img五味子醇甲的混合溶液,作為對照品溶液；吸取上述兩種溶液各5ul,分別點于同一娃膠GF254薄層板上，以乙酸乙酯:甲酸=9: 4為展開劑，展開，取出，晾干，置波長為254nm的紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； (2)五味子甲素、五味子乙素的含量測定 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈:水=70: 50為流動相，檢測波長為254nm，理論板數(shù)按五味子甲素峰計算應(yīng)不低于5000 ;取五味子甲素和五味子乙素對照品，加流動相制成每Iml含五味子甲素30Pg和五味子乙素IOOPg的混合溶液作為對照品溶液；取本品裝量差異項下的內(nèi)容物，混勻，取0.25克，置50ml量瓶中，加流動相45ml，超聲處理15分鐘，放冷，加流動相至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，吸取上述兩種溶液各IOul，分別注入液相色譜儀，測定，即得本品中五味子甲素和五味子乙素的含量； 本品每粒含五味子以五味子甲素與五味子乙素的總量計，不得少于1.5mg。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的五仁醇膠囊的檢測方法，其特征在于，步驟(2)中所述的超聲處理其功率為250W，頻率為20kHz。
全文摘要
本發(fā)明公開一種五仁醇膠囊的檢測方法，該檢測方法包括鑒別及含量測定，所述鑒別包括對膠囊中五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲的鑒別；所述含量測定包括對膠囊中五味子甲素和五味子乙素的含量測定。本發(fā)明提供的有效成份五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲成分的鑒別，五味子甲素、五味子乙素的含量測定，能監(jiān)測不法廠商少投或不投相應(yīng)原料，有效地檢測五仁醇膠囊的成分含量，使該藥品安全有效，從而保證了該膠囊制劑的臨床療效，維護了患者的利益，而且，該方法不使用氯仿，不影響環(huán)境，不影響實驗者的身體健康。
文檔編號G01N30/90GK103149285SQ20131004049
公開日2013年6月12日 申請日期2013年2月2日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月2日
發(fā)明者鐘茂團, 黎勇 申請人:四川逢春制藥有限公司