本發(fā)明涉及有機酸含量檢測技術領域，具體涉及一種同時測定米酒發(fā)酵液或白酒釀造過程大曲或酒醅中七種有機酸含量的方法。

背景技術：

在整個米酒發(fā)酵過程中、白酒釀造中大曲及酒醅中，有機酸作為其中重要組成之一，影響著酒的品質好壞，為研究酒發(fā)酵過程中有機酸的變化規(guī)律，需要建立同時檢測多種有機酸的檢測方法，跟蹤工藝發(fā)酵過程以及微生物的變化，間接來研究影響酒品質的因素。目前有機酸的檢測方法有氣相色譜、氣質聯用儀，液相色譜、液質聯用儀；其中氣相和氣質主要檢測一些揮發(fā)性和沸點低的小分子有機酸，而對于乳酸、蘋果酸等分子量大，不易揮發(fā)的有機酸，則需要液相或者液質聯用儀來檢測，而液質由于成本比較高很少用于有機酸的檢測。且各有機酸的分別檢測，耗費時間，成本高，實用性較差。

技術實現要素：

本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種同時測定釀酒物料中七種有機酸含量的方法，在米酒釀造過程中以及白酒大曲、酒醅發(fā)酵中有很好的應用，建立同時檢測物質中多種有機酸機制，通過檢測有機酸含量監(jiān)控發(fā)酵過程中有機酸的變化規(guī)律，來摸清微生物與有機酸之間的聯系，具有快速、靈敏、實用性以及低成本等優(yōu)點。

本發(fā)明通過以下技術方案實現：

一種同時測定釀酒物料中七種有機酸含量的方法，包括以下步驟：

1）有機酸混標配制：精確配制酒石酸、蘋果酸、乳酸、乙酸、檸檬酸、丁二酸、丙酸濃度以mg/100ml計分別為123.78、733.21、407.28、1945.52、122.45、123.07、196.44，作為標準溶液；標準溶液制成混標并按照倍數1：5:10:20:50:100稀釋配制六個標準曲線濃度點，待測；

2）待測樣品的制備：取米酒發(fā)酵液或白酒釀造過程大曲或酒醅待測樣品，凈化后過0.45μm水相濾膜，待測；

3）步驟1）混標和步驟2）樣品分別采用安捷倫1200高效液相色譜儀按以下條件進行檢測：色譜柱為Waters T3 5μm 4.6×250mm Column；流動相為pH=2.7的磷酸二氫鉀緩沖溶液，檢測器為紫外檢測器；波長254nm；柱溫為30℃；流速為0.8mL/min；進樣量為10μL進入液相色譜進行檢測，6個標曲作標準曲線、回收率、精密度等；

4）混標6個標曲作標準曲線、回收率、精密度，樣品色譜圖對照混標色譜圖進行定性，得到色譜圖后采用自動積分或手動積分，得到有機峰面積，帶入標準曲線Y=aX+b，按以下公式進行計算：,式中W₀為樣品濃度，g/kg； A₀為樣品峰面積，V樣品稀釋體積，mL；M為樣品質量，g。

本發(fā)明與現有技術相比，具有以下明顯優(yōu)點：

本發(fā)明利用高效液相色譜儀特定的檢測條件檢測有機酸含量，能夠同時檢測物質中酒石酸、蘋果酸、乳酸、乙酸、檸檬酸、丁二酸、丙酸的含量，回收率好，精密度高，適用于米酒發(fā)酵過程中、或白酒大曲、酒醅發(fā)酵中有機酸的定性和定量檢測。本發(fā)明可以被廣泛開展和實施跟蹤有機酸的檢測，通過檢測有機酸含量監(jiān)控發(fā)酵過程中有機酸的變化規(guī)律，來摸清微生物與有機酸之間的聯系，用以研究影響酒品的因素。本發(fā)明具有快速、靈敏、實用性以及低成本等優(yōu)點。

附圖說明

圖1為有機酸混標色譜圖。

圖2為大曲樣品色譜圖。

具體實施方式

本發(fā)明建立了一種高效液相色譜同時檢測多種有機酸含量的方法，結合以下實例來具體說明：

1）有機酸混標配制：精確配制酒石酸、蘋果酸、乳酸、乙酸、檸檬酸、丁二酸、丙酸濃度（mg/100ml）分別為123.78、733.21、407.28、1945.52、122.45、123.07、196.44，作為標準溶液；標準溶液制成混標并按照倍數1：5:10:20:50:100稀釋配制六個標準曲線濃度點，待測；

2）待測樣品的制備：稱取白酒大曲待測樣品，凈化后過0.45μm水相濾膜，待測；

3）步驟1）混標和步驟2）樣品分別采用安捷倫1200高效液相色譜儀按以下條件進行檢測：色譜柱為Waters T3 5μm 4.6×250mm Column；流動相為pH=2.7的磷酸二氫鉀緩沖溶液，檢測器為紫外檢測器；波長254nm；柱溫為30℃；流速為0.8mL/min；進樣量為10μL進入液相色譜進行檢測，6個標曲作標準曲線、回收率、精密度等；

4）混標6個標曲作標準曲線、回收率、精密度，樣品色譜圖對照混標色譜圖進行定性，得到色譜圖后采用自動積分或手動積分，得到有機峰面積，帶入標準曲線Y=aX+b，按以下公式進行計算：,式中W₀為樣品濃度，g/kg； A₀為樣品峰面積，V樣品稀釋體積，mL；M為樣品質量，g?；鞓说臋z測色譜圖見圖1。

大曲樣品的檢測色譜圖見圖2。

檢測方法考察：

表1有機酸的標線和檢出限

由表1可知，有機酸標準曲線線性R²>0.999，滿足要求，符合檢測。

取同一份樣品，分為2份，其中一份作為空白，另一份加入標品，按照色譜條件進行檢測，計算回收率；選取其中一個濃度標品重復進樣6次，計算相對標準偏差，驗證方法精密度。

表2回收率和精密度

表2回收率介于92～101%之間，峰面積和保留時間相對標準偏差均小于3%，滿足檢測要求。