本發(fā)明涉及中藥制劑質(zhì)量控制領(lǐng)域，具體屬于一種高效液相色譜法對補(bǔ)中益氣合劑指紋圖譜的建立方法。

背景技術(shù)：

補(bǔ)中益氣合劑收載于《中國藥典》2015年版一部，由炙黃芪、黨參、炙甘草、炒白術(shù)、當(dāng)歸、升麻、柴胡、陳皮等八味藥材制備而成的制劑。補(bǔ)中益氣合劑具有補(bǔ)中益氣、升陽舉陷的功效，用于脾胃虛弱、中氣下陷所致的泄瀉、脫肛、陰挺，癥見體倦乏力、食少、腹脹、便溏久瀉、肛門下墜或脫肛、子宮脫垂。隨著現(xiàn)代中藥的高速發(fā)展，尤其是在中藥的有效成分絕大多數(shù)沒有明確的現(xiàn)階段，現(xiàn)行的補(bǔ)中益氣合劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)已不能完全反映補(bǔ)中益氣合劑的內(nèi)在品質(zhì)及批與批之間產(chǎn)品質(zhì)量的一致性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是針對上面所述的缺陷，提供一種補(bǔ)中益氣合劑HPLC指紋圖譜建立方法，該方法用高效液相色譜法對補(bǔ)中益氣合劑的多種指標(biāo)成分進(jìn)行檢測，獲得指紋圖譜，用于評價(jià)和控制補(bǔ)中益氣合劑的質(zhì)量，確保補(bǔ)中益氣合劑的安全性和有效性。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)的。

一種補(bǔ)中益氣合劑HPLC指紋圖譜建立方法，其特征在于，精密量取補(bǔ)中益氣合劑樣品1-3ml，置10ml容量瓶中，加甲醇3-7ml，超聲處理[S1] ，取出，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，取溶液適量，置離心管中，以每分鐘6000[S2] 轉(zhuǎn)離心5分鐘，取上清液，臨用前用微孔濾膜濾過；照高效液相色譜法建立指紋圖譜。

最佳的，一種補(bǔ)中益氣合劑HPLC指紋圖譜建立方法，其特征在于：

（a）供試品溶液制備：精密量取補(bǔ)中益氣合劑樣品2ml，置10ml容量瓶中，加甲醇5ml，超聲處理10分鐘，取出，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，取溶液適量，置離心管中，以每分鐘5000轉(zhuǎn)離心5分鐘，取上清液，臨用前用微孔濾膜濾過，即得供試品溶液；

（b）色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，4.6mm × 250mm，5μm；流動相A為乙腈；流動相B為水；檢測波長254nm；流速：1.0ml/min；洗脫程序?yàn)樘荻认疵摮绦颍?/p>

測定：精密吸取供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，即得補(bǔ)中益氣合劑的指紋圖譜。

所述微孔濾膜是用0.45μm的微孔濾膜。

所述梯度洗脫程序中流動相A與流動相B的體積比濃度為：

洗脫時(shí)間 流動相A的比例 流動相B的比例

0-5min 0% 100%

5-40min 0%→25% 100%→75%

40-80min 25%→40% 75%→60%

80-85min 100% 0%

85.01min 0% 100%

95min 0% 100%

所述補(bǔ)中益氣合劑指紋圖譜中有9個(gè)特征共有峰，圖譜總長度為95min。

使用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)” 2004版對所述指紋圖譜進(jìn)行相似度評價(jià)，其相似度應(yīng)大于0.9。

指紋圖譜相似度計(jì)算參數(shù)設(shè)置為：時(shí)間寬度為0.5秒；校正方式采用多點(diǎn)校正，校正色譜峰的匹配點(diǎn)為共有峰。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

a.將前述方法建立的補(bǔ)中益氣合劑指紋圖譜與相應(yīng)的對照譜進(jìn)行相似度評價(jià)，其相似度應(yīng)大于0.9，能有效的表征產(chǎn)品質(zhì)量，更有利于監(jiān)控產(chǎn)品的質(zhì)量。

b.本發(fā)明采用高效液相建立標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，通過建立多指標(biāo)成分特征圖譜，從而增強(qiáng)標(biāo)準(zhǔn)的可控性，進(jìn)而保障療效的安全性和有效性。

c.本發(fā)明具有快捷、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性強(qiáng)及適用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，有利于全方位的控制補(bǔ)中益氣合劑的質(zhì)量穩(wěn)定性。

附圖說明

圖1為10批補(bǔ)中益氣合劑指紋圖譜疊加圖。

圖2為補(bǔ)中益氣合劑對照指紋圖譜圖。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1。

儀器：戴安U3000型高效液相色譜儀。

試藥：補(bǔ)中益氣合劑由江西普正制藥有限公司提供；流動相乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

供試品溶液制備：精密量取補(bǔ)中益氣合劑樣品2ml，置10ml容量瓶中，加甲醇5ml，超聲處理10分鐘，取出，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，取溶液適量，置離心管中，以每分鐘5000轉(zhuǎn)離心5分鐘，取上清液，過0.45μm微孔濾膜，即得供試品溶液。

色譜條件：月旭XBC₁₈色譜柱（4.6 mm ×250 mm 5μm）；流動相：流動相A為乙腈；流動相B為水；檢測波長254nm；洗脫程序?yàn)樘荻认疵摮绦颉?/p>

梯度洗脫程序的體積比濃度為：

測定：精密吸取供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，即得補(bǔ)中益氣合劑的指紋圖譜。

實(shí)施例2。

采用實(shí)施例1的方法測定10個(gè)不同批次補(bǔ)中益氣合劑供試品溶液進(jìn)行測定（批號： 130501、130502、130601、130602、140101、140401、140402、140501、140601、140701）。

使用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)” 2004版對10批次的補(bǔ)中益氣合劑進(jìn)行相似度評價(jià)，得到10批次的補(bǔ)中益氣合劑相似度計(jì)算結(jié)果與補(bǔ)中益氣合劑對照指紋圖譜。

10批次補(bǔ)中益氣合劑指紋圖譜相似度計(jì)算結(jié)果