一種淋巴細胞免疫分型的方法和試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于免疫學【技術(shù)領(lǐng)域】，公開了一種淋巴細胞免疫分型的方法和試劑盒。本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型的方法，包括：T淋巴細胞免疫分型和B淋巴細胞免疫分型；T淋巴細胞免疫分型包括：取不同的熒光標記的抗體，與待檢測樣品混合，孵育后，經(jīng)流式細胞術(shù)檢測，得檢測數(shù)據(jù)，分析所述檢測數(shù)據(jù)；B淋巴細胞免疫分型包括：取不同的熒光標記的抗體，與新的所述待檢測樣品混合，孵育后，經(jīng)流式細胞術(shù)檢測，得檢測數(shù)據(jù)，分析所述檢測數(shù)據(jù)。本發(fā)明的方法實現(xiàn)了對淋巴細胞進行更加全面的精細免疫分型，所需待測樣品少，操作簡單、所需時間短、準確性高、可廣泛應(yīng)用于淋巴細胞亞群免疫分型。
【專利說明】一種淋巴細胞免疫分型的方法和試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于免疫學【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種淋巴細胞免疫分型的方法和試劑盒。

【背景技術(shù)】
[0002] 淋巴細胞（lymphocyte)也稱淋巴球，為白細胞中體積最小的一種，直徑6-8微米； 在人體約占白細胞數(shù)目的20% -30%，圓形細胞核，細胞質(zhì)很少；由淋巴器官產(chǎn)生，是機體 免疫應(yīng)答功能的重要細胞成分，是一類具有免疫識別功能的細胞系。淋巴細胞是復(fù)雜的異 質(zhì)性細胞群體，根據(jù)其表型和功能特征可分為不同類別，如T細胞、B細胞、NK細胞等，這些 細胞還可以進一步分為若干亞群。淋巴細胞及其亞群在免疫應(yīng)答過程中相互協(xié)作、相互制 約，共同完成對抗原物質(zhì)的識別、應(yīng)答和清除，從而維持機體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。
[0003] 早期研究根據(jù)淋巴細胞按其發(fā)生遷移、表面分子和功能的不同，大體上將淋巴細 胞分為T細胞、B細胞和自然殺傷（NK)細胞。其中T細胞可分為細胞毒性T細胞（cytotoxic T lymphocyte，Tc)、輔助 T 細胞（helper T lymphocyte，Th)、記憶 T 細胞（memory T lymphocyte，Tm)和調(diào)節(jié) / 抑制 T 細胞（regulatory/suppressor T lymphocyte) ;B 細胞 可進一步分為記憶B細胞（memory B cell)、楽細胞（plasma cell)、初始B細胞（nalfve B cell)等亞類。
[0004] 隨著科學研究的不斷進步，科學家發(fā)現(xiàn)了更多的細胞表面標志，可以將各類淋巴 細胞進行更加精細的細胞亞群分類。例如，可以將T細胞進一步劃分為：TCRa ￠ +雙陰性T 細胞（double negative T lymphocyte，DNT)、Y ST細胞、輔助初始T細胞、輔助耗竭T細 胞、輔助中心記憶T細胞、輔助效應(yīng)記憶T細胞、細胞毒性初始T細胞、細胞毒性耗竭T細胞、 細胞毒性中心記憶T細胞、細胞毒性效應(yīng)記憶T細胞。
[0005] 血液樣品中淋巴細胞的種類與機體的免疫系統(tǒng)性能有著重要關(guān)系。通過對血液樣 品中淋巴細胞進行免疫分型和定量分析，能夠更加準確地評價機體的免疫功能，也能夠更 好地研究某些疾病的發(fā)生、發(fā)展以及治療效果評價。目前，常用于血液樣品中的淋巴細胞 免疫分型和定量分析的方法主要有：免疫酶標法、普通淋巴細胞分類、較細淋巴細胞亞群檢 測。免疫酶標法只是針對某一種或一類特定的抗原或抗體發(fā)生特異反應(yīng)，檢測面窄、操作復(fù) 雜、對待檢測樣品需求量大，費時費力。普通淋巴細胞分類，普遍應(yīng)用于淋巴細胞檢測，但只 能將淋巴細胞分為T細胞、Tc細胞、Th細胞、B細胞和NK細胞，不能進一步對細胞進行分 型。較細淋巴細胞亞群檢測依賴于流式細胞術(shù)，采用多色流式的方法，對淋巴細胞進行較為 詳細的分型，除傳統(tǒng)的T細胞、Tc細胞、Th細胞、B細胞和NK細胞外，還檢測Tm細胞及細胞 數(shù)量。但是，如果想進一步對細胞亞群進行免疫分型和定量分析的話，還需要借助于其他的 細胞免疫分型方法，操作復(fù)雜，對待測樣品的需求量大，并不適合實際應(yīng)用。所以，還需要對 淋巴細胞免疫分型和定量分析的方法進行研究，以求盡可能利用簡單的方法將淋巴細胞進 行較精細地免疫分型和定量分析。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 有鑒于此，本發(fā)明的發(fā)明目的在于提供一種淋巴細胞免疫分型的方法和試劑盒。 該淋巴細胞免疫分型的方法能夠?qū)α馨图毎M行更為全面的精細免疫分型和定量分析，效 率高，且節(jié)約了待測樣品的用量，更合適淋巴細胞的免疫分型和定量分析。
[0007] 為了實現(xiàn)本發(fā)明的發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：
[0008] 本發(fā)明提供了一種用于淋巴細胞免疫分型的方法，包括T淋巴細胞免疫分型和B 淋巴細胞免疫分型；
[0009] 該T淋巴細胞免疫分型包括：
[0010] 取不同的熒光標記的抗體，與待檢測樣品混合，孵育后，經(jīng)流式細胞術(shù)檢測，得檢 測數(shù)據(jù)，分析所述檢測數(shù)據(jù)；
[0011] 該B淋巴細胞免疫分型包括：
[0012] 取不同的熒光標記的抗體，與新的所述待檢測樣品混合，孵育后，經(jīng)流式細胞術(shù)檢 測，得檢測數(shù)據(jù)，分析所述檢測數(shù)據(jù)；
[0013] 該T淋巴細胞免疫分型時，所用的抗體包括：
[0014] 抗TCR a P的抗體、抗TCR Y S的抗體、抗⑶3的抗體、抗⑶4的抗體、抗⑶8的抗 體、抗⑶27的抗體和抗⑶45RA抗體；
[0015] 該B淋巴細胞免疫分型時，所用的抗體包括：
[0016] 抗⑶19的抗體、抗IgD的抗體、抗⑶38的抗體、抗⑶24的抗體和抗⑶27的抗體；
[0017] 該T淋巴細胞免疫分型時，所述分析的方法包括：
[0018] 細胞表面標志⑶3+TCR a @ +⑶4XD丨代表TCR a @ +雙陰性T細胞；
[0019] 細胞表面標志⑶3+TCR Y S +代表Y S T細胞；
[0020] 細胞表面標志⑶3+⑶4+⑶45RA+CD27+代表輔助初始T細胞；
[0021] 細胞表面標志⑶3+⑶4+⑶45RA+CD27_代表輔助耗竭T細胞；
[0022] 細胞表面標志⑶3+⑶4+⑶45RAXD27+代表輔助中心記憶T細胞；
[0023] 細胞表面標志⑶3+⑶4+⑶45RAXD27_代表輔助效應(yīng)記憶T細胞；
[0024] 細胞表面標志⑶3+⑶8+⑶45RA+CD27+代表細胞毒性初始T細胞；
[0025] 細胞表面標志⑶3+⑶8+⑶45RA+CD27_代表細胞毒性耗竭T細胞；
[0026] 細胞表面標志⑶8+⑶45RATD27+代表細胞毒性中心記憶T細胞；
[0027] 細胞表面標志⑶3+⑶8+⑶45RAXD27_代表細胞毒性效應(yīng)記憶T細胞；
[0028] 該B淋巴細胞免疫分型時，所述分析的方法包括：
[0029] 細胞表面標志⑶19+D27+代表記憶B細胞；
[0030] 細胞表面標志⑶19+D27_IgD+代表初始B細胞；
[0031] 細胞表面標志⑶19+⑶24++CD38++代表過渡B細胞；
[0032] 細胞表面標志⑶19+⑶24TD38++代表漿母細胞。
[0033] 在本發(fā)明中，流式細胞術(shù)中所用到的抗體可以為與待測樣品同源的抗體或也可以 為與待測樣品非同源的抗體，只要該抗體能夠與待測樣品中細胞表面標志物產(chǎn)生抗原-抗 體特異性結(jié)合反應(yīng)即可。
[0034] 在本發(fā)明中，" + "代表陽性，即表示該抗原在細胞表面有表達；
[0035] "++"代表強陽性，即表示該抗原在細胞表面高表達；
[0036] 代表陰性，即表示該抗原在細胞表面不表達。
[0037] 淋巴細胞的表面標志是指存在于淋巴細胞表面的膜分子，它們是淋巴細胞識別 抗原、與其他免疫細胞相互作用以及接受信號刺激并產(chǎn)生應(yīng)答的物質(zhì)基礎(chǔ)，也是鑒別和分 離淋巴細胞的重要依據(jù)。在淋巴細胞的分化發(fā)育過程中，淋巴樣干細胞進一步分化成各 個細胞亞群，賦予了各個細胞亞群特定的表面標志。有些表面標志是淋巴細胞共有的，有 些表面標志是某一類或某幾類淋巴細胞特有的，所以在進行淋巴細胞免疫分型時，可以有 眾多種組合。但是并不是每種組合都能夠?qū)崿F(xiàn)淋巴細胞的免疫分型，本發(fā)明通過大量的 創(chuàng)造性勞動發(fā)現(xiàn)：針對T細胞，細胞表面標志為⑶3+TCRa 0+CD4TDK時，可對TCRa ￠ + 雙陰性T細胞進行免疫分型；細胞表面標志為⑶3+TCRy S +時，可對Y ST細胞進行免 疫分型；細胞表面標志為CD3+CD4+CD45RA+CD27+時，可對輔助初始T細胞進行免疫分型； 細胞表面標志為⑶3+CD4+⑶45RA+⑶27_時，可以對輔助耗竭T細胞進行免疫分型；細胞表 面標志為⑶3+⑶4+CD45RATD27+時，可以對輔助中心記憶T細胞進行免疫分型；細胞表 面標志為⑶3+⑶4+CD45RATD27_時，可以對輔助效應(yīng)記憶T細胞進行免疫分型；細胞表 面標志為CD3+CD8+CD45RA+CD27+時，可以對細胞毒性初始T細胞進行免疫分型；細胞表 面標志為CD3+CD8+CD45RA+CD27_時，可以對細胞毒性耗竭T細胞免疫分型；細胞表面標 志為⑶8+CD45RATD27+時，可以對細胞毒性中心記憶T細胞免疫分型；細胞表面標志為 ⑶3+CD8+⑶45RATD27_時，可以對細胞毒性效應(yīng)記憶T細胞免疫分型。本發(fā)明根據(jù)對各個細 胞所對應(yīng)的細胞表面標志，設(shè)計獲得了最優(yōu)的細胞表面標志的抗體組合，通過流式細胞術(shù)， 對T淋巴細胞進行了更為全面的免疫分型。針對B淋巴細胞，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，細胞表面標志為 ⑶19+D27+時，可以對記憶B細胞進行免疫分型；細胞表面標志為⑶19+D27_IgD+時，可以對 初始B細胞進行免疫分型；細胞表面標志為⑶19+⑶24++⑶38++時，可以對過渡B細胞進行免 疫分型；細胞表面標志為CD19+CD24XD38++時，可以對漿母細胞進行免疫分型。本發(fā)明根據(jù) 對各個細胞所對應(yīng)的細胞表面標志，設(shè)計獲得了最優(yōu)的細胞表面標志的抗體組合，通過流 式細胞術(shù)，對B淋巴細胞進行了精細免疫分型和定量分析，進一步完善了對淋巴細胞的精 細免疫分析和定量分析。
[0038] 優(yōu)選地，本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型的方法中，針對T淋巴細胞免疫分型，還 設(shè)置對照組和同型對照組。設(shè)置對照組的意義在于排除無關(guān)變量的影響，增加實驗結(jié)果的 可信度和說服力；設(shè)置同型對照組的意義在于區(qū)別抗體染色過程中相同亞型所造成的背景 信號影響。
[0039] 在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型的方法中，針對T淋 巴細胞免疫分型，對照組所用不同的熒光標記的抗體具體為：
[0040] 抗⑶3的抗體、抗⑶4的抗體、抗⑶8的抗體。
[0041] 在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型的方法中，針對T淋 巴細胞免疫分型，抗TCRa 0的抗體的熒光標記為PE。
[0042] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型的方法中，針對T 淋巴細胞免疫分型，抗TCR Y S的抗體的熒光標記為BV421或FITC。在本發(fā)明的另外一些實 施例中，本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型的方法中，抗TCR Y S的抗體的熒光標記為FITC。
[0043] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型的方法中，針對T 淋巴細胞免疫分型，抗⑶3的抗體的熒光標記為Percp-Cy5. 5或Pacific blue。在本發(fā)明的 另外一些實施例中，本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型的方法中，抗CD3的抗體的熒光標記 為 Pacific blue。
[0044] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型的方法中，針對T 淋巴細胞免疫分型，抗⑶4的抗體的熒光標記為FITC或APC-Cy7。在本發(fā)明的另外一些實 施例中，本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型的方法中，抗CD4的抗體的熒光標記為APC-Cy7。
[0045] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型的方法中，針對T 淋巴細胞免疫分型，抗⑶8的抗體的熒光標記為BV510。
[0046] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型的方法中，針對T 淋巴細胞免疫分型，抗CD27的抗體的熒光標記為APC。
[0047] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型的方法中，針對T 淋巴細胞免疫分型，抗⑶45RA的抗體的熒光標記為PE-Cy7。
[0048] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型的方法中，針對T 淋巴細胞免疫分型，同型對照所用的抗體具體為：PE標記的同型抗體、FITC標記的同型抗 體、APC標記的同型抗體、PE-Cy7標記的同型抗體。
[0049] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型的方法，針對T 淋巴細胞免疫分型，具體為：
[0050] 取熒光標記的抗TCRa 0的抗體、熒光標記的抗TCRy S的抗體，與待測樣品混 合，室溫（即20°C?25°C )條件下，孵育25min?35min，得第一產(chǎn)品；
[0051] 取熒光標記的抗⑶3的抗體、熒光標記的抗⑶4的抗體、熒光標記的抗⑶8的抗 體、突光標記的抗CD27的抗體、突光標記的抗CD45RA的抗體，與第一產(chǎn)品混合，室溫（即 20°C?25°C )條件下，孵育25min?35min，得第二產(chǎn)品；
[0052] 取第二產(chǎn)品與紅細胞裂解液混合，并將所得混合液置于36. 5°C?37. 5°C的中水 中水浴9min?llmin，洗滌，流式上機檢測，得檢測數(shù)據(jù)，分析檢測數(shù)據(jù)；
[0053] 分析的方法包括：
[0054] 細胞表面標志⑶3+TCR a P +⑶4XD丨代表TCR a P +雙陰性T細胞；
[0055] 細胞表面標志⑶3+TCR Y S +代表Y S T細胞；
[0056] 細胞表面標志⑶3+⑶4+⑶45RA+CD27+代表輔助初始T細胞；
[0057] 細胞表面標志⑶3+⑶4+⑶45RA+CD27_代表輔助耗竭T細胞；
[0058] 細胞表面標志⑶3+⑶4+⑶45RAXD27+代表輔助中心記憶T細胞；
[0059] 細胞表面標志⑶3+⑶4+⑶45RAXD27_代表輔助效應(yīng)記憶T細胞；
[0060] 細胞表面標志⑶3+⑶8+⑶45RA+CD27+代表細胞毒性初始T細胞；
[0061] 細胞表面標志⑶3+⑶8+⑶45RA+CD27_代表細胞毒性耗竭T細胞；
[0062] 細胞表面標志⑶8+⑶45RATD27+代表細胞毒性中心記憶T細胞；
[0063] 細胞表面標志⑶3+⑶8+⑶45RAXD27_代表細胞毒性效應(yīng)記憶T細胞。
[0064] 在本發(fā)明中，本發(fā)明提供的方法中，各個熒光標記的抗體中的熒光標記物不受本 發(fā)明的限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)實際情況選擇合適的熒光標記物，以及對應(yīng)的同型 對照。
[0065] 優(yōu)選地，本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型的方法中，針對B淋巴細胞免疫分型，還 設(shè)置對照組和同型對照組。設(shè)置對照組的意義在于排除無關(guān)變量的影響，增加實驗結(jié)果的 可信度和說服力；設(shè)置同型對照組的意義在于區(qū)別抗體染色過程中相同亞型所造成的背景 信號影響。
[0066] 在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型的方法中，針對B淋 巴細胞免疫分型，對照組所用的抗體具體為：抗CD19的抗體。
[0067] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型的方法中，針對B 淋巴細胞免疫分型，同型對照所用的抗體具體為：BV450標記的同型抗體、BV510標記的同 型抗體、PE標記的同型抗體、Percp_cy5. 5標記的同型抗體。
[0068] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型的方法中，針對B 淋巴細胞免疫分型，同型對照所用的抗體具體為：APC標記的同型抗體、BV510標記的同型 抗體、PE標記的同型抗體、Percp_cy5. 5標記的同型抗體。
[0069] 在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型的方法中，針對B淋 巴細胞免疫分型，抗⑶19的抗體的熒光標記為APC或APC-Cy7。
[0070] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型的方法中，針對B 淋巴細胞免疫分型，抗IgD的抗體的熒光標記為BV510。
[0071] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型的方法中，針對B 淋巴細胞免疫分型，抗⑶38的抗體的熒光標記為Percp-Cy5. 5。
[0072] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型的方法中，針對B 淋巴細胞免疫分型，抗CD24的抗體的熒光標記為PE。
[0073] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型的方法中，針對B 淋巴細胞免疫分型，抗⑶27的抗體的熒光標記為BV450或APC。
[0074] 優(yōu)選地，本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型的方法，針對B淋巴細胞免疫分型，具體 為：
[0075] 取熒光標記的抗⑶19的抗體、熒光標記的抗IgD的抗體、熒光標記的抗⑶38的 抗體、熒光標記的抗CD24的抗體、熒光標記的抗CD27的抗體，與待檢測樣品混合，室溫 (20°C?25°C )條件下，孵育25min?35min后，與紅細胞裂解液混合，經(jīng)裂解紅細胞后，洗 滌，流式上機檢測，得檢測數(shù)據(jù)；
[0076] 該分析的方法包括：
[0077] 細胞表面標志⑶19+D27+代表記憶B細胞；
[0078] 細胞表面標志⑶19+D27_IgD+代表初始B細胞；
[0079] 細胞表面標志⑶19+⑶24++CD38++代表過渡B細胞；
[0080] 細胞表面標志⑶19+⑶24TD38++代表漿母細胞。
[0081] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的方法中，針對B淋巴細胞免疫分型， 對照組和同型對照組所對應(yīng)的操作具體為：
[0082] 取熒光標記的抗⑶19的抗體、BV450標記的同型抗體、BV510標記的同型抗體、PE 標記的同型抗體、Percp-cy5. 5標記的同型抗體，與待檢測樣品混合，20°C?25°C條件下， 孵育25min?35min后，與紅細胞裂解液混合，經(jīng)裂解紅細胞后，洗滌，流式上機檢測，得檢 測數(shù)據(jù)。
[0083] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的方法中，針對B淋巴細胞免疫分型， 對照組和同型對照組所對應(yīng)的操作具體為：
[0084] 取熒光標記的抗⑶19的抗體、APC標記的同型抗體、BV510標記的同型抗體、PE標 記的同型抗體、Percp-cy5. 5標記的同型抗體，與待檢測樣品混合，20°C?25°C條件下，孵 育25min?35min后，與紅細胞裂解液混合，經(jīng)裂解紅細胞后，洗滌，流式上機檢測，得檢測 數(shù)據(jù)。
[0085] 在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的方法中，還包括統(tǒng)計所述待測樣品中各 個淋巴細胞亞群的數(shù)目的步驟，包括：
[0086] 檢測待測樣品中淋巴細胞的總數(shù)；
[0087] 檢測待測樣品中T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK淋巴細胞占淋巴細胞的百分比；
[0088] 通過計算，即得待測樣品中T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK淋巴細胞的數(shù)目。
[0089] 優(yōu)選地，本發(fā)明提供的方法中，檢測待測樣品中T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK淋巴細 胞占所述淋巴細胞的百分比的步驟，包括：
[0090] 取不同的熒光標記的抗體，與新的待測樣品混合，孵育后，經(jīng)流式細胞術(shù)檢測，得 檢測數(shù)據(jù)，分析所述檢測數(shù)據(jù)；
[0091] 將淋巴細胞分為T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK淋巴細胞時，所用的抗體包括：
[0092] 抗⑶45的抗體、抗⑶3的抗體、抗⑶16的抗體、抗⑶56的抗體、抗⑶19的抗體；
[0093] 該步驟中所用的抗CD3的抗體與T淋巴細胞免疫分型中所述抗CD3的抗體，各 自獨立地帶有熒光標記；該步驟中所用的抗CD19的抗體與B淋巴細胞免疫分型中所述抗 ⑶19的抗體，各自獨立地帶有熒光標記。
[0094] 本發(fā)明提供的方法中，淋巴細胞總數(shù)乘以其中T淋巴細胞的百分比，即得T淋巴細 胞的數(shù)目。在本發(fā)明中通過對待測樣品各個T細胞亞群進行免疫分型和相對數(shù)統(tǒng)計，再結(jié) 合T淋巴細胞的絕對數(shù)，即可獲得每個T細胞亞群的細胞絕對數(shù)。淋巴細胞總數(shù)乘以其中B 淋巴細胞的百分比，即得B淋巴細胞的數(shù)目。在本發(fā)明中通過對待測樣品各個B細胞亞群 進行免疫分型和相對數(shù)統(tǒng)計，再結(jié)合B淋巴細胞的絕對數(shù)，即可獲得每個B細胞亞群的細胞 絕對數(shù)。淋巴細胞總數(shù)乘以其中NK淋巴細胞的百分比，即得NK淋巴細胞的數(shù)目。
[0095] 在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的方法中，檢測待測樣品中T淋巴細胞、 B淋巴細胞、NK淋巴細胞占所述淋巴細胞的百分比的步驟中，抗CD45的抗體熒光標記為 Percp0
[0096] 在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的方法中，檢測待測樣品中T淋巴細胞、 B淋巴細胞、NK淋巴細胞占所述淋巴細胞的百分比的步驟中，抗CD3的抗體的熒光標記為 FITC0
[0097] 在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的方法中，檢測待測樣品中T淋巴細胞、B 淋巴細胞、NK淋巴細胞占所述淋巴細胞的百分比的步驟中，抗CD16的抗體的熒光標記為 PE0
[0098] 在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的方法中，檢測待測樣品中T淋巴細胞、B 淋巴細胞、NK淋巴細胞占所述淋巴細胞的百分比的步驟中，抗CD56的抗體的熒光標記為 PE0
[0099] 在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的方法中，檢測待測樣品中T淋巴細胞、B 淋巴細胞、NK淋巴細胞占所述淋巴細胞的百分比的步驟中，抗CD19的抗體的熒光標記為 APC。
[0100] 在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的方法中，檢測待測樣品中T淋巴細胞、 B淋巴細胞、NK淋巴細胞占所述淋巴細胞的百分比的步驟中，抗CD4的抗體的熒光標記為 APC。
[0101] 在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的方法中，檢測待測樣品中T淋巴細胞、B 淋巴細胞、NK淋巴細胞占所述淋巴細胞的百分比的步驟中，抗CD8的抗體的熒光標記為PE。
[0102] 在本發(fā)明中，本發(fā)明提供的方法中，檢測待測樣品中T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK淋 巴細胞占所述淋巴細胞的百分比的步驟所用方法為常規(guī)方法，該方法不受本發(fā)明的限制， 本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)實際情況選擇測定待測樣品中檢測待測樣品中T淋巴細胞、B淋 巴細胞、NK淋巴細胞占所述淋巴細胞的百分比的方法。
[0103] 本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型方法，對待測樣品，該待測樣品優(yōu)選為待測血液 樣品，對T淋巴細胞進行了免疫分型和定量分析，通過選用特定的抗體組合，來識別T淋巴 細胞表面標志，經(jīng)過對檢測數(shù)據(jù)進行分析，通過一次檢測，得出了 T淋巴細胞中TCR a P +雙 陰性T細胞、Y S T細胞、輔助初始T細胞、輔助耗竭T細胞、輔助中心記憶T細胞、輔助效應(yīng) 記憶T細胞、細胞毒性初始T細胞、細胞毒性耗竭T細胞、細胞毒性中心記憶T細胞或細胞 毒性效應(yīng)記憶T細胞的數(shù)量。同時，也實現(xiàn)了一次性對B淋巴細胞進行了免疫分型和定量 分析，通過特定的抗體組合，來識別B淋巴細胞表面標志，經(jīng)過對所得檢測數(shù)據(jù)進行分析， 通過一次檢測，得出了 B淋巴細胞中，記憶B細胞、初始B細胞、過渡B細胞或漿母細胞的數(shù) 量。進而，實現(xiàn)了一次性將淋巴細胞進行了精細的免疫分型和定量分析，效率高，且節(jié)約了 待測樣品用量。
[0104] 本發(fā)明還提供了一種用于淋巴細胞免疫分型的試劑盒，其包括用于T淋巴細胞免 疫分型的抗體、用于B淋巴細胞免疫分型的抗體；
[0105] 用于T淋巴細胞免疫分型的抗體包括如下不同的熒光標記的抗體：
[0106] 抗TCR a 0的抗體、抗TCR Y S的抗體、抗⑶3的抗體、抗⑶4的抗體、抗⑶8的抗 體、抗⑶27的抗體、抗⑶45RA抗體；
[0107] 用于B淋巴細胞免疫分型的抗體包括如下不同的熒光標記的抗體；
[0108] 抗⑶19的抗體、抗IgD的抗體、抗⑶38的抗體、抗⑶24的抗體、抗⑶27的抗體。
[0109] 在本發(fā)明中，本發(fā)明提供的用于淋巴細胞免疫分型的試劑盒中，熒光標記的抗體， 可以是熒光標記物與抗體單獨放置，在使用時將兩者偶聯(lián)獲得熒光標記的抗體；也可以是 熒光標記的抗體，在使用時，直接使用即可。
[0110] 在本發(fā)明一些實施例中，本發(fā)明提供的用于淋巴細胞免疫分型的試劑盒中，針對T 淋巴細胞免疫分型的抗體中抗TCR a 0的抗體的熒光標記為PE。
[0111] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的用于淋巴細胞免疫分型的試劑盒 中，針對T淋巴細胞免疫分型的抗體中抗TCR Y S的抗體的熒光標記為BV421或FITC。在 本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的用于淋巴細胞免疫分型的試劑盒中，針對T淋 巴細胞免疫分型的抗體中抗TCR Y S的抗體的熒光標記為FITC。
[0112] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的用于淋巴細胞免疫分型的試劑盒 中，針對T淋巴細胞免疫分型的抗體中抗⑶3的抗體的熒光標記為Percp-Cy5. 5或Pacific blue。在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的用于淋巴細胞免疫分型的試劑盒中，針 對T淋巴細胞免疫分型的抗體中抗⑶3的抗體的熒光標記為Pacific blue。
[0113] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的用于淋巴細胞免疫分型的試劑盒 中，針對T淋巴細胞免疫分型的抗體中抗CD4的抗體的熒光標記為FITC或APC-Cy7。在本 發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的用于淋巴細胞免疫分型的試劑盒中，針對T淋巴 細胞免疫分型的抗體中抗CD4的抗體的熒光標記為APC-Cy7。
[0114] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的用于淋巴細胞免疫分型的試劑盒 中，針對T淋巴細胞免疫分型的抗體中抗CD8的抗體的熒光標記為BV510。
[0115] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的用于淋巴細胞免疫分型的試劑盒 中，針對T淋巴細胞免疫分型的抗體中抗CD27的抗體的熒光標記為APC。
[0116] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的用于淋巴細胞免疫分型的試劑盒 中，針對T淋巴細胞免疫分型的抗體中抗CD45RA的抗體的熒光標記為PE-Cy7。
[0117] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的用于淋巴細胞免疫分型的試劑盒中 的抗體，針對T淋巴細胞免疫分型的抗體,還包括同型對照抗體,具體為：PE標記的同型抗 體、BV421標記的同型抗體、APC標記的同型抗體、PE-Cy7標記的同型抗體。
[0118] 在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的用于淋巴細胞免疫分型的試劑盒中，針 對B淋巴細胞免疫分型的抗體中抗⑶19的抗體的熒光標記為APC或APC-Cy7。
[0119] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的用于淋巴細胞免疫分型的試劑盒 中，針對B淋巴細胞免疫分型的抗體中抗IgD的抗體的熒光標記為BV510。
[0120] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的用于淋巴細胞免疫分型的試劑盒 中，針對B淋巴細胞免疫分型的抗體中抗⑶38的抗體的熒光標記為Percp-Cy5. 5。
[0121] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的用于淋巴細胞免疫分型的試劑盒 中，針對B淋巴細胞免疫分型的抗體中抗CD24的抗體的熒光標記為PE。
[0122] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的用于淋巴細胞免疫分型的試劑盒 中，針對B淋巴細胞免疫分型的抗體中抗CD27的抗體的熒光標記為BV450或APC。
[0123] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型的試劑盒中， 針對B淋巴細胞免疫分型的抗體,還包括同型對照抗體,具體為：BV450標記的同型抗體、 BV510標記的同型抗體、PE標記的同型抗體、Percp-cy5. 5標記的同型抗體。
[0124] 在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的淋巴細胞免疫分型的試劑盒中，針 對B淋巴細胞免疫分型的抗體中的同型對照抗體，具體為：APC標記的同型抗體、BV510標記 的同型抗體、PE標記的同型抗體、Percp_cy5. 5標記的同型抗體。
[0125] 在本發(fā)明中，本發(fā)明提供的試劑盒中，各個熒光標記的抗體中的熒光標記物不受 本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)實際情況選擇合適的熒光標記物，以及對應(yīng)的同 型對照。
[0126] 優(yōu)選地，本發(fā)明提供的試劑盒中，還包括用于將淋巴細胞分為T淋巴細胞、B淋巴 細胞、NK淋巴細胞的抗體，具體為：
[0127] 抗⑶45的抗體、抗⑶3的抗體、抗⑶16的抗體、抗⑶56的抗體、抗⑶19的抗體。
[0128] 在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的試劑盒中，用于將淋巴細胞分為T淋巴 細胞、B淋巴細胞、NK淋巴細胞的抗體中，抗⑶45的抗體熒光標記為Percp。
[0129] 在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的試劑盒中，用于將淋巴細胞分為T淋巴 細胞、B淋巴細胞、NK淋巴細胞的抗體中，抗⑶3的抗體的熒光標記為FITC。
[0130] 在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的試劑盒中，用于將淋巴細胞分為T淋巴 細胞、B淋巴細胞、NK淋巴細胞的抗體中，抗CD16的抗體的熒光標記為PE。
[0131] 在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的試劑盒中，用于將淋巴細胞分為T淋巴 細胞、B淋巴細胞、NK淋巴細胞的抗體中，抗CD56的抗體的熒光標記為PE。
[0132] 在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的試劑盒中，用于將淋巴細胞分為T淋巴 細胞、B淋巴細胞、NK淋巴細胞的抗體中，抗CD 19的抗體的熒光標記為APC。
[0133] 在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的試劑盒中，用于將淋巴細胞分為T淋巴 細胞、B淋巴細胞、NK淋巴細胞的抗體中，抗⑶4的抗體的熒光標記為APC。
[0134] 在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的試劑盒中，用于將淋巴細胞分為T淋巴 細胞、B淋巴細胞、NK淋巴細胞的抗體中，抗⑶8的抗體的熒光標記為PE。
[0135] 在本發(fā)明中，流式細胞術(shù)檢測過程中，通過目標細胞分群是否清楚、目標細胞熒光 強度等表示準確性的高低；目標細胞分群清楚、目標細胞熒光強度準確高，通過對同一標本 進行多次重復(fù)實驗，無統(tǒng)計學差異，則表示準確性高。
[0136] 本發(fā)明提供了一種淋巴細胞免疫分型的方法和試劑盒。本發(fā)明提供的淋巴細 胞免疫分型的方法，包括：T淋巴細胞免疫分型和B淋巴細胞免疫分型；T淋巴細胞免疫 分型包括：取不同的熒光標記的抗體，與待檢測樣品混合，孵育后，經(jīng)流式細胞術(shù)檢測，得 檢測數(shù)據(jù)，分析所述檢測數(shù)據(jù)；B淋巴細胞免疫分型包括：取不同的熒光標記的抗體，與 新的所述待檢測樣品混合，孵育后，經(jīng)流式細胞術(shù)檢測，得檢測數(shù)據(jù)，分析所述檢測數(shù)據(jù)； 所述T淋巴細胞免疫分型時，所用的抗體包括：抗TCR a 0的抗體、抗TCR Y S的抗體、 抗⑶3的抗體、抗⑶4的抗體、抗⑶8的抗體、抗⑶27的抗體和抗⑶45RA抗體；所述B淋 巴細胞免疫分型時，所用的抗體包括：抗CD19的抗體、抗IgD的抗體、抗CD38的抗體、抗 CD24的抗體和抗CD27的抗體；所述T淋巴細胞免疫分型時，所述分析的方法包括：細胞 表面標志⑶3+TCR a 0 +CD4TDK代表TCR a 0 +雙陰性T細胞；細胞表面標志⑶3+TCR Y S + 代表Y ST細胞；細胞表面標志⑶3+CD4+⑶45RA+CD27+代表輔助初始T細胞；細胞表面 標志CD3+CD4+CD45RA+CD27^代表輔助耗竭T細胞；細胞表面標志CD3+CD4+CD45RATD27+ 代表輔助中心記憶T細胞；細胞表面標志⑶3+⑶4+CD45RATD27_代表輔助效應(yīng)記憶T 細胞；細胞表面標志CD3+CD8+CD45RA+CD27+代表細胞毒性初始T細胞；細胞表面標志 CD3+CD8+CD45RA+CD27_代表細胞毒性耗竭T細胞；細胞表面標志CD8+CD45RATD27+代表細胞 毒性中心記憶T細胞；細胞表面標志⑶3+⑶8+⑶45RA_CD27_代表細胞毒性效應(yīng)記憶T細胞； 所述B淋巴細胞免疫分型時，所述分析的方法包括：細胞表面標志CD19+D27+代表記憶B細 胞；細胞表面標志CD19+D27_IgD+代表初始B細胞；細胞表面標志CD19+CD24++CD38++代表過 渡B細胞；細胞表面標志CD19+CD24TD38++代表漿母細胞。實驗結(jié)果證實，本發(fā)明設(shè)計獲得 了最優(yōu)的細胞表面標志的抗體組合，通過流式細胞術(shù)，實現(xiàn)了對淋巴細胞進行更加全面的 免疫分型和定量分析。在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的方法，所需待測樣品 少、操作簡單、所需時間短。在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的方法重復(fù)性好、準 確性高、可廣泛應(yīng)用于淋巴細胞亞群免疫分型和定量分析。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0137] 圖1示實施例1中淋巴細胞分類結(jié)果；
[0138] 圖2示實施例1中T淋巴細胞分型結(jié)果；其中，圖2-A、圖2-B示TCRa f雙陰性 T細胞的細胞分型結(jié)果；圖2-C示Y S T細胞的細胞分型結(jié)果；圖2-D示輔助T細胞亞類的 細胞分型結(jié)果；圖2-E示細胞毒性T細胞亞類的細胞分型結(jié)果；
[0139] 圖3示實施例1中B淋巴細胞分型結(jié)果；
[0140] 圖4示實施例2中淋巴細胞分類結(jié)果；
[0141] 圖5示實施例2中T淋巴細胞分型結(jié)果；其中，圖5-A、圖5-B示TCRa P +雙陰性 T細胞的細胞分型結(jié)果；圖5-C示Y S T細胞的細胞分型結(jié)果；圖5-D示輔助T細胞亞類的 細胞分型結(jié)果；圖5-E示細胞毒性T細胞亞類的細胞分型結(jié)果；
[0142] 圖6示實施例2中B淋巴細胞分型結(jié)果；
[0143] 圖7示實施例3中淋巴細胞分類結(jié)果；
[0144] 圖8示實施例3中T淋巴細胞分型結(jié)果；其中，圖8-A、圖8-B示TCRa P +雙陰性 T細胞的細胞分型結(jié)果；圖8-C示Y S T細胞的細胞分型結(jié)果；圖8-D示輔助T細胞亞類的 細胞分型結(jié)果；圖8-E示細胞毒性T細胞亞類的細胞分型結(jié)果；
[0145] 圖9示實施例3中B淋巴細胞分型結(jié)果；
[0146] 圖10示對比例1中⑶19、⑶38、⑶24、IgM相組合時，所得的流式圖；
[0147] 圖11示對比例2中CD45R0和CCR7相組合時，所得的流式圖。

【具體實施方式】
[0148] 本發(fā)明公開了一種淋巴細胞免疫分型的方法和試劑盒。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以參考 本文內(nèi)容，實施該方法，實現(xiàn)其應(yīng)用，特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域 技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明內(nèi)。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通 過較佳的實施例進行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對本文 制備方法和應(yīng)用進行改動或適當變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
[0149] 本發(fā)明提供的一種淋巴細胞免疫分型的方法和試劑盒中所用到的試劑和原料均 可由市場購得。
[0150] 本發(fā)明中用到的熒光標記 Percp、FITC、PE、APC、BV421、Percp-cy5. 5、BV510、 PE-Cy7、BV450均為常見的熒光標記可以由市場購得，各個熒光標記的抗體也可以由市場購 得。
[0151] 為了使本【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員能夠更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合實施 例，進一步闡述本發(fā)明：
[0152] 實施例1淋巴細胞精細免疫分型和定量分析
[0153] 實驗材料：
[0154] 待測樣品：抗凝外周血樣品，來源于健康志愿者，為正常人的外周血。
[0155] BD Biosciences 淋巴細胞分類試劑盒（cat 340503)，購買于 BD biosciences，其 中混合抗體1包括：熒光標記Percp的抗⑶45抗體、抗⑶3 (FITC)的抗體、抗⑶4 (APC)的 抗體、抗CD8 (PE)的抗體；混合抗體2包括：突光標記Percp的抗CD45抗體、抗CD19 (APC) 的抗體、抗CD56和CD16 (PE)的抗體、抗CD3 (FITC)的抗體。BD臨床試劑盒自帶的紅細胞裂 解液。
[0156] 自配的紅細胞裂解液：每IL紅細胞裂解液中含NH4Cl 8. 29g、KHCO3Ig, EDTA 0. 37g〇
[0157] 實驗方法：
[0158] 取500 ii L抗凝外周血樣品，取200 ii L待測樣品，通過血細胞計數(shù)儀測得淋巴細胞 絕對數(shù)，得淋巴細胞的絕對數(shù)為4. 22 X IO9個/L。
[0159] 剩下300 y L用于檢測淋巴細胞各亞群，進行淋巴細胞免疫分型和定量分析。
[0160] 淋巴細胞分類
[0161] 1、取兩根流式管，分別標記為L-l、L-2,將BD Biosciences淋巴細胞分類試劑盒 (cat 340503)中兩種混合抗體分別加入到對應(yīng)的流式管中，其中混合抗體1加入到L-I號 流式管中；混合抗體2分別加入對L-2號流式管中。
[0162] 2、向L-l、L-2號流式管中，各加入50iiL待測樣品，充分渦旋，室溫（25°C )避光 孵育30min ;
[0163] 3、用試劑盒中IXBD紅細胞裂解液裂解紅細胞，5min ;
[0164] 4、加入 ImL PBS 洗滌一次后（3500rpm/min，2min)，加入 200iiL PBS 流式上機，并 分析結(jié)果。
[0165] T淋巴細胞精細免疫分型
[0166] 1、取兩根流式管，分別標記為T-l、T-2,其中T-I為對照組和同型對照組，T-2為待 檢測組；按照表1向各個流式管中加入以下抗體：
[0167] 表1各個流式管中加入的抗體的類別和加入的體積

【權(quán)利要求】
1. 一種用于淋巴細胞免疫分型的方法，其特征在于，包括T淋巴細胞免疫分型和B淋巴 細胞免疫分型； 所述T淋巴細胞免疫分型包括： 取不同的熒光標記的抗體，與待檢測樣品混合，孵育后，經(jīng)流式細胞術(shù)檢測，得檢測數(shù) 據(jù)，分析所述檢測數(shù)據(jù)； 所述B淋巴細胞免疫分型包括： 取不同的熒光標記的抗體，與新的所述待檢測樣品混合，孵育后，經(jīng)流式細胞術(shù)檢測， 得檢測數(shù)據(jù)，分析所述檢測數(shù)據(jù)； 所述T淋巴細胞免疫分型時，所用的抗體包括： 抗TCRa 0的抗體、抗TCRy S的抗體、抗⑶3的抗體、抗⑶4的抗體、抗⑶8的抗體、 抗⑶27的抗體和抗⑶45RA抗體； 所述B淋巴細胞免疫分型時，所用的抗體包括： 抗⑶19的抗體、抗IgD的抗體、抗⑶38的抗體、抗⑶24的抗體和抗⑶27的抗體； 所述T淋巴細胞免疫分型時，所述分析的方法包括： 細胞表面標志⑶3+TCR a 0 +⑶4TD8_代表TCR a 0 +雙陰性T細胞； 細胞表面標志⑶3+TCR y S +代表Y S T細胞； 細胞表面標志⑶3+CD4+⑶45RA+⑶27+代表輔助初始T細胞； 細胞表面標志⑶3+CD4+⑶45RA+⑶27_代表輔助耗竭T細胞； 細胞表面標志⑶3+CD4+⑶45RATD27+代表輔助中心記憶T細胞； 細胞表面標志⑶3+CD4+⑶45RATD27_代表輔助效應(yīng)記憶T細胞； 細胞表面標志⑶3+CD8+⑶45RA+⑶27+代表細胞毒性初始T細胞； 細胞表面標志⑶3+CD8+⑶45RA+⑶27_代表細胞毒性耗竭T細胞； 細胞表面標志⑶8+CD45RATD27+代表細胞毒性中心記憶T細胞； 細胞表面標志⑶3+CD8+⑶45RATD27_代表細胞毒性效應(yīng)記憶T細胞； 所述B淋巴細胞免疫分型時，所述分析的方法包括： 細胞表面標志⑶19+D27+代表記憶B細胞； 細胞表面標志⑶19+D271gD+代表初始B細胞； 細胞表面標志⑶19+CD24++⑶38++代表過渡B細胞； 細胞表面標志⑶19+CD24TD38++代表漿母細胞。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，還包括統(tǒng)計所述待測樣品中各個淋巴細 胞亞群的數(shù)目的步驟，包括： 檢測所述待測樣品中淋巴細胞的總數(shù)； 檢測所述待測樣品中T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK淋巴細胞占所述淋巴細胞的百分比； 通過計算，即得所述待測樣品中T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK淋巴細胞的數(shù)目。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述檢測待測樣品中T淋巴細胞、B淋巴 細胞、NK淋巴細胞占所述淋巴細胞的百分比的步驟，包括： 取不同的熒光標記的抗體，與新的所述待測樣品混合，孵育后，經(jīng)流式細胞術(shù)檢測，得 檢測數(shù)據(jù)，分析所述檢測數(shù)據(jù)； 所述將淋巴細胞分為T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK淋巴細胞時，所用的抗體包括： 抗⑶45的抗體、抗⑶3的抗體、抗⑶16的抗體、抗⑶56的抗體、抗⑶19的抗體。
4. 一種用于淋巴細胞免疫分型的試劑盒，其特征在于，其包括用于T淋巴細胞免疫分 型的抗體、用于B淋巴細胞免疫分型的抗體； 所述用于T淋巴細胞免疫分型的抗體包括如下不同的熒光標記的抗體： 抗TCR a 0的抗體、抗TCRy S的抗體、抗⑶3的抗體、抗⑶4的抗體、抗⑶8的抗體、 抗⑶27的抗體、抗⑶45RA抗體； 所述用于B淋巴細胞免疫分型的抗體包括如下不同的熒光標記的抗體； 抗⑶19的抗體、抗IgD的抗體、抗⑶38的抗體、抗⑶24的抗體、抗⑶27的抗體。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，其還包括用于將淋巴細胞分為T淋巴細 胞、B淋巴細胞、NK淋巴細胞的抗體，具體為： 抗⑶45的抗體、抗⑶3的抗體、抗⑶16的抗體、抗⑶56的抗體、抗⑶19的抗體。
【文檔編號】G01N33/53GK104360050SQ201410486089
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2014年9月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月22日
【發(fā)明者】趙曉東, 周麗娜 申請人:重慶醫(yī)科大學附屬兒童醫(yī)院