一種用于檢測(cè)mc-lr型微囊藻毒素的生物電極傳感器及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種用于檢測(cè)MC-LR型微囊藻毒素的生物電極傳感器及其制備方法。所述生物電極傳感器是在絲網(wǎng)印刷電極的工作電極上修飾多壁碳納米管-殼聚糖電沉積薄膜，并在多壁碳納米管-殼聚糖電沉積薄膜的表面進(jìn)一步交聯(lián)上MC-LR型微囊藻毒素抗體。本發(fā)明傳感器分析速度快，樣品用量少，易于發(fā)展手持設(shè)備，便于實(shí)現(xiàn)定點(diǎn)和實(shí)時(shí)測(cè)試，而且成本遠(yuǎn)低于大型的分析檢測(cè)儀器，因此可以進(jìn)行推廣普及滿足家庭測(cè)量需求。
【專利說(shuō)明】-種用于檢測(cè)MC-LR型微囊藻毒素的生物電極傳感器及其 制備方法和應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于電化學(xué)分析和納米材料【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種用于檢測(cè)MC-LR型微 囊藻毒素的生物電極傳感器及其制備方法和應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 微囊藻毒素（Microcystin，簡(jiǎn)稱MC)是藍(lán)藻產(chǎn)生的多肽毒素，為環(huán)狀結(jié)構(gòu)，有多種 變型，含量較多、毒性較大的主要是MC-LR、MC-RR、MC-YR這三種微囊藻毒素（L、R、Y分別代 表亮氨酸、精氨酸和酪氨酸），本發(fā)明主要針對(duì)MC-LR型微囊藻毒素進(jìn)行檢測(cè)。微囊藻毒素 會(huì)使水體中其他生物中毒，而且也會(huì)對(duì)人類的健康產(chǎn)生很多潛在的危害。人們?cè)谄つw接觸 含有微囊藻毒素的水體時(shí)會(huì)引起如眼睛等敏感部位過(guò)敏，少量喝入可引起急性腸胃炎，而 且微囊藻毒素是一種肝毒素，是肝癌的強(qiáng)烈促癌劑，長(zhǎng)期飲用則可能引發(fā)肝癌，因此對(duì)微囊 藻毒素的研究已經(jīng)成為水體環(huán)境科學(xué)研究的重要內(nèi)容，快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)微囊藻毒素具有 重要的現(xiàn)實(shí)應(yīng)用意義，能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)水體的檢測(cè)預(yù)警，及時(shí)采取預(yù)防措施。
[0003] 目前微囊藻毒素的檢測(cè)方法主要有高效液相色譜法（HPLC)、酶聯(lián)免疫法（ELISA) 等?，F(xiàn)有常用的檢測(cè)方法都表現(xiàn)出了一些局限性，如HPLC法毒素需要進(jìn)行預(yù)處理，靈敏度 較低，檢測(cè)設(shè)備比較昂貴而且需要專業(yè)人員操作；ELISA法操作步驟繁瑣、成本較高等。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷，本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種用于檢測(cè)MC-LR型 微囊藻毒素的生物電極傳感器；本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種制備該生物電極傳感器的 方法；本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種利用該生物電極傳感器檢測(cè)MC-LR型微囊藻毒素的 方法。
[0005] 本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0006] 一種用于檢測(cè)MC-LR型微囊藻毒素的生物電極傳感器，所述生物電極傳感器是 在絲網(wǎng)印刷電極的工作電極上修飾多壁碳納米管-殼聚糖電沉積薄膜，并在多壁碳納米 管-殼聚糖電沉積薄膜的表面進(jìn)一步交聯(lián)上MC-LR型微囊藻毒素抗體。
[0007] 在上述方案的基礎(chǔ)上，所述絲網(wǎng)印刷電極是標(biāo)準(zhǔn)三電極，PET基底，工作電極是碳 (直徑3mm)，對(duì)電極是碳，參比電極是銀/氯化銀。
[0008] -種制備如上所述的用于檢測(cè)MC-LR型微囊藻毒素的生物電極傳感器的方法，具 體制備步驟如下：
[0009] (1)將殼聚糖（CS)溶于0? 5 %的稀鹽酸溶液中，室溫條件下磁力攪拌40min，再進(jìn) 行抽濾得到I. Owt%的殼聚糖溶液；
[0010] ⑵將多壁碳納米管（MWCNTs)加入到步驟⑴中所得的殼聚糖溶液中，室溫條 件下磁力攪拌3h，初步得到多壁碳納米管分散的殼聚糖溶液，其中多壁碳納米管的濃度為 0. 5mg/mL ；
[0011] (3)將步驟（2)中所得的多壁碳納米管分散的殼聚糖溶液超聲lOmin，進(jìn)一步得到 均勻分散的多壁碳納米管-殼聚糖溶液，用I. 〇wt%的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)此混合溶液的pH 值為4. 0?6. 0 ;
[0012] (4)將絲網(wǎng)印刷電極（SP)浸入到步驟（3)中所得的多壁碳納米管-殼聚糖混合 溶液中，進(jìn)行電沉積，電沉積電壓為-1. 5?-3. 0V，沉積時(shí)間為20?300s，形成多壁碳納米 管-殼聚糖電沉積薄膜，再用超純水洗滌得到初步修飾電極（CS-MWCNTs/SP);
[0013] (5)將步驟⑷中制得的CS-MWCNTs/SP電極浸入到L Owt %的戊二醛溶液中 0? 5 ?Ih ;
[0014] (6)將步驟（5)中所得修飾后的CS-MWCNTs/SP電極用超純水洗漆，在其工作電 極上滴加5?25 ii L MC-LR型微囊藻毒素抗體溶液（anti-MC-LR)，室溫條件下靜置交聯(lián) 0? 5 ?3h，得到目標(biāo)檢測(cè)（anti-MC-LR/CS-MWCNTs/SP)電極；
[0015] 一種檢測(cè)MC-LR型微囊藻毒素的方法，具體步驟如下：
[0016] (1)制備標(biāo)準(zhǔn)HRP酶標(biāo)微囊藻毒素溶液：將不同濃度的微囊藻毒素溶液（MC-LR) 分別與微囊藻毒素 HRP酶標(biāo)物溶液（HRP-MC-LR)以等體積混合，得到一系列標(biāo)準(zhǔn)HRP酶標(biāo) 微囊藻毒素混合溶液（MC-LR+HRP-MC-LR)，其混合液中MC-LR的濃度是0. 0、0. 3、0. 8、1. 0、 2. Oppb ；
[0017] (2)將生物電極傳感器anti-MC-LR/CS-MWCNTs/SP用超純水洗滌，在其工作電 極上分別滴加5?25 ii L步驟（1)中所制備的MC-LR+HRP-MC-LR溶液，在室溫條件下 孵育0. 5?3h，得到具有不同濃度MC-LR的修飾電極：MC-LR+HRP-MC-LR/anti-MC-LR/ CS-MWCNTs/SP ；
[0018] (3)分別測(cè)試步驟（2)中孵育后的 MC-LR+HRP-MC-LR/anti-MC-LR/CS-MWCNTs/SP 電極的電流值Ip ;
[0019] (4)繪制MC-LR濃度與Ip的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0020] (5)將待測(cè)的微囊藻毒素溶液（MC-LR)與微囊藻毒素 HRP酶標(biāo)物溶液 (HRP-MC-LR)以等體積混合，取5?25 ii L混合液滴加到超純水洗滌過(guò)的生物電極傳感器上 (anti-MC-LR/CS-MWCNTs/SP)，室溫條件下孵育0. 5?3h，測(cè)試孵育后電極的電流值Ip ;結(jié) 合步驟（4)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線即可得到待測(cè)樣品溶液中微囊藻毒素的濃度。
[0021] 在上述方案的基礎(chǔ)上，步驟（3)中測(cè)試電流值Ip的方法為：測(cè)試工作液為含有 2mM對(duì)苯二酚（HQ) UmM雙氧水（H2O2)的0. 05M PBS (pH = 7. 0)緩沖液，電化學(xué)檢測(cè)方法為 微分脈沖伏安法。
[0022] 本發(fā)明的有益效果是：
[0023] 本發(fā)明通過(guò)生物電極傳感器實(shí)現(xiàn)微囊藻毒素的檢測(cè)，生物電極傳感器將生物樣品 固定在修飾過(guò)的電極表面，將生物分子間的相互作用轉(zhuǎn)化為電信號(hào)從而達(dá)到檢測(cè)生物反應(yīng) 活動(dòng)的目的，電信號(hào)輸出比ELISA法的光信號(hào)更加穩(wěn)定、靈敏。生物電極傳感器可由選擇性 好的生物材料如特異性抗體構(gòu)成目標(biāo)分子的識(shí)別元件，可以實(shí)現(xiàn)與特定的底物分子發(fā)生反 應(yīng)，更具有專一性。生物電極傳感器相應(yīng)的檢測(cè)系統(tǒng)比較簡(jiǎn)單，分析速度快，樣品用量少，易 于發(fā)展手持設(shè)備，便于實(shí)現(xiàn)定點(diǎn)和實(shí)時(shí)測(cè)試，而且成本遠(yuǎn)低于大型的分析檢測(cè)儀器，因此可 以進(jìn)行推廣普及滿足家庭測(cè)量需求。
[0024] 本發(fā)明采用活性的海洋多糖殼聚糖為生物電極傳感器的載體，殼聚糖是來(lái)自于海 洋的生物活性多糖，具有好的成膜特性、生物相容性，可以作為電極傳感器的修飾材料，用 于進(jìn)一步固定生物活性物質(zhì)如抗體，顯著提高電極負(fù)載抗體后的穩(wěn)定性。本發(fā)明引入了多 壁碳納米管，其具有大的比表面積、良好的導(dǎo)電性，可以促進(jìn)電極檢測(cè)過(guò)程中電子的傳遞， 進(jìn)一步增強(qiáng)殼聚糖膜的導(dǎo)電性，從而提高響應(yīng)速度，具有更高的檢測(cè)靈敏度。
[0025] 本發(fā)明通過(guò)實(shí)驗(yàn)可以得到殼聚糖、多壁碳納米管的混合溶液，通過(guò)電沉積的方法 實(shí)現(xiàn)絲網(wǎng)印刷電極的修飾，即采用電信號(hào)進(jìn)行電極修飾，不同于一般的滴涂法，相應(yīng)的電沉 積電壓、電沉積時(shí)間更容易控制，得到的修飾電極重現(xiàn)性更好，為進(jìn)一步固定微囊藻毒素抗 體奠定良好基礎(chǔ)。另外此生物電極傳感器的檢測(cè)過(guò)程將生物分子間的相互作用轉(zhuǎn)化為電信 號(hào)進(jìn)行檢測(cè)，即以電信號(hào)形式輸出，不同于傳統(tǒng)的檢測(cè)微囊藻毒素的光信號(hào)輸出，電信號(hào)靈 敏度更高，信號(hào)更穩(wěn)定，且易于操作，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)快速準(zhǔn)確的檢測(cè)微囊藻毒素的目的。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0026] 圖1 一種用于檢測(cè)MC-LR型微囊藻毒素的生物電極傳感器（a)未加入HRP酶標(biāo)物 溶液孵育的電極和（b)加入HRP酶標(biāo)物溶液孵育的電極的微分脈沖伏安曲線圖。
[0027] 圖2 -種用于檢測(cè)MC-LR型微囊藻毒素的生物電極傳感器檢測(cè)微囊藻毒素的標(biāo)準(zhǔn) 曲線圖（內(nèi)插圖是此生物電極傳感器檢測(cè)微囊藻毒素的微分脈沖伏安曲線圖）。

【具體實(shí)施方式】
[0028] 下面通過(guò)具體實(shí)施例，結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
[0029] 本實(shí)施例所用到的主要設(shè)備：CHI1040C型電化學(xué)工作站、SCIENTZ- II D超聲波細(xì) 胞粉碎機(jī)、Master-E plus UF超純水機(jī)、84-1A磁力攪拌器、SHZ-D III循環(huán)水真空泵。
[0030] 實(shí)施例
[0031] 1、用于檢測(cè)MC-LR型微囊藻毒素的生物電極傳感器的制備方法，具體為：
[0032] (1)將0? 5g殼聚糖溶于50mL 0? 5%的稀鹽酸溶液中，室溫條件下磁力攪拌4〇1^11， 再進(jìn)行抽濾得到I. Owt%的殼聚糖溶液；
[0033] (2)稱取5. Omg多壁碳納米管加入10. OmL步驟（1)中所得的殼聚糖溶液中，室溫 條件下磁力攪拌3h，初步得到多壁碳納米管分散的殼聚糖溶液，其中多壁碳納米管的濃度 為 0? 5mg/mL ;
[0034] (3)將步驟（2)中所得的多壁碳納米管分散的殼聚糖溶液超聲lOmin，進(jìn)一步得到 均勻分散的多壁碳納米管-殼聚糖溶液，用I. Owt%的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)此混合溶液的pH 值為5. 0 ;
[0035] (4)將絲網(wǎng)印刷（SP)電極（標(biāo)準(zhǔn)三電極，PET基底，工作電極是碳-直徑3mm，對(duì) 電極是碳，參比電極是銀/氯化銀）浸入到步驟（3)中所得的溶液中，進(jìn)行電沉積（沉積電 壓：-1. 8V，沉積時(shí)間：30s)，形成多壁碳納米管-殼聚糖電沉積薄膜，再用超純水洗滌得到 初步修飾電極（CS-MWCNTs/SP);
[0036] (5)將步驟⑷中制得的CS-MWCNTs/SP電極浸入到I. Owt %的戊二醛溶液中 0. 5h ；
[0037] (6)將步驟（5)中所得修飾后的CS-MWCNTs/SP電極用超純水洗滌，在其工 作電極上滴加20 y L微囊藻毒素抗體溶液（anti-MC-LR)，靜置交聯(lián)2h，得到目標(biāo)檢測(cè) (anti-MC-LR/CS-MWCNTs/SP)電極；
[0038] 2、利用上述制備的生物電極傳感器檢測(cè)MC-LR型微囊藻毒素的方法，具體步驟如 下：
[0039] (1)制備標(biāo)準(zhǔn)HRP酶標(biāo)微囊藻毒素溶液：將不同濃度的微囊藻毒素溶液（MC-LR) 分別與微囊藻毒素 HRP酶標(biāo)物溶液（HRP-MC-LR)等體積混合，得到一系列標(biāo)準(zhǔn)HRP酶標(biāo)微 囊藻毒素混合液（MC-LR+HRP-MC-LR)，混合液中相應(yīng)微囊藻毒素的濃度為0. 0、0. 3、0. 8、 1. 0>2. Oppb ；
[0040] (2)將所得anti-MC-LR/CS-WWCNTs/SP電極用超純水洗滌，再分別滴加20 ii L步驟 (1) 中所制備的系列MC-LR+HRP-MC-LR溶液，在室溫條件下孵育2. 5h ;
[0041] (3)在含有2mM HQ、ImM H2O2的0? 05M PBS(pH = 7. 0)緩沖液中分別測(cè)試步驟 (2) 中孵育后電極的電流值Ip，測(cè)試方法：微分脈沖伏安法，具體測(cè)試掃描條件：起始電壓 0. 12V，終止電壓-0. 3V，掃描幅度0. 05V，記錄在-0. 12V附近產(chǎn)生的特征峰的電流值Ip ;
[0042] (4)繪制MC-LR濃度與電流值Ip的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0043] (5)將待測(cè)的微囊藻毒素溶液（MC-LR)與微囊藻毒素 HRP酶標(biāo)物溶液 (HRP-MC-LR)以等體積混合，取20 ii L混合液滴加到超純水洗滌過(guò)的生物電極傳感器上 (anti-MC-LR/CS-MWCNTs/SP)，室溫條件下孵育2. 5h，測(cè)試孵育后電極的電流值Ip ;結(jié)合步 驟（4)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線即可得到待測(cè)微囊藻毒素的濃度。
[0044] 性能表征：
[0045] 1、電化學(xué)催化性能
[0046] 配制兩種微囊藻毒素溶液，一種添加 HRP酶標(biāo)物，一種不添加，使用本發(fā)明實(shí)施1 制備的生物電極傳感器（anti-MC-LR/CS-MWCNTs/SP)進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如圖1所示。在 所得孵育電極中沒有HRP酶標(biāo)物時(shí)未出現(xiàn)特征電流峰（圖la)，有HRP酶標(biāo)物時(shí)得到明顯的 特征電流峰（圖Ib)，由此可知：本發(fā)明所制備的anti-MC-LR/CS-MWCNTs/SP生物電極傳感 器對(duì)HRP酶標(biāo)微囊藻毒素具有良好的催化性能，可用于測(cè)定微囊藻毒素的濃度。
[0047] 2、標(biāo)準(zhǔn)曲線
[0048] 為了得到目標(biāo)檢測(cè)電極（anti-MC-LR/CS-MWCNTs/SP)對(duì)于檢測(cè)微囊藻毒素具有 較好的響應(yīng)范圍以及檢測(cè)限，我們主要采用微分脈沖伏安法針對(duì)不同濃度的微囊藻毒素溶 液進(jìn)行了電化學(xué)分析測(cè)試。HRP酶標(biāo)藻毒素混合溶液中微囊藻毒素 HRP酶標(biāo)物和微囊藻毒 素與電極上固定化的有限的抗體活性位點(diǎn)發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，微囊藻毒素濃度越大相應(yīng)與固 定化抗體發(fā)生免疫反應(yīng)的HRP酶標(biāo)物越少，則微分脈沖伏安法測(cè)定的峰電流信號(hào)會(huì)隨著待 測(cè)溶液中微囊藻毒素濃度的增大而呈下降的趨勢(shì)。
[0049] 本發(fā)明所制備的目標(biāo)檢測(cè)電極（anti-MC-LR/CS-MWCNTs/SP)對(duì)檢測(cè)微囊藻毒素 的電化學(xué)分析測(cè)試實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示，由內(nèi)插圖可知相應(yīng)峰電流Ip隨著微囊藻毒素濃 度的增大而逐漸減小，符合競(jìng)爭(zhēng)免疫反應(yīng)的預(yù)期結(jié)果，并且微囊藻毒素濃度在〇. Oppb? 2. Oppb范圍內(nèi)微分脈沖伏安法測(cè)定的峰電流信號(hào)隨溶液中微囊藻毒素濃度的增大并不是

【權(quán)利要求】
1. 一種用于檢測(cè)MC-LR型微囊藻毒素的生物電極傳感器，其特征在于，所述生物電極 傳感器是在絲網(wǎng)印刷電極的工作電極修飾上多壁碳納米管-殼聚糖電沉積薄膜，并在多壁 碳納米管-殼聚糖電沉積薄膜的表面進(jìn)一步交聯(lián)上MC-LR型微囊藻毒素抗體。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于檢測(cè)MC-LR型微囊藻毒素的生物電極傳感器，其特 征在于，所述絲網(wǎng)印刷電極是標(biāo)準(zhǔn)三電極，PET基底，工作電極是碳（直徑3mm)，對(duì)電極是 碳，參比電極是銀/氯化銀。
3. -種制備如權(quán)利要求1或2所述的用于檢測(cè)MC-LR型微囊藻毒素的生物電極傳感器 的方法，其特征在于，具體制備步驟如下： (1) 將殼聚糖（CS)溶于0.5 %的稀鹽酸溶液中，室溫條件下磁力攪拌40min，再進(jìn)行抽 濾得到1. 〇wt %的殼聚糖溶液； (2) 將多壁碳納米管加入到步驟（1)中所得的殼聚糖溶液中，室溫條件下磁力攪拌3h， 初步得到多壁碳納米管分散的殼聚糖溶液，其中多壁碳納米管的濃度為0. 5mg/mL ; (3) 將步驟（2)中所得的多壁碳納米管分散的殼聚糖溶液超聲lOmin，進(jìn)一步得到均勻 分散的多壁碳納米管-殼聚糖溶液，用1. 〇wt %的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)此混合溶液的pH值為 4. 0 ?6. 0 ; (4) 將絲網(wǎng)印刷電極（SP)浸入到步驟（3)中所得的多壁碳納米管-殼聚糖溶液中，進(jìn) 行電沉積，電沉積電壓為-1. 5?-3. 0V，沉積時(shí)間為20?300s，形成多壁碳納米管-殼聚 糖電沉積薄膜，再用超純水洗滌得到初步修飾電極（CS-MWCNTs/SP); (5) 將步驟（4)中制得的CS-MWCNTs/SP電極浸入到1. Owt%的戊二醛溶液中0? 5? lh ; (6) 將步驟（5)中所得修飾后的CS-MWCNTs/SP電極用超純水洗滌，在其工作電極上滴 加5?25 ii L MC-LR型微囊藻毒素抗體溶液（anti-MC-LR)，室溫條件下靜置交聯(lián)0. 5?3h， 即得到目標(biāo)檢測(cè)（anti-MC-LR/CS-MWCNTs/SP)電極傳感器。
4. 一種檢測(cè)MC-LR型微囊藻毒素的方法，其特征在于，使用了如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所 述的生物電極傳感器。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種檢測(cè)MC-LR型微囊藻毒素的方法，其特征在于，具體步驟 如下： (1) 制備標(biāo)準(zhǔn)HRP酶標(biāo)微囊藻毒素溶液：將不同濃度的微囊藻毒素溶液（MC-LR)分別 與微囊藻毒素HRP酶標(biāo)物溶液（HRP-MC-LR)以等體積混合，得到一系列標(biāo)準(zhǔn)HRP酶標(biāo)微 囊藻毒素混合溶液（MC-LR+HRP-MC-LR)，其混合液中MC-LR的濃度是0. 0、0. 3、0. 8、1. 0、 2. Oppb ； (2) 將生物電極傳感器（anti-MC-LR/CS-MWCNTs/SP)用超純水洗滌，再分別滴加5? 25 y L步驟（1)中所制備的MC-LR+HRP-MC-LR溶液，在室溫條件下孵育0. 5?3h，得到具有 不同濃度 MC-LR 的修飾電極：MC-LR+HRP-MC-LR/anti-MC-LR/CS-MWCNTs/SP ; (3) 分別測(cè)試步驟（2)中孵育后的 MC-LR+HRP-MC-LR/anti-MC-LR/CS-MWCNTs/SP 電極 的電流值Ip ; (4) 繪制MC-LR濃度與Ip的標(biāo)準(zhǔn)曲線； (5) 將待測(cè)的微囊藻毒素溶液（MC-LR)與微囊藻毒素HRP酶標(biāo)物溶液（HRP-MC-LR)以 等體積混合，取5?25 y L混合液滴加到超純水洗滌過(guò)的生物電極傳感器（anti-MC-LR/ CS-MWCNTs/SP)上，室溫條件下孵育0. 5?3h，測(cè)試孵育后電極的電流值Ip ;結(jié)合步驟（4) 繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線即可得到待測(cè)樣品溶液中微囊藻毒素的濃度。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種檢測(cè)MC-LR型微囊藻毒素的方法，其特征在于，步驟（3) 中測(cè)試電流值Ip的方法為：測(cè)試工作液為含有2mM對(duì)苯二酚（HQ)、lmM雙氧水（H202)的 0. 05M PBS (pH = 7. 0)緩沖液，電化學(xué)檢測(cè)方法為微分脈沖伏安法。
【文檔編號(hào)】G01N27/48GK104407039SQ201410713946
【公開日】2015年3月11日 申請(qǐng)日期:2014年11月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月28日
【發(fā)明者】施曉文, 蘇曉明, 曹發(fā), 劉桂亭 申請(qǐng)人:青島海佑海洋生物工程有限公司