專利名稱：一種血吸蟲病電化學傳感快速測定試劑盒及其檢測方法和制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及生物檢測領域，具體涉及一種血吸蟲病電化學傳感快速測定試劑盒及其檢測方法和制備方法。
背景技術：
血吸蟲病是世界上分布最廣泛的人畜共患寄生蟲病之一，其嚴重危害著人類健康并直接影響著全球經濟發(fā)展。在我國，血吸蟲病雖然得到了一定的控制，但其仍然是一個重要的公共衛(wèi)生問題。目前，血吸蟲病的診斷仍然是血吸蟲病防治工作的關鍵，它是尋找并確定指示血吸蟲在機體存在的直接或間接證據，為血吸蟲感染的臨床診斷提供依據。血吸蟲病傳統(tǒng)的檢測方法為糞檢等病原學檢測，但該方法在中度或低度血吸蟲病流行區(qū)域的敏感性并不令人滿意，且費時、費力、漏檢率較高，而且不能對該病進行早期診斷。為了解決這一問題，至今逾半個世紀研究者們一直致力于免疫學診斷方法的研制，目前免疫學診斷已被廣泛用于血吸蟲病的篩查及監(jiān)測，并成為血防工作的主要手段，常用的方法主要包括換卵沉淀實驗(C0PT)，酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)、間接血凝實驗(IHA)等，但由于這些方法均有一定的缺陷，靈敏度仍不夠高，操作復雜費時，且需要昂貴的儀器及技術熟練的分析人員，嚴重阻礙了其在現(xiàn)場大規(guī)模篩查中的應用，不能完全適應目前血吸蟲病防治工作的需要。目前，比較常用的商業(yè)化日本血吸蟲抗體檢測試劑盒大多是采用粗制的蟲卵抗原，雖然其診斷靈敏度高，但由于其常常含有宿主抗原或其他寄生蟲抗原的共有成分，易產生交叉反應，特異性較低。此外由于天然抗原的來源有限，且蟲卵抗原的提取及純化過程比較復雜，難以控制且耗資大，大大限制了其在大規(guī)模篩查中的應用。為了實現(xiàn)對血吸蟲病的有效控制，我們迫切需要開發(fā)新型快速診斷方法及試劑，實現(xiàn)血吸蟲的快速、靈敏、便攜檢測，為血吸蟲病的現(xiàn)場篩查及監(jiān)測提供技術支撐。電化學免疫傳感器是將免疫測定技術與電化學傳感技術相結合的一類新型生物傳感器。其工作原理類似于傳統(tǒng)的免疫分析技術，即把抗原或抗體固定在固相載體表面(即電極上)，通過抗原抗體特異性結合來檢測樣品中的抗體或抗原。目前，其已發(fā)展成為一種分析濃度范圍寬，適用于多種生物基質的有力分析工具。通過特定的標記物進行標記，該方法還能實現(xiàn)信號的放大，因此，具有較高的靈敏性。對于混合樣品中微量的待測物，不論從靈敏度、特異性，還是分析時間和可操作性方面考慮，電化學免疫傳感器都將成為首選的檢測方法且有著巨大的應用前景。前期已有研究報道將電化學免疫傳感技術用于血吸蟲抗體的檢測，例如俞汝勤課題組通過在玻碳電極上修飾Nafion來固定血吸蟲抗原，用免疫競爭的方法進行血吸蟲抗體的檢測，其主要采用重組血吸蟲抗原作為診斷抗原，靈敏度并不夠高，且其所用的電極多為單一圓盤電極，前處理及抗原固定方法比較復雜，且需配合其他輔助電極進行檢測，不太適合多樣本分析。近年來，隨著絲網印刷技術的發(fā)展，批量制備成本低廉、重現(xiàn)性好的絲網印刷電極已成為可能并廣泛應用于生物檢測。印刷電極芯片的發(fā)展為開發(fā)適用于實際檢測的便攜式、可棄型電化學免疫傳感器提供了便利。迄今為止，仍沒有基于電化學傳感陣列技術的血吸蟲快速測定方法及試劑被研制出來。

發(fā)明內容
本發(fā)明目的在于克服現(xiàn)有技術中血吸蟲病檢測方法敏感性不高，費時、費力、漏檢率較高，而且不能對該病進行早期診斷的缺陷，提供一種具有高敏感性及特異性的血吸蟲病電化學傳感快速測定試劑盒及其檢測方法和制備方法。為了解決上述技術問題，本發(fā)明采用以下技術方案:提供一種血吸蟲病電化學傳感快速測定(ECISA)試劑盒，所述試劑盒包括:電化學傳感陣列、酶結合物工作液、酶底物、陰性對照品、陽性對照品、樣本稀釋液和洗滌液，所述電化學傳感陣列包括印刷碳電極、共組裝在所述印刷碳電極表面的血吸蟲抗原層和吸附的封閉劑層，所述血吸蟲抗原為日本血吸蟲重組抗原SjE16和日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原SEA的混合物，所述酶結合物工作液為含有辣根過氧化酶標記的二抗的BSA溶液，所述酶底物為四甲基聯(lián)苯胺與雙氧水的混合物，所述陰性對照品為正常血清，所述陽性對照品為血吸蟲感染血清，所述樣本稀釋液和洗滌液均為含有表面活性劑的磷酸鹽緩沖液。所述日本血吸蟲重組抗原SjE16具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。所述日本血吸蟲重組抗原SjE16和所述日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原SEA兩者以4:1 64:1質量比混合。所述日本血吸蟲重組抗原SjE16和所述日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原SEA兩者以8:1質量比混合。采用該質量比時靈敏度最高。所述印刷碳電極由碳糊工作電極，碳糊對電極以及銀/氯化銀參比電極組成。所述封閉劑是牛血清白蛋白或酪蛋白。還提供一種血吸蟲抗體的檢測方法，所述檢測方法包括:1)樣本稀釋:用樣本稀釋液將待檢血清按1:100稀釋；2)加樣反應:向每個工作電極上分別滴加已稀釋的樣本血清，每個樣本平行檢測2孔，同時設陰性、陽性及空白對照各2孔，取陰性、陽性對照品分別滴加于工作電極表面，空白對照孔僅加入樣本稀釋液，將電極陣列于濕盒內室溫反應20-40分鐘后，甩去電極表面液體，并用洗滌液沖洗，吹干電極表面；3)加酶反應:每個工作電極表面滴加酶結合物工作液，于濕盒內室溫反應20-40分鐘，甩去電極表面液體，并用洗滌液沖洗；4)電化學檢測:每個通道滴加酶底物，覆蓋三電極區(qū)域，于多通道電化學分析儀上進行時間電流曲線掃描，掃描電壓為-lOOmv，掃描時間是50s。50s時的穩(wěn)態(tài)電流值作為檢測信號；5)數據分析與結果判斷:定性檢測:所有電流值都扣除空白對照的電流值，以陰性對照品的平均電流值的2.1倍作為閾值，待檢樣本電流值大于或等于閾值的樣本判定為陽性樣本，電流值小于閾值的樣本判定為陰性樣本；半定量檢測:待檢樣品所含的血吸蟲抗體的效價為樣品連續(xù)稀釋電極中判定為陽性電極的最高稀釋倍數的倒數，該陽性電極結果判定方法與定性檢測相同。還提供一種血吸蟲病電化學傳感快速測定試劑盒的制備方法，所述制備方法包括:電化學傳感陣列的制備:滴加磷酸緩沖液覆蓋三電極，于多通道電化學檢測儀上進行循環(huán)伏安法掃描，沖洗電極，再在工作電極表面滴加碳二亞胺和羥基琥珀酰亞胺的羧基活化溶液，室溫反應后用超純水沖洗，再在所述工作電極表面滴加含有日本血吸蟲重組抗原SJE16和日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原SEA的PBS溶液，室溫反應I 3h后沖洗電極，滴加封閉劑覆蓋三電極，室溫孵育后沖洗電極，吹干表面，備用。所述制備方法還包括:酶結合物工作液的配置:將辣根過氧化物酶標記的二抗用1%BSA溶液稀釋1000倍；酶底物工作液的配置:將四甲基聯(lián)苯胺與雙氧水配置為混合溶液，棕色試劑瓶避光保存；樣本稀釋液或洗滌液的配置:將TWeen20加入磷酸鹽緩沖液中混勻；陰性對照品的制備:將10份正常人標準血清混合并用稀釋液稀釋100倍；陽性對照品的制備:將10份血吸蟲感染人標準血清混合并用稀釋液稀釋100倍。所述日本血吸蟲重組抗原SjE16具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列:MSDENRffIAV FNSLDKDGNK LLTRDEIEQC LKSLGVSESF AEKIIKETDL NKDGKISLDE YLKALPKIPPRDKCSSVERff KEVFQSIDKD NSGKVSAKEL DEFLKSTGND INKSCLENWM ATNDKNKDGE LDYAEFLAYVRQTYE。所述日本血吸蟲重組抗原SjE16和所述日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原SEA兩者以4:1 64:1質量比混合。所述日本血吸蟲重組抗原SjE16和所述日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原SEA兩者以8:1質量比混合。由于天然抗原常常含有宿主抗原或不同亞型及蟲株抗原的共有成分，易產生交叉反應，因而免疫檢測的特異性不理想，此外由于天然抗原的來源有限，且其提取及純化過程比較復雜，難以控制且耗資大，因此不易標準化和規(guī)模生產；而重組抗原所獲抗原純度高，可以批量生產，易于質量控制，但是與抗體的親和力仍有限，導致其檢測靈敏度并不夠高。本發(fā)明創(chuàng)造性地將重組抗原與天然抗原進行共組裝，從而有效克服了天然抗原特異性不夠高、重組抗原靈敏度不理想的缺陷，提供了一種特異性好、靈敏度高的電化學傳感檢測試劑盒。本發(fā)明中的ECISA試劑盒是采用電化學間接免疫傳感法檢測抗體，首先印刷電極陣列表面已共組裝了血吸蟲天然及重組抗原，然后滴加待檢血清或血漿，經過孵育后，若樣品中含有血吸蟲特異性抗體，則該抗體與電極上的抗原結合，再與酶標記的抗抗體結合形成抗原-抗體-酶標二抗免疫復合物，滴加底物TMB，用電化學檢測儀檢測電極界面酶催化底物產生的氧化還原電流即可判斷特異性抗體是否存在。本發(fā)明的有益效果在于:1、試劑盒采用印刷電極陣列作為固相載體，采用重組蛋白與天然蛋白共組裝的策略固定診斷抗原，大大減少了天然抗原的用量，制作成本低廉，可批量生產，且便于攜帶、并可多樣本分析；2、檢測血吸蟲的敏感性及特異性高，與其他寄生蟲病的交叉反應性低；3、檢測步驟少，操作簡單，且反應快速，能大大縮短血吸蟲檢測時間，且可在室溫條件下進行，無需恒溫恒濕箱等專門的設備，具有快速、簡單、現(xiàn)場應用等優(yōu)點；
4、檢測所用樣本體積小，試劑少，且無有害物質及放射性物質，安全可靠，適用于血吸蟲病的診斷；5、檢測所需的儀器是自主研發(fā)的多通道電化學檢測儀，設備簡單，成本低廉，操作方便、且便于攜帶，并可實現(xiàn)微型化、自動化和數字化等?？傊?，本發(fā)明所提供的試劑盒制備簡單、成本低廉、便于攜帶、可進行多樣本分析，且檢測靈敏度、特異性及重現(xiàn)性好，檢測快速，操作簡單，無須昂貴復雜的儀器設備，適用于血吸蟲病的現(xiàn)場快速診斷，有望用于疫區(qū)血吸蟲病患者篩查及監(jiān)測。


圖1是實施例1中以印刷碳電極為傳感元件電化學定性檢測人血清血吸蟲抗體的結果。
具體實施例方式以下實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件進行。實施例1以印刷碳電極為傳感元件電化學檢測血吸蟲抗體印刷碳電極表面處理:印刷碳電極在PB緩沖液中進行循環(huán)伏安法掃描以活化電極，電壓范圍-0.3V 0.6V，掃速0.5V/s，掃描10個循環(huán)，然后超純水沖洗，氮氣吹干。傳感界面構建:在電極上滴加IOul含有200mM EDC與50mM NHS的水溶液于電極表面，室溫反應15min活化羧基。將單一 SEA抗原及不同比例混合的SjE16與SEA混合抗原，分別滴加IOul于電極表面，室溫反應2h，用PBST沖洗電極，氮氣吹干。再在電極表面滴加50ull%BSA室溫封閉Ih,然后沖洗電極，吹干表面。免疫反應:將100倍稀釋的正常血清(即陰性對照血清)、不同倍比稀釋的血吸蟲感染血清(即陽性對照血清)分別滴加IOul至印刷碳電極上；室溫下孵育30min，PBST清洗電極表面。然后將稀釋1000倍的辣根過氧化物酶標記二抗滴加于電極表面，室溫反應30mino電化學檢測:將酶底物TMB滴加于上述反應后的電極表面，采用時間電流曲線法進行檢測，讀取穩(wěn)態(tài)電流值作為檢測信號。采用印刷碳電極作為傳感元件構建不同比例混合抗原共組裝的傳感界面，其檢測血清抗體的結果見附圖1，結果表明重組抗原SjE16與天然抗原SEA的質量比在4:1 64:1的范圍內時，共組裝Sjl6EA檢測血吸蟲陽性參比血清的信號及其與陰性參比血清的P/N比值均大于單獨組裝SEA的，說明共組裝能夠提高人血清中SjAb檢測的靈敏度，但與單度組裝SEA組相比，共組裝組陽性信號及P/N比值增加的幅度先變大，后變小，最終我們選取陽性信號及P/N比值增加幅度均為最大的點也即250ng SjE16與30ng SEA (8:1)共組裝作為最佳比例。實施例2血吸蟲電化學傳感快速測定試劑盒的制備方法1.電化學傳感陣列的制備:將多通道印刷碳糊電極用超純水沖洗干凈，滴加50ull0mM磷酸緩沖液(PB)覆蓋三電極，于多通道電化學檢測儀上進行循環(huán)伏安法掃描，用超純水沖洗電極。再在工作電極表面滴加IOul含200mM碳二亞胺(EDC)和50mM N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)的羧基活化溶液，于室溫反應15分鐘，用超純水沖洗電極，然后再在工作電極表面滴加5ul含50mg/L日本血吸蟲重組抗原SjE16(由中國疾病預防控制中心寄生蟲病預防控制所提供)和6mg/L日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原SEA (由中國疾病預防控制中心寄生蟲病預防控制所提供)的PBS溶液，于濕盒內室溫反應2h，沖洗電極。滴加50ull%BSA溶液覆蓋三電極，于濕盒內室溫封閉lh，然后沖洗電極，吹干表面。于冰箱中冷藏保存。2.酶結合物工作液的配置:將辣根過氧化物酶標記的羊抗人抗體(購自sigma公司)用1%BSA稀釋1000倍，充分混勻，冷藏保存?zhèn)溆谩?.酶底物工作液的配置:采用Neogen公司生產的TMB原液，于棕色試劑瓶中避光冷藏保存。4.樣本稀釋液或洗滌液的配置:將0.5ml Tween20加入IOOOmllOmM pH7.2的磷
酸鹽緩沖液中，配置成為樣本稀釋液，或洗滌液。5.陰性對照品的制備:將10份正常人標準血清混合并用稀釋液稀釋100倍。6.陽性對照品的制備:將10份血吸蟲感染人標準血清混合并用稀釋液稀釋100倍。本實施例中所采用的SjE16與SEA的質量比為8:1，為最優(yōu)比值，此時該試劑盒的
靈敏度最筒。實施例3血吸蟲抗體的檢測方法1.樣本稀釋:定性檢測:用樣本稀釋液將待檢血清按1:100稀釋，例如將Iii I血清加入99 ii I稀釋液，充分混勻，陰陽對照品不用稀釋。半定量檢測:用樣本稀釋液將待檢血清按1:100稀釋，然后再連續(xù)倍比稀釋到3200倍(可根據抗體濃度高低適當增加或降低稀釋倍數)，陰陽對照不用稀釋。2.加樣反應:2.1每個工作電極上分別加已稀釋樣本血清IOul，每個樣本平行檢測2孔，同時設陰性、陽性及空白對照各2孔，取陰性、陽性對照品各IOul分別滴加于工作電極表面，空白對照孔加入IOul樣本稀釋液；2.2電極陣列于濕盒內室溫(20_30°C )反應30分鐘后，甩去電極表面液體，并用稀釋液或洗滌液沖洗3次，吹干電極表面。3.加酶反應:每個工作電極表面加酶結合物工作溶液IOul，于濕盒內室溫反應30分鐘后，甩去電極表面液體，如上洗滌電極表面。4.電化學檢測:每個通道滴加酶底物50ul，覆蓋三個電極區(qū)域，于多通道電化學分析儀上進行時間電流曲線掃描，掃描電壓為-1OOmv,掃描時間是50秒。50s時的穩(wěn)態(tài)電流值作為檢測信號。5.數據分析與結果判斷:定性檢測:所有電流值都扣除空白對照的電流值，以陰性對照品平均電流值的2.1倍作為閾值。待檢樣本電流值大于或等于閾值的樣本判定為陽性樣本，電流值小于閾值的樣本判定為陰性樣本。半定量檢測:待檢樣品所含的血吸蟲抗體的效價為樣品連續(xù)稀釋電極中判定為陽性電極的最高稀釋倍數的倒數。陽性電極結果判定方法與定性檢測相同。注意事項:試劑盒在2_8°C下保存，每次取出后先平衡至室溫使用。實施例4血吸蟲電化學傳感快速測定試劑盒在快速檢測血吸蟲病中的應用將人體血清作為陰性對照和陽性對照對本發(fā)明的試劑盒進行檢測，并與常用的ELISA試劑盒進行對比，以得出本試劑盒的檢驗效果及臨床上的應用前景。1.評價天然可溶性蟲卵抗原SEA及重組抗原蛋白SjE16用于血吸蟲電化學傳感快速測定試劑盒快速診斷血吸蟲病的敏感性、特異性及交叉反應性其中，臨床人體血清由中國疾病預防控制中心寄生蟲病研究所提供，包括15份正常人血清、35份糞檢陽性的血吸蟲感染人血清，5份肝吸蟲感染人血清、9份旋毛蟲感染人血清、10份囊蟲感染人血清及7份肺吸蟲感染人血清。2.檢測2.1血吸蟲病ELISA檢測試劑盒:采用深圳康百得試劑公司出品的檢測試劑盒。2.2實驗室檢測:采用上述實施例2中的血吸蟲電化學免疫傳感測定(ECISA)試劑盒。診斷抗原:SjE16與SEA以8:1的質量比混合聯(lián)合組裝。陽性標準:以非疫區(qū)的正常人血清為參照。3.結果分析:結果表明，基于聯(lián)合抗原的電化學傳感陣列(ECISA/Sjl6EA)檢測試劑盒的敏感性為97.1%，特異性為100%，均與商品試劑盒相當，并且ECISA/Sjl6EA與其他寄生蟲病人血清的交叉反應性比ELISA試劑盒低很多，具體統(tǒng)計結果如下表所示:ECISA/SJ16EA與肝吸蟲及囊蟲基本不存在交叉反應，與旋毛蟲的交叉反應性為11%，與肺吸蟲的交叉反應性為42.9%。而ELISA試劑盒與肝吸蟲、旋毛蟲、囊蟲及肺吸蟲的交叉反應性分別為 20%,33.3%,60% 和 100%ο表1:ECISA與ELISA檢測臨床血清樣本的敏感性、特異性及交叉反應性比較
權利要求
1.一種血吸蟲病電化學傳感快速測定試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括:電化學傳感陣列、酶結合物工作液、酶底物、陰性對照品、陽性對照品、樣本稀釋液和洗滌液；所述電化學傳感陣列包括印刷碳電極、共組裝在所述印刷碳電極表面的血吸蟲抗原層和吸附的封閉劑層,其中，所述血吸蟲抗原為日本血吸蟲重組抗原SjE16和日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原SEA的混合物；所述酶結合物工作液為含有辣根過氧化酶標記的二抗的BSA溶液；所述酶底物為四甲基聯(lián)苯胺與雙氧水的混合物；所述陰性對照品為正常血清；所述陽性對照品為血吸蟲感染血清；所述樣本稀釋液和洗滌液均為含有表面活性劑的磷酸鹽緩沖液。
2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述日本血吸蟲重組抗原SjE16具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述日本血吸蟲重組抗原SjEie和所述日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原SEA兩者以4:1 64:1質量比混合。
4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述日本血吸蟲重組抗原SjE16和所述日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原SEA兩者以8:1質量比混合。
5.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述印刷碳電極由碳糊工作電極，碳糊對電極以及銀/氯化銀參比電極組成。
6.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述封閉劑是牛血清白蛋白或酪蛋白。
7.—種血吸蟲抗體的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括: 1)樣本稀釋:用樣本稀釋液將待檢血清按1:100稀釋； 2)加樣反應:向每個工作電極上分別滴加已稀釋的樣本血清,每個樣本平行檢測2孔，同時設陰性、陽性及空白對照各2孔，取陰性、陽性對照品分別滴加于工作電極表面，空白對照孔僅加入樣本稀釋液，將電極陣列于濕盒內室溫反應20-40分鐘后，甩去電極表面液體，并用洗滌液沖洗，吹干電極表面； 3)加酶反應:每個工作電極表面滴加酶結合物工作液,于濕盒內室溫反應20-40分鐘，甩去電極表面液體，并用洗滌液沖洗； 4)電化學檢測:每個通道滴加酶底物，覆蓋三電極區(qū)域，于多通道電化學分析儀上進行時間電流曲線掃描，掃描電壓為-lOOmv，掃描時間是50s。50s時的穩(wěn)態(tài)電流值作為檢測信號。
5)數據分析與結果判斷: 定性檢測:所有電流值都扣除空白對照的電流值，以陰性對照品的平均電流值的2.1倍作為閾值，待檢樣本電流值大于或等于閾值的樣本判定為陽性樣本，電流值小于閾值的樣本判定為陰性樣本； 半定量檢測:待檢樣品所含的血吸蟲抗體的效價為樣品連續(xù)稀釋電極中判定為陽性電極的最高稀釋倍數的倒數，該陽性電極結果判定方法與定性檢測相同。
8.—種血吸蟲病電化學傳感快速測定試劑盒的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括: 電化學傳感陣列的制備:滴加磷酸緩沖液覆蓋三電極，于多通道電化學檢測儀上進行循環(huán)伏安法掃描，沖洗電極，再在工作電極表面滴加碳二亞胺和羥基琥珀酰亞胺的羧基活化溶液，室溫反應后用超純水沖洗，再在所述工作電極表面滴加含有日本血吸蟲重組抗原SJE16和日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原SEA的PBS溶液，室溫反應后沖洗電極，滴加封閉劑覆蓋三電極，室溫孵育后沖洗電極，吹干表面，備用。
9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法還包括: 酶結合物工作液的配置:將辣根過氧化物酶標記的二抗用1%BSA溶液稀釋1000倍； 酶底物工作液的配置:將四甲基聯(lián)苯胺與雙氧水配置為混合溶液，棕色試劑瓶避光保存； 樣本稀釋液或洗滌液的配置:將Tween20加入磷酸鹽緩沖液中混勻； 陰性對照品的制備:將10份正常人標準血清混合并用稀釋液稀釋100倍； 陽性對照品的制備:將10份血吸蟲感染人標準血清混合并用稀釋液稀釋100倍。
10.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述日本血吸蟲重組抗原SjEie具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
11.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述日本血吸蟲重組抗原SjE16和所述日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原SEA兩者以4:1 64:1質量比混合。
12.根據權利要求11所述的制備方法，其特征在于，所述日本血吸蟲重組抗原SjE16和所述日本血吸蟲可溶性蟲卵 抗原SEA兩者以8:1質量比混合。
全文摘要
本發(fā)明提供一種血吸蟲病電化學傳感快速測定試劑盒及其檢測方法和制備方法，該試劑盒包括電化學傳感陣列、酶結合物工作液、酶底物、陰性對照品、陽性對照品、樣本稀釋液和洗滌液，電化學傳感陣列包括印刷碳電極以及表面共組裝的血吸蟲抗原層和吸附的封閉劑層，血吸蟲抗原為SjE16和SEA的混合物，酶結合物工作液為含有辣根過氧化酶標記的二抗的BSA溶液，酶底物為四甲基聯(lián)苯胺與雙氧水的混合物，陰性對照品為正常血清，陽性對照品為血吸蟲感染血清，樣本稀釋液和洗滌液均為含有表面活性劑的磷酸鹽緩沖液。本發(fā)明的試劑盒制備簡單、成本低廉、可進行多樣本分析，且檢測靈敏度、特異性及重現(xiàn)性好，有望用于疫區(qū)血吸蟲病患者篩查及監(jiān)測。
文檔編號G01N27/26GK103197059SQ20131011839
公開日2013年7月10日 申請日期2013年4月7日 優(yōu)先權日2013年4月7日
發(fā)明者樊春海, 宋世平, 鄧王平, 馮正, 胡薇 申請人:中國科學院上海應用物理研究所